CN102907256A - 一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,包括蚕蛹清洗、消毒、接种、虫草培养。菌种用PDA液体培养基培养,培养基高温灭菌接种后摇床23℃左右培养至培养液较粘稠并有菌球出现。培养好的液体菌种过滤至无菌瓶内,菌球用菌液体积0.5-1倍的无菌水冲洗2-3次,整个过程无菌操作。接种时用注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射;接种后单层摆放于消过毒的培养室内,接种处变干结痂,转移到灭过菌的塑料盒内培养,至尾部僵化变硬、环节处有菌丝出现时摆放在有通气孔盒内,保持温、湿度,直至长出蛹虫草,采收,烘干。本发明温、湿度易控制、调节,能充分光照,易采收,虫草培养时间短、操作方便、出草整齐,成功率高达95%以上,虫草商品性好。
Description
技术领域
本发明属于食用菌栽培领域,具体涉及一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法。
背景技术
蛹虫草也称北冬虫夏草、北蛹虫草、虫草等,其有效成分和冬虫夏草类似。
自然界中野生蛹虫草的资源稀缺,其产量受自然环境和气候的影响很大,根本满足不了人们的需求,目前市场上的蛹虫草产品大多是人工培养的,人工培养的方式为:(1)采集野生的蛹虫草进行菌种的分离、纯化,然后将蛹虫草菌接种在固体培养基上,于20-25℃及一定的湿度和光照条件下培养,经35-45d子实体即可达到采收。姜明兰等用野生菌进行组织分离,在PDA培养基上分离、纯化出优良的原种,经人工驯化的原种在PDA液体培养基中扩大培养后,接种到大米培养基上,成功获得子实体。张显科等研究认为,高粱米、小米、玉米渣和蚕蛹可以代替大米栽培蛹虫草;(2)用液体深层发酵的方法人工生产蛹虫草菌丝体。采用液体发酵的方法获得菌丝体可以高效快速的得到某些有效成分,缩短生产周期。不少科研工作者对液体深层发酵的条件进行了探索。刘苗苗等用响应曲面法优化蛹虫草液体培养条件,得出了蛹虫草培养中最佳碳氮比和培养时间;唐芳荣,昌艳等以传统工业废料玉米浆、豆饼粉等作培养基,并对培养条件进行了优化。汪宇等以发酵得率为指标优化培养基成分,初步得到蛹虫草液体培养条件和生长动力学,为蛹虫草液体培养工业化生产提供了一定的理论依据;(3)采用缫丝厂副产物干的桑蚕或柞蚕蛹,通过复水后高温灭菌,然后接种,在18-23℃发菌,约30d左右发菌完毕,然后将蛹体照光,一定时间后可获得蛹虫草。
目前,采用大米发酵也是获得虫草子实体的重要方式,但是由于大米中缺少虫体中特有的蛋白等营养物质,所获得的子实体虫草素等有效成分的含量偏低,质量难以保证,更有不法者以无机氮源代替有机氮,使获得的子实体中主要活性成分虫草素的含量很低,甚至没有,干扰了蛹虫草的市场。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状,旨在提供一种出草整齐、培养时间短、操作方便、成功率高,虫草商品性好的柞蚕蛹虫草盒式培养方法。
本发明目的的实现方式为,一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,具体步骤如下:
(1)接种前准备
①挑出蚕茧中混合的死蚕蛹,用水洗掉蚕蛹表面的尘土及夹带的毛片,晾干蚕蛹体表面水分,用臭氧或紫外线消毒30min;
②制备虫草培养基:250ml三角瓶中装110-130ml液体培养基,用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块,放于三角瓶中,每瓶4-6个菌块;23℃静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇,36h后摇床转速120-130r/m,培养3-5天菌种较粘稠并有菌球出现;
(2)接种
将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内,整个过程保持无菌操作,滤液中添加滤液体积0.5-1.0倍的无菌水;接种时先用5ml注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射,注射深度1-2cm,每个蚕蛹的注射量0.1-0.5ml;
(3)蚕蛹僵化
接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内的培养架上,温度控制在16-18℃, 1-3天接种处变干结痂;然后将蚕蛹转移到灭过菌的培养盘内,每个蚕蛹之间留有空隙,单层摆放,升温至13-18℃,每天通风30±10min, 4天后蚕蛹的尾部即僵化变硬;僵化时间7-10天,待环节处有菌丝出现,表示僵化完成;
(4)出草管理
将僵化好的蚕蛹摆放在盒内,盒内加10-20ml水,盒上覆盖透明塑料薄膜,两端留通气孔,温度保持在20-23℃,开始阶段湿度70-80%,光线200-400 Lx,草长出来后,湿度85%以上,温度20-23℃,每天通风8-15min;
(5)接种后的40-50天采收,采收时保持虫草完整,不要折断,采收后立即烘干,避光保存。
本发明根据蚕蛹生理特点,采用蚕蛹盒式培养法,解决了柞蚕蛹栽培虫草栽培过程中感染率低、易受杂菌污染、出草率低等问题;可充分灭菌,盒内温、湿度易控制、调节,能充分光照,易采收。本发明出草整齐、培养时间短、操作方便、成功率高达95%以上,虫草商品性好。
具体实施方式
本发明先清洗蚕茧、消毒、晾干;三角瓶中液体培养基,用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块,放于三角瓶中,摇床培养至有菌种较粘稠并有菌球出现;过滤至灭过菌的瓶内,菌球用无菌水冲洗,保持无菌操作;用注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射。单层摆放在消过毒的培养室内,接种处变干结痂,转移到灭过菌的塑料盒内,至尾部僵化变硬,未僵化、有伤口的蚕蛹捡出,至环节处有菌丝出现;摆放在有通气孔的塑料盒内,保持温、湿度,长出蛹虫草,采收,烘干。
250ml三角瓶中所装110-130ml液体培养基为PDA培养基。
蚕蛹的尾部僵化变硬,伤口处流出的体液沾到其它蚕蛹上,用70%酒精擦拭消毒。
培养室内的培养架层高45±5cm,宽度60±6cm,长度80±8cm,培养架上铺一层塑料窗纱,培养室内放一台臭氧发生器。
5ml注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射,注射深度1-2cm,每个蚕蛹的注射量0.1-0.5ml;
将僵化好的蚕蛹摆放在长30±5cm、宽20±2cm、深10±1cm方形,有通气孔的塑料盒内。
下面用具体实施例详述本发明。
例1、
(1)接种前准备
①挑出蚕茧中混合的死蛹,用水洗掉蛹表面的尘土及夹带的毛片,晾干蛹体表面水分,用臭氧消毒30min。
②制备虫草培养基:250ml三角瓶中装110mlPDA培养基,用接种针在试管斜面培养基上刮取4个菌块放于三角瓶中;23℃静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇,36h后摇床转速120r/m,培养3天菌种较粘稠并有菌球出现;
(2)接种,将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内,整个过程保持无菌操作,滤液中添加滤液体积0.5倍的无菌水;接种时先用5ml注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射,注射深度1cm,每个蚕蛹的注射量0.1ml;
(3)蚕蛹僵化
接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内,层高40cm,宽度54cm,长度72cm的培养架上,温度控制在16℃,1-3天接种处变干结痂;然后将蚕蛹转移到灭过菌的塑料盒内,每个蚕蛹之间留有空隙,单层摆放,控温至13℃,每天通风20min,4天后蚕蛹的尾部即僵化变硬;僵化时间7-10天,待环节处有菌丝出现表示僵化完成;
(4)出草管理
将僵化好的蚕蛹摆放在长30cm、宽20cm、深10cm方形,有通气孔的塑料盒内,盒内加10ml水,盒上覆盖透明塑料薄膜,两端留通气孔,温度保持在20℃,开始阶段湿度70%,光线200 Lx,草长出来后,湿度85%,温度20℃,每天通风8min;
(5)接种后的50天采收,采收时保持虫草完整,不要折断,采收后立即烘干,避光保存。出草整齐、成功率95%。
例2、
(1)接种前准备
①挑出蚕茧中混合的死蛹,用水洗掉蛹表面的尘土及夹带的毛片,晾干蛹体表面水分,用臭氧或紫外线消毒30min,酒精表面灭菌。
②制备虫草培养基:250ml三角瓶中装120mlPDA培养基,用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块,放于三角瓶中,每瓶5个菌块;23℃静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇,36h后摇床转速125r/m,培养4天菌种较粘稠并有菌球出现;
(2)接种,将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内,整个过程保持无菌操作,滤液中添加滤液体积0.8倍的无菌水;接种时先用5ml注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射,注射深度1.5cm,每个蚕蛹的注射量0.2ml;
(3)蚕蛹僵化
接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内,层高45cm,宽度60cm,长度80的培养架上,温度控制在16℃, 1-3天接种处变干结痂;然后将蚕蛹转移到灭过菌的塑料盒内,每个蚕蛹之间留有空隙,单层摆放,升温至16℃,每天通风30min, 4天后蛹的尾部即僵化变硬;僵化时间8天,待环节处有菌丝出现表示僵化完成;
(4)出草管理
将僵化好的蚕蛹摆放在长30cm、宽20cm、深10cm方,有通气孔的形塑料盒内,盒内加15ml水,盒上覆盖透明塑料薄膜,两端留通气孔,温度保持在22℃,开始阶段湿度80%,光线300 Lx,草长出来后,湿度90%,温度22℃,每天通风10min;
(5)接种后的45天采收,采收时保持虫草完整,不要折断,采收后立即烘干,避光保存。出草整齐、成功率96%。
例3、
(1)接种前准备
①挑出蚕茧中混合的死蛹,用水洗掉蛹表面的尘土及夹带的毛片,晾干蛹体表面水分,用臭氧或紫外线消毒30min,酒精表面灭菌。
②制备虫草培养基:250ml三角瓶中装130mlPDA培养基,用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块,放于三角瓶中,每瓶6个菌块;23℃静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇,48h后摇床转速130r/m,培养5天菌种较粘稠并有菌球出现;
(2)接种,将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内,整个过程保持无菌操作,滤液中添加滤液体积1.0倍的无菌水;接种时先用5ml注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射,注射深度2.0cm,每个蚕蛹的注射量0.5ml;
(3)蚕蛹僵化
接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内,层高50cm,宽度66cm,长度88cm的培养架上,温度控制在18℃,1-3天接种处变干结痂;然后将蚕蛹转移到灭过菌的塑料盒内,每个蚕蛹之间留有空隙,单层摆放,升温至18℃,每天通风40min, 4天后蛹的尾部即僵化变硬;僵化时间7-10天,待环节处有菌丝出现表示僵化完成;
(4)出草管理
将僵化好的蚕蛹摆放在长35cm、宽22cm、深11cm方形,有通气孔的塑料盒内,盒内加20ml水,盒上覆盖透明塑料薄膜,两端留通气孔,温度保持在23℃,开始阶段湿度80%,光线400 Lx,草长出来后,湿度95%,温度23℃,每天通风15min;
(5)接种后的50天采收,采收时保持虫草完整,不要折断,采收后立即烘干,避光保存。出草整齐、成功率98%。
Claims (6)
1.一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,其特征在于具体步骤如下:
(1)接种前准备
①挑出蚕茧中混合的死蚕蛹,用水洗掉蚕蛹表面的尘土及夹带的毛片,晾干蚕蛹体表面水分,用臭氧或紫外线消毒30min;
②制备虫草培养基:250ml三角瓶中装110-130ml液体培养基,用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块,放于三角瓶中,每瓶4-6个菌块;23℃静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇,36h后摇床转速120-130r/m,培养3-5天菌种较粘稠并有菌球出现;
(2)接种
将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内,整个过程保持无菌操作,滤液中添加滤液体积0.5-1.0倍的无菌水;接种时先用5ml注射器吸取菌液,从蚕蛹尾部数第二节处注射,注射深度1-2cm,每个蚕蛹的注射量0.1-0.5ml;
(3)蚕蛹僵化
接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内的培养架上,温度控制在16-18℃, 1-3天接种处变干结痂;然后将蚕蛹转移到灭过菌的培养盘内,每个蚕蛹之间留有空隙,单层摆放,升温至13-18℃,每天通风30±10min, 4天后蚕蛹的尾部即僵化变硬;僵化时间7-10天,待环节处有菌丝出现,表示僵化完成;
(4)出草管理
将僵化好的蚕蛹摆放在盒内,盒内加10-20ml水,盒上覆盖透明塑料薄膜,两端留通气孔,温度保持在20-23℃,开始阶段湿度70-80%,光线200-400 Lx,草长出来后,湿度85%以上,温度20-23℃,每天通风8-15min;
(5)接种后的40-50天采收,采收时保持虫草完整,不要折断,采收后立即烘干,避光保存。
2.根据权利要求1所述的一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,其特征在于250ml三角瓶中所装110-130ml液体培养基为PDA培养基。
3.根据权利1所述一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,其特征在于蚕蛹的尾部僵化变硬,伤口处流出的体液沾到其它蚕蛹上,用70%酒精擦拭消毒。
4.根据权利要求1所述的一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,其特征在于尾部未僵化、有伤口的蚕蛹捡出。
5.根据权利1所述一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,其特征在于培养架层高45±5cm,宽度60±6cm,长度80±8cm,培养架上铺一层塑料窗纱单层摆放,培养室内放一台臭氧发生器。
6.根据权利1所述一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法,其特征在将僵化好的蚕蛹摆放在长30±5cm、宽20±2cm、深10±1cm方形,有通气孔的塑料盒内。
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