JP2013150558A - 疲労状態及びストレス状態の評価方法 - Google Patents
疲労状態及びストレス状態の評価方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013150558A JP2013150558A JP2012011890A JP2012011890A JP2013150558A JP 2013150558 A JP2013150558 A JP 2013150558A JP 2012011890 A JP2012011890 A JP 2012011890A JP 2012011890 A JP2012011890 A JP 2012011890A JP 2013150558 A JP2013150558 A JP 2013150558A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cyp2a6
- test organism
- gene
- fatigue
- gene group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、所定の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
【選択図】なし
Description
分子生物学的情報の利用対象は、疾患という特殊な生理的状態変化に限られず、年齢、性別、身体的特徴といった個人の特性や特徴、住所や住環境、職業や就労状況といった境遇や環境などの、生理的状態に変化又は影響を与える要因の効果(強度)も含まれる。これらの生理的状態変化や生理的状態に変化又は影響を与える要因の効果にも、共通する遺伝子発現パターンが存在することは周知である。
こうした生理的状態変化や、生理的状態に変化又は影響を与える要因の効果を反映する遺伝子発現情報を利用可能とすることは、従来、定量的な指標のない、あるいは、客観的判断が困難な筋肉疲労の状態変化を可視的に明らかにすることを可能とする。
すなわち、本発明は以下の通りである。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
(2)被験生物の精神的な疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Chga、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Ccr2、AAO、COX、LOX、PHOX、POX
(3)被験生物の運動による疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Irs1、AAO、COX、LOX、PHOX、POX
(4)被験生物の精神的因子又は運動的因子を除く因子による疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
(5)細胞の疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、前記細胞から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Ckm、IL6、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、Irs1、AAO、COX、LOX、PHOX、POX
(6)被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態に対する被験物質の抑制効果又は回復効果を評価する方法であって、被験物質が接触、摂取又は投与された被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、前記被験物質の抑制効果又は回復効果と関連づけることを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
(7)被験生物が動物である、上記(1)〜(4)及び(6)のいずれかに記載の方法。
(8)被験生物が細胞である、上記(1)〜(4)及び(6)のいずれかに記載の方法。
(9)下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子のDNA又はmRNAに対し、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが搭載されたマイクロアレイ。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5 、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、 Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
(10)配列番号1〜213で示される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドプローブが搭載されたマイクロアレイ。
本発明は、被験生物から採取された試料中の対象遺伝子を検出することで、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法、又は被験生物の疲労状態及び/若しくはストレス状態に対する被験物質の抑制効果又は回復効果を評価する方法である。本発明において対象となる遺伝子群を以下に示す。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
また、上記遺伝子について、被験物質が接触、摂取又は投与された被験生物が疲労状態及び/又はストレス状態になった場合の遺伝子発現量と、被験物質が接触、摂取又は投与されていない被験生物が疲労状態及び/又はストレス状態になった場合の遺伝子発現量とを対比し、遺伝子発現量の変動と当該被験物質の効果とを関連づけることにより、当該被験物質の疲労状態及び/又はストレス状態に対する抑制効果を評価することができる。
さらに、疲労状態及び/又はストレス状態の被験生物に被験物質を接触、摂取又は投与し、当該被験生物から採取された試料に存在する上記遺伝子の遺伝子発現量と、疲労状態及び/又はストレス状態の被験生物に被験物質を接触、摂取又は投与していない場合の試料に存在する上記遺伝子の遺伝子発現量とを対比し、遺伝子発現量の変動と当該被験物質の効果とを関連づけることにより、当該被験物質の疲労状態及び/又はストレス状態に対する回復効果を評価することができる。
このように、本発明は、上記遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子の発現量を指標として、被験生物の疲労状態及び/若しくはストレス状態を評価する方法、又は疲労状態及び/若しくはストレス状態に対する被験物質の効果を評価する方法である。
本発明は、被験生物から採取された試料中に存在する所定の遺伝子を検出し、その検出結果を対照と比較することにより、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法である。
本発明においては、例えば、被験生物から採取された試料に存在する所定の遺伝子について、当該被験生物の平常時の遺伝子発現量と疲労状態及び/又はストレス状態の遺伝子発現量とを対比し、遺伝子発現量の変動(増加又は減少)又は遺伝子発現の有無を確認することにより、当該被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態を客観的に評価することができる。
本発明において、「疲労状態」とは、被験生物に精神的負荷、運動による負荷、又は精神的因子及び運動的因子を除く因子による負荷が与えられることにより、被験生物の精神的又は身体的作業能力が質的又は量的に低下している状態をいう。例えばヒトの疲労状態においては、仕事量の減少、作業遂行の非能率化などが観察される。被験生物が細胞である場合の疲労状態とは、細胞に対して電気刺激による負荷、培地の対流による負荷、過酸化水素などの薬剤添加による負荷、RNAiによる遺伝子のノックダウンやノックアウトによる負荷などの負荷が与えられることにより、その細胞の由来する動物における疲労状態を当該細胞で再現した状態をいう。
また、本発明において、「ストレス」とは、精神的因子、運動的因子、又は精神的因子及び運動的因子を除く因子による負荷及び刺激をいい、「ストレス状態」とは、ストレスが一時的又は継続的に与えられている状態をいう。ストレス状態には、精神的なストレス状態、運動によるストレス状態、並びに精神的因子及び運動的因子を除く因子によるストレス状態がある。
また、同じ因子(精神的因子、運動的因子又は精神的因子及び運動的因子を除く因子)によって疲労状態とストレス状態が同時に生じることもある。従って、このような状態を本発明においては「疲労状態及びストレス状態」と称する。
本発明において、精神的な疲労とは、被験生物にとって不快な状態を続けることによって生じる疲労であり、このような疲労の要因となる因子を本明細書では「精神的因子」という。精神的因子は、被験生物に精神的な負担を生じさせるものであれば限定されるものではない。
本発明において、「運動」又は「運動的因子」とは、身体に筋肉運動を負荷するものをいい、例えば、ランニング、ジョギング、サイクリング、遊泳、ウエイトトレーニングなどが挙げられる。
運動による疲労(運動疲労)は、主に身体に筋肉運動が負荷されることによって発生する疲労であり、局所的又は全身的な筋肉の疲労をいう。また、運動疲労には、一時的又は慢性的な筋肉の疲労も含まれる。
精神的因子及び運動的因子を除く因子による疲労(非運動疲労:運動による疲労にも精神的な疲労にも該当しない因子による疲労)とは、同じ体勢を維持又は圧迫し続けることによって発生する疲労であり、このような疲労としては、こり、褥瘡、筋萎縮等が挙げられる。「こり」は特定の同じ体勢を維持することにより血液循環が悪くなり、筋肉が柔軟性を失って硬くなる状態をいう。「褥瘡」は、患者が長期にわたり同じ体勢で寝たきり等になった場合、体と支持面(多くはベッド)との接触局所で血行が不全となって、周辺組織に壊死を起こすことをいい、床ずれとも称する。「筋萎縮」は筋肉量が低減する現象であり、筋肉そのものに原因がある筋原性筋萎縮と、運動神経にその原因がある神経原性筋萎縮、筋肉の使用が低下することで起こる廃用性筋萎縮、遺伝や感染による筋萎縮が挙げられる。
本発明において、被験生物を疲労状態にする方法には様々な方法があり、運動疲労の場合は、例えばランニング、ジョギング、サイクリング、遊泳、ウエイトトレーニングなどを実施させるほか、電気刺激又は寒冷刺激を与えたり、溺水させる方法が挙げられ、例えばマウス、ラットの場合は遊泳の方法が好ましい。
非運動疲労の場合は、被験生物に対する部分的な圧迫、体勢の固定・維持が挙げられ、例えば被験生物がマウスの場合は、尾懸垂、後肢懸垂等による廃用試験などが挙げられる。尾懸垂は、マウス又はラットの尾を任意の方法で任意の場所に固定してぶら下げる方法であり、筋肉を使用させないことにより廃用性筋萎縮を惹起することができる方法である。
本発明において、被験生物が動物である場合、ストレス状態には、身体に筋肉運動が負荷されることによって発生するものと、同じ体勢を維持又は圧迫し続けることによって発生するものとがあり、ストレス状態を生じる因子は疲労状態の因子と共通する。すなわち、被験動物をストレス状態にする方法は、上記疲労状態にする方法と同じである。
他方、被験生物が細胞である場合、細胞の疲労状態及び/又はストレス状態の因子としては、電気刺激によるストレス、培地の対流によるストレス、過酸化水素などの薬剤添加によるストレス、RNAiによる遺伝子のノックダウンやノックアウトによるストレスが挙げられる。すなわち、細胞を疲労状態及び/又はストレス状態にする方法としては、細胞に対する電気刺激、培地の対流、過酸化水素などの薬剤添加、RNAiによる遺伝子のノックダウンやノックアウトが挙げられる。筋肉由来の細胞においては、好ましくは過酸化水素、デキサメタゾンなどの薬剤添加、及びRNAiを用いた方法であり、これらの方法は、より生物の運動及び非運動の両方の筋肉疲労を再現できる。また血管由来の細胞においては、トロンビンによる刺激またはRNAiを用いた方法が好ましい。
本発明の検出の対象となる遺伝子は、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子である。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1(SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
Chga、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Ccr2、AAO、COX、LOX、PHOX、POX
Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Irs1、AAO、COX、LOX、PHOX、POX
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Irs1、AAO、COX、LOX、PHOX、POX
表1
<遺伝子群>
Chga、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5 、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1 、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、 Ybx1、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
さらにより好ましくは、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子である。
<遺伝子群>
Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5 、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1 、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、 Ybx1、Ddit4、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX
<遺伝子群>
SOD1、cat(カタラーゼ)、Gpx4、NOX4、Rac1、MYC、lcam1、Thbs1、TSC1、mTOR、CYP2E1、Gsr、Gsta3、Gstm3、Gsto1、Efna1、gp130、AdipoR1、capn2、FN1、Prdm16、Cbl-b、Dmd、Dag1、Trim63
本発明において、被験生物とは、疲労状態又はストレス状態になり得る生物であり、動植物個体、動植物組織、動植物細胞(培養細胞を含む)、線形動物及び微生物(ウイルス、菌類)などが含まれる。
本発明において、対照とは、被験生物の測定結果と比較し、その結果を判断するための対照被検生物の測定結果である。例えば、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態の測定結果に対する対照としては、被検生物の平常時の測定結果が挙げられる。また、同一の被験生物を測定対象とする場合、ある時点、条件下における疲労状態及び/又はストレス状態の測定結果に対する対照は、別の時点、条件下における疲労状態及び/又はストレス状態の測定結果である。他方、異なる被検生物を測定対象とする場合、ある被検生物における疲労状態及び/又はストレス状態の測定結果に対する対照は、同一条件下における別の被検生物における疲労状態及び/又はストレス状態の測定結果である。
本発明において、疲労状態及び/ストレス状態の評価は、被験生物における平常時の遺伝子発現量プロファイルと疲労状態及びストレス状態の遺伝子発現量プロファイルとを比較解析することによって行うことができる。対比する場合の対照となる遺伝子発現量プロファイルは、同一被験生物のものであっても複数の異なる被験生物のものであってもよく、またデータベースに予め蓄積されたものであってもよい。本発明の方法では、複数の被験生物由来の試料を用いてmRNAのレベルを測定する場合がある。従って、予め規定された数の被験生物(1次母集団)において上記mRNAを測定し、得られた測定値を基本データとして、この基本データと、検出の対象となる単数又は複数の被験生物由来の試料のmRNAとを比較することができる。比較は、mRNAの増減を比較することだけでなく、mRNAの発現の有無を比較することも含む。例えば、基本データでは発現しておらず、被験生物で発現するmRNAについて、各試料を比較することを含む。
さらに、上記測定された被験生物由来のデータを前記母集団の値に組み込んでmRNAレベルを再度データ処理し(平均値化等)、対象となる被験生物(母集団)の例数を増やすこともできる。例数を増やすことにより、mRNAの臨界値の精度を高め、場合により臨界値を適宜修正することにより、検出精度を高めることができる。
本発明は、このようなデータを格納するデータベースと、当該データ及び比較解析に必要なプログラム等を読み出して実行する解析装置をも提供することができる。このような解析装置によれば、当該データベースから蓄積データを取り出し、測定された被験生物のデータと比較するだけで、被験生物の疲労状態をいつでも簡便に評価することができる。なお、本実施形態において、「疲労状態及びストレス状態前後」には、疲労及びストレス負荷前、疲労及びストレス負荷中、疲労及びストレス負荷後が含まれるものとする。
遺伝子発現量プロファイルとは、採取された生体試料中のmRNAの量を測定し、測定された各遺伝子の発現量を絶対値及び/又は相対値で示すことである。
また、本発明において、「遺伝子を検出する」とは、採取された試料中のmRNAの量を測定することである。mRNA量測定法としては、逆転写酵素-ポリメラーゼ連鎖反応法(RT-PCR法)、リアルタイムPCR法、ノーザンブロッティング及びドットブロット、核酸マイクロアレイなどの方法が挙げられる。好ましくは複数種類の遺伝子の変動を同時に測定でき、実験操作による誤差の少ない核酸マイクロアレイによる測定が好ましい。また試料の調製は各測定方法に適した方法で行う。その測定方法及び測定結果の解析方法を下記に示す。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5 、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、 Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4
本発明の評価方法においては、これらの核酸マイクロアレイを用いることができる。
本発明においては、マハラノビス・タグチシステムの手法(文献: ベーシックオフライン品質工学 田口玄一、横山巽子著 日本規格協会)を用いて、複数の遺伝子を用いて疲労状態及び/又はストレス状態を評価することが好ましい。マハラノビス・タグチシステムのひとつである複数T法を用いた場合、それぞれの遺伝子群における疲労及び/ストレス負荷前の状態の測定結果を単位空間とし、y=Mの式で表されるyの値で判定する。MはM2=1/2{V(Y11-Y1)2-2V11(Y11-Y1)(Y12-Y2)+V11(Y21-Y2)2}で表され、Yは各測定条件のβとηを用いて、Y1=β、Y2=1/√ηとして変換した単位空間の各値であり、Vはその変換した単位空間の分散行列でありV11、V12は分散行列の値、Y11、Y12は求めたいサンプルの測定データの変換値である。y値がある値A以上のとき、または、疲労・ストレス負荷前の状態のときの群の最大の値との差が1000以上のときを疲労状態と判定する。値Aは4000から10000であり、好ましくは6000から8000であり、より好ましくは7000である。
本発明は、被験物質を接触、摂取又は投与した被験生物から採取した試料中に存在する所定の遺伝子を検出し、その検出結果を被験物質の効果と関連づけることにより、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態に対する被験物質の抑制効果又は回復効果を評価する方法である。検出の対象となる所定の遺伝子については、上記と同様である。
例えば、被験生物から採取された試料に存在する所定の遺伝子について、被験物質が接触、摂取又は投与された被験生物が疲労状態及び/又はストレス状態になった場合の遺伝子発現量プロファイルと、被験物質が接触、摂取又は投与されていない被験生物が疲労状態及び/又はストレス状態になった場合の遺伝子発現量プロファイルとを対比し、遺伝子発現量の変動と当該被験物質の効果とを関連づけることにより、当該被験物質の疲労状態及び/又はストレス状態に対する抑制効果を評価することができる。
また、疲労状態及び/又はストレス状態の被験生物に被験物質を接触、摂取又は投与し、当該被験生物から採取された試料に存在する所定の遺伝子の遺伝子発現量プロファイルと、疲労状態及び/又はストレス状態の被験生物に被験物質を接触、摂取又は投与していない場合の試料に存在する所定の遺伝子の遺伝子発現量プロファイルとを対比し、遺伝子発現量の変動と当該被験物質の効果とを関連づけることにより、当該被験物質の疲労状態及び/又はストレス状態に対する回復効果を評価することができる。
その他、(i) 被験物質を接触、摂取又は投与する前の平常時、(ii) 被験物質を接触、摂取又は投与する前の疲労状態及び/又はストレス状態時、(iii) 被験物質を接触、摂取又は投与した後の平常時、(iv)被験物質の接触、摂取又は投与後に疲労及びストレスを負荷した後、並びに(v) 疲労及びストレス負荷後に被験物質を接触、摂取又は投与した後における遺伝子発現量プロファイルを、任意の組み合わせで対比することにより、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態やこれに対する被験物質の効果を評価することができる。
本発明において、「被験物質」とは、被験生物に接触させる物質、被験生物が摂取する物質又は被験生物に投与する物質を意味し、食品や薬物が含まれる。
食品とはすべての飲食物のことであり、生鮮食品、加工食品、飲料、調味料材料、食品添加物などの加工材料、植物の粉砕物、植物からの抽出物、それら食品の混合物、食品成分といったものが含まれる。薬物としては医薬品、医薬部外品、薬剤候補物、薬剤混合物、化粧品、化粧品成分、香料、着色料が含まれる。
例えば生鮮食物であれば、コメ、麦、トウモロコシ、カブ、ダイコン、ハツカダイコン、ワサビ、ホースラディッシュ、ゴボウ、チョロギ、ショウガ、ニンジン、ラッキョウ、レンコン、ユリ根、ナス、ペピーノ、トマト、タマリロ、タカノツメ、トウガラシ、シシトウガラシ、ハバネロ、ピーマン、カボチャ、ズッキーニ、キュウリ、ツノニガウリ、シロウリ、ツルレイシ、トウガン、ヘチマ、ユウガオ、オクラ、アズキ、インゲンマメ、エンドウ、エダマメ、ササゲ、シカクマメ、ソラマメ、ダイズ、ナタマメ、ラッカセイ、レンズマメ、ゴマ、スプラウト、モヤシ、かいわれ大根、イチゴ、スイカ、メロン、マクワウリ、カラシナ、キャベツ、クレソン、ケール、コマツナ、サイシン、サンチュ、山東菜、シュンギク、シロナ、セリ、セロリ、タアサイ、ダイコンナ、タカナ、チシャ、チンゲンサイ、ニラ、菜の花、野沢菜、白菜、パセリ、ハルナ、フダンソウ、ホウレンソウ、ミズナ、ミブナ、ミツバ、メキャベツ、ルッコラ、レタス、はなっこりー、ワサビナ、アサツキ、アスパラガス、ウド、コールラビ、ザーサイ、タケノコ、ニンニク、ヨウサイ、ネギ、ワケギ、タマネギ、アーティチョーク、ブロッコリー、カリフラワー、食用菊、なばな、フキノトウ、ミョウガ、サツマイモ、サトイモ、ジャガイモ、ナガイモ、ヤマノイモ、エノキタケ、エリンギ、キクラゲ、キヌガサタケ、シイタケ、シメジ、シロキクラゲ、タモギタケ、チチタケ、ナメコ、ナラタケ、ハタケシメジ、ヒラタケ、ブナシメジ、ブナピー、ポルチーニ、ホンシメジ、マイタケ、マッシュルーム、マツタケ、ヤマブシタケ、カリン、チュウゴクナシ、ナシ、マルメロ、セイヨウカリン、ジューンベリー、シポーバ、リンゴ、アメリカンチェリー、アンズ、ウメ、サクランボ、スミミザクラ、スピノサスモモ、スモモ、モモ、アーモンド、イチョウ、クリ、クルミ、ペカン、アケビ、イチジク、カキ、キイチゴ、キウイフルーツ、グミ、クワ、クランベリー、コケモモ、ザクロ、サルナシ、シーバックソーン、スグリ、ナツメ、ニワウメ、ビルベリー、フサスグリ、ブドウ、ブラックベリー、ブルーベリー、ポーポー、マツブサ、ラズベリー、ユスラウメ、柑橘類、オリーブ、ビワ、ヤマモモ、トロピカルフルーツ、イチゴ、スイカ、メロン、バナナ及びこれらの食材の可食部、葉、種子、他に牛肉、豚肉、鶏肉、卵、馬肉、羊肉、猪肉、鹿肉、魚やカニ、海老、イカ、蛸といった魚介類、海草などが挙げられる。加工食品としてはケフィア、ヨーグルト、納豆、味噌、醤油、漬物などといった発酵食品が挙げられ、他に煎茶、玉露、番茶といった緑茶や、白茶、ウーロン茶といった青茶、紅茶、黒茶、コーヒーのような飲料、前述した生鮮食品からの窄汁、塩、こしょうと言った調味料などを挙げることができる。
本発明において、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態に対する抑制効果とは、被験生物に対して被験物質を接触、摂取又は投与した後に、疲労及び/又はストレスを負荷した場合に、被験物質を接触、摂取又は投与しない場合と比べて、疲労状態及び/又はストレス状態に関連する遺伝子(本発明の検出の対象となる遺伝子)の発現量が抑制されることを意味する。
他方、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態に対する回復効果とは、被験生物に対して疲労及び/又はストレスが負荷された後に、被験物質を接触、摂取又は投与した場合に、被験物質を接触、摂取又は投与しない場合と比べて、疲労状態及び/又はストレス状態に関連する遺伝子の発現量が低下することを意味する。
本発明においては、(i) 被験物質を接触、摂取又は投与した被験生物からの試料、及び(ii)接触、摂取若しくは投与前の被験生物からの試料又はブランク(プラセボ、溶媒のみなど)を接触、摂取又は投与した被験生物からの試料を測定し、得られたmRNA量測定結果より被験物質の効果を関連付ける。測定結果で評価に使用するデータ、判定値、mRNA量の変動の判定方法、及び疲労状態・ストレス状態の評価方法についての説明は上記と同様である。変動した遺伝子の中で被験物質の接触、摂取又は投与した場合のみで変動した遺伝子がある場合、被験物質は、その遺伝子に対して作用し、疲労状態及び/又はストレス状態に対する抑制効果又は回復効果があると判定する。
さらに、上記測定された被験生物由来のデータを前記母集団の値に組み込んでmRNAレベルを再度データ処理し(平均値化等)、対象となる被験生物(母集団)の例数を増やすこともできる。例数を増やすことにより、mRNAの臨界値の精度を高め、場合により臨界値を適宜修正することにより、検出精度を高めることができる。
被験生物としてはC57BL/6J マウス(雄、12 週齢)を用い、被験物質としては疲労に効果がある食品成分であるデルフィニジン(植物由来の色素でアントシアニジンの一種)を用いた。デルフィニジンに対する陰性対照としては水を用いた。
C57BL/6J マウス(雄、12 週齢)に対し、水又はデルフィニジンを2日に1回、1週間にわたって強制投与した。デルフィニジンは水に溶解したものを0.5 mg/250 mL/dayの量で用いた。投与は経口投与により行った。その後、逃避不可能なストレス刺激を負荷し、廃用性筋萎縮を惹起するための尾懸垂試験を開始した(精神的因子及び運動的因子を除く因子による疲労状態及び/又はストレス状態)。
試料調製、ハイブリダイゼーション、検出は以下のとおりに行った。
上記の尾懸垂試験の開始から10 日後、マウスより各筋肉を採取した。マウスから採取した各筋肉のうち、大腿四頭筋からRNeasy Mini Kitキット(QIAGEN社製)を用いてTotal RNAを調製した。Message Amp II-Biotin Enhancedキット(アプライドバイオシステムズ社製)を用い、添付のプロトコールに従ってTotal RNA 1 mg から aRNAの調製を行った。aRNA 5μgをプラスチックチューブに入れ、Message AmpII-Biotin Enhancedキット(アプライドバイオシステムズ社製)付属の5x Array Fragmentation Bufferを4μl添加し、20μlにメスアップしてよく混合した後、94℃で7.5分間加熱して断片化を行った。断片化後の溶液 20μlに、18μlの1M Tris-HCl溶液(インビトロジェン社製)、18μlの1M NaCl溶液(ナカライテスク社製)及び15μlの0.5% Tween 20溶液をそれぞれ混合し、Nuclease-free waterで150μlにメスアップして、検体液を調製した。
調製した検体液に、核酸マイクロアレイ(三菱レイヨン株式会社製DNAチップ)を浸漬し、65℃で16時間ハイブリダイゼーション反応を行った。当該核酸マイクロアレイは、疲労及び/又はストレス関連遺伝子並びにハウスキーピング遺伝子に対するオリゴヌクレオチドプローブ(表2に示す核酸断片(配列番号1〜213))が固定されたもの(Lot No. 09011-03-001)である。
当該アレイからハイブリダイゼーションに用いた検体液を除去した後、当該アレイを65℃の0.12M TNT溶液(0.12M Tris-HCl、0.12M NaCl、0.5% Tween 20溶液)中に浸漬し(20分間×2回)、次いで、65℃に温めた0.12M TN溶液(0.12M Tris-HCl、0.12M NaCl)に10分間浸漬して、洗浄した。核酸マイクロアレイにおけるシグナルの検出は、DNAチップ検出装置(横河電機製:MB-M3A、レーザー波長:633nm)を用い、Cy5の蛍光強度を測定した(露光時間:0.1秒, 1秒, 4秒, 40秒)。なお、結果はバックグランドを減算後、β-actinの値を用いて補正した。
表2
この結果から、ストレス及び筋萎縮を惹起した場合において各遺伝子(SOD1、cat(カタラーゼ)、Gpx4、NOX4、Rac1、MYC、lcam1、Thbs1、TSC1、mTOR、CYP2E1、Gsr、Gsta3、Gstm3、Gsto1、Efna1、gp130、AdipoR1、capn2、FN1、Prdm16、Cbl-b、Dmd、Dag1)の発現量の増加が確認され、被験生物におけるストレス状態及び疲労状態を測定(評価)することができることがわかる。またデルフィニジンを投与した場合には、筋萎縮の場合の各遺伝子の発現量の増加が抑制されており、この方法により被験生物における疲労に対する被験物質の抑制効果又は回復効果を評価することができることがわかる。
従って、本発明の方法により、被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態を評価することができることが示された。また、被験生物における疲労状態及び/又はストレス状態に対する被験物質の抑制効果又は回復効果を客観的に評価することができることが示された。
Claims (10)
- 被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4 - 被験生物の精神的な疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Chga、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Ccr2、AAO、COX、LOX、PHOX、POX - 被験生物の運動による疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Irs1、AAO、COX、LOX、PHOX、POX - 被験生物の精神的因子又は運動的因子を除く因子による疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4 - 細胞の疲労状態及び/又はストレス状態を評価する方法であって、前記細胞から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、対照と比較することを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Ckm、IL6、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eEF2、Keap1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、Irs1、AAO、COX、LOX、PHOX、POX - 被験生物の疲労状態及び/又はストレス状態に対する被験物質の抑制効果又は回復効果を評価する方法であって、被験物質が接触、摂取又は投与された被験生物から採取された試料から、下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子を検出し、得られた検出結果を、前記被験物質の抑制効果又は回復効果と関連づけることを特徴とする前記方法。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4 - 被験生物が動物である、請求項1〜4及び6のいずれか1項に記載の方法。
- 被験生物が細胞である、請求項1〜4及び6のいずれか1項に記載の方法。
- 下記の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子のDNA又はmRNAに対し、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが搭載されたマイクロアレイ。
<遺伝子群>
Chga、Ckm、IL6、Ldha、Ldhb、Ldhc、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Sod1、Sod2、Sod3、cat、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、COX2、SOX、AO、Shc1、Romo1、Cyba、Ncf4、Ncf1、Ncf2、NOX1、NOX3、NOX4、Efcab5 、Rac1、Xdh、F2、SELP、EGR1、FOS、CCL2、JUN、Ccl1、MYC、ITGB1BP3、Ptpn1、fasl、IL1a、IL1b、IL2、IL2ra、Csf1、Csf2、Csf3、Sele、Icam1、Nos2、Txn1、Txn2、Txnrd1、Mt1、Mt2、Mt3、Mt4、Hmox1、Hmox2、EDN1、ITGB3、PDGF-B、Thbs1、VEGFA、NOS3、Atf2、TSC1、TSC2、Rheb、mTOR、IGF1、IGF2、IGFBP4、eIF2a、eIF4E、eEF2、Keap1、CYP1A1、CYP1A2、Cyp2c29(CYP2C)、CYP2E1、Cyp2d22(CYP2D6)、Cyp2a5(CYP2A6)、Cyp2b10 (CYP1B6)、Cyp3a11(CYP3A4)、Cyp3a41aX、Cyp3a44、Cyp3a16(CYP3A7)、Cyp4f18(CYP4F3)、SULT1A1、Sult1c1 (SULT1A2)、SULT1B1、SULT1C2、SULT1E1、SULT2A1、Sult2b1、SULT4A1、Kl、Gsr、Gsta1、Gsta2、Gsta3、Gsta4、Gstk1、Gstm1、Gstm2、Gstm3、Gstm4、Gstm5、Gstm6、Gsto1、Gsto2、Gstp1、Gstt1、Gstt2、Gstt3、Gstz1、Sgk1、Gclc、Ggt1、HIF1alpha、 Ybx1、Efna1、Efnb2、Ddit4、IL10、Il6ra、IL6st、Il1rn、Socs1、Socs2、Socs3、Cish、Adipoq、AdipoR1、AdipoR2、ifna1、ifna2、ifna4、ifna5、ifna6、ifna7、ifna9、ifna11、ifna12、ifna13、ifna14、Mapk14、Slc6a4、Capn2、Cast、FABP4、Hspa1a、Hspa1b、Hspa8、Hspd1、Hspb2、Hspa9、Ifng、FN1、ITGB1、ITGB5、LAMA4、LAMC1、Adrb1、Adrb2、Adrb3、Itgam、Itgb2、Tnf、Prlr、CD83、CD69、TNFAIP3、DUSP2、Eed1g、Tnnt3、Tnni3、Fbxo32、Eif3f、Prdm16、Cblb、Irs1、Ccr2、Dmd、Drp2、Dag1、Sgca、Sgcb、Sgcd、Sgce、Sgcg、Sspn、Pde5a、Trim63、AAO、COX、LOX、PHOX、POX、CYP3A3、CYP7A、SULT1A3、SULT1C4 - 配列番号1〜213で示される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドプローブが搭載されたマイクロアレイ。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012011890A JP2013150558A (ja) | 2012-01-24 | 2012-01-24 | 疲労状態及びストレス状態の評価方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012011890A JP2013150558A (ja) | 2012-01-24 | 2012-01-24 | 疲労状態及びストレス状態の評価方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013150558A true JP2013150558A (ja) | 2013-08-08 |
Family
ID=49047534
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012011890A Pending JP2013150558A (ja) | 2012-01-24 | 2012-01-24 | 疲労状態及びストレス状態の評価方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2013150558A (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016031581A1 (ja) * | 2014-08-27 | 2016-03-03 | 株式会社ウイルス医科学研究所 | 疲労に関与する因子及びその利用 |
KR20160042703A (ko) * | 2014-10-10 | 2016-04-20 | 서울대학교산학협력단 | 운동 스트레스 진단용 조성물 및 이의 용도 |
JPWO2017170572A1 (ja) * | 2016-03-28 | 2019-02-07 | 国立大学法人大阪大学 | ストレスバイオマーカー |
JP2021532827A (ja) * | 2018-07-27 | 2021-12-02 | アドミニストレシオン ジェネラル デ ラ コムニダッド アウトノマ デ エウスカディ | 虚弱性の診断および/または予測のためのバイオマーカー |
KR20220163624A (ko) * | 2021-06-03 | 2022-12-12 | 서울대학교산학협력단 | 혈중 젖산 수준 예측용 조성물 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006000015A (ja) * | 2004-06-15 | 2006-01-05 | Kazuhito Rokutan | ストレスの評価方法 |
JP2008054590A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-03-13 | Hitachi High-Technologies Corp | 運動ストレス状態の評価方法 |
JP2009247309A (ja) * | 2008-04-09 | 2009-10-29 | Chiba Univ | シスプラチン耐性遺伝子診断方法及びシスプラチン治療効果遺伝子診断キット |
JP2011125326A (ja) * | 2009-12-15 | 2011-06-30 | Dna Chip Research Inc | 運動疲労状態を評価する方法及び評価用キット、並びに物質が有する運動疲労予防回復効果を評価する方法 |
WO2011099514A1 (ja) * | 2010-02-10 | 2011-08-18 | 日環科学株式会社 | 好熱性微生物を用いた混合物、溶解液、及び医薬品 |
WO2011108487A1 (ja) * | 2010-03-01 | 2011-09-09 | 国立大学法人九州大学 | 筋萎縮阻害剤 |
-
2012
- 2012-01-24 JP JP2012011890A patent/JP2013150558A/ja active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006000015A (ja) * | 2004-06-15 | 2006-01-05 | Kazuhito Rokutan | ストレスの評価方法 |
JP2008054590A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-03-13 | Hitachi High-Technologies Corp | 運動ストレス状態の評価方法 |
JP2009247309A (ja) * | 2008-04-09 | 2009-10-29 | Chiba Univ | シスプラチン耐性遺伝子診断方法及びシスプラチン治療効果遺伝子診断キット |
JP2011125326A (ja) * | 2009-12-15 | 2011-06-30 | Dna Chip Research Inc | 運動疲労状態を評価する方法及び評価用キット、並びに物質が有する運動疲労予防回復効果を評価する方法 |
WO2011099514A1 (ja) * | 2010-02-10 | 2011-08-18 | 日環科学株式会社 | 好熱性微生物を用いた混合物、溶解液、及び医薬品 |
WO2011108487A1 (ja) * | 2010-03-01 | 2011-09-09 | 国立大学法人九州大学 | 筋萎縮阻害剤 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CELL. MOL. NEUROBIOL., 2012, 32(5), PP.795-800 (EPUB 2011 DEC 25), JPN6015046792, ISSN: 0003200295 * |
EXERC. IMMUNOL. REV., 2005, 11, PP.86-96, JPN6015046791, ISSN: 0003200294 * |
NEUROSCI. RES., 2008, 62(3), PP.155-159, JPN6015046789, ISSN: 0003200293 * |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016031581A1 (ja) * | 2014-08-27 | 2016-03-03 | 株式会社ウイルス医科学研究所 | 疲労に関与する因子及びその利用 |
JPWO2016031581A1 (ja) * | 2014-08-27 | 2017-06-08 | 株式会社ウイルス医科学研究所 | 疲労に関与する因子及びその利用 |
JP2020058355A (ja) * | 2014-08-27 | 2020-04-16 | 株式会社ウイルス医科学研究所 | 疲労に関与する因子及びその利用 |
JP7033113B2 (ja) | 2014-08-27 | 2022-03-09 | 株式会社ウイルス医科学研究所 | 疲労に関与する因子及びその利用 |
KR20160042703A (ko) * | 2014-10-10 | 2016-04-20 | 서울대학교산학협력단 | 운동 스트레스 진단용 조성물 및 이의 용도 |
KR101643353B1 (ko) * | 2014-10-10 | 2016-07-27 | 서울대학교산학협력단 | 운동 스트레스 진단용 조성물 및 이의 용도 |
JPWO2017170572A1 (ja) * | 2016-03-28 | 2019-02-07 | 国立大学法人大阪大学 | ストレスバイオマーカー |
JP2021532827A (ja) * | 2018-07-27 | 2021-12-02 | アドミニストレシオン ジェネラル デ ラ コムニダッド アウトノマ デ エウスカディ | 虚弱性の診断および/または予測のためのバイオマーカー |
JP7336517B2 (ja) | 2018-07-27 | 2023-08-31 | アドミニストレシオン ジェネラル デ ラ コムニダッド アウトノマ デ エウスカディ | 虚弱性の診断および/または予測のためのバイオマーカー |
KR20220163624A (ko) * | 2021-06-03 | 2022-12-12 | 서울대학교산학협력단 | 혈중 젖산 수준 예측용 조성물 |
KR102529421B1 (ko) | 2021-06-03 | 2023-05-08 | 서울대학교산학협력단 | 혈중 젖산 수준 예측용 조성물 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Gurău et al. | Anti-senescence compounds: a potential nutraceutical approach to healthy aging | |
EP3231437B1 (en) | Aging inhibitor | |
US9730883B2 (en) | Prophylactic or therapeutic agent for oral diseases | |
CN105142632A (zh) | 通过投予尿石素或其前体增强自噬或增加寿命 | |
US20080279786A1 (en) | Method for Extending Lifespan Delaying the Onset of Age-Related Disease | |
JP2013150558A (ja) | 疲労状態及びストレス状態の評価方法 | |
CN102300578A (zh) | 用于改变健康、安康和寿命的方法和组合物 | |
BRPI0611493B1 (pt) | Lactobacilos probióticos felinos | |
Munir et al. | Dietary arginine stimulates humoral and cell-mediated immunity in chickens vaccinated and challenged against hydropericardium syndrome virus | |
CN111394276B (zh) | 一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌 | |
KR101993009B1 (ko) | 노화의 효과에 대항하기 위한 경구 제제 | |
JP2017520553A (ja) | 加齢関連症状及び疾患を治療するためのケト酪酸化合物ならびに組成物 | |
Gureev et al. | Long-term mildronate treatment increased Proteobacteria level in gut microbiome, and caused behavioral deviations and transcriptome change in liver, heart and brain of healthy mice | |
CN105943530B (zh) | 铁死亡抑制剂在制备治疗铁过载疾病的药物中的应用 | |
CN111084769A (zh) | 天冬氨酸在制备防治非酒精性脂肪肝的药物中的应用 | |
JP2016220695A (ja) | 標的遺伝子の発現変化による食品機能成分及び医薬品感受性評価方法 | |
JP6488504B2 (ja) | 褐色脂肪細胞分化誘導剤及びその用途 | |
Huang et al. | Phyllanthus emblica L. extract alleviates leptin resistance and lipid accumulation by inhibiting methylglyoxal production | |
JP2017052747A (ja) | ウロプラキン発現促進剤 | |
JP2007131603A (ja) | L−カルニチン合成系酵素遺伝子の転写促進用組成物 | |
KR20120117116A (ko) | 발효홍삼 추출물을 함유하는 피부세포 사멸방지용 화장료 조성물 | |
TW202200160A (zh) | 含有nr及/或nmn與芝麻素類之組成物 | |
Liu et al. | Acer truncatum leaves extract modulates gut microbiota, improves antioxidant capacity, and alleviates lipopolysaccharide-induced inflammation in broilers | |
Arabmoazzen et al. | Evaluation of the effects of metformin as adenosine monophosphate-activated protein kinase activator on spatial learning and memory in a rat model of multiple sclerosis disease | |
Pattanayak et al. | Study of growth and biochemical alteration in Clarias batrachus due to cadmium (Cd) toxicity effect |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20141212 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141215 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20151124 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151228 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160517 |