CN102836698B - 用于dna和rna分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法，制得的核酸吸附材料由以下原料按重量百分比制成；纸纤维：3%～15%，硅粉：3%～20%，羧甲基纤维素：5%～15%，余量为去离子水，原料的重量百分比总和为100％；首先将配方中的原料加热溶解形成混合物，然后用电动搅拌器进行匀浆后倒入直径为4cm的六孔模具中；放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。制得的核酸吸附材料做成直径为0.7cm的圆形纸片，放入核酸吸附离心套管中作为核酸吸附介质，在特定溶液中能特异地吸附DNA或RNA，从而降低了蛋白质和其他杂质的污染，提高了DNA或RNA的纯度和产量，避免使用有机溶剂提取DNA或RNA时所对人体引起的毒副作用。

Description

用于DNA和RNA分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，涉及核酸DNA或RNA分离纯化及回收的一种核酸吸附材料的制备，具体涉及一种对动物、植物、微生物的组织及细胞中的DNA或RNA特异吸附的核酸吸附材料的制备方法，采用该吸附材料能简单、快速分离出超纯的DNA或RNA。
背景技术
目前，国内外提取动物、植物、微生物的组织及细胞中的DNA或RNA多采用有机溶剂抽提方法。该方法操作繁琐、耗时长、不易被掌握，提取的核酸DNA或RNA易受蛋白质及杂质污染，且纯度和产量不高，而且有机溶剂有害人体健康。
发明内容
针对上述方法存在的不足，本发明目的在于，用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法。
为了实现上述任务，本发明采用如下的技术方案：
一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法，其特征在于，按以下步骤操作：
1）原料组成及重量百分比：
纸纤维：3%～15%，硅粉：3%～20%，羧甲基纤维素：5%～15%，余量为去离子水，原料的重量百分比总和为100％；
2）将配方中的原料加热溶解形成混合物，然后用电动搅拌器进行匀浆；
3）将得到的匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中；放置60℃烤箱中烘烤30min或常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。
本发明的方法制备的核酸吸附材料，在特定的溶液中能特异性吸附DNA或RNA，从而使提取DNA或RNA操作方法简单快速，且纯度高、产量高，避免使用有机溶剂。可用于分子生物学研究领域中的动物、植物、微生物的组织及细胞中DNA或RNA的分离、纯化和回收。
附图说明
图1是本发明制备核酸吸附材料的流程图；
图2是制成的核酸吸附纸纤维材料图片；
下面结合附图和实施例进一步详细说明。
具体实施方式
以下是发明人给出的实施例，需要说明的是，这些实施例是较优的例子，本发明不限于这些实施例。
实施例1：
参见图1，本实施例的操作步骤为：
1）在三角瓶中按重量取优质纸纤维：10%、硅粉：15%，羧甲基纤维素：15%，用去离子水补至总体积500ml。
2）将三角瓶放入水浴中，加热，直至上述混合物完全溶解。
3）用电动搅拌器进行匀浆。
4）将匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中，将模具放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。
5）将制备好的核酸吸附材料做成直径0.7cm圆形纸片（如图2所示）。
实施例2：
参见图1，本实施例的操作步骤为：
1）在三角瓶中按重量取优质纸纤维：5%、硅粉：10%，羧甲基纤维素：10%，用去离子水补至总体积500ml。
2）将三角瓶放入水浴中，加热，直至上述混合物完全溶解。
3）用电动搅拌器进行匀浆。
4）将匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中，将模具放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。
5）将制备好的吸附材料做成直径0.7cm圆形纸片（如图2所示）。
实验例1：微量血液RNA核酸吸附快速分离
采用上述实施例制备的核酸吸附材料，放入核酸吸附离心套管的内层中作为核酸吸附介质，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。
RNA提取试剂由红细胞裂解溶液，离解溶液，清除溶液，洗涤液溶和分离溶液组成。
所述的RNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
红细胞裂解溶液：0.01-1mol/L的NH4Cl，0.0001-0.3mol/L的KHCO3，0.00001-1mol/L EDTA余量为去离子水；
离解溶液：0.1-10mol/L的胍盐，0.005-0.5mol/L的C6H5Na3O7，0.0001-1mol/L的C15H28NaNO3,，0.01-2mol/L的C2H6OS，0.1-10mol/L的NaAc，余量为去离子水；
清除溶液：0.01-20mol/L的胍盐，0.001-0.60mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水（2:1，v/v）的混合溶液；
洗涤溶液：0.001-2mol/L的NaCl，0.0001-2mol/L的C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水（2:1，v/v）的混合溶液；
操作步骤是：
1、取0.5-1ml血液，加入3倍体积红细胞裂解溶液混匀，室温放置5min。
2、4000r离心1min弃去上清。
3、沉淀中加入1ml离解溶液混匀，室温放置5min。
4、将液体吸入核酸吸附管中室温放置5min。
5.12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
6、加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
7、加洗涤溶液，12000r,离心30s，弃去收集管中的废液。
8、将吸附管插入一干净的离心管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心1min，即获得纯化的RNA。
实验例2：组织细胞基因组DNA的核酸快速分离
本实施例与实验实施例1不同的是，选用的DNA核酸提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液和分离溶液组成。
DNA核酸提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
悬浮溶液：0.01-0.2mol/L的C4H11NO3，0.001-0.5mol/L的EDTA，0.0001-0.9mol/L的C15H28NaNO3，余量为去离子水；
离解溶液：0.5-10mol/L是胍盐，余量为去离子水；
清除溶液：0.1-10mol/L的胍盐，0.01-4mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水（2:1，v/v）的混合溶液；
洗涤溶液：0.01-8mol/L的NaCl，0.001-3mol/L的C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水（2:1，v/v）的混合溶液；，
分离溶液：0.01-10mol/L的EDTA，0.001-0.6mol/L的C4H11NO3，余量为去离子水。
操作步骤是：
1、收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮。
2、加离解溶液混匀，室温5min。
3、将液体吸入吸附管中，12000r离心30s,弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
4、加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
5、加洗涤溶液，12000r，离心30s，弃去收集管中的废液。
6、将吸附管插入一干净的收集管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心1min，即获得纯化的DNA。

Claims (1)

1.一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的使用方法，其特征在于，方法包括：
将核酸吸附材料放入核酸吸附离心套管的内层中作为核酸吸附介质，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中；
RNA的分离纯化回收包括：
(1)取0.5-1ml血液，加入3倍体积红细胞裂解溶液混匀，室温放置5min；
(2)4000r离心1min弃去上清；
(3)沉淀中加入1ml离解溶液混匀，室温放置5min；
(4)将液体吸入核酸吸附管中室温放置5min；
(5)12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中；
(6)加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中；
(7)加洗涤溶液，12000r,离心30s，弃去收集管中的废液；
(8)将吸附管插入一干净的离心管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心1min，即获得纯化的RNA；
所述红细胞裂解溶液：0.01-1mol/L的NH4Cl，0.0001-0.3mol/L的KHCO3，0.00001-1mol/L EDTA，余量为去离子水；离解溶液：0.1-10mol/L的胍盐，0.005-0.5mol/L的C6H5Na3O7，0.0001-1mol/L的C15H28NaNO3，0.01-2mol/L的C2H6OS，0.1-10mol/L的NaAc，余量为去离子水；清除溶液：0.01-20mol/L的胍盐，0.001-0.60mol/L的C4H11NO3,余量为体积比为2:1的乙醇和去离子水的混合溶液；洗涤溶液：0.001-2mol/L的NaCl，0.0001-2mol/L的C4H11NO3，余量为体积比为2:1的乙醇和去离子水的混合溶液；
DNA的分离纯化回收包括：
(1)收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮；
(2)加离解溶液混匀，室温5min；
(3)将液体吸入吸附管中，12000r离心30s,弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中；
(4)加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中；
(5)加洗涤溶液，12000r，离心30s，弃去收集管中的废液；
(6)将吸附管插入一干净的收集管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心1min，即获得纯化的DNA；
所述悬浮溶液：0.01-0.2mol/L的C4H11NO3，0.001-0.5mol/L的EDTA，0.0001-0.9mol/L的C15H28NaNO3，余量为去离子水；离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；清除溶液：0.1-10mol/L的胍盐，0.01-4mol/L的C4H11NO3,余量为体积比为2:1的乙醇和去离子水的混合溶液；洗涤溶液：0.01-8mol/L的NaCl，0.001-3mol/L的C4H11NO3，余量为体积比为2:1的乙醇和去离子水的混合溶液；分离溶液：0.01-10mol/L的EDTA，0.001-0.6mol/L的C4H11NO3，余量为去离子水；
所述核酸吸附材料按以下步骤操作：
(1)原料组成及重量百分比：
纸纤维：3％～15％，硅粉：3％～20％，羧甲基纤维素：5％～15％，余量为去离子水，原料的重量百分比总和为100％；
(2)将配方中的原料加热溶解形成混合物，然后用电动搅拌器进行匀浆；
(3)将得到的匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中；放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，得到核酸吸附材料。
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