KR20130016212A

KR20130016212A - 알레르기 억제 물질

Info

Publication number: KR20130016212A
Application number: KR1020127023461A
Authority: KR
Inventors: 켄고 스즈키
Original assignee: 가부시키가이샤 유그레나
Priority date: 2010-03-09
Filing date: 2011-03-08
Publication date: 2013-02-14
Also published as: CN102812048B; CN102812048A; US20120329752A1; SG183518A1; JP5612875B2; KR101786788B1; WO2011111707A1; US8877737B2; JP2011184371A

Abstract

본 발명의 목적은 파라밀론의 결정 구조를 변화시킨 물질인 아몰퍼스 파라밀론의 효능을 이용한 알레르기 억제 물질을 제공하는 것에 있다.
알레르기성 질환을 억제하기 위한 물질에 관한 것이다. 유글레나 유래의 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화한 아몰퍼스 파라밀론으로 이루어지는 알레르기 억제 물질로서, 본 아몰퍼스 파라밀론은 X선 회절법에 의한 결정성 파라밀론의 결정도에 대한 상대 결정도가 20% 이하인 물질이다. 　이 알레르기 억제 물질은 알레르기성 질환인 아토피성 피부염 및 화분증 등을 유효하게 억제할 수 있다.

Description

알레르기 억제 물질{ALLERGY INHIBITOR}

본 발명은 파라밀론의 결정 구조를 변화시킨 물질인 아몰퍼스 파라밀론의 효능을 이용한 알레르기 억제 물질에 관한 것이다.

알레르기성 질환의 하나인 아토피성 피부염에서는 환경항원(하우스 더스트·화분·곰팡이 등)에 대한 알레르기 반응의 획득 및 그것에 대한 과잉반응이 일어남으로써 가려움을 수반하는 피부염 증상을 보인다고 생각되고 있다.

이들 알레르겐에 의한 감작이 성립하기 위해서는 항원제시세포에 의한 항원의 탐식과 항원 정보의 제시 및 Th2형CD4+T세포에 의한 항원인식이 필요하다.

Th2형CD4+T세포가 피부병변영역에 침윤하고, 사이토카인을 산출하여 염증을 야기하는 경우(4형 과민증)와, 또한 림프절로 이동한 Th2형CD4+T세포가 B세포의 IgE에 감작된 말초 조직에 있어서의 비만 세포의 탈과립에 의한 염증 반응이 일어나는 경우(1형 과민증)가 있다.

사람·동물의 아토피성 피부염에는 이 4형 과민증과 1형 과민증의 양쪽이 관여하고 있다.

최근, β-1,3-glucan이 면역조절기능을 가지고, 사람의 화분증의 증상 개선 효과를 나타내는 것 등이 보고되고 있지만, 당해 효과에 관한 보고는 적고, 상세하게는 밝혀져 있지 않다.

한편, β-1,3-glucan으로서 미생물 유래의 파라밀론(paramylon)이라는 다당이 일반적으로 알려져 있다.

이 파라밀론은 약700개의 글루코오스가 β-1,3-결합에 의해 중합한 고분자체이며, 유글레나(Euglena)가 함유하는 저장다당이다.

이 파라밀론은 유글레나로부터 단리되어, 다양한 용도에 사용되고 있다.

이러한 단리된 파라밀론립은 신체에 유효한 작용이 확인되고 있어, 식용으로서 활용되고 있다.

예를 들면, 파라밀론립은 다공질인 점에서 콜레스테롤 등을 흡착하여 체외로 배출한다는 효과가 있다고 일컬어지고 있다.

또, 파라밀론립은 입자가 세세한 점에서 화장품이나 일용품 등으로의 응용도 기대되고 있다.

또한, 상기한 바와 같이 β-1,3-glucan은 신체의 면역기구에 작용하여, 항균작용, 항바이러스작용, 대사개선작용, 항종양성, 항알레르기성 등의 다양한 효능이 확인되어 있으며, 이러한 기능을 활용하는 연구도 진행되고 있다.

이러한 상황하에서, 유글레나로부터 파라밀론을 단리하여, 이 파라밀론을 함유한 건강식품이나 서플리먼트 등이 개발되고 있음과 아울러, 약제 등 다양한 용도에 이용하는 기술이 개발되고 있다.

그 일례로서, 예를 들면 특허문헌 1에는 파라밀론을 함유하는 동결건조한 약제의 기술이 개시되어 있다.

특허문헌 1에 기재된 기술에서는, 배양한 유글레나 세포로부터 파라밀론을 단리하여, 이 파라밀론을 함유시킨 비경구 투여 또는 경구 투여의 약제를 제조한다.

그리고, 그 약제는 생체용 매트릭스, 특히 플래스터, 영양보조제로서의 사용, 화장품 성분, 의약 성분의 투여를 위해 사용된다.

또, 특허문헌 2에는 피부가 거칠어지는 등의 피부 질환을 개선하는 성분으로서 유글레나속 원생동물이 산출하는 β-1,3-glucan을 함유시키는 기술이 개시되어 있다.

특허문헌 2의 기술에서는 β-1,3-glucan을 기제 등에 함유시켜 도포하거나, 식품에 함유시켜 경구 투여함으로써 피부가 거칠어지는 등의 피부 질환을 개선할 수 있는 것이 개시되어 있다.

일본 공표특허공보 2003-529538호 일본 공개특허공보 2004-339113호

이와 같이 유글레나로부터 단리된 파라밀론은 다양한 용도에 사용되어 실적을 올리고 있다.

한편, 출원인은 이와 같이 유글레나로부터 단리된 파라밀론을 더욱 유효하게 활용하기 위해서 예의 연구를 거듭했다.

즉, 파라밀론이 나타내는 유용한 기능, 특히 피부염을 개선 및 해소하는 기능을 더욱 크게 발현시키기 위해, 파라밀론 자체에 개량을 더해 유용한 지견을 얻은 것이다.

본 발명에 있어서는, 파라밀론은 아몰퍼스화되어 「아몰퍼스 파라밀론」으로 되어 있다.

「아몰퍼스」(amorphous)는 비정질을 말하며, 이것은 결정과 같은 장거리 질서는 없지만, 단거리 질서를 가지는 물질의 상태를 가리킨다.

열역학적으로는 자유에너지의 극소(비평형준안정상태)에 있는 상태를 말한다.

동일한 물질이어도 결정 상태와 아몰퍼스 상태에서는 동일한 재료라도 물성이 큰 폭으로 변하는 경우가 있다.

예를 들면, 전기전도성, 열전도성, 광투과성, 물리적 강도, 내부식성, 초전도성 등이 큰 폭으로 변해버리는 일이 있는 것이 보고되어 있다.

본 발명의 목적은 상기 각 문제점을 해결함에 있으며, 파라밀론의 결정 구조를 변화시킨 물질인 아몰퍼스 파라밀론의 효능을 이용한 알레르기 억제 물질에 관한 것이다.

상기 과제는 청구항 1에 따른 발명인 알레르기 억제 물질에 의하면, 알레르기성 질환을 억제하기 위한 물질로서, 유글레나 유래의 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화한 아몰퍼스 파라밀론으로 이루어지는 것에 의해 해결된다.

또, 이 때, 이 아몰퍼스 파라밀론의 특성으로서는 X선 회절법에 의한 상기 결정성 파라밀론의 결정도에 대한 상대 결정도가 20% 이하이다.

이와 같이, 본 발명에 있어서는, 유효 효과를 향상시키기 위해, 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화하여 「아몰퍼스 파라밀론」으로 했다.

또한, 「결정성 파라밀론」은 배양된 유글레나로부터 공지의 방법으로 정제된 파라밀론을 가리키고, 통상 분말체로서 제공된다.

즉, 본 명세서에 있어서는, 「아몰퍼스」라는 물질적 구별을 도모하기 위해 「결정성」이라는 문언을 사용한 것이다.

이와 같이, 본 발명에 의하면, 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화하고 비정성으로 했다(단, 「전혀 결정 구조를 가지지 않는다」라는 의미가 아니라, 「결정성 파라밀론에 비해 결정성이 낮게 되어 있다」라는 의미로 「비정성」이라는 문언을 사용한다).

이와 같이, 아몰퍼스화함으로써 본 발명에 따른 아몰퍼스 파라밀론에 있어서는 X선 회절법에 의한 결정성 파라밀론의 결정도에 대한 상대 결정도가 20% 이하로 되어 있다.

이와 같이, 아몰퍼스화된 아몰퍼스 파라밀론은 결정성 파라밀론 분말체와는 상이한 물성을 나타내고(비중, 결정의 크기 등), 특히 알레르기 억제 효과를 가지는 유효한 물질이 된다.

또, 구체적으로는 상기 알레르기는 피부염 혹은 화분증이며, 상기 피부염은 1형 과민증 및 4형 과민증 양쪽을 포함하는 아토피성 피부염이다.

상기와 같은 특성을 가진 본 발명에 따른 알레르기 억제 물질은 식품, 약품, 사료로부터 선택되는 적어도 하나의 제품에 함유되어 제공됨으로써 유효한 효과인 알레르기 억제 기능을 유효하게 나타낸다.

「함유」라는 문언은 「적어도 일부에 성분으로서 포함된다」라는 의미이며, 「전부가 아몰퍼스 파라밀론(알레르기 억제 물질)로 구성되는」 것도 그 개념에 포함한다.

이와 같이, 본 발명에 따른 아몰퍼스 파라밀론으로 이루어지는 알레르기 억제 물질은 모든 형태에서 알레르기 억제 기능을 가지는 물질로서 제공될 수 있음과 아울러, 널리 활용의 장을 상정할 수 있는 유용한 물질이다.

본 발명에 따른 알레르기 억제 물질은 결정성 파라밀론의 결정 구조를 변화시킨 물질인 아몰퍼스 파라밀론의 효능을 이용한 것이다.

이 아몰퍼스 파라밀론으로 구성되는 알레르기 억제 물질을 투여함으로써 알레르기 증상이 유효하게 억제되는 것을 알 수 있었다.

이와 같이, 본 발명에 따른 알레르기 억제 물질은 알레르기성 질환을 유효하게 억제하기 위해서 널리 활용할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시형태에 따른 아몰퍼스 파라밀론의 제조 공정을 나타내는 공정도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시형태에 따른 아몰퍼스 파라밀론의 회절 피크 위치 확인 풀스캔 결과를 나타내는 스캔차트이다.
도 3은 본 발명의 일 실시형태에 따른 아몰퍼스 파라밀론의 회절 강도 측정용 상세 스캔 결과를 나타내는 스캔차트이다.
도 4는 실험 프로토콜이다.
도 5는 피부염 스코어 결과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 귓바퀴의 상태 및 배면 피부 상태를 촬상한 사진이다.
도 7은 귓바퀴의 두께를 나타내는 그래프이다.
도 8은 피부의 병리 조직을 촬상한 사진이다.
도 9는 혈청 총 IgE 농도를 나타내는 그래프이다.
도 10은 혈청 IL-4 농도를 나타내는 그래프이다.
도 11은 혈청 IFN-γ 농도를 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명의 일 실시형태를 도면에 기초하여 설명한다.

또한, 이하에 설명하는 구성은 본 발명을 한정하는 것은 아니며, 본 발명의 취지의 범위 내에서 다양하게 개변할 수 있는 것이다.

본 실시형태는 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화하여 결정성 파라밀론보다 유용효과를 향상시킨 아몰퍼스 파라밀론에 관한 것이다.

도 1은 아몰퍼스 파라밀론의 제조 공정을 나타내는 공정도, 도 2는 아몰퍼스 파라밀론의 회절 피크 위치 확인 풀스캔 결과를 나타내는 스캔차트, 도 3은 아몰퍼스 파라밀론의 회절 강도 측정용 상세 스캔 결과를 나타내는 스캔차트, 도 4는 실험 프로토콜, 도 5는 피부염 스코어 결과를 나타내는 그래프, 도 6은 귓바퀴의 상태 및 배면 피부 상태를 촬상한 사진, 도 7은 귓바퀴의 두께를 나타내는 그래프, 도 8은 피부의 병리 조직을 촬상한 사진, 도 9는 혈청 총 IgE 농도를 나타내는 그래프, 도 10은 혈청 IL-4 농도를 나타내는 그래프, 도 11은 혈청 IFN-γ 농도를 나타내는 그래프이다.

도 1에 따라, 아몰퍼스 파라밀론의 제조 방법에 대해서 설명한다.

또한, 본 제조 방법은 약40g의 아몰퍼스 파라밀론을 제조하기 위한 예이며, 아몰퍼스 파라밀론의 제조량을 증감시키기 위해서는 적당히 스케일을 변경함으로써 대응한다. 순서는 마찬가지이다.

우선, 공정 1에서 1N의 수산화나트륨 수용액을 조정한다.

본 실시형태에 있어서는, 수산화나트륨 수용액을 2리터 조정했다.

다음에 공정 2에서 1N 수산화나트륨 수용액에 결정성 파라밀론 분말을 50g 첨가하여 용해시킨다.

결정성 파라밀론 분말은 1~2시간 스터러로 교반함으로써 1N 수산화나트륨 수용액에 용해시켰다.

이 결정성 파라밀론 분말은 배양한 유글레나로부터 공지의 방법으로 분리 정제된 것이다.

다음에 공정 3에서 1N 염산에 의해 파라밀론 분말이 용해한 1N 수산화나트륨 수용액을 중화했다.

또한, 1N 염산을 적하함에 따라 적하 부분이 겔화하지만, 이 겔을 스파텔 등으로 부수면서 중화가 확인될 때까지 중화 반응을 계속했다.

중화가 완료된 시점에서는 수분이 겔에 완전히 합쳐져 전체가 젤리상태가 된다.

다음에 공정 4에서 수분을 분리하기 위해 원심분리를 했다.

이 원심분리는 수분이 분리되고 침전을 회수할 수 있는 조건에서 행하면 된다.

본 실시형태에 있어서는, 100ml 원심관에서 2500rpm, 10분간의 원심분리를 했다.

다음에 공정 5에서 상청을 버리고, 침전의 세정을 행한다.

이 공정에서는 증류수를 침전에 첨가하여 교반하고, 원심분리를 행한다.

즉, 상청 폐기→증류수 첨가→교반→원심분리라는 공정을 반복하여 실시함으로써 침전을 세정하고, 침전한 겔을 회수한다.

본 실시형태에 있어서는, 4회의 상기 세정 공정을 반복했다.

다음에 공정 6에서 회수한 겔을 배트에 펼쳐, 냉동고에서 동결시키고, 공정 7에서 동결 건조기에 의해 동결 건조시켜, 아몰퍼스 파라밀론을 얻었다.

이렇게 하여 회수한 아몰퍼스 파라밀론은 흡습성이 높기 때문에, 어느정도 손으로 푼 후, 건조제를 넣은 데시케이터에서 보존한다.

이 조작으로 약40g의 아몰퍼스 파라밀론을 작성할 수 있었다.

다음에 본 발명에 따른 아몰퍼스 파라밀론에 대해서 설명한다.

아몰퍼스 파라밀론의 결정도를 측정하기 위해서, 각 파라밀론 샘플의 X선 회절을 행했다.

샘플로서는 이하의 샘플을 준비했다.

(1) 샘플

1.샘플A 결정성 파라밀론

2.샘플B 아몰퍼스 파라밀론(30g 생산 스케일)

3.샘플C 아몰퍼스 파라밀론(15g 생산 스케일)

4.샘플D 아몰퍼스 파라밀론(5g 생산 스케일)

이들 샘플은 분쇄기에 의해 분쇄된 후, X선 회절 장치에 의해 분석된다.

또한, 샘플A는 결정성 파라밀론 분말이지만, 샘플B 내지 샘플D를 분쇄하기 때문에, 전처리 조건을 동일하게 하는 조건에서 분쇄 처리를 실시했다.

또, 샘플A는 대조이며, 아몰퍼스화된 파라밀론인 샘플B 내지 샘플D의 샘플A에 대한 상대 결정도를 산정한다.

(2) 전처리

1.분쇄기

Retsh사제 볼밀 MM400

분쇄 조건 : 진동수 20회/초, 분쇄 시간 5분

2.X선 회절 장치

스펙트리스사제 H'PertPRO

측정 조건 : 관전압 45KV, 관전류 40mA

측정 범위 : 2θ 5~70°(회절 피크 위치 확인 풀스캔)

　　　　　　2θ 5~30°(강도 측정용 상세 스캔)

(3) 분석

1.피크 위치 확인

풀스캔에서 회절 피크 위치를 확인하고, 회절 피크 강도 측정에 사용하는 각도를 결정했다.

2.회절 피크 강도 측정

상기 피크 위치 확인으로 결정한 각도에서 상세 스캔을 실시하고, 회절 피크 강도를 측정했다.

그 결과를 기초로 회절 피크 강도비를 상대 결정도로서 산출했다.

(4) 결과

1.피크 위치 확인

회절 피크 위치 확인 풀스캔의 결과를 도 2에 나타낸다.

도 2에 나타내는 바와 같이, 샘플A에 있어서 2θ=20°의 부근에 현저한 피크를 관측할 수 있었다.

따라서, 강도 측정용 상세 스캔을 행하는 범위를 2θ가 5° 내지 30°의 범위라고 결정했다.

2.강도 측정 결과

강도 측정용 상세 스캔의 결과를 도 3에 나타낸다.

도 3에 나타내는 바와 같이, 샘플B 내지 샘플D에 있어서의 2θ=20°의 부근의 회절 피크가 샘플A의 회절 피크에 비해 작게 되어 있는 것이 확인되어, 이 점에서 샘플B 내지 샘플D의 결정도가 샘플A의 결정도에 비해 작게 되어 있는 것을 알 수 있다.

3.결정도 산출

강도 측정 결과와 아몰퍼스 파라밀론의 샘플인 샘플B 내지 샘플D의 상대 결정도의 산출 결과를 표 1에 나타낸다.

샘플	회절 피크 강도(counts)	상대 결정도(%)
A	380771.3	100
B	6220.2	1.6
C	60968.9	16.0
D	21036.5	5.5

상대 결정도는 강도 측정 결과에 기초하여 하기 식으로 산출한다.

상대 결정도(%)=(샘플 회절 피크 강도/대조 회절 피크 강도)×100

즉, 대조인 결정성 파라밀론의 결정도를 100%로 하고, 아몰퍼스화한 파라밀론의 결정도를 산출한 것이다.

이와 같이, 아몰퍼스 파라밀론의 상대 결정도는 상대 결정도 20% 이하 정도라고 생각되며, 보다 상세하게는 상대 결정도 16% 이하로 되어 있는 것을 알 수 있다.

또한, 회절 피크 위치 확인 풀스캔의 결과인 도 2에는 그 밖에 2θ=20° 부근의 피크 이외에 몇개의 샤프한 피크가 존재한다.

이것은 샘플B 내지 샘플D에 공통으로 나타나 있는 점에서, 마찬가지의 구조에 의한 것이라고 생각되며, 이 점에서도 아몰퍼스화에 의해 결정 구조가 변화되어, 결정성 파라밀론과는 상이한 구조가 된 것을 알 수 있다.

이것은 원래는 3중 나선이었던 β-1,3-glucan의 결정 구조가 아몰퍼스화를 행함으로써 없어져, β-1,3-glucan의 나선 구조가 아닌 입체 구조의 피크 혹은 노멀한 1본쇄의 β-1,3-glucan의 피크 등이 나타나 있을 가능성이 있다고 추측된다.

이상과 같이, 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화하여 아몰퍼스 파라밀론을 형성함으써, 결정 구조를 변화시켜, 이것에 따른 유용한 효과를 창출할 수 있다.

즉, 통상의 결정 구조의 결정성 파라밀론에는 없는 혹은 통상 구조의 결정성 파라밀론에 있어서는 낮은 효능을 아몰퍼스 파라밀론은 높게 발휘할 수 있는 것이다.

다음에 효과의 일례를 나타낸다.

아토피성 피부염 모델 마우스를 사용했다.

실험 방법에 대해서 설명한다.

우선, NC/Nga 마우스, 수컷, 5주령을 구입하고, 1주간의 순치사육 후, 도 4에 나타내는 프로토콜에 기초하여 실험 및 평가를 했다.

NC/Nga 마우스는 피부염을 자연발증시키는 것을 목적으로 하여 작성된 자연발증 피부염 모델 마우스이다.

NC/Nga 마우스에는 피험 물질을 소정량 혼입한 분말 사료 및 피험물을 혼입하지 않은 분말 사료(음성 및 양성 컨트롤)를 시험 기간중, 매일 자유롭게 섭취시켰다(시험 기간 : 54일).

피험 물질 투여후 7일째에 배부 및 복부를 제모하고, 접촉 피부염 감작성 물질 트리니트로클로로벤젠(2,4,6-Trinitrochlorobenzene:이하 「TNCB」) 용액을 감작을 위해서 가슴·복부·뒷다리(풋패드)에 150μl 도포했다.

TNCB 용액은 99.5% 에탄올:아세톤=4:1의 비율로 혼합한 용액에 TNCB를 5%의 농도로 용해시킨 것을 사용했다.

감작 후 4일째 이후 1주일 간격으로 TNCB 용액을 배부 및 좌우 귓바퀴 양면에 도포했다.

TNCB 용액은 배부에 130μl, 귓바퀴 일면에 대하여 10μl씩 도포했다.

감작 후 47일째에 안락사를 시행하고, 배부 피부, 좌우 귓바퀴, 혈액을 채취하여 각 평가를 실시했다.

실험군은

a.음성 컨트롤(TNCB 비감작) : 표준 사료 투여

b.양성 컨트롤 : 표준 사료 투여

c.결정성 파라밀론 0.1% 투여(사료에 혼합)

d.결정성 파라밀론 1% 투여(사료에 혼합)

e.아몰퍼스 파라밀론 0.1% 투여(사료에 혼합)

f.아몰퍼스 파라밀론 1% 투여(사료에 혼합)

로 했다.

각 n=10이다.

(1) 피부염 스코어

결과를 도 5에 나타낸다.

도 5는 피부염 스코어의 결과를 나타낸다.

피부염 스코어는

a.발적·출혈

b.부종

c.찰상·표피박리·조직결손

d.건피·가피

의 정도에 기초하여 0(무징후), 1(경미), 2(중간정도), 3(위독)의 4단계로 평점화하고, 합계 점수를 스코어로서 나타낸 것이다(0~12점).

감작 후, 0, 4, 11, 18, 25, 32, 39, 46, 47일째에 평가를 실시했다.

도 5에 나타내는 바와 같이, 양성 컨트롤군에는 현저한 피부염 징후가 확인된 것에 대해, 결정성 파라밀론 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 투여군은 피부염 징후가 억제되어 있는 것을 알 수 있다.

그리고, 양성 컨트롤군과, 결정성 파라밀론 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 투여군 사이에는 유의차가 확인되었다(유의 수준 5%).

또한, 결정성 파라밀론 투여군과 아몰퍼스 파라밀론 투여군 사이에도 유의차가 확인되어(유의 수준 5%), 아몰퍼스 파라밀론 투여군 쪽이 보다 유효하게 피부염 징후가 억제되어 있는 것이 검증되었다.

(2) 귓바퀴 비후

감작 후, 0, 4, 11, 18, 25, 32, 39, 46, 47일째에 있어서의 귓바퀴의 두께를 다이얼 시크니스 게이지(형식 G-6C, 가부시키가이샤 오자키세이사쿠쇼)로 측정했다.

결과를 도 6(사진) 및 도 7에 나타낸다.

도 6에 나타내는 바와 같이, 양성 컨트롤군에서는 귓바퀴가 현저하게 비후 및 변형하고 있었던 것을 알 수 있다.

이것은, 피부염의 증상이 진행했기 때문이다.

이에 대해, 결정성 파라밀론 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 투여군에 있어서는 당해 징후의 억제가 확인되었다.

이와 같이, 결정성 파라밀론 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 투여군에서는 피부염의 진행이 억제되어 있는 것을 알 수 있다.

또, 도 7에 나타내는 바와 같이, 감작 후 47일째에 있어서의 귓바퀴의 두께에 있어서는 양성 컨트롤군과 결정성 파라밀론 1% 투여군 사이, 양성 컨트롤군과 아몰퍼스 파라밀론 0.1% 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 1% 투여군 사이, 결정성 파라밀론 0.1% 투여군 및 결정성 파라밀론 1% 투여군과 아몰퍼스 파라밀론 0.1% 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 1% 투여군 사이에 유의차(유의 수준 5%)가 확인되었다.

이와 같이, 결정성 파라밀론 자체에도 피부염 억제 효과가 확인되지만, 아몰퍼스화시킨 아몰퍼스 파라밀론 쪽이 보다 효과적으로 피부염을 억제하는 것이 검증되었다.

(3) 피부의 병리조직학적 소견

각 군의 피부의 파라핀 포매절편을 작성하고, HE 염색을 시행했다.

결과를 도 8(사진)에 나타낸다.

도 8에 나타내는 바와 같이, 음성 컨트롤군에서는 명확한 병리조직학 변화가 확인되지 않은 것에 대해, 양성 컨트롤군에서는 표피의 비후, 각화항진, 진피에 있어서의 호산구, 비만세포, 림프구를 비롯한 염증 세포의 침윤이 관찰되었다.

결정성 파라밀론 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 투여군에서는 당해 조직학적 소견의 경감화가 확인되었다.

이 효과는 결정성 파라밀론 투여군보다 아몰퍼스 파라밀론 투여군 쪽이 크고, 양쪽 모두 0.1% 투여군보다 1% 투여군 쪽의 효과가 컸다.

(4) 혈청 총 IgE 농도

마우스 IgE 측정 키트(코스모바이오, YSE-7675)를 사용하여, ELISA법으로 측정을 실시했다.

결과를 도 9에 나타낸다.

양성 컨트롤군에서는 혈청 IgE 농도의 현저한 상승이 확인된 것에 대해, 결정성 파라밀론 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 투여군에서는 혈청 IgE 상승이 억제되어 있었다.

또, 양성 컨트롤군과 아몰퍼스 파라밀론 0.1% 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 1% 투여군 사이에는 유의차(유의 수준 5%)가 확인되고, 아몰퍼스 파라밀론 투여군에 있어서는 혈청 IgE 농도의 상승이 억제되어 있는 것을 알 수 있었다.

이 결과로부터 아몰퍼스 파라밀론은 아토피성 피부염의 특히 1형 과민증을 유효하게 억제하는 것이 시사된다.

즉, 아토피성 피부염의 1형 과민증은 림프절로 이동한 Th2형CD4+T세포가 B세포의 IgE에 감작된 말초 조직에 있어서의 비만 세포를 탈과립하는 것에 의한 염증반응이기 때문에, 아몰퍼스 파라밀론에 의해 IgE를 감소시켜, 본 증상을 억제할 수 있는 것이 시사되게 된다.

또, 이 결과로부터 아몰퍼스 파라밀론이 알레르기의 일종인 화분증의 억제에 유효한 것도 시사된다.

즉, 아몰퍼스 파라밀론은 혈청 IgE 농도의 상승을 억제하기 위해서, 화분의 알레르겐과 결합하는 IgE를 감소시키고, 알레르기 증상을 억제하기 위해서 유효한 것이 시사되게 된다.

바꾸어 말하면, 아몰퍼스 파라밀론은 면역조절기능을 가지고, 아토피성 피부염의 1형 과민증 및 사람의 화분증의 증상 개선 효과를 나타내는 것이 시사된다.

(5) 혈청 사이토카인

혈청 사이토카인인 혈청 IL-4 농도 및 혈청 IFN-γ 농도의 측정을 실시했다.

그 결과를 도 10 및 도 11에 나타낸다.

도 10에 나타내는 바와 같이, 양성 컨트롤군에서는 혈청 IL-4 농도의 현저한 상승이 확인된 것에 대해, 결정성 파라밀론 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 투여군에서는 혈청 IL-4 농도의 상승이 억제되어 있었다.

양성 컨트롤군과 아몰퍼스 파라밀론 0.1% 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 1% 투여군 사이에는 유의차(유의 수준 5%)가 확인되고, 아몰퍼스 파라밀론 투여군에 있어서는, 혈청 IL-4 농도의 상승이 억제되어 있는 것을 알 수 있었다.

또한, 도 11에 나타내는 바와 같이, 양성 컨트롤군에서는 혈청 IFN-γ 농도의 현저한 상승이 확인되었다.

결정성 파라밀론 각 투여군 및 아몰퍼스 파라밀론 각 투여군에서는 혈청 IFN-γ 농도의 감소 경향이 확인되었지만, 통계학적 유의차는 생기지 않았다.

그러나, 도 11에 나타내는 바와 같이, 혈청 IFN-γ 농도의 감소 경향이 확인되었기 때문에, 결정성 파라밀론 및 아몰퍼스 파라밀론에는 혈청 IFN-γ 농도 상승을 억제하는 효과가 있는 것이라고 생각된다.

이 결과로부터 아몰퍼스 파라밀론은 아토피성 피부염의 4형 과민증을 유효하게 억제하는 것이 시사된다.

즉, 아토피성 피부염의 4형 과민증은 Th2형CD4+T세포가 피부병변영역에 침윤하고, 사이토카인을 산출하여 염증을 야기하는 바, 아몰퍼스 파라밀론은 사이토카인을 감소시켜, 유효하게 아토피성 피부염의 4형 과민증을 억제하는 것이 시사되는 것이다.

이와 같이, 결정성 파라밀론 자체에 각 알레르기성 질환을 억제하는 효과는 확인되지만, 이러한 통상의 결정성 파라밀론에 비해, 아몰퍼스 파라밀론은 각 알레르기성 질환을 억제하는 효과가 더욱 높은 것이 검증되었다.

이와 같이, 아몰퍼스 파라밀론은 아몰퍼스화함으로써 통상의 결정성 파라밀론에는 없는 효과를 나타내는 물질이 된다.

즉, 아몰퍼스 파라밀론은 알레르기성 질환을 유효하게 억제하는 알레르기 억제 물질로서 기능하는 것이 검증되었다.

본 실시형태에 있어서는 경구 투여했지만, 투여 방법은 이것에 한정되지 않고, 본 발명의 취지를 일탈하는 것이 아니면, 어떠한 투여 방법이어도 된다.

즉, 약품으로서의 사용에 그치지 않고, 다른 재료와 혼합하여 건강식품으로서 활용하는 것도 가능하고, 사료 등으로서의 용도도 상정할 수 있다.

이상과 같이, 아몰퍼스 파라밀론은 알레르기 억제 물질로서 넓은 용도에 제공하는 것이 기대되는 것이다.

Claims

알레르기성 질환을 억제하기 위한 물질로서, 유글레나 유래의 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화한 아몰퍼스 파라밀론으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 알레르기 억제 물질.
제 1 항에 있어서, 상기 아몰퍼스 파라밀론은 X선 회절법에 의한 상기 결정성 파라밀론의 결정도에 대한 상대 결정도가 20% 이하인 것을 특징으로 하는 알레르기 억제 물질.
제 1 항에 있어서, 상기 알레르기성 질환은 피부염 혹은 화분증인 것을 특징으로 하는 알레르기 억제 물질.
제 3 항에 있어서, 상기 피부염은 1형 과민증 및 4형 과민증 양쪽을 포함하는 아토피성 피부염인 것을 특징으로 하는 알레르기 억제 물질.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 식품, 약품, 사료로부터 선택되는 적어도 하나의 제품에 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 알레르기 억제 물질.