CN102821779B - 新型肽及其制备方法和应用 - Google Patents
新型肽及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102821779B CN102821779B CN201180016089.5A CN201180016089A CN102821779B CN 102821779 B CN102821779 B CN 102821779B CN 201180016089 A CN201180016089 A CN 201180016089A CN 102821779 B CN102821779 B CN 102821779B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peptide
- gln
- lys
- cys
- xaa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/30—Insulin-like growth factors (Somatomedins), e.g. IGF-1, IGF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
- C07K14/723—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH receptor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
本发明属于糖尿病的治疗领域并且涉及对于葡萄糖依赖型促胰岛素肽受体(GIP-R)和胰高血糖素-样肽-1受体(GLP-1-R)都展现活性且对于胰高血糖素受体(Gluc-R)有选择性的肽。特别提供了引入氨基酸替换以调节GIP-R和GLP-1-R活性并维持对于Gluc-R的选择性的GIP类似物。
Description
本发明属于糖尿病的治疗领域并且涉及对于葡萄糖依赖型促胰岛素肽受体(GIP-R)和胰高血糖素-样肽-1受体(GLP-1-R)都展现活性且对于胰高血糖素受体(Gluc-R)有选择性的肽。具体提供了引入氨基酸取代以调控GIP-R和GLP-1-R活性并维持对于Gluc-R的选择性的GIP类似物。
GIP,已知作为胃抑制性肽或葡萄糖依赖型促胰岛素肽,是42个氨基酸的胃肠道调控肽,其显示出在葡萄糖存在下刺激胰腺β细胞分泌胰岛素,因此在葡萄糖稳态中起生理作用。GLP-1是37个氨基酸的肽,其保护胰腺β细胞并抑制胰高血糖素分泌、胃排空以及食品摄取,导致体重降低。GIP和GLP-1被称作肠促胰岛素。肠促胰岛素受体信号途径对葡萄糖稳态发挥至关重要的生理相关作用。胰高血糖素是由胰腺产生的29个氨基酸的肽。此激素向肝发出信号以释放葡萄糖,造成血糖增加。因此,在糖尿病环境下并不希望刺激Gluc-R。
不同于在健康受试者中的观察,GIP单独对2型糖尿病人具有非常适度的降糖效应。然而,在实现了一定的降糖后,GIP的效力增加并变得与在血糖正常的受试者中的观察接近。另一方面,GLP-1对于健康和糖尿病受试者的降糖都是有效的但是会引起恶心,因此,可能不会实现GLP-1的全部效力。此外,GIP和GLP-1都被普遍存在的蛋白酶,二肽基肽酶IV(DPP IV),快速失活,产生不能刺激胰岛素分泌的肽并且因此GIP和GLP-1都只可以用于短期代谢控制。
在WO 2010/016940和WO 2010/016944中描述了某些GIP类似物。在WO 2010/011439中描述了某些胰高血糖素类似物展现出GIP和GLP-1活性。
目前对于糖尿病的治疗包括胰岛素促分泌剂,例如磺酰脲类和glitinides类,其通常展现出效力进行性降低并可造成2型糖尿病患者的低血糖症。如此,需要鉴定出以持续的葡萄糖依赖型方式加强胰岛素分泌的新型活性剂。也希望鉴定出拥有GLP-1的降糖效应而不会引起恶心的新型活性剂以及进一步鉴定出具有增加的代谢稳定性的新型活性剂。
本发明提供具有引入了氨基酸替换的新的有力且有效力的肽,来调控GIP和GLP-1两者的活性而同时维持对于胰高血糖素的选择性。此发明实现了GLP-1的降糖效应并且利用了GIP的葡萄糖刺激性胰岛素分泌效应。此外,本发明的某些化合物对于降低体重提供了有效治疗。
本发明提供了包含下述序列的肽:
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-
5 10
Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Xaa1-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-
15 20 25
Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-
30 3 540
Xaa2-Xaa3(SEQ ID NO:1)
其中在第22位的Xaa1是Nal或Phe;在第43位的Xaa2是Cys或不存在;在第44位的Xaa3是Cys或不存在;C末端氨基酸任选地被酰胺化;并且如果第43位的Xaa2或第44位的Xaa3是Cys,那么它们之一或者它们两者都任选地被聚乙二醇化。
本发明的一个实施方式涉及Xaa1是Phe的肽。本发明的优选实施方式涉及Xaa1是Nal的肽。
本发明的一个实施方式涉及Xaa2和Xaa3不存在的肽。本发明的优选实施方式涉及Xaa2和Xaa3每者是Cys的肽。在所述实施方式中,优选在第44位的Cys的羧基被酰胺化。
本发明另外优选的实施方式涉及在第43和44位的任一Cys被20kDaPEG分子聚乙二醇化的肽。在所述实施方式中,优选C末端Cys的羧基被酰胺化。本发明另一优选实施方式涉及在第43和44位的Cys都被20kDaPEG分子聚乙二醇化的肽。在所述实施方式中,优选C端Cys的羧基被酰胺化。
本发明的一个实施方式涉及其中Xaa1是Phe;并且Xaa2和Xaa3不存在的肽。在所述实施方式中,优选第42位的C末端Gln的羧基被酰胺化。本发明的优选实施方式涉及其中Xaa1是Nal;并且Xaa2和Xaa3不存在的肽。在所述实施方式中,优选第42位的C末端Gln的羧基被酰胺化。
本发明的更优选实施方式涉及这样的肽,其中Xaa1是Phe;Xaa2和Xaa3都是Cys并且都任选地被聚乙二醇化并且第44位的Cys的羧基任选地被酰胺化。本发明尤其优选的实施方式涉及这样的肽,其中Xaa1是Nal;Xaa2和Xaa3是Cys并且Cys之一或两个任选地被聚乙二醇化并且第44位的Cys的羧基任选地被酰胺化。
本发明尤其优选的实施方式是
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Th r-Gln-Cys(PEG20K)-Cys(PEG20K)(SEQ ID N0:2)
并且在第44位的Cys被酰胺化。此肽被称作Aib2、Aib13、Aib29、Cys43(PEG20K)、Cys44(PEG20K)-GIP。
本发明最优选的实施方式是
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Nal-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-Cys(PEG20K)-Cys(PEG20K)(SEQ IDNO:3)
并且在第44位的Cys被酰胺化。此肽被称作Aib2、Aib13、Nal22、Aib29、Cys43(PEG20K)、Cys44(PEG20K)-GIP。
本发明也提供治疗患者的糖尿病的方法,所述方法包括对需要此类治疗的患者施用有效量的本发明的肽。本发明进一步提供治疗患者的非胰岛素依赖型糖尿病的方法,所述方法包括对需要此类治疗的患者施用有效量的本发明的肽。本发明进一步提供治疗患者的胰岛素依赖型糖尿病的方法,所述方法包括对需要此类治疗的患者施用有效量的本发明的肽。
另外,本发明也提供通过对需要此类治疗的患者施用有效量的本发明的肽来治疗选自肥胖症、代谢综合征、冠状动脉疾病和动脉粥样硬化的病况的方法。此外,本发明提供通过对需要此类治疗的患者施用有效量的本发明的肽来诱导体重降低的方法。本发明也提供通过对需要此类治疗的患者施用有效量的本发明的肽来治疗虚弱或增加骨强度的方法。
此外,此发明提供本发明的肽,其用于疗法。在特别的实施方式中,本发明提供本发明的肽,其用于治疗糖尿病。此发明提供本发明的肽,其用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病。此发明提供本发明的肽,其用于治疗胰岛素依赖型糖尿病。而且,此发明提供本发明的肽,其用于治疗肥胖症。额外地,此发明提供本发明的肽,其用于治疗选自肥胖症、代谢综合征、冠状动脉疾病和动脉粥样硬化的病况。此发明进一步提供本发明的肽,其用于诱导体重降低。而且,此发明提供本发明的肽,其用于治疗虚弱或增加骨强度。
此发明也提供本发明的肽在制造用于治疗糖尿病的药物中的用途。此发明也提供本发明的肽在制造用于治疗肥胖症的药物中的用途。此发明进一步提供上述肽在制造用于治疗选自代谢综合征、冠状动脉疾病和动脉粥样硬化的病况的药物中的用途。此发明进一步提供本发明的肽在制造用于诱导体重降低的药物中的用途。此发明也提供本发明的肽在制造用于治疗虚弱或增加骨强度的药物中的用途。
额外地,此发明提供包含本发明的肽与可药用的载体、稀释剂或赋形剂的药物制剂。此外,此发明提供适合用于治疗糖尿病的药物制剂。此发明提供适合用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病的药物制剂。此发明提供适合用于治疗胰岛素依赖型糖尿病的药物制剂。此外,此发明提供适合用于治疗肥胖症的药物制剂。此发明也提供适合用于治疗选自代谢综合征、冠状动脉疾病和动脉粥样硬化的病况的药物制剂。此发明提供适合用于诱导体重降低的药物制剂。此发明进一步提供适合用于治疗虚弱或增加骨强度的药物制剂。在特别的实施方式中,该制剂进一步包含一种或多种其他治疗剂。
此发明也提供包含本发明的肽与一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。在特别的实施方式中,该组合物进一步包含一种或多种其他治疗剂。
本发明额外地提供较不易于被DPPIV快速代谢失活的稳定分子。
本发明的序列含有用于20种天然存在的氨基酸的标准单字母或三字母氨基酸代码。使用的其他氨基酸代码定义如下:Aib=α-氨基异丁酸;Nal=1-萘基丙氨酸。
术语“C末端氨基酸”指肽序列中含有游离羧基的最后一个氨基酸。本发明的C末端氨基酸可为第42位的Gln、第43位的Cys或第44位的Cys。
术语“聚乙二醇”或“PEG”指聚乙二醇化合物或其衍生物,其具有或没有耦联剂,或者用耦联或活化部分衍生。在其典型形式中,PEG是具有末端羟基的线性聚合物,并且PEG具有通式HO-CH2CH2-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH,其中n是从约8至4000。mPEG是单甲氧基-聚乙二醇。由于PEG通常生成并且用作为其分子量在一定程度上变化的PEG化合物的混合物,因此本领域技术人员通常通过描述在生成特别的聚乙二醇化的化合物的聚乙二醇化反应中使用的PEG试剂的平均分子量来描述结合到化合物的PEG的分子量。共价结合到本发明的肽的PEG分子可为10,000道尔顿、20,000道尔顿、30,000道尔顿或40,000道尔顿。PEG分子的平均值优选18,000至22,000道尔顿。更优选地,平均值为19,000至21,000道尔顿。最优选地,平均值为20,000至21,000道尔顿。PEG分子可为线性或分支的并且可单独存在或者串联存在。本发明的聚乙二醇化的肽优选具有与肽的C末端结合的串联线性PEG分子。特别地,PEG分子优选通过mPEG-20kDa马来酰亚胺(mPEG MAL)(I)或mPEG-20kDa碘乙酰胺(II)结合至肽的C末端的两个半胱胺酸残基,其中n是10至2500。优选地,n是350至600。更优选地,n是425至475。
在本文使用的术语“聚乙二醇化”意指一个或多个如上所述的PEG分子与本发明的肽的共价连接。例如,本发明的肽在第43和44位的Cys被与每个Cys的巯基共价连接的20kDa PEG分子聚乙二醇化。
在本文使用下述缩写:“t-Bu”指叔丁基;“fmoc”指芴甲氧羰基;“Pbf”指2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基;“Trt”指三苯甲基或三苯基甲基;“OtBu”指叔丁氧基;“Boc”指叔丁氧羰基;“PyBOP”指(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸盐;“DIEA”指二异丙基乙胺;“HEK”指人胚肾;“Tris”指2-氨基-2-羟甲基-丙烷-1,3-二醇;“BSA”指牛血清白蛋白;“HEPES”指2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙烷磺酸;“PBS”指磷酸盐缓冲液;“NSB”指非特异性结合;“HBSS”指Hank缓冲盐溶液;“IBMX”指1-甲基-3-(2-甲基丙基)-7H-嘌呤-2,6-二酮;以及“DMSO”指二甲基亚砜。
肽合成
本发明的所有肽都是通过固相肽合成在Protein Technologies Inc.自动肽合成仪上生成的。合成是在Fmoc-Rink酰胺聚苯乙烯树脂(Rapp Polymere Tubingen,德国)上进行,取代物约0.7mmol/g。使用Fmoc/t-Bu固相肽合成进行合成。使用的氨基酸侧链衍生物是:Arg(Pbf)、Asp(OtBu)、Cys(Trt)、Gln(Trt)、Glu(OtBu)、His(Trt)、Lys(Boc)、Ser(tBu)、Thr(tBu)、Trp(Boc)和Tyr(tBu)。在室温下,用约6当量通过二异丙基碳化二亚胺(DIC)和羟基苯并三唑(HOBt)活化的氨基酸(1∶1∶1摩尔比)在二甲基亚砜(DMF)中进行耦联,持续90分钟。将下述条件用于在第22位耦联Fmoc-(1-Nal)-OH:室温下,Fmoc-(1-Nal)-OH(3当量)、PyBOP(3当量)以及DIEA(6当量)在DMF中持续3h。将下述条件用于在第12位耦联Fmoc-Ile-OH:Fmoc-Ile-OH(6当量)、PyBOP(6当量)以及DIEA(12当量)在DMF中持续10h。
在室温下,在含有三氟乙酸(TFA)∶三异丙基硅烷∶1,2-乙二硫醇∶甲醇∶茴香硫醚90∶4∶2∶2∶2(v/v)的溶液中进行从树脂切割伴生物和移除侧链保护基团,持续2h。过滤溶液并用冷的二乙醚沉淀肽,将肽再溶解在30-40mL的10%乙腈水中,并在C18反相HPLC柱(通常是WatersSymmetryPrepTM 7μm,19x 300mm)上以18mL/min的流速纯化。用0至18%B持续5min,随后用18至45%B持续110分钟的两阶段线性AB梯度洗脱样品,其中A=0.05%TFA/水并且B=0.05%TFA/乙腈。产物通常在28-35%乙腈中洗脱。在Agilent 1100Series LC-MS系统上用单相四极MS检测仪来确认肽纯度和分子量。在EclipseTM XDB-C8,5μm,4.6mm内径x 15cm柱上用6至60%B持续15分钟的线性AB梯度来完成分析HPLC分离,其中A=0.05%TFA/H2O而B=0.05%TFA/乙腈并且流速为1mL/min。所有的肽都被纯化至>95%纯度并且确认具有相当于计算值1amu以内的的分子量。
实施例1
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-
5 10
Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Nal-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-
15 20 25
Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln
30 35 40
(SEQ ID NO:4)
实施例2
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-
5 10
Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-
15 20 25
Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln
30 35 40
(SEQ ID NO:5)
中间体1
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-
5 10
Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Nal-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-
15 20 25
Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-Cys-
30 35 40
Cys
(SEQ ID NO:6)
中间体2
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-
5 10
Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-
15 20 25
Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-Cys-
30 35 40
Cys
(SEQ ID NO:7)
用mPEG-MAL-20kDa对肽聚乙二醇化
称出冻干的肽(通常30-50mg)。称出2.1倍摩尔当量的mPEG-20kDa马来酰亚胺(CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)3NHCO(CH2)2-马来酰亚胺)(NOFSUNBRIGHT ME-200MA)(mPEG MAL)并与所述肽组合。将反应物溶解在50/50(v/v)水/乙腈混合物中至肽浓度为约20mg/mL。用100mM乙酸铵,10mM EDTA,pH 7将肽溶液稀释两倍。室温搅拌得到的混合物。通过分析反相HPLC(在60℃,在Waters SymmetryShieldTM C18,3.5μm,4.6mm内径x 10cm柱上用0至30%B持续5分钟以及30至90%B持续随后的30min的两阶段线性AB梯度来完成分析HPLC分离,其中A=0.05%TFA/H2O以及B=0.05%TFA/乙腈并且流速为1mL/min)监控反应混合物,并且通常在1-2h反应时间后,显示出肽峰几乎完全消失。由于单-和二-聚乙二醇化的肽,因此出现两个峰,其中二-聚乙二醇化的肽通常构成总峰面积的90-95%。
然后通常用酸化水(0.05%TFA/水)将样品稀释至约40mL并通过C18反相HPLC柱(通常是Waters SymmetryPrepTM 7μm,19x 300mm),用0至25%B持续15min,随后25至55%B持续100min的两阶段线性AB梯度进行纯化,流速为10mL/min,其中A=0.05%TFA/水并且B=0.05%TFA/乙腈。产物通常在35-40%乙腈中洗脱。通过在280nm处的UV吸收值,使用基于肽序列的计算的摩尔消光系数对纯化的肽进行定量。纯化后的产量通常在基于起始肽量的70%的范围内。
实施例3
Aib2,Aib13,Aib29,Cys43(PEG20K),Cys44(PEG20K)-GIP
实施例4
Aib2,Aib13,Nal22,Aib29,Cys43(PEG20K),Cys44(PEG20K)-GIP
已经使用mPEG-MAL对实施例3和实施例4的肽进行聚乙二醇化。
用mPEG-碘乙酰胺-20kDa对肽聚乙二醇化
称出冻干的肽(通常30-50mg)。称出2.1倍摩尔当量的mPEG-20kDa碘乙酰胺(CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)3NHCOCH2-I)(NOF SUNBRIGHTME-200IA)并与所述肽组合。将反应物溶解在pH 8.5的水性缓冲溶液(硼酸、氯化钾、氢氧化钠缓冲液0.1M+10mM EDTA)+20%乙腈(v/v)中至肽浓度为约10mg/mL。然后在室温搅拌得到的混合物。通过分析反相HPLC(在60℃,在Waters SymmetryShieldTM C18,3.5微米,4.6mm内径x 10cm柱上用0至30%B持续5分钟以及30至90%B持续随后的30min的两阶段线性AB梯度来完成分析HPLC分离,其中A=0.05%TFA/H2O以及B=0.05%TFA/乙腈并且流速为1mL/min)监控反应混合物,并且通常在18h反应时间后,显示出肽峰几乎完全消失。由于单-和二-聚乙二醇化的肽,因此出现两个峰,其中二-聚乙二醇化的肽通常构成总峰面积的90-95%。
然后通常用酸化水(0.05%TFA/水)将样品稀释至约50mL并通过C18反相HPLC柱(通常是Waters SymmetryPrepTM 7μm,19x 300mm),用0至25%的持续15min,随后25至55%B持续100min的两阶段线性AB梯度进行纯化,流速为10mL/min,其中A=0.05%TFA/水并且B=0.05%TFA/乙腈。产物通常在35-40%乙腈中洗脱。通过在280nm处的UV吸收值,使用基于肽序列的计算的摩尔消光系数对纯化的肽进行定量。纯化后的产量通常在基于起始肽量的70%的范围内。
备选地,称出冻干的肽(通常30-50mg)。称出2.1倍摩尔当量的mPEG-20kDa碘乙酰胺(CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)3NHCOCH2-I)(NOFSUNBRIGHT ME-200IA)并与所述肽组合。将反应物溶解在pH 8.0的水性缓冲溶液(0.1M碳酸氢盐缓冲液+10mM EDTA)+20%乙腈(v/v)中至肽浓度为约8mg/mL。然后在室温下暗处搅拌得到的混合物。通过分析反相HPLC(在60℃,在Waters SymmetryShieldTM C18,3.5微米,4.6mm内径x 10cm柱上用0至30%B持续5分钟以及30至90%B持续随后的30min的两阶段线性AB梯度来完成分析HPLC分离,其中A=0.05%TFA/H2O以及B=0.05%TFA/乙腈并且流速为1mL/min)监控反应混合物,并且通常在3h反应时间后,显示出肽峰几乎完全消失。由于单-和二-聚乙二醇化的肽,因此出现两个峰,其中二-聚乙二醇化的肽通常构成总峰面积的90-95%。
然后通常用酸化水(0.05%TFA/水)将样品稀释至约50mL并按上述纯化。纯化后的产量通常在基于起始肽量的70%的范围内。
实施例5:SEQ ID:3
Aib2,Aib13,Nal22,Aib29,Cys43(PEG20K),Cys44(PEG20K)-GIP
实施例5的肽是使用mPEG-碘乙酰胺进行聚乙二醇化的。
测定法
体外
基本如下文所述对本文示例的化合物进行检测并且其展现出对于GIP-R和GLP-1-R的结合亲和性(Ki)低于100nM以及对Gluc-R的选择性比率至少为100倍。此外,本文的化合物在结合测定法试验中展现出对于GIP-R和GLP-1-R的活性比率在4∶1至1∶2(GIP-R∶GLP-1-R)之间(4∶1表示在GIP-R处较高的效价;1∶2表示在GLP-1-R处较高的效价)。
葡萄糖依赖型促胰岛素肽受体(GIP-R)结合测定法
人葡萄糖依赖型促胰岛素多肽受体结合测定法使用克隆到pcDNA3.1(Promega)-NeoR质粒中的hGIP-R(Usdin,T.B.,Gruber,C.,Modi,W.和Bonner,T.I.,GenBank:AAA84418.1)。将hGIP-R-pcDNA3.1/Neo质粒转染入中国仓鼠卵巢细胞CHO-S中,用于悬浮培养并且在500μg/mL遗传霉素(Geneticin)(Invitrogen)存在下进行筛选。
使用悬浮培养的细胞来制备粗细胞质膜。在含有25mM Tris HCl,pH7.5,1mM MgCl2,DNA酶1,20μ/mL以及无EDTA的Roche CompleteTMInhibitors的低渗缓冲液中在冰上裂解细胞。用玻璃杜恩斯(dounce)匀浆器使用杵捣动25次来使细胞悬液均质化。匀浆物在4℃以1800xg离心15分钟。收集上清液并且在低渗缓冲液中重悬沉淀并再次均质化。混合物以1800x g离心15分钟。将第二次上清液与第一次上清液组合。将组合的上清以1800x g再次离心15分钟以澄清。将澄清的上清液转移到高速管中并在4℃以25000x g离心30分钟。将膜沉淀在匀浆缓冲液中重悬并在-80℃冰箱中作为等分冷冻储存直到使用。
通过I-125-乳过氧化物酶方法对GIP进行放射性碘化(Markalonis,J.J.,Biochem.J.113:299(1969))并且通过反相HPLC在Perkin-Elmer/NEN(NEX-402)上纯化GIP。比活性为2200Ci/mmol。通过使用冷hGIP的同源竞争代替饱和结合来进行KD测定。使用闪烁亲近测定法(SPA)(Sun,S.,Almaden,J.,Carlson,T.J.,Barker,J.和Gehring,M.R.Assaydevelopment and data analysis of receptor-ligand binding based onscintillation proximity assay.Metab Eng.7:38-44(2005)),用预先以1%无脂肪酸BSA(Gibco,7.5%BSA)封闭的麦胚凝集素(WGA)珠(GE HealthCare)进行受体结合测定法。结合缓冲液含有25mM HEPES,pH 7.4,2.5mM CaCl2,1mM MgCl2,0.1%无脂肪酸BSA,0.003%Tween20以及无EDTA的Roche CompleteTM Inhibitors。将hGIP和肽类似物溶解在PBS中并在-80℃储存。将肽类似物在结合缓冲液中进行系列稀释。接下来,将10μL稀释的肽转移到含有40μL测定结合缓冲液或冷GIP(0.1μM终浓度的NSB)的3632透明底测定板上。然后,添加90μL膜(4μg/孔),50μL[125I]GIP(Perkin Elmer Life and Analytical Sciences,在反应中终浓度为0.15nM)以及50μL的WGA珠(150μg/孔),密封并颠倒混合。在室温下,12小时的稳定时间后,用闪烁记数器读板。
结果以在化合物存在下的特异性I-125-GIP结合百分数来计算。通过I-125-GIP的特异性结合百分数对添加的化合物浓度的非线性回归得出化合物的绝对IC50浓度。使用Cheng-Prusoff方程将IC50浓度转换为Ki,其中估测KD为0.174nM(Cheng,Y.,Prusoff,W.H.,Biochem.Pharmacol.22,3099-3108,(1973))。
表1
实施例 | Ki |
1 | 0.044nM |
2 | 0.023nM |
3 | 9.79nM |
4 | 8.23nM |
5 | 9.22nM |
这些数据表明表1的肽结合GIP-R并且可活化该受体,转而引发GIP依赖型生理应答。
胰高血糖素-样-肽1(GLP-1-R)受体结合测定法
GLP-1受体结合测定法使用从293HEK膜分离的克隆的人胰高血糖素样-肽1受体(hGLP-1-R)(Graziano MP,Hey PJ,Borkowski D,Chicchi GG,Strader CD,Biochem Biophys Res Commun.196(1):141-6,1993)。将hGLP-1-R cDNA亚克隆到表达质粒phD中(Trans-activated expression offully gamma-carboxylated recombinant human protein C,anantithrombotic factor.Grinnell,B.W.,Berg,D.T.,Walls,J.和Yan,S.B.Bio/Technology 5:1189-1192,1987)。将此质粒DNA转染入293HEK细胞中并用200μg/mL潮霉素进行筛选。
使用来自悬浮培养的细胞来制备粗细胞质膜。在含有25mM TrisHCl,pH 7.5,1mM MgCl2,DNA酶1,20μ/mL以及无EDTA的RocheCompleteTM Inhibitors的低渗缓冲液中在冰上裂解细胞。用玻璃杜恩斯匀浆器使用杵捣动25次来使细胞悬液均质化。匀浆物在4℃以1800x g离心15分钟。收集上清液并且在低渗缓冲液中重悬沉淀并再次均质化。混合物以1800x g离心15分钟。将第二次上清液与第一次上清液组合。将组合的上清以1800x g再次离心15分钟以澄清。将澄清的上清液转移到高速管中并在4℃以25000x g离心30分钟。将膜沉淀在匀浆缓冲液中重悬并在-80℃冰箱中作为等分冷冻储存直到使用。
通过I-125-乳过氧化物酶方法对胰高血糖素-样肽1(GLP-1)进行放射性碘化(Markalonis,J.J.,Biochem.J.113:299(1969))并且通过反相HPLC在Perkin-Elmer/NEN (NEX308)上纯化。比活性为2200Ci/mmol。由于I-125GLP-1材料中的高丙醇含量,因此通过同源竞争代替饱和结合来进行KD测定。估测KD为0.96nM并且使用KD计算所有检测的化合物的Ki值。
使用闪烁亲近测定法(SPA),用预先以1%无脂肪酸BSA(Gibco)封闭的麦胚凝集素(WGA)珠进行受体结合测定法。结合缓冲液含有25mMHEPES,pH 7.4,2.5mM CaCl2,1mM MgCl2,0.1%无脂肪酸BSA,0.003%Tween20以及无EDTA的Roche CompleteTM Inhibitors。将胰高血糖素-样肽1以1mg/mL溶解在PBS中并立即在-80℃以30μL等分冷冻。稀释胰高血糖素-样肽1等分物并在一小时内用于结合测定法。将肽类似物溶解在PBS中并在结合缓冲液中进行系列稀释。接下来,将10μL稀释的化合物或PBS转移到含有40μL测定结合缓冲液或冷胰高血糖素(0.1μM终浓度的NSB)的3632透明底测定板上。然后,添加90μL膜(4μg/孔),50μL I-125胰高血糖素-样肽1(在反应中终浓度为0.15nM)以及50μL的WGA珠(150μg/孔),密封并颠倒混合。在室温下,12小时的稳定时间后,用PerkinElmer Life and Analytical Sciences Trilux闪烁记数器读板。
结果以在化合物存在下的特异性I-125-胰高血糖素-样肽1结合百分数来计算。通过I-125-胰高血糖素-样肽1的特异性结合百分数对添加的化合物浓度的非线性回归得出化合物的绝对IC50浓度。使用Cheng-Prusoff方程将IC50浓度转换为Ki。
表2
实施例 | Ki |
1 | 0.096nM |
2 | 0.059nM |
3 | 9.00nM |
4 | 5.27nM |
5 | 6.20nM |
这些数据表明表2的肽结合GLP-1-R并且可因而活化该受体,转而引发GLP-1依赖型生理应答。
胰高血糖素受体(hGlucR)结合测定法
胰高血糖素受体结合测定法使用从293HEK膜分离的克隆的人胰高血糖素受体(Lok,S,等,Gene 140(2),203-209(1994))。将hGlucR cDNA亚克隆到表达质粒phD中(Trans-activated expression of fullygamma-carboxylated recombinant human protein C,an antithromboticfactor.Grinnell,B.W.,Berg,D.T.,Walls,J.和Yan,S.B.Bio/Technology5:1189-1192,1987)。将此质粒DNA转染入293HEK细胞并用200μg/mL潮霉素进行筛选。
使用来自悬浮培养的细胞来制备粗细胞质膜。在含有25mM TrisHCl,pH 7.5,1mM MgCl2,DNA酶1,20μ/mL以及无EDTA的RocheCompleteTM Inhibitors的低渗缓冲液中在冰上裂解细胞。用玻璃杜恩斯匀浆器使用杵捣动25次来使细胞悬液均质化。匀浆物在4℃以1800x g离心15分钟。收集上清液并且在低渗缓冲液中重悬沉淀并再次均质化。混合物以1800x g离心15分钟。将第二次上清液与第一次上清液组合。将组合的上清以1800x g再次离心15分钟以澄清。将澄清的上清液转移到高速管中并在4℃以25000x g离心30分钟。将膜沉淀在匀浆缓冲液中重悬并在-80℃冰箱中作为等分冷冻储存直到使用。
通过I-125-乳过氧化物酶方法对胰高血糖素进行放射性碘化并且通过反相HPLC在Perkin-Elmer/NEN(NEX207)上纯化。比活性为2200Ci/mmol。由于I-125胰高血糖素材料中的高丙醇含量,因此使用同源竞争代替饱和结合来进行KD测定。估测KD为2.62nM并且使用KD计算所有检测的化合物的Ki值。
使用闪烁亲近测定法(SPA),用预先以1%无脂肪酸牛血清白蛋白(BSA)(Gibco,7.5%BSA)封闭的麦胚凝集素(WGA)珠进行受体结合分析试验。结合缓冲液含有25mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基乙磺酸(HEPES),pH7.4,2.5mM CaCl2,1mM MgCl2,0.1%无脂肪酸BSA,0.003%Tween20以及不含EDTA的Roche CompleteTM Inhibitors。将胰高血糖素以1mg/mL溶解在0.01N HCl中并立即在-80℃以30μL等分冷冻。稀释胰高血糖素等分物并在一小时内用于结合测定法。将肽类似物溶解在磷酸缓冲液(PBS)中并在结合缓冲液中进行系列稀释。接下来,将10μL稀释的化合物或PBS转移到含有40μL测定结合缓冲液或冷胰高血糖素(非特异性结合(NSB),终浓度1μM)的3632透明底测定板上。然后,添加90μL膜(3μg/孔),50μL I-125胰高血糖素(在反应中终浓度为0.15nM)以及50μμL的WGA珠(150μg/孔),密封并颠倒混合。在室温下,12小时的稳定时间后,用PerkinElmer Life and Analytical Sciences Trilux闪烁记数器读板。
结果以在化合物存在下的特异性I-125-胰高血糖素结合百分数来计算。通过I-125-胰高血糖素的特异性结合百分数对添加的化合物浓度的非线性回归得出化合物的绝对IC50浓度。使用Cheng-Prusoff方程将IC50剂量转换为Ki。
表3
实施例 | Ki |
1 | >23,600nM |
2 | >23,600nM |
3 | >7,890nM |
4 | >7,490nM |
5 | >7,490nM |
这些数据表明表3的肽对于Gluc-R的选择性较小并因此不会启动Gluc-R介导的生理应答。
hGIP-R细胞的功能活化以生成细胞内cAMP
cAMP功能测定法使用与上述用于hGIP-R结合测定法所分离的相同的克隆GIP-R细胞系。用肽刺激细胞并使用CisBio cAMP Dynamic 2Assay试剂盒(62AM4PEB)来定量细胞内生成的cAMP。简言之,通过在细胞裂解缓冲液存在下,结合cAMP-d2捕获抗体来检测细胞内生成的cAMP。添加第二检测抗体,抗-cAMP穴状化合物(Cryptate)来产生夹心物,然后使用Perkin-Elmer Life Sciences设备检测该夹心物。
用无酶细胞解离溶液(Enzyme-Free Cell Dissociation Solution)(专用培养基5-004-B)从亚铺满的组织培养皿中收获hGIP-R-CHO-S细胞。在低速沉淀细胞并用cAMP测定缓冲液[25mM Hepes,在具有Mg和Ca以及0.1%无脂肪酸BSA(Gibco,7.5%BSA),500μM IBMX的HBSS(GIBCO,14025-092)中]洗涤3次,然后稀释到终浓度为每mL有312,000个细胞。将hGIP和肽制备为5X储液并和cAMP标准曲线都在cAMP Assay Buffer中系列稀释,该cAMP标准曲线是由存储于-20℃的在PBS中的2,848nMcAMP的冷冻储液制备的。为了开始测定,将40μL的细胞悬液转移到黑色、未经组织培养物处理的半孔板(CoStar 3694)中,随后添加10μL的5X肽稀释液。将细胞置于室温1h。通过添加25μL在CisBio裂解缓冲液中稀释的cAMP-d2-捕获抗体(CisBio)然后在titer-tek振动器中温和地混合来终止反应。裂解15分钟后,添加25μL检测抗体,抗-cAMP Cryptate(CisBio),温和混合。1h后,在室温下使用Perkin-Elmer读取裂解细胞和抗体混合物。使用cAMP标准曲线将单位转换成nMcAMP/孔。将在每孔中生成的纳摩cAMP转换成用hGIP对照观察到的最大应答的百分数。使用最大应答的百分数对添加的肽浓度,通过非线性回归分析得处出相对EC50值。
表4
实施例 | EC50 |
1 | 0.005nM |
2 | 0.023nM |
3 | 0.244nM |
4 | 0.277nM |
5 | 0.207nM |
这些数据表明表4的肽结合并活化GIP-R并可以因此启动GIP-R-介导的生理应答。
hGLP-1-R细胞的功能活化以生成细胞内cAMP
cAMP功能测定法使用hGLP-1-R表达细胞的克隆系,其分离自将克隆到pcDNA3.1/Neo(Promega)((Graziano MP,Hey PJ,Borkowski D,Chicchi GG,Strader CD,Biochem Biophys Res Commun.1993 Oct15;196(1):141-6))中并转染入293HEK细胞的hGLR-1-R转染物。用肽刺激hGLP-1-R细胞并使用CisBio cAMP Dynamic 2测定试剂盒(62AM4PEB)来定量细胞内生成的cAMP。简言之,通过在细胞裂解缓冲液存在下,结合cAMP-d2捕获抗体(CisBio)来检测细胞内诱导的cAMP。添加第二检测抗体,抗-cAMP穴状化合物(CisBio)来产生夹心物,然后使用Perkin-Elmer Life Sciences设备检测该夹心物。
用无酶细胞解离溶液(专用培养基5-004-B)从亚铺满的组织培养皿中收获hGLP-1-R-293HEK细胞。在低速沉淀细胞并用cAMP DMEM测定缓冲液[10mM Hepes,在具有0.5%FBS和2mM谷氨酰胺以及500μMIBMX的DMEM(Gibco-31053)中)洗涤3次,然后稀释到终浓度为每mL有50,000个细胞。hGLP-1和肽制备为5X储液并和cAMP标准曲线都在cAMP测定缓冲液中系列稀释,该cAMP标准曲线是由存储于-20℃的在PBS中的2,848nM cAMP的冷冻储液制备的。为了开始测定,将40μL的细胞悬液转移到黑色、未经组织培养物处理的半孔板(CoStar 3694)中,随后添加10μL的5X肽稀释液。将细胞置于室温1h。通过添加25μL在CisBio裂解缓冲液中稀释的cAMP-d2-捕获抗体(CisBio)然后在titer-tek振动器中温和地混合来终止反应。裂解15分钟后,添加25μL检测抗体,抗-cAMP穴状化合物(CisBio),温和混合。1h后,在室温下使用Perkin-Elmer读取裂解细胞和抗体混合物。使用cAMP标准曲线将单位转换成nM cAMP/孔。将在每孔中生成的纳摩cAMP转换成用hGLP-1对照观察到的最大应答的百分数。使用最大应答的百分数对添加的肽浓度,通过非线性回归分析得出相对EC50值。
表5
实施例 | EC50 |
1 | 0.036nM |
2 | 0.045nM |
3 | 1.11nM |
4 | 0.844nM |
5 | 0.959nM |
这些数据表明表5的肽结合并活化GLP-1-R并可以因此启动GLP-1-R介导的生理应答。
体内
在饮食引发肥胖症(DIO)小鼠中对食物摄取、体重和身体组成的影响
使用三至四月龄雄性的饮食引发肥胖症(DIO)小鼠。用12小时光/暗周期(22:00给光)在温控(24℃)设施中单个安置动物,并使动物自由饮用食物和水。适应设施2周后,随机将小鼠分成治疗组(n=8-10/组)以便各组具有相似的平均体重和脂肪质量。实验前,用运载体溶液皮下(sc)注射小鼠并称重7天以使它们适应该过程。
每三天,在暗周期开始前30-90分钟,将运载体或溶解在运载体中的肽类似物(剂量范围10-100nmol/Kg)通过皮下注射给予随意喂养的DIO小鼠,持续2至4周。同时测量体重和食物加漏斗重量。通过从前一天的食物加漏斗重量减去当前的食物加漏斗重量来计算过去24小时消耗的食物。通过在第一次注射前减去动物体重来计算体重的绝对变化。在第1和14天,使用Echo Medical System(Houston,TX)设备通过核磁共振(NMR)来测量总脂肪质量。通过从总体重中减去脂肪质量来计算去脂质量。
表6a在14天治疗期间,DIO小鼠的重量变化(实施例3和4)
表6b在14天治疗期间,DIO小鼠的重量变化(实施例4和5)
表6a和6b的数据显示出,相比于运载体处理的小鼠,在14天DIO小鼠研究中,实施例3、4和5降低了累积的食物摄取和体重。降低的体重主要是由于脂肪质量降低。*p<0.01,**p<0.001对运载体(Dunnett’s检验)。
对2周治疗后DIO小鼠中口服葡萄糖耐受检测期间血糖波动的影响
在上述DIO研究中的最后一次注射化合物后56小时,使动物接受口服葡萄糖耐受检测。简言之,小鼠在开始葡萄糖耐受检测前禁食16小时。在0时间时,通过口服管饲法给予动物2g/kg葡萄糖。在葡萄糖激发后0、15、30、60和120分钟通过尾部取血来收集血液。通过血糖仪来测量葡萄糖浓度。
表7a.在口服葡萄糖负载后,实施例3和4对葡萄糖波动的影响。数据以葡萄糖曲线下的面积给出(平均值±SEM)
表7b.在口服葡萄糖负载后,实施例4和5对葡萄糖波动的影响。数据以葡萄糖曲线下的面积给出(平均值±SEM)
表7a和7b的这些数据显示出实施例3、4和5在口服葡萄糖负载后显著降低葡萄糖波动。通过Dunnett检验来评估统计显著性。
对饮食引发肥胖症(DIO)Long Evans大鼠中食物摄取、体重和身体组成的影响
使用四至五月龄雄性的饮食引发肥胖症Long Evans大鼠。用12小时光/暗周期(22:00给光)在温控(24℃)设施中单个安置动物,并使动物自由饮用食物(饮食TD95217)和水。动物适应设施至少2周。在第0天,通过QNMR来测定身体组成并且基于体重、%脂肪和%瘦体重将大鼠随机分成各组(n=6/组)。在第1、4、8、11和15天,通过皮下注射施用化合物。在第14天,再次通过QNMR来测定身体组成并且在第16天对动物称重并从尾部取血样来测定血浆葡萄糖、脂类、胰岛素、胰高血糖素和PYY。CO2安乐死后,通过心脏条(cardiac stick)取血样用于分析照射测定。
相比于运载体处理的DIO,在16天中施用实施例3和4通过增加瘦体重百分数并降低脂肪质量百分数产生了DIO大鼠体重和身体组成的变化。例如,在16天中施用10nmol/Kg剂量的实施例3后,瘦体重增加0.6%并且脂肪质量减少1.3%。类似地,在16天中施用30nmol/Kg剂量的实施例3后,瘦体重增加1.3%并且脂肪质量减少2.3%。此外,在16天中施用30nmol/Kg剂量的实施例4后,瘦体重增加0.4%并且脂肪质量减少1.8%。类似地,在16天中施用100nmol/Kg剂量的实施例4后,瘦体重增加1.8%并且脂肪质量减少3.2%。
相比于运载体处理的小鼠,在DIO大鼠中,施用实施例3和4降低了血脂的量,包括甘油三酯和总胆固醇,并且增加了游离脂肪酸的量。例如,在施用10nmol/Kg剂量的实施例3后,甘油三酯和总胆固醇分别从507.3mg/dL和104mg/dL(运载体)降至262.1mg/dL和91mg/dL,并且游离脂肪酸从0.69mEq/L增加至0.94mEq/L。类似地,在施用30nmol/Kg剂量的实施例3后,甘油三酯和总胆固醇分别从507.3mg/dL和104mg/dL(运载体)降至233.5mg/dL和94mg/dL,并且游离脂肪酸从0.69mEq/L增加至1.01mEq/L。此外,在施用10nmol/Kg剂量的实施例4后,甘油三酯和总胆固醇分别从808.1mg/dL和127mg/dL(运载体)降至488.7mg/dL和110mg/dL。类似地,在施用30nmol/Kg剂量的实施例4后,甘油三酯和总胆固醇分别从808.1mg/dL和127mg/dL(运载体)降至212.2mg/dL和104mg/dL,并且游离脂肪酸从0.67mEq/L增加至0.82mEq/L。
对正常大鼠中静脉内葡萄糖耐受检测期间血糖波动的影响
此研究中使用正常的雄性Wistar大鼠(225-250g)。基于饲养体重和血糖将动物随机分组。在开始检测前16小时向动物注射运载体或肽类似物(剂量3-400μg肽含量/kg)。在注射时移走食物。在测定前,将动物麻醉,腹腔(i.p.)施用苯巴比妥(Phenobarbital)65mg/kg,并且插入两根导管,一根插入颈静脉另一根插入颈动脉。在0时间时,通过静脉导管给予动物0.5g葡萄糖/kg。在葡萄糖激发后0(葡萄糖前)、2、4、6、10、20和30分钟的时间,从颈动脉收集血液。通过血糖仪测量葡萄糖浓度。通过测量胰岛素。效力以在胰岛素曲线下总面积的增加(=从t+0至30min积分的血浆胰岛素数值)以及葡萄糖曲线下的面积进行测量,葡萄糖曲线下的面积是静脉葡萄糖激发后的葡萄糖波动的量度。
相比于运载体处理的大鼠,施用实施例3和4增加胰岛素AUC并降低葡萄糖AUC。例如,在施用50μg/Kg剂量的实施例3后,胰岛素AUC从55ng*min/mL(运载体)增加至137ng*min/mL并且葡萄糖AUC从7830mg*min/dL(运载体)降至6780mg*min/dL。类似地,在施用200μg/Kg剂量的实施例3后,胰岛素AUC从55ng*min/mL(运载体)增加至183ng*min/mL并且葡萄糖AUC从7830mg*min/dL(运载体)降至7020mg*min/dL。此外,在施用50μg/Kg剂量的实施例4后,胰岛素AUC从44ng*min/mL(运载体)增加至150ng*min/mL并且葡萄糖AUC从8010mg*min/dL(运载体)降至7730mg*min/dL。类似地,在施用200μg/Kg剂量的实施例4后,胰岛素AUC从44ng*min/mL(运载体)增加至161ng*min/mL并且葡萄糖AUC从8010mg*min/dL(运载体)降至7420mg*min/dL。
在施用50μg/Kg剂量的实施例5后,胰岛素AUC从41ng*min/mL(运载体)增加至133ng*min/mL并且葡萄糖AUC从7739mg*min/dL(运载体)降至7202mg*min/dL。类似地,在施用200μg/Kg剂量的实施例5后,胰岛素AUC从41ng*min/mL(运载体)增加至124ng*min/mL并且葡萄糖AUC从7739mg*min/dL(运载体)降至7351mg*min/dL。
骨骼影响
在6月龄的切除卵巢的(OvX;参见Endocrinology 144:2008-2015),Sprague Dawley大鼠中评估了实施例4。从手术后9天开始每日以皮下注射给予大鼠0、2.9、9.7或29nmol/kg剂量。治疗持续35天并且相比于假手术OvX大鼠,实施例4剂量应答式地降低了食物消耗和体重至多8%。体重降低是由于脂肪质量减少并且在OvX大鼠中未观察到瘦体重的变化。实施例4减少了OvX大鼠中的非禁食血清葡萄糖和甘油三酯。化合物剂量依赖性地防止OvX诱导的腰椎中骨矿物质含量和骨矿物质密度的降低但是对于股骨中段骨密质没有影响。实施例4没有不利地影响OvX大鼠中股骨和腰椎的骨矿物质密度或骨矿物质含量。应注意体重降低(此研究中为8%)可以直接影响骨质量。骨强度是负载依赖性的并且重量降低造成负重骨的负载降低并且结果是观察到对负重骨,即股骨骨密质的骨骼参数的影响较少。通过单向ANOVA随后是Dunnett检验来评估统计显著性。
表8:腰椎的骨矿物质密度(BMD)的变化
表9:腰椎的骨矿物质含量(BMC)的变化
表8和9的数据显示出实施例4改善OvX大鼠中的BMC和BMD。
本发明的化合物优选配置成通过多种途径施用的药学组合物。最优选地,此类化合物用于胃肠外施药。此类药学组合物及其制备方法使本领域公知的。参见例如,Remington:The Science and Practice of Pharmacy(A.Gennaro等人编,第19版,Mack Publishing Co.,1995)。
本发明的化合物通常在宽的剂量范围内都是有效的。例如,每周的剂量落入1至24mg肽缀合物或0.014至0.343mg/Kg体重的范围内。在一些情形下,低于前述范围的下限的剂量水平是足够而且有余的,而在其他情形下,可使用更大的剂量而不会造成任何有害的副作用并因此不旨在以任何方式用上述剂量范围来限制本发明的范围。应理解的是实际施用的化合物量将由医生考虑相关情况来确定,包括待治疗的病况,所选择的施药途径,施用的实际的一种或多种化合物,个体患者的年龄、体重和应答,以及患者症状的严重性。
本发明的其他修饰对于本领域技术人员将是显而易见的,并不背离本发明的范围。
Claims (16)
1.由下述序列组成的肽:
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-
Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Xaa1-Val-Gln-Trp-Leu-
Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-
Ile-Thr-Gln-Xaa2-Xaa3(SEQ ID NO:1)
其中第22位的Xaa1是Nal或Phe;第43位的Xaa2是Cys或不存在;第44位的Xaa3是Cys或不存在;C末端氨基酸任选地被酰胺化;并且如果第43位的Xaa2或第44位的Xaa3是Cys,那么它们之一或者两者都任选地被聚乙二醇化;
其中所述Aib代表α-氨基异丁酸;Nal代表1-萘基丙氨酸。
2.权利要求1的肽,其中Xaa1是Nal。
3.权利要求1的肽,其中Xaa1是Phe。
4.权利要求1-3中任一项的肽,其中Xaa2和Xaa3两者都不存在。
5.权利要求1-3中任一项的肽,其中Xaa2和Xaa3每者为Cys。
6.权利要求1-3中任一项的肽,其中第43位的Cys或第44位的Cys之一或者两者都被18-22kDa PEG分子聚乙二醇化。
7.权利要求6的肽,其中PEG分子为20至21kDa。
8.权利要求6的肽,其中PEG分子为20kDa。
9.权利要求1-3中任一项的肽,其中每个PEG是线性的。
10.权利要求1-3中任一项的肽,其中C末端氨基酸被酰胺化。
11.权利要求1-3中任一项的肽,其由下述序列组成:
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-
Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-
Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-
Ile-Thr-Gln-Cys(PEG20K)-Cys(PEG20K)(SEQ ID NO:2)
其中第44位的被聚乙二醇化的Cys的羧基被酰胺化。
12.权利要求1-3中任一项的肽,其由下述序列组成:
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-
Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Nal-Val-Gln-Trp-Leu-
Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-
Ile-Thr-Gln-Cys(PEG20K)-Cys(PEG20K)(SEQ ID NO:3)
其中第44位的被聚乙二醇化的Cys的羧基被酰胺化被酰胺化。
13.包含权利要求1-12中任一项的肽以及可药用的载体、稀释剂或赋形剂的药学制剂。
14.权利要求13的药学制剂,其包含一种或多种其他治疗剂。
15.有效量的权利要求1-12中任一项的肽用于制备治疗患者的糖尿病的药学制剂的用途。
16.有效量的权利要求1-12中任一项的肽用于制备诱导患者体重降低的药学制剂的用途。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US31785010P | 2010-03-26 | 2010-03-26 | |
US61/317,850 | 2010-03-26 | ||
PCT/US2011/029501 WO2011119657A1 (en) | 2010-03-26 | 2011-03-23 | Novel peptides and methods for their preparation and use |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102821779A CN102821779A (zh) | 2012-12-12 |
CN102821779B true CN102821779B (zh) | 2015-03-11 |
Family
ID=44041636
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201180016089.5A Expired - Fee Related CN102821779B (zh) | 2010-03-26 | 2011-03-23 | 新型肽及其制备方法和应用 |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8815811B2 (zh) |
EP (1) | EP2552471B1 (zh) |
JP (1) | JP5887335B2 (zh) |
KR (1) | KR101407775B1 (zh) |
CN (1) | CN102821779B (zh) |
AR (1) | AR080592A1 (zh) |
AU (1) | AU2011232597B2 (zh) |
BR (1) | BR112012024373A2 (zh) |
CA (1) | CA2794664A1 (zh) |
CL (1) | CL2012002635A1 (zh) |
CO (1) | CO6630128A2 (zh) |
CR (1) | CR20120457A (zh) |
DO (1) | DOP2012000244A (zh) |
EA (1) | EA022489B1 (zh) |
EC (1) | ECSP12012181A (zh) |
ES (1) | ES2568796T3 (zh) |
GT (1) | GT201200263A (zh) |
MA (1) | MA34077B1 (zh) |
MX (1) | MX2012011127A (zh) |
PE (1) | PE20130523A1 (zh) |
SG (1) | SG184289A1 (zh) |
TN (1) | TN2012000432A1 (zh) |
TW (1) | TWI535450B (zh) |
WO (1) | WO2011119657A1 (zh) |
ZA (1) | ZA201206832B (zh) |
Families Citing this family (69)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007056362A2 (en) | 2005-11-07 | 2007-05-18 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting physiological solubility and stability |
WO2008086086A2 (en) | 2007-01-05 | 2008-07-17 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility in physiological ph buffers |
EA017849B1 (ru) | 2007-02-15 | 2013-03-29 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Соагонисты глюкагоновых/glp-1-рецепторов |
EP2214691B1 (en) | 2007-10-30 | 2015-09-30 | Indiana University Research and Technology Corporation | Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity |
ES2509883T3 (es) | 2007-10-30 | 2014-10-20 | Indiana University Research And Technology Corporation | Antagonistas de glucagón |
JP5753779B2 (ja) | 2008-06-17 | 2015-07-22 | インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションIndiana University Research And Technology Corporation | 生理学的pHの緩衝液中で向上した溶解性及び安定性を示すグルカゴン類縁体 |
ES2579502T3 (es) | 2008-06-17 | 2016-08-11 | Indiana University Research And Technology Corporation | Coagonistas de receptores de glucagón/GLP-1 |
ES2650038T3 (es) | 2008-06-17 | 2018-01-16 | Indiana University Research And Technology Corporation | Agonistas mixtos a base de GIP para el tratamiento de trastornos metabólicos y obesidad |
SG172291A1 (en) | 2008-12-19 | 2011-07-28 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs |
JP5887265B2 (ja) | 2009-06-16 | 2016-03-16 | インディアナ・ユニバーシティ・リサーチ・アンド・テクノロジー・コーポレーション | Gip受容体活性グルカゴン化合物 |
EA022816B1 (ru) | 2009-07-13 | 2016-03-31 | Зилэнд Фарма А/С | Ацилированные аналоги глюкагона |
EP2512503A4 (en) | 2009-12-18 | 2013-08-21 | Univ Indiana Res & Tech Corp | COAGONISTS OF GLUCAGON / GLP-1 RECEPTOR |
RU2012136450A (ru) | 2010-01-27 | 2014-03-10 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Конъюгаты антагонист глюкагона - агонист gip и композиции для лечения метаболических расстройств и ожирения |
CA2797095A1 (en) | 2010-05-13 | 2011-11-17 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity |
BR112012028707A2 (pt) | 2010-05-13 | 2019-09-24 | Univ Indiana Res & Tech Corp | composto de glucagon da superfamília de peptídeos exibindo atividade do receptor g com proteína acoplada, pró farmaco, dímero ou multímro, composição farmacêutica que o compreendem e método de administração do mesmo. |
KR20130102470A (ko) | 2010-06-24 | 2013-09-17 | 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 | 아미드계 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 프로드러그 |
EA201390941A1 (ru) | 2010-12-22 | 2013-12-30 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Аналоги глюкагона, проявляющие активность на рецепторе gip |
US9309301B2 (en) | 2011-06-22 | 2016-04-12 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists |
GEP20176629B (en) | 2011-06-22 | 2017-02-27 | Indiana Unversity Research And Tech Corporation | Glucagon/glp-1 receptor co-agonists |
JP6352806B2 (ja) | 2011-09-23 | 2018-07-04 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | 新規のグルカゴン類似体 |
CA2847246A1 (en) | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon superfamily peptides exhibiting glucocorticoid receptor activity |
WO2013164483A1 (en) | 2012-05-03 | 2013-11-07 | Zealand Pharma A/S | Gip-glp-1 dual agonist compounds and methods |
WO2013186240A2 (en) | 2012-06-14 | 2013-12-19 | Sanofi | Exendin-4 peptide analogues |
MX2014015558A (es) | 2012-06-21 | 2015-03-05 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Analogos de glucagon que exhiben actividad del receptor gip. |
PL2875043T3 (pl) | 2012-07-23 | 2017-06-30 | Zealand Pharma A/S | Analogi glukagonu |
TWI608013B (zh) | 2012-09-17 | 2017-12-11 | 西蘭製藥公司 | 升糖素類似物 |
UA116217C2 (uk) | 2012-10-09 | 2018-02-26 | Санофі | Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону |
UA116553C2 (uk) | 2012-12-21 | 2018-04-10 | Санофі | Пептидна сполука - агоніст рецептора glp-1 i glp |
MX365465B (es) | 2013-03-21 | 2019-06-04 | Sanofi Aventis Deutschland | Sintesis de productos peptidicos que contienen imida ciclica. |
CA2907454C (en) | 2013-03-21 | 2021-05-04 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of hydantoin containing peptide products |
WO2014161835A1 (en) | 2013-04-03 | 2014-10-09 | Sanofi | Modified blood glucose regulating proteins with altered pharmacological activity profile and preparation thereof |
SI2986313T1 (sl) * | 2013-04-18 | 2019-09-30 | Novo Nordisk A/S | Stabilni koagonisti GLP-1 / glukagonskega receptorja z dolgotrajnim učinkom za medicinsko uporabo |
UA118558C2 (uk) | 2013-05-28 | 2019-02-11 | Такеда Фармасьютікал Компані Лімітед | Пептидна сполука |
US9988429B2 (en) | 2013-10-17 | 2018-06-05 | Zealand Pharma A/S | Glucagon analogues |
SG11201602965WA (en) | 2013-10-17 | 2016-05-30 | Zealand Pharma As | Acylated glucagon analogues |
US10093713B2 (en) * | 2013-11-06 | 2018-10-09 | Zealand Pharma A/S | GIP-GLP-1 dual agonist compounds and methods |
CA2929107C (en) | 2013-11-06 | 2023-09-26 | Zealand Pharma A/S | Glucagon-glp-1-gip triple agonist compounds |
TW201609799A (zh) | 2013-12-13 | 2016-03-16 | 賽諾菲公司 | 雙重glp-1/gip受體促效劑 |
TW201609797A (zh) | 2013-12-13 | 2016-03-16 | 賽諾菲公司 | 雙重glp-1/升糖素受體促效劑 |
WO2015086730A1 (en) | 2013-12-13 | 2015-06-18 | Sanofi | Non-acylated exendin-4 peptide analogues |
TW201609795A (zh) | 2013-12-13 | 2016-03-16 | 賽諾菲公司 | 作為雙重glp-1/gip受體促效劑的艾塞那肽-4(exendin-4)胜肽類似物 |
TW201625670A (zh) | 2014-04-07 | 2016-07-16 | 賽諾菲公司 | 衍生自exendin-4之雙重glp-1/升糖素受體促效劑 |
TW201625669A (zh) | 2014-04-07 | 2016-07-16 | 賽諾菲公司 | 衍生自艾塞那肽-4(Exendin-4)之肽類雙重GLP-1/升糖素受體促效劑 |
TW201625668A (zh) | 2014-04-07 | 2016-07-16 | 賽諾菲公司 | 作為胜肽性雙重glp-1/昇糖素受體激動劑之艾塞那肽-4衍生物 |
US10570184B2 (en) | 2014-06-04 | 2020-02-25 | Novo Nordisk A/S | GLP-1/glucagon receptor co-agonists for medical use |
US9932381B2 (en) | 2014-06-18 | 2018-04-03 | Sanofi | Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists |
RU2716985C2 (ru) | 2014-10-29 | 2020-03-17 | Зилэнд Фарма А/С | Соединения-агонисты gip и способы |
JOP20200119A1 (ar) * | 2015-01-09 | 2017-06-16 | Lilly Co Eli | مركبات مساعد مشترك من gip وglp-1 |
WO2016166289A1 (en) | 2015-04-16 | 2016-10-20 | Zealand Pharma A/S | Acylated glucagon analogue |
AR105319A1 (es) | 2015-06-05 | 2017-09-27 | Sanofi Sa | Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico |
WO2016198624A1 (en) | 2015-06-12 | 2016-12-15 | Sanofi | Exendin-4 derivatives as trigonal glp-1/glucagon/gip receptor agonists |
AR105284A1 (es) | 2015-07-10 | 2017-09-20 | Sanofi Sa | Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón |
TWI622596B (zh) | 2015-10-26 | 2018-05-01 | 美國禮來大藥廠 | 升糖素受體促效劑 |
CA3024962A1 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Peptide compound |
WO2018104263A1 (en) | 2016-12-06 | 2018-06-14 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods of enhancing the potency of incretin-based drugs in subjects in need thereof |
JOP20180028A1 (ar) | 2017-03-31 | 2019-01-30 | Takeda Pharmaceuticals Co | مركب ببتيد |
TWI744579B (zh) * | 2017-12-21 | 2021-11-01 | 美商美國禮來大藥廠 | 腸促胰島素(incretin)類似物及其用途 |
WO2019140030A1 (en) | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Eli Lilly And Company | Combination therapy |
EP3699187A1 (en) * | 2019-02-21 | 2020-08-26 | Universite D'angers | Peptide targeting gip and glp-2 receptors for treating bone disorders |
CN110684082B (zh) * | 2019-10-08 | 2021-12-10 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | Gip和glp-1双激动多肽化合物及药学上可接受的盐与用途 |
MX2022009149A (es) * | 2020-01-23 | 2022-12-15 | Lilly Co Eli | Compuestos coagonistas de gip/glp1. |
CN115884982A (zh) | 2020-03-06 | 2023-03-31 | 赛诺菲 | 作为选择性gip受体激动剂的肽 |
CN115362165A (zh) * | 2020-03-11 | 2022-11-18 | 安尼根有限公司 | 包含新型化合物的用于抗糖尿病和抗肥胖的组合物 |
JP2024516070A (ja) * | 2021-05-28 | 2024-04-12 | 広東衆生睿創生物科技有限公司 | ポリペプチドの調製およびその使用 |
CN117440964A (zh) * | 2021-06-01 | 2024-01-23 | 南京知和医药科技有限公司 | 一种glp-1r和gipr双重靶向激动作用的多肽衍生物及其制备方法和用途 |
WO2023031455A1 (en) | 2021-09-06 | 2023-03-09 | Sanofi Sa | New peptides as potent and selective gip receptor agonists |
KR20230037391A (ko) * | 2021-09-09 | 2023-03-16 | 애니젠 주식회사 | 신규한 화합물을 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 조성물 |
WO2023088140A1 (zh) * | 2021-11-19 | 2023-05-25 | 南京明德新药研发有限公司 | 订合肽及其应用 |
WO2024059674A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Eli Lilly And Company | Gip and glp-1 dual agonist compounds |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010011439A2 (en) * | 2008-06-17 | 2010-01-28 | Indiana University Research And Technology Corporation | Gip-based mixed agonists for treatment of metabolic disorders and obesity |
WO2010016940A2 (en) * | 2008-08-07 | 2010-02-11 | Ipsen Pharma S.A.S. | Analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide |
WO2010016944A2 (en) * | 2008-08-07 | 2010-02-11 | Ipsen Pharma S.A.S. | Analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide (gip) modified at n-terminal |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050272652A1 (en) * | 1999-03-29 | 2005-12-08 | Gault Victor A | Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity |
WO2006121904A1 (en) * | 2005-05-06 | 2006-11-16 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Glucose-dependent insulinotropic polypeptide (gip) receptor agonists and their pharmacological methods of use |
WO2006121860A2 (en) * | 2005-05-06 | 2006-11-16 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Glucagon-like peptide 1 (glp-1) receptor agonists and their pharmacological methods of use |
JP5887265B2 (ja) | 2009-06-16 | 2016-03-16 | インディアナ・ユニバーシティ・リサーチ・アンド・テクノロジー・コーポレーション | Gip受容体活性グルカゴン化合物 |
RU2012136450A (ru) | 2010-01-27 | 2014-03-10 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Конъюгаты антагонист глюкагона - агонист gip и композиции для лечения метаболических расстройств и ожирения |
-
2011
- 2011-03-16 AR ARP110100835A patent/AR080592A1/es unknown
- 2011-03-18 TW TW100109463A patent/TWI535450B/zh not_active IP Right Cessation
- 2011-03-23 EA EA201270723A patent/EA022489B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-03-23 CN CN201180016089.5A patent/CN102821779B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-03-23 KR KR1020127025038A patent/KR101407775B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2011-03-23 SG SG2012071601A patent/SG184289A1/en unknown
- 2011-03-23 PE PE2012001634A patent/PE20130523A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-03-23 AU AU2011232597A patent/AU2011232597B2/en not_active Ceased
- 2011-03-23 ES ES11711424.9T patent/ES2568796T3/es active Active
- 2011-03-23 MA MA35233A patent/MA34077B1/fr unknown
- 2011-03-23 BR BR112012024373A patent/BR112012024373A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-03-23 CA CA2794664A patent/CA2794664A1/en not_active Abandoned
- 2011-03-23 EP EP11711424.9A patent/EP2552471B1/en active Active
- 2011-03-23 WO PCT/US2011/029501 patent/WO2011119657A1/en active Application Filing
- 2011-03-23 US US13/069,425 patent/US8815811B2/en active Active
- 2011-03-23 JP JP2013501419A patent/JP5887335B2/ja active Active
- 2011-03-23 MX MX2012011127A patent/MX2012011127A/es active IP Right Grant
-
2012
- 2012-08-30 TN TNP2012000432A patent/TN2012000432A1/en unknown
- 2012-09-07 CR CR20120457A patent/CR20120457A/es unknown
- 2012-09-07 DO DO2012000244A patent/DOP2012000244A/es unknown
- 2012-09-12 ZA ZA2012/06832A patent/ZA201206832B/en unknown
- 2012-09-24 GT GT201200263A patent/GT201200263A/es unknown
- 2012-09-24 CL CL2012002635A patent/CL2012002635A1/es unknown
- 2012-09-26 EC ECSP12012181 patent/ECSP12012181A/es unknown
- 2012-10-01 CO CO12171916A patent/CO6630128A2/es not_active Application Discontinuation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010011439A2 (en) * | 2008-06-17 | 2010-01-28 | Indiana University Research And Technology Corporation | Gip-based mixed agonists for treatment of metabolic disorders and obesity |
WO2010016940A2 (en) * | 2008-08-07 | 2010-02-11 | Ipsen Pharma S.A.S. | Analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide |
WO2010016944A2 (en) * | 2008-08-07 | 2010-02-11 | Ipsen Pharma S.A.S. | Analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide (gip) modified at n-terminal |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2011232597B2 (en) | 2015-01-29 |
CR20120457A (es) | 2012-10-16 |
CL2012002635A1 (es) | 2012-12-21 |
GT201200263A (es) | 2013-12-05 |
EA022489B1 (ru) | 2016-01-29 |
BR112012024373A2 (pt) | 2017-01-10 |
TW201201829A (en) | 2012-01-16 |
TWI535450B (zh) | 2016-06-01 |
ES2568796T3 (es) | 2016-05-04 |
US8815811B2 (en) | 2014-08-26 |
EA201270723A1 (ru) | 2013-01-30 |
EP2552471B1 (en) | 2016-03-16 |
PE20130523A1 (es) | 2013-04-25 |
ZA201206832B (en) | 2014-03-26 |
KR20120133402A (ko) | 2012-12-10 |
AR080592A1 (es) | 2012-04-18 |
KR101407775B1 (ko) | 2014-06-17 |
EP2552471A1 (en) | 2013-02-06 |
US20110237503A1 (en) | 2011-09-29 |
MA34077B1 (fr) | 2013-03-05 |
TN2012000432A1 (en) | 2014-01-30 |
AU2011232597A1 (en) | 2012-08-30 |
CO6630128A2 (es) | 2013-03-01 |
MX2012011127A (es) | 2012-10-15 |
JP5887335B2 (ja) | 2016-03-16 |
ECSP12012181A (es) | 2012-11-30 |
SG184289A1 (en) | 2012-11-29 |
WO2011119657A1 (en) | 2011-09-29 |
CA2794664A1 (en) | 2011-09-29 |
CN102821779A (zh) | 2012-12-12 |
JP2013523647A (ja) | 2013-06-17 |
DOP2012000244A (es) | 2013-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102821779B (zh) | 新型肽及其制备方法和应用 | |
ES2747928T3 (es) | Compuestos coagonistas de GIP y GLP-1 | |
CN108135981B (zh) | 胰高血糖素受体激动剂 | |
TW201716431A (zh) | 升糖素及glp-1共激動劑化合物 | |
CN105814076A (zh) | 用于治疗严重低血糖的新颖的化合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150311 Termination date: 20180323 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |