CN102812048A - 过敏抑制物质 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供一种利用了无定形裸藻淀粉的效能的过敏抑制物质，所述无定形裸藻淀粉是使裸藻淀粉的结晶结构发生变化而得的物质。本发明涉及用于抑制过敏性疾病的物质。所述过敏抑制物质是含有无定形裸藻淀粉的过敏抑制物质，所述无定形裸藻淀粉是将来自裸藻的结晶性裸藻淀粉无定形化而得到的，本无定形裸藻淀粉是利用X射线衍射法测得的相对于结晶性裸藻淀粉的结晶度的相对结晶度为20％以下的物质。这种过敏抑制物质能够有效地抑制作为过敏性疾病的特异反应性皮炎和花粉症等。

Description

过敏抑制物质
技术领域
本发明涉及利用无定形裸藻淀粉的效能的过敏抑制物质，所述无定形裸藻淀粉是使裸藻淀粉的结晶结构发生变化而得的物质。
背景技术
作为过敏性疾病之一的特异反应性皮炎，被认为是由于获得对于环境抗原(房屋灰尘，花粉，霉等)的过敏反应以及引起对于环境抗原的过度反应，而呈现出伴随发痒的皮炎症状。
为了使由上述过敏原而导致的致敏成立，需要基于抗原提呈细胞的抗原的吞噬和抗原信息的提呈，以及基于Th2型CD4+T细胞的抗原识别。
存在下述情况：Th2型CD4+T细胞浸润到皮肤病变区域，产出细胞因子，引发炎症的情况(4型过敏症)；以及引起由于向淋巴结移动了的Th2型CD4+T细胞使被B细胞的IgE致敏后的末梢组织中的肥大细胞脱粒而导致的炎症反应的情况(1型过敏症)。
人，动物的特异反应性皮炎，涉及这种4型过敏症和1型过敏症两者。
近年来，有报告指出β-1、3-葡聚糖具有免疫调节功能，显示出人的花粉症的症状改善效果等，但是有关该效果的报告少，详细情况尚未明确。
另一方面，作为β-1、3-葡聚糖，通常已知的是来自微生物的裸藻淀粉(paramylon)这样的多糖。
该裸藻淀粉是约700个葡萄糖通过β-1、3-键进行聚合而得的高分子体，是裸藻(Euglena)所含有的储备多糖。
所述裸藻淀粉从裸藻中分离出来，用于各种各样的用途。
如此分离而得的裸藻淀粉粒被认为有对机体的有效作用，并被用作食用。
例如，裸藻淀粉粒是多孔的，因此被认为具有吸附胆固醇等并向体外排出这样的效果。
另外，裸藻淀粉粒的粒子细小，因此还期待向化妆品，日用品等的应用。
进而，如上所述，β-1、3-葡聚糖作用于身体的免疫系统，并已确认具有抗菌作用，抗病毒作用，代谢改善作用，抗肿瘤性，抗过敏性等各种各样的效能，将上述的功能活用的研究正在被推进。
在这种状况下，利用裸藻分离裸藻淀粉，开发出了含有该裸藻淀粉的健康食品，补充剂等，并且开发出了用于药剂等各种用途中的技术。
作为其一例，例如专利文献1公开了含有裸藻淀粉的经冻干而得的药剂的技术。
在专利文献1所记载的技术中，从经培养的裸藻细胞中分离裸藻淀粉，制造含有该裸藻淀粉的非经口给药或经口给药的药剂。
而且，这种药剂可作为生物体用基质使用，特别是作为膏药，营养补充剂使用，可用于化妆品成分，医药成分的给药。
另外，专利文献2公开了含有裸藻属原生动物产出的β-1、3-葡聚糖作为改善干皮病等皮肤疾病的成分的技术。
在专利文献2的技术中，公开了通过使主剂等含有β-1、3-葡聚糖而进行涂布，或者包含在食品中而经口给药，从而能够改善干皮病等皮肤疾病这样的情况。
专利文献
专利文献1：日本特表2003-529538号公报
专利文献2：日本特开2004-339113号公报
发明内容
这样，对于由裸藻分离而得的裸藻淀粉，列举了用于各种各样的用途的实际成果。
另一方面，申请人为了更有效活用如上所述由裸藻分离而得的裸藻淀粉，进行了深入研究。
即，为了进一步深入地体现裸藻淀粉所产生的有用的功能，特别是为了体现其改善和消除皮炎的功能，而对裸藻淀粉自身实施了改良，得到了有用的见解。
对于本发明，裸藻淀粉被无定形化成“无定形裸藻淀粉”。
“无定形”(amorphous)是指非晶质，这是指不具有结晶那样的长程有序而具有短程有序的物质的状态。
热力学上是指处于自由能极小(非平衡准稳定状态)的状态。
即使为相同的物质，对于结晶状态和无定形状态，即便是相同的材料也存在物性大幅地变化的情况。
例如，已有报告指出存在导电性，导热性，光透射性，物理强度，耐腐蚀性，超导性等大幅地发生了改变的情况。
本发明的目的在于解决上述各个问题，涉及利用了无定形裸藻淀粉的效能的过敏抑制物质，所述无定形裸藻淀粉是使裸藻淀粉的结晶结构发生变化而得的物质。
上述课题是根据技术方案1所述的发明即过敏抑制物质，从而是用于抑制过敏性疾病的物质，通过含有无定形裸藻淀粉而解决上述课题，所述无定形裸藻淀粉是使来自裸藻的结晶性裸藻淀粉无定形化而得到的。
另外，此时，作为该无定形裸藻淀粉的特性，利用X射线衍射法测得的，相对于前述结晶性裸藻淀粉的结晶度的相对结晶度为20％以下。
这样，对于本发明，为了提高有效效果，而将结晶性裸藻淀粉无定形化，从而形成“无定形裸藻淀粉”。
应予说明，“结晶性裸藻淀粉”是指利用公知的方法由经培养的裸藻进行纯化而得的裸藻淀粉，通常可以以粉末体的形式提供。
即，在本说明书中，为了实现与“无定形”的物质性区别而使用了“结晶性”这样的文字。
这样，本发明将结晶性裸藻淀粉无定形化，形成非晶性(使用“非晶性”这样的文字，并非是指“完全不带有结晶结构”的意思，而是指“与结晶性裸藻淀粉相比，结晶性变低”)。
这样，通过进行无定形化，本发明所述的无定形裸藻淀粉的相对结晶度为20％以下，所述相对结晶度是利用X射线衍射法测得的，相对于结晶性裸藻淀粉的结晶度的相对结晶度。
这样，经无定形化而得的无定形裸藻淀粉显示出与结晶性裸藻淀粉末不同的物性(比重，结晶的大小等)，特别是成为具有抑制过敏效果的有效物质。
另外，具体而言，所述过敏是皮炎或花粉症，所述皮炎是包括1型过敏症和4型过敏症两者的特异反应性皮炎。
具有上述这样的特性的，本发明所述的过敏抑制物质，被包含在选自食品，药品，饲料中的至少一种制品中而被提供，从而有效地发挥作为有效效果的抑制过敏功能。
“包含”这样的文字是指“至少一部分作为成分而含有”这样的意思，在该概念中还包括“全部由无定形裸藻淀粉(过敏抑制物质)构成”的情况。
这样，本发明所述的含有无定形裸藻淀粉的过敏抑制物质，可在所有的形态下作为具有抑制过敏功能的物质而被提供，并且是可广泛地设想活用的场合的有用的物质。
发明的效果
本发明所述的过敏抑制物质利用无定形裸藻淀粉的效能，所述无定形裸藻淀粉是使结晶性裸藻淀粉的结晶结构发生变化而得的物质。
验证了通过施用由这种无定形裸藻淀粉构成的过敏抑制物质，能够有效地抑制过敏症状。
这样，本发明所述的过敏抑制物质可广泛地活用在有效抑制过敏性疾病这方面。
附图说明
图1是表示本发明的一个实施方式所述的无定形裸藻淀粉的制造工序的工序图。
图2是表示本发明的一个实施方式所述的无定形裸藻淀粉的衍射峰位置确认全扫描结果的扫描图。
图3是表示本发明的一个实施方式所述的无定形裸藻淀粉的衍射强度测定用详细扫描结果的扫描图。
图4是实验方案。
图5是表示皮炎得分结果的曲线图。
图6是拍摄耳廓的状态和背面皮肤状态而得的照片。
图7是表示耳廓的厚度的曲线图。
图8是拍摄皮肤的病理组织而得的照片。
图9是表示血清总IgE浓度的曲线图。
图10是表示血清IL-4浓度的曲线图。
图11是表示血清IFN-γ浓度的曲线图。
具体实施方式
以下，基于附图对本发明的一个实施方式进行说明。
应予说明，以下所说明的构成并不限定本发明，而是可在本发明的主旨的范围内进行各种改变的发明。
本实施方式涉及将结晶性裸藻淀粉无定形化而较之结晶性裸藻淀粉进一步提高了有用效果的无定形裸藻淀粉。
图1是表示无定形裸藻淀粉的制造工序的工序图，图2是表示无定形裸藻淀粉的衍射峰位置确认全扫描结果的扫描图，图3是表示无定形裸藻淀粉的衍射强度测定用详细扫描结果的扫描图，图4是实验方案，图5是表示皮炎得分结果的曲线图，图6是拍摄耳廓的状态和背面皮肤状态而得的照片，图7是表示耳廓的厚度的曲线图，图8是拍摄皮肤的病理组织而得的照片，图9是表示血清总IgE浓度的曲线图，图10是表示血清IL-4浓度的曲线图，图11是表示血清IFN-γ浓度的曲线图。
利用图1，对于无定形裸藻淀粉的制造方法进行说明。
应予说明，本制造方法是用于制造约40g的无定形裸藻淀粉的例子，为了增减无定形裸藻淀粉的制造量，可通过适当地改变规模来应对。步骤是相同的。
首先，在工序1中，调制1N的氢氧化钠水溶液。
在本实施方式中，调制2升氢氧化钠水溶液。
然后，在工序2中，向1N氢氧化钠水溶液中添加50g结晶性裸藻淀粉末而使其溶解。
结晶性裸藻淀粉末通过利用搅拌机搅拌1～2小时，从而溶解在1N氢氧化钠水溶液中。
这种结晶性裸藻淀粉末是利用公知的方法从经培养的裸藻中分离纯化而得的粉末。
接下来，在工序3中，利用1N盐酸，对溶解有裸藻淀粉末的1N氢氧化钠水溶液进行中和。
应予说明，随着1N盐酸的滴加，滴加部分发生凝胶化，在利用刮勺等使该凝胶崩碎的同时，继续中和反应直到可确认中和为止。
在中和结束了的时刻，水分完全被凝胶拢住，整体形成胶状。
接下来，在工序4中，为了分离水分而进行了离心分离。
所述离心分离在能够分离水分且回收沉淀的条件下进行即可。
在本实施方式中，利用100ml离心管在2500rpm下进行10分钟的离心分离。
接下来，在工序5中，舍弃上清液，进行沉淀的清洗。
在上述工序中，向沉淀中添加蒸馏水，进行搅拌，进行离心分离。
即，通过重复实施上清液废弃→蒸馏水添加→搅拌→离心分离这样的工序，对沉淀进行清洗，回收沉淀后的凝胶。
在本实施方式中，重复4次上述清洗工序。
接下来，在工序6中，将回收后的凝胶摊开在托盘上，利用冰箱进行冷冻，在工序7中通过冻干机进行冻干，得到无定形裸藻淀粉。
如此回收而得的无定形裸藻淀粉，其具有高吸湿性，因此，在某种程度上用手揉散后，保存在放入有干燥剂的干燥器中。
利用该操作，能够制作约40g的无定形裸藻淀粉。
接下来，对于本发明所述的无定形裸藻淀粉进行说明。
为了测定无定形裸藻淀粉的结晶度，进行了各裸藻淀粉样品的X射线衍射。
作为样品，准备了以下的样品。
(1)样品
1.样品A  结晶性裸藻淀粉
2.样品B  无定形裸藻淀粉(30g生产规模)
3.样品C  无定形裸藻淀粉(15g生产规模)
4.样品D  无定形裸藻淀粉(5g生产规模)
上述样品可在利用粉碎机粉碎后，通过X射线衍射装置进行分析。
应予说明，样品A是结晶性裸藻淀粉末，为了粉碎样品B～样品D，在将前处理条件设为相同的条件下，实施了粉碎处理。
另外，样品A为对照，推算作为经无定形化而得的裸藻淀粉的样品B～样品D的相对于样品A的相对结晶度。
(2)前处理
1.粉碎器
Retsh公司制球磨机MM400
粉碎条件：振动数20次/秒，粉碎时间5分钟
2.X射线衍射装置
Spectris公司制H’PertPRO
测定条件：管电压45KV，管电流40mA
测定范围：2θ5～70°(衍射峰位置确认全扫描)
          2θ5～30°(强度测定用详细扫描)
(3)分析
1.峰位置确认
利用全扫描确认衍射峰位置，确定用于测定衍射峰强度的角度。
2.衍射峰强度测定
按照在上述峰位置确认中确定的角度实施详细扫描，测定衍射峰强度。
基于该结果，算出衍射峰强度比作为相对结晶度。
(4)结果
1.峰位置确认
衍射峰位置确认全扫描的结果由图2示出。
如图2所示，对于样品A，能够在2θ＝20°的附近观测到显著的峰。
由此，将进行强度测定用详细扫描的范围确定为2θ为5°～30°的范围。
2.强度测定结果
强度测定用详细扫描的结果由图3示出。
如图3所示，确认了样品B～样品D的2θ＝20°的附近的衍射峰与样品A的衍射峰相比变小，由此可知样品B～样品D的结晶度与样品A的结晶度相比变小。
3.结晶度计算
强度测定结果与作为无定形裸藻淀粉的样品的样品B～样品D的相对结晶度的计算结果由表1示出。
[表1]
  样品   衍射峰强度(counts)   相对结晶度(％)
  A   380771.3   100
  B   6220.2   1.6
  C   60968.9   16.0
  D   21036.5   5.5
相对结晶度基于强度测定结果由下式算出。
相对结晶度(％)＝(样品衍射峰强度/对照衍射峰强度)×100
即，将作为对照的结晶性裸藻淀粉的结晶度设为100％，算出经无定形化而得的裸藻淀粉的结晶度。
由此可知：可认为无定形裸藻淀粉的相对结晶度为相对结晶度20％以下左右，更详细而言，达到相对结晶度16％以下。
应予说明，在作为衍射峰位置确认全扫描的结果的图2中，除了2θ＝20°附近的峰以外，还存在其他数根尖锐的峰。
这在样品B～样品D中相同地出现，因此可认为是相同的结构所致，由此可知：通过无定形化，结晶结构发生变化，形成与结晶性裸藻淀粉不同的结构。
这种情况可推测出具有下述可能性：原本为三重螺旋的β-1、3-葡聚糖的结晶结构通过进行无定形化而消失，出现了并非螺旋结构的β-1、3-葡聚糖的立体结构的峰或常态的单链的β-1、3-葡聚糖的峰等。
如上所述，通过将结晶性裸藻淀粉无定形化，形成无定形裸藻淀粉，从而可使结晶结构发生变化，创造出与此相伴的有用的效果。
也就是说，无定形裸藻淀粉能够较高地发挥出通常的结晶结构的结晶性裸藻淀粉所没有或者通常结构的结晶性裸藻淀粉效果较低的效能。
接下来，示出效果的一例。
使用的是特异反应性皮炎模型小鼠。
对于实验方法进行说明。
首先，购入NC/Nga小鼠，雄性，5周龄，在进行了一周的驯化饲养后，按照图4所示的方案进行实验和评价。
NC/Nga小鼠是以使皮炎自然发病为目的而制成的自然发病皮炎模型小鼠。
在试验期间(时间期间：54天)，每天使NC/Nga小鼠自由地摄取混入有规定量的被检物质的粉末饲料以及未混入被检物的粉末饲料(阴性和阳性对照)。
施用被检物质后第7天，为了致敏，而刮去背部和腹部的毛，在胸，腹部，后肢(脚垫)涂布150μl的接触皮炎致敏性物质三硝基氯苯(2、4、6-Trinitrochlorobenzene：以下为“TNCB”)溶液。
TNCB溶液使用的是在按照99.5％乙醇∶丙酮＝4∶1的比例混合而得的溶液中以5％的浓度溶解TNCB而形成的溶液。
致敏后第4天以后，每隔1周，在背部和左右耳廓两面涂布TNCB溶液。
TNCB溶液在背部涂布130μl，在耳廓单面涂布10μl。
致敏后第47天实施安乐死，采取背部皮肤，左右耳廓，血液，实施了各种评价。
试验组设为：
a.阴性对照(TNCB非致敏)：施用标准饲料
b.阳性对照：施用标准饲料
c.施用结晶性裸藻淀粉0.1％(混合在饲料中)
d.施用结晶性裸藻淀粉1％(混合在饲料中)
e.施用无定形裸藻淀粉0.1％(混合在饲料中)
f.施用无定形裸藻淀粉1％(混合在饲料中)。
各组中n＝10。
(1)皮炎得分
结果由图5示出。
图5表示皮炎得分的结果。
皮炎得分是指：基于以下的程度，以0(无症候)，1(轻微)，2(中等程度)，3(严重)这四个阶段进行评价，将总分数作为得分而示出(0～12分)。
a.发红，出血
b.浮肿
c.擦伤，表皮剥离，组织损伤
d.干皮，痂皮
致敏后，在第0，4，11，18，25，32，39，46，47天，实施评价。
如图5所示可知，在阳性对照组中发现了显著的皮炎症候，与此相对，结晶性裸藻淀粉给药组和无定形裸藻淀粉给药组抑制了皮炎症候。
而且，在阳性对照组与结晶性裸藻淀粉给药组和无定形裸藻淀粉给药组之间，具有显著差异(显著性水平5％)。
而且，在结晶性裸藻淀粉给药组与无定形裸藻淀粉给药组之间也具有显著差异(显著性水平5％)，验证出无定形裸藻淀粉给药组一方更有效地抑制了皮炎症候。
(2)耳廓肥厚
致敏后，利用表盘式厚度规(ダイヤルシツクネスゲ一ジ)(型号G-6C，株式会社尾崎制作所)测定第0，4，11，18，25，32，39，46，47天的耳廓的厚度。
结果如图6(照片)和图7所示。
如图6所示可知，在阳性对照组中，耳廓明显肥厚并发生变形。
这是由于皮炎的症状发生了进展。
与此相对，在结晶性裸藻淀粉给药组和无定形裸藻淀粉给药组中，发现该症状被抑制。
由此可知，在结晶性裸藻淀粉给药组和无定形裸藻淀粉给药组中，皮炎的进展受到抑制。
另外，如图7所示，对于致敏后第47天的耳廓的厚度，在阳性对照组与结晶性裸藻淀粉1％给药组之间，阳性对照组与无定形裸藻淀粉0.1％给药组和无定形裸藻淀粉1％给药组之间，结晶性裸藻淀粉0.1％给药组和结晶性裸藻淀粉1％给药组与无定形裸藻淀粉0.1％给药组和无定形裸藻淀粉1％给药组之间，有显著差异(显著性水平5％)。
由此可验证出：结晶性裸藻淀粉自身也体现了皮炎抑制效果，但是经无定形化而得的无定形裸藻淀粉一方会更有效地抑制皮炎。
(3)皮肤的病理组织学所见
制作各组的皮肤的石蜡包埋切片，实施HE染色。
结果由图8(照片)示出。
如图8所示，在阴性对照组中，未发现清晰的病理组织学变化，与此相对，在阳性对照组中观察到了表皮的肥厚，角质化亢进，以真皮中的嗜酸粒细胞，肥大细胞，淋巴细胞为代表的炎症细胞的浸润。
在结晶性裸藻淀粉给药组和无定形裸藻淀粉给药组中，发现了该组织学所见的减轻。
对于这种效果，与结晶性裸藻淀粉给药组相比，无定形裸藻淀粉给药组一方更大，对双方而言，与0.1％给药组相比，1％给药组一方的效果更大。
(4)血清总IgE浓度
使用小鼠IgE测定试剂盒(CosmoBio YSE-7675)，按照ELISA法实施测定。
结果由图9示出。
在阳性对照组中，发现了血清IgE浓度的显著上升，与此相对，在结晶性裸藻淀粉给药组和无定形裸藻淀粉给药组中，抑制了血清IgE上升。
另外，在阳性对照组与无定形裸藻淀粉0.1％给药组和无定形裸藻淀粉1％给药组之间，具有显著差异(显著性水平5％)，可知在无定形裸藻淀粉给药组中抑制了血清IgE浓度的上升。
由该结果启示出：无定形裸藻淀粉可有效地抑制特异反应性皮炎，特别是可以有效抑制1型过敏症。
也就是说，特异反应性皮炎的1型过敏症，是由于向淋巴结移动了的Th2型CD4+T细胞使被B细胞的IgE致敏后的末梢组织中的肥大细胞脱粒而导致的炎症反应，因此启示出可利用无定形裸藻淀粉使IgE减少，抑制本症状。
另外，由该结果启示出：无定形裸藻淀粉对作为过敏之一的花粉症的抑制是有效的。
即，启示出：因无定形裸藻淀粉抑制血清IgE浓度的上升，使与花粉的过敏原结合的IgE减少，无定形裸藻淀粉对抑制过敏症状是有效的。
换言之，启示出：无定形裸藻淀粉具有免疫调节功能，显示出特异反应性皮炎的1型过敏症和人的花粉症的症状改善效果。
(5)血清细胞因子
实施了作为血清细胞因子的血清IL-4浓度和血清IFN-γ浓度的测定。
其结果如图10和图11所示。
如图10所示，在阳性对照组中，发现了血清IL-4浓度的显著上升，与此相对，在结晶性裸藻淀粉给药组和无定形裸藻淀粉给药组中，抑制了血清IL-4浓度的上升。
在阳性对照组与无定形裸藻淀粉0.1％给药组和无定形裸藻淀粉1％给药组之间，具有显著差异(显著性水平5％)，对于无定形裸藻淀粉给药组，可知抑制了血清IL-4浓度的上升。
应予说明，如图11所示，在阳性对照组中，发现了血清IFN-γ浓度的显著上升。
在结晶性裸藻淀粉各给药组和无定形裸藻淀粉各给药组中，发现了血清IFN-γ浓度的减少趋势，但未产生统计学上的显著差异。
但是，如图11所示，发现了血清IFN-γ浓度的减少趋势，因此可认为对于结晶性裸藻淀粉和无定形裸藻淀粉而言，存在抑制血清IFN-γ浓度上升的效果。
由该结果启示出：无定形裸藻淀粉有效地抑制特异反应性皮炎的4型过敏症。
也就是说，可知：对于特异反应性皮炎的4型过敏症而言，Th2型CD4+T细胞浸润到皮肤病变区域，产出细胞因子而引起炎症，但是无定形裸藻淀粉使细胞因子减少，有效地抑制特异反应性皮炎的4型过敏症。
这样，在结晶性裸藻淀粉自身中发现了抑制各过敏性疾病的效果，但与这样的通常的结晶性裸藻淀粉相比，验证出无定形裸藻淀粉抑制各过敏性疾病的效果更高。
这样，无定形裸藻淀粉成为通过进行无定形化而发挥出通常的结晶性裸藻淀粉所没有的效果的物质。
也就是说，验证出无定形裸藻淀粉作为有效抑制过敏性疾病的过敏抑制物质而发挥功能。
在本实施方式中，进行了经口给药，但给药方法并不限于此，只要不脱离本发明的主旨，就可以为任意的给药方法。
也就是说，不仅用作药品，还能够与其他的材料混和而活用作健康食品，还能够设想出作为饲料等的用途。
如上所述，无定形裸藻淀粉可被期待作为过敏抑制物质而用于广泛的用途。

Claims (5)

1.一种过敏抑制物质，其特征在于，是用于抑制过敏性疾病的物质，所述过敏抑制物质由将来自裸藻的结晶性裸藻淀粉无定形化而得到的无定形裸藻淀粉构成。
2.根据权利要求1所述的过敏抑制物质，其特征在于，所述无定形裸藻淀粉的相对结晶度为20％以下，所述相对结晶度是利用X射线衍射法测得的相对于所述结晶性裸藻淀粉的结晶度的相对结晶度。
3.根据权利要求1所述的过敏抑制物质，其特征在于，所述过敏性疾病为皮炎或者花粉症。
4.根据权利要求3所述的过敏抑制物质，其特征在于，所述皮炎是包括1型过敏症和4型过敏症两者的特异反应性皮炎。
5.根据权利要求1或4所述的过敏抑制物质，其特征在于，所述过敏抑制物质被包含在选自食品，药品，饲料中的至少一种制品中。
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