CN102899377B - 金霉素预混剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种金霉素预混剂的制备方法，是将金色链霉菌采用纯种二级发酵培养，培养基采用实罐灭菌法，在整个培养过程中严格保持无菌状态并保持一定的罐温、罐压，通入无菌空气并不断搅拌，根据发酵代谢过程中的pH和糖量变化，采用通氨和补料的方式保持一定的酸碱度及营养，所得发酵液再经过钙化、板框过滤、旋转闪蒸干燥、粉碎、过筛、混合等过程，最终制得金霉素预混剂；本发明方法大大提高了发酵单位和提取收率，提高了产品质量和活性成分含量，同时生产工艺简单、快速、稳定。

Description

金霉素预混剂的制备方法

技术领域

本发明属于兽药领域，涉及一种抗生素预混剂的制备方法。

背景技术

金霉素预混剂属四环类抗生素药物饲料添加剂，主要活性成分为金霉素钙盐，其抗菌谱广，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、螺旋体、立克次体、支原体、衣原体等均有较强的抑制作用，不仅可以预防和治疗禽畜疾病如细菌性肺炎、细菌性肠炎、钩端螺旋体病、猪链球菌性颊部脓肿、鸡传染性滑膜炎等，而且可以促进禽畜对营养物质的吸收，提高饲料转化率，促进禽畜生长。此外，金霉素预混剂还具有生产工艺较成熟，效价较高，使用成本相对较低；人畜不交叉使用，避免了交叉耐药；使用安全性高，低剂量长期使用不会引起药物残留；与其它兽药之间少有配伍禁忌，可用作基础药物与其它兽药制成复合药物饲料添加剂等优点。

随着畜牧业的进一步发展，近年来金霉素预混剂的市场需求量不断扩大，预计在未来较长一段时间内也是药物饲料添加剂的主力产品之一，而国外客户对金霉素预混剂的质量要求越来越高（如金霉素含量大于23%），且产品价格与活性成分含量直接相关，因此，有必要改进和完善金霉素预混剂的制备方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种改进的制备金霉素预混剂的方法，提高发酵单位和提取收率，提高产品质量和活性成分含量，同时生产工艺简单、快速、稳定。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

金霉素预混剂的制备方法，包括以下步骤：

a．种子培养：将金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子悬浮液接种入种子罐，用种子培养基在温度30-33℃、通气量1:1.5-2.0 v/v/min、罐压0.03-0.05 MPa、搅拌速度150-230 rpm/min的条件下培养20-26小时；

所述种子培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0-0.05%、硫酸铵0.2-0.6%、碳酸钙0.2-0.6%、氯化钙0-0.3%、玉米蛋白0-1%、玉米淀粉3-5%、玉米浆0-0.8%、葡萄糖0-0.6%、硫酸镁0.02-0.04%、花生饼粉0-4%、磷酸二氢钾0.01-0.06%、氯化钠0-0.3%、黄豆饼粉0-4%、植物油或豆油0-0.6%、酵母粉0-2%、余量为水；

b．发酵培养：将步骤a制得的种子培养液接入发酵罐，用发酵培养基在温度28-33℃、通气量1:0.8-1.0 v/v/min、罐压0.02-0.05 MPa、搅拌速度120-180 rpm/min的条件下发酵培养80-160小时，在发酵培养过程中通过添加氨水确保发酵液pH在5.6-6.2之间，并根据发酵液的总糖浓度和总糖浓度控制指标添加补料培养基；

所述总糖浓度控制指标为：发酵培养0-40小时控制总糖质量百分浓度不低于4.0%，发酵培养40-80小时控制总糖质量百分浓度低于4.0%但高于2.5%，发酵培养80小时后控制总糖质量百分浓度不高于2.5%；

所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.002-0.02%、硫酸铵0.5-1%、消泡剂0-0.06%、碳酸钙0.4-0.7%、氯化钙0-1%、玉米蛋白0-1%、玉米淀粉0-8%、玉米浆0-2%、葡萄糖0-1%、硫酸镁0.001-0.3%、花生饼粉0-4%、磷酸二氢钾0.01-0.03%、氯化钠0.1-0.4%、黄豆饼粉0-5%、植物油或豆油0-0.3%、酵母粉0-2%、余量为水；

所述补料培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0-0.08%、硫酸铵0-0.7%、消泡剂0.02-0.08%、碳酸钙0.2-0.6%、氯化钙0-1.0%、玉米蛋白0-1.0%、玉米淀粉0-50%、玉米浆0-2.6%、葡萄糖0-0.6%、硫酸镁0-0.03%、花生饼粉0-1%、磷酸二氢钾0-0.02%、氯化钠0.2-0.5%、黄豆饼粉0-1%、植物油或豆油0-0.6%、酵母粉0-0.5%、余量为水；

c．提取：取步骤b制得的发酵液，加入相当于发酵液体积0-12%的碳酸钙，搅拌20-40分钟，板框压滤，压滤完毕后，将板框滤饼在进风温度210-260℃、排风温度90-120℃条件下进行旋转闪蒸干燥，干燥物料经振动筛筛分，筛上的大颗粒经粉碎机粉碎后重新筛分，最后混合，即得金霉素预混剂。

优选的，所述种子培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：硫酸铵0.4-0.5%、碳酸钙0.4%、玉米淀粉3.6-4%、硫酸镁0.02%、花生饼粉1.6-1.8%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.12%、黄豆饼粉1.3-1.5%、植物油或豆油0.5%、酵母粉1.0-1.1%、余量为水。

优选的，所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.006%、硫酸铵0.88%、消泡剂0.02%、碳酸钙0.6%、氯化钙0.6%、玉米淀粉6.05%、玉米浆1.4-1.8%、硫酸镁0.16%、花生饼粉1.7%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.22%、黄豆饼粉1.0-1.5%、植物油或豆油0.2%、酵母粉0.8-1.2%、余量为水。

优选的，所述补料培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.03%、硫酸铵0.25%、消泡剂0.03%、碳酸钙0.375%、氯化钙0.25%、玉米淀粉40%、玉米浆1.7-2.0%、氯化钠0.375%、植物油或豆油0.075%、余量为水。

更优选的，所述金霉素预混剂的制备方法包括以下步骤：

a．种子培养：将金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子悬浮液接种入种子罐，用种子培养基在温度30-33℃、通气量1:1.5-2.0 v/v/min、罐压0.03-0.05 MPa、搅拌速度150-230 rpm/min的条件下培养24小时；

所述种子培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：硫酸铵0.42%、碳酸钙0.4%、玉米淀粉3.67%、硫酸镁0.02%、花生饼粉1.67%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.12%、黄豆饼粉1.33%、植物油0.5%、酵母粉1.04%、余量为水；

b．发酵培养：将步骤a制得的种子培养液接入发酵罐，用发酵培养基在温度28-33℃、通气量1:0.8-1.0 v/v/min、罐压0.02-0.05 MPa、搅拌速度120-180 rpm/min的条件下发酵培养85小时，在发酵培养过程中通过添加氨水确保发酵液pH在5.6-6.2之间，并根据发酵液的总糖浓度和总糖浓度控制指标添加补料培养基；

所述总糖浓度控制指标为：发酵培养0-40小时控制总糖质量百分浓度不低于4.0%，发酵培养40-80小时控制总糖质量百分浓度低于4.0%但高于2.5%，发酵培养80小时后控制总糖质量百分浓度不高于2.5%；

所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.006%、硫酸铵0.88%、消泡剂0.02%、碳酸钙0.6%、氯化钙0.6%、玉米淀粉6.05%、玉米浆1.4%、硫酸镁0.16%、花生饼粉1.7%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.22%、黄豆饼粉1%、植物油0.2%、酵母粉0.88%、余量为水；

所述补料培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.03%、硫酸铵0.25%、消泡剂0.03%、碳酸钙0.375%、氯化钙0.25%、玉米淀粉40%、玉米浆1.7%、氯化钠0.375%、植物油0.075%、余量为水；

c．提取：取步骤b制得的发酵液，加入相当于发酵液体积5%的碳酸钙，搅拌30分钟，板框压滤，压滤完毕后，将板框滤饼在进风温度240℃、排风温度110℃条件下进行旋转闪蒸干燥，干燥物料经振动筛筛分，筛上的大颗粒经粉碎机粉碎后重新筛分，最后混合，即得金霉素预混剂。

更优选的，所述金霉素预混剂的制备方法包括以下步骤：

a．种子培养：将金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子悬浮液接种入种子罐，用种子培养基在温度30-33℃、通气量1:1.5-2.0 v/v/min、罐压0.03-0.05 MPa、搅拌速度150-230 rpm/min的条件下培养24小时；

所述种子培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：硫酸铵0.5%、碳酸钙0.4%、玉米淀粉4%、硫酸镁0.02%、花生饼粉1.8%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.12%、黄豆饼粉1.5%、植物油或豆油0.5%、酵母粉1.1%、余量为水；

b．发酵培养：将步骤a制得的种子培养液接入发酵罐，用发酵培养基在温度28-33℃、通气量1:0.8-1.0 v/v/min、罐压0.02-0.05 MPa、搅拌速度120-180 rpm/min的条件下发酵培养85小时，在发酵培养过程中通过添加氨水确保发酵液pH在5.6-6.2之间，并根据发酵液的总糖浓度和总糖浓度控制指标添加补料培养基；

所述总糖浓度控制指标为：发酵培养0-40小时控制总糖质量百分浓度不低于4.0%，发酵培养40-80小时控制总糖质量百分浓度低于4.0%但高于2.5%，发酵培养80小时后控制总糖质量百分浓度不高于2.5%；

所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.006%、硫酸铵0.88%、消泡剂0.02%、碳酸钙0.6%、氯化钙0.6%、玉米淀粉6.05%、玉米浆1.8%、硫酸镁0.16%、花生饼粉1.7%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.22%、黄豆饼粉1.5%、植物油0.2%、酵母粉1.20%、余量为水；

所述补料培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.03%、硫酸铵0.25%、消泡剂0.03%、碳酸钙0.375%、氯化钙0.25%、玉米淀粉40%、玉米浆2.0%、氯化钠0.375%、植物油0.075%、余量为水；

c．提取：取步骤b制得的发酵液，加入相当于发酵液体积1%的碳酸钙，搅拌30分钟，板框压滤，压滤完毕后，将板框滤饼在进风温度230℃、排风温度105℃条件下进行旋转闪蒸干燥，干燥物料经振动筛筛分，筛上的大颗粒经粉碎机粉碎后重新筛分，最后混合，即得金霉素预混剂。

在本发明的种子培养基、发酵培养基和补料培养基中，硫酸铵、玉米蛋白、玉米浆、花生饼粉、黄豆饼粉和酵母粉为氮源，玉米淀粉、葡萄糖、植物油和豆油为碳源，淀粉酶为生物催化剂，氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾和氯化钠为激活剂，碳酸钙为缓冲剂，此外，植物油和豆油还兼作消沫剂。

在种子培养过程中，种子生长8小时后，可每隔4小时取样检测无菌情况，同时显微观察菌体及细胞生长情况。在种子培养基灭菌后，可取样测定pH值、总糖和氨基氮，接种3小时后重复测试1次，当种子生长到20-26小时（生长末期），再次取样测定pH值、总糖、氨基氮、效价和菌丝浓度。当种子培养液达到如下质控指标时即可移种入发酵罐进行发酵培养。

在发酵培养过程中，由于一系列酶的催化作用，产生菌在不断生长代谢，使培养基的性质、含量等不断变化，及时掌握这些代谢变化情况并加以适当控制，有利于抗生素的生物合成。因此，必须进行发酵过程的中间分析，以明确菌丝的变化以及培养基各主要成分的含量、pH的变化，及时调整和控制，使发酵沿着有利于提高产量、质量的方向进行。在本发明中，发酵周期通常为80-135小时，有时为提取高含量产品，发酵周期最多可延长至160小时。在发酵过程中，应对pH值进行连续检测并及时添加氨水以保证发酵液pH值在5.6-6.2之间；同时，为了保证微生物的营养条件，还应每6小时取样测定总糖，并根据总糖浓度控制指标及时添加补料培养基。当发酵液达到如下质控指标时，发酵过程结束。

在提取过程中，碳酸钙的具体加入量可根据发酵液的效价和最终产品中金霉素的标示量计算而得。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种改进的制备金霉素预混剂的方法，是将金色链霉菌采用纯种二级发酵培养，培养基采用实罐灭菌法，在整个培养过程中严格保持无菌状态并保持一定的罐温、罐压，通入无菌空气并不断搅拌，根据发酵代谢过程中的pH和糖量变化，采用通氨和补料的方式保持一定的酸碱度及营养，所得发酵液再经过钙化、板框压滤、旋转闪蒸干燥、粉碎、过筛、混合等过程，最终制得金霉素预混剂。该方法大大提高了发酵单位和提取收率，提高了产品质量和金霉素含量，同时生产工艺简单、快速、稳定。

首先，本发明从培养基和金色链霉菌的代谢机理等方面出发，通过实验研究了不同因素如温度、通气量、pH、种龄、补料方式等对金色链霉菌生长的影响以及添加金属离子等对金霉素发酵的影响，优化了培养基的配方，确定了工艺的关键控制点，最终获得了稳定的适合金霉素生产的最佳工艺，大大提高了发酵单位和金霉素产量。在发酵过程中温度对生长和生产的影响是不同的，一般发酵温度升高酶反应速率增大，生长代谢加快，生产期提前，但酶本身很易因过热而失去活性，表现在菌体容易衰老，发酵周期缩短，影响最终产量。温度除了直接影响过程的各种反应速率外，还通过改变发酵液的物理性质间接影响产物的合成，有时还影响生物合成的方向。因此，严格保持菌种生长繁殖和抗生素合成所需的最适温度，有利于稳定发酵过程、缩短发酵周期、提高发酵单位、增加抗生素产量。金霉素在发酵过程中对溶氧极为敏感，通常要求控制溶氧值不低于20%，改善通气环境一般有利于金霉素的合成。在发酵过程中，为了加速氧的溶解，本发明设置机械搅拌使气流分散，并优化了通气量。产生菌的生长代谢和抗生素合成都是由一系列酶催化反应的结果，pH是影响酶活性的重要条件，在不同的pH环境中，各种酶的活力不同，产生菌对培养基的分解利用就不同，合成抗生素的能力也不同，从而影响抗生素的产量。本发明首先调整好培养基中生理酸性和生理碱性物质的用量以保证发酵过程pH适当，同时在发酵过程中严格控制酸碱度的变化，防止累积有机酸使pH下降。种龄指种子罐中的培养物移到发酵罐时的培养时间。选择适当的种龄十分重要，太年轻的种子接种后往往前期生长缓慢，导致整个发酵周期延长，产物开始形成时间推迟；太老的种子虽然菌量较多，但接种后会导致生产能力下降，菌体过早衰退。为了保证微生物的营养条件，发酵过程中需进行补料，补料方式有一次性补料和分批补料，一次性补料虽然操作简便，但会使发酵液瞬时大量稀释，扰乱菌的生理代谢，难于控制过程在最适于生产的状态，分批补料虽然操作稍显麻烦，但这种方法比一次性补料合理，本发明通过控制残糖浓度进行分批补料。

其次，本发明改进了提取过程中的板框过滤和干燥工艺。现有技术中，金霉素发酵液经板框过滤后，通常进行强力干燥，存在能耗高、干燥效率低、效价损失严重，差向金霉素等杂质含量增加，金霉素收率低等缺点，严重影响产品质量和工艺流程的顺畅。本发明改用全自动板框压滤设备、旋转闪蒸干燥，明显加快了发酵液压滤速度、干燥速度，不仅劳动强度明显下降，而且减少了效价损失，差向金霉素等杂质少，提高了终产品的金霉素含量，金霉素收率﹥98%。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。

实施例1、金霉素预混剂的制备

a．种子培养

在配料罐中配制种子培养基，按质量百分浓度计由以下组分组成：硫酸铵0.42%、碳酸钙0.4%、玉米淀粉3.67%、硫酸镁0.02%、花生饼粉1.67%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.12%、黄豆饼粉1.33%、植物油0.5%、酵母粉1.04%、余量为水；

将配好的种子培养基用泵打入种子罐中，封闭罐孔，通入蒸气，在温度120±1℃、压力0.11-0.12MPa条件下保持30分钟灭菌，关闭蒸气，然后通入无菌空气保持罐正压，并立即用冷却水降温至31±1℃待接种；将金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子悬浮液用接种针注入种子罐，然后在温度30-33℃、通气量1:1.5-2.0 v/v/min、罐压0.03-0.05 MPa、搅拌速度150-230 rpm/min的条件下培养24小时（具体温度依据菌种的生长速度来控制，通气量、罐压和搅拌速度根据溶氧值来调整），取样检测；

检测结果：外观呈浅黄色、稠，pH值为6.08，总糖5.5%，氨基氮88.4mg/100ml，效价55U/ml，菌丝浓度27%，菌丝形态呈网状、中分节、粗壮，无杂菌，达到种子培养液质控指标；

b．发酵培养

在配料罐中配制发酵培养基，按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.006%、硫酸铵0.88%、消泡剂（泡敌）0.02%、碳酸钙0.60%、氯化钙0.60%、玉米淀粉6.05%、玉米浆1.40%、硫酸镁0.16%、花生饼粉1.7%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.22%、黄豆饼粉1.00%、植物油0.2%、酵母粉0.88%、余量为水；

在配料罐中配制补料培养基，按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.03%、硫酸铵0.25%、消泡剂（泡敌）0.03%、碳酸钙0.375%、氯化钙0.25%、玉米淀粉40%、玉米浆1.7%、氯化钠0.375%、植物油0.075%、余量为水；随后将配好的补料培养基用泵打入补料罐中，封闭罐孔，通入蒸气，先升温至65℃保持45分钟，再在温度120±1℃、压力0.11-0.12MPa条件下保持30分钟灭菌，关闭蒸气，然后通入无菌空气保持罐正压，并立即用冷却水降温至31±1℃待补料；

将配好的发酵培养基用泵打入发酵罐中，封闭罐孔，通入蒸气，先升温至75℃保持20分钟，再在温度120±1℃、压力0.11-0.12MPa条件下保持30分钟灭菌，关闭蒸气，然后通入无菌空气保持罐正压，并立即用冷却水降温至31±1℃待接种；将步骤a制得的合格的种子培养液接入发酵罐，接种量为15%，在温度28-33℃、通气量1:0.8-1.0 v/v/min、罐压0.02-0.05 MPa、搅拌速度120-180 rpm/min的条件下发酵培养（具体温度依据菌种的生长速度来控制，通气量、罐压和搅拌速度根据溶氧值来调整），在培养过程中，对pH值进行连续检测并及时添加氨水以保证发酵液pH值在5.6-6.2之间，并每6小时取样测定总糖浓度，根据总糖浓度控制指标及时添加补料罐中的补料培养基；总糖浓度控制指标为：发酵培养0-40小时总糖质量百分浓度不低于4.0%，发酵培养40-80小时总糖质量百分浓度低于4.0%但高于2.5%，发酵培养80小时后总糖质量百分浓度不高于2.5%；发酵培养85小时后，取样检测；

检测结果：pH值为6.00，总糖1.2%，氨基氮75mg/100ml，总效价21080U/mL，四环素效价1200U/mL，滤速15mL/5 min，达到发酵液质控指标；

c．提取

取发酵液，加入相当于发酵液体积5%的碳酸钙，搅拌30分钟，取样检测料液效价200U/mL，然后用全自动板框压滤设备进行板框压滤，初始压力调整到0.1Mpa以下，在过滤过程中逐步提高压力，但最高压力不超过0.6Mpa，压滤完毕后，将板框滤饼在进风温度240℃、排风温度110℃条件下进行旋转闪蒸干燥，干燥物料经振动筛筛分，筛上的大颗粒经粉碎机粉碎后重新筛分，最后混合，即得金霉素预混剂，取样检测。

检测结果：金霉素含量15.5%、四环素含量3.1%、差向金霉素含量0.75%。

实施例2、金霉素预混剂的制备

a．种子培养

在配料罐中配制种子培养基，按质量百分浓度计由以下组分组成：硫酸铵0.5%、碳酸钙0.4%、玉米淀粉4.0%、硫酸镁0.02%、花生饼粉1.8%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.12%、黄豆饼粉1.5%、植物油或豆油0.5%、酵母粉1.10%、余量为水；

将配好的种子培养基用泵打入种子罐中，封闭罐孔，通入蒸气，在温度120±1℃、压力0.11-0.12MPa条件下保持30分钟灭菌，关闭蒸气，然后通入无菌空气保持罐正压，并立即用冷却水降温至31±1℃待接种；将金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子悬浮液用接种针注入种子罐，然后在温度30-33℃、通气量1:1.5-2.0 v/v/min、罐压0.03-0.05 MPa、搅拌速度150-230 rpm/min的条件下培养24小时（具体温度依据菌种的生长速度来控制，通气量、罐压和搅拌速度根据溶氧值来调整），取样检测；

检测结果：外观呈浅黄色、稠，pH值为5.90，总糖4.5%，氨基氮78.5mg/100ml，效价55U/ml，菌丝浓度25%，菌丝形态呈网状、中分节、粗壮，无杂菌，达到种子培养液质控指标；

b．发酵培养

在配料罐中配制发酵培养基，按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.006%、硫酸铵0.88%、消泡剂（泡敌）0.02%、碳酸钙0.60%、氯化钙0.60%、玉米淀粉6.05%、玉米浆1.80%、硫酸镁0.16%、花生饼粉1.7%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.22%、黄豆饼粉1.50%、植物油0.2%、酵母粉1.20%、余量为水；

在配料罐中配制补料培养基，按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.03%、硫酸铵0.25%、消泡剂（泡敌）0.03%、碳酸钙0.375%、氯化钙0.25%、玉米淀粉40%、玉米浆2.0%、氯化钠0.375%、植物油0.075%、余量为水；随后将配好的补料培养基用泵打入补料罐中，封闭罐孔，通入蒸气，先升温至65℃保持45分钟，再在温度120±1℃、压力0.11-0.12MPa条件下保持30分钟灭菌，关闭蒸气，然后通入无菌空气保持罐正压，并立即通入冷却水降温至31±1℃待补料；

将配好的发酵培养基用泵打入发酵罐中，封闭罐孔，通入蒸气，先升温至75℃保持20分钟，再在温度120±1℃、压力0.11-0.12MPa条件下保持30分钟灭菌，关闭蒸气，然后通入无菌空气保持罐正压，并立即通入冷却水降温至31±1℃待接种；将步骤a制得的合格的种子培养液接入发酵罐，接种量为20%，在温度28-33℃、通气量1:0.8-1.0 v/v/min、罐压0.02-0.05 MPa、搅拌速度120-180 rpm/min的条件下发酵培养（具体温度依据菌种的生长速度来控制，通气量、罐压和搅拌速度根据溶氧值来调整），在培养过程中，对pH值进行连续检测并及时添加氨水以保证发酵液pH值在5.6-6.2之间，并每6小时取样测定总糖浓度，根据总糖浓度控制指标及时添加补料罐中的补料培养基；总糖浓度控制指标为：发酵培养0-40小时总糖质量百分浓度不低于4.0%，发酵培养40-80小时总糖质量百分浓度低于4.0%但高于2.5%，发酵培养80小时后总糖质量百分浓度不高于2.5%；发酵培养115小时后，取样检测；

检测结果：pH值为5.89，总糖1.1%，氨基氮87mg/100ml，总效价24850U/mL，四环素效价1358 U/mL，滤速16mL/5 min，达到发酵液质控指标；

c．提取

取发酵液，加入相当于发酵液体积1%的碳酸钙，搅拌30分钟，取样检测料液效价250U/mL，然后用全自动板框压滤设备进行板框压滤，初始压力调整到0.1Mpa以下，在过滤过程中逐步提高压力，但最高压力不超过0.6Mpa，压滤完毕后，将板框滤饼在进风温度230℃、排风温度105℃条件下进行旋转闪蒸干燥，干燥物料经振动筛筛分，筛上的大颗粒经粉碎机粉碎后重新筛分，最后混合，即得金霉素预混剂，取样检测。

检测结果：金霉素含量23.3%、四环素含量2.8%、差向金霉素含量0.8%。

与实施例1相比，由于实施例2的发酵周期更长，发酵单位效价更高，提取过程中加入的碳酸钙更少，因此最终产品中金霉素的含量更高。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。

Claims (1)

1.金霉素预混剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a．种子培养：将金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子悬浮液接种入种子罐，用种子培养基在温度30-33℃、通气量1:1.5-2.0 v/v/min、罐压0.03-0.05 MPa、搅拌速度150-230 rpm/min的条件下培养24小时；

所述种子培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：硫酸铵0.5%、碳酸钙0.4%、玉米淀粉4%、硫酸镁0.02%、花生饼粉1.8%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.12%、黄豆饼粉1.5%、植物油或豆油0.5%、酵母粉1.1%、余量为水；

b．发酵培养：将步骤a制得的种子培养液接入发酵罐，用发酵培养基在温度28-33℃、通气量1:0.8-1.0 v/v/min、罐压0.02-0.05 MPa、搅拌速度120-180 rpm/min的条件下发酵培养115小时，在发酵培养过程中通过添加氨水确保发酵液pH在5.6-6.2之间，并根据发酵液的总糖浓度和总糖浓度控制指标添加补料培养基；

所述总糖浓度控制指标为：发酵培养0-40小时控制总糖质量百分浓度不低于4.0%，发酵培养40-80小时控制总糖质量百分浓度低于4.0%但高于2.5%，发酵培养80小时后控制总糖质量百分浓度不高于2.5%；

所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.006%、硫酸铵0.88%、消泡剂0.02%、碳酸钙0.6%、氯化钙0.6%、玉米淀粉6.05%、玉米浆1.8%、硫酸镁0.16%、花生饼粉1.7%、磷酸二氢钾0.03%、氯化钠0.22%、黄豆饼粉1.5%、植物油0.2%、酵母粉1.20%、余量为水；

所述补料培养基按质量百分浓度计由以下组分组成：淀粉酶0.03%、硫酸铵0.25%、消泡剂0.03%、碳酸钙0.375%、氯化钙0.25%、玉米淀粉40%、玉米浆2.0%、氯化钠0.375%、植物油0.075%、余量为水；

c．提取：取步骤b制得的发酵液，加入相当于发酵液体积1%的碳酸钙，搅拌30分钟，板框压滤，压滤完毕后，将板框滤饼在进风温度230℃、排风温度105℃条件下进行旋转闪蒸干燥，干燥物料经振动筛筛分，筛上的大颗粒经粉碎机粉碎后重新筛分，最后混合，即得金霉素预混剂。