CN102977228A - 一种高效价肝素钠的提取方法 - Google Patents

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顾永军
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Abstract

本发明公开了一种高效价肝素钠的提取方法，其特征在于：包括肝素钠粗品的复溶、超滤、脱色、氧化、醇沉和干燥过程，首先采用超滤膜除杂蛋白，再用大孔吸附树脂吸附色素，最后经过常规氧化、醇沉和干燥步骤得到精制的肝素钠，本发明制备的肝素钠效价值高于250IU/g，色素去除率达到95%以上，蛋白质去除率高于99%。

Description

一种高效价肝素钠的提取方法
技术领域
本发明涉及一种高效价肝素钠的提取方法。
背景技术
肝素钠是一类抗凝血药，主要由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质。肝素钠可用于手术预防危险的血栓栓塞性疾病，能够减轻不稳定型心绞痛、预防心肌梗塞，降低急性心肌梗塞病死率，最新研究发现还具有降血脂、降胆固醇的作用。
目前，肝素钠主要是从猪、羊小肠粘膜和牛肺等中提取出，提取液里常含有大量的残蛋白、核酸、色素和微生物等。传统的提取方法较常采用酸碱处理、高温处理和氧化处理等手段去除上述杂质，但是去除效果并不高，会有残留，影响了肝素钠产品的最终效价，其效价值一般在200IU/g左右。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效价肝素钠的提取方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种高效价肝素钠的提取方法，其特征在于：包括肝素钠粗品的复溶、超滤、脱色、氧化、醇沉和干燥过程，其具体步骤为：
1）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为1-3%的氯化钠溶液和0.5-1%的碱性蛋白酶，在30-40℃下搅拌2-3h，酶解后，采用高速离心机，以8000r/min的转速，时间为15-20min离心除杂质，得到酶解液；
2）超滤：将上述酶解液使用孔径为8000-10000分子量的中空纤维超滤膜，在0.1-0.2MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；
3）脱色：将步骤2）所得滤液加入3-4wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3-4h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用有机溶剂洗脱，再以清水漂洗下次备用；
4）氧化、醇沉和干燥：将步骤3）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。
进一步地，所述的大孔吸附树脂为AB-8树脂或D101树脂。
进一步地，所述有机溶剂为甲醇或乙醇。
本发明的优点在于：本发明肝素钠粗品复溶的预处理后，首先采用超滤膜除杂蛋白，再用大孔吸附树脂吸附色素，最后经过常规氧化、醇沉和干燥步骤得到精制的肝素钠，本发明提取的肝素钠效价值高于250IU/g，色素去除率达到95%以上，蛋白质去除率高于99%。
具体实施方式
为了使公众能充分了解本发明的技术实质和有益效果，申请人对实施例的描述不是对技术方案的限制，任何依据本发明构思作形式而非实质的变化都应当视为本发明的保护范围。
实施例1 
一种高效价肝素钠的提取方法，包括肝素钠粗品的复溶、超滤、脱色、氧化、醇沉和干燥过程，其具体步骤为：
1）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为3%的氯化钠溶液和0.5%的碱性蛋白酶，在30℃下搅拌2h，酶解后，采用高速离心机，以8000r/min的转速，时间为20min离心除杂质，得到酶解液；
2）超滤：将上述酶解液使用孔径为10000分子量的中空纤维超滤膜，在0.1-0.2MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；
3）脱色：将步骤2）所得滤液加入3.5wt%的AB-8型大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3-4h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用乙醇或甲醇洗脱，再以清水漂洗下次备用；
4）氧化、醇沉和干燥：将步骤3）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。
本发明提取的肝素钠效价值250.1IU/g，色素去除率达到96.4%，蛋白质去除率99.2%。
实施例2 
一种高效价肝素钠的提取方法，包括肝素钠粗品的复溶、超滤、脱色、氧化、醇沉和干燥过程，其具体步骤为：
1）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为1%的氯化钠溶液和1%的碱性蛋白酶，在40℃下搅拌3h，酶解后，采用高速离心机，以8000r/min的转速，时间为20min离心除杂质，得到酶解液；
2）超滤：将上述酶解液使用孔径为8000分子量的中空纤维超滤膜，在0.1-0.2MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；
3）脱色：将步骤2）所得滤液加入3.5wt%的D101型大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3-4h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用乙醇或甲醇洗脱，再以清水漂洗下次备用；
4）氧化、醇沉和干燥：将步骤3）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。
本发明提取的肝素钠效价值252.3IU/g，色素去除率达到95.3%，蛋白质去除率99.5%。

Claims (3)

1.一种高效价肝素钠的提取方法，其特征在于：包括肝素钠粗品的复溶、超滤、脱色、氧化、醇沉和干燥过程，其具体步骤为：
1）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为1-3%的氯化钠溶液和0.5-1%的碱性蛋白酶，在30-40℃下搅拌2-3h，酶解后，采用高速离心机，以8000r/min的转速，时间为15-20min离心除杂质，得到酶解液；
2）超滤：将上述酶解液使用孔径为8000-10000分子量的中空纤维超滤膜，在0.1-0.2MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；
3）脱色：将步骤2）所得滤液加入3-4wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3-4h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用有机溶剂洗脱，再以清水漂洗下次备用；
4）氧化、醇沉和干燥：将步骤3）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。
2.根据权利要求1所述的一种高效价肝素钠的提取方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂为AB-8树脂或D101树脂。
3.根据权利要求1所述的一种高效价肝素钠的提取方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇或乙醇。
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PB01 Publication
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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