CN102994222B - 一种从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法 - Google Patents

一种从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，所述方法包括以下步骤：（1）提取苦杏仁油：将苦杏仁粉碎后萃取，得苦杏仁油和苦杏仁粕；（2）提取苦杏仁苷：将苦杏仁粕加乙醇浸泡，微沸状态保温，提取过滤得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将提取液减压浓缩后静置析晶，得苦杏仁苷和滤液Ⅰ；（3）提取苦杏仁总黄酮：将滤渣Ⅰ加入乙醇在微沸状态下保温，提取过滤得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将总黄酮提取液浓缩得总黄酮粗品，纯化后得苦杏仁总黄酮；（4）提取苦杏仁蛋白：将滤渣Ⅱ干燥，得苦杏仁蛋白。本发明所述方法能够同时提取多种成分，避免单一提取所带来的资源浪费，提高苦杏仁的综合利用率。

Description

一种从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法
技术领域
本发明涉及一种从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，尤其是一种能够从苦杏仁中同时提取苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法。
背景技术
传统中医理论认为，苦杏仁具有降气止咳平喘、润肠通便的功效，主治咳嗽气喘、胸满痰多、肠燥便秘等。药理实验证实，苦杏仁具有镇咳平喘、抗肿瘤、降血脂、润肠通便等作用。其成分有脂肪油类、苷类、蛋白质类、黄酮类等。苦杏仁中的脂肪油含有丰富的亚油酸和油酸，对人体有重要的生理作用和药用价值，亚油酸是人体必需脂肪酸，能降低血液胆固醇，预防动脉粥样硬化。苦杏仁油可作为护肤化妆品的原料、精密仪器的润滑油、食品添加剂等，并且是上好的食用油。苦杏仁中的苦杏仁苷在体内分解为氢氰酸和苯甲醛，氢氰酸对呼吸中枢可产生一定的抑制作用，使呼吸趋于安静而达到镇咳平喘作用。苦杏仁苷及其水解所产生的氢氰酸和苯甲醛体外试验均被证明有抗癌作用，癌细胞内硫氢化酶较正常细胞少，因此对苦杏仁苷水解释放出的氢氰酸的解毒能力较差，苦杏仁苷加苯甲醛或苦杏仁苷加β-葡糖苷酶可明显提高抗癌效力。临床试验证实，健康人及高血脂症病人服用苦杏仁后可降低血脂水平，因此苦杏仁具有降血脂作用。
目前，对苦杏仁中苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮及苦杏仁蛋白的制备方法较多，但是现有的方法都是从苦杏仁中提取单一的成分，单一提取会造成资源的浪费，而且降低了苦杏仁的综合利用率，提高了苦杏仁深加工的成本。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种能够从苦杏仁中同时提取得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取苦杏仁，粉碎，然后萃取，分别得到苦杏仁油和苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，然后减压浓缩后静置析晶，得晶体和滤液Ⅰ，所得晶体即为苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4-1g生药/ml浓度，先通过大孔树脂柱，然后加水分散成0.1-0.4g生药/ml浓度，再上聚酰胺柱，收集洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ干燥，即得苦杏仁蛋白。
本发明所述方法使用的原料苦杏仁来源蔷薇科植物山杏Prunus armeniacaL.var.ansu Maxim.、西伯利亚杏Prunus sibirica L.、东北杏Prunus mandshurica(Maxim.)Koehne或杏Prunus armeniaca L.的干燥成熟种子。作为提取苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的原料，可以是市售炮制的饮片，也可以是此植物的原药材。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，所述步骤（1）中的苦杏仁水分活度为0.1~0.7，苦杏仁粉碎后过10~120目筛。一般选取新鲜的苦杏仁，进行干燥，使得苦杏仁的水分活度为0.1~0.7，然后将原料苦杏仁粉碎至10~120目；所述步骤（2）中先将苦杏仁粕干燥至水分活度为0.1-0.7，然后再加入80~95%的乙醇。所述苦杏仁的干燥方式可选择晒干、风干、烘干、真空烘干、冻干和脱水剂干燥中的至少一种。当采用脱水剂干燥的方式时，所述脱水剂选自乙醇、甘油、葡萄糖和食盐中的至少一种，所述脱水剂与所述苦杏仁的用量比为0.05~0.5L：1kg。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，所述步骤（1）采用超临界二氧化碳萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油，具体过程为：所述超临界流体萃取装置包括萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、二氧化碳储气罐、高压泵，将粉碎后的苦杏仁置于超临界流体萃取装置的萃取釜中，在分离釜Ⅰ温度为30-50℃、萃取釜温度为35-55℃条件下，打开二氧化碳储气罐，对萃取釜进行加压，当萃取釜压力达到25-32MPa、二氧化碳流速为12-24L/h时，保持温度和压力，萃取1-2h，收集萃取物，即得苦杏仁油。超临界流体萃取技术，是20世纪80年代发展起来的一种独特、高效、新型分离精制的高新技术。超临界二氧化碳萃取具有操作温度低、溶解能力强、无毒、无污染、无溶剂残留及产品易分离等优势，克服了其他提取方法分离过程的确定，特别适合于热敏性物质及生物活性物质的提取分离，因此，超临界二氧化碳流体萃取法是较为理想的工艺方法。
当所述步骤（1）采用超临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油时，本发明所述方法所得苦杏仁油的收率40-50%；所得苦杏仁苷的纯度大于90%；所得苦杏仁总黄酮的纯度大于50%；所述步骤（4）中滤渣Ⅱ中所含苦杏仁蛋白的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]大于42g/100g；所得苦杏仁中不饱和脂肪酸的含量为93-96.8%、饱和脂肪酸的含量为2.6-6.6%。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，所述步骤（1）采用亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，具体过程为：将粉碎后的苦杏仁与萃取剂按照1:1~1:20的质量比投入到亚临界流体萃取装置的萃取釜中，在萃取温度为30-50℃、萃取压力为2-10公斤压力的条件下，连续萃取1-2次，每次萃取5-10min，萃取流量为10-200L/h，得萃取物，将所得到的萃取物在分离温度为30-50℃、分离压力为1-2公斤压力条件下进行分离，得到萃取液，即为苦杏仁油。亚临界流体是指某些化合物在温度高于其沸点但低于临界温度，且压力低于其临界压力的条件下，以流体形式存在的该物质。在亚临界流体状态存在时，分子的扩散性能增强，传质速度快，对天然产物中弱极性以及非极性物质的渗透性和溶解能力显著提高。亚临界流体萃取技术，可以在比较低的压力下实现比较好的萃取效果，提供了一种投资少、成本低、并且更安全、无毒的萃取方法。与超临界流体萃取相比，亚临界流体萃取的主要优点是工作压力低，萃取条件更加温和，而且亚临界萃取大大降低了设备投资，减少了二氧化碳的用量，降低了成本，提高了安全性，并且保持了与超临界流体萃取相似的优点，如具有较强的溶解能力，可溶解多种物质等。
当所述步骤（1）采用亚临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油时，本发明所述方法所得苦杏仁油的收率45-52%；所得苦杏仁苷的纯度大于90%；所得苦杏仁总黄酮的纯度大于50%；所述步骤（4）中滤渣Ⅱ中所含苦杏仁蛋白的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]大于42g/100g；所得苦杏仁中不饱和脂肪酸的含量为93-96.8%、饱和脂肪酸的含量为2.6-6.6%。
在实践中，步骤（1）首选使用亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，因为与压榨法、有机溶剂浸出法相比，亚临界流体萃取法大大提高了萃取率，缩短了萃取时间，同时所述亚临界流体萃取法选用二氧化碳、烷烃类等无毒无害溶剂，从而无有害溶剂残留现象；与超临界流体萃取法相比，亚临界流体萃取的工作压力低，萃取条件更加温和如二氧化碳超临界萃取必须在25MPa以上的超高压状态下能够进行萃取加工，而二氧化碳亚临界萃取的工作压力为6~7MPa，工作温度为20~30℃。更重要地，亚临界流体萃取大大降低了设备投资，减少了二氧化碳的用量，降低了成本，提高了安全性，并且保持了超临界二氧化碳相似的优点，具有较强的溶解能力，可溶解多种物质等。同时，利用亚临界流体萃取技术可以一次性处理，实现萃取精制，无需后续的脱臭、脱色等处理，整个萃取过程是在密闭绝氧、低温低压的条件下进行，没有高温过程，因此特别适合于类似苦杏仁油等富含不饱和脂肪酸油脂的工业化连续性生产，操作方便、安全，环保。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，当步骤（1）使用亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油时，所述萃取剂为丙烷、丁烷、异丁烷、四氟丁烷、二甲醚、二氧化碳、液化石油气、六氟化硫、1,1,1,2-四氟乙烷中的任意一种或其组合。二氧化碳（CO2）无色、无味、无毒，且通常条件下为气体。CO2的临界温度（Tc=304.21K）和临界压力（pc=7.38MPa）温和，萃取过程中不产生任何副产品，可直接排入空气，无环境污染；萃取后无溶剂残留问题，可获取纯天然中药原料；操作上易于实现；可通过控制温度和压力改变其溶解度和状态，实现选择性提取分离。六氟化硫常态下是一种无色、无味、无嗅、无毒的非燃烧气体，分子量146.06，密度6.139克/升，约为空气的5倍，微溶于水、乙醇、乙醚，是已知化学安定性最好的气态物质之一，具有极好的热稳定性和化学稳定性。二甲醚（DME）是一种无色、具有轻微醚香味的气体，具有惰性、无腐蚀性、无致癌性。还具有优良的混溶性，能同大多数极性和非极性有机溶剂混溶。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，所述步骤（2）中减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃；所述步骤（4）中采用真空干燥滤渣Ⅱ，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，所述步骤（3）中将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4-1g生药/ml浓度，先通过大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为1:1~3:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.1-0.4g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为2:1~6:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，真空干燥得苦杏仁总黄酮。所述大孔树脂一般采用AB-8大孔树脂，上述纯化方法采用聚酰胺-大孔树脂联用对苦杏仁总黄酮纯化，使得纯化后苦杏仁总黄酮的产品纯度大于50%。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，所述步骤（3）中减压浓缩的条件均为：压力20-100kpa，时间20-120min，温度20~80℃；所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃。
作为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法的优选实施方式，所述步骤（2）中60~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1；所述步骤（3）中50~80%的乙醇与滤渣Ⅰ的重量比为6~10:1。
本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，通过对苦杏仁萃取、乙醇提取等过程，能够同时从苦杏仁中提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮及苦杏仁蛋白，所得苦杏仁油的收率大于40%，所得苦杏仁苷的纯度大于90%，所得苦杏仁总黄酮产品纯度大于50%，所得滤渣Ⅱ中苦杏仁蛋白的含量大于42g/100g。本发明所述方法从苦杏仁中同时提取分离得到多种有效成分，避免了现有技术中单一提取所带来的资源浪费，提高了苦杏仁的综合利用率，降低了苦杏仁深加工的成本。
附图说明
图1为本发明所述从苦杏仁中同时提取多种有效成分的工艺流程图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁100g，粉碎至10~120目，采用超临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油，具体过程为：所述超临界流体萃取装置包括萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、二氧化碳储气罐、高压泵，将粉碎后的苦杏仁置于超临界流体萃取装置的萃取釜中，在分离釜Ⅰ温度为30℃、萃取釜温度为35℃条件下，打开二氧化碳储气罐，对萃取釜进行加压，当萃取釜压力达到30MPa、二氧化碳流速为12L/h时，保持温度和压力，萃取2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4g生药/ml浓度，将所述0.4g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为1:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.1g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为2:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为40%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为94%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为53%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为42.9g/100g。
实施例2
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁1kg，粉碎至10~120目，采用超临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油，具体过程为：所述超临界流体萃取装置包括萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、二氧化碳储气罐、高压泵，将粉碎后的苦杏仁置于超临界流体萃取装置的萃取釜中，在分离釜Ⅰ温度为45℃、萃取釜温度为45℃条件下，打开二氧化碳储气罐，对萃取釜进行加压，当萃取釜压力达到32MPa、二氧化碳流速为12L/h时，保持温度和压力，萃取2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4g生药/ml浓度，将所述0.4g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为3:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.1g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为2:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为41.2%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为91%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为52%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为42g/100g。
实施例3
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁100g，粉碎至10~120目，采用超临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油，具体过程为：所述超临界流体萃取装置包括萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、二氧化碳储气罐、高压泵，将粉碎后的苦杏仁置于超临界流体萃取装置的萃取釜中，在分离釜Ⅰ温度为50℃、萃取釜温度为50℃条件下，打开二氧化碳储气罐，对萃取釜进行加压，当萃取釜压力达到25MPa、二氧化碳流速为24L/h时，保持温度和压力，萃取2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80～95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4g生药/ml浓度，将所述0.4g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为1∶1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.1g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为2:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为45.3%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为91%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为51%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为42.3g/100g。
实施例4
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁100g，粉碎至10~120目，采用超临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油，具体过程为：所述超临界流体萃取装置包括萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、二氧化碳储气罐、高压泵，将粉碎后的苦杏仁置于超临界流体萃取装置的萃取釜中，在分离釜Ⅰ温度为45℃、萃取釜温度为40℃条件下，打开二氧化碳储气罐，对萃取釜进行加压，当萃取釜压力达到28MPa、二氧化碳流速为12L/h时，保持温度和压力，萃取2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.5g生药/ml浓度，将所述0.5g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为2:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.2g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为4:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为49%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为96%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为58%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为42.6g/100g。
实施例5
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁100g，粉碎至10~120目，采用超临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油，具体过程为：所述超临界流体萃取装置包括萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、二氧化碳储气罐、高压泵，将粉碎后的苦杏仁置于超临界流体萃取装置的萃取釜中，在分离釜Ⅰ温度为45℃、萃取釜温度为55℃条件下，打开二氧化碳储气罐，对萃取釜进行加压，当萃取釜压力达到26MPa、二氧化碳流速为12L/h时，保持温度和压力，萃取2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成1g生药/ml浓度，将所述1g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为3:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.4g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为6:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为50%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为95%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为56%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为43.2g/100g。
实施例6
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁100g，粉碎至10~120目，采用超临界流体萃取法从苦杏仁萃取苦杏仁油，具体过程为：所述超临界流体萃取装置包括萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、二氧化碳储气罐、高压泵，将粉碎后的苦杏仁置于超临界流体萃取装置的萃取釜中，在分离釜Ⅰ温度为50℃、萃取釜温度为45℃条件下，打开二氧化碳储气罐，对萃取釜进行加压，当萃取釜压力达到32MPa、二氧化碳流速为24L/h时，保持温度和压力，萃取2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成1g生药/ml浓度，将所述1g生药/ml浓度水分散液先通过大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为3:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.4g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为6:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为43.8%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为93%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为54%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为44.7g/100g。
实施例7
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁1kg，粉碎至10~120目，亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，具体过程为：将粉碎后的苦杏仁与丙烷按照1:1的质量比投入到亚临界流体萃取装置的萃取釜中，在萃取温度为30℃、萃取压力为2公斤压力的条件下，萃取1次，萃取10min，萃取流量为10L/h，得萃取物，将所得到的萃取物在分离温度为30℃、分离压力为1公斤压力条件下进行分离，得到萃取液，即为苦杏仁油，剩余的物料即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4g生药/ml浓度，将所述0.4g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为1:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.1g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为2:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为45%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为92%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为51%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为43.5g/100g。
实施例8
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁1kg，粉碎至10~120目，亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，具体过程为：将粉碎后的苦杏仁与异丁烷按照1:3的质量比投入到亚临界流体萃取装置的萃取釜中，在萃取温度为35℃、萃取压力为4公斤压力的条件下，连续萃取2次，每次萃取5min，萃取流量为20L/h，得萃取物，将所得到的萃取物在分离温度为35℃、分离压力为1.5公斤压力条件下进行分离，得到萃取液，即为苦杏仁油，剩余的物料即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.6g生药/ml浓度，将所述0.6g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为2:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.2g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为3:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为49.5%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为94%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为53%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为43.5g/100g。
实施例9
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁1kg，粉碎至10~120目，亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，具体过程为：将粉碎后的苦杏仁与二氧化碳按照1:5的质量比投入到亚临界流体萃取装置的萃取釜中，在萃取温度为40℃、萃取压力为6公斤压力的条件下，萃取1次，萃取时间5min，萃取流量为40L/h，得萃取物，将所得到的萃取物在分离温度为35℃、分离压力为1.8公斤压力条件下进行分离，得到萃取液，即为苦杏仁油，剩余的物料即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成1g生药/ml浓度，将所述1g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为3:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.4g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为6:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为46%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为96%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为55%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为46.7g/100g。
实施例10
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁1kg，粉碎至10~120目，亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，具体过程为：将粉碎后的苦杏仁与二甲醚按照1:20的质量比投入到亚临界流体萃取装置的萃取釜中，在萃取温度为50℃、萃取压力为10公斤压力的条件下，连续萃取2次，每次萃取5min，萃取流量为200L/h，得萃取物，将所得到的萃取物在分离温度为50℃、分离压力为2公斤压力条件下进行分离，得到萃取液，即为苦杏仁油，剩余的物料即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.8g生药/ml浓度，将所述0.8g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为2:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.3g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为5:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为52%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为96%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为58%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为49.5g/100g。
实施例11
一种从苦杏仁中同时提取分离得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁总黄酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取新鲜的原料苦杏仁100g，粉碎至10~120目，亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，具体过程为：将粉碎后的苦杏仁与1,1,1,2-四氟乙烷按照1:15的质量比投入到亚临界流体萃取装置的萃取釜中，在萃取温度为40℃、萃取压力为8公斤压力的条件下，连续萃取2次，每次萃取10min，萃取流量为150L/h，得萃取物，将所得到的萃取物在分离温度为45℃、分离压力为1.6公斤压力条件下进行分离，得到萃取液，即为苦杏仁油，剩余的物料即为苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80~95%的乙醇浸泡2~3h，所述80~95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6~10:1，微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，减压浓缩，得晶体和滤液Ⅰ，减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后将所得晶体在无水乙醇中进行重结晶，得苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50~80%的乙醇在微沸状态下保温1~2h，提取1~5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.8g生药/ml浓度，将所述0.8g生药/ml浓度水分散液先通过AB-8大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为2.5:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV10~30%的乙醇和50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.25g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为4:1，依次用10~15BV蒸馏水、6~10BV50~80%的乙醇洗脱，收集50~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，减压浓缩压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20~80℃，然后真空干燥，真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ进行真空干燥，所述真空干燥的真空度为50~1200kpa，时间为40~180min，温度为20~80℃，即得苦杏仁蛋白。
所述步骤（1）中苦杏仁油的收率为48%，步骤（2）中所得苦杏仁苷的纯度为91%，步骤（3）中所得苦杏仁总黄酮的纯度为56%，步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量按照以下方法计算：容量法[GB 5009.5-2010第一法（蛋白质=含氮量×6.25）]，本实施例步骤（4）中所述滤渣Ⅱ中所含蛋白质的含量为44.8g/100g。
实施例12
1.苦杏仁总黄酮的含量测定
精密称取芦丁对照品适量（约5mg），置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取芦丁对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，置于25mL容量瓶中，加5%NaNO21mL，放置6min，加入10%Al(NO3)31mL,放置6min,再加10%NaOH10mL，加70%乙醇定容至刻度，静置15min，于510nm处测吸光度。以芦丁对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
精密称取苦实施例1-11所得苦杏仁总黄酮提取物样品各3份，每份50mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述样品溶液精密吸取样品溶液5mL置于25mL容量瓶中，加5%NaNO21mL，放置6min，加入10%Al(NO3)31mL，放置6min，再加10%NaOH10mL，加甲醇定容至刻度，静置15min，于510nm处测吸光度，外标两点法计算含量。计算得知，实施例1-11所得苦杏仁总黄酮以芦丁含量计为0.5%。
2.苦杏仁苷含量的测定
色谱条件：色谱柱：AKZONOBEL Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水（25:75），流速：1mL/min，柱温：30℃，检测波长为225nm，进样量10μL，理论塔板数按苦杏仁苷计大于5000。在此色谱条件下苦杏仁苷的分离度大于10。
标准曲线绘制：精密量取对照品溶液0.5、1、2、3、4、5mL至5mL容量瓶中，依次进样，测定各色谱峰峰面积，以峰面积值纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。
含量测定：分别精密称取实施例1-11中所得苦杏仁粕样品各3份，每份0.5g，置于锥形瓶中，加甲醇25mL，称定重量，超声提取30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，取上清液过0.45μm微孔滤膜，取续滤液注入色谱液相仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。计算得知，实施例1-11所得苦杏仁苷的含量为5.8%。
3.芦丁、槲皮素、异鼠李素的含量测定
色谱条件：色谱柱：KromasailC18（4.6×250mm，5μm）色谱柱，流动相：甲醇-0.4%磷酸（46：54），流速为1.0mL.min-1，柱温：30℃，检测波长：370nm，进样量为10μL。供试品溶液色谱中与各对照品对应的吸收峰的理论塔板数均不低于6000，对应的色谱峰的分离度均大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。
标准曲线绘制：精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5mL置5mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列混合对照品溶液。测定各色谱峰峰面积，以峰面积值纵坐标，进样量（ug）为横坐标，绘制标准曲线。
含量测定：分别精密称取实施例1-11所得苦杏仁总黄酮提取物样品各3份，每份0.1g，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀。精密吸取溶液10μL，注入色谱液相仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。计算得知，实施例1-11的苦杏仁中芦丁、槲皮素、异鼠李素的含量分别为5.65%、1.5%、0.86%。
4.苦杏仁油的检测
采用以下表格中的方法对实施例1-11所得苦杏仁油成分进行检测，检测方法及结果如下表1所示：
表1苦杏仁油中各各组分检测方法及结果
Figure BDA00002591061900201
Figure BDA00002591061900211
由表1内容得知，本发明所述方法提取得到的苦杏仁油的主要化学成分为脂肪酸。经GC/MS面积归一化法计算可得，本发明所述方法得到的苦杏仁油中饱和脂肪酸的含量为2.6-6.6%，不饱和脂肪酸的含量为93-96.8%。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (8)

1.一种从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）提取苦杏仁油：选取苦杏仁，粉碎，然后萃取，分别得到苦杏仁油和苦杏仁粕；
（2）提取苦杏仁苷：将步骤（1）中得到的苦杏仁粕加入80～95%的乙醇浸泡2～3h，微沸状态下保温1～2h，提取1～5次，趁热过滤，得苦杏仁苷提取液和滤渣Ⅰ，将得到的苦杏仁苷提取液合并，然后减压浓缩后静置析晶，得晶体和滤液Ⅰ，所得晶体即为苦杏仁苷；
（3）提取苦杏仁总黄酮：将步骤（2）中的滤渣Ⅰ加入50～80%的乙醇在微沸状态下保温1～2h，提取1～5次，趁热过滤，得总黄酮提取液和滤渣Ⅱ，将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4-1g生药/ml浓度，先通过大孔树脂柱，然后加水分散成0.1-0.4g生药/ml浓度，再上聚酰胺柱，收集洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥，得苦杏仁总黄酮；
（4）提取苦杏仁蛋白：将步骤（3）中得到的滤渣Ⅱ干燥，即得苦杏仁蛋白；
所述步骤（1）采用亚临界流体萃取法从苦杏仁中萃取苦杏仁油，具体过程为：将粉碎后的苦杏仁与萃取剂按照1:1～1:20的质量比投入到亚临界流体萃取装置的萃取釜中，在萃取温度为30-50℃、萃取压力为2-10公斤压力的条件下，连续萃取1-2次，每次萃取5-10min，萃取流量为10-200L/h，得萃取物，将所得到的萃取物在分离温度为30-50℃、分离压力为1-2公斤压力条件下进行分离，得到萃取液，即为苦杏仁油。
2.如权利要求1所述的从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的苦杏仁水分活度为0.1～0.7，苦杏仁粉碎后过10～120目筛；所述步骤（2）中先将苦杏仁粕干燥至水分活度为0.1-0.7，然后再加入80～95%的乙醇。
3.如权利要求1所述的从苦杏仁油中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述萃取剂为丙烷、丁烷、异丁烷、四氟丁烷、二甲醚、二氧化碳、液化石油气、六氟化硫、1，1，1，2-四氟乙烷中的任意一种或其组合。
4.如权利要求1所述的从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤（2）中减压浓缩的压力为20-100kpa，时间为20-120min，温度为20～80℃；所述步骤（4）中采用真空干燥滤渣Ⅱ，所述真空干燥的真空度为50～1200kpa，时间为40～180min，温度为20～80℃。
5.如权利要求1所述的从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤（3）中将得到的总黄酮提取液与步骤（2）中的滤液Ⅰ合并，然后浓缩回收溶剂至无醇味后加水分散成0.4-1g生药/ml浓度，先通过大孔树脂，上样量为生药量：大孔树脂量的质量比为1:1～3:1，依次用10～15BV蒸馏水、6～10BV10～30%的乙醇和50～80%的乙醇洗脱，收集50～80%乙醇洗脱部分，洗脱液减压浓缩回收溶剂至无醇味，再加水分散成0.1-0.4g生药/ml浓度，然后通过聚酰胺树脂，上样量为生药量：聚酰胺树脂量的质量比为2:1～6:1，依次用10～15BV蒸馏水、6～10BV50～80%的乙醇洗脱，收集50～80%乙醇洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，真空干燥得苦杏仁总黄酮。
6.如权利要求5所述的从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤（3）中减压浓缩的条件均为：压力20-100kpa，时间20-120min，温度20～80℃；所述真空干燥的真空度为50～1200kpa，时间为40～180min，温度为20～80℃。
7.如权利要求1所述的从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述步骤（2）中80～95%的乙醇与苦杏仁粕的重量比为6～10:1；所述步骤（3）中50～80%的乙醇与滤渣Ⅰ的重量比为6～10:1。
8.如权利要求1所述的从苦杏仁中同时提取多种有效成分的方法，其特征在于，所述方法所得苦杏仁油的收率40-52%，所得苦杏仁苷的纯度大于90%，所得苦杏仁总黄酮的纯度大于50%，所得苦杏仁中不饱和脂肪酸的含量为93-96.8%、饱和脂肪酸的含量为2.6-6.6%；所述滤渣Ⅱ中苦杏仁蛋白的含量大于42g/100g。
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