CN110241197A - 用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用 - Google Patents

用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用 Download PDF

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宣涛
刘颖
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Abstract

本发明公开了一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的特异性引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括针对rs4149056、rs1045642基因SNP的特异性引物探针组合。本发明还公开了包含所述引物组合的试剂盒及其应用。本发明的有益效果在于：提供了一种快捷的用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的分型试剂盒及应用，应用本发明获得的检测结果精确可靠，且成本较低，具有较好的实用性。

Description

用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物探 针组合及试剂盒及应用
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用。
背景技术
患者在患有高脂血症的情况下，容易引发冠心病，两者合并在临床上会出现不稳定型心绞痛和猝死等。在冠心病合并高脂血症的治疗防治中，要增加对胆固醇和甘油三酯摄入量的控制。经过临床研究表明，冠心病的发展情况，会受到血脂(主要是LDL-C)的抑制，由此保障患者的生存质量和生存时间。在此基础上，给冠心病合并高脂血症患者服用他汀类药物，能够有效控制血脂，产生抗炎效果，稳定粥样斑块生长。
阿托伐他汀钙片是他汀类药物的主要代表，能够有效抑制患者体内HMG-CoA还原酶的形成，从而减少体内胆固醇。患者细胞内总胆固醇的数量减少，就会促进细胞生成，加速低密度脂蛋白受体加速，增强肝脏表面LDL受体的数目，提高活性。受体降解途径代谢，会降低血清中LDL含量。但用药过量会产生横纹肌溶解、肌痛肌炎、急性肝功能衰退、肝炎、四肢活动转改、感觉异常、头痛失眠、性功能障碍等危害。
通过检测他汀类药物靶点基因、代谢相关基因，可以有效评估药物疗效和毒副作用，为医生合理用药提供依据。ABCB1基因突变会影响阿托伐他汀的转运和代谢，进而影响药物疗效；SLCO1B1*5等位基因突变使肌肉他汀类药物暴露增加，与肌病的发生相关。
他汀类药物治疗效果存在明显的个体化差异，随之而来的毒副作用也严重危害病患的健康。通过检测阿托伐他汀代谢、转运或作用靶点基因，可以及早发现不同个体对阿托伐他汀的药物敏感程度，从而实现阿托伐他汀的“个体化”用药，增强其用药剂量的依从性，以降低用药剂量不当引起的风险，提高治疗疗效。
目前市场上采用的基因多态性检测技术有PCR-RFLP，其主要原理是通过应用特异性限制性内切酶消化PCR扩增产物，并根据消化位点是否消失来判断其变异存在与否，但该方法操作复杂，样本量多时易造成PCR产物的交叉污染且容易出现酶切不充分或酶切过度而出现假阴性或假阳性结果，可靠性低。
多重PCR方法尽管特异性有所提高，但是这种方法的原理仍然是基于普通PCR的原理，引物特异性以及低保真Taq酶等这些因素均可造成对结果的影响。DNA测序法虽然是目前进行基因诊断的金标准，但步骤繁琐，过程复杂，试剂价格昂贵，容易出现样本间的交叉污染而导致测序失败；另外测序仪的装备也超出了一般临床检验实验室的承受范围。
高分辨率熔解曲线法是一种快速，简便，经济，实用的分型方法，但基因分型依赖于仪器温度控制的精密性，假阳性高。Taqman探针的方法采用特异性的荧光标记的探针，特异性强，灵敏度高且操作方便，快速。
发明内容
本发明的，目的是为了解决传统临床经验医疗方式诊断及阿托伐他汀药物用药时易出现临床用药不良反应且没有合适的试剂盒产品的技术问题而提供了新的引物组合及其试剂盒及其应用。
本发明的目的之一在于提供一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的引物探针组合。
本发明的目的之二在于提供包含所述相关基因SNP的引物探针组合的试剂盒
本发明的目的之三在于所述试剂盒的应用。
为实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是：
一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的特异性引物探针组合，所述引物探针组合包括针对rs4149056、rs1045642基因SNP的特异性引物探针组合，具体如下：
rs4149056引物探针序列为：
rs4149056-F：5'-GAAACACTCTCTTATCTACATAGGTTGT-3'；
rs4149056-R：5'-CCTTCTTTAGCGAAATCATCAA-3'；
rs4149056-P1：5'FAM-CCCATGAACACATATA-MGB 3'；
rs4149056-P2：5'VIC-ACCCATGAACGCATATA-MGB 3'；
rs1045642引物探针序列为：
rs1045642-F：5'-GAACATTGCCTATGGAGACAACAG-3'；
rs1045642-R：5'-AGAGAGGCTGCCACATGCTC-3'；
rs1045642-P1：5'FAM-TGGTGTCACAGGAAGAGATTGTGAG-TAMRA 3'；
rs1045642-P2：5'VIC-TGGTGTCACAGGAAGAGATCGTGA-TAMRA 3'。
为了实现本发明的目的之二，所采用的技术方案是：
一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的荧光定量PCR试剂盒，包括所述的特异性引物探针组合的PCR反应液，所述PCR反应液分别为rs4149056、rs1045642的PCR反应液，所述PCR反应液还包括2×NuHi SNP Mix(Taq酶、dNTPs、MgCl2、PCR buffer、ROX参比荧光)及超纯水。
在本发明的一个优选实施例中，所述PCR反应液成分的终浓度为：1×NuHi SNPMix，0.5μM的各特异性引物及0.2μM探针。
在本发明的一个优选实施例中，所述试剂盒中还包括阳性对照品Ⅰ、阳性对照品Ⅱ及阳性对照品Ⅲ；
所述阳性对照品Ⅰ分别为rs4149056、rs1045642基因位点TT型、AA型质粒；
所述阳性对照品Ⅱ分别为rs4149056基因位点TT型与CC型、rs1045642基因位点AA型与GG型按1：1数量比杂合的质粒；
所述阳性对照品Ⅲ分别为rs4149056、rs1045642基因位点CC型、GG型质粒。
为了实现本发明的目的之三，所采用的技术方案是：
一种所述试剂盒的应用，所述应用是利用所述的荧光定量PCR试剂盒，针对人基因组DNA进行荧光定量PCR反应，根据反应过程产生的荧光信号区分相应SNP位点的多态性，用来指导阿托伐他汀药物个体化用药。
本发明的有益效果在于：
提供了一种快捷的用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的分型试剂盒及应用，应用本发明获得的检测结果精确可靠，且成本较低，具有较好的实用性。
附图说明
图1：本发明实施例中rs4149056的TT基因型的扩增曲线图(FAM在上)；
图2：本发明实施例中rs4149056的TC基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图3：本发明实施例中rs4149056的CC基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图4：本发明实施例中rs4149056基因分型结果的PCR荧光分析图；
图5：本发明实施例中rs1045642的AA基因型的扩增曲线图(FAM在上)；
图6：本发明实施例中rs1045642的AG基因型的扩增曲线图(FAM在上)；
图7：本发明实施例中rs1045642的GG基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图8：本发明实施例中rs1045642基因分型结果的PCR荧光分析图；
图9：对比例中引物探针组合rs4149056-2的TT基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图10：对比例中引物探针组合rs4149056-2的TC基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图11：对比例中引物探针组合rs4149056-2的CC基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图12：对比例中引物探针组合rs4149056-2基因分型结果的PCR荧光分析图；
图13：对比例中引物探针组合rs1045642-2的AA基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图14：对比例中引物探针组合rs1045642-2的AG基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图15：对比例中引物探针组合rs1045642-2的GG基因型的扩增曲线图(FAM在下)；
图16：对比例中引物探针组合rs1045642-2基因分型结果的PCR荧光分析图。
具体实施方式
本发明的主要优点在于：
本发明是采用Taqman探针与荧光定量PCR技术相结合的检测试剂盒，适用于临床推广和产业化。
本发明的原理主要在于：
1.在TaqMan探针法的PCR反应体系中，包括一对PCR引物和一对探针。探针只与模板特异性地结合，其结合位点在两条引物之间。探针的5’端标记有报告基因，3’端标记有荧光淬灭基团，当探针完整的时候，报告基因所发射的荧光能量被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号，随着PCR的进行，Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其3’-5’外切核酸酶活性就会将探针切断，报告基团远离淬灭基团，其能量不能被吸收，即产生荧光信号。
2.用两种不同荧光染料(如FAM，HEX、VIC)分别标记这一对探针，针对双等位SNP的不同基因型，就可以在一次PCR反应中完成对单个SNP位点的基因型判定。
以下通过实施例对本发明作进一步的说明，但这些实施例不得用于解释对本发明的限制。
实施例1：
一、生物样本：本发明所采用的生物材料均来自公司内部。为2018年9-12月期间在公司内部所检测的100例剩余人群抗凝血。
二、取待检测样本抽提的DNA，作为PCR模板：DNA提取试剂盒为天根生化科技(北京)有限公司的提取试剂盒《血液基因组DNA提取试剂盒》进行提取(货号：DP318)。
1.取全血400ul，加800ul细胞裂解液CL混匀，10000rpm/11500×g，1min离心，弃上清，若裂解不彻底可重复一次。
2.沉淀中加入200ul缓冲液GS，混匀，再加入20ul蛋白酶K，混匀。
3.加入200ul缓冲液GB，混匀，56℃，10min，期间颠倒数次，直至溶液变澄清(若未澄清，可延长时间至澄清)。
4.加200ul无水乙醇混匀，短暂离心。
5.转移样本混合液到吸附柱CB3，13400×g/12000rpm，30s离心，弃滤液。
6.加入500ul缓冲液GD到吸附柱CB3，13400×g/12000rpm，30s离心，弃滤液。
7.加入600ul缓冲液PW到吸附柱CB3，13400×g/12000rpm，30s离心，弃滤液，重复一次。
8.吸附柱CB3放入干净离心管中，13400×g/12000rpm，2min离心，弃滤液，室温静置3分钟，晾干。
9.加100ulddH2O，室温孵育2-5min,13400×g/12000rpm，2min离心，收集洗脱产物，-20℃保存。
三、引物和探针的设计与合成：1、针对人基因组中rs4149056、rs1045642基因位点(序列参见NCBI数据库公开的人类全基因组序列)，使用Primer Premier 5.0及PrimerExpress 3.0软件，分别进行试验设计符合需要的特异性引物及探针。
准备特异性引物及探针序列，如下表1所示：
表1
注：引物名称以基因对应的rs编号命名；F代表上游引物，R代表下游引物，P1代表FAM探针，P2代表VIC探针。
四、准备PCR反应液：
第一组添加基因位点为rs4149056的引物探针，引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2，探针序列为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；
第二组添加基因位点为rs1045642的引物探针，引物序列为SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6，探针序列为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；
每组PCR反应液还包括2×NuHi SNP Mix(Taq酶、dNTPs、MgCl2、PCR buffer、ROX参比荧光)及超纯水；
所述PCR反应液成分的终浓度为：1×NuHi SNP Mix，0.5μM的各特异性引物及0.2μM探针。
五、PCR反应体系，如下表2所示：
表2
PCR扩增程序，如下表3所示：
表3
采用ABI SteponePlus荧光定量PCR仪(Applied Biosystems，美国应用生物技术有限公司)。
六、实验结果：
PCR反应结束后，应用Stepone software V2.3(Applied Biosystems，美国应用生物技术有限公司)进行分析，将得到的100例结果进行分类，依据本发明的探针共分辨出2个SNP位点的共6种基因型。
rs4149056的三种基因型的扩增曲线图如图1～3所示，PCR荧光分析图如图4所示；rs1045642的三种基因型的扩增曲线图如图5～7所示，PCR荧光分析图如图8所示。
八、本发明的试剂盒检测结果在指导阿托伐他汀药物用药中的应用
根据荧光定量PCR中的结果判定得出rs4149056、rs1045642各位点的基因型。基因型与阿托伐他汀药物个体化用药关系对应下表4所示：
表4
对比例1：改变引物探针组合序列信息检测人抗凝血组织样本的基因分型。
一、生物样本：本发明所采用的生物材料均来自派森诺医学检验所。为2018年9-12月期间在派森诺医学检验所检测的100例剩余人群抗凝血。
二、取待检测样本抽提的DNA，作为PCR模板：DNA提取试剂盒为天根生化科技(北京)有限公司的提取试剂盒《血液基因组DNA提取试剂盒》进行提取(货号：DP318)，具体抽提步骤同实施例1中的人DNA抽提步骤。
三、引物和探针的设计与合成：
1、针对人基因组中rs4149056、rs1045642基因位点(序列参见NCBI数据库公开的人类全基因组序列)，使用Primer Premier 5.0及Primer Express 3.0软件，分别设计两组引物探针。
本发明的特异性引物探针序列和对比引物探针序列，如下表5所示：
表5
注：引物名称以基因对应的rs编号命名；F代表上游引物，R代表下游引物，P1代表FAM探针，P2代表VIC探针。
四、准备PCR反应液：
第一组为引物探针组合rs4149056-1：添加引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2，探针序列为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；
第二组为引物探针组合rs4149056-2：添加引物序列为SEQ ID NO.9和SEQ IDNO.10，探针序列为SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12；
第三组为引物探针组合rs1045642-1：添加引物序列为SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6，探针序列为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；
第四组为引物探针组合rs1045642-2：添加引物序列为SEQ ID NO.13和SEQ IDNO.14，探针序列为SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16；
每组PCR反应液还包括2×NuHi SNP Mix(Taq酶、dNTPs、MgCl2、PCR buffer、ROX参比荧光)及超纯水；
所述PCR反应液成分的终浓度为：1×NuHi SNP Mix，0.5μM的各特异性引物及0.2μM探针。
五、PCR反应体系，如实施例1中表2所示。
六、PCR扩增程序，如实施例1中表3所示。
采用ABI SteponePlus荧光定量PCR仪(Applied Biosystems，美国应用生物技术有限公司)。
七、实验结果：
PCR反应结束后，应用Stepone software V2.3(Applied Biosystems，美国应用生物技术有限公司)进行分析，分析结果如下：
引物探针组合rs4149056-1的三种基因型的扩增曲线图如图1～3所示，PCR荧光分析图如图4所示，扩增曲线图及PCR荧光分析图均区分良好；
引物探针组合rs4149056-2的三种基因型的扩增曲线图如图9～11所示，PCR荧光分析图如图12所示，扩增曲线图及PCR荧光分析图均区分效果不佳；
引物探针组合rs1045642-1的三种基因型的扩增曲线图如图5～7所示，PCR荧光分析图如图8所示，扩增曲线图及PCR荧光分析图均区分良好；
引物探针组合rs1045642-2的三种基因型的扩增曲线图如图13～15所示，PCR荧光分析图如图16所示，扩增曲线图及PCR荧光分析图均区分效果不佳。
由此可见，本申请的引物组合的后续效果良好，且更适合商业化运用，且由对比文件对比可知，本申请的引物探针组合并不是随便筛选而得到，是付出了大量创造性劳动的。
序列表
<110> 南京派森诺基因科技有限公司
<120> 用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用
<130> 20190515
<160> 16
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 1
gaaacactct cttatctaca taggttgt 28
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 2
ccttctttag cgaaatcatc aa 22
<210> 3
<211> 16
<212> DNA
<213> homo spaiens
<400> 3
cccatgaaca catata 16
<210> 4
<211> 17
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 4
acccatgaac gcatata 17
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 5
gaacattgcc tatggagaca acag 24
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 6
agagaggctg ccacatgctc 20
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 7
tggtgtcaca ggaagagatt gtgag 25
<210> 8
<211> 24
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 8
tggtgtcaca ggaagagatc gtga 24
<210> 9
<211> 32
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 9
aatgaaacac tctcttatct acataggttg tt 32
<210> 10
<211> 28
<212> DNA
<213> homo spaiens
<400> 10
ctttagcgaa atcatcaatg taagaaag 28
<210> 11
<211> 32
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 11
cgaagcatat tacccatgaa cacatatatc ca 32
<210> 12
<211> 31
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 12
aagcatatta cccatgaacg catatatcca c 31
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 13
ttgatggcaa agaaataaag cg 22
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 14
ggcagtgact cgatgaaggc 20
<210> 15
<211> 18
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 15
cacaggaaga gatcgtga 18
<210> 16
<211> 15
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 16
acaggaagag attgt 15

Claims (5)

1.一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的特异性引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括针对rs4149056、rs1045642基因SNP的特异性引物探针组合，具体如下：
rs4149056引物探针序列为：
rs4149056-F：5'-GAAACACTCTCTTATCTACATAGGTTGT-3'；
rs4149056-R：5'-CCTTCTTTAGCGAAATCATCAA-3'；
rs4149056-P1：5'FAM-CCCATGAACACATATA-MGB3'；
rs4149056-P2：5'VIC-ACCCATGAACGCATATA-MGB3'；
rs1045642引物探针序列为：
rs1045642-F：5'-GAACATTGCCTATGGAGACAACAG-3'；
rs1045642-R：5'-AGAGAGGCTGCCACATGCTC-3'；
rs1045642-P1：5'FAM-TGGTGTCACAGGAAGAGATTGTGAG-TAMRA3'；
rs1045642-P2：5'VIC-TGGTGTCACAGGAAGAGATCGTGA-TAMRA3'。
2.如权利要求1所述的一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，包括所述的特异性引物探针组合的PCR反应液，所述PCR反应液分别为rs4149056、rs1045642的PCR反应液，所述PCR反应液还包括2×NuHi SNP Mix及超纯水。
3.如权利要求2所述的一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液成分的终浓度为：1×NuHi SNP Mix，0.5μM的各特异性引物及0.2μM探针。
4.如权利要求2所述的一种用于指导阿托伐他汀药物个体化用药相关基因SNP的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性对照品Ⅰ、阳性对照品Ⅱ及阳性对照品Ⅲ；
所述阳性对照品Ⅰ分别为rs4149056、rs1045642基因位点TT型、AA型质粒；
所述阳性对照品Ⅱ分别为rs4149056基因位点TT型与CC型、rs1045642基因位点AA型与GG型按1：1数量比杂合的质粒；
所述阳性对照品Ⅲ分别为rs4149056、rs1045642基因位点CC型、GG型质粒。
5.如权利要求2所述的一种所述试剂盒的应用，其特征在于，所述应用是利用所述的荧光定量PCR试剂盒，针对人基因组DNA进行荧光定量PCR反应，根据反应过程产生的荧光信号区分相应SNP位点的多态性，用来指导阿托伐他汀药物个体化用药。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110295224A (zh) * 2019-05-28 2019-10-01 南京派森诺基因科技有限公司 用于指导罗格列酮药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用
CN112646869A (zh) * 2020-12-28 2021-04-13 广东南芯医疗科技有限公司 阿托伐他汀个体化用药基因的指导方法及试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107099602A (zh) * 2017-05-27 2017-08-29 宁波美晶医疗技术有限公司 一种同时检测他汀类药物代谢基因多位点突变的试剂盒
CN107142307A (zh) * 2017-05-08 2017-09-08 韩林志 用于指导阿司匹林个体化用药相关基因检测的引物组、试剂盒及方法
CN107893114A (zh) * 2017-12-29 2018-04-10 韩林志 用于指导芬太尼类药物个体化用药相关基因检测的引物对、试剂盒及方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107142307A (zh) * 2017-05-08 2017-09-08 韩林志 用于指导阿司匹林个体化用药相关基因检测的引物组、试剂盒及方法
CN107099602A (zh) * 2017-05-27 2017-08-29 宁波美晶医疗技术有限公司 一种同时检测他汀类药物代谢基因多位点突变的试剂盒
CN107893114A (zh) * 2017-12-29 2018-04-10 韩林志 用于指导芬太尼类药物个体化用药相关基因检测的引物对、试剂盒及方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110295224A (zh) * 2019-05-28 2019-10-01 南京派森诺基因科技有限公司 用于指导罗格列酮药物个体化用药相关基因检测的引物探针组合及试剂盒及应用
CN112646869A (zh) * 2020-12-28 2021-04-13 广东南芯医疗科技有限公司 阿托伐他汀个体化用药基因的指导方法及试剂盒
CN112646869B (zh) * 2020-12-28 2023-05-23 广东南芯医疗科技有限公司 阿托伐他汀个体化用药基因的指导方法及试剂盒

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