CN103243090A - 一种提取昆虫dna的方法 - Google Patents

Abstract

一种提取昆虫DNA的方法，该方法适用于小型昆虫在不破坏虫体的情况下提取其基因组DNA。包括以下步骤：（1）将待提取DNA的昆虫用70%乙醇洗涤，清洗昆虫表面携带的杂质，再用双蒸水洗涤3次，去除70%乙醇残留；（2）将昆虫放置在离心管中，加入昆虫3倍体积的STE溶液，使虫体完全浸在液面以下；（3）按照10%的比例加入蛋白酶K，混合均匀；（4）在56℃水浴中孵育1小时以上，收集上述溶液于新的离心管中，-20℃保存备用。该溶液中即含有昆虫的基因组DNA。该方法具有保持虫体完整，节约试剂，节约时间，工艺简化等特点。

Description

一种提取昆虫DNA的方法

技术领域

本发明属于实验技术领域，特别涉及DNA提取方法。

背景技术

昆虫的DNA是其重要的遗传物质，提取其DNA并进行研究为生命科学领域重要的研究内容，可用于DNA分类、多态性分析、基因工程等领域，因此提取DNA的数量和质量对于昆虫方面的研究具有重要意义。近年来发展起来的利用昆虫DNA进行其分子分类，可以对近缘类群、隐存种、残缺标本、雌虫等进行准确鉴定，是对传统分类的重要补充。

传统的DNA提取技术和方法均需要将标本的全部或部分研磨至没有明显的块状物质，再利用蛋白酶消化细胞膜，然后利用有机溶剂（氯仿、异戊醇和酚等）去除蛋白质、保留核酸，最后收集基因组DNA。以上方法的主要缺点如下：（1）研磨标本破坏了虫体，即可能浪费了珍稀标本又会使将来无从查对该标本；（2）在操作的过程中，需要使用氯仿、异戊醇和酚等有机溶剂，这不仅浪费试剂而且会对操作人员造成危害，还将污染环境；（3）操作粗放，去除蛋白质的过程中损失较多的DNA，对珍惜标本是严重的浪费，相对而言传统方法产率较低。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述缺点，从而提供一种具有耗时短、质量高等优点，且因可保证虫体的完整性，特别适用于小型昆虫基因组DNA的提取。

本发明是一种提取昆虫DNA的方法，包括以下步骤：

（1）将待提取DNA的昆虫用70%乙醇洗涤，清洗昆虫表面携带的杂质，再用双蒸水洗涤3次，去除70%乙醇残留；

（2）选取普通的离心管，放入整个昆虫，装入昆虫3倍体积的STE溶液，将昆虫浸在液面以下；再加入10%STE溶液体积的蛋白酶K，混合均匀；

（3）在56℃水浴中孵育1小时以上，获得处理过的溶液，溶液中即含有该昆虫的基因组DNA。

所述的STE溶液为：0.1 mol/L NaCl；10 mmol/L Tris.HCl pH 8.0；1 mmol/L EDTA pH 8.0。

本发明与现有技术相比，由以上技术方案可知，工艺简化，节约时间，减少了氯仿、异戊醇和酚等有机溶剂的使用量；同时减少了有机溶剂对环境的污染和操作人员的危害；不破坏标本即可以节约珍惜标本。

具体实施方式

一种提取昆虫DNA的方法，包括以下步骤：

（1）将待提取DNA的昆虫用70%乙醇洗涤，清洗昆虫表面携带的杂质，再用双蒸水洗涤3次，去除70%乙醇残留；

（2）选取普通的离心管，放入整个昆虫，装入昆虫3倍体积的STE溶液，将昆虫浸在液面以下；再加入10%STE溶液体积的蛋白酶K，混合均匀；

（3）在56℃水浴中孵育1小时以上，获得处理过的溶液，溶液中即含有该昆虫的基因组DNA。

所述的STE溶液为：0.1 mol/L NaCl；10 mmol/L Tris.HCl pH 8.0；1 mmol/L EDTA pH 8.0。

本发明与现有技术相比，由以上技术方案可知，工艺简化，节约时间，减少了氯仿、异丙醇和乙醇等有机溶剂的使用量；同时减少了有机溶剂对环境的污染和操作人员的危害；不破坏标本即可以节约珍惜标本。

Claims (2)

1.一种提取昆虫DNA的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（1）将待提取DNA的昆虫用70%乙醇洗涤，清洗昆虫表面携带的杂质，再用双蒸水洗涤3次，去除70%乙醇残留；

（2）选取普通的离心管，放入整个昆虫，装入昆虫3倍体积的STE溶液可将昆虫浸在液面以下；

（3）按照10%的比例加入蛋白酶K，混合均匀；

（4）在56℃水浴中孵育1小时以上，收集上述溶液于新的离心管中，-20℃保存备用，溶液中即含有该昆虫的基因组DNA。

2.如权利要求1所述的提取昆虫DNA的方法，其特征在于：所述的STE溶液为：0.1 mol/L NaCl；10 mmol/L Tris.HCl pH 8.0；1 mmol/L EDTA pH 8.0。