CN104946698A - 一种毒藜碱的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种毒藜碱的制备方法。其制备步骤为：原材料的处理→酶解→乙醇超声提取→纯化→精制，冷冻干燥即得毒藜碱。本方法高效、快速、适合高纯度毒藜碱的生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种毒藜碱的制备方法，属于生物技术领域。
背景技术
毒藜碱，英文名称：anabasine，又称新烟碱；CAS号：13078-04-1；分子式C10H14N2；分子量：162.23；存在于无叶毒藜(An-abasis apylla)中。沸点276℃；溶于水、乙醇、乙醚和苯，密度(20℃)1.0445g/cm3，折射率1.5430，旋光度-82.20°，可作杀虫剂。分子结构式如下：
高速逆流色谱技术是一种不用任何同态载体的液、液色谱技术，其原理是基于组分在旋转螺旋管内的相对移动而互不混溶的两相溶剂间分布不同而分离，其分离效率和速度可以与HPLC相媲美。HSCCC分离效率高，产品纯度高，不存在载体对样品的吸附和污染，制备量大和溶剂消耗少，操作简单，能从极复杂的混合物中分离出特定的组分。被广泛应用天然产物分离制备中。
目前，国内很少见毒藜碱提取方法的相关专利报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种毒藜碱的提取、纯化方法，此法操作简单，所得产品纯度高。
为实现上述目的，一种毒藜碱的制备方法通过以下技术方案来实现：
1）原材料的处理：取干燥的毒藜粉碎，过20-80目筛；
2）酶解：称取一定量的粗粉，加入重量体积比为1：2~5、70~80%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0.1%~0.5%的生物酶在pH值4~5，温度为45~50℃的条件下浸泡酶解1~3h；
3）超声提取：酶解结束，将步骤（2）中的酶解物进行超声提取1~2h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取1~2次；
4）纯化：收集提取液加入超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，收集浓缩液，依次加入浓缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，收集下层，合并萃取液；
5）精制：萃取液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得毒藜碱。
步骤2）中所述的生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物。
步骤3）中所述超声提取的频率为20~40KHz，温度为50~70℃。
步骤4）中所述超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量100-500的中空纤维素膜。
步骤5）中所述的高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-水溶剂系统，混合比例2-6：6-10：5-8，取下相做固定相，上相做流动相。
本发明具有的优点为：1、采用了生物酶酶解辅助超声提取的提取方法，提取效率高，溶剂用量少，对环境污染小；2、采用了高速逆流色谱法纯化，方法简便易操作，溶剂用量小，样品无损失，制备量大，可连续制备，而且无污染。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。
实施例1：
取干燥的毒藜粉碎，过20目筛；称取一定量的粗粉，加入重量体积比为1：2、70%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0.1%%的果胶酶在pH值4，温度为45℃的条件下浸泡酶解1h；酶解结束，将所得酶解物在频率为20KHz，温度为50℃的条件下进行超声提取1h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取1次；收集提取液加入截留分子量为2000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量为100的中空纤维素纳滤膜浓缩，收集浓缩液，依次加入浓缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，收集下层，合并萃取液；萃取液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得毒藜碱。高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-水溶剂系统，混合比例2：6：5，取下相做固定相，上相做流动相。经HPLC检测，毒藜碱含量为95.2%。
实施例2：
取干燥的毒藜粉碎，过60目筛；称取一定量的粗粉，加入重量体积比为1：4、75%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0.3%的纤维素酶在pH值5，温度为45℃的条件下浸泡酶解2h；酶解结束，将所得酶解物在频率为30KHz、温度为60℃的条件下进行超声提取1.5h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取2次；收集提取液加入截留分子量为6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量为300的中空纤维素纳滤膜浓缩，收集浓缩液，依次加入浓缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，收集下层，合并萃取液；萃取液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得毒藜碱。高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-水溶剂系统，混合比例4：8：7，取下相做固定相，上相做流动相。经HPLC检测，毒藜碱含量为96.5%。
实施例3：
取干燥的毒藜粉碎，过80目筛；称取一定量的粗粉，加入重量体积比为1：5、80%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0.5%的半纤维素酶在pH值5，温度为50℃的条件下浸泡酶解3h；酶解结束，将所得酶解物在频率为40KHz，温度为70℃的条件下进行超声提取2h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取2次；收集提取液加入截留分子量为10000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量为500的中空纤维素纳滤膜浓缩，收集浓缩液，依次加入浓缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，收集下层，合并萃取液；萃取液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得毒藜碱。高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-水溶剂系统，混合比例6：10：8，取下相做固定相，上相做流动相。经HPLC检测，毒藜碱含量为95.9%。
Claims (5)
1.一种毒藜碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）原材料的处理：取干燥的毒藜粉碎，过20-80目筛；
2）酶解：称取一定量的粗粉，加入重量体积比为1：2~5、70~80%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0.1%~0.5%的生物酶在pH值4~5，温度为45~50℃的条件下浸泡酶解1~3h；
3）超声提取：酶解结束，将步骤（2）中的酶解物进行超声提取1~2h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取1~2次；
4）纯化：收集提取液加入超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，收集浓缩液，依次加入浓缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，收集下层，合并萃取液；
5）精制：萃取液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得毒藜碱。
2.根据权利要求1所述的一种毒藜碱的制备方法方法，其特征在于步骤2）中所述的生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物。
3.根据权利要求1所述的一种毒藜碱的制备方法，其特征在于步骤3）中所述超声提取的频率为20~40KHz，温度为50~70℃。
4.根据权利要求1所述的一种毒藜碱的制备方法，其特征在于步骤4）中所述超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量100-500的中空纤维素膜。
5.根据权利要求1所述的一种毒藜碱的制备方法，其特征在于步骤5）中所述的高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-水溶剂系统，混合比例2-6：6-10：5-8，取下相做固定相，上相做流动相。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN106719727A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-05-31 | 安徽东健化工科技有限公司 | 一种除虫剂 |
| CN108753863A (zh) * | 2018-06-14 | 2018-11-06 | 慎终（上海）生物科技有限公司 | 雷迪帕韦中间体的合成工艺 |
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2015
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Application publication date: 20150930 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |