CN103074293B - 一种mdck细胞制备流感疫苗的培养基及其使用方法 - Google Patents
一种mdck细胞制备流感疫苗的培养基及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103074293B CN103074293B CN201210595094.2A CN201210595094A CN103074293B CN 103074293 B CN103074293 B CN 103074293B CN 201210595094 A CN201210595094 A CN 201210595094A CN 103074293 B CN103074293 B CN 103074293B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- substratum
- mdck cell
- large scale
- high density
- virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title abstract 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 24
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 17
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 13
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 13
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000002435 venom Substances 0.000 claims description 5
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 claims description 5
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 8
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 7
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229910021426 porous silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Abstract
本发明提供一种适用于大规模高密度培养MDCK细胞制备流感疫苗的培养基。
Description
技术领域
本发明属于生物制品领域，涉及一种培养基的配置和使用方法，更具体的，涉及一种用于在大规模高密度生长环境的培养MDCK细胞制备流感病毒疫苗的培养基。
背景技术
通过动物细胞培养以制备最终产品，是生物制品领域最常用的生产方式之一。用于动物细胞培养的培养基，绝大部分需要加入10％-15％的动物血清，以提供细胞生长所需的营养成分及细胞保持正常形态的支持蛋白。但是，来源于动物的血清的缺点在于：成分难以明确，产品批间差异不易控制，价格昂贵，并且要求极其严格的检测程序以确保血清中不含有血清来源动物可能携带的细菌、病毒等。MDCK细胞广泛用于生物制品领域，尤其是疫苗制备。使用MDCK细胞制备流感疫苗是近年来流感疫苗生产的一个新趋势。生物反应器及多种适合的载体，已被广泛应用于动物细胞培养，其优点在于，许多种类的生物反应器可以通过灌流培养的方式实现大规模，高密度培养动物细胞。为达到良好的培养效果，生物反应器的参数设置和所选培养基的成分是其中的重要因素。然而，针对使用生物反应器大规模高密度培养MDCK细胞制备流感疫苗的培养基研究有待深入进行。
发明内容
本发明提供一种适用于大规模高密度培养MDCK细胞制备流感疫苗的培养基及其使用方法。使用本发明所述的培养基，使MDCK细胞的大规模高密度培养在低血清浓度条件下进行。接种流感病毒后，使用本发明所述的无血清、低蛋白的培养基用来维持病毒在细胞液中的增殖。本发明提供的培养基及其使用方法，使MDCK细胞高效贴附在微载体上，细胞生长过程中生长速度快，细胞形态好，在灌流培养方式下可以在3-5天内达到极高密度；接种流感病毒后，在维持培养基培养下，可以连续收获病毒液7-10天。
本发明的一种大规模高密度培养MDCK细胞制备流感疫苗的培养基，其组成成分及重量份为：
上述培养基的组成成分及重量份优选为：
上述培养基，在使用前加入3％-5％的胎牛血清或小牛血清，经过膜过滤制成在大规模高密度环境下使用的培养MDCK细胞的培养液。
本发明的一种大规模高密度培养得到MDCK细胞接入流感病毒后，维持病毒感染时期的培养基，其组成成分及重量份为：
上述培养基的组成成分及重量份优选为：
上述培养基还包含如下成分及其重量比例：
上述培养基包含的添加成分，其重量份的优选比例为：
所述大规模高密度培养MDCK细胞所用的生物反应器可使用本领域常用的内部结构支持使用载体的各类生物反应器，例如德国Eppendorf(艾本德)公司New Brunswick Scientific生物反应器，德国Satorious公司生物反应器，荷兰Applicon公司生物反应器生物反应器，杭州安普公司生物反应器，上海日泰公司生物反应器，广州旗帜公司生物反应器。优选使用德国Eppendorf(艾本德)公司New Brunswick Scientific生物反应器，德国Satorious公司生物反应器，荷兰Applicon公司生物反应器，更优选使用德国Eppendorf(艾本德)公司New Brunswick Scientific生物反应器。
所述载体可选自常规使用的各种材料制的载体，包括化工材料的聚丙烯，PLA，PGA，多孔硅，PLGA，PPF等，和天然材料的葡聚糖，胶原蛋白，琼脂，谷物蛋白等。优选使用葡聚糖材料的微载体，更优选使用美国GE公司Cytodex1球形微载体。
所述MDCK细胞培养的条件是本领域中常规的使用条件，生物反应器的参数设置参考生物反应器厂家的使用说明书设置。优选的培养条件是：37摄氏度，溶氧DO为30-50％，按比例通入压缩空气，氧气，二氧化碳和氮气四种气体，通气量为1.0，转速为110rpm。
接种流感病毒种毒液，使用病毒液维持培养基时，培养的条件是本领域中常规的使用条件，生物反应器的参数设置参考生物反应器厂家的使用说明书设置。优选的培养条件是：36摄氏度，溶氧DO为50-70％，通入压缩空气，氧气，二氧化碳和氮气四种气体，通气量为1.2，转速为110rpm。
本方法所述的培养基及其使用方法，在生物反应器中大规模高密度的培养MDCK细胞时使用低浓度血清，在接种流感病毒后，使用无血清、低蛋白的培养基维持病毒增殖，有效的减少动物源血清可能带来的风险，显著降低杂蛋白对最终产品的干扰，在较短时间内，通过灌流方式培养生产大量的滴度高的病毒液，制备流感病毒疫苗。
本方法所述的培养基及其使用方法，适用于制备针对各种流感病毒亚型，各种宿主的流感病毒灭活疫苗。
附图说明
图1为细胞培养的生长曲线对比图。
图2为接种流感病毒后病毒滴度曲线对比图
具体实施方式
材料与设备
1，材料
1)MEM培养基，DMEM培养基，GIBCO公司
2)胎牛血清，GIBCO公司
3)Cytodex1球形微载体，GE公司
2，主要设备
1)生物反应器：德国Eppendorf(艾本德)公司New Brunswick 14升生物反应器(工作体积10升)
2)二氧化碳培养箱，日本三洋公司
3)高速离心机，Beckman公司
4)超速离心机，Beckman公司
5)4度和-20度冰箱，日本三洋公司
6)分光光度计，德国Eppendorf(艾本德)公司
生产过程主要参数
以下实施例在实施过程中的主要参数均设置为同样数值，仅在培养基的使用上有所区别，具体成分见实施例1，实施例2，实施例3，实施例4，实施例5。
1，灭菌和预处理
按照设备使用说明调试与准备生物反应器，进行必要的清洗，灭菌步骤，并进行无菌试验，以确认生物反应器处于良好的生产状态。对选用Cytodex1微载体进行浸泡和灭菌准备。按20克/升培养基加入微载体，每台14升生物反应器(工作体积10升)加入200克经预处理的Cytodex1微载体。
2，MDCK细胞培养的条件是本领域中常规技术的使用条件，生物反应器的参数设置参考生物反应器厂家的使用说明书设置。细胞接种密度为4.5x105个细胞/毫升。在全部实施例中，MDCK细胞大规模培养时的参数设置为：温度37摄氏度，溶氧DO为40％，按70％，20％，5％，5％的比例分别通入空气，氧气，二氧化碳和氮气四种气体，通气量为1.0升/分钟，转速为110rpm。
3，以灌流方式培养MDCK细胞5天。用台盼蓝法检测细胞浓度和活性。将生物反应器中的培养基更换为病毒液维持培养基，具体成分见实施例1，实施例2，实施例3，实施例4。按照MOI为0.05的量接种流感病毒种毒液。培养的条件是本领域中常规的使用条件，生物反应器的参数设置参考生物反应器厂家的使用说明书设置。在全部实施例中，接入流感病毒种毒液后的参数设置为：温度36摄氏度，溶氧DO为50％，按50％，42％，7％，1％的比例分别通入空气，氧气，二氧化碳和氮气四种气体，通气量为1.1升/分钟，转速为110rpm。
4，以灌流方式维持病毒液10天，将10天内收集得到的全部病毒液在零下20度冻融3次，经β-丙内酯灭活，纯化，稀释，加入佐剂，制成流感疫苗。
实施例1
使用的MDCK细胞大规模高密度培养的培养基，其组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基中加入3％的胎牛血清，制成MDCK细胞大规模高密度培养的培养液。
使用的维持病毒增殖的培养基的组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基的基础上，还添加如下组成成分，制成维持病毒增殖的培养液，其重量份的比例如下：
实验结果见表1，表2中“实施例1”的数据。
实施例2
使用的MDCK细胞大规模高密度培养的培养基，其组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基中加入3％的胎牛血清，制成MDCK细胞大规模高密度培养的培养液。
使用的维持病毒增殖的培养基的组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基的基础上，还添加如下组成成分，制成维持病毒增殖的培养液，其重量份的比例如下：
实验结果见表1，表2中“实施例2”的数据。
实施例3
使用的MDCK细胞大规模高密度培养的培养基，其组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基中加入3％的胎牛血清，制成MDCK细胞大规模高密度培养的培养液。
使用的维持病毒增殖的培养基的组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基的基础上，还添加如下组成成分，制成维持病毒增殖的培养液，其重量份的比例如下：
实验结果见表1，表2中“实施例3”的数据。
实施例4
使用的MDCK细胞大规模高密度培养的培养基，其组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基中加入3％的胎牛血清，制成MDCK细胞大规模高密度培养的培养液。
使用的维持病毒增殖的培养基的组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基的基础上，还添加如下组成成分，维持病毒增殖的培养液，其重量份的比例如下：
实验结果见表1，表2中“实施例4”的数据。
实施例5
使用的MDCK细胞大规模高密度培养的培养基，其组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基中加入3％的胎牛血清，制成MDCK细胞大规模高密度培养的培养液。
使用的维持病毒增殖的培养基的组成成分和重量份的比例如下：
在上述培养基的基础上，还添加如下组成成分，制成维持病毒增殖的培养液，其重量份的比例如下：
在同样条件下，使用本发明所述培养基的细胞生长曲线与使用普通市售MEM
培养基，DMEM培养基+10％-15％胎牛血清的细胞生长曲线对比如表1：
表1MDCK细胞生长曲线对比表
单位：105细胞/ml
| 0天 | 1天 | 2天 | 3天 | 4天 | 5天 | |
| 实施例1 | 5 | 45.1 | 100.5 | 178.3 | 294 | 525.5 |
| 实施例2 | 5 | 40.5 | 98.9 | 167.5 | 268.4 | 511.3 |
| 实施例3 | 5 | 38.2 | 83.1 | 150.8 | 273.6 | 486 |
| 实施例4 | 5 | 31.1 | 76.2 | 135.3 | 250.2 | 455.6 |
| 实施例5 | 5 | 35.9 | 91.2 | 173.9 | 288.1 | 503.2 |
| MEM+15％FBS | 5 | 10.3 | 30.4 | 63.5 | 89.1 | 105.1 |
| DMEM+15％FBS | 5 | 11.5 | 35.1 | 72.2 | 103.7 | 122.8 |
在同样条件下，接种流感病毒种毒液后，使用本发明所述维持病毒增殖的培养基与使用普通市售DMEM/F12无血清培养基的病毒滴度对比如表2：
表2流感病毒滴度对比表
单位：TCLD50/ml
| 1天 | 2天 | 3天 | 4天 | 5天 | 6天 | 7天 | 8天 | 9天 | 10天 | |
| 实施例1 | 5.5 | 6.8 | 7.3 | 8.4 | 8.8 | 9.0 | 9.3 | 9.2 | 8.9 | 8.5 |
| 实施例2 | 5.8 | 6.4 | 7.7 | 8.2 | 8.5 | 8.9 | 9.5 | 9.0 | 8.5 | 8.1 |
| 实施例3 | 5.4 | 6.1 | 7.2 | 8.1 | 8.6 | 8.8 | 9.1 | 9.2 | 8.6 | 8.0 |
| 实施例4 | 5.2 | 5.9 | 7.5 | 8.2 | 8.4 | 8.6 | 9.3 | 9.0 | 8.8 | 7.8 |
| 实施例5 | 5.9 | 6.6 | 7.4 | 8.0 | 8.6 | 9.2 | 9.8 | 9.6 | 9.0 | 8.5 |
| DMEM/F12 | 4.2 | 5.1 | 5.9 | 6.5 | 7.1 | 7.5 | 7.0 | 6.7 | 6.2 | 5.6 |
Claims (5)
1.一种大规模高密度培养MDCK细胞制备流感疫苗的培养基，其特征在于：培养基的组成成分及含量为：
2.制备在大规模高密度环境下使用的培养MDCK细胞的培养液的一种方法，其特征在于：在使用前向如权利要求1所述的培养基中加入3％-5％的胎牛血清或小牛血清，并经过膜过滤制成。
3.一种培养MDCK细胞的培养基，用于向大规模高密度培养得到的MDCK细胞接入流感病毒后，维持病毒感染时期的培养，其特征在于：培养基的组成成分及含量为：
4.如权利要求3所述的培养基，其特征在于：其中还包含如下成分且其含量为：
5.一种大规模高密度培养MDCK细胞制备流感疫苗的培养方法，其特征在于：使用权利要求2所述的培养液，在生物反应器中以灌流培养的方式培养MDCK细胞；接种流感病毒种毒液后，使用权利要求4所述的培养基，作为维持病毒感染时期的培养基，以灌流培养的方式维持流感病毒的增殖，直到收获病毒液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210595094.2A CN103074293B (zh) | 2012-12-28 | 2012-12-28 | 一种mdck细胞制备流感疫苗的培养基及其使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210595094.2A CN103074293B (zh) | 2012-12-28 | 2012-12-28 | 一种mdck细胞制备流感疫苗的培养基及其使用方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103074293A CN103074293A (zh) | 2013-05-01 |
| CN103074293B true CN103074293B (zh) | 2015-07-22 |
Family
ID=48150992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210595094.2A Active CN103074293B (zh) | 2012-12-28 | 2012-12-28 | 一种mdck细胞制备流感疫苗的培养基及其使用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103074293B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104232564A (zh) * | 2014-05-12 | 2014-12-24 | 杭州国牧生物科技有限公司 | 一种st细胞制备猪瘟疫苗的培养基及其使用方法 |
| CN104232565A (zh) * | 2014-05-12 | 2014-12-24 | 杭州国牧生物科技有限公司 | 一种mpk细胞制备猪瘟疫苗的培养基及其使用方法 |
| CN104278009B (zh) * | 2014-09-12 | 2017-11-17 | 江苏省农业科学院 | 无血清培养基及其用途和一种猪瘟病毒的培养方法 |
| CN104894057A (zh) * | 2015-06-25 | 2015-09-09 | 江苏太一生物科技有限公司 | 一种mrc-5细胞制备狂犬病疫苗的培养基及其使用方法 |
| CN111304169B (zh) * | 2019-12-03 | 2022-03-18 | 北京亚东生物制药有限公司 | 一种培养基添加物、含有该添加物的细胞培养基及其应用 |
| CN114561364A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-05-31 | 上海荣盛生物药业股份有限公司 | 高效扩增人流感病毒的方法和试剂 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101245335A (zh) * | 2008-03-21 | 2008-08-20 | 乐能生物工程股份有限公司 | 无血清植物蛋白肽通用细胞培养基 |
| CN101914485A (zh) * | 2010-08-05 | 2010-12-15 | 乐能生物工程股份有限公司 | 一种无血清大豆蛋白肽动物细胞培养基的配制方法 |
-
2012
- 2012-12-28 CN CN201210595094.2A patent/CN103074293B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101245335A (zh) * | 2008-03-21 | 2008-08-20 | 乐能生物工程股份有限公司 | 无血清植物蛋白肽通用细胞培养基 |
| CN101914485A (zh) * | 2010-08-05 | 2010-12-15 | 乐能生物工程股份有限公司 | 一种无血清大豆蛋白肽动物细胞培养基的配制方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 5种MEM细胞培养基成分;网友;《生物帮》;20120413;1-3 * |
| 不同培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果研究;张建伟;《安徽农业科学》;20120831;4609-4611 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103074293A (zh) | 2013-05-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103074293B (zh) | 一种mdck细胞制备流感疫苗的培养基及其使用方法 | |
| CN100389193C (zh) | 安全连续封闭式细胞培养、病毒生产和灭活的方法 | |
| CN102816732B (zh) | 适应全悬浮无血清培养的mdck细胞系及其在培养流感病毒、生产流感病毒疫苗中的应用 | |
| CN101979517B (zh) | 一种利用生物反应器大规模生产流感病毒的方法 | |
| CN101851610A (zh) | 一种大规模生产动物用狂犬病毒抗原的方法 | |
| CN104232564A (zh) | 一种st细胞制备猪瘟疫苗的培养基及其使用方法 | |
| CN101979519A (zh) | 一种制备伪狂犬病疫苗的方法 | |
| CN106085946B (zh) | 可以悬浮培养的猪睾丸细胞株st-s及其获得方法与应用 | |
| CN101869702B (zh) | 以悬浮微载体细胞培养系统产制的疫苗及其方法 | |
| CN107460156A (zh) | 无血清全悬浮mdck细胞株及其在生产流感病毒中的应用 | |
| CN108220227A (zh) | 一种通过全悬浮传代细胞系悬浮培养新城疫病毒的方法 | |
| CN103394081B (zh) | 利用wave波浪生物反应器生产禽流感疫苗的方法 | |
| CN102807964B (zh) | 一种动物细胞放大培养的方法 | |
| CN104726392B (zh) | 一种制备无血清培养的悬浮哺乳动物细胞系的方法、及其制备的细胞系和应用 | |
| CN101831412A (zh) | 一种大规模生产猪蓝耳病病毒的方法 | |
| CN104338127A (zh) | 一种h9n2亚型禽流感灭活疫苗的生产方法及其制品 | |
| CN101695572B (zh) | 一种利用生物反应器生产伪狂犬病活疫苗的方法及其制品 | |
| CN102127524A (zh) | 细胞载体生物反应器大量繁殖禽流感病毒的方法 | |
| CN102409020A (zh) | 一种无纺布/聚酯类纤维培养细胞用载体及其使用方法 | |
| CN105838683A (zh) | 一种应用新型细胞微载体增殖水貂犬瘟热病毒的方法 | |
| CN107794248A (zh) | 一种用微载体悬浮培养犬瘟热病毒的方法 | |
| CN102886043B (zh) | 猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN102260650B (zh) | 鸡马立克氏病毒的大规模生产方法 | |
| CN103409364A (zh) | 一种pk15细胞制备猪圆环ⅱ型病毒疫苗的培养基及其使用方法 | |
| CN107432931B (zh) | 一种微载体培养水痘病毒制备疫苗的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Jia Xindan Document name: the First Notification of an Office Action |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180601 Address after: 230601 Hefei Chuang Hua Industrial Park, Anhui, China, 2F218 351 Patentee after: Hefei Level Biotechnology Co., Ltd. Address before: 310053 2 floor B2216 room, six and 368 Road, Binjiang District, Hangzhou, Zhejiang. Patentee before: Hangzhou Guomu Bio-Technology Co., Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20191108 Address after: 214000 no.8410, zone B, science and technology entrepreneurship Park, No.16, Changjiang Road, Xinwu District, Wuxi City, Jiangsu Province Patentee after: Jiangsu Taiyi Biotechnology Co., Ltd. Address before: 230601 Hefei Chuang Hua Industrial Park, Anhui, China, 2F218 351 Patentee before: Hefei Level Biotechnology Co., Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200813 Address after: Room 501, building 1, No. 619, BINKANG Road, Binjiang District, Hangzhou City, Zhejiang Province Patentee after: HANGZHOU GUOMU BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 214000 no.8410, zone B, science and technology entrepreneurship Park, No.16, Changjiang Road, Xinwu District, Wuxi City, Jiangsu Province Patentee before: JIANGSU TAIYI BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |