CN102844038A

CN102844038A - 使用了嗜热微生物的混合物、溶解液及药物

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Publication number: CN102844038A
Application number: CN2011800091842A
Authority: CN
Inventors: 宫本浩邦; 儿玉浩明; 西内巧; 松下映夫; 宫本久; 堀内三吉; 濑田真奈未; 森建一; 服部正平; 小川和男
Original assignee: INDP ADMINISTRATIVE INST NIMS; KEIYO PLANT ENG; JAPAN ECO SCIENCE CO Ltd; Kanazawa University NUC; Chiba University NUC; Miroku Corp
Current assignee: INDP ADMINISTRATIVE INST NIMS; KEIYO PLANT ENG; JAPAN ECO SCIENCE CO Ltd; Kanazawa University NUC; Chiba University NUC; Miroku Corp
Priority date: 2010-02-10
Filing date: 2011-02-09
Publication date: 2012-12-26
Anticipated expiration: 2031-02-09
Also published as: CN102844038B; DK2556835T3; JP5578375B2; EP2556835A4; JPWO2011099514A1; EP2556835A1; US20120301450A1; WO2011099514A1; US20150306153A1; US9987312B2; BR112012020003A2; EP2556835B1

Abstract

本发明的课题是提供一种使用了可调节粘膜免疫系统基因群、和/或肠、肝脏中的代谢相关基因群的嗜热微生物的混合物、溶解液及药物。作为本发明的解决问题的方法是，提供一种混合物或溶解液，是通过在50℃～90℃使含有嗜热微生物的有机物发酵而得到的，通过对动物施与该混合物或溶解液，从而调节该动物的选自粘膜免疫系统基因群、肠中的代谢相关基因群、肝脏中的代谢相关基因群中的至少1个基因群的表达，其中，作为所述嗜热微生物，含有1种以上嗜热性的芽孢杆菌(Bacillus)属、海洋芽胞杆菌(Oceanobacillus)属、类芽孢杆菌(Paenibacillus)属、厌氧芽孢杆菌(Anoxybacillus)属、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus)属、甲烷嗜热菌(Methanopyrus)属、Geogemma属、火叶菌(Pyrolobus)属、热网菌(Pyrodictium)属、超热菌(Hyperthermus)属、火球菌(Pyrococcus)属、火棒菌属(Pyrobaculum)、热球菌(Thermococcus)属、气火菌(Aeropyrum)属、产水菌(Aquifex)属、热袍菌(Thermotoga)属、热脱硫杆菌(Thermodesulfobacterium)属、栖热菌(Thermus)属、地芽孢杆菌(Geobacillus)属、嗜热丝孢菌(Thermomyces)属、梭菌(Clostridium)属的微生物。

Description

使用了嗜热微生物的混合物、溶解液及药物

技术领域

本发明涉及含有能够对包括人在内的动物进行粘膜免疫系统的活化和代谢调节的嗜热微生物的混合物、溶解液及药物。

背景技术

已知使用了微生物的益生菌改善动物的肠内细菌层、活化腹泻的预防和/或免疫等。例如，专利文献1中公开了一种源自对动物预防腹泻等的菌体的杀菌处理成分。另外，专利文献2中公开了含有作为乳酸菌的一种的乳杆菌(Lactobacillus)属的配合物。另外，专利文献3中公开了一种源自作为枯草菌的一种的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抗菌化合物。另外，专利文献4中公开了对胃肠道具有定居性的微生物群，其是含有酵母、乳杆菌属及双歧杆菌(Bifidobacterium)属的共生组合物。进而，专利文献5中公开了含有作为乳酸菌的一种的乳杆菌属等的免疫增强剂。这些专利文献中所公开的益生菌均是使用常温性的微生物的益生菌，不是使用嗜热性的微生物的益生菌。

另外，作为关于对动物施与常温性的微生物对免疫系统和/或代谢调节系统的影响及其作用机制进行公开的例子，可以举出如下内容。

非专利文献1中报告了枯草芽孢杆菌通过与兔的盲肠内的拟杆菌(Bacteroides)属共生来增进CCL21基因的表达。另外，非专利文献2中报告了作为源自动物的病原菌已知的沙门氏菌(Salmonella)经由作为粘膜免疫系统的传感器的Toll样受体-4来抑制作为免疫系统的B细胞的游走因子的趋化因子CXCL13和CCL12的表达。其中，所述趋化因子CXC13等，非专利文献3中公开了其在生物体内承担与淋巴结的发育相关的作用，专利文献4中公开了其与呼吸系统的免疫功能的形成相关。

另外，在非专利文献5中，作为用于调节作为肠道中的免疫系统的调节部位的派尔集合淋巴结的功能的细菌，公开了分节丝状菌(Segmented filamentous bacteria)。另外，在非专利文献6中，还进行了在Germ free animal(无菌动物)中导入如上所述的特殊的细菌，并加入人的菌群的尝试。

另一方面，专利文献6～8中公开了使用了嗜热性的微生物的技术。该使用了嗜热性的微生物的技术具有通过将有机性废弃物进行再循环而可进行各用途的制剂化等许多应瞩目的优点。但是，在上述各专利文献中，虽然关于对畜产动物施与具有分解几丁质能力的芽孢杆菌(Bacillus)属时的源自粪尿的堆肥化的促进、气味减轻等进行了公开，但没有关于其作用机制的详细记载。即，在这些专利文献中，未公开对动物施与嗜热微生物时对生物体的直接效果、特别是对免疫系统和/或内分泌系统的影响。

如上所述，现有的与免疫系统的调节相关的技术仅使用常温性的微生物。特别是不能在进行免疫系统的控制的同时，实现提高肌肉的增量效果、调节肠道的气体代谢和/或脂肪代谢来降低源自肠道的内容物的地球变暖气体、抑制体内的脂肪积累的效果。另外，现有的使用了嗜热性的微生物的技术提倡肥料及饲料效果、环境改善效果。

专利文献1：日本专利2621588号公报

专利文献2：日本专利3338446号公报

专利文献3：日本特表2006-514019号公报

专利文献4：日本特开2009-137962号公报

专利文献5：日本特开2006-76961号公报

专利文献6：日本专利3146305号公报

专利文献7：日本专利3314302号公报

专利文献8：日本特开2003-219864号公报

非专利文献1：Nicholas B et al.Microbialinduction of B and T cellare as in rabbit appendix.Dev Comp Immunol.2008；32(8)：980-981

非专利文献2：Asheley L st John et al.Salmonella disrupts lymphnode architecture by TLR-4mediated suppressionofhomeostaticchemokines.Nature Medicine 2009；15(11)：1259-1266

非专利文献3：Serge A van de Pavert et al.ChemokineCXCL13 isessential for lymph node initiation and is induced byretinoic acid andneuronal stimulation.Nature Immunology 2009；10(11)：1193-1200

非特专利献4：Juan E Moyron-Quiroz,et al.Roleof induciblebronchus associated lymphoid tissue(iBALT)inrespiratory immunity.Nature Medicine.2004；10(9)：927-934

非专利文献5：Klaasen HLBM et al.Infection and Immunity61:303-306,1993etc.

非专利文献6：肠内细菌学杂志22:109-114,2008

发明内容

发明要解决的课题

但是，各专利文献及非专利文献中所公开的技术缺乏双向检验关于对动物的影响的作用机制和对全身的健康状态的影响的数据。特别是关于现有的使用了嗜热性的微生物的技术，不是与使用实验动物的研究成果相关的技术，缺乏关于用于谋求在除畜产动物以外的动物、特别是人中的应用的基础研究等的见解。

本发明是鉴于上述情况而完成的，基于使用了作为积累了普遍数据的实验动物的小鼠以及大鼠的研究数据，其目的在于提供一种使用了可调节粘膜免疫系统基因群、和/或肠、肝脏中的代谢相关基因群的嗜热微生物的混合物、溶解液及药物。

用于解决课题的方法

本发明的混合物或溶解液的特征在于，是通过在50℃～90℃使含有嗜热微生物的有机物发酵而得到的，通过对动物施与该混合物或溶解液，从而调节该动物的选自粘膜免疫系统基因群、肠中的代谢相关基因群、肝脏中的代谢相关基因群中的至少1个基因群的表达，其中，作为所述嗜热微生物，含有一种以上嗜热性的芽孢杆菌(Bacillus)属、海洋芽胞杆菌(Oceanobacillus)属、类芽孢杆菌(Paenibacillus)属、厌氧芽孢杆菌(Anoxybacillus)属、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus)属、甲烷嗜热菌(Methanopyrus)属、Geogemma属、火叶菌(Pyrolobus)属、热网菌(Pyrodictium)属、超热菌(Hyperthermus)属、火球菌(Pyrococcus)属、火棒菌属(Pyrobaculum)、热球菌(Thermococcus)属、气火菌(Aeropyrum)属、产水菌(Aquifex)属、热袍菌(Thermotoga)属、热脱硫杆菌(Thermodesulfobacterium)属、栖热菌(Thermus)属、地芽孢杆菌(Geobacillus)属、嗜热丝孢菌(Thermomyces)属、梭菌(Clostridium)属的微生物。

其中，所述嗜热微生物与H.G.Schlegel著、“一般微生物学”(ThiemeVerlag Stuttgart，第5版，173高度嗜热菌及超高度嗜热菌的栏)中记载的耐热性的基准(最适增殖温度为40℃以上)一致。

本发明的混合物或溶解液的特征在于，作为嗜热微生物，含有嗜热性复合菌BP-1051。

本发明的混合物或溶解液的特征在于，作为嗜热微生物，含有BP-863，该BP-863具有对用热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillusthermoamylovorans)的近源种难分解性的糖质的分解能力。

本发明的混合物或溶解液的特征在于，作为嗜热微生物，含有嗜热性种菌PTA-1773。

本发明的药物的特征在于，含有上述混合物或溶解液中的任一种作为有效成分。

发明的效果

本发明的混合物或溶解液通过含有一种以上嗜热性的芽孢杆菌(Bacillus)属、海洋芽胞杆菌(Oceanobacillus)属、类芽孢杆菌(Paenibacillus)属、厌氧芽孢杆菌(Anoxybacillus)属、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus)属、甲烷嗜热菌(Methanopyrus)属、Geogemma属、火叶菌(Pyrolobus)属、热网菌(Pyrodictium)属、超热菌(Hyperthermus)属、火球菌(Pyrococcus)属、火棒菌属(Pyrobaculum)、热球菌(Thermococcus)属、气火菌(Aeropyrum)属、产水菌(Aquifex)属、热袍菌(Thermotoga)属、热脱硫杆菌(Thermodesulfobacterium)属、栖热菌(Thermus)属、地芽孢杆菌(Geobacillus)属、嗜热丝孢菌(Thermomyces)属、梭菌(Clostridium)属的微生物作为嗜热微生物，对包括人在内的动物进行施与，由此与宿主的肠内菌群共存，可期待调节粘膜免疫系统基因群、肠中的代谢相关基因群、肝脏中的代谢相关基因群中的至少1个基因群的表达。另外，本混合物或溶解液即使通过在无菌环境下对包括人类的动物进行施与，也可期待调节粘膜免疫系统基因群等的表达。

本发明的混合物或溶解液含有嗜热性复合菌BP-1051作为嗜热微生物，从而在肠内不存在菌相那样的无菌条件下、及在肠内存在菌相的通常环境下的任一环境下，都可期待通过对动物(包括人)进行施与，由此活化早期应对细菌感染、病毒感染的自然免疫系统，从而调节粘膜免疫系统基因群的表达、或调节肠、肝脏中的代谢相关基因群的表达。

本发明的混合物或溶解液通过含有具有对用热噬淀粉芽孢杆菌的近源种难分解性的糖质的分解能力的BP-863、嗜热性种菌PTA-1773中的任一种作为嗜热微生物，也可发挥上述同样的效果。

另外，设想所述BP-863活化肠道的派尔集合淋巴结的发育、以及生物体内的IL-18的产生。通常已知派尔集合淋巴结承担免疫球蛋白的产生调节等，IL-18诱导γ干扰素的产生。因此，通过BP-863，在上述无菌条件下、或者上述通常条件下的任一种条件下，都能够有助于可以早期应对细菌感染、病毒感染的自然免疫系统的活化。

本发明的药物通过含有上述混合物或溶解液的任一种作为有效成分，可以发挥上述同样的效果。另外，本发明的药物，可对包括人在内的动物进行经口或者经气管的施与。

附图说明

图1是关于本发明的混合物或溶解液的肠道内的作用机制的概念图。

图2是表示本发明的混合物或溶解液对无菌小鼠的肠道功能的影响的概念图；

图3是热噬淀粉芽孢杆菌的近源种N-11株(NITE BP-863)的培养皿上的培养照片；

图4是热噬淀粉芽孢杆菌的近源种N-11株(NITE BP-863)的电子显微镜图像；

图5是在高脂肪食下饲养的小鼠(饮水：自来水)的利用CT扫描得到的躯干部的图像；

图6是在高脂肪食下饲养的小鼠(饮水：添加了1.0%溶解液1-B的自来水)的利用CT扫描得到的躯干部的图像；

图7是表示施与了嗜热性的微生物的无菌小鼠的肝脏中的IL-18的含量的图；

图8是表示施与了嗜热性的微生物的无菌小鼠的粪中的分泌型IgA的浓度的图。

具体实施方式

以下，参照附图说明本发明的实施方式。首先，对本发明的混合物或溶解液进行说明。本发明的混合物或溶解液通过高温发酵含有嗜热性的微生物的有机物而得到，通过对包括人在内的动物进行施与，从而调节该动物的粘膜免疫系统基因群、肠中的代谢相关基因群、肝脏中的代谢相关基因群中的至少1个基因群的表达。

上述嗜热性的微生物也如上述所记载，是最适增殖温度为40℃以上的微生物。具体而言，可以举出：嗜热性的芽孢杆菌属、海洋芽胞杆菌属、类芽孢杆菌属、厌氧芽孢杆菌属、赖氨酸芽孢杆菌属等的微生物。除此之外，可以举出嗜热性的甲烷嗜热菌属、Geogemma属、火叶菌属、热网菌属、超热菌属、火球菌属、火棒菌属、热球菌属、气火菌属、产水菌属、热袍菌属、热脱硫杆菌属、栖热菌属、地芽孢杆菌属、嗜热丝孢菌属、梭菌属的微生物。另外，更具体而言，可以举出嗜热性种菌PTA-1773、嗜热性复合菌BP-1051、作为热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)的BP-863、作为细菌门属于厚壁菌门(Firmicutes)的热阴沟芽孢杆菌(Bacillus thermocloacae)的近源种(在GenBank数据库中登记为no.AB298562)、热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans)的近源种(在GenBank数据库中登记为no.AB298559)。

另外，上述嗜热性种菌PTA-1773于2000年5月1日在ATCC(American Type Culture Collection(美国典型培养物保藏中心),10801University Boulevard Manassas,Virginia 20110-2209U.S.A.)国际保藏(保藏号：PTA-1773)。嗜热性种菌PTA-1773含有几丁质分解能力高的微生物群、以及嗜热性的乳酸菌，具体而言，含有放线细菌(Actinomycetales bacterium)属、脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)属、双芽孢杆菌(Amphibacillus)属、厌氧芽孢杆菌(Anoxybacillus)属、Atopostipes属、短状杆菌(Brachybacterium)属、短杆菌(Brevibacterium)属、樱桃芽孢杆菌(Cerasibacillus)属、梭菌(Clostridium)属、棒状杆菌(Corynebacterium)属、短小杆菌(Curtobacterium)属、乔治菌(Georgenia)属、薄壁芽孢杆菌(Gracilibacillus)属、Jeotgalicoccus属、Salinibacillus属、蒂西耶氏菌(Tissierella)属、脲芽胞杆菌(Ureibacillus)属、漫游球菌(Vagococcus)属、枝芽孢杆菌(Virgibacillus)属、魏斯氏菌(Weissella)属等的微生物。另外，嗜热性复合菌BP-1051于2011年1月18日在独立行政法人制品评价技术基盘机构的专利微生物保藏中心(NPMD)(日本

292-0818千叶县木更津市上总镰足2-5-8)国际保藏(保藏号：NITEBP-1051)。另外，作为热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)的BP-863于2010年1月15日在独立行政法人制品评价技术基盘机构的专利微生物保藏中心(NPMD)(日本

292-0818千叶县木更津市上总镰足2-5-8)国际保藏(保藏号：NITE BP-863)。

上述有机物含有如上所述的嗜热微生物且可高温发酵。具体而言，可以举出：含有上述嗜热性的微生物的海产品、农产品、它们的残渣等有机性废弃物、木材碎片等。其中，上述农产品包含玉米的外皮、玉米的芯(玉米棒)、大豆粕、草莓、蘑菇等含有作为难分解性的糖醇的阿拉伯糖、木糖醇、木聚糖等的原材料。

另外，为了制作本发明的混合物或溶解液，在50℃～90℃的温度下使上述有机物发酵。在此，如果使有机物的发酵温度低于50℃，则可能上述嗜热性的微生物的增殖难以进行，而且常温性的微生物也增殖，因此不适当。另外，如果使有机物的发酵温度高于90℃，则上述嗜热性的微生物可能被杀灭，因此不适当。

本发明的混合物或溶解液可由通过上述发酵得到的发酵产物来制作。例如，本发明的混合物可以通过将上述发酵产物直接或者混合在饲料等中来制作。另外，本发明的溶解液可以通过用水稀释上述发酵产物来制作。除此之外，以不使上述嗜热性的微生物被杀灭为条件，本发明的混合物或溶解液可以通过任意的方法制作。

如上制作的本发明的混合物或溶解液通过经口或经气管对动物(包括人)进行施与，从而可以调节该动物的粘膜免疫系统基因群、肠中的代谢相关基因群、肝脏中的代谢相关基因群中的至少1个基因群的表达。

设想本发明的混合物或溶解液的上述功能通过例如图1中记载的机制产生。即，本发明的混合物或溶解液中所含的嗜热性的微生物在与宿主的肠内菌群共存时，作用于粘膜免疫系统及代谢系统。首先，作为对粘膜免疫系统的作用，通过肠道中活化自然杀伤细胞(NK细胞)，以及促进趋化因子以及相关基因群的表达并促进淋巴组织的形成、B细胞的游走，从而使抗体产生增加。另外，作为代谢系统的作用，通过调节脂肪代谢的基因群的表达量使中性脂肪减少，以及调节气体代谢的基因群的表达量，从而抑制甲烷气体产生。

另外，也设想本发明的混合物或代谢系统中所含的嗜热性的微生物直接作用于粘膜免疫系统。这基于以下事实：如图2所示，在施与了本发明的混合物或溶解液的Germ free小鼠(无菌小鼠)中，派尔集合淋巴结的发育、粪便代谢的正常化、粘膜免疫系统的温和的活化进行。因此，本发明的混合物或溶解液可以说是即使在肠内无菌的环境下也能够以性状相近的形式调节肠内代谢的益生菌。例如可期待在医疗领域中需要绝食的手术后治疗中的应用。

另外，本发明的混合物或溶解液含有的微生物为嗜热性，因此，可在就要使用前进行60℃左右的灭菌，从而可以以防止了混入杂菌的形式进行灵活利用。另外，也可以通过更简便的培养技术大量地增产具有新功能的益生菌以及益生元。

接着，对本发明的药物进行说明，本发明的药物通过含有本发明的混合物或溶解液作为有效成分，来调节被施与的动物的粘膜免疫系统基因群、肠中的代谢相关基因群、肝脏中的代谢相关基因群中的至少1个基因群的表达，从而发挥效果。另外，本药物可经口或经气管对动物(包括人)进行施与。

另外，本发明的药物可根据需要适宜选择赋形剂、增量剂、粘结剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、分散剂、缓冲剂、保存剂、溶解辅助剂、矫味剂、无痛剂、稳定剂等药学上容许的载体或添加剂进行混合来实现，从而可以制成溶液剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂等。

另外，例如，作为上述赋形剂，可以举出乳糖、白糖等糖类、淀粉类等。另外，作为崩解剂，可以举出纤维素衍生物、淀粉类等。另外，作为粘结剂，可以举出明胶、阿拉伯胶等高分子类。另外，作为润滑剂，可以举出蜡类、硬脂酸等。

以下，通过实施例更具体地说明本发明，但本发明并不受这些实施例任何限定。另外，实施例中所引用的文献中的记载内容是作为本说明书的记载被参照的。

实施例1

(1-1)溶解液1-A、1-B的制作

溶解液1-A是将新泽等(Niisawa C,Oka S,Kodama H,Hirai M,Kumagai Y,Mori K,Matsumoto J,Miyamoto H,Miyamoto H(2008)Microbial analysis of composted product of marine animal resourcesand isolation of antagonistic bacteria to plant pathogen from thecompost.J Gen Appl Microbiol 54:149-158)报告的高温发酵产物以重量比稀释至200倍，在60～70℃下进行6小时以上的散气处理而制作的。另外，溶解液1-B是通过共培养溶解液1-A中所含的嗜热微生物和PTA-1773而制作的。

(1-2)溶解液1-A中所含的微生物的分析

上述溶解液1-A含有多种嗜热微生物，作为优先菌种，含有嗜热性复合菌BP-1051，对它们的碱基序列(16SrDNA序列)进行分析。该分析通过在标准培养基、普通琼脂培养基、心浸液培养基等中接种溶解液1-A中所含的微生物，从增殖而得的菌株中提取DNA来进行。另外，在该分析中，应用已知的方法(Lane,D.J.(1991)16S/23S rRNA sequencing.In Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics.Stackebrandt,E.and Goodfellow,M.eds.,John Wiley & Sons Ltd.,Chichester,England,pp.115-175)并使用作为通用引物的27F和1525R来实施PCR反应。反应溶液是混合25μL 2×GoTaq Hot Start Colorless Master Mix(Promega Co.,WI,USA)和2pmol的引物，用50μL的灭菌水溶解样品而制作的。PCR循环是在94℃15分钟后，将94℃30秒、55℃30秒、72℃90秒的循环进行35个循环，在72℃下使其反应7分钟。进而，用QIAquick PCR Purification Kit(Qiagen GmbH,Germany)纯化1.5-kbp长的PCR片段，使用BigDye Terminator or Cycle Sequencing Kit通过全自动DNA analyser system(Applied Biosystems Inc.,CA,USA)来确定碱基序列。进而，根据GenBank(http://ww.ucbi.ulm.nih.gov/)的数据库等进行比对检索。通过该分析而分析出的各微生物的碱基序列如序列号1～8所示。

在此，在序列号1中显示碱基序列的栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)的近源种(IP-2)与栗褐芽孢杆菌的标准菌株(B NBRC15713^T)具有97.3%的同源性。另外，作为栗褐芽孢杆菌的近源种(IP-2)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度2μm、长度2μm、形成芽孢、无葡萄糖、乳糖等的糖分解能力、过氧化氢酶、氧化酶阳性等，另外，已知栗褐芽孢杆菌具有参与氮代谢的基因。

在序列号2中显示碱基序列的Anoxybacillus kamchatkensis的近源种(IP-3)与Anoxybacillus kamchatkensis的标准菌株(IAM11061^T)具有99.5%的同源性。另外，作为Anoxybacillus kamchatkensis的近源种(IP-3)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度0.4μm、长度3～4μm、形成芽孢、有淀粉、葡萄糖的分解能力、过氧化氢酶、氧化酶阳性、将硝酸盐还原成亚硝酸等。另外，设想Anoxybacillus kamchatkensis具有脂肪酶活性、且脂质的分解能力高。

在序列号3中显示碱基序列的泛酸枝芽孢杆菌(Virgibacilluspantothenticus)的近源种(IP-9)与泛酸枝芽孢杆菌的标准菌株(DSM24988^T)具有99.5%的同源性。另外，作为泛酸枝芽孢杆菌的近源种(IP-9)的特征，可以举出革兰氏阴性、宽度0.5μm、长度5～6μm、形成大的芽孢、有淀粉、葡萄糖、塔格糖的分解能力、过氧化氢酶、氧化酶阳性、将硝酸盐还原成亚硝酸等。另外，泛酸枝芽孢杆菌具有作为具有抗盐性的成分的ectoine，该ectoine也作为保湿成分已知。

在序列号4中显示碱基序列的Bacillus fortis的近源种(IP-14)与Bacillus fortis的标准菌株(LMG22079^T)具有99.7%的同源性。另外，作为Bacillus fortis的近源种(IP-14)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度0.5μm、长度1μm、形成芽孢、无淀粉、葡萄糖的分解能力、有海藻糖的分解能力，过氧化氢酶、氧化酶阳性、不将硝酸盐还原成亚硝酸等。

在序列号5中显示碱基序列的Lysinibacillus xylanilyticus的近源种(IP-23)与Lysinibacillus xylanilyticus的标准菌株(YC6957^T)具有95.0%的同源性。另外，作为Lysinibacillus xylanilyticus的近源种(IP-23)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度0.5μm、长度3～5μm、形成芽孢、无糖分解能力、有胨分解能力，过氧化氢酶、氧化酶阳性、不将硝酸盐还原成亚硝酸等。另外，已知Lysinibacillus xylanilyticus具有对难分解性的木聚糖的分解特性，但Lysinibacillus xylanilyticus的近源种(IP-23)如上所述，完全没有糖分解能力，仅胨的利用能力高，认为是新菌种。

在序列号6中显示碱基序列的Paenibacillus timonensis的近源种(IP-60)与Paenibacillus timonensis的标准菌株(CIP108005^T)具有96.9%的同源性。另外，作为Paenibacillus timonensis的近源种(IP-60)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度0.5μm、长度3～5μm、形成芽孢、有分解淀粉、木糖醇、木聚糖的能力、过氧化氢酶、氧化酶阴性、将硝酸盐还原成亚硝酸等。另外，Paenibacillus timonensis木聚糖的分解能力未知，但Paenibacillus timonensis的近源种(IP-60)如上所述具有高的木聚糖分解能力，设想为新菌种。另外，对难分解性的糖醇的分解能力也与BP-863同程度地高。

在序列号7中显示碱基序列的Paenibacillus curdlanolyticus的近源种(IP-75)与Paenibacillus curdlanolyticus的标准菌株(IFO15724^T)具有94.6%的同源性。另外，作为Paenibacillus curdlanolyticus的近源种(IP-75)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度0.5μm、长度3～5μm、形成芽孢、有乳糖分解能力、过氧化氢酶、氧化酶阴性、不将硝酸盐还原成亚硝酸等。另外，已知Paenibacillus curdlanolyticus具有对难分解性的木聚糖的分解特性。另外，Paenibacillus curdlanolyticus的近源种(IP-75)，对难分解性的糖醇的分解能力也与BP-863同程度地高，设想为新菌种。

另外，在序列号8中显示碱基序列的Bacillus ruris的近源种(IP-95)与Bacillus ruris的标准菌株(LMG22866^T)具有99.9%的同源性。另外，作为Bacillus ruris的近源种(IP-95)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度1μm、长度2μm、形成芽孢、有淀粉、葡萄糖、海藻糖分解能力、过氧化氢酶、氧化酶阳性、将硝酸盐还原成亚硝酸等。

实施例2

(2-1)溶解液2的制作

溶解液2如下制作：在株式会社三六九所设置的3段式的通气性发酵槽中，在70℃～90℃利用溶解液1-B中所含的微生物群来发酵含有海产残渣的有机物，用水将其最终发酵物稀释至100倍，在60℃以下且在曝气条件下使其溶解10小时以上时间。

(2-2)通过施与溶解液2来分析在无菌小鼠的盲肠便中成为优先种的微生物

对无菌饲养的Balb/c小鼠(雄性、10周龄)以0.5%的浓度将溶解液2施与3周，对从其盲肠便中分离的微生物的碱基序列(16SrDNA序列)进行分析。另外，在饲养时，在调节为室温24±1℃、湿度55±5%的饲养室中用隔离器(アイ·シ一·エム社制)饲养上述Balb/c小鼠，饲料使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名CMF)。另外，碱基序列的分析通过与实施例1的(1-2)中叙述的方法同样的方法进行。通过该分析所分析出的溶解液2中所含的各微生物的碱基序列如序列号9、10所示。

在上述序列号9中显示碱基序列的热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)为上述BP-863，与热噬淀粉芽孢杆菌的标准菌株(LMG18084^T)具有99.9%的同源性。该热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)的生物化学特性如表1所示，另外，热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)的培养照片如图3、图4所示。

[表1]

其中，表1中，与热噬淀粉芽孢杆菌的标准菌株(LMG18084^T)比较显示热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)的生物化学性状。另外，热噬淀粉芽孢杆菌的标准菌株(LMG18084^T)的生物化学性状基于Combet-Blanc,Y.,Ollivier,B.,Streicher,C.,Patel,B.K.C.,Dwivedi,P.P.,Pot,B.,Prensier,G.,Garcia,J.L.(1995)Bacillusthermoamylovorans sp.nov.,amoderately thermophilic and amylolyticbacterium.Int.J.Syst.Bacteriol.45:9-16、及Coorevits,A.,Logan,N.,Dinsdale,A.,Halket,G.,Scheldeman,P.,Heyndrickx,M.,Schumann,P.,VanLandschoot,A.,De Vos,P.(2010)Bacillus thermolactis sp.nov.,isolated from dairy farms,and emended description ofBacillusthermoamylovorans.Int.J.Syst.Microbiol.56:781-786中记载的内容。

上述热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)如表1中所示，与热噬淀粉芽孢杆菌的标准菌株(LMG18084^T)相比，对作为难分解性的糖醇的阿拉伯糖、木糖醇等具有高的分解能力。因此，热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)在利用于发酵饲料等时，可对目前饲料价值低的含有难分解性的糖醇等的玉米外皮、小麦粕、大豆粕、蘑菇、蔬菜粕等期待有效的分解能力。另外，热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)也被确认了作为难分解性的多糖类的木聚糖的分解能力。另外，热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)如图4的电子显微镜照片所示，在通常的培养基条件下，形成芽孢的菌体与杆菌共存。

在上述序列号10中显示碱基序列的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)的近源种(N-16)与凝结芽孢杆菌的标准菌株(ATCC7050^T)具有99.9%的同源性。作为该凝结芽孢杆菌的近源种(N-16)的特征，可以举出革兰氏阳性、宽度0.7μm、长度3～5μm、形成芽孢、无淀粉分解能力、有葡萄糖、海藻糖、塔格糖的分解能力、过氧化氢酶阳性、氧化酶阴性、不将硝酸盐还原成亚硝酸等。

(2-3)溶解液3、4、5的制作

作为仅含有热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)(BP-863)的溶解液制作溶解液3。另外，作为仅含有凝结芽孢杆菌的近源种(N-16)(BP-1051中含有的分离菌)的溶解液制作溶解液4。另外，作为仅含有热噬淀粉芽孢杆菌的标准菌(LMG18084^T)的溶解液制作溶解液5。

实施例3

(3-1)溶解液1-A的检验实验[1]

对Wistar大鼠(雄性、3周龄)(从九动社获得)施与溶解液1-A，进行检验该溶解液1-A的基因群表达调节效果的实验。其中，通过准备下述3组并比较来进行本实验。

(1-A)组通常饲养组(对照组)

(1-B)组溶解液1-A的饮水添加组

(1-C)组溶解液1-A(其中，经0.02μm过滤器灭菌处理)的饮水添加组

其中，对于Wistar大鼠，(1-A)～(1-C)组均将经5天预备饲养的Wistar大鼠用于实验。另外，Wistar大鼠各组均为5只，每只用各自的计量器(夏目制作所社制)进行饲养。另外，饲料使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名MF)，对1只Wistar大鼠，使其在每日25g的摄取限制内自由摄食。另外，饮水对于(1-A)组使用自来水，对于(1-B)组使用添加有1.0%溶解液1-A的自来水，对于(1-C)组使用添加有1.0%的用0.02μm过滤器进行了灭菌处理的溶解液1-A的自来水，使其自由摄取。

上述(1-A)～(1-C)组的Wistar大鼠分别饲养3个月后，采取它们的的肠道、肝脏、脾脏、血液等，迅速用液氮冷冻，然后，在-80℃的冰箱中保管。

使用上述采取的小肠道分析各组间的基因群的表达的变动。具体而言，在从采取的小肠道中除去派尔集合淋巴结后的部位中，实施RNA提取。在100mg以下的组织中添加Isogen(ニツポンジ一ン社制)1000μl，在用液氮冷冻的状态下用乳钵进行粉碎，使用RNAeasy mini kit(Quiagen公司制)进行该RNA提取。然后，各基因群的表达量如下进行数值化：使上述提取的RNA与搭载小鼠的全基因的微阵列(Agilent公司制)杂交并清洗后，通过阵列扫描仪(Agilent公司制)进行各点荧光值的计算及补正。其结果如表2、3所示。

[表2]

[表3]

表2表示相对于(1-A)组在(1-B)组中显示2.0倍以上的表达量的上位6个基因群。在这些基因群中，免疫球蛋白相关基因、趋化因子(C-C基序)配基、趋化因子(C-C基序)受体、颗粒酶B/自然杀伤细胞蛋白酶前体为粘膜免疫系统基因群，维生素D-结合蛋白前体为代谢相关基因群。另外，虽然表中没有，但作为粘膜免疫系统基因群的肿瘤坏死因子受体也相对于(1-A)组在(1-B)组中为1.8倍左右的表达量。

其中，作为上述免疫球蛋白相关基因，确认了抗独特型免疫球蛋白M轻链、免疫球蛋白γ2a恒定区、NGF-结合Ig轻链、Igγ-1、链C区、γ-2a免疫球蛋白重链、免疫球蛋白κ链可变区。另外，作为上述趋化因子(C-C基序)配基，小诱导细胞因子B13前体(CXCL13)(B淋巴细胞化学引诱物)显著地表达。进行利用实时PCR的定量化，结果相对于(1-A)组在(1-B)组中确认了3.6倍(n=3)的增加倾向。

表3表示相对于(1-A)组在(1-B)组中显示二分之一以下的表达量的上位5个基因群。在这些基因群中，HBV pX相关蛋白参与病毒感染的控制，碳酸酐酶参与气体代谢，载脂蛋白A-V参与脂肪代谢，内皮缩血管肽参与血压调节，热激蛋白4参与基因表达、蛋白质功能调节及细胞内信号等。

另外，(1-C)组与(1-B)组不同，相对于(1-A)组的基因群的表达量的变动少。

(3-2)溶解液1-B的检验实验[1]

对无菌小鼠施与溶解液1-B，进行检验该溶解液1-B的基因群表达量调节效果的实验。其中，通过准备下述2组并比较来进行本实验。

(2-A)组通常饲养组(对照组)

(2-B)组溶解液1-B的饮水添加组

另外，无菌小鼠(从东京大学大学院农学生命科学研究科兽医公众卫生学研究室获得并委托该研究室饲养)(2-A)、(2-B)组均为5只，在各组内用相同的隔离器(アイ·シ一·エム社制)进行饲养。另外，饲料使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名CMF)，使其自由摄食。另外，饮水对于(2-A)组使用通过紫外线及高压灭菌器灭菌后的水，对于(2-B)组使用在通过紫外线及高压灭菌器灭菌后的水中添加有0.5%溶解液1-B的水，使其自由摄取。

上述(2-A)、(2-B)组的无菌小鼠分别饲养3周后，采取它们的肠道、肝脏、脾脏、血液等，迅速用液氮进行冷冻，然后在-80℃的冰箱中保管。然后，应用与本实施例(3-1)同样的方法分析各组间的基因群的表达量的变动。

由上述分析的结果也表明，在无菌小鼠中，通过施与溶解液1-B，虽然与表2及表3中所示的Wistar大鼠的情况同样地变化的基因群少，但是，如表4所示的类似的作为粘膜免疫系统基因群的免疫球蛋白相关基因、趋化因子(C-C基序)配基、肿瘤坏死因子受体高表达，代谢相关基因群的表达也被调节。此外，该结果由于对无菌小鼠的施与时间短至3周，因而设想为短时间施与的效果。

[表4]

(3-3)溶解液1-A的检验实验[2]

关于在本实施例(3-1)中采取的Wistar大鼠的肝脏，分析(1-A)、(1-B)组间的基因群间的表达量的变动。本分析应用与本实施例(3-1)同样的方法进行。分析结果如表5、6所示。

[表5]

[表6]

表5表示相对于(1-A)组在(1-B)组的肝脏中显著高表达的主要的上位5个基因群。在这些的基因群中，免疫球蛋白相关基因为粘膜免疫系统的基因，醇脱氢酶6(class V)为代谢相关系统的基因。另外，嗅觉受体1148(predicted)、UDP糖基转移酶2家族多肽B、TRAF2结合蛋白为参与其它的生理反应的基因。另外，虽然表中没有，但作为代谢相关基因群的葡糖激酶等也高表达。

另外，作为上述免疫球蛋白相关基因，可以举出Igκ链、Ig种系κ-链C-区基因、3’末端、抗NGF30抗体轻链mRNA、可变区和恒定区、免疫球蛋白α重链。

表6表示相对于(1-A)组在(1-B)组的肝脏中显著低表达的主要的上位8个基因群。在这些的基因群中，羟基类固醇(17-β)脱氢酶2影响睾酮的增减，硬脂酰辅酶A脱氢酶影响甘油三酯的减少等脂肪代谢整体。另外，apelin在慢性肝病及肥胖时增加。

(3-4)溶液1-B的检验实验[2]

关于在本实施例(3-2)中采取的无菌小鼠的肝脏，分析(2-A)、(2-B)组间的基因群的表达量的变动。本分析使用与本实施例(3-1)同样的方法进行，分析结果如表7、8所示。

[表7]

[表8]

表7表示相对于(2-A)组在(2-B)组的肝脏中显著高表达的主要的上位5个基因群。另外，表8表示相对于(2-A)组在(2-B)组的肝脏中显著低表达的主要的上位5个基因群。此外，这些结果由于对无菌小鼠的施与时间短至3周，因而设想为短时间施与的效果。由表7、8可知，在无菌小鼠的肝脏中，与本实施例(3-3)中的Wistar大鼠的肝脏相比，虽然关于间皮素(mesothelin)的表达量显著减少的方面一致，但未发现关于其它的基因群的一致。

(3-5)溶液1-B的检验实验[3]

对Wistar大鼠(雄性、3周龄)(从九动社获得)施与溶解液1-B，进行检验该溶解液1-B的脂质能量代谢调节效果的实验。其中，通过准备下述4组并比较来进行本实验。

(3-A)组通常食饲养组(对照组)

(3-B)组通常食+溶解液1-B的饮水添加组

(3-C)组高脂肪食饲养组

(3-D)组高脂肪食+溶解液1-B的饮水添加组

其中，关于Wistar大鼠，(3-A)～(3-D)组均将经5天预备饲养的Wistar大鼠用于实验。另外，Wistar大鼠各组均为5只，每只用各自的计量器(夏目制作所社制)饲养。另外，关于饲料，(3-A)、(3-B)组使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名MF)，(3-C)、(3-D)组使用在经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名MF)中以含有20%的方式添加猪油而成的饲料(在ケ一ビ一テイ一オリエン夕ル社制成)，对于1只Wistar大鼠在每日25g的摄取限制内使其自由摄食。另外，关于饮水，(3-A)、(3-C)组自由摄取自来水，(3-B)、(3-D)组自由摄取添加有1.0%溶解液1-B的自来水。

上述(3-A)～(3-D)组的Wistar大鼠分别饲养3个月后，在采取它们的血液等，并测定体重。其中，体重的统计处理通过ANOVA(分散分析)来进行，其结果如表9所示。其中，表中的NS表示无显著差异

[表9]

由表9表明，在都摄食通常食的(3-A)组和(3-B)组之间，Wistar大鼠的体重无显著差异。但是，在都摄食高脂肪食的(3-C)组和(3-D)组之间，Wistar大鼠的体重有显著差异。即，作为高脂肪食+溶解液1-B的饮水添加组的(3-D)组的Wistar大鼠，与作为高脂肪食饲养组的(3-C)组的Wistar大鼠相比较体重显著增加。

另外，在(3-C)组和(3-D)组之间，Wistar大鼠的血液分析的结果未发现显著差异。另外，在(3-D)组的Wistar大鼠中，在解剖学观察中未发现显著的脂肪沉积。另外，根据肝脏的免疫组织染色，脂肪滴也变少。

(3-6)溶液1-B的检验实验[4]

对Balb/c小鼠(雄性、3周龄)(从九动社获得)施与溶解液1-B，进行检验该溶解液1-B的脂质能量代谢调节效果的实验。其中，通过准备下述4组并比较来进行本实验。

(4-A)组通常食饲养组(对照组)

(4-B)组通常食+溶解液1-B的饮水添加组

(4-C)组高脂肪食饲养组

(4-D)组高脂肪食+溶解液1-B的饮水添加组

另外，关于Balb/c小鼠，各组为4只或6只，在4只的情况下用1个计量器(夏目制作所社制)进行饲养，在6只的情况下分成2个计量器(夏目制作所社制)进行饲养。另外，关于饲料，(4-A)、(4-B)组使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名MF)，(4-C)、(4-D)组使用在经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名MF)中以含有20%的方式添加猪油而成的饲料(在ケ一ビ一テイ一オリエン夕ル社制成)，分别使其自由摄食。另外，关于饮水，(4-A)、(4-C)组自由摄取自来水，(4-B)、(4-D)组自由摄取添加有1.0%溶解液1-B的自来水。然后，上述(4-A)～(4-D)组的Balb/c小鼠分别饲养3个月后，通过CT扫描测定体脂肪率，并测定体重。

(4-C)、(4-D)组的Balb/c小鼠的躯干部的CT扫描像分别如图5、6所示，在Balb/c小鼠的体内，图5、6中的接近外周的部分及图6中的中央上部的偏黑的灰色中看到的部分为脂肪。由此表明，(4-D)组的Balb/c小鼠与(4-C)组的Balb/c小鼠相比，尽管有体重增加的倾向，但体脂肪少，实际体脂肪率降低了20%左右。其中，在Balb/c小鼠的大腿部也显示同样的倾向。该倾向表明体脂肪的蓄积低，肌肉容易附着。

(3-7)溶液1-B的检验实验[5]

对Wistar大鼠(雄性、3周龄)(从九动社获得)施与溶解液1-B，进行测定肠内的作为肠内原有菌的梭菌属Clostridiumclusters IV及Clostridium subcluster XIVa的变化的实验。其中，通过准备下述2组并比较来进行本实验。

(5-A)组通常食饲养组(对照组)

(5-B)组通常食+溶解液1-B的饮水添加组

其中，关于Wistar大鼠，(5-A)、(5-B)组均使用经5天预备饲养的Wistar大鼠。另外，Wistar大鼠各组均为5只，每只用各自的计量器(夏目制作所社制)饲养。另外，饲料使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名MF)，对于1只Wistar大鼠，使其在每日25g的摄食限制内自由摄食。另外，关于饮水，(5-A)组自由摄取自来水，(5-B)组自由摄取添加有1.0%溶解液1-B的自来水。

上述(5-A)、(5-B)组的Wistar大鼠分别饲养3个月。然后，通过T-RFLP(Terminal Restriction Frament Length PolymorphismAnalysis，末端限制性片段长度多态性分析)来确认它们的粪中的lostridium clusters IV及Clostridium subcluster XIVa的变化。其结果如表10所示。

[表10]

由此表明，相对于(5-A)组，在(5-B)组中，Clostridium cluster IV及Clostridium subcluster XIVa均增加。

(3-8)由溶解液1-A、1-B的检验实验得到的见解

通过对本实施例(3-1)～(3-7)中记载的各实验的结果进行研究，可得到如下的见解。

根据本实施例(3-1)、(3-3)的实验结果，可列举通过溶解液1-A中所含的微生物，使免疫系统活化和/或使肠道功能正常化的倾向。例如，已知抗IgM抗体代替抗原而有助于初始B细胞的活性(Mora et al.Generation of Gut-Homing Ig A-secreting B cells by intestinaldendritic cells.Science 2006;314:1157-1160)。另外，同样地可推测抗NGF抗体的产生。已知抗NGF抗体降低肠中的细胞旁通透性的异常增加(Barreau,et al.Pathways involved in gut mucosal barrierdysfunction induced in adult rats by maternal deprivation:corticotrophin-releasing factor and nerve growth factor interplay.JPhysiol.2007;580(1):347-356)。

接着，根据本实施例(3-1)的实验结果，通过溶解液1-A中所含的微生物，维生素D-结合蛋白前体的表达量增加，已知该维生素D-结合蛋白前体有助于巨噬细胞的活化，也启示了抗癌功能(Kisker et al.,Vitamin D binding protein-Macrophage activating factor (DBP-maf)inhibits angiogenesis and tumor growth in mice.Neoplasia 2003;5(1):32-40)。另外，HBV pX相关蛋白的表达量减少，已知该HBV pX相关蛋白(HBV pX基因)促进p53诱导型的细胞死亡。

另外，碳酸酐酶的表达量降低，已知该碳酸酐酶属于代谢调节系统，调节碳酸离子量。粪中的碳酸离子为由肠内菌群产生的甲烷气体的来源，因此，可期待由于碳酸酐酶的表达量减少而使甲烷气体的产生在肠内减少。这与在另行进行的实验中施与高温发酵饲料(包含含有与溶解液1-A同样的微生物的发酵产物的饲料)则粪发酵时的恶臭变少并不矛盾。此外，通常畜粪在堆肥化时倾向于厌氧发酵，可由粪中的甲烷气体和硫化氢生成甲硫醇。因此，若预先使粪中甲烷少，则上述甲硫醇的生成量变少。此外，甲烷气体具有二氧化碳的20倍的地球变暖潜力，因此，若可从肠内进行调节，则意义深远。

另外，载脂蛋白A-V的表达量降低，已知该载脂蛋白A-V通过其表达量降低而有助于降低中性脂肪值。此外，对本实施例(3-1)中采取的肝脏等进行分析，结果血清中的甘油三酯有减少的倾向，通过免疫组织化学染色也确认了肝脏中的甘油三酯的沉积减少。

另外，在进行了灭菌处理的(1-C)组中，与(1-B)组不同，未发现相对于(1-A)组的基因群的表达量的变动，由此启示，为了发挥基因群的表达量的调节效果，嗜热性的微生物的存在是重要的。

接着，根据本实施例(3-3)的实验结果，通过溶解液1-A中所含的微生物群，醇脱氢酶6(class V)的基因表达量增加，该醇脱氢酶6(class V)被期待与脂肪代谢的相关性。另外，间皮素的表达量降低，该间皮素被推测为致癌相关基因群，表达量降低是优选的。

另外，Nocturnin(黑夜因子)的表达量减少，已知该Nocturnin的表达量减少则脂肪量倾向于减少。对本实施例(3-1)中采取的肝脏进行分析，结果中性脂肪的沉积减少，可得到与该Nocturnin的表达量减少不矛盾的结果。另外，羟基类固醇(17-β)脱氢酶2的表达量减少。对于该羟基类固醇(17-β)脱氢酶2的减少，可期待对类固醇代谢系统的影响。

接着，无菌小鼠的本实施例(3-2)、(3-4)的实验结果启示，溶解液1-B中所含的微生物直接发挥效果。根据Wistar大鼠的本实施例(3-1)、(3-3)的实验结果，认为粘膜免疫系统的基因群及代谢系统的基因群的表达调节效果是通过与宿主侧的土著肠内菌群的协调而得到的，但推测上述直接的效果与其完全不同。

接着，本实施例(3-5)、(3-6)的实验结果显示溶解液1-B中所含的微生物可能调节肠内的脂质能量的代谢。实际在另行进行的实验中也表明，施与高温发酵饲料(含有与溶解液1-B同样的微生物)时，作为肠内的能量源的有机物的组成发生变化。

接着，本实施例(3-7)的实验结果显示，溶解液1-B中所含的微生物使作为常居菌的无害的梭菌clostridium clusters IV和XIVa(Clostridium leptum and coccoides groups，柔嫩球形梭菌群)增加。由此表明，溶解液1-B中所含的微生物诱导被施与后的动物的肠内细菌相的变化。另外，通过与本实施例(3-5)及(3-6)的实验结果组合进行考察，通过该梭菌的增加，刺激Toll样受体5(TLR5)等并调节脂肪代谢，如图6所示的CT扫描图像所示，可推测存在即使在高脂肪食条件下也不使内脏脂肪积蓄这样的机制。

另外，认为作为肠道的免疫系统的受体的上述TLR5是具有鞭毛的梭菌等的受体，不仅调节自然免疫系统，而且调节代谢综合症。另外，有如下报告：缺损了TLR5的基因的小鼠患代谢综合症，将源自该小鼠的肠内细菌相对无菌小鼠经口施与时，该无菌小鼠也患了代谢综合症(Matam Vijay-Kumar,et al.Metabolic Syndrome and Altered GutMicrobiota in Mice Lacking Toll-Like Receptor 5.Science 2010;328:228-231)。该事实说明，如果梭菌的刺激无法经由TLR5给予时，就患代谢综合症，由此质疑作为肠内的原有菌的梭菌的存在意义。

另外，报告了上述梭菌诱导肠道的免疫系统的控制、特别是表达转录因子forkhead box P3(Foxp3)的CD4阳性的控制性T细胞(Treg细胞)的表达，不易引起炎症性肠炎及过敏反应(Koji Atarashi,et al.Inductionof Colonic Regulatory T Cells by Indigenous Clostridium Species.学术志Science电子版(H22.12.24发表)，Science 2011;311:337-341)。另外，也有在人类的溃疡性大肠炎的患者中该细胞减少的报告。此外，认为上述控制性T细胞为控制免疫系统的过度反应的T细胞的一种，对于自身免疫疾病的调节也承担重要的作用。

实施例4

(4-1)溶解液1-B的检验实验[6]

对无菌饲养的Balb/c小鼠施与溶解液1-B，进行检验由此引起的肠道内派尔集合淋巴结的发育等的实验。此外，通过准备通常饲养组(对照组)和溶解液1-B的饮水添加组这2组并比较来进行本实验。

其中，无菌饲养的Balb/c小鼠(从东京大学大学院农学生命科学研究科兽医公众卫生学研究室获得，并委托该研究室饲养)，两组均为5只，在各组内用相同的隔离器(アイ·シ一·エム社制)饲养。另外，饲料使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名CMF)，使其自由摄食。另外，饮水对于对照组使用通过紫外线及高压灭菌器灭菌的水，对于溶解液1-B的饮水添加组使用在通过紫外线及高压灭菌器灭菌的水中添加有0.5%溶解液1-B的水，使其自由摄取。

两组无菌饲养的Balb/c小鼠分别饲养3周。然后，对该饲养后的两组无菌饲养的Balb/c小鼠进行比较，结果与对照组相比，发现溶解液1-B的饮水添加组的粪便正常化的倾向。另外，与对照组相比，确认了溶解液1-B的饮水添加组的肠道内的派尔集合淋巴结发育。进而，确认了溶解液1-B的饮水添加组的大肠粪中的分泌型IgA的浓度增加至对照组的1.5倍左右的倾向，肠道的强度也比对照组增强，是性状相近的粪便的状态。

(4-2)溶解液1-B的检验实验[7]

对无菌小鼠施与溶解液1-B，进行检验由此引起的肝脏的IL-18含量的变化的实验。此外，通过准备通常饲养组(对照组)与溶解液1-B的饮水添加组这2组并比较来进行本实验。

其中，无菌小鼠(从东京大学大学院农学生命科学研究科兽医公众卫生学研究室获得，并委托该研究室饲养)两组均为5只，在各组内用相同的隔离器(アイ·シ一·エム社制)饲养。另外，饲料使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名CMF)，使其自由摄食。另外，饮水对于对照组使用通过紫外线及高压灭菌器灭菌的水，对于溶解液1-B的饮水添加组使用在通过紫外线及高压灭菌器灭菌的水中添加有0.5%溶解液1-B的水，使其自由摄取。

两组无菌小鼠分别饲养3周。然后，对该饲养后的两组无菌小鼠的肝脏进行分析，结果确认了与对照组相比，溶解液1-B的饮水添加组的肝脏的IL-18含量如图7所示那样增加。

(4-3)溶解液2、3、4、5的检验实验

对Balb/c小鼠(雄性、3周龄)(由九动社获得)施与溶解液2、3、4、5，进行检验由它们引起的肠道及脾脏中的分泌型IgA的浓度变化的实验。此外，通过准备下述5组并比较来进行本实验。

(6-A)组通常食饲养组(对照组)

(6-B)组溶解液2的饮水添加组

(6-C)组溶解液3的饮水添加组

(6-D)组溶解液4的饮水添加组

(6-E)组溶解液5的饮水添加组

其中，Balb/c小鼠各组为4只或6只，在4只的情况下，用1个计量器(夏目制作所社制)饲养，在6只的情况下，分成2个计量器(夏目制作所社制)饲养。另外，饲料使用经放射线灭菌的饲料(オリエン夕ル酵母社制制品名MF)，使其自由摄食。另外，饮水对于(6-A)组使用自来水，对于(6-B)组使用添加有1.0%溶解液2的自来水，对于(6-C)组使用添加有1.0%溶解液3的自来水，对于(6-D)组使用添加有1.0%溶解液4的自来水，对于(6-E)组使用添加有1.0%溶解液5的自来水，分别使其自由摄取。

上述(6-A)～(6-E)组的Balb/c小鼠分别饲养3个月后，通过测定粪中的分泌型IgA的浓度来分析肠道及脾脏的分泌型IgA的浓度。将小肠的数据示于图8。分析的结果是，相对于作为对照组的(6-A)组，分别施与了溶液2、3、4的(6-B)、(6-C)、(6-D)组中分泌型IgA的浓度显著增加。另外，可知相对于(6-A)组，施与了溶解液5的(6-E)组的分泌型IgA的浓度的增加量比(6-B)、(6-C)、(6-D)组小。在脾脏中也可确认了这样的倾向。

(4-4)由溶解液1-B、2、3、4、5的检验实验得到的见解

通过对本实施例(4-1)～(4-3)中记载的各实验的结果进行研究，可得到如下见解。

无菌饲养的Balb/c小鼠及无菌小鼠的本实施例(4-1)、(4-2)的实验结果启示，溶解液1-B中所含的微生物直接具有粘膜免疫系统的基因群的表达调节效果。这是因为可通过以下实验结果设想：已知一般派尔集合淋巴结调节免疫球蛋白的产生等，IL-18诱导γ干扰素的产生，但热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)等溶解液1-B中所含的微生物活化肠道的派尔集合淋巴结的发育及生物体内的IL-18的产生。

接着，Balb/c小鼠的本实施例(4-3)的实验结果启示，溶解液2中所含的微生物通过与宿主侧的土著肠内菌群的协调，发挥粘膜免疫系统基因群的表达调节效果。因此，通过实时PCR研究在上述说明的作为免疫系统的控制细胞的Treg细胞中表达的Foxp3在大肠组织中的表达水平，结果在作为BP-863的单独施与组的(6-C)组中确认了与作为通常饲养组(对照组)的(6-A)组以及作为标准菌株施与组的(6-E)组相比为1.4倍左右的表达量。由本结果可推测，有可能通过嗜热性BP-863的施与，作为免疫系统的控制细胞的Treg细胞集聚，过敏的发病预防等的免疫控制机构发挥作用。

另外，作为溶解液2中所含的微生物的热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)(BP-863)及凝结芽孢杆菌的近源种(N-16)与热噬淀粉芽孢杆菌的标准菌株(LMG18084^T)不同，即使在作为分离菌施与的情况下，如图8所示，也发挥粘膜免疫系统的基因群的表达调节效果。进而，根据实施例3的(3-5)、(3-6)的检验实验结果等，在添加了热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)的组中，饲料效率提高，成为了与作为同时饲养的卡路里数高10%以上的高脂肪食饲养的小鼠同等以上的体重，体重增加率得以改善。设想这如下产生：热噬淀粉芽孢杆菌的近源种(N-11)分解饲料中的难分解性的糖，提高利用效率。

产业可利用性

本发明的混合物、溶解液及药物可通过对动物进行施与，从而作为能够调节该动物的粘膜免疫系统基因群、和/或肠、肝脏中的代谢相关基因群的混合物、溶解液及药物利用。

Claims

1.一种混合物或溶解液，其特征在于，是通过在50℃～90℃使含有嗜热微生物的有机物发酵而得到的，通过对动物施与该混合物或溶解液，从而调节该动物的选自粘膜免疫系统基因群、肠中的代谢相关基因群、肝脏中的代谢相关基因群中的至少1个基因群的表达，其中，作为所述嗜热微生物，含有1种以上嗜热性的芽孢杆菌属、海洋芽胞杆菌属、类芽孢杆菌属、厌氧芽孢杆菌属、赖氨酸芽孢杆菌属、甲烷嗜热菌属、Geogemma属、火叶菌属、热网菌属、超热菌属、火球菌属、火棒菌属、热球菌属、气火菌属、产水菌属、热袍菌属、热脱硫杆菌属、栖热菌属、地芽孢杆菌属、嗜热丝孢菌属、梭菌属的微生物。

2.如权利要求1所述的混合物或溶解液，其特征在于，作为所述嗜热微生物，含有嗜热性复合菌BP-1051。

3.如权利要求1所述的混合物或溶解液，其特征在于，作为所述嗜热微生物，含有BP-863，该BP-863具有对用热噬淀粉芽孢杆菌的近源种难分解性的糖质的分解能力。

4.如权利要求1所述的混合物或溶解液，其特征在于，作为所述嗜热微生物，含有嗜热性种菌PTA-1773。

5.一种药物，含有权利要求1～4的任一项所述的混合物或溶解液作为有效成分。