CN103025751B - 琥珀酰酪蛋白铁(iii)及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种琥珀酰酪蛋白铁(III)，其特征在于铁含量在4.5重量%和7重量%之间，并且在水中的溶解率大约为92%以上。本发明进一步涉及一种用于制备琥珀酰酪蛋白铁(III)的方法。

Description

琥珀酰酪蛋白铁(III)及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种琥珀酰酪蛋白铁(III)（iron(III)caseinsuccinylate），其特征在于铁含量在4.5重量%和7重量%之间并且在水中的溶解率为大约92%以上。
本发明进一步涉及一种用于制备琥珀酰酪蛋白铁(III)的方法。
背景技术
铁衍生物在药品中广泛使用，用于预防和治疗贫血和妊娠期铁缺乏、吸收不良综合征、哺乳期铁缺乏和生长期铁缺乏。其中，蛋白琥珀酸铁（Iron Protein Succinilate）（通常指的是首字母缩写词IPS）因其生物利用度和耐受性特性而尤为杰出。
意大利专利IT1150213中描述了起始于牛奶蛋白而获得的IPS的化学、物理学和生物学性质以及制剂（被称为Ironlat）。此外，Ironlat的溶解率在pH>5时表示为：对于含有6.7%的铁的络合物而言，是部分溶解的；并且对于含有4.6%的铁的络合物而言，是完全溶解的。
Cremonesi等人在International Journal of Clinical PharmacologyTherapy and Toxicology 31卷(1993)40-51页中指出琥珀酰酪蛋白铁(III)（起始于琥珀酰酪蛋白而获得的铁(III)络合物）的化学和药理学性质。在体内实验中，相对于其它铁衍生物，该产品（具有等于5%的铁含量）显示出更好的胃肠耐受性。
欧洲专利EP939083B1中描述了一种用于生产琥珀酰酪蛋白铁(III)的方法，该方法提供使用特定的撕碎和干燥程序以克服产品中存在不溶性成分的问题。此外，还描述了作为待用原料的食品级酪蛋白在琥珀酰酪蛋白铁(III)的生产工艺中的用途。
为了有助于将产品中的微生物污染保持在规定的极限内，在工艺中加入尼泊金甲酯和尼泊金丙酯防腐剂；当分析最终产品时，分别测定以3%和1.05%的水平存在的尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。防腐剂的这种用途同样在专利EP1776382B1中有所描述，其介绍了在工艺中湿式造粒与产品的喷雾干燥或冷冻干燥结合使用以促进溶解过程。
专利申请EP319664提出了一种基于琥珀酰酪蛋白铁(III)的酶促降解的方法以克服在该络合物中观察到的溶解率和粘度的问题，尤其是当铁的特定值超过10%时。
国际专利申请WO2007/065812描述了琥珀酰酪蛋白铁(III)的制备，在悬浮液中操作的所述制备不仅进行琥珀酰化反应，而且随后进行使用铁(III)离子的络合反应，然而并未解决关于琥珀酰酪蛋白铁(III)溶解困难的问题。事实上，该专利申请没有提供关于所获得的络合物的溶解的信息，并且没有测定可能获得的溶液的粘度。
当特定铁含量超过5%的极限时，这种溶解问题尤为明显。
由于水溶液中产品浓度增加而观察到的粘度增加的现象使得超过预定浓度时使用琥珀酰酪蛋白铁(III)变得困难，或者甚至阻碍了超过预定浓度时使用琥珀酰酪蛋白铁(III)。
除非使用超过15ml溶液的制剂，否则这些作用的结合会将产品的剂量限制到不超过800mg的值，相当于每剂大约40mg的铁(III)。
此外，琥珀酰酪蛋白铁(III)的水溶液的粘度使得通过过滤和微细过滤来降低产品中微生物含量的操作复杂化，并且要求使用大量的防腐剂。
因此，显而易见的是，现有技术没有提供用于克服琥珀酰酪蛋白铁(III)（一种高效治疗各种形式的铁缺乏的药物）溶解问题的简单方案。
发明内容
目前，人们已经发现如果将食用酪蛋白（所述食用酪蛋白已经经受旨在除去蛋白质杂质、无机杂质和/或提高磷/氮比例（P/N比例）的纯化工艺）用作原料，那么在琥珀酰酪蛋白铁(III)的生产中可以获得令人吃惊的优势。事实上，因此有可能获得琥珀酰酪蛋白铁(III)，其特征不仅在于含有更少杂质的蛋白质性质，而且意想不到地在于改善的水中溶解率。这种改善的溶解率使其有可能获得水溶液和/或悬浮液，所述水溶液和/或悬浮液显示出比起始于商购的食品级酪蛋白而获得的粘度更低的粘度。
关于酪蛋白，根据本发明的表述“蛋白质杂质”用于表示与各种变体酪蛋白不同的蛋白质，所述蛋白质杂质借助于采用考马斯亮蓝（Coomassie Blue）染色和密度计分析的一维电泳来测定。优选地，本发明的所述蛋白质杂质是与α-S1酪蛋白、α-S2酪蛋白、β酪蛋白、κ酪蛋白和/或假κ酪蛋白不同的蛋白质。
类似地，关于琥珀酰酪蛋白铁(III)，根据本发明的表述“蛋白质杂质”用于表示与各种变体琥珀酰酪蛋白不同的物质，所述蛋白质杂质借助于采用考马斯亮蓝染色和密度计分析的一维电泳来测定。优选地，本发明的所述蛋白质杂质是与α-S1酪蛋白、α-S2酪蛋白、β酪蛋白、κ酪蛋白和/或假κ酪蛋白（pseudo-kappa casein）的琥珀酰产品不同的琥珀酰蛋白质。
根据本发明的表述“无机杂质”用于表示硫酸灰分。
术语“P/N比例”用于表示样品中存在的以重量计的磷的量（借助于ICP技术来测定）和以重量计的氮的量（通过元素分析来测定）之间的比例。
根据本发明，以重量百分比表示的值（重量%）应当旨在相对于琥珀酰酪蛋白铁(III)的总重量或酪蛋白的总重量。
因此，本发明的目的是琥珀酰酪蛋白铁(III)，其特征在于铁含量在4.5重量%和7重量%之间并且在水中的溶解率为大约92重量%以上。优选地，这种在水中的溶解率被视为在大约11.5份水中的溶解率。
所述琥珀酰酪蛋白铁(III)进一步含有蛋白质杂质，所述蛋白质杂质的量为大约15%以下，优选大约10%以下和/或P/N比例为大约5%以上，优选大约5.5%以上。
本发明的另一个目的是一种用于制备琥珀酰酪蛋白铁(III)的方法，其包含以下步骤：
a）将酪蛋白和琥珀酸酐在水里反应以获得琥珀酰酪蛋白，
b）将琥珀酰酪蛋白与三氯化铁(III)反应以获得琥珀酰酪蛋白铁(III)，
其特征在于根据步骤a）的所述酪蛋白是纯化的酪蛋白，其具有低的蛋白质杂质和/或无机杂质含量和/或高的P/N比例。
优选地，所述蛋白质杂质的含量为15重量%以下，所述无机杂质的含量为1重量%以下，并且以重量计的磷含量与以重量计的氮含量之间的比例为大约5重量%以上。
更优选地，所述蛋白质杂质的含量为大约10重量%以下和/或所述无机杂质的含量为大约0.4重量%以下和/或磷重量含量与氮重量含量之间的比例为大约5.5%以上。
本发明所述蛋白质杂质是与α-S1酪蛋白、α-S2酪蛋白、β酪蛋白、κ酪蛋白和/或假κ酪蛋白不同的蛋白质。
通常根据其制备中应用的沉淀技术来鉴定食用酪蛋白：借助于酸化来进行酸凝酪蛋白（acid casein）沉淀，使用凝乳酶（rennet）获得的酪蛋白是酶凝的（presamic），通常也被称为凝乳酶凝酪蛋白（rennetcasein）。
根据本发明，作为原料使用的食用酪蛋白可以是酸凝酪蛋白或酶凝酪蛋白（presamic casein）。
不管类型（酸凝或酶凝），这些商购产品通常没有分析文件；典型的指示参数是水含量、蛋白质含量（通过将倍增因数应用于总氮值来测定）、微生物污染水平和粒度测量。这种特性描述水平完全适合在食品工业中使用酪蛋白，但是我们目前已经发现琥珀酰酪蛋白铁(III)的制备需要对该原料进行深入的分析评价。
根据本发明用于制备琥珀酰酪蛋白铁(III)的、作为原料使用的商购食用酪蛋白和纯化的酪蛋白借助于反相HPLC，根据Bonizzi等人Journal of Chromatography A 1261卷(2009)165-168页（并入本文用于参考）指示的方法进行分析。
因此，有可能鉴定三种类型的酪蛋白：α-S1、α-S2、β、κ和假κ。
通过一维和二维电泳分析，使用考马斯亮蓝作为指示剂，伴随着各种类型的酪蛋白及其衍生自其转录后修饰（如糖基化和磷酸化）的各种变体的分离，还有可能评价蛋白质杂质的存在。
特别地，使用含有14%聚丙烯酰胺凝胶的SDS-PAGE电泳（采用考马斯亮蓝染色和基于以不同量的BSA构建的定标线的密度分析）来定量测定蛋白质杂质。
根据欧洲药典（Farmacopea Europea,method Eu.Pharm.2.4.14），使用硫酸灰分方法也可以分析所述酪蛋白和纯化的酪蛋白。然后通过ICP技术来测定其磷（P）含量，并且通过元素分析来测定氮（N）含量，因此将关于磷所观测的重量除以关于氮所观测的重量并且将结果乘以100来计算P/N%比例。下表1显示针对各种类型的酪蛋白，即商购食用酪蛋白（酸凝和酶凝）和根据本发明方法的纯化的酪蛋白获得的结果。
表1
酪蛋白 原料 蛋白质杂质 硫酸灰分 P/N%
酸凝酪蛋白 实施例化合物1和2 15% 1.6%
酶凝酪蛋白 实施例化合物3 20% 9.2%
实施例4 实施例8A和9A 5% 0.4% 5.5%
实施例5 实施例8B 9% 0.9% 5.1%
实施例6 实施例8C 8% 0.2% 5.6%
实施例7 实施例8D和9B 10% 0.8% 5.2%
因此，人们观测到被分析的商购食用酪蛋白显示出蛋白质杂质含量等于样品蛋白质总量的15-20%，而无机杂质在商购酸凝酪蛋白中的含量水平（借助于被测定的硫酸灰分值来限定）在1重量%和2.5重量%之间，在酶凝酪蛋白中的含量水平在7重量%和10重量%之间，如上面表1所举例说明。
因此，本发明的另一个目的也是一种用于纯化所述食用酪蛋白的方法，所述方法导致蛋白质杂质、无机杂质的部分（或全部）去除和/或P/N比例的增加。
根据本发明，采用水、极性有机溶剂或其混合物（优选采用水）来处理所述食用酪蛋白
优选地，所述极性有机溶剂为C1-C4醇，更优选甲醇、乙醇、异丙醇或其混合物。
根据本发明的第一项实施方案，选定的溶剂用于酪蛋白的纯化，所述纯化以如下方式进行：溶解蛋白质杂质和无机杂质，借助于离心或过滤将它们从未溶解的酪蛋白中分离出来。酪蛋白在选定溶剂中的溶解特性随着温度、pH和/或添加剂如（例如）氯化钠、氯化钙和/或醋酸铵的加入而变化，所述溶解特性用于实现该纯化方法。
可以将在纯化工艺中使用的食用酪蛋白直接放置，在蛋白质和无机杂质溶解的条件下与选定的溶剂接触，在搅拌下接触适当时间后，通过过滤或离心从含有杂质的溶剂中分离出来。
根据本发明的第二项实施方案，通过首先将酪蛋白溶解于选定的溶剂中，随后借助于适当的pH、温度变化和/或添加剂如（例如）氯化钠、氯化钙和/或醋酸铵的加入使所述酪蛋白沉淀来进行纯化。甚至在这种情况下，应当通过过滤或离心来进行蛋白质和无机杂质中的酪蛋白分离，这些杂质最终溶解在用于纯化的溶剂中。
根据上面提及的本发明的第一项实施方案，将食用酪蛋白放置，与选定的溶剂接触，任选地，将混合物的pH调节至pH在3和5之间，或调节至pH在5和10之间。例如，使用盐酸或氢氧化钠的水溶液可以进行所述pH调节。将所述混合物调节至温度在0℃和40℃之间，优选0℃和10℃。任选地，可以加入添加剂如（例如）氯化钠、氯化钙和/或醋酸铵。在搅拌下，将所得混合物放置一段时间，所述一段时间在1和24小时之间，优选2和10小时之间。
因此，将所述选定的溶剂用于溶解蛋白质杂质和无机杂质，并将它们从不溶性酪蛋白中分离出来，优选地，然后通过离心或过滤将酪蛋白从杂质中分离出来。过滤可以是常规类型，或者可以借助于具有根据切向流过滤方法的适当孔隙率的或者死端（dead end）类型的膜进行过滤。
根据上面提及的本发明的第二项实施方案，将食用酪蛋白溶解于选定的溶剂中，然后将其调节至pH在4和6之间，优选在4.5和5之间进行沉淀。可以使用本领域技术人员已知的任何方法从含有蛋白质和无机杂质的溶液中分离酪蛋白，优选地，借助于过滤或离心来分离所述酪蛋白。
为了获得所需的纯化程度，这些纯化步骤可以被重复一次或数次。因此，可以重复相同的纯化方法，或者人们可以选择依次操作彼此不同的纯化方法。
因此，本发明的另一个目的是纯化的食用酪蛋白（能够通过前述本发明的方法之一获得），所述纯化的食用酪蛋白具有的蛋白质杂质含量优选为15重量%以下，更优选10重量%以下；无机杂质含量优选为1重量%以下，更优选0.4重量%以下，和/或以重量计的磷含量和以重量计的氮含量之间的比例为5重量%以上，更优选5.5重量%以上。
本发明另一个目的是所述纯化的酪蛋白用于制备琥珀酰酪蛋白铁(III)的用途。
根据本领域技术人员已知的方法，如（例如）专利IT1150213和EP939083B1中描述的方法（并入本文用于参考），可以进行琥珀酰酪蛋白铁(III)的制备。
在本发明的一项实施方案中，上述用于制备琥珀酰酪蛋白铁(III)的方法包括以下步骤：
a）将酪蛋白和琥珀酸酐在水里反应以获得琥珀酰酪蛋白，
b）将琥珀酰酪蛋白与三氯化铁(III)反应以获得琥珀酰酪蛋白铁(III)，
其中步骤a）中的酪蛋白是纯化的酪蛋白，其具有如上所述的低的蛋白质杂质和/或无机杂质含量和/或高的P/N比例，步骤a）如下进行：
使用琥珀酸酐在水中琥珀酰化所述纯化的酪蛋白，通过加入氢氧化钠水溶液，使pH在反应期间保持在7.5和8.5之间。
反应温度为大约20-25℃。在反应结束时，通过（在搅拌下）加入盐酸水溶液直至pH为大约3来沉淀所述产品。
将由此获得的琥珀酰酪蛋白过滤，并且通过加入氢氧化钠水溶液将琥珀酰酪蛋白溶解于水中。将溶液过滤以除去可能不溶的固体；然后根据终产品所需的铁含量定量加入三氯化铁(III)水溶液。
在加入期间，发生pH的降低和琥珀酰酪蛋白铁(III)的沉淀。
在加入三氯化铁(III)溶液期间，可以使用氢氧化钠水溶液来调整pH以避免过量的酸性条件。在这种情况下，在加入三氯化铁(III)结束时，通过加入盐酸水溶液完成络合物的沉淀。
通过过滤来回收形成的固体并且将其悬浮于水中。在该步骤中，可以加入防腐剂（尼泊金甲酯和尼泊金丙酯）。加入氢氧化钠水溶液直至pH为大约8.5，通过离心除去不溶物并且使用盐酸水溶液通过酸化来沉淀琥珀酰酪蛋白铁(III)。在低压下干燥所述产品。
作为在低压下干燥的另一种选择，可以借助于喷雾干燥从其水溶液中获得琥珀酰酪蛋白铁(III)。
所述方法也可以包含琥珀酰酪蛋白铁(III)水溶液的微细过滤的额外步骤。根据本发明的所述微细过滤步骤旨在降低微生物污染。
因此，本发明的另一个主题是通过前述方法获得的琥珀酰酪蛋白铁(III)。
相对于现有技术的水溶性，本发明的这种琥珀酰酪蛋白铁(III)具有改善的水溶性特性；优选这种琥珀酰酪蛋白铁(III)具有的在水中的溶解率为大约92%以上。当在11.5份的水中时，这种溶解率值是优选的。
通过以下方法计算水溶解率：使用氢氧化钠，在pH为大约8.0并且水和琥珀酰酪蛋白铁(III)之间的最终比例为11.5（以重量计）的条件下溶解样品，在孔隙率等于6μm的过滤器上过滤所述制剂，（干燥后）通过称重过滤器来测定不溶物的量。通过减去留在过滤器上的样品自身重量并且比较所得结果和样品的最初重量来计算样品的溶解率百分比。在产品pH为大约8.0并且浓度等于5重量%、6重量%和8重量%的条件下测定各种含水制剂的粘度。
此外，针对不同的制备样品，在孔隙率等于0.45μm的膜上测定过滤速度有可能通过细微过滤来降低微生物污染。通过在pH为大约8.0，浓度为5重量%的条件下，测定用于使5mL的样品水溶液（借助于真空系统）通过3cm2的孔隙率为0.45μm的膜所需的时间来进行该计算。
下表2显示获得的结果。
表2
本发明的另一个目的是一种包含本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)和至少一种生理学上可接受的赋形剂的组合物。
所述组合物可以优选配制成固体或液体形式，更优选液体形式。所述液体形式优选为溶液或悬浮液，更优选水溶液。所述水溶液可以口服或肠胃外施用。
所述组合物包含一定量的根据本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)，优选在10和200mg之间的铁，更优选在20和100mg之间的铁，甚至更优选大约40mg、60mg或80mg的铁。
根据本发明的一项优选的实施方案，所述组合物为包含溶解于15mL溶液中的大约40mg、60mg或80mg的铁的水溶液。
此外，已经令人吃惊地发现，基于根据本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)的液体组合物相对于现有技术的组合物显示出大大降低的粘度。
含有本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)的液体组合物的粘度大大低于具有相等铁值的现有技术的组合物的粘度。如表2所示，在（起始于铁含量等于5%的琥珀酰酪蛋白铁(III)而获得的）制剂中并且（甚至更清楚地）通过与具有更高的铁含量的产品相比（尤其是与具有6%及以上的铁含量的产品相比），能够观察到在含有本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)的制剂中的这种粘度的降低。优选地，含有（溶解形式的）大约8重量%的本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)的液体组合物的粘度为400mPa·秒以下，更优选300mPa·秒以下。
本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)具有更高的溶解率并且含有它们的液体组合物具有更低的粘度，这些令人吃惊的特性特别有利于制备高铁浓度（例如15ml溶液中的铁浓度等于或高于40mg）的琥珀酰酪蛋白铁(III)。根据本发明的一种优选的溶液含有相比于总重量的量在4重量%和15重量%之间，优选4.5重量%和12重量%之间，更优选5重量%和8重量%之间的琥珀酰酪蛋白铁(III)。
这种低粘度特性也允许含有本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)的液体组合物的微细过滤。
该操作极其有利于保障产品、后续制剂及其储存的性质。已经进行的微细过滤操作和已经降低的微生物污染，还可能降低或甚至避免使用防腐剂，如（例如）通常用于预防微生物增殖的尼泊金。
事实上，这大大降低了含有根据本发明的琥珀酰酪蛋白铁(III)的制剂（优选液体制剂）的微生物含量。
到目前为止，起始于未经受适当的纯化工艺的食用琥珀酰酪蛋白铁(III)而获得的基于琥珀酰酪蛋白铁(III)的液体制剂（例如，水溶液）的高粘度阻碍了（而并非促进了）这种微细过滤操作。
根据本发明的微细过滤可以在具有受控孔隙率的膜上进行，或者切向微细过滤可以在具有旨在降低微生物污染的受控孔隙率的膜上进行。
所述微细过滤操作（也能够与琥珀酰酪蛋白铁(III)的液体组合物（优选水溶液）的更低的粘度有联系）特别有利于制备保质期长的口服液体组合物，而无需使用大量可疑的防腐剂。
以下实施例的唯一目的在于解释本发明的一些实施方案，无论如何它们不应被视为以任何方式来限制本发明。
具体实施方式
实施例1
用于制备起始于商购酸凝酪蛋白的，铁含量等于大约5%的琥珀酰酪蛋白铁(III)的对比实施例。
将600mL去矿物质水加入到50g食用酸凝酪蛋白中，将混合物搅拌30分钟并且采用9.5%的氢氧化钠水溶液调节pH至稳定的pH=8.4。
保持在搅拌下分批加入15g琥珀酸酐。在加入期间，通过加入9.5%的氢氧化钠溶液，使pH随着时间的推移而维持在大约8.4。加入17%的盐酸水溶液直至稳定的pH=2.8。通过将重悬浮于600mL去矿物质水中的沉淀态琥珀酰酪蛋白（succinil casein）过滤来进行分离。使用9.5%的氢氧化钠水溶液来调节pH至pH=8.5，将其置于搅拌下，在滤纸上过滤少量不溶性部分，并且在搅拌下加入由14.1g三氯化铁(III)六水合物在119mL水中构成的溶液。在加入期间，出现pH降低和琥珀酰酪蛋白铁(III)沉淀。在搅拌下保持30分钟之后，pH=2.9并且过滤产品。将所述产品悬浮于600mL水中，逐渐加入5%的氢氧化钠水溶液并且在搅拌下直至稳定的pH=8.5。进行离心以除去等于大约20g潮湿物的不可溶成分；使用17%的盐酸水溶液调整pH直至稳定的pH=2.8。将沉淀物过滤并且干燥以获得54.1g琥珀酰酪蛋白铁(III)。
实施例2
用于制备起始于商购酸凝酪蛋白的，铁含量等于大约6%的琥珀酰酪蛋白铁(III)的对比实施例。
将600mL去矿物质水加入到50g食用酸凝酪蛋白中，将混合物搅拌30分钟并且采用9.5%的氢氧化钠水溶液调节pH至稳定的pH=8.4。
保持在搅拌下分批加入15g琥珀酸酐。在加入期间，通过加入9.5%的氢氧化钠溶液，使pH随着时间的推移而维持在大约8.4。加入17%的盐酸水溶液直至稳定的pH=2.8。通过将重悬浮于600mL去矿物质水中的沉淀态琥珀酰酪蛋白过滤来进行分离。使用9.5%的氢氧化钠水溶液来调节pH至pH=8.5，将其置于搅拌下，在滤纸上过滤少量不溶性部分，并且在搅拌下加入由17g三氯化铁(III)六水合物在150mL水中构成的溶液。在加入三氯化铁溶液期间，将pH维持在pH=6.0和pH=6.5之间的范围内，同时加入5%的氢氧化钠水溶液。在加入三氯化铁溶液完毕后，使用17%的盐酸水溶液来调整pH至pH=2.8。在搅拌下保持30分钟并且过滤产品。将所述产品悬浮于600mL水中，逐渐加入5%的氢氧化钠水溶液并且在搅拌下直至稳定的pH=8.5。进行离心以除去等于大约25g潮湿物的不可溶成分；使用17%的盐酸水溶液调整pH直至稳定的pH=2.8。将沉淀物过滤并且干燥以获得53.5g琥珀酰酪蛋白铁(III)。
实施例3
用于制备起始于商购酶凝酪蛋白的，铁含量等于大约5%的琥珀酰酪蛋白铁(III)的对比实施例。
依据实施例1中描述的方法，从50g食用酶凝酪蛋白开始制备琥珀酰酪蛋白铁(III)。干燥后，获得54.2g琥珀酰酪蛋白铁(III)。
实施例4
商购酸凝酪蛋白的纯化。
将6L去矿物质水加入到180g食用酸凝酪蛋白中，采用1M氢氧化钠水溶液来调整pH至pH=7.0。将混合物冷却至4℃，采用1M盐酸水溶液来调节pH至pH=4.5。将悬浮液置于搅拌下16小时并且在布氏漏斗上过滤固体。
将潮湿产品悬浮于6L去矿物质水中，采用1M氢氧化钠水溶液来调整pH至pH=7.0。将混合物冷却至4℃，采用1M盐酸水溶液来调节pH至pH=4.5。将悬浮液置于搅拌下3小时并且在布氏漏斗上过滤固体。
将潮湿产品重悬浮于3L去矿物质水中，采用1M氢氧化钠水溶液来调整pH至pH=7.0。将混合物冷却至4℃，采用1M盐酸水溶液来调节pH至pH=4.5。将悬浮液置于搅拌下3小时并且在布氏漏斗上过滤390g潮湿固体，在旋转干燥器中，于25℃和30mmHg下干燥所述产品20小时，获得146g纯化的酪蛋白。
实施例5
商购酸凝酪蛋白的纯化。
将6L去矿物质水加入到18g食用酸凝酪蛋白中，采用1M氢氧化钠水溶液来调整pH至pH=7.0。将混合物冷却至4℃，采用1M盐酸水溶液来调节pH至pH=4.5。将悬浮液置于搅拌下16小时并且在布氏漏斗上过滤固体。
获得408g潮湿物，在旋转干燥器中，于25℃和30mmHg下干燥所述潮湿物20小时，获得162g纯化的酪蛋白。
实施例6
商购酸凝酪蛋白的纯化。
将42L去矿物质水加入到144g食用酸凝酪蛋白中，采用8%的氢氧化钠水溶液来调整pH至稳定的pH=7.0。采用0.5M盐酸水溶液来调节pH至pH=3.0。将混合物冷却至2℃，并且采用0.01M氢氧化钠水溶液来调节pH至pH=4.0。将悬浮液置于搅拌下1小时并且在布氏漏斗上过滤318g潮湿固体，在旋转干燥器中，于25℃和30mmHg下干燥所述产品20小时，获得126g纯化的酪蛋白。
实施例7
商购酶凝酪蛋白的纯化。
将6L去矿物质水加入到180g食用酶凝酪蛋白中，将混合物搅拌30分钟，将其冷却至4℃，将混合物维持在搅拌下16小时，采用1M盐酸水溶液来调节pH至pH=4.5。将悬浮液置于搅拌下1小时并且在布氏漏斗上过滤固体。
将潮湿产品悬浮于6L去矿物质水中，采用1M氢氧化钠水溶液来调整pH至pH=7.0。将混合物冷却至4℃，采用1M盐酸水溶液来调节pH至pH=4.5。将悬浮液置于搅拌下3小时并且在布氏漏斗上过滤固体。
将潮湿产品重悬浮于6L去矿物质水中，采用1M氢氧化钠水溶液来调整pH至pH=7.0。将混合物冷却至4℃，采用1M盐酸水溶液来调节pH至pH=4.5。将悬浮液置于搅拌下16小时并且在布氏漏斗上过滤固体。
获得290g潮湿物，在旋转干燥器中，于25℃和30mmHg下干燥所述潮湿物20小时，获得126g纯化的酪蛋白。
实施例8
起始于如实施例4、5、6和7所定义的纯化的酪蛋白的，铁含量等于大约5%的琥珀酰酪蛋白铁(III)的制备。
依据实施例1中描述的方法，从如实施例4、5、6和7所述而获得的纯化的酪蛋白开始制备琥珀酰酪蛋白铁(III)。
下表显示出关于每种制剂的量。
表3
实施例9
起始于如实施例4和7所定义的纯化的酪蛋白的，铁含量等于大约6%的琥珀酰酪蛋白铁(III)的制备。
根据实施例2中描述的方法，从如实施例4和7所述而获得的纯化的酪蛋白开始制备琥珀酰酪蛋白铁(III)。
下表显示出关于每种制剂的量。
表4

Claims (19)

1.一种用于制备琥珀酰酪蛋白铁(III)的方法，其包含以下步骤：
a.将酪蛋白和琥珀酸酐在水里反应以获得琥珀酰酪蛋白，
b.将琥珀酰酪蛋白与三氯化铁(III)反应以获得琥珀酰酪蛋白铁(III)，所述琥珀酰酪蛋白铁(III)具有在4.5重量％和7重量％之间的铁含量，在11.5份水中92％以上的溶解率并且含有8％所述琥珀酰酪蛋白铁(III)的水溶液的粘度为400mPa·秒以下，
c.其特征在于根据步骤a的所述酪蛋白是纯化的酪蛋白，其具有的蛋白质杂质含量为15重量％以下和无机杂质含量为1重量％以下和磷/氮比例为5重量％以上，通过采用水、极性有机溶剂或其混合物处理来获得所述纯化的酪蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述蛋白质杂质含量为10重量％以下和所述无机杂质含量为0.4重量％以下。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述蛋白质杂质是与α-S1酪蛋白、α-S2酪蛋白、β酪蛋白、κ酪蛋白、假κ酪蛋白不同的蛋白质。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纯化的酪蛋白具有的磷/氮比例为5.5重量％以上。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纯化的酪蛋白是从酸凝酪蛋白或酶凝酪蛋白获得的。
6.根据权利要求1所述的方法，其包含琥珀酰酪蛋白铁(III)水溶液的微细过滤的额外步骤。
7.一种琥珀酰酪蛋白铁，其能够通过根据权利要求1-6中任一项所述的方法获得。
8.一种药物组合物，其含有根据权利要求7所述的琥珀酰酪蛋白铁(III)和至少一种生理学上可接受的赋形剂。
9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于其是液体或固体形式。
10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于其是液体形式。
11.根据权利要求10所述的组合物，其特征在于所述液体形式为溶液或悬浮液。
12.根据权利要求11所述的组合物，其特征在于所述液体形式为水溶液。
13.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于所述组合物是含有8重量％的琥珀酰酪蛋白铁(III)的溶液，所述溶液具有的粘度为400mPa·秒以下。
14.根据权利要求13所述的组合物，其特征在于所述粘度为300mPa·秒以下。
15.根据权利要求8-14中任一项所述的组合物，其中相对于所述组合物的总重量，含有的琥珀酰酪蛋白铁(III)的量在5重量％和15重量％之间。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中相对于所述组合物的总重量，含有的琥珀酰酪蛋白铁(III)的量在6重量％和12重量％之间。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中相对于所述组合物的总重量，含有的琥珀酰酪蛋白铁(III)的量在7重量％和9重量％之间。
18.根据权利要求8-17中任一项所述的组合物在制备用于治疗铁缺乏的药物中的用途。
19.根据权利要求8-17中任一项所述的组合物制备用于治疗贫血、妊娠期铁缺乏、吸收不良综合征、哺乳期铁缺乏和生长期铁缺乏的药物中的用途。
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