CN103003244A

CN103003244A - 四氢异喹啉衍生物的盐和溶剂合物

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Publication number: CN103003244A
Application number: CN2011800354689A
Authority: CN
Inventors: T·D·姆卡蒂; P·M·凯利; C·J·S·博伊尔; A·R·埃博林
Original assignee: Spinifex Pharmaceuticals Pty Ltd
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2010-07-21
Filing date: 2011-07-21
Publication date: 2013-03-27
Anticipated expiration: 2031-07-21
Also published as: JP2016164178A; NZ708529A; HK1224290A1; PT2595960E; JP5948326B2; SI2595960T1; CA2803699C; SMT201600171B; US20150105422A1; HUE028620T2; CA2803699A1; JP2013531057A; CN105777636A; AU2011281381B2; ZA201300169B; US8927575B2; AU2011281381A1; AU2017203236A1; AU2015238774A1; CN103003244B

Abstract

描述了基本纯化形式的(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸与其钠盐和溶剂合物。也描述了制备所述化合物、其钠盐和其溶剂合物以及含有其的药物组合物的方法。

Description

四氢异喹啉衍生物的盐和溶剂合物

相关申请

本申请要求2010年7月21日提交的美国临时申请序列号61/366,367的优先权，其通过引用全文纳入本文。

技术领域

背景技术

(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸（称为PD126055的外消旋物的一个对映异构体）是血管紧张素II2型(AT₂)受体拮抗剂，并且描述于US5,246,943和Klutchko等，1994,Bioorg.&Med.Chem.Lett.,4:57-62。

AT₂受体拮抗剂近期鉴定为用于治疗疼痛，特别是炎性疼痛(WO2007/106938)和神经性疼痛(WO2006/066361)，并且(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸:

鉴定为候选药物。

通过α-甲基苄胺盐的重结晶从外消旋物中获得化合物1(US5,246,943)。然而，这个方法没有提供对药学目的必要的具所需高水平化学和对映体纯度的足量化合物1。

尽管外消旋物即(R,S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸是晶体化合物，并且本发明人鉴定了两个不同的晶体形式，化合物1是无定形化合物，尽管做出很多努力仍没有鉴定出所述化合物的晶体形式。就药学目的开发化合物1有显著困难，包含：

1.不采取昂贵和耗时的色谱法时，无定形难于纯化到药学目的所需的水平；

2.化合物1的无定形保留了残留溶剂，难于除去所述残留溶剂以达到药学使用的可接受水平；和

3.化合物1的无定形有很低的水溶性，并且这限制了其口服生物利用度。

需要适于药物开发的化合物1形式，包含能大量获得的具可接受化学纯度和对映体纯度以及可接受水溶性的形式。

本发明至少部分基于以下来预测：化合物1的钠盐倾向于形成高度晶体溶剂合物，不仅使所述材料以提高的化学纯度制成，而且通过重结晶在所述事件中提高对映体纯度，所述事件是在生产过程中四氢异喹啉环的手性3位点发生一些差向异构化。也发现了所述钠盐有良好的口服生物利用度特性。

发明内容

在第一方面，提供了(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的钠盐和其溶剂合物。

在特定的实施方式中，所述钠盐是无定形的。在其他实施方式中，所述钠盐是晶体溶剂合物形式，特别是乙醇合物（ethanolate）、异丙醇合物（iso-propanolate）或水合物。在一些实施方式中，所述水合物是单水合物、二水合物、三水合物、四水合物或1-5的全部或部分水合物。在一些实施方式中，所述水合物有约2-约5个水分子。

在另一方面，提供了基本纯化形式的(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸。

在特定的实施方式中，所述化合物有>97%ee的对映体纯度和/或>96%化学纯度。

在本发明的另一个方面中提供了药物组合物，所述组合物包含(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸、其钠盐或其钠盐溶剂合物，以及药学上可接受的运载体、稀释剂或赋形剂。

在一些实施方式中，所述组合物包含钠盐。在一些实施方式中，所述组合物是固体形式，特别对口服递送而言。在一些实施方式中，所述钠盐是无定形的。

在本发明的另一方面，提供了制备(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸钠盐的方法，包含：

(i)用醇钠处理(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸；

(ii)形成所得(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸钠盐的晶体醇溶剂合物；和

(iii)使所述步骤(ii)中形成的溶剂合物重结晶。

在一个实施方式中，所述醇钠是乙醇钠。在特定实施方式中，所述晶体溶剂合物是乙醇或异丙醇溶剂合物，特别是异丙醇溶剂合物。

在一些实施方式中，步骤(ii)中形成的晶体醇溶剂合物的溶剂合物分子在步骤(iii)之前、之中或之后换成另一溶剂合物。在特定的实施方式中，步骤(ii)获得的所述晶体醇溶剂合物是乙醇溶剂合物，并且步骤(iii)的重结晶在包含异丙醇的溶剂中获得，从而步骤(iii)获得的晶体溶剂合物是化合物1钠盐的异丙醇溶剂合物。在一些实施方式中，步骤(iii)的重结晶在非水性有机溶剂中完成。

本方法还包含在溶剂合物中互换醇和水分子的步骤，以制备钠盐的无定形物或晶体水合物。

本方法还包含干燥醇溶剂合物或水合物以提供(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的无定形钠盐的步骤。在一些实施方式中，通过冻干干燥。

本方法还包含酸化钠盐以提供基本纯化形式的(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的步骤。

在另一方面，提供了制备(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸钠盐的醇溶剂合物的方法，包含步骤：

(i)用下式的活化环酰胺酰化(S)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的异喹啉氮原子：

其中，环A是5元含氮杂环；和

(ii)用醇盐在醇溶剂中处理步骤(i)的产物。

在一些实施方式中，5元含氮杂环是吡唑、吡咯、咪唑、1,2,3-三唑或1,2,4-三唑，特别是吡唑。在一些实施方式中，所述醇钠盐是乙醇钠。在一些实施方式中，所述醇溶剂是乙醇。

本说明书中提到的所有出版物和专利申请通过引用全文纳入本文，就如同各单独出版物或专利申请通过引用具体地和单独地纳入本文一样。

附图简要说明

图1显示了化合物2的晶体钠盐的特性X射线粉末衍射图。

图2显示了钠盐的晶体乙醇溶剂合物（化合物4）的特性X射线粉末衍射图。

图3显示了钠盐的晶体异丙醇溶剂合物（化合物5）的特性X射线粉末衍射图。

图4显示了有至少三个水分子钠盐的晶体水合物（化合物6）的特性X射线粉末衍射图。

图5显示了有约两个水分子钠盐的晶体水合物（化合物7）的特性X射线粉末衍射图。

图6显示了化合物2的无定形钠盐的特性固态¹³C NMR谱。

图7显示了钠盐的晶体乙醇溶剂合物（化合物4）的特性固态¹³C NMR谱。

图8显示了钠盐的晶体异丙醇溶剂合物（化合物5）的特性固态¹³C NMR谱。

图9显示了有至少三个水分子钠盐的晶体水合物（化合物6）的特性固态¹³C NMR谱。

图10显示了有约两个水分子钠盐的晶体水合物（化合物7）的特性固态¹³C NMR谱。

图11显示了对狗口服给予化合物1、2(无定形钠盐)、6和7后，(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸(化合物1)随时间的平均血浆浓度。图11A显示了线性标度上的平均血浆浓度时间曲线和图11B显示了对数标度上的平均血浆浓度时间曲线。

图12A提供了对狗口服给予化合物1、2(无定形钠盐)、6和7后，游离化合物1的C最大。图12B提供了对狗口服给予化合物1、2(无定形钠盐)、6和7后，游离化合物1的AUC(0-inf)。

发明详述

(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的钠盐(下文称为化合物2)具有式：

这个化合物是AT₂受体拮抗剂，在治疗疼痛特别是炎性和神经性疼痛中有药学应用。前面鉴定了化合物1和其外消旋混合物作为AT₂受体拮抗剂。然而，现已发现所述钠盐(化合物2)在易于生产、纯化和口服生物利用度方面有游离酸(化合物1)或其他盐中没有发现的特定的优点。

尽管所述外消旋形式是晶体，化合物1代表的所述单个对映异构体未以晶体形式分离，并且因此难于纯化成药学上可接受水平，包含除去其(R)-对映异构体(化合物3)：

另外，在一些生产条件下能发生化合物1手性3位点的差向异构化，并且因此获得和维持有高对映体纯度的化合物1能是一个挑战。

本发明人发现了钠盐化合物2能以晶体形式分离作为溶剂合物，特别是醇溶剂合物。这可以从化合物1的制备中直接获得，并且因此通过结晶纯化是可能的，并且可以获得高对映体纯度。另外，如果发生3位点手性中心的差向异构化，结晶能用于除去不需要的对映异构体和提高对映体纯度。所述溶剂合物也可以互换，和能实现有药学上可接受纯度的水合物形式转化和残余的溶剂水平。这些水合物形式包含晶体形式以及无定形，后者由冻干制备。

在特定实施方式中，化合物2是无定形的。在一个这种实施方式中，所述无定形的固态¹³C NMR谱包含位于约55.2、109.8、128.4和151.7ppm的峰。在另一个这种实施方式中，所述无定形的固态¹³C NMR谱与图6基本相同。在另一个实施方式中，所述固态¹³C NMR谱有位于约26.2、29.8、39.0、41.9、45.7、55.2、60.4、73.6、94.4、109.8、121.3、128.4、139.9、145.0、151.7、172.2、175.7和178.8ppm的峰。

在另一个实施方式中，化合物2是晶体形式。在一个这种实施方式中，所述非溶剂合物钠盐晶体形式的XRPD图包含至少一个2θ值约9.6度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图包含2θ值约9.6度的峰和包含至少一个2θ值选自约6.0和19.6度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图包含2θ值约9.6度的峰、至少一个2θ值选自约6.0和19.6度的峰、和至少一个2θ值选自约14.0、17.9、20.6、21.8、23.3和23.9度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图与图1基本相同。在另一个这种实施方式中，所述非溶剂化晶体形式的X射线衍射图有在2θ=5.5、6.0、6.9、8.5、9.6、11.0、13.3、14.0、16.1、16.7、17.9、18.4、19.6、20.6、21.8、22.3、23.3、23.9、25.5、26.3和27.6的峰。

在一些实施方式中，从水或醇溶剂(特别是水、乙醇或异丙醇)中形成所述溶剂合物。

在一个实施方式中，所述钠盐的溶剂合物是乙醇溶剂合物（乙醇合物）（化合物4）：

在一个实施方式中，这个化合物能以晶体形式分离。在一个这种实施方式中，所述乙醇溶剂合物的X射线粉末衍射(“XRPD”)图包含2θ值约14.3度的峰。在另一个这种实施方式中，所述乙醇溶剂合物钠盐晶体形式的XRPD图包含2θ值约14.7度的峰。在另一个这种实施方式中，所述乙醇溶剂合物钠盐晶体形式的XRPD图包含至少两个2θ值约14.3、14.7、26.9和29.7度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图与图2基本相同。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的X射线衍射图显示了2θ=5.5、6.7、8.0、8.7、9.3、11.1、13.4、14.3、14.7、15.8、16.1、16.6、17.4、17.8、18.8、20.3、20.9、21.4、22.2、22.8、24.2、25.4、26.9、27.6、28.7、29.7、30.3、31.3、32.1、33.5、35.7和41.0的峰。

在一个实施方式中，所述钠盐晶体形式的乙醇溶剂合物的固态¹³C NMR谱包含位于约18.4、约139.7和约141.4ppm的峰。在另一个这种实施方式中，所述钠盐晶体形式的乙醇溶剂合物的固态¹³C NMR谱与图7基本相同。在另一个实施方式中，所述固态¹³C NMR谱有位于约18.4、25.9、28.6、38.1、41.9、47.0、52.0、54.1、55.6、57.5、74.1、81.1、110.8、118.5、126.4、128.1、137.6、139.7、141.4、143.9、151.3、171.6和180.2ppm的峰。

在另一个实施方式中，所述钠盐的溶剂合物是异丙醇溶剂合物（异丙醇合物）（化合物5）：

这个化合物能以晶体形式分离。在一个这种实施方式中，所述钠盐晶体形式的异丙醇溶剂合物的XRPD图包含至少一个2θ值选自约26.0、26.6、27.2、28.3和29.3度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图包含至少两个2θ值选自约25.0、26.0、26.6、27.2、28.3和29.3度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式显示的XRPD图包含至少一个2θ值选自约26.0、26.6、27.2、28.3和29.3度的峰和至少一个2θ值选自约10.8、14.0、21.1、21.9和22.5度的峰。在另一个这种实施方式中，所述结晶形式的XRPD图与图3基本相同。在另一个这种实施方式中，这种异丙醇溶剂合物晶体形式的X射线衍射图有在2θ=5.4、6.6、7.9、8.6、9.2、10.8、13.4、14.0、15.9、16.4、17.3、17.6、18.6、20.0、20.5、21.1、21.9、22.5、23.0、24.0、25.0、25.5、26.0、26.6、27.2、28.3和29.3的峰。

在一个实施方式中，所述钠盐晶体形式的异丙醇溶剂合物的固态¹³C NMR谱包含位于约63.1和约140.7ppm的峰。在另一个这种实施方式中，所述钠盐晶体形式的异丙醇溶剂合物的固态¹³C NMR谱与图8基本相同。在另一个实施方式中，所述固态¹³C NMR谱有位于约25.1、28.0、41.4、46.8、48.2、53.8、55.8、56.8、58.1、63.1、74.0、111.0、118.7、126.5、128.0、137.7、140.7、143.7、151.4、171.2、173.2和180.0ppm的峰。

在另一个实施方式中，所述钠盐的溶剂合物是每个化合物2分子包含三个水分子的三水合溶剂合物（化合物6）。

一些研究指示化合物6可以就每个化合物2分子具有四个或更多个水分子（部分水合物）。不考虑水的精确量，化合物6的水合物能以晶体形式分离。在一个这种实施方式中，所述有3-5个水分子的钠盐晶体形式水合物的XRPD图包含2θ值约15.2度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式显示的XRPD图包含2θ值约15.2度的峰和至少两个选自约4.8、7.3、12.0、12.6、23.5和24.5度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图与图4基本相同。在另一个实施方式中，所述水合物晶体形式的X射线衍射图有在2θ=4.8、5.5、7.3、8.3、9.9、12.0、12.6、15.2、16.7、17.2、17.9、19.0、21.5、23.5和24.5的峰。

在一个实施方式中，所述有约3-少于5个水分子的钠盐晶体形式的水合物的固态¹³C NMR谱包含位于约53.7、约122.9和约128.1ppm的峰。在另一个实施方式中，所述有约3-少于5个水分子的钠盐晶体形式水合物的固态¹³CNMR谱与图9基本相同。在另一个实施方式中，所述固态¹³C NMR谱有位于约23.7、26.2、28.4、38.1、45.5、47.6、53.7、55.8、59.3、74.0、108.6、110.5、120.5、122.9、128.1、130.4、137.7、139.8、143.9、145.3、150.9、152.0、171.6、173.3和177.3ppm的峰。

在另一个实施方式中，所述钠盐的溶剂合物是每个化合物2分子包含两个水分子的二水合溶剂合物（化合物7）。

一些研究指示化合物7可以就每个化合物2分子具有略少于两个但是多于一个的水分子（部分水合物）。不考虑水的精确量，化合物7的水合物能以晶体形式分离。在一个这种实施方式中，所述有1-2个水分子的钠盐晶体形式水合物的XRPD图包含至少一个2θ值约19.3度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图包含2θ值约19.3和18.2度的峰。在另一个这种实施方式中，所述晶体形式的XRPD图与图5基本相同。在另一个实施方式中，所述水合物晶体形式的X射线衍射图有在2θ=4.8、5.5、7.3、8.2、12.1、12.8、15.8、16.9、18.2、19.3和25.6的峰。

在一个实施方式中，所述有约1-2个水分子的钠盐晶体形式水合物的固态¹³C NMR谱包含位于约55.7、约128.2和约151.3ppm的峰。在另一个实施方式中，所述有约1-2个水分子的钠盐晶体形式水合物的固态¹³C NMR谱与图10基本相同。在另一个实施方式中，所述固态¹³C NMR有在约25.8、28.2、46.6、55.7、73.7、75.1、109.3、119.7、128.2、137.8、139.6、144.7、151.3、172.1和178.2ppm的峰。

本文使用的术语“对映体纯度”指与不需要的(R)-对映异构体相比，(S)-对映异构体出现的百分比。例如，90%纯度有90%的(S)-对映异构体和10%的(R)-对映异构体，而100%纯度仅有(S)-对映异构体而没有(R)-对映异构体。在特定实施方式中，(S)-对映异构体的纯度高，即纯度大于80%,，特别是大于85%、87.5%、90%、92.5%、95%、96%、97%、98%、99%和包含100%。对映体纯度也可以报道为对映体过量(ee)。对映体过量通常表示为下式计算的百分比：

((R-S)/(R+S))x100=%ee

其中，R和S是对映异构体的各自分数，从而R+S=1。在特定实施方式中，(S)-对映异构体的ee高，即ee大于80%,，特别是大于85%、87.5%、90%、92.5%、95%、96%、97%、98%、99%和包含100%。

本文使用的术语“化学纯度”指产物中出现的杂质百分比。杂质可以例如不需要的溶剂、降解产物或氧化产物的形式出现。在特定实施方式中，所述化学纯度高，即大于80%的产物是(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸，特别是大于85%、87.5%、90%、92.5%、95%、96%、97%、98%、99%和包含100%。

术语"基本纯化形式"指产物有大于96%化学纯度，特别是大于97%、98%或99%且更特别是100%化学纯度和/或大于97%ee，特别是大于98%或99%ee且更特别是100%ee。

本文使用的术语“约”的含义取决于其使用的上下文。当用于x射线粉末衍射(XRPD)图上峰的位点时，术语“约”包含所述2θ值位点±0.1度内的峰。例如，本文使用的在“2θ值约10.0度”的XRPD峰指所述峰发生在2θ值9.9-10.1度。当用于固态¹³C NMR谱上峰的位点时，术语“约”包含所述位点±0.2ppm内的峰。例如，如本文使用，在“约100.0ppm”的¹³C NMR谱的峰指所述峰发生在99.8-100.2ppm。

制备化合物1的合成方法为本领域已知。合成包含化合物1和其(R)-对映异构体化合物3的外消旋混合物和随后使用手性盐形成拆分（resolution）对映异构体描述于US5,246,943和Klutchko等，Bioorg.&Med.Chem.Lett.,1994,4:57-62。用于拆分（resolution）的手性盐是1-(-)-α-甲基苄胺。

所述钠盐化合物2能通过用氢氧化钠的水溶液处理化合物1得到。然而，此方法制备化合物2为油状残留物或胶而不是晶体固体。除非选择引起不同溶剂合物形式的晶体固体形成的溶剂系统，否则不能获得钠盐晶体形式。例如，所述乙醇溶剂合物化合物4能通过采取使用氢氧化钠水溶液所制备化合物2的非晶体形式和用乙醇处理，或者更优选用溶于乙醇的乙醇钠处理化合物1来获得。相似地，所述异丙醇溶剂合物化合物5能通过采取使用氢氧化钠水溶液所制备化合物2的非晶体形式和用异丙醇处理来获得。化合物5也能使用包含溶剂系统的异丙醇中的异丙醇钠处理化合物1来制备。

化合物2或其溶剂合物也可以通过在有机溶剂或水性有机溶剂（加入一定水百分比的有机溶剂）中重结晶化合物2的醇溶剂合物获得。晶体溶剂合物通过在乙酸乙酯(EtOAc)/10%水、甲乙酮(MEK)、1-丙醇、EtOAc、甲基叔丁基醚(TBME)和烃溶剂如庚烷中的重结晶获得。来自乙腈的重结晶生成钠盐的非溶剂化结晶形式。

所述水合物即化合物6和7通过将晶体乙醇合物或异丙醇合物暴露于水分，特别是大气水分获得。在高湿度如70%相对湿度，形成所述化合物6水合物，在中等湿度如40%相对湿度，形成所述化合物7水合物。不同水合物形式干燥或冻干后，生成所述无定形钠盐（化合物2）。

化合物2的无定形也能通过水中冻干化合物2的醇溶剂合物来形成。

或者，化合物2能通过非对称合成制备，并且在合成结束时所述钠盐分离为晶体溶剂合物。制备非天然手性α氨基酸的方法为本领域已知(例如Burk等，J.Am.Chem.Soc.,1993,115,10125-10138)，并且这些方法能用于合成手性邻-苯基甲氧基-间-甲氧基-苯基丙氨酸。必须小心使用足够温和的条件从而保留侧O苄基。

一旦制备，所述手性苯基丙氨酸衍生物能使用皮克特-施彭格勒(Pictet-Spengler)反应转化成1,2,3,4-四氢异喹啉，如方案1所示和US5,246,943所述。

方案1

异喹啉氮原子的酰化可以通过异喹啉与2,2-二苯基乙酸反应实现，活化所述2,2-二苯基乙酸以反应形成酰胺键，例如，2,2-二苯基乙酸氯（2,2-diphenylethanoic acid chloride）、酸酐或环状活性酰胺。必需仔细控制这个反应，因为形成二聚、酯化或差向异构化副产物能降低产率。可通过在异喹啉氮与酸基氯的酰化中使用无水条件和保护羧酸来避免或降低负反应。例如，在使用2,2-二苯基乙酸氯形成酰胺键中，水相反应中水解的简单水解保护基团如三甲基甲硅烷基可以用于在羧酸中防止或降低副反应。合适的保护基团为本领域已知，并且可参见Greene和Wuts,Protective Groups in OrganicSynthesis(《有机合成中的保护基团》),第3版,1999,约翰韦利父子公司(JohnWiley&Sons)。

使用2,2-二苯基乙酸的环状活性酰胺降低了暂时保护异喹啉羧酸的需求，因为环状活性酰胺对用异喹啉氮的反应更具选择性。环状活性酰胺可以通过2,2-二苯基乙酸氯与5元含氮杂环反应形成。合适的杂环示例包含吡唑、吡咯、咪唑、1,2,3-三唑和1,2,4-三唑。使用吡唑的示例示于方案2。

关于化合物2的不同溶剂合物和物理形式的知识通过制备钠盐的乙醇溶剂合物（化合物4）纳入整体合成过程，例如，通过在酰化反应的水相反应后将溶于乙醇的乙醇钠加入到有机提取物中，和如方案2所示直接从反应混合物中分离晶体中间物。

方案2

因此，本发明的另一方面提供了制备(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸钠盐的醇溶剂合物的方法，包含步骤：

其中，环A是5元含氮杂环；和

(ii)用醇盐在醇溶剂中处理步骤(i)的产物。

在一些实施方式中，5元含氮杂环是吡唑、吡咯、咪唑、1,2,3-三唑或1,2,4-三唑。在一个实施方式中，所述5元含氮杂环是吡唑。在一些实施方式中，所述醇钠盐是乙醇钠。在一些实施方式中，所述醇溶剂是乙醇。在一些实施方式中，使用乙醇钠和乙醇的组合。

在一些实施方式中，步骤(i)的产物在步骤(ii)前用碱如胺碱处理。

化合物4还能通过在含乙醇的溶剂系统中重结晶纯化以提供晶体化合物4。类似地，如果制备化合物5，可以通过在异丙醇溶剂系统中重结晶纯化。醇溶剂合物能通过在不同含醇溶剂系统中重结晶转化。例如化合物5可以通过从异丙醇或异丙醇和另一极性溶剂如乙酸乙酯的混合物中重结晶生成，以获得异丙醇溶剂合物(化合物5)。

化合物4或5可以存储、转化成化合物2水合物的不同晶体形式，或者在水中溶解和冻干以提供无定形化合物2。

钠盐（化合物2）能以适用于药物组合物的晶体形式或无定形制备，所述制备是通过在合成或分离后用醇钠处理游离酸(化合物1)然后形成晶体溶剂合物。

本文使用的“醇盐”指通过从醇的羟基除去氢原子形成的离子。可用于本发明的合适醇盐包含甲醇盐、乙醇盐、丙醇盐、异丙醇盐和丁醇盐。

化合物2的晶体溶剂合物可以用合适的溶剂通过醇钠处理来形成。例如，化合物2的乙醇溶剂合物可以通过在乙醇中用乙醇钠处理形成。异丙醇溶剂合物可以通过在异丙醇中用异丙醇钠处理形成。

一旦分离所述晶体溶剂合物，其从合适溶剂中重结晶。可以进行分离溶剂合物的重结晶或所述溶剂合物可以在重结晶之前或之中与另一种溶剂合物交换。例如，可以分离所述乙醇溶剂合物，并且然后所述乙醇分子用异丙醇分子互换以产生重结晶的异丙醇溶剂合物。

重结晶的醇溶剂合物然后可以转化成水合物形式，通过暴露于大气水分和/或干燥或冻干以生成高化学和对映体纯度的无定形化合物2。在一些实施方式中，所述晶体醇溶剂合物或水合物在水中溶解和冻干以生成高化学和对映体纯度或基本纯化形式的无定形化合物2。

也可以酸化钠盐(化合物2)以生成基本纯化形式的游离酸(化合物1)。

尽管可能使用净形式（neat form）的本发明化合物，其更适合与至少一种药学上可接受运载体、稀释剂或赋形剂一起用于药物组合物中。

所述一种或多种运载体、稀释剂或赋形剂必须是“可接受的”，这意味着它与该组合物的其它成分相容，并且对其受体无害。

药物制剂包括适于口服、直肠、经鼻、局部（包括口颊和舌下）、阴道或肠胃外（包括肌肉内、皮下和静脉内）给予的那些或以适于吸入或吹入给予的形式。本发明的化合物特别是化合物2与传统的佐剂、运载体、赋形剂或稀释剂一起，可以因此置于药物组合物形式和其单位剂量，以及所述形式可以用作固体如药片或填充的胶囊，或液体如溶液、悬浮液、乳液、酏剂或相同填充的胶囊，所有用于口服，以栓剂形式用于直肠给予；或以无菌注射溶液形式用于胃肠外使用(包含皮下)。这种药物组合物和其单位剂型可以常规比例包含常规成分，以及这种单位剂型可以包含与想要使用的每日剂量范围相当的任何合适有效量活性成分。因此，每药片或胶囊包含十(10)毫克或(25)毫克活性成分或更广泛的0.1–二百(200)毫克的制剂是合适的代表性单位剂型。本发明的化合物特别是化合物2能以广泛的口服和胃肠外剂型给予。在特定的实施方式中，无定形化合物2制成固体剂型。

对于从本发明的化合物制备药物组合物，药学上可接受的运载体可为固体或液体。对于液体制剂，所述钠盐和其溶剂合物用于获得具有适用于药物组合物的纯度水平的化合物2。固体形式制剂包括粉末剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散的粒剂。固体运载体可为一种或多种还能用作稀释剂、调味剂、稳定剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂、或包封材料的物质。

在粉末中，运载体是细碎的固体，其与细碎的活性组分混合。

在片剂中，所述活性组分与具有所需结合能力的运载体以合适比例混合并压缩为所需的形状和大小。

在特定的实施方式中，所述粉末和药片包含活性化合物的5或10-约70％。合适的运载体为碳酸镁、硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、胶体二氧化硅、低熔点蜡、可可油等。术语“制剂”意在包括活性化合物与作为运载体的包封材料的制剂，从而提供其中含有或不含有运载体的活性成分被载体包围的胶囊，所述运载体因此与活性成分相结合。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉末剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂和锭剂可用作适于口服给药的固体形式。

对于制备栓剂，首先将低熔点蜡例如脂肪酸甘油酯或可可油的混合物熔化，并（例如通过搅拌）将所述活性组分均匀分散在其中。然后将该熔融均匀混合物倒入常规尺寸的模具中，使其冷却，从而固化。

除了本领域已知合适的活性成分如运载体以外，适合阴道给药的制剂可制成阴道栓剂、棉塞剂，乳膏剂、凝胶剂、贴剂、泡沫剂或喷雾剂。

液体形式制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，例如水或水-丙二醇溶液剂。例如，对于胃肠道外注射，液体制剂可配制为溶于水性聚乙二醇溶液的溶液。

活性剂也可配制用于胃肠外给药(例如注射，如推注或连续输注)，并可制成单位剂型装在安瓿、预填充注射器、小体积输液瓶或加入防腐剂的多剂量容器中。该组合物可采用诸如油性或水性载剂中的悬浮剂、溶液剂或乳剂的形式，可含有配方试剂，如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是无菌固体经无菌分离或溶液经冻干获得的粉末形式，以在临用前用合适的载剂如无菌无热原水进行重建。

适于口服使用的水溶液可通过将活性组分溶解于水中并如需要添加合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。

适于口服使用的水性混悬剂可通过用粘性材料将细碎活性组分分散于水中来制备，所述粘性材料如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠的或其他熟知的悬浮剂。在一些实施方式中，当水溶性和/或口服生物利用度低时，例如化合物1，所述化合物可在包含液体制剂如玉米油中制成，或者制成凝胶和以胶囊递送。

还包括旨在临使用前转变为液体形式制剂以口服给药的固体形式制剂。这些液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。这些制剂可包含所述活性组分以外的着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

对于局部给予表皮，本发明所述的化合物可配制成软膏剂、乳膏剂或洗剂，或制成透皮贴剂。可用水性或油性基料，加入合适的增稠剂和/或凝胶剂来配制软膏剂和乳膏剂。洗剂可用水性或油性基料配制，且通常还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。

适合局部给予口腔的制剂包括锭剂，所述锭剂包括含活性剂的调味基料，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶；软锭剂，所述软锭剂包括含活性成分的惰性基料如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶；以及漱口水，所述漱口水包括含活性成分的合适液体载体。

溶液或悬浮液通过传统方式如滴剂、移液器或喷雾器直接用于鼻腔。所述制剂可以单一或多剂型提供。在后面的滴剂或移液器示例中，这可以通过给予患者合适、预定体积的溶液或悬浮液实现。在喷雾器示例中，这可以通过如计量雾化喷嘴方式实现。为改善鼻腔递送和保持，本发明所述的化合物可以用环糊精包封，或用其预期改善鼻腔粘膜中递送和保持的试剂配制。

呼吸道给予也可以通过气雾剂方式实现，其中以有合适推进剂的加压包装提供所述活性成分，所述推进剂例如氯氟碳(CFC)如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。所述气雾剂也宜包含表面活性剂如卵磷脂。药物剂量可以通过提供量阀来控制。

或者，活性成分可以干粉的形式提供，例如合适粉末基料中的化合物粉末混合物，所述基料如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。

便利地，所述粉末运载体会在鼻腔中形成凝胶。可将粉末组合物制成单位剂型，例如在明胶或泡罩包装的胶囊或药筒中，可通过吸入器给予该粉末。

在用于呼吸道给予的制剂（包含鼻内制剂）中，所述化合物通常有小颗粒尺寸，例如1-10微米级别或更小。该颗粒尺寸可通过本领域已知方法获得，如通过微粉化。

需要时，可使用适合产生活性成分缓释的制剂。

在特定实施方式中，药物制剂是单位剂型。在这些形式中，制剂细分成含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可为包装的制剂，所述包装包含不连续量的制剂，如小瓶或安瓿中的小包装片剂、胶囊剂和粉末剂。另外，所述单位剂型本身可为胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂或其可为包装形式的适当数量的胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂中任一种。

在特定实施方式中，所述药物制剂是固体口服剂型如药片或胶囊。

参考以下说明本发明一些特定方面的实施例描述本发明。但是，应当理解以下发明描述的具体内容并不能代替本发明前面描述的一般原则。

实施例

实施例1：外消旋物的经典拆分（resolution）

化合物1和化合物3的外消旋混合物通过US5246943的方法获得和使用手性盐形成进行拆分（resolution）。20种手性基料用于从包含化合物1和化合物3的外消旋材料中分离对映异构体作为手性盐。拆分（resolution）步骤提供结晶固体形式的对映异构体化合物1的盐，其中可以制备游离酸化合物1。

所有的手性基料在乙醇中配制至0.5摩尔浓度。不溶于乙醇的那些使用给定的质量作为固体加入，从而加入1.05摩尔当量的基料到各游离酸样品中。所述溶液搅拌加热到50°C，并且冷却到5°C超过21小时。结果示于表1。冷却时重结晶样品7和9。不重结晶的那些进行超声处理10分钟，然后存储在摇床上25°C过夜。样品4、6、12和19作为固体加入，且在50°C没有完全溶解，因此在25°C成熟（mature）。

表1.起始手性盐拆分

生成固体的6个样品通过手性HPLC分析以评价盐形成中化合物的任何手性拆分，并且结果示于表2。

表2.盐的手性HPLC分析。

样品	4	6	7	9	12	19
							固体	出现杂质	出现杂质	-0.5	+3.0	0.0	-8.0
液体	0.0	出现杂质	出现杂质	+1.0	+2.0	+40.0

从thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)处理的样品19收集的材料显示了对映异构体的最大分离。分离固体倾向于化合物1超过化合物3，生成8.0%对映体过量。因此所述液体倾向于对映异构体化合物3，生成40%对映体过量。分析固体和液体中每个对映异构体的%分析，并且示于表3。

表3–thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)盐的手性HPLC结果。

	%化合物3	化合物1
			样品19固体	46	54
样品19液体	70	30

收集的固体也通过XRPD分析。收集的固体各生成与游离酸形式或用于形成盐的手性基料不匹配的新衍射图。

所述thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)盐用3mL乙醇中70mg在25°C过夜调成浆液，然后过滤并且通过手性HPLC分析固体，生成增加的对映体过量，再一次倾向化合物1。这使用600μL乙醇中10mg回收固体来重复，生成77.8%化合物1的对映体过量增加。第一次成浆实验后的¹HNMR显示thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)在这个过程后保持不变，生成1∶1thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)盐。结果示于表4。

表4–制浆thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)盐的手性HPLC结果。

	%化合物3	%化合物1	对映体过量
				第一次成浆尝试后	31.9	68.1	-36.2
第二次成浆尝试后	11.1	88.9	-77.8

实施例2：外消旋物的进一步手性拆分

外消旋化合物在如表5所示的合适溶剂中溶解，500μL溶剂中使用50mg游离酸。在溶液中不完全溶解的手性基料作为固体加入到游离酸溶液中，从而所有溶液包含1.05摩尔当量的手性基料。所述溶液搅拌加热到50°C，并且然后冷却到10℃超过20小时。

冷却中不产生固体的所述溶液置于超声发生器中5分钟，并且在室温静置过夜。此后，仅有L精氨酸的溶液没有从异丙醇(IPA)或乙酸乙酯(EtOAc)形成固体。

表5–第二手性盐拆分

所述固体真空过滤，并用手性HPLC分析，收集的液体也是这样。所述结果显示有一些基料能用于分离对映异构体。仅有一个即thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)分离对映异构体，在固体中生成过量的所需对映异构体化合物1。因此，这些基料能用于分离对映异构体，然而，thiomicamine(2-氨基-1-[4-(甲硫基)苯基]-1,3-丙二醇)显示是在乙醇和乙酸乙酯中有效分离对映异构体的唯一基料，并且生成所需的对映异构体。

实施例3-15的方法

X-射线粉末衍射(XRD)

西门子（Siemens）D5000

在Bruker AXS或西门子D5000衍射仪上收集XRPD图。

用西门子D5000衍射仪(Siemens D5000diffractometer)采集X-射线粉末衍射图，使用CuKα放射(40kV,40mA)，θ-θ测角计，自动发散和接收狭缝(divergence and receiving slits)，石墨二级单色器和闪烁计数器。仪器性能使用认证刚玉标样(NIST1976)检验。

环境条件

在环境条件下运行的样品使用粉末(按原样)制备成平板试样。约35mg样品缓慢装入在抛光的零背景(510)硅晶片内切出的洞中。分析过程中所述样品在其自身平面内旋转。数据采集详细如下：

角度范围：2-42°2θ

步长(Step size)：0.05°2θ

收集时间：4s.步骤-1

Bruker AXS C2GADDS

X-射线粉末衍射图用Bruker AXS C2GADDS衍射仪采集，使用CuKα放射(40kV,40mA)，自动XYZ平台，自动样品定位的激光视频显微镜和HiStar二维区域检测器。X-射线光学器件由单个

多层镜与0.3mm的针孔准直仪联接组成。

光束发散即X-射线光束在样品上的有效大小，约为4mm。使用θ-θ连续扫描模式，样品-检测器的距离为20cm，得到的有效2θ范围是3.2°–29.7°。通常样品暴露于X-射线束中120秒。

环境条件

在环境条件下运行的样品使用粉末(按原样)制备成平板试样。将约1-2mg所述样品在载玻片上轻压得到平坦表面。

非环境条件

非环境条件下运行的样品安装在带有热导化合物的硅晶片上。然后，样品以约20°C.min^-1加热至合适温度，随后在数据采集开始之前恒温保持约1分钟。

单晶X射线衍射(SCXRD)

在装配有Oxford Cryosystems Cryostream冷却设备的Bruker AXS 1KSMART CCD衍射仪上收集数据。使用SHELXS或SHELXD程序解析结构，并且用SHELXL程序作为Bruker AXS SHELXTL套件的一部分来精细化（refine）。除非另有说明，连接碳的氢原子几何放置，并且能用骑式（riding）各向同性位移参数精细化。连接杂原子的氢原子位于差异傅立叶合成，并且能用各向同性位移参数自由精细化。

¹H NMR

在装备有自动取样器的Bruker400MHz分光计上收集NMR谱。除非另有说明，在d₆-DMSO中制备样品。

固态¹³C NMR

在Bruker Avance DRX-200分光光度计上收集NMR谱。就50.3MHz的¹³C NMR而言，在4mm Bruker SB魔角旋转探针上以5kHz离心样品。样品封装入4mm ZnO NMR转子，并且用Kell-F帽密封。将质子发射器功率增加到对应于¹³C数据获取中质子去耦（decoupling）的90°脉冲宽度2.8μs的值。瞬变平均超过1h。化学位移指使用甘氨酸羰基共振的外部参照(176ppm)。

差异扫描比色法(DSC)：

用装有50位自动取样器的TA仪器Q1000(TA Instruments Q1000)采集DSC数据。使用认证铟对仪器的能量和温度标定进行校正。

通常，0.5-3毫克的各样品在针孔铝盘中以10°C.min^-1从25℃加热至250℃。样品上的氮气吹扫保持在30mL.min^-1。

热重分析(TGA)

用装有16位自动取样器的TA仪器Q500TGA(TA Instruments Q500TGA)采集TGA数据。使用认证的阿留麦尔镍合金(Alumel)来校正仪器温度。

通常，将5-30mg的各样品装载到预配衡铂坩埚和DSC铝盘上，以10°C.min^-1从室温加热至350℃。样品上的氮气吹扫保持在60mL.min^-1。

重量分析水分吸附(GVS)

使用由CFRSorp软件控制的Hiden IGASorp水分吸附分析仪获得吸附等温线。样品温度通过Huber再循环水浴维持在25°C。通过混合干和湿氮气流来控制湿度，总流速为250mL.min^-1。用校准的Vaisala RH探针测量样品附近的相对湿度(0-95%RH的动态范围)。用微量天平(精度±0.001毫克)持续监测随着%RH变化的样品重量改变(质量松弛(mass relaxation))。

通常，10-20毫克样品在环境条件下放置在配衡不锈钢网篮(tared meshstainless steel basket)中。在40%RH和25℃条件(典型的室温条件)下加载并取出样品。

如下文所述运行水分吸附等温线(2次扫描得到1个完整的循环)。25℃下，在0-90%RH范围内以10％RH间隔运行标准等温线。参数见表6：

表6.

参数	值
		吸附-扫描1	40-90
解吸/吸附-扫描2	85-干燥,干燥-40
		间隔(%RH)	10
扫描次数	2
		流速(mL.min^-1)	250
温度(°C)	25
		稳定性(°C.min^-1)	0.05
最小吸附时间（小时）	1
		最大吸附时间（小时）	4
模式	AF2
		精确性(%)	98

所述软件使用最小二乘法以及质量松弛模型预测渐近值。选择%RH值前，所测质量松弛值必需在该软件预测值的5%内。最小平衡时间设定为1小时，和最大为4小时。

等温线完成后回收样品并用XRPD再分析。

通过卡尔费休库仑法（Karl Fischer Coulometry，KF）测定水

在Mettler Toledo DL39库仑计上使用Hydranal Coulomat AG试剂和氩气吹扫测定每个样品的水含量。将称量的固体样品引入连接subaseal的TGA铂盘上的容器以避免进入水。每滴定使用约10mg样品，并且进行重复测定。

高效液相色谱(HPLC)

纯度测定

在安捷伦HP1100系列系统(Agilent HP1100series system)上进行纯度分析，该系统装有二极管阵列检测器并使用ChemStation v9软件。方法示于表7和8。

表7.

表8.手性分析

离子色谱

在Metrohm861Advanced Compact IC上使用IC Net软件v2.3收集数据。样品制备为溶于水的1000ppm储液。当样品溶解度低时，使用合适溶剂如DMSO。在测试前用合适的溶剂稀释样品到50ppm或100ppm。与所分析已知离子浓度的标准溶液作比较完成定量。条件示于表9A和9B。

表9A.

方法类型	阴离子交换
		柱	Metrosep A Supp5–250(4.0x250mm)
柱温度（°C）	环境温度
		注射(μL):	20
检测：	电导率检测器
		流速(mL.min^-1)	0.7
洗脱剂：	水中3.2mM碳酸钠、1.0mM碳酸氢钠

表9B.

方法类型	阳离子交换
		柱	Metrosep C2-250(4.0x250mm)
柱温度（°C）	环境温度
		注射(μL):	20
检测：	电导率检测器
		流速(mL.min^-1)	1.0
洗脱剂：	水中4.0mM酒石酸、0.75mM吡啶二羧酸

实施例3：盐选择

化合物1溶解在表10所述的溶剂异丙醇(IPA)或四氢呋喃(THF)中，并且加入1.05摩尔当量的药学上可接受基料。在1摩尔溶液中制备所述基料，除非所述基料不溶解，这种情况下作为固体加入。所有溶液都有1.05摩尔当量的基料加入其中。

溶液在50°C搅拌2小时，然后在持续搅拌下冷却到5°C超过3.5小时。然后在5℃存储样品3天。仍在溶液中的那些进行超声处理10分钟，然后如果没有生成固体，慢慢蒸发所述溶剂。所有收集的固体通过XRPD分析。结果示于表10。

表10.起始盐选择的结果

仅三个样品生成任意固体晶体材料。赖氨酸盐来自IPA和THF，和氨基丁三醇盐来自IPA。XRPD分析显示了所有这些都有差异晶体图。赖氨酸和氨基丁三醇盐的HPLC化学纯度分析显示了相对起始材料的纯度提高，就赖氨酸盐而言从96.7%到98.0%，和就氨基丁三醇盐而言为97.8%。

所述晶体赖氨酸盐显示了在40°C/75%RH和25°C/94%RH的潮解。氨基丁三醇盐在25°C/94%RH潮解。因此，这些胺盐都不适合药物开发。

实施例4：进一步的盐选择

在不同溶剂中重复尝试用钾或钠生成盐。20mg的化合物1溶解在20μL合适溶剂中，其中加入了1.05摩尔当量的氢氧化钾或氢氧化钠作为1摩尔水溶液。所述溶液加热到50°C持续2小时，并且冷却到5°C超过21小时，整个过程中搅拌。如果冷却后没有固体形成，超声处理溶液，然后如果仍没有固体形成，蒸发溶剂以设法干燥结晶所述盐。

表11-钾/钠盐形成的结果

样品	基料	溶剂	冷却至5℃	超声	蒸发
						1	氢氧化钾	乙酸乙酯	没有固体	没有固体	胶
2	氢氧化钾	乙腈（Acetronitrile）	没有固体	没有固体	胶
						3	氢氧化钾	二噁烷	没有固体	没有固体	胶
4	氢氧化钾	甲苯	没有固体	没有固体	胶
						5	氢氧化钾	DCM	没有固体	没有固体	胶
6	氢氧化钠	乙酸乙酯	没有固体	没有固体	胶
						7	氢氧化钠	乙腈	没有固体	没有固体	胶
8	氢氧化钠	二噁烷	没有固体	没有固体	胶
						9	氢氧化钠	甲苯	没有固体	没有固体	胶
10	氢氧化钠	DCM	没有固体	没有固体	胶

生成固体的溶液中没有溶剂，仅生成胶。

所述胶用于在新一组溶剂中成浆以尝试生成晶体材料。向胶中加入100μL溶剂，并且置于50°C4小时然后室温4小时的循环下成熟（maturation）过夜。过滤任何固体，并用XRPD分析。结果示于表12。

表12.钾/钠盐成浆的结果

样品	基料	溶剂	成熟后
				1	氢氧化钾	丙酮	没有固体
2	氢氧化钾	IPA	没有固体
				3	氢氧化钾	THF	没有固体
4	氢氧化钾	乙醇	没有固体
				5	氢氧化钠	丙酮	没有固体
6	氢氧化钠	IPA	晶体固体
				7	氢氧化钠	THF	没有固体
8	氢氧化钠	乙醇	晶体固体

来自IPA和乙醇的固体在XRPD分析中产生新的晶体图。XRPD峰和其强度示于表13和14。

表13.化合物4的XRPD峰。

表14.化合物5的XRPD峰。

离子色谱分析显示了所述固体包含1摩尔钠。¹H NMR证明了溶剂的出现和手性HPLC分析显示了没有发生显著降解以及其仍是纯的对映异构体化合物1。当用可变温度XRPD分析时，所述晶体结构在加热到高于135°C后降解。在IPA和乙醇中通过缓慢冷却、接种、蒸发溶剂和成熟以生成钠盐的所有尝试都失败了。将钠盐溶剂合物置于40°C/75%RH一周，生成新的XRPD痕迹，通过TGA上10%重量损失和除去溶剂乙醇或IPA而鉴定为三水合物（等于三摩尔水）。

实施例5：钠盐研究

为了尝试直接形成钠盐乙醇溶剂合物化合物4，而不需要从胶中结晶，所述盐使用乙醇钠在乙醇中制备而不是使用氢氧化钠在水中制备。认为起始制备中出现水会妨碍结晶。

25mg化合物1在室温溶解在50μL乙醇中。18.4μL,1.0当量的乙醇钠(乙醇中21%)。室温静置快速结晶固体材料。所述样品真空下过滤并且25°C下真空干燥一天。XRPD和TGA分析显示了生成的材料是单乙醇溶剂合物(化合物4)。所述材料存储于40°C/75%RH过夜以形成所述水合物（化合物6）用于进一步分析。

再用XRPD鉴定水合物化合物6。XRPD峰和其强度示于表15。

表15.化合物6的XRPD峰。

当用可变温度XRPD分析时，所述材料在加热超过70°C时损失结晶性。

化合物6的GVS分析显示在分析开始前，所述材料当存储于40%RH时损失一些重量，即2%。当采用多达90%RH时重量逐渐增加到+6%重量，然后当采用降到0%RH时，再损失，达到-12%重量。当回到40%RH时，材料达到-6%重量。重复所述循环：在90%RH逐渐增加重量到+6%，然后在0%RH下降到-12%，并且最终在40%RH达到-6%重量。当重量在一定湿度范围内稳定时，没有平台期。GVS图表明所述水能根据周围空气的相对湿度进入或离开晶格，产生就包含材料的空气的特定相对湿度而言的某一水含量百分比。因此，如果所述湿度更高，在75%RH形成化合物6，然而，当所述湿度更低，在40%RH形成化合物7。当在40%RH从GVS除去时，TGA热谱图支持二水合物的估计，生成6.6%的重量损失，等于2摩尔水。GVS分析后的XRPD痕迹与GVS分析前的材料痕迹匹配，因此，晶体和空气之间的水转移没有改变晶体结构。

从40°C/75%RH除去的化合物6样品在40°C无真空下干燥4天。这个材料干燥后生成相同的XRPD痕迹，但是用TGA分析时，所述材料显示了6.6%重量损失，再一次生成二水合物化合物7。这支持了GVS，因为所述材料存储在40°C，但是仍然在40%的环境相对湿度下。4摩尔水是12.3%重量，3摩尔是9.25%，和2摩尔是6.2%。化合物7的XRPD峰和强度示于表16。

表16.化合物7的XRPD峰。

化合物6的后续DSC-TGA分析产生13%重量损失，提示了化合物6可以有4个水分子或4+分数水分子。化合物7的后续DSC-TGA分析产生5.5%重量损失，提示了化合物7可以是有少于2个水分子的部分水合物。在这些后续DSC-TGA研究中，在SDT Q600仪器上从环境温度开始和以每分钟10°C增加到约300°C来获得数据。

实施例6：钠盐水合物

仅通过暴露于高湿度制备钠盐水合物，因此设置一系列的实验通过从溶液中结晶水合物的方式将钠盐溶剂合物转化成水合物。

盐的IPA和乙醇溶剂合物在水中调成浆液，使用100μL水中的25mg盐在25°C调成浆液，重结晶材料，当HPLC分析时，通过99.1%化学纯度的XRPD生成新的痕迹。TGA分析显示了25%重量损失，当开始加热时立即开始损失重量。离子色谱显示了形成的新晶体是半钠盐。这个材料不如前面观察的水合物有利，因此持续作出努力通过成浆形成前面的水合物。半钠盐水合物的XRPD峰和强度示于表17。

表17.半钠盐水合物的XRPD峰

钠盐的乙醇溶剂合物用于尝试通过在乙醇或IPA与不同比例水中成浆以形成水合物。

75%水溶液中浆液形成的沉淀生成与100%水中成浆材料相同的XRPD痕迹，产生所述半钠盐。生成新晶体XRPD模式的一个样品在含10%水的乙醇中成浆。就单个晶体分析这个样品，证明了所述材料是半钠盐单乙醇合物。

进行另一个尝试以从钠盐的乙醇溶剂合物中形成水合钠盐。称重25mg钠盐乙醇溶剂合物化合物4到每小瓶中，所述小瓶中加入包含1%水的合适溶剂。置于成熟室前一次加入10μL溶剂以确保所述材料生成浆液，50°C4小时和室温4小时循环。用前面形成的水合钠盐接种样品。如果从成熟室中取回时没有形成固体，存储在5°C以促进结晶。如果在5°C3天后没有固体，逐滴加入抗溶剂庚烷，并且所述溶液置回成熟室中。结果示于表18。

表18.1%水溶液中成浆的结果。

收集的材料进行过滤并用XRPD分析。来自甲乙酮(MEK)的样品生成前面未见的衍射图，并且因此可能是MEK溶剂合物。来自乙酸乙酯、THF和丙酮的样品生成与乙醇溶剂合物起始材料匹配的XRPD衍射图。从二噁烷收集的材料生成前面未见的新痕迹，因此可能是二噁烷溶剂合物。剩余的两个样品仅生成胶。

实施例7：单钠盐的多态性（化合物2）

15个小瓶中各加入约30mg单乙醇合物钠盐(化合物4)。加入200μL合适溶剂，注意室温下的溶解度。如果所述材料全部溶解，将其置于5°C，如果没有全部溶解，置于50°C。然后所有小瓶在5°C存储16小时。生成固体的所述溶液用XRPD分析，保留溶液的那些能在环境条件下缓慢蒸发。结果示于表19。

表19.多态性筛选的结果。

7个样品即样品7、10、11、12、13、14和15生成固体，用XRPD分析。这7个样品的XRPD衍射图生成来自乙腈、MEK和100%EtOAc的三个新图，与来自叔丁基甲基酮(TBME)的样品图匹配。来自庚烷和1-丙醇的样品生成与乙醇溶剂合物相同的图，和来自含10%水的EtOAc的样品生成与半钠盐相同的图。样品10、11、13和14在25°C真空下干燥1小时，然后用¹H NMR分析，显示了样品10保留了最少溶剂，指示其是钠盐的晶体非溶剂化形式。进一步用GVS、TGA、DSC分析来研究此样品，且所有4个样品存储在40°C/75%RH，然后再用XRPD分析。非溶剂化钠盐（化合物2）的XRPD峰和强度示于表20。

表20.化合物2的XRPD峰。

来自乙腈(MeCN)的材料显示了TGA上3.5%重量损失，其逐渐损失直到约120°C，当重量更快损失时，从DSC观察到与吸热率相符，表示晶体形式熔化。所述GVS分析显示了从40%RH到90%RH，重量上升约17%，然后在0%RH下降到-2%，下降了总共19%重量。由40%RH增加的6%重量，与从水合物观察到的重量增加匹配，没有回到其进入的材料重量。与水合物循环匹配的重复循环和GVS分析后材料的XRPD衍射图显示了其是盐的水合形式。这也在40/75%RH下存储后，由其他3个样品的XRPD衍射图中观察到。

实施例8：化合物1的钾盐

使用乙醇钾重复用乙醇钠形成钠盐的过程。25mg无定形游离酸化合物1溶解在50μL乙醇中。加入22μL1摩尔当量的乙醇钾(乙醇中24%)，并且溶液在25°C摇床中存储3天。没有固体沉淀，所述小瓶置于超声发生器中5分钟，然后存储于5°C以尝试诱导钾盐的结晶。使用一定范围的不同溶剂重复以溶解所述游离酸。结果示于表21。

表21.钾盐形成的结果

样品	溶剂	在25°C摇床中存储	超声	5°C存储	用抗溶剂成熟
						1	甲醇	没有固体	没有固体	没有固体	油
2	IPA	没有固体	没有固体	没有固体	胶
						3	THF	没有固体	没有固体	没有固体	胶
4	乙酸乙酯	没有固体	没有固体	没有固体	胶
						5	乙腈	没有固体	没有固体	没有固体	油
6	二噁烷	没有固体	没有固体	没有固体	胶
						7	甲苯	没有固体	没有固体	没有固体	无定形
8	DCM	没有固体	没有固体	没有固体	胶
						9	丙酮	没有固体	没有固体	没有固体	胶
10	水	没有固体	没有固体	没有固体	油

整个实验中使用的溶剂都没有生成沉淀。在设法使钠盐结晶的其他尝试中，缓慢蒸发所述溶剂，仅从所有样品中生成胶。所述胶在50°C下重新溶解于200μL相同溶剂中，然后逐滴加入所述抗溶剂庚烷以生成一些沉淀，随后存储在成熟室中，50°C4小时和室温4小时之间循环。除了来自甲苯的一个样品外，所有过滤生成胶或油的样品当用XRPD分析时生成无定形曲线，但其中有小的峰。来自甲苯的样品加入50μL甲苯，并且再回到成熟室4天，此时间后所述样品用XRPD再分析，显示了衍射图上所述峰的略微提高，但仍主要是无定形。

为研究来自甲苯的样品，大规模重复所述盐的形成。50mg游离酸化合物1(通过钠盐纯化)溶解在400μL的甲苯中，其中加入了44μL乙醇钾(乙醇中24%重量)。庚烷逐滴加入到溶液中，直到观察到一些沉淀，并且所述小瓶置于成熟室中，50°C4小时和室温4小时之间循环。收集过滤的材料，但是静置形成胶。

实施例9：化合物1的钙和镁盐

化合物2的单乙醇合物钠盐用于尝试将钙或镁离子与钠离子交换。50mg所述钠盐溶解在IPA/水混合物中。5.47mg氯化钙和4.70mg氯化镁分别溶解在11mL和9mL甲醇中。所述氯化钙溶液和氯化镁溶液各加入到50mg钠盐溶液中并且搅拌3小时，然后存储在5°C过夜。

所述溶液置于旋转蒸发仪以除去溶剂，留下固体。加入水以除去可能出现的氯化钠，并且过滤材料。

通过XRPD分析，镁样品生成胶，但是钙样品生成无定形固体。这用¹HNMR和离子色谱分析。¹H NMR显示了与前面观察的游离酸相同的峰。离子色谱结果显示了所述材料仅包含样品中0.07当量的钙离子，如果钙盐形成，其应该是0.5。所述无定形材料必需是无定形游离酸化合物1，作为混合物的样品中剩余的氯化钙量最小。

实施例10：钠盐转化成游离酸

无定形化合物2(5.00g,8.59毫摩尔)溶解在乙酸乙酯(50mL)中，并且用1M HCl(30mL)洗涤，用MgSO4干燥和蒸发以生成黄色泡沫。这个泡沫在50°C高真空下干燥2小时，生成4.373g黄色泡沫(100%)。¹H NMR谱中δ1.25、2.39和2.87信号的整合（integration）提示2.6%w/w乙酸乙酯保持陷在泡沫中。HPLC分析显示了97.1%纯度。手性HPLC表明了所述样品是>98%对映体过量。

m/z(ES^-)506.2[MH⁺,100%],507.2[¹³C-MH⁺,40%];HRMS C₃₂H₂₈NO₅需要506.1967，发现506.1964。¹H NMR(CDCl₃,500MHz)δ2.39(1H*,dd,J16.3,6.0),2.87(1H,dd,J16.3,6.2),3.32(1H,dd,J16.2,4.8),3.39(1H*dd,J16.2,2.4),3.81(3H*,s),3.81(3H,s),4.42(1H,d,J14.9),4.49(1H*,d,J17.2),4.58(1H,d,J14.9),4.82(2H*,m),4.89(1H,d,J10.9),4.95(2H*,m),5.01(1H,d,J11.0),5.15(1H,1H*,m),5.31(1H,s),6.54(1H,d,J8.4),6.70(1H,d,J8.4),6.78(1H*,d,J8.5),6.84(1H*,d,J8.5),7.10-7.41(15H,15H*,m)。¹³C NMR(CDCl₃,125MHz)24.9,25.8*,43.3*,45.6,52.4,54.4*,55.5,55.6*,55.9,60.4*,74.8*,74.9,111.2,111.7*,121.4,122.2*,125.3,125.6,125.7,127.0,127.1,127.2,127.2,127.4,128.0,128.2,128.3,128.4,128.5,128.6,128.6,128.6,128.8,129.0,129.1,129.2,129.4,137.4,137.6*,138.3*,138.8,138.9,139.2*,145.0,151.1*,151.8,171.9*,172.5,175.4,175.5。[α]_D+5.1(DCM,c0.68);IR(cm^-1,KBr盘),3439,3029,1737,1621,1496,1454,1275,1215,1093,1050,895,803,747,700,632。*指示次要旋转异构体（rotamer）。

实施例11：游离酸的重结晶

实验10中形成的游离酸（化合物1）加入到10个小瓶中，每个25mg，加入15μL合适溶剂并且置于成熟室中，50°C4小时和室温4小时循环3天。此时间后，超声处理没有重结晶的那些，然后如果仍然没有形成固体，存储在5°C。结果示于表22。

表22.游离酸重结晶的结果。

没有溶液重结晶任何固体材料，因此缓慢蒸干所述溶剂，然而，这仅生成胶。将200μL相同溶剂加入到每个小瓶中，并且加热到50°C以溶解所述胶。庚烷加入到溶液中，直到观察到一些沉淀，然后，所述小瓶置于成熟室中。除了来自水的一个以外，所有样品生成胶或油，当用XRPD分析时生成无定形固体。

实施例12：来自钠盐的游离酸的尝试重结晶

从α-甲基苄胺盐中制备化合物1的无定形的过程描述于美国专利号5,246,943(1992)，其涉及加入硫酸氢钾水溶液到化合物1的α-甲基苄胺盐甲醇溶液中。当这个技术用于钠盐(化合物2)时，用硫酸氢钾溶液沉淀制备化合物1游离酸的技术用于尝试定性所得游离酸的物理形式。50mg钠盐溶解在最小体积甲醇中，并且逐滴加入溶于甲醇的硫酸氢钾溶液(过量1%硫酸氢钾)以沉淀游离酸。所述小瓶置于成熟室中，50°C4小时和室温4小时交替3天。过滤样品，并且XRPD衍射图显示了收集的材料是无定形；然而，有一些残留无机材料引起的衍射图中的一些峰。

实施例13：不同湿度的乙醇溶剂合物的稳定性

乙醇溶剂合物的样品置于40°C/75%RH过夜以形成钠盐三水合物。在进展到使用水合物形式前，通过XRPD检查这个转换。制备约600mg。

所述材料分成6个90mg批料，并且存储在6个不同温度和湿度下。通过在40°C或25°C存储的乙酸钾、碳酸钾或亚硝酸钠之一的饱和溶液上存储容器中的材料来固定所述湿度。这生成了如下表23所述的6个温度和湿度条件。1、7和14天后，所述材料用XRPD、HPLC和卡尔费休库仑（coulometricKarl Fischer）分析。

表23.湿度稳定性评价的结果。

*-卡尔费休库仑分析生成第二次运行的不同结果，所以显示两个结果，而不是平均数字。

所述材料通过存储在40°C/75%RH而制备成水合物，因此存储在低湿度，约60%RH下的那些保留了相同材料，在XRPD衍射图上没有任何改变，全程保持高水含量值。所述材料存储在低湿度、约20%RH下，水含量过夜减少，生成XRPD衍射图上峰之一的轻微改变。122θ的一个峰从双峰变成具有单个峰。XRPD衍射图上的区别在所有丧失水含量的材料中明显。存储在约40%RH的材料仅在加热到40°C超过1周时丧失水分。然而，在25°C，水含量和因此XRPD衍射图在整个2周中保持不变。所述材料的纯度在整个实验中保持，并且似乎没有受到低或高湿度存储的影响。

实施例14：化合物2溶解度和稳定性

评价化合物2在以下物质中的溶解度：选自水、甲醇、乙腈(ACN)和异丙醇的溶剂，pH1、2、7和8的50mM磷酸盐缓冲液，pH3、4、5和6的50mM柠檬酸盐缓冲液以及pH9的50mM硼酸盐缓冲剂。

化合物2加入到10mL溶剂或缓冲液中直到可见所述溶液饱和以及在涡旋混合后保持混浊。每个样品室温下置于往复振荡器上24小时，然后过滤通过0.45μm尼龙过滤器以除去过量的悬浮化合物。

需要时，按表24稀释所述样品并用HPLC分析。所得结果与ACN中已知浓度的标准曲线作比较。结果示于表25。

表24.t=0和t=1周的储备样品稀释

样品	储备溶液的体积(mL)	选定介质(mL)的总体积
			H₂O	1	50
H₂O	1	25
			MeOH	1	100
ACN	1	25
			IPA	1	25
pH1	无（N/A）	无
			pH2	无	无
pH3	无	无
			pH4	无	无
pH5	无	无
			pH6	1	10
pH7	1	10
			pH8	1	10
pH9	1	10

表25.化合物2溶液溶解度

溶剂	溶解度
		pH1缓冲液（磷酸盐，50mM）	<1μg/mL
pH2缓冲液（磷酸盐，50mM）	<1μg/mL
		pH3缓冲液（磷酸盐，50mM）	<1μg/mL
pH4缓冲液（柠檬酸盐，50mM）	<1μg/mL
		pH5缓冲液（柠檬酸盐，50mM）	33μg/mL

溶剂	溶解度
		pH6缓冲液（柠檬酸盐，50mM）	0.9mg/mL
pH7缓冲液（磷酸盐，50mM）	1.7mg/mL
		pH8缓冲液（磷酸盐，50mM）	1.6mg/mL
pH9缓冲液（硼酸盐，50mM）	5.3mg/mL
		水	14mg/mL
甲醇	>50mg/mL
		乙腈	12mg/mL
IPA	0.7mg/mL

上面分析在t=0进行，并且所述样品然后分成两份，每个样品之一存储在5°C一周，和每个样品的另一份存储在25°C/60%相对湿度(RH)一周。

一周后，所述样品能平衡到室温，并且如果需要，(H₂O和pH7-9样品存储在5°C)重新过滤以除去沉淀。

样品用HPLC重新分析。结果列于表26和27。

表26.在25°C/60%RH下化合物2的溶液稳定性

*由于pH1-5溶液的低溶解度，不能测定稳定性数据。

表27.5°C下化合物2溶液稳定性

*由于pH1-5溶液的低溶解度，不能测定稳定性数据。

化合物2显示了在选定水性缓冲液和有机溶剂中的溶解度和稳定性。对于筛选溶剂，化合物2在MeOH中溶解度最大（>50mg/mL），最低溶解度是在异丙基醇中（0.7mg/mL）。所述pH溶解度概况显示了溶解度随pH的增加而增加。化合物1有pKa~3.86，并且这解释了pH溶解度趋势。由于化合物2在这些缓冲液中的低溶解度，pH1-5样品获得的稳定性数据生成了不确定结果。

实施例15：HPMC和明胶胶囊的比较

羟丙基甲基纤维素(HPMC，也称为羟丙甲纤维素（Hypromellose）)和明胶的20个胶囊用25±1mg无定形化合物2填充以测定HPMC胶囊中发现的更低水含量是否会延缓化合物的水摄入。两种胶囊类型中的化合物2样品置于25°C/60%RH和40°C/75%RH一周。在t=0和t=1周分析所述样品的水含量、效力和%纯度(%面积)。

化合物2HPMC和明胶样品的制备

20个透明尺寸00HPMC胶囊和20个透明尺寸00明胶胶囊人工填充有API。

每个胶囊用25±1mg API填充。

两种胶囊类型分入两个有盖的30cc HDPE瓶，并且置于25°C/60%RH和40°C/75%RH一周。

t=0下样品分析

对t=0时间点，分析化合物2的水含量、效力和%纯度(%面积)。

水含量

对水含量而言，t=0时取化合物2的两个样品。在HPMC胶囊填充后取第一个样品，和明胶胶囊填充后取第二个样品。当填充胶囊时，完成所述取样过程以补偿发生的水摄入。

在HPMC胶囊填充后称量50.3mg化合物2到钳口瓶（crimp vial）中。

所述小瓶立即钳压以用于卡尔费休(Karl Fischer)分析。

在明胶胶囊填充后称量50.4mg化合物2到钳口瓶中。

所述小瓶立即钳压以用于卡尔费休分析。

效力和%纯度(%面积)

直接称量76.17mg化合物2到100-mL容量瓶中。

用ACN稀释所述烧瓶到体积，并且反转混合。

1mL等分样品直接转移到HPLC小瓶以用于分析。

所述样品存储在40°C/75%RH和20°C/60%RH一周，然后样品用HPLC分析%纯度和%效力。结果示于表28。

表28.t=0和t=1周时HPMC相比明胶效力和纯度结果

进行HPMC与明胶胶囊的比较以测定HPMC胶囊的更低起始水含量是否会妨碍化合物2吸收水。也进行这个实验以了解水含量增加是否会造成化合物的效力和%纯度(%面积)降低。所述结果显示了当存储在40°C/75%RH时，HPMC胶囊相对于明胶确实使水摄入减少3.74%。一周后对所有测试条件而言，化合物2的效力和%纯度(%面积)没有改变。

实施例16：化合物2的颗粒大小分布、粉末流动、容积密度、振实密度和碾磨可行性

化合物2的颗粒大小分布通过筛分选分析测定。化合物2的样品通过一系列筛，包含53、106、250、500、710和1000μm网筛。筛分发生前后称量每个筛选以测定每个颗粒大小的化合物量。

粉末流动在FlowDex仪器上测定。

容积密度通过用化合物2填充配衡100mL量筒来测定。记录加入的化合物2的体积和重量，并且用于计算其容积密度。然后通过用填充有化合物2的相同量筒和置于Autotap设置100次循环来测定振实密度。记录新的粉末体积并且用于计算其振实密度。

直接称量24.73mg化合物2到配衡25mL容量瓶中。用ACN稀释所述烧瓶到体积，并且反转混合。在发生碾磨前取样品以测定药物的%纯度(%面积)。通过取17.92g化合物2和使这个材料通过有1143μm筛的锥形研磨机进行研磨。回收14.33g化合物2并且重新分析其颗粒大小分布、容积密度和振实密度。直接称量24.93mg研磨的化合物2到配衡25mL容量瓶中。用ACN稀释所述烧瓶到体积，并且反转混合。取这个样品以测定化合物2研磨后的%纯度(%面积)。结果见表29、30、31和32。

表29.整体化合物2的颗粒大小分布

表30.研磨的化合物2的颗粒大小分布(使用1143μm筛)

表31.未研磨化合物2的容积和振实密度

化合物2重量	8.86g
		容积体积（bulk volume）	100mL
振实体积	78mL
		容积密度	0.089g/mL
振实密度	0.114g/mL

表32.经研磨化合物2的容积和振实密度

化合物2重量	7.27g
		容积体积	100mL
振实体积	74mL
		容积密度	0.073g/mL
振实密度	0.098g/mL

化合物2样品的%纯度在研磨情况下没有改变。

化合物2研磨后，其与2.5%w/w胶体二氧化硅，在T2Turbula混合器上混合2分钟。收集所述混合的粉末和在FlowDex仪器上分析其流动性。

在FlowDex上测定化合物2的粉末流速。测试的第一条件是整体未研磨的化合物2。所述粉末不能通过最大可用的34mm孔。测试的第二条件是与2.5%w/w胶体二氧化硅混合的经研磨化合物2。研磨和混合的化合物2流动通过34mm孔，但是不能通过32mm孔。

由于整体化合物2的低密度和大颗粒大小分布，使用研磨过程。所述研磨过程将化合物2的平均粒度从~775μm下降到~560μm，而不降解药物。然而，研磨所述化合物确实使化合物充气，造成容积密度和振实密度下降。

实施例17：溶解比较

分析三种固体钠盐形式的溶解，即单钠三水合物(化合物6)、单钠盐二水合物(化合物7)和无定形化合物2。

晶体三水合物（化合物6）胶囊的制备

通过将无定形化合物2暴露于环境温度/75%RH24小时制备晶体材料。使用干燥室中密封的饱和氯化钠溶液创造这些条件。一旦生成晶体材料，收集并且存储在2-8°C，直到进行溶解测试。通过称量25mg±1mg到尺寸00白色不透明的明胶胶囊来制备用于溶解的两个样品。

晶体二水合物（化合物7）胶囊的制备

通过将化合物2的异丙醇溶剂合物样品置于环境温度和湿度条件下2周制备晶体化合物7二水合物。化合物2的异丙醇溶剂合物易转化成二水合物。一旦制备了化合物7，收集并且存储在2-8°C，直到进行溶解测试。通过称量25mg±1mg到尺寸00白色不透明的明胶胶囊来制备用于溶解的两个样品。

化合物2胶囊的制备

通过称量25mg±1mg无定形化合物2到尺寸00白色不透明的明胶胶囊来制备用于溶解的两个样品。

所述溶解材料和参数示于表33。在各吸动时间（pull time），从每个容器移除~6mL介质并且通过0.45μm尼龙过滤器过滤。弃去前5mL溶液，并且在UPLC小瓶中收集最后1mL用于分析。

表33.溶解参数和材料。

溶解介质	pH6.8磷酸盐缓冲液
		每容器的溶解介质体积	900mL
浴温度	37.0±0.5°C
		桨叶速度	第一小时为50RPM，第二小时为150RPM
吸动时间	15,30,45,60和120分钟

评价每个样品在每个时间点的平均溶解值，示于表34。

表34.化合物2不同晶体形式的溶解结果。

时间(分钟)	化合物7的%溶解	化合物6的%溶解	化合物2的%溶解
				15	72.8	39.4	77.8
30	74.7	56.5	83.6
				45	77.4	64.4	86.3
60	78.2	69.6	88.8
				120	80.9	88.9	92.9

如所预期，化合物2的晶体形式有最慢的溶解速率，而无定形化合物2的溶解显著更快。

实施例18：制剂

混合表35所示组分以提供均匀混合物，并且所述混合物置于明胶或HMPC胶囊中。

表35.无定形化合物2的原型制剂

选定25mg制剂在40°C/75°C RH下一个月的稳定性示于表36。

表36.稳定性

实施例19：从游离酸化合物1中制备化合物2

化合物1(31.35g,61.8毫摩尔,95.82%纯度)溶解在二氯甲烷(DCM)(150mL)中并用乙醇钠溶液处理(20.05mL,21%w/w)。所述混合物蒸发至干，然后溶解在乙酸乙酯(110mL)中。搅拌中逐滴加入异丙醇(315mL)到这个溶液，引起快速结晶。异丙醇完全加入后20分钟，过滤所述晶体，用异丙醇(80mL)洗涤并且在烧结物（sinter）上干燥约3h。这生成28.71g乳脂粉。此材料溶解在温热(40°C)的290mL蒸馏水中，并且室温搅拌1小时，得到晶体。过滤所述混合物，并且真空干燥残余物，生成21.35g(65%)白色固体。HPLC分析揭示了所述材料为>98%e.e和99.3%纯度。

m/z(ES^-)506.2[MH⁺,100%],507.2[13C₁-MH⁺,40%];HRMS C₃₂H₂₈NO₅需要506.1969,发现506.1967;¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ2.08(1H*,dd,J16.6,6.4),2.83(1H,dd,J15.9,6.4),3.03(1H,dd,J15.9,6.4),3.36(1H*,m),3.55(3H*,s),3.66(3H,s),4.29-4.47(3H,2H*,m),4.68(1H*,d,J11.0,4.83(2H,m),4.83(1H*,m),4.91(1H*,d,J17.0,5.28(1H*,s),5.31(1H,s),6.21(1H,d,J8.3),6.46(1H,d,J8.3),6.48(1H*,d,J8.3),6.94-7.32(15H,m);¹³C NMR(CDCl₃,500MHz)δ25.5(CH₂),26.0(*CH₂),42.8(*CH₂),45.8(CH₂),55.0,55.8,56.1,56.7,74.2(*CH₂),74.9(CH₂),110.2(CH),110.7(*CH),121.1(CH),122.0(*CH),126.4,126.7,126.8,127.0,127.8,127.9,128.3,128.5,128.6,128.7,128.8,129.0,129.5,129.5,129.8,137.5(q),127.7(*q),139.3(q),139.3(*q),139.9(q),140.7(*q),144.4(q),144.7(*q)150.7(*q),151.6(q),172.2(q),172.7(*q),177.7(q);[α]_D ²⁵=-39.1(CH₂Cl₂,c0.68);IR(cm^-1,KBr盘)3425(O-H),1626(C=O),1601(C=O)。*指示次要旋转异构体（rotomer）。

实施例20：异喹啉的酰化和结晶

酰化步骤

在惰性氮气下，二氯甲烷(DCM)、异喹啉(1.0eq)和吡啶(6.0eq)的悬浮液冷却到-12±2°C。氯三甲基硅烷(4.0eq)逐步加入到悬浮液中，同时维持内部温度-10°C或更低。完全加入后，生成近似均匀溶液。搅拌反应混合物至少20分钟，并且内部温度调整到-12±2°C。联苯基乙酰氯(0.9eq)的DCM溶液然后逐步加入到反应混合物中，同时维持内部温度低于-10°C。完全加入后搅拌反应混合物至少15分钟，同时维持内部温度低于-10°C。

用2M盐酸淬灭反应，并且所述混合物加温到+20±5°C。停止搅拌并且使所述双相混合物静置至少15分钟。分离下（有机）相。乙醇钠溶液(乙醇中21%,1.0eq)加入到有机相中，并且蒸发所得溶液以生成钠盐乙醇溶剂合物化合物4。

结晶步骤

粗钠盐乙醇溶剂合物化合物4溶解于乙酸乙酯(EA)然后浓缩。所述残留物溶解在乙酸乙酯中，然后在+20±5°C下搅拌。以受控添加方式逐步加入异丙醇到搅拌的乙酸乙酯溶液中。这引起异丙醇溶剂合物化合物5的结晶。完全加入后，所述混合物搅拌1小时。过滤所述晶体并用异丙醇洗涤。真空干燥所述晶体直到异丙醇水平小于10%。所述晶体加入到RO水搅拌体积中引起快速溶解发生。所得溶液搅拌2小时，能形成厚的沉淀。所得浆液然后冻干，生成灰白色粉末的化合物2。

实施例21：

形成吡唑活性酯

将玻璃或不锈钢夹套容器置于惰性气体下。容器装满吡唑(1.1eq)、N-甲基吗啉(NMM)(1.3eq)和乙酸乙酯。逐步加入联苯基乙酰基氯(1.0eq)的乙酸乙酯溶液。冷却反应容器以维持内部温度低于+30°C。完全加入后，所述内容物搅拌至少20分钟。反应混合物用水、1M硫酸(2x)、饱和水性碳酸氢钠(2x)、水和盐水洗涤。浓缩乙酸乙酯相，并用庚烷脱去残留物。

所述残留物在庚烷中加热到70°C以溶解所有固体。冷却所得溶液并且在15±5°C保持1小时，伴有结晶。过滤晶体并干燥最小16小时。产率：来自联苯基乙酰基氯的80-90%。

异喹啉酰化

将搪玻璃（glass lined）或不锈钢容器置于惰性气体下。容器装满DMF、四甲基胍(1.03eq)和异喹啉(1.0eq)。搅拌所述混合物约1h以使溶解发生(在这个阶段只期望部分溶解)。所述反应混合物填满吡唑活性酯(1.2eq)。搅拌反应混合物至少16小时。进行IPC(HPLC)以证实反应程度(通过条件:<5.00%残留异喹啉)。二甲基乙二胺(0.3eq)加入所述反应混合物中并且搅拌再持续2小时。对吡唑活性酯进行IPC(HPLC)(通过条件:<0.10%吡唑活性酯)。

所述反应混合物用甲苯稀释，并用1M硫磺酸(2x)和水(2x)洗涤。通过蒸发溶剂降低有机相的体积。乙醇钠(1.0eq)加入到所述反应混合物中。从所述反应混合物中蒸发剩余的溶剂。从乙酸乙酯中蒸发残留物。

在乙酸乙酯中搅拌所述粗产物，并且转移所述混合物到搅拌容器。以受控添加方式将异丙醇加入乙酸乙酯溶液中引起结晶发生。搅拌混合物至少1小时。过滤所述晶体并用小体积异丙醇洗涤。真空干燥晶体至少16小时，生成化合物5。

加入水到搪玻璃或不锈钢容器中。内部温度调整到40±2°C。化合物5的晶体缓慢加入到水中，使溶解发生。分配温热溶液到lyoguard盘并且加载到冷冻干燥仪中。用5°C储存温度进行初步干燥超过至少3天。用+25°C储存温度进行第二干燥期超过至少24小时。进行IPC(KF)以证实可接受的水含量(通过条件:<15.0%水)。化合物2从lyoguard盘中移除并置于合适的容器（containment）。产率：来自异喹啉的80-90%。

实施例22：

化合物2的生物利用度

对健康男性对象(18-55岁)口服给予HPMC胶囊中的化合物2，采用可变量10mg、25mg、50mg、100mg和200mg，每天一次持续七天。

每个剂量后以常规间隔取血样，并且分析血液样品衍生血浆的化合物1水平。得到的数据用于计算药理学参数，示于表37。

表37：化合物2的药理学参数

n=每个剂量水平的对象数目。

实施例23：

单个口服剂量后，雄性比格犬中化合物2(无定形)、6、7和1的药代动力学（pharmakokinetic）分析

研究设计成比较禁食状态下，4个化合物1形式作为单个口服胶囊给予后的PK概况。动物的随机方案概括于下表。简单说，所述研究由4只雄性犬组成，各接受单个10mg/kg剂量的以下4个化合物中每一个：化合物2钠盐无定形、化合物6、化合物7和化合物1游离羧酸。给药之间有4天的清除期。在研究第1、4、8和11天的预定时间收集各动物的血样。通过验证HPLC MS/MS试验分析所述血浆的化合物1。

A–化合物2(无定形)

B–化合物6

C–化合物7

D–化合物1

描述PK参数通过标准模型独立方法(Gibaldi和Perrier,1982)基于单个血浆浓度-时间数据测定。血浆浓度四舍五入成（round）3个有效数字。就平均计算而言，对浓度低于可定量试验限度(BQL<2.00ng/mL)的血浆样品赋予零值。就PK计算而言，从剂量前时间到第一可定量浓度的时间，BQL设定成零，并且此后设定成缺失。标称时间点用于所有计算。

·C最大是给药后观察到的最大血浆浓度。

·T最大是达到C最大的时间。

·T_1/2是通过ln(2)/λ计算的表观半衰期，其中，λ是终末期log-线性比例的速率常数。计算λ需要血浆浓度时间曲线的分布后期中最小的三个值。

·AUC(0-T)是从时间零到使用线性梯形法则测定的最后可测量血浆浓度时间之间的血浆浓度时间曲线下的面积。

·AUC(0-inf)是从零到无穷的血浆浓度-时间曲线下的面积。这通过对AUC(0-T)求和与从T到无穷的外推面积计算。

通过无房室分析使用模型200在WinNonlin Professional6.1(加利福尼亚州芒廷维尤的Pharsight公司)中进行PK分析。。

对化合物2(无定形)、化合物6、化合物7和化合物1游离羧酸后的化合物1血浆浓度和PK参数而言，单个、平均和标准差（SD）值分别示于表38、39、40和41。化合物1的平均PK参数概括于表42。不同形式后的化合物1平均血浆浓度-时间概况示于图11，平均C最大和AUC(0-inf)示于图12。

单个口服剂量10mg/kg的化合物1后，就化合物2钠盐无定形、化合物6、化合物7和化合物1游离羧酸而言中值T最大值分别是0.750、1.00、1.00和2.00小时(表42)。对应的平均C最大值分别是1590±534、1320±1050、1260±428和294±238ng/mL(表42)。平均AUC(0-inf)值分别是1840±516、1930±1240、2440±542和680±412ng·h/mL。化合物6和游离羧酸后的AUC比化合物2无定形和化合物7水合物有更高的对象间变异性(%CV值范围60.6%-81.1%;见表42)。所述化合物7水合物产生最高平均AUC，而游离羧酸化合物1产生最低AUC。对化合物2钠盐无定形、化合物6、化合物6和游离羧酸化合物1而言，平均调和T_1/2值分别是2.49±0.391、2.82±1.18、4.36±3.16和2.11±0.115小时(图11和表42)。

游离羧酸化合物1后观察到最长T最大的2小时中值，相比于化合物2(无定形)、化合物6和化合物7的0.75–1小时。化合物2(无定形)后观察到最高平均C最大值(1590±534ng/mL)，和化合物6后观察到最高平均AUC值(2440±542ng·h/mL)。

表38：单个口服10mg/kg剂量的化合物2无定形后，犬中化合物1的血浆浓度(ng/mL)和PK参数

^a表示为中值和范围

^b表示为调和平均值和假标准差

BQL-低于可定量极限<2.00ng/mL

NA–不适用

表39：单个口服10mg/kg剂量的化合物6后，犬中化合物1的血浆浓度(ng/mL)和PK参数

^a表示为中值和范围

^b表示为调和平均值和假标准差

BQL-低于可定量极限<2.00ng/mL

NA–不适用

表40：单个口服10mg/kg剂量的化合物6后，犬中化合物1的血浆浓度(ng/mL)和PK参数

^a表示为中值和范围

^b表示为调和平均值和假标准差

BQL-低于可定量极限<2.00ng/mL

NA–不适用

表41：单个口服10mg/kg剂量的游离羧酸形式化合物1后，犬中化合物1的血浆浓度(ng/mL)和PK参数

^a表示为中值和范围

^b表示为调和平均值和假标准差

BQL-低于可定量极限<2.00ng/mL

NA-不适用

ND-未检测

表42：化合物1、化合物2(无定形)、化合物6和化合物7后，犬中化合物1的平均PK参数的总结

^a表示为中值和范围

^b表示为调和平均值和假标准差

以上是本发明的特定实施方式的详细说明。应理解，尽管出于说明目的本文描述了本发明的具体实施方式，但是可以对其进行各种改进而不偏离本发明精神和范围。因此，除了所附权利要求书，本发明不受限制。

Claims

1.(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的钠盐和其溶剂合物。

2.如权利要求1所述的钠盐，其特征在于，所述钠盐是无定形的。

3.如权利要求1所述的钠盐，其特征在于，所述钠盐是晶体溶剂合物的形式。

4.如权利要求3所述的钠盐，其特征在于，所述溶剂合物是乙醇溶剂合物、异丙醇溶剂合物或有约2-约5个水分子的水合物。

5.如权利要求4所述的钠盐，其特征在于，所述溶剂合物是乙醇或异丙醇溶剂合物。

6.如权利要求4所述的钠盐，其特征在于，所述溶剂合物是有约2个水分子的水合物。

7.如权利要求4所述的钠盐，其特征在于，所述溶剂合物是有约3-约5个水分子的水合物。

8.如权利要求6所述的钠盐水合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的x射线粉末衍射图包含2θ值约19.3度的峰。

9.如权利要求8所述的钠盐水合物，其特征在于，所述x射线粉末衍射图还显示2θ值约18.2度的峰。

10.如权利要求9所述的钠盐水合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的固态¹³CNMR谱包含位于约55.7、约128.2和约151.3ppm的峰。

11.如权利要求7所述的钠盐水合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的x射线粉末衍射图包含2θ值约15.2度的峰。

12.如权利要求11所述的钠盐水合物，其特征在于，所述X射线粉末衍射图还包含至少两个2θ值选自约4.8、约7.3、约12.0、约12.6、约23.5和约24.5度的峰。

13.如权利要求12所述的钠盐水合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的固态¹³CNMR谱包含位于约53.7、约122.9和约128.1ppm的峰。

14.如权利要求5所述的乙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的X射线粉末衍射图包含2θ值约14.3度的峰。

15.如权利要求5所述的乙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的X射线粉末衍射图包含2θ值约14.7度的峰。

16.如权利要求5所述的乙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的X射线粉末衍射图包含至少两个2θ值选自约14.3、约14.7、约26.9和约29.7度的峰。

17.如权利要求16所述的乙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的固态¹³CNMR谱包含位于约18.4、约139.7和约141.4ppm的峰。

18.如权利要求5所述的异丙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的X射线粉末衍射图包含至少一个2θ值选自约20.6、约26.6、约27.2、约28.3和约29.3度的峰。

19.如权利要求18所述的异丙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的X射线粉末衍射图包含至少两个2θ值选自约25.0、约26.0、约26.6、约27.2、约28.3和约29.3度的峰。

20.如权利要求18所述的异丙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的X射线粉末衍射图还包含至少一个2θ值选自约10.8、约14.0、约21.1、约21.9和约22.5度的峰。

21.如权利要求20所述的异丙醇溶剂合物，其特征在于，所述晶体溶剂合物的固态¹³CNMR谱包含位于约63.1和约140.7ppm的峰。

22.基本纯化形式的(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸。

23.一种药物组合物，所述药物组合物包含(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸、其钠盐或其钠盐溶剂合物，以及药学上可接受的运载体、稀释剂或赋形剂。

24.如权利要求23所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸钠盐。

25.如权利要求24所述的药物组合物，其特征在于，所述钠盐是无定形的。

26.如权利要求23-25中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物配制用于口服递送。

27.一种制备(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的钠盐或其溶剂合物的方法，所述方法包含：

(ii)形成(i)中所得钠盐的晶体醇溶剂合物；和

(iii)重结晶所述溶剂合物。

28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述晶体醇溶剂合物是乙醇溶剂合物、异丙醇溶剂合物或有约2-约5个水分子的水合物。

29.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中形成的晶体醇溶剂合物的醇分子在步骤(iii)之前、之中或之后换成另一种溶剂合物。

30.如权利要求27或29中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(iii)中重结晶的溶剂合物是异丙醇溶剂合物。

31.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述形成的溶剂合物是水合物。

32.如权利要求27-31中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包含干燥所述溶剂合物的步骤。

33.一种如权利要求27-31中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包含酸化钠盐以形成基本纯化形式的(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸。

34.一种制备(S)-2-(联苯基乙酰基)-1,2,3,4-四氢-6-甲氧基-5-(苯基甲氧基)-3-异喹啉羧酸的钠盐的醇溶剂合物的方法，所述方法包含步骤：

其中，环A是5元含氮杂环；和

(ii)用醇盐在醇溶剂中处理步骤(i)的产物。