CN1221794A - 从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法 - Google Patents
从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1221794A CN1221794A CN 97125650 CN97125650A CN1221794A CN 1221794 A CN1221794 A CN 1221794A CN 97125650 CN97125650 CN 97125650 CN 97125650 A CN97125650 A CN 97125650A CN 1221794 A CN1221794 A CN 1221794A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- paraffin
- add
- dna
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法,该方法采用二甲苯脱蜡法或水浴脱蜡法,再提取核酸DNA进行基因PCR扩增,采用该方法能充分利用石蜡包埋的病理标本组织为能使肿瘤等疾病在基因水平上进行回顾性分析,做出了一个良好开端,并对进一步加强基础理论研究与临床的配合,深入探讨疾病的发生、演变及预后关系,正确评价临床治疗以及加深理解肿瘤生物学特性与临床表现的关系,都有着十分重要的现实意义。
Description
本发明涉及一种分子生物学特别是基因工程从石蜡包埋组织中提取核酸DNA进行基因PCR扩增的方法。
自PCR技术1985年在美国问世以来，被迅速广泛地应用于分子生物学领域，对于此项技术大都建立在(1)直接应用核酸DNA作模板进行基因PCR扩增；(2)直接裂解微生物(如细菌、病毒、衣原体等)提取核酸DNA进行基因PCR扩增；(3)将组织剪碎研磨，采用Saiki氏法提取核酸DNA再进行基因PCR扩增。而对石蜡包埋组织中如何脱蜡，将这些组织中的核酸高质量的分离纯化，最终应用于基因PCR扩增以作为对核酸结构、功能进一步分析有价值的研究材料，是目前急待解决的问题。本发明经过多年的试验、探索，研制出了一种从石蜡包埋组织中提取核酸DNA进行基因PCR扩增的方法。
本发明的目的在于，研制出从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法，该方法采用二甲苯脱蜡法或水浴脱蜡法，再提取核酸DNA进行基因PCR扩增，通过试验证明，不管用二甲苯8脱蜡法还是用水浴脱蜡法都可分离到大分子核酸DNA，基因PCR扩增效果也较好。由于石蜡包埋的病理标本能得到长期保存，因此本发明为能使肿瘤等疾病在基因水平上进行回顾性分析，做出了一个良好开端，该方法对进一步加强基础理论研究与临床的配合，深入探讨疾病的发生、演变及预后关系，正确评价临床治疗以及加深理解肿瘤生物学特性与临床表现的关系，都有着十分重要的现实意义。
本发明所述的从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法，该方法在如何脱蜡均可采用二甲苯脱蜡法或水浴脱蜡法，其中二甲苯脱蜡法是将石蜡包埋组织块切成薄片，加入二甲苯微微摇动，换液3次，时间为12小时，用浓度为100％、90％、75％、50％、25％的乙醇呈梯度水化，间隔30分钟浸洗一次，弃上清液，剪碎组织，加入含有十二烷基磺酸钠和蛋白酶配制的溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心，在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量后，加入等体积的双蒸水，经RNase37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶解；水浴脱蜡法是将石蜡包埋组织块切成薄片，加入生理盐水，置65-72℃水浴，待石蜡溶化后，冷却，夹去石蜡，重复5-10次，直至无石蜡为止，再将液体(含组织)倒入离心管中离心弃上清液，剪碎组织，加入含有十二烷基磺酸钠和蛋白酶配制的溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心，在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量后，加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶解。
实施例1：
将石蜡包埋组织块切成5-10μm厚的薄片，置于带盖的试剂瓶中，加入20ml二甲苯微微摇动，换液3次，总时间为12小时，用浓度为100％、90％、75％、50％、25％的乙醇呈梯度水化，每次20ml，间隔30分钟浸洗一次，弃上清液，剪碎组织，加入10ml含十二烷基磺酸钠和蛋白酶K溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠至0.3mol/l，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心15分钟，在500μl的TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量为430μg，加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，用200μl双蒸水溶解，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶解。
实施例2：
将石蜡包埋组织块切成5-10μm厚的薄片，置于一烧杯中，加入生理盐水50ml，置65-72℃水浴，待石蜡溶化后，取出烧杯冷却，夹去石蜡，重复5-10次，直至无石蜡为止。将液体倒入离心管中，离心弃上清液，剪碎组织，加入10μl十二烷基磺酸钠和蛋白酶K溶液，37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠至0.3mol/l，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心15分钟，在500μl的TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量为380μg，加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，用200μl双蒸水溶解，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶解。
Claims (2)
1、一种从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法，其特征在于，该方法采用二甲苯脱蜡法：首先将石蜡包埋组织块切成薄片，加入二甲苯微微摇动，换液3次，时间为12小时，用浓度为100％、90％、75％、50％、25％的乙醇呈梯度水化，间隔30分钟浸洗一次，弃上清液，剪碎组织，加入含有十二烷基磺酸钠和蛋白酶K配制的溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心，在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量后，加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶解，经电泳检测后，用基因PCR法进行扩增。
2、一种从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法，其特征在于，该方法采用水浴脱蜡法：首先将石蜡包埋组织块切成薄片，加入生理盐水，置65-72℃水浴，待石蜡溶化后，冷却，夹去石蜡，重复5-10次，直至无石蜡为止，再将液体(含组织)倒入离心管中离心，弃上清液，剪碎组织，加入含有十二烷基磺酸钠和蛋白酶配制的溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心，在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经分光光度计测其含量后，加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶液经电泳检测后，用基因PCR法进行扩增。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 97125650 CN1221794A (zh) | 1997-12-31 | 1997-12-31 | 从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 97125650 CN1221794A (zh) | 1997-12-31 | 1997-12-31 | 从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1221794A true CN1221794A (zh) | 1999-07-07 |
Family
ID=5177345
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 97125650 Pending CN1221794A (zh) | 1997-12-31 | 1997-12-31 | 从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1221794A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100366632C (zh) * | 2005-12-28 | 2008-02-06 | 南方医科大学 | 一种石蜡包埋组织提取蛋白质的方法 |
| CN100374576C (zh) * | 2002-10-11 | 2008-03-12 | 阿克丘勒斯生物科学股份有限公司 | 来自ffpe样品的基因表达分布图 |
| CN102181431A (zh) * | 2011-03-11 | 2011-09-14 | 大连医科大学 | 从石蜡包埋组织中提取总rna的方法 |
| CN102939381A (zh) * | 2010-06-14 | 2013-02-20 | 恰根有限公司 | 从蜡包埋样品中提取核酸 |
| CN103243090A (zh) * | 2013-05-31 | 2013-08-14 | 遵义医学院 | 一种提取昆虫dna的方法 |
| CN104853843A (zh) * | 2012-09-12 | 2015-08-19 | 比欧帕斯自动化公司 | 可切片机切片的凝胶支撑结构和方法 |
| CN105063019A (zh) * | 2015-09-09 | 2015-11-18 | 云南大学 | 一种从鱼类历史标本中提取dna的方法 |
| CN105567671A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 天津市应世博科技发展有限公司 | 从乳腺癌石蜡包埋组织中提取dna的方法 |
| CN107271239A (zh) * | 2017-07-06 | 2017-10-20 | 浙江大学 | 一种溶解石蜡组织切片的方法及应用 |
-
1997
- 1997-12-31 CN CN 97125650 patent/CN1221794A/zh active Pending
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100374576C (zh) * | 2002-10-11 | 2008-03-12 | 阿克丘勒斯生物科学股份有限公司 | 来自ffpe样品的基因表达分布图 |
| CN100366632C (zh) * | 2005-12-28 | 2008-02-06 | 南方医科大学 | 一种石蜡包埋组织提取蛋白质的方法 |
| CN102939381A (zh) * | 2010-06-14 | 2013-02-20 | 恰根有限公司 | 从蜡包埋样品中提取核酸 |
| CN102939381B (zh) * | 2010-06-14 | 2015-12-02 | 恰根有限公司 | 从蜡包埋样品中提取核酸 |
| CN102181431A (zh) * | 2011-03-11 | 2011-09-14 | 大连医科大学 | 从石蜡包埋组织中提取总rna的方法 |
| CN102181431B (zh) * | 2011-03-11 | 2012-12-26 | 大连医科大学 | 从石蜡包埋组织中提取总rna的方法 |
| CN104853843A (zh) * | 2012-09-12 | 2015-08-19 | 比欧帕斯自动化公司 | 可切片机切片的凝胶支撑结构和方法 |
| CN104853843B (zh) * | 2012-09-12 | 2017-03-29 | 比欧帕斯自动化公司 | 可切片机切片的凝胶支撑结构和方法 |
| US10794804B2 (en) | 2012-09-12 | 2020-10-06 | Biopath Automation, Llc | Microtome sectionable gel support structure and methods |
| CN103243090A (zh) * | 2013-05-31 | 2013-08-14 | 遵义医学院 | 一种提取昆虫dna的方法 |
| CN105567671A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 天津市应世博科技发展有限公司 | 从乳腺癌石蜡包埋组织中提取dna的方法 |
| CN105063019A (zh) * | 2015-09-09 | 2015-11-18 | 云南大学 | 一种从鱼类历史标本中提取dna的方法 |
| CN107271239A (zh) * | 2017-07-06 | 2017-10-20 | 浙江大学 | 一种溶解石蜡组织切片的方法及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101005924B1 (ko) | 핵산 추출 장치 | |
| CN100471861C (zh) | 从细胞和组织中快速提取rna | |
| Nevins | [70] Definition and mapping of adenovirus 2 nuclear transcription | |
| EP1529841A1 (en) | RNA extraction method, RNA extraction reagent, and method for analyzing biological materials | |
| CN105473737A (zh) | 用于检测细菌污染的方法和组合物 | |
| JP2011200236A (ja) | 分画された血液白血球からのｒｎａの抽出のための方法および試薬 | |
| US20040072193A1 (en) | Method for collecting and using nuclear mrna | |
| KR20100001827A (ko) | 핵산 추출 방법 | |
| CN1221794A (zh) | 从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法 | |
| CN102807976A (zh) | 一种核酸快速提取试剂盒及其应用 | |
| EP1950289A1 (en) | Method of collecting dna from biological sample | |
| CN105859831A (zh) | 苹果蛋白质提取方法及相关的蛋白质提取液 | |
| CN100429307C (zh) | 核酸检测方法及其系统 | |
| CN102115743A (zh) | 一种从石蜡包埋组织中提取高质量rna的新方法和试剂盒 | |
| CN113604580A (zh) | 一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的引物、试剂盒及应用 | |
| US20080299546A1 (en) | Canine Cd20 Gene | |
| CN102433322A (zh) | 蜂蜜基因的提取方法 | |
| CN109880822A (zh) | 一种山桐子高质量dna提取方法 | |
| KR100415726B1 (ko) | Dna 채취용 스티커 및 이를 이용한 dna 채취방법 | |
| KR20180064085A (ko) | Ｐｃｒ용 ｄｎａ의 간단하고 신속한 추출방법 | |
| CN106701965A (zh) | 一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法 | |
| CN102191238A (zh) | 小分子rna的提取方法 | |
| CN109457023A (zh) | 鉴定皂荚性别的基因组合、ssr引物组合、鉴定方法和应用 | |
| CN111690746A (zh) | 与肺癌相关的血小板rna标志物及其应用 | |
| CN109182329A (zh) | 一种用于石蜡包埋组织样本的rna提取方法及其在高通量测序中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C01 | Deemed withdrawal of patent application (patent law 1993) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |