CN106701965A - 一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法 - Google Patents
一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106701965A CN106701965A CN201710034912.4A CN201710034912A CN106701965A CN 106701965 A CN106701965 A CN 106701965A CN 201710034912 A CN201710034912 A CN 201710034912A CN 106701965 A CN106701965 A CN 106701965A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mulberry
- nucleotide polymorphism
- method based
- target gene
- genetic typing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 title claims abstract description 50
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 title claims abstract description 45
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 7
- 230000004907 flux Effects 0.000 claims description 5
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 claims description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 abstract 3
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 206010039897 Sedation Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000036280 sedation Effects 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Abstract
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法。本发明根据高通量转录组测序筛选得到目的基因，通过PCR反应及PCR产物测序得到多个单核苷酸多态性位点。再由所有有效的单核苷酸多态性位点组成单倍体型用于分子标记以达到遗传分型。本发明操作简单、通量灵活、单核苷酸多态性标记遗传稳定可靠，可在生物学、遗传学研究中推广应用，为考证桑类中药原植物提供有力技术支持。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法。
背景技术
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)，是指发生在染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。单核苷酸多态性是许多物种基因组中最常见的变异形式,在基因组中的分布频率很高。据估计，在人类基因组中大约含有320万个SNP位点，平均每1000个核苷酸就有一个以上的SNP；水稻第4号染色体每隔250bp左右就有一个SNP。组成DNA的碱基虽然有4种，但SNP一般只有两种碱基，因此SNP通常被称为二等位基因。由于SNP的二态性，非此即彼，在基因组中筛选SNPs往往只需要+/-的分析，而不用分析片段的长度，这就有利于发展自动化技术筛选或检测SNPs。从分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测，单个核苷酸多态性标记可帮助区分个体间遗传物质的差异。在漫长的进化过程中，生物体形成了自身特有的DNA碱基序列，比较不同物种间或同一物种不同地方品种间的SNP差异，可以了解物种间的亲缘关系和进化的生物信息学，从而对不同物种或同一物种不同地方的品种进行精细鉴定和分类。桑叶、桑椹、桑皮、桑根都是传统的中药材，在现有国家药品标准中，含有这4味中药的复方多达200种以上。桑叶具有降血糖、降血压、降血胆固醇、抗肿瘤、抗过敏、抗氧化、抗毛细管渗透、利尿等功能。桑枝不仅是《中华人民共和国药典》记载的祛风湿的常用药，而且还具有抗炎、降糖、降血脂、提高机体免疫等功能。桑白皮首载于《神农本草经》，其味甘、性寒,能泻肺平喘及行水消肿，主治肺热、水肿、糖尿病及骨折等症，桑白皮的提取液能明显降低血压，还有镇静作用。现代药理学研究表明，桑椹具有调节免疫、降血糖、降脂、抗衰老、护肝、抗病毒等作用。目前，桑类中药原植物均采用桑Morus alba L.,但是，由于桑树品种较为复杂，古今关于桑类中药原植物的记述也不一致，而桑树植物的分类学处理亦很频繁；同时，由于桑树植物易于自然杂交，人工杂交的品种亦层出不穷，亦可能导致桑类中药原植物的复杂性。鉴于此，对桑类中药的原植物的区分就尤为必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法，能够在现有桑树品种复杂、桑树分类处理频繁及古今桑类中药原植物记述不一致等情况下，通过获得基因组的大量的核苷酸多态性标记，发现不同地方的桑树品种之间存在的遗传变异，为考证桑类中药原植物提供有力技术支持。
本发明的技术方案：
本发明所述基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法，由以下步骤构成：
(1)种群调查及取样；
(2)DNA提取；
(3)测序；
(4)筛选目标基因TR2222；
(5)根据目标基因TR2222设计引物，正向引物如序列表中SEQ ID NO:1所示；反向引物如序列表中SEQ ID NO:2所示；
(6)PCR扩增；
(7)测序；
(8)序列拼接、比对，鉴定记录单核苷酸多态性位点。
进一步地，所述目标基因TR2222是通过高通量转录组测序后筛选得到。
进一步地，所述PCR扩增的条件参数：94℃预变性5min、94℃30s、55℃30s、72℃1min，35个循环，72℃延伸10min。
进一步地，所述目标基因TR2222在桑树种群中有8个单核苷酸多态性位点，目标基因TR2222的基因片段如序列表中SEQ ID NO:3所示，其中8个单核苷酸多态性位点分别位于13、115、201、297、384、386、486、551。
进一步地，高通量转录组测序的方法：提取样本总RNA，用Oligo(dT)的磁珠富集分离mRNA，通过反转录反应合成双链cDNA，构建转录组测序文库，插入片段长度约为500bp，在Illumina HiSeq2500测序仪上进行高通量测序，使用Trinity软件对测序片段进行拼接，从而得到基因序列。
本发明的有益效果：
自古以来，桑树品种繁多，发展至今，我国桑树种质资源多达三千余份。长期以来，国内外的学者为了更好的解决桑类的分类问题，已经提出了诸如数值分类、染色体分类、同工酶分类、DNA分子标记分类等分类方法，但这些方法都存在着一些缺点和不足。本发明一次实验中，即可得到8个单核苷酸多态性SNP位点，提供了丰富的多态性信息。同时本发明的实验条件简单，成功率高，可重复性好。在实施过程中，实验成功率在98％以上，实验结果的可重复性更可达到100％。本发明采用的8个SNP位点，单倍体基因型理论上可以达到2的8次方，即256，能够提供非常丰富的多态性信息，使结果更加准确。SNP标记遗传稳定，可用于不同来源的样本，适宜高通量自动化分析。本发明以广东和江苏两个地方的桑树品种为研究对象，在整个基因组内批量寻找单核苷酸多态性位点，全面评估桑树植物品种的多样性，为考证桑类中药原植物提供有力技术支持。本发明在桑树植物资源开发和利用等方面起着重要的作用，同时对桑树遗传资源的保护也具有重要意义。
具体实施方式：
下面结合具体样本对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
1.种群调查与取样
选择广东和江苏两个地方作为采样点，选取生长良好、无虫害的桑叶，采取后用保鲜袋装好，立刻放入事先装有冰袋的保温盒中。带回实验室后立即提取基因组DNA。每个采样点随机取样10株，避免重复采集同一样品，记录好样品名字及采集地点。
2.DNA提取
使用BioFlux公司的Biospin植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取，具体步骤基本按照试剂盒的说明书进行，稍作修改：
(1)称取0.05-0.1g新鲜叶片，放入已用液氮预冷的研钵中，用力快速研磨成粉末，在研磨过程中不要让样品解冻；
(2)将研磨好的粉末小心转移到预先加有450μl LP Buffer的1.5ml的离心管中，涡旋混匀；
(3)65℃水浴30-60min，每隔10分钟将样品混匀一次，然后取出冷至室温；
(4)加入150μl DA Buffer，混匀，然后冰上放置5min；
(5)13000rpm离心10min，转移上清至Shredder spin column中，13000rpm离心1min；
(6)将滤液转移到一个新的1.5ml的离心管中；
(7)加入1.5倍滤液体积的P Binding Buffer，温和颠倒混匀，管中出现絮状沉淀，13000rpm离心10min；
(8)转移上清至Spin column，7500rpm离心1min，并弃滤液；
(9)向Spin column中加入50μl的G Binding Buffer，12000rpm离心30秒，去除滤液；
(10)向Spin column中加入600μl的Wash Buffer，12000rpm离心30秒，去除滤液；
(11)重复步骤(10)一次；
(12)再次将Spin column于12000rpm离心1min，并将Spin column转移至一个新的离心管；
(13)向Spin column加入100-200μl 65℃预热的去离子水，室温静置2-3分钟；(14)12000rpm离心1min，并弃Spin column，DNA存在于1.5ml的离心管中，-20℃保存备用。
3.高通量转录组测序
高通量测序不需要了解物种基因组信息，可以对任意物种进行转录组分析，并能测定每个转录本的片段序列，能够精确到单核苷酸的分辨率；能够同时鉴定和定量稀有转录本和正常转录本，以及检测基因家族中相似基因和可变剪切造成的不同转录本的表达，高通量测序的步骤是：提取样品的总RNA，用Oligo(dT)的磁珠富集分离mRNA，通过逆转录反应合成双链cDNA，构建转录组文库，插入片段的长度约为500bp，在Illumina HiSeq 2500测序仪上进行高通量测序，使用Trinity软件对测序片段进行拼接，从而得到基因序列。
4.筛选目标基因
对得到的转录组数据进行筛选，去除多拷贝及重复基因，找到易于扩增的片段TR2222，TR2222基因片段如序列表中SEQ ID NO:3所示；
5.根据目标基因设计引物，引物序列为：
正向引物如SEQ ID NO:1所示：tcaccatccc cttattct
反向引物如SEQ ID NO:2所示：ggttctacga cctctaca
6.PCR扩增
设计50μl PCR扩增体系，具体组成为：36.5μl ddH2O、5μl 10×Buffer(Mg2+)、4μldNTP Mixture(2.5mM each)、0.5μl TaKaRa Taq(5U/μl)、2μl Template DNA(20-40ng/μl)、1μl正向引物(10μM)、1μl反向引物(10μM)。
PCR扩增的条件参数：94℃预变性5min、94℃30s、55℃30s、72℃1min，35个循环，72℃延伸10min。
7.测序
PCR扩增产物经1％琼脂糖电泳检测，确定为目的条带大小合适且条带单一。使用生工生物工程(上海)股份有限公司的胶回收试剂盒回收电泳片段，回收产物浓度达到测序要求后，TR2222片段使用引物进行双向测序。
8.序列拼接、比对和分析
所得的序列使用Sequencher软件进行拼接并根据峰图进行手工校正，然后采用Mega软件进行比对排列，经比对，两段切齐后长度为578bp。TR2222片段测序质量很高，峰形清晰，无杂峰。可以通过测序峰形清晰鉴定单核苷酸多态性位点。
9.对广东和江苏的桑树种群进行鉴定记录单核苷酸多态性位点。
表1广东和江苏的桑树种群单核苷酸多态性位点
注：Y、M、K是国际纯粹与应用化学联合会(International Union of Pure andApplied Chemistry,IUPAC)制定的命名规则，Y代表T或C，M代表A或C，K代表G或T
鉴定结果发现，广东和江苏的桑树种群内具有较高的多态性。在578bp的片段上，共存在8个隔离位点(见表1)。广东的桑树种群群体的3个个体中，1个个体含有2个单核苷酸多态性位点，2个个体含有1个单核苷酸多态性位点。江苏的桑树种群群体的3个个体中，1个个体含有3个单核苷酸多态性位点，2个个体含有1个单核苷酸多态性位点。
<110>南京大学
<120>一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法
<160>3
<210>1
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<223>人工合成引物I
<400>1
tcaccatccc cttattct 18
<210>2
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<223>人工合成引物II
<400>2
ggttctacga cctctaca 18
<210>3
<211>578
<212>DNA
<213>Morus alba L.
<223>目标基因TR2222基因片段
<400>3
actccgtact cattcctcag caagtcacaa tttttgttca ccaacgctat gtccctcttt 60
gtctctaggc agaacctttt tcccttgcca tgataaccat ccaccaagtg caagtgaacc 120
tctagattat gcgcacaccc cggatcctta gtgggcttga gaaatgggct gtggctgtgg 180
tccagcctaa gttccacccc aacgtgggca taactccaag gaaacgacat cgtttcttca 240
atgtactttt gaaactgacg cttctcattg gctattatcc ccggcaccgt tgggaccaca 300
tcgtgaacgt taaccactct caacacctta attcccagct cgtcacagcg ccctttgaac 360
ttcagatttc cgacacgtgg acctgcaaag gaataaacgg tgatcgggac tttcttcccc 420
gatgcgacga cgtttagtcc cacctcagcc atgtcgtacg cgcttagaat cgctaaagcc 480
gaacccaggc tgtgaccggt gacggtgatg ctaatttcct ctccctcgta gtaatcgagg 540
aggcgcttga tctccgccag cacctgctca cgcgccga 578
Claims (1)
1.一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法，其特征是由以下步骤构成：
(1)种群调查与取样；
(2)DNA提取；
(3)高通量转录组测序，其中，高通量转录组测序的方法为：提取样本总RNA，用Oligo(dT)的磁珠富集分离mRNA，通过反转录反应合成双链cDNA，构建转录组测序文库，插入片段长度为500bp，在Illumina HiSeq2500测序仪上进行高通量测序，使用Trinity软件对测序片段进行拼接，从而得到基因序列；
(4)筛选种群的目标基因TR2222；
(5)根据目标基因TR2222设计引物，正向引物如序列表中SEQ ID NO:1所示；反向引物如序列表中SEQ ID NO:2所示；
(6)PCR扩增，其中，PCR扩增体系为50μl：36.5μl ddH2O、5μl 10×Buffer(含Mg2+)、4μldNTP Mixture(2.5mM each)、0.5μl TaKaRa Taq(5U/μl)、2μl Template DNA(20-40ng/μl)、1μl正向引物、1μl反向引物；PCR反应参数为：94℃预变性5min、94℃30s、55℃30s、72℃1min，35个循环，72℃延伸10min；
(7)将(6)中PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，回收目标片段，对回收产物进行测序；
(8)序列拼接、比对，鉴定记录单核苷酸多态性位点；其中，所述目标基因TR2222在桑树种群中有8个单核苷酸多态性位点，目标基因TR2222基因片段如序列表中SEQ ID NO:3所示，其中8个单核苷酸位点分别位于13、115、201、297、384、386、486、551。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710034912.4A CN106701965A (zh) | 2017-01-17 | 2017-01-17 | 一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710034912.4A CN106701965A (zh) | 2017-01-17 | 2017-01-17 | 一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106701965A true CN106701965A (zh) | 2017-05-24 |
Family
ID=58906886
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710034912.4A Pending CN106701965A (zh) | 2017-01-17 | 2017-01-17 | 一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106701965A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109576358A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-04-05 | 吉林省强参生物技术有限公司 | 林下山参的鉴别方法和即时检测系统 |
| CN111876521A (zh) * | 2020-09-09 | 2020-11-03 | 深圳市兰科植物保护研究中心 | 药用植物活性化合物生物合成基因snp位点的鉴定方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103114144A (zh) * | 2013-02-05 | 2013-05-22 | 南京大学 | 一种基于单核苷酸多态性标记的互花米草遗传分型方法 |
| CN103146817A (zh) * | 2013-02-05 | 2013-06-12 | 南京大学 | 互花米草种群的snp标记的分型方法 |
| KR20150081774A (ko) * | 2014-01-07 | 2015-07-15 | 대한민국(농촌진흥청장) | 뽕나무 동정방법 |
-
2017
- 2017-01-17 CN CN201710034912.4A patent/CN106701965A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103114144A (zh) * | 2013-02-05 | 2013-05-22 | 南京大学 | 一种基于单核苷酸多态性标记的互花米草遗传分型方法 |
| CN103146817A (zh) * | 2013-02-05 | 2013-06-12 | 南京大学 | 互花米草种群的snp标记的分型方法 |
| KR20150081774A (ko) * | 2014-01-07 | 2015-07-15 | 대한민국(농촌진흥청장) | 뽕나무 동정방법 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ESHA BHATTACHARYA等: ""Single primer amplification reaction methods reveal exotic and indigenous mulberry varieties are similarly diverse"", 《JOURNAL OF BIOSCIENCES》 * |
| HE，N.等: ""Morus notabilis Phospholipase A1-Igamma3 partial mRNA"", 《GENBANK》 * |
| 陈祥平 等: ""中国桑属15个种RAD-seq高通量测序"", 《蚕学通讯》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109576358A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-04-05 | 吉林省强参生物技术有限公司 | 林下山参的鉴别方法和即时检测系统 |
| CN111876521A (zh) * | 2020-09-09 | 2020-11-03 | 深圳市兰科植物保护研究中心 | 药用植物活性化合物生物合成基因snp位点的鉴定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108504749B (zh) | 29个微单倍型位点、筛选方法、复合扩增体系及应用 | |
| CN109234442B (zh) | 一种与绵羊多羔性状相关的snp分子标记及其检测试剂盒和应用 | |
| CN106367496B (zh) | 一套猕猴桃物种关联特异单核苷酸分子标记及其检测引物组和应用 | |
| CN107365874B (zh) | 亨利兜兰est-ssr标记引物、其开发方法及其应用 | |
| CN113355448B (zh) | 一种用于鉴定茶枝柑的InDel分子标记及其应用 | |
| CN105734679A (zh) | 核酸靶序列捕获测序文库的制备方法 | |
| Chen et al. | DNA barcoding in herbal medicine: retrospective and prospective | |
| CN111534632A (zh) | 与油茶种仁含油率相关的3个snp分子标记及其应用 | |
| CN107557461B (zh) | 一种用于肝癌易感基因早筛的核酸质谱的检测方法 | |
| CN106701965A (zh) | 一种基于单核苷酸多态性标记的桑树遗传分型方法 | |
| Li et al. | Molecular differentiation of Russian wild ginseng using mitochondrial nad7 intron 3 region | |
| CN107937395B (zh) | 一种远海梭子蟹多态性微卫星分子标记及鉴定方法与应用 | |
| CN111534631B (zh) | 与油茶种仁含油率相关的2个snp分子标记及其应用 | |
| CN101445827B (zh) | 鉴别川牛膝道地药材的核苷酸序列和方法 | |
| CN101240318A (zh) | 一种检测老年性痴呆易感遗传风险的试剂盒 | |
| CN110760603B (zh) | 一种与茶树茶氨酸含量连锁的分子标记位点及其应用 | |
| CN110241197A (zh) | 用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用 | |
| CN114107545B (zh) | 一种冬瓜果面蜡粉基因的caps分子标记及其应用 | |
| KR101332368B1 (ko) | 오이의 품종을 식별하기 위한 다형성 마커 | |
| CN113584203B (zh) | 与油茶单果质量相关的dna片段、其紧密连锁的snp分子标记及其应用 | |
| Seeber et al. | Ploidy in the alpine sedge Kobresia pygmaea (Cyperaceae) and related species: combined application of chromosome counts, new microsatellite markers and flow cytometry | |
| CN111534630B (zh) | 与油茶种仁含油率相关的snp分子标记及其应用 | |
| CN109457023B (zh) | 鉴定皂荚性别的基因组合、ssr引物组合、鉴定方法和应用 | |
| CN109022610B (zh) | 一种金线莲的分子特异性标记引物及其鉴别方法 | |
| CN105063202B (zh) | 利用SNP标记rs4208349鉴别蜂群王浆高产性状的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20170524 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |