CN102864139A - 一种用于组织细胞基因组dna的核酸吸附快速分离方法 - Google Patents

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饶国洲
李昂
苟建重
石建峰
魏红
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Abstract

本发明公开了一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成。本发明操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取基因组DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。

Description

一种用于组织细胞基因组DNA的核酸吸附快速分离方法
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域中组织细胞基因组DNA分离方法，具体涉及一种用于组织细胞基因组DNA分离试剂及核酸吸附离心套管，采用该核酸吸附分离方法，能快速分离出组织细胞基因组DNA，分离出的DNA产量和纯度高，无蛋白质及RNA污染。
背景技术
目前，国内外提取组织细胞中基因组DNA，利用蛋白酶消化后采用有机溶剂抽提的方法。该方法实验周期长、操作繁琐，提取的基因组DNA纯度和产量不高，常含有蛋白质和RNA的污染，直接影响下游实验工作。
发明内容
针对上实验方法存在的缺陷或不足，本发明的目的在于，提供一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，该方法能快速分离组织细胞中基因组DNA，其分离的DNA纯度和产量高、无蛋白质及RNA污染。
为了实现上述任务，本发明采用如下的技术解决方案：
一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是：
收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA；
所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C4H11NO3,0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C15H28NaNO3，余量为去离子水；
离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；
清除溶液：0.1-10mol/L胍盐，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水的混合溶液（2:1，v/v）；
洗涤溶液：0.01-8mol/L NaCl，0.001-3mol/L C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水的混合溶液（2:1，v/v）；
分离溶液：0.01-10mol/L EDTA，0.001-0.6mol/L C4H11NO3，余量为去离子水。
所述核酸吸附离心套管包括内层吸附管和外层收集管，其中，内层吸附管中含吸附介质层，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。
本发明的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取血液DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。
附图说明
图1是实验流程图
下面结合附图和实施例对发明进一步详细说明。
具体实施方式
按照本发明的技术方案，本发明的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸提取试剂和核酸吸附离心套管。其中，核酸提取试剂包含：悬浮溶液，离解溶液，清除溶液，洗涤溶液和分离溶液。
所述的核酸提取试剂中，离解溶液的作用是使基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA。
DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C4H11NO3,0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C15H28NaNO3，余量为去离子水；
离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；
清除溶液：0.1-10mol/L胍盐，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水的混合溶液（乙醇：去离子水=2:1，v/v）；
洗涤溶液：0.01-8mol/L NaCl，0.001-3mol/L C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水的混合溶液（乙醇：去离子水=2:1，v/v）；
分离溶液：0.01-10mol/L EDTA，0.001-0.6mol/L C4H11NO3，余量为去离子水。
核酸吸附材料为圆形纸片，核酸吸附离心套管包含内层吸附管和外层收集管，当每加一次试剂时需将内层吸附管插入到外层收集管中，经离心后弃去收集管中废液，再将吸附管插回收集管中，当最后加分离液时需将吸附管插入到一干净（新的）的收集管中，再经过离心获得纯化的DNA。
以下是发明人给出的具体实施例，操作流程参见图1所示：
1、收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，室温放置5min。
2、加离解溶液混匀，室温放置5min。
3、将液体吸入吸附管中，室温放置2min，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
4、加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
5、加洗涤溶液，12000r，离心30s，弃去收集管中的废液。
6、将吸附管插入一干净的收集管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心1min，获得超纯的DNA。

Claims (2)

1.一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是：
收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA；
所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C4H11NO3，0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C15H28NaNO3，余量为去离子水；
离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；
清除溶液：0.1-10mol/L胍盐，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水的混合溶液；
洗涤溶液：0.01-8mol/L NaCl，0.001-3mol/L C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水的混合溶液；
分离溶液：0.01-10mol/L EDTA，0.001-0.6mol/L C4H11NO3，余量为去离子水。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸吸附离心套管包括内层吸附管和外层收集管，其中，内层吸附管中含吸附介质层，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。
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