CN102836698A - 用于dna和rna分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法,制得的核酸吸附材料由以下原料按重量百分比制成;纸纤维:3%~15%,硅粉:3%~20%,羧甲基纤维素:5%~15%,余量为去离子水,原料的重量百分比总和为100%;首先将配方中的原料加热溶解形成混合物,然后用电动搅拌器进行匀浆后倒入直径为4cm的六孔模具中;放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥,即可得到核酸吸附材料。制得的核酸吸附材料做成直径为0.7cm的圆形纸片,放入核酸吸附离心套管中作为核酸吸附介质,在特定溶液中能特异地吸附DNA或RNA,从而降低了蛋白质和其他杂质的污染,提高了DNA或RNA的纯度和产量,避免使用有机溶剂提取DNA或RNA时所对人体引起的毒副作用。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域,涉及核酸DNA或RNA分离纯化及回收的一种核酸吸附材料的制备,具体涉及一种对动物、植物、微生物的组织及细胞中的DNA或RNA特异吸附的核酸吸附材料的制备方法,采用该吸附材料能简单、快速分离出超纯的DNA或RNA。
背景技术
目前,国内外提取动物、植物、微生物的组织及细胞中的DNA或RNA多采用有机溶剂抽提方法。该方法操作繁琐、耗时长、不易被掌握,提取的核酸DNA或RNA易受蛋白质及杂质污染,且纯度和产量不高,而且有机溶剂有害人体健康。
发明内容
针对上述方法存在的不足,本发明目的在于,用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法。
为了实现上述任务,本发明采用如下的技术方案:
一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法,其特征在于,按以下步骤操作:
1)原料组成及重量百分比:
纸纤维:3%~15%,硅粉:3%~20%,羧甲基纤维素:5%~15%,余量为去离子水,原料的重量百分比总和为100%;
2)将配方中的原料加热溶解形成混合物,然后用电动搅拌器进行匀浆;
3)将得到的匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中;放置60℃烤箱中烘烤30min或常温下自然干燥,即可得到核酸吸附材料。
本发明的方法制备的核酸吸附材料,在特定的溶液中能特异性吸附DNA或RNA,从而使提取DNA或RNA操作方法简单快速,且纯度高、产量高,避免使用有机溶剂。可用于分子生物学研究领域中的动物、植物、微生物的组织及细胞中DNA或RNA的分离、纯化和回收。
附图说明
图1是本发明制备核酸吸附材料的流程图;
图2是制成的核酸吸附纸纤维材料图片;
下面结合附图和实施例进一步详细说明。
具体实施方式
以下是发明人给出的实施例,需要说明的是,这些实施例是较优的例子,本发明不限于这些实施例。
实施例1:
参见图1,本实施例的操作步骤为:
1)在三角瓶中按重量取优质纸纤维:10%、硅粉:15%,羧甲基纤维素:15%,用去离子水补至总体积500ml。
2)将三角瓶放入水浴中,加热,直至上述混合物完全溶解。
3)用电动搅拌器进行匀浆。
4)将匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中,将模具放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥,即可得到核酸吸附材料。
5)将制备好的核酸吸附材料做成直径0.7cm圆形纸片(如图2所示)。
实施例2:
参见图1,本实施例的操作步骤为:
1)在三角瓶中按重量取优质纸纤维:5%、硅粉:10%,羧甲基纤维素:10%,用去离子水补至总体积500ml。
2)将三角瓶放入水浴中,加热,直至上述混合物完全溶解。
3)用电动搅拌器进行匀浆。
4)将匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中,将模具放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥,即可得到核酸吸附材料。
5)将制备好的吸附材料做成直径0.7cm圆形纸片(如图2所示)。
实验例1:微量血液RNA核酸吸附快速分离
采用上述实施例制备的核酸吸附材料,放入核酸吸附离心套管的内层中作为核酸吸附介质,外层套管为液体收集管,使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。
RNA提取试剂由红细胞裂解溶液,离解溶液,清除溶液,洗涤液溶和分离溶液组成。
所述的RNA提取试剂各组分及物质浓度(摩尔/升)组成按终浓度体积为:
红细胞裂解溶液:0.01-1mol/L的NH4Cl,0.0001-0.3mol/L的KHCO3,0.00001-1mol/L EDTA余量为去离子水;
离解溶液:0.1-10mol/L的胍盐,0.005-0.5mol/L的C6H5Na3O7,0.0001-1mol/L的C15H28NaNO3,,0.01-2mol/L的C2H6OS,0.1-10mol/L的NaAc,余量为去离子水;
清除溶液:0.01-20mol/L的胍盐,0.001-0.60mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水(2:1,v/v)的混合溶液;
洗涤溶液:0.001-2mol/L的NaCl,0.0001-2mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水(2:1,v/v)的混合溶液;
操作步骤是:
1、取0.5-1ml血液,加入3倍体积红细胞裂解溶液混匀,室温放置5min。
2、4000r离心1min弃去上清。
3、沉淀中加入1ml离解溶液混匀,室温放置5min。
4、将液体吸入核酸吸附管中室温放置5min。
5.12000r离心30s,弃去收集管中的废液,将吸附管插回收集管中。
6、加清除溶液,12000r离心30s,弃去收集管中的废液,将吸附管插回收集管中。
7、加洗涤溶液,12000r,离心30s,弃去收集管中的废液。
8、将吸附管插入一干净的离心管中,加分离溶液室温放置2min后,12000r离心1min,即获得纯化的RNA。
实验例2:组织细胞基因组DNA的核酸快速分离
本实施例与实验实施例1不同的是,选用的DNA核酸提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液和分离溶液组成。
DNA核酸提取试剂各组分及物质浓度(摩尔/升)组成按终浓度体积为:
悬浮溶液:0.01-0.2mol/L的C4H11NO3,0.001-0.5mol/L的EDTA,0.0001-0.9mol/L的C15H28NaNO3,余量为去离子水;
离解溶液:0.5-10mol/L是胍盐,余量为去离子水;
清除溶液:0.1-10mol/L的胍盐,0.01-4mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水(2:1,v/v)的混合溶液;
洗涤溶液:0.01-8mol/L的NaCl,0.001-3mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水(2:1,v/v)的混合溶液;,
分离溶液:0.01-10mol/L的EDTA,0.001-0.6mol/L的C4H11NO3,余量为去离子水。
操作步骤是:
1、收集经匀浆后的组织或消化后的细胞,加悬浮溶液悬浮。
2、加离解溶液混匀,室温5min。
3、将液体吸入吸附管中,12000r离心30s,弃去收集管中的废液,将吸附管插回收集管中。
4、加清除溶液,12000r离心30s,弃去收集管中的废液,将吸附管插回收集管中。
5、加洗涤溶液,12000r,离心30s,弃去收集管中的废液。
6、将吸附管插入一干净的收集管中,加分离溶液室温放置2min后,12000r离心1min,即获得纯化的DNA。
Claims (1)
1.一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法,其特征在于,按以下步骤操作:
1)原料组成及重量百分比:
纸纤维:3%~15%,硅粉:3%~20%,羧甲基纤维素:5%~15%,余量为去离子水,原料的重量百分比总和为100%;
2)将配方中的原料加热溶解形成混合物,然后用电动搅拌器进行匀浆;
3)将得到的匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中;放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥,即可得到核酸吸附材料。
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