KR102025632B1 - 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제, 류마티스 관절염 치료제 및 류마티스 관절염 억제용 식품 - Google Patents

류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제, 류마티스 관절염 치료제 및 류마티스 관절염 억제용 식품 Download PDF

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Abstract

부작용이 없고 류마티스 관절염의 면역 이상을 정상화 가능한 류마티스 관절염 억제제, 예방제 및 치료제를 제공한다. 　유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하는 류마티스 관절염 억제제, 예방제 또는 치료제이다. 류마티스 관절염에 있어서의 면역 이상을 개선함으로써 류마티스 관절염의 활동성을 컨트롤하는 항류마티스약으로서 사용된다. 또 류마티스 관절염의 확정 진단을 받고 있지 않은 생체용으로 사용된다. 생체에 류마티스 관절염의 확정 진단 전부터 확정 진단을 받은 후의 임의의 시점까지 계속해서 투여된다. 유글레나 유래 물질은 유글레나의 조체, 상기 유글레나 유래의 파라밀론, 이 파라밀론에 알칼리 처리 및 중화 처리를 시행한 수용성의 아몰퍼스 파라밀론 및 상기 파라밀론 수용액을 초고압으로 세공 노즐로부터 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 처리를 시행한 에멀전 파라밀론을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 물질이다.

Description

류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제, 류마티스 관절염 치료제 및 류마티스 관절염 억제용 식품
본 발명은 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제, 류마티스 관절염 치료제 및 류마티스 관절염 억제용 식품에 관한 것이다.
류마티스 관절염은 자기의 면역이 수족의 관절을 침범함으로써, 수족의 관절이 붓거나 아프거나 한 병이다. 진행되면 뼈나 연골이 파손되어 관절을 움직일 수 없게 되어 일상생활이 크게 제한된다.
이제껏 류마티스 관절염은 병인도 병태도 불명하며, 예방하는 것도 완치하는 것도 불가능한 난치성의 병이었다. 그러나 최근 병태의 해명이 진행되어, T세포나 염증성 사이토카인을 억제함으로써 큰 개선이 얻어지는 것이 밝혀져, 치료약을 잘 조합하여 사용하면, 관절 파괴를 조금이라도 막고 증상을 억제하는 관해를 구체적인 치료 목표로 할 수 있게 되었다.
류마티스 관절염의 약물 요법에서 사용되는 약제는 크게 분류하여 진통, 해열, 소염증 작용을 가지고, 비특이적으로 염증 반응을 억제하는 비스테로이드계 소염 진통약(non-steroidal anti-inflammatory drugs:NSAIDS), 류마티스 관절염의 염증을 신속하고 또한 효과적으로 억제하여, 활동성의 병변을 가지는 류마티스 관절염 환자의 QOL을 저명하게 개선하는 스테로이드약, 염증 자체를 억제하는 작용은 가지지 않지만 류마티스 관절염의 면역 이상을 개선함으로써 류마티스 관절염의 활동성을 컨트롤하는 항류마티스약(disease modifying antirheumatic drugs:DMARDs), 류마티스 관절염의 병태에 깊이 관여하는 사이토카인 등을 선택적으로 억제하는 것을 목적으로 하여 유전자공학적 기술을 구사하여 개발된 항체 또는 융합 단백인 생물학적 제제를 들 수 있다.
류마티스 관절염의 약제에서는 류마티스 염증의 관해, 관절 파괴의 경과의 억제, 즉효성을 겸비하는 것이 없고, 또 부작용이 강한 것도 약한 것도 있기 때문에, 약물 요법에서는 이들 약제가 상보적으로 병용되고 있다.
상기 약제 중 항류마티스약에는 그 작용 기서로부터 정상의 면역능에는 영향을 주지 않고 이상한 면역 기능을 정상화하는 면역조절약(예를 들면 특허문헌 1)과 모든 면역 기능을 비특이적으로 억제하는 면역억제약(예를 들면 특허문헌 2)이 있다.
일본 특개 평8-301875호 공보 일본 특허 제3839836호 공보
그러나 종래의 항류마티스약은 일반적으로 효과에 개체차가 크고, 어떠한 증례에 유효해도 다른 증례에는 무효한 경우가 있다.
또 부작용 발현율이 높고, 또한 효과 발현에 2주간~3개월정도 걸리는 효과 발현의 지효성이 있다. 항류마티스약은 부작용 발현율이 높기 때문에 류마티스 관절염의 확정 진단까지는 투여할 수 없다. 게다가 류마티스 관절염의 환자 중 확정 진단까지 3개월 이상을 필요로 하는 사람이 5할 초과, 자각 증상 발현으로부터 항류마티스약 투여 개시까지 반년 이상을 필요로 하는 사람이 8할 초과라는 실태 조사 결과도 발행되어 있어(화이자 가부시키가이샤 「류마티스 관절염 환자 500명을 대상으로 한 실태 조사」, 2011년 11월 24일), 자각 증상 발현으로부터 항류마티스약의 효과 발현까지 반년~1년 이상을 필요로 하는 경우가 적지 않다.
또 항류마티스약은 소량의 투여로부터 시작하여 효과나 부작용의 유무를 확인하는 것도 항류마티스약의 효과 발현을 늦추는 요인이 되고 있다.
부작용이 거의 없고, 증례에 따른 효과의 차가 적은 항류마티스약은 알려져 있지 않다.
본 발명은 상기한 과제를 감안하여 이루어진 것으로, 본 발명의 목적은 부작용이 없고, 류마티스 관절염의 면역 이상을 정상화 가능한 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제, 류마티스 관절염 치료제 및 류마티스 관절염 억제용 식품을 제공하는 것에 있다.
본 발명의 다른 목적은 류마티스 관절염의 이환 또는 진단 전이라도 투여 가능한 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제, 류마티스 관절염 치료제 및 류마티스 관절염 억제용 식품을 제공하는 것에 있다.
상기 과제는 본 발명에 의하면 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하는 류마티스 관절염 억제제, 예방제 및 치료제에 의해 해결된다.
이와 같이 류마티스 관절염의 억제 기능을 구비한 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로 하기 때문에, 류마티스 관절염을 유효하게 억제, 예방, 치료할 수 있다. 또 부작용이 없고 식품으로서 사용되기에 충분한 안전성을 구비한 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로 하기 때문에, 유전적 또는 생활환경면에서 류마티스 관절염에 이환할 가능성이 높은 사람이나, 류마티스 관절염의 자각 증상이 발현되었지만 검사나 확정 진단을 거치지 않은 사람 등에게도 투여할 수 있다.
류마티스 관절염에 있어서의 면역 이상을 개선함으로써 류마티스 관절염의 활동성을 컨트롤하는 항류마티스약으로서 사용되어도 된다.
이와 같이 구성하고 있기 때문에, 류마티스 관절염 환자의 각각의 증상이나 개선 상황을 보면서 다른 스테로이드약, 비스테로이드계 소염진통약, 항류마티스약 등과 조합하여 병용함으로써, 류마티스 관절염의 관해 나아가서는 치유를 목표로 할 수 있다.
또 류마티스 관절염의 확정 진단을 받고 있지 않은 생체용으로 사용되어도 된다.
생체에 류마티스 관절염의 확정 진단 전부터 확정 진단을 받은 후의 임의의 시점까지 계속해서 투여되어도 된다.
이와 같이 생체에 대하여 류마티스 관절염의 확정 진단 전부터 계속해서 투여할 수 있기 때문에, 확정 진단을 기다렸다가 투여할 필요가 없어, 신속히 류마티스 관절염의 활동성을 억제할 수 있다. 본 발명의 류마티스 관절염 억제제, 예방제 또는 치료제에 의하면, 자각 증상 발현 후 민간의 조사 결과에 있어서 확정 진단까지 필요하다고 보고되어 있는 3개월~6개월이 경과할 때쯤에는 류마티스 관절염의 활동성의 컨트롤 효과가 발현하기 때문에, 류마티스 관절염의 조기 관해 및 치유를 목표로 하는 것이 가능하게 된다.
상기 유글레나 유래 물질은 유글레나의 조체(藻體), 상기 유글레나 유래의 파라밀론, 이 파라밀론에 알칼리 처리 및 중화 처리를 시행한 수용성의 아몰퍼스 파라밀론 및 상기 파라밀론 수용액을 초고압으로 세공 노즐로부터 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 처리를 시행한 에멀전 파라밀론을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 물질이어도 된다.
또 상기 과제는 본 발명에 의하면 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하고, 류마티스 관절염의 예방 또는 개선에 사용되는 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 억제용 식품에 의해 해결된다.
이와 같이 구성하기 때문에, 유전적 또는 생활환경면에서 류마티스 관절염에 이환할 가능성이 높은 사람이나, 류마티스 관절염의 자각 증상이 발현되었지만 검사나 확정 진단을 거치고 있지 않고 있은 사람 등도 섭취하여, 류마티스의 예방 또는 개선 효과를 얻을 수 있다.
본 발명에 의하면, 류마티스 관절염의 억제 기능을 구비한 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로 하기 때문에, 류마티스 관절염을 유효하게 억제, 예방, 치료, 개선할 수 있다. 또 부작용이 없고 식품으로서 사용되기에 충분한 안전성을 구비한 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로 하기 때문에, 유전적 또는 생활환경면에서 류마티스 관절염에 이환할 가능성이 높은 사람이나, 류마티스 관절염의 자각 증상이 발현되었지만 검사나 확정 진단을 거치고 있지 않은 사람 등에도 투여 또는 섭취시킬 수 있다.
도 1은 시험예 1의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 관절염 스코어의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 시험예 1의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 사이토카인(IL-6)의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 시험예 1의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 사이토카인(IL-17A)의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 시험예 1의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 사이토카인(IFN-γ)의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 관절염 스코어의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 항콜라겐 IgG의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 7은 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 사이토카인(IL-17)의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 사이토카인(IFN-γ)의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 9는 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 무릎 관절 조직의 평가를 위한 무릎 관절의 병리 표본 제작 방법을 나타내는 설명도이다.
도 10은 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 무처치군의 왼쪽 무릎 관절 조직의 병리 표본을 나타내는 사진이다.
도 11은 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 대조군의 왼쪽 무릎 관절 조직의 병리 표본을 나타내는 사진이다.
도 12는 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 유글레나군의 왼쪽 무릎 관절 조직의 병리 표본을 나타내는 사진이다.
도 13은 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 파라밀론군의 왼쪽 무릎 관절 조직의 병리 표본을 나타내는 사진이다.
도 14는 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 아몰퍼스 파라밀론군의 왼쪽 무릎 관절 조직의 병리 표본을 나타내는 사진이다.
도 15는 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 에멀전 파라밀론군의 왼쪽 무릎 관절 조직의 병리 표본을 나타내는 사진이다.
도 16은 시험예 2의 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가에 있어서의 CD4 양성 T세포 중의 IL-17 산생 세포수의 비율을 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명의 하나의 실시형태에 따른 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제 및 류마티스 관절염 치료제에 대해서, 도 1~도 16을 참조하면서 설명한다.
본 명세서에 있어서 「생체」에는 사람 이외에 가축이나 펫 등의 포유류의 동물 등 류마티스 관절염에 이환하는 모든 생체를 포함한다.
본 실시형태는 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하는 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제 및 류마티스 관절염 치료제이다.
유글레나 유래 물질로서는 파라밀론을 포함하는 것이 바람직하고, 유글레나 또는 유글레나의 건조품 외에 파라밀론, 파라밀론 분말이나, 파라밀론의 가공품 등이 포함된다. 또 유글레나 또는 유글레나의 건조품에 파라밀론 또는 파라밀론 가공품이 첨가된 것이어도 된다.
본 명세서에 있어서 「유글레나」는 동물학이나 식물학의 분류에서 유글레나속(Euglena)으로 분류되는 미생물, 그 변종, 그 변이종 모두를 포함한다.
여기서 유글레나속(Euglena)의 미생물은 동물학에서는 원생동물문(Protozoa)의 편모충강(Mastigophorea), 식물편모충아강(Phytomastigophorea)에 속하는 연두벌레목(Euglenida)의 유글레노이디나아목(Euglenoidina)에 속하는 미생물이다. 한편, 유글레나속의 미생물은 식물학에서는 연두벌레식물문(Euglenophyta)의 연두벌레조류강(Euglenophyceae)에 속하는 연두벌레목(Euglenales)에 속해 있다.
유글레나속의 미생물로서는 구체적으로는 유글레나 아쿠스(Euglena acus), 유글레나 카우다타(Euglena caudata), 유글레나 차데파우디(Euglena chadefaudii), 유글레나 데세스(Euglena deses), 유글레나 그라실리스(Euglena gracilis), 유글레나 그라눌라타(Euglena granulata), 유글레나 인터메디아(Euglena intermedia), 유글레나 뮤타빌리스(Euglena mutabilis), 유글레나 옥시우리스(Euglena oxyuris), 유글레나 프록시마(Euglena proxima), 유글레나 스피로지라(Euglena spirogyra), 유글레나 비리디스(Euglena viridis), 유글레나 버미포르미스(Euglena vermiformis), 유글레나 인터메디아(Euglena intermedia), 유글레나 피리데(Euglena piride) 등을 들 수 있다. 유글레나 세포로서는 유글레나 그라실리스(E. gracilis), 특히 유글레나 그라실리스(E. gracilis) Z주를 사용할 수 있는데, 그 밖에 유글레나 그라실리스(E. gracilis) Z주의 변이주 SM-ZK주(엽록체 결손주)나 변종의 바르. 바실라리스(var. bacillaris), 이들 종의 엽록체의 변이주 등의 유전자 변이주 유래의 β-1,3-글루카나제, 유글레나 인터메디아(Euglena intermedia), 유글레나 피리데(Euglena piride) 및 그 밖의 유글레나류, 예를 들면 아스타시아 롱가(Astasia longa)이어도 된다.
유글레나속은 연못이나 늪 등의 담수 중에 널리 분포되어 있으며, 이들로부터 분리하여 사용해도 되고, 또 이미 단리되어 있는 임의의 유글레나속을 사용해도 된다.
본 발명의 유글레나속은 그 모든 변이주를 포함한다. 또 이들 변이주 중에는 유전적 방법 예를 들면 재조합, 형질 도입, 형질 전환 등에 의해 얻어진 것도 함유된다.
유글레나 세포의 배양에 있어서, 배양액으로서는 예를 들면 질소원, 인원, 미네랄 등의 영양염류를 첨가한 배양액, 예를 들면 개변 Cramer-Myers 배지((NH4)2HPO4 1.0g/L, KH2PO4 1.0g/L, MgSO4·7H2O 0.2g/L, CaCl2·2H2O 0.02g/L, Fe2(SO2)3·7H2O 3mg/L, MnCl2·4H2O 1.8mg/L, CoSO4·7H2O 1.5mg/L, ZnSO4·7H2O 0.4mg/L, Na2MoO4·2H2O 0.2mg/L, CuSO4·5H2O 0.02g/L, 티아민염산염(비타민 B1) 0.1mg/L, 사이아노코발라민(비타민 B12), (pH3.5))을 사용할 수 있다. 또한 (NH4)2HPO4는 (NH4)2SO4나 NH3aq로 변환하는 것도 가능하다. 또 그 밖에 유글레나 생리와 생화학(기타오카 쇼자부로편, 가부시키가이샤 각카이슛판센터)의 기재에 기초하여 조제되는 공지의 Hutner 배지, Koren-Hutner 배지를 사용해도 된다.
배양액의 pH는 바람직하게는 2 이상, 또 그 상한은 바람직하게는 6 이하, 보다 바람직하게는 4.5 이하이다. pH를 산성측으로 함으로써, 광합성 미생물은 다른 미생물보다 우세하게 생육할 수 있기 때문에 컨태미네이션을 억제할 수 있다.
유글레나 세포의 배양은 태양광을 직접 이용하는 오픈 폰드 방식, 집광 장치로 집광한 태양광을 광파이버 등으로 보내고, 배양조에서 조사시켜 광합성에 이용하는 집광 방식 등에 의해 행해도 된다.
또 유글레나 세포의 배양은 예를 들면 공급 배치법을 사용하여 행해질 수 있는데, 플라스크 배양이나 발효조를 사용한 배양, 회분 배양법, 반회분 배양법(유가 배양법), 연속 배양법 (관류 배양법) 등 어느 액체 배양법에 의해 행해도 된다.
배양은 오픈 폰드형, 레이스웨이형, 튜브형 등의 공지의 배양 장치나, 사카구치 플라스크, 삼각 플라스크, 시약병 등의 실험용의 배양 용기를 사용하여 행할 수 있다. 유글레나는 CO2를 자화하기 위해서, 독립 영양 배지인 Cramer-Myers 배지를 사용하여 배양하는 경우는 1~5% CO2를 포함하는 공기를 배지 중에 통과시키는 것이 바람직하다. 또한 엽록체를 충분히 발달시키기 위해서, 배지 1리터당 1~5g정도의 인산 암모늄을 가하면 된다. 배양 온도는 통상 20~34℃이며, 특히 28~30℃가 적합하다. 또 배양 조건에 따르기도 하지만, 유글레나는 통상 배양 개시 후 2~3일에 대수 증식기가 되고, 4~5일정도에 정상기에 도달한다.
유글레나는 광 조사하에서 배양(명배양)되어도 되고, 무조사에서 배양(암배양)되어도 된다.
유글레나 세포의 분리는 예를 들면 배양액의 원심분리 또는 단순한 침강에 의해 행해질 수 있다.
파라밀론(Paramylon)은 약700개의 글루코스가 β-1,3-결합에 의해 중합한 고분자체(β-1,3-글루칸)이며, 유글레나속이 함유하는 저장다당이다. 파라밀론 입자는 편평한 회전 타원체 입자이며, β-1,3-글루칸쇄가 나선형상으로 서로 얽혀 형성되어 있다.
파라밀론은 모든 종, 변종의 유글레나 세포 내에 과립으로서 존재하고, 그 개수, 형상, 입자의 균일성은 종에 따라 특징이 있다.
파라밀론은 글루코스만으로 이루어지고, 유글레나 그라실리스(E. gracilis) Z의 야생주와 엽록체 결손주 SM-ZK로부터 얻어진 파라밀론의 평균 중합도는 글루코스 단위로 약700이다.
파라밀론은 물, 열수에는 불용성이지만, 희알칼리, 농산, 다이메틸설폭사이드, 폼알데하이드, 폼산에 녹는다.
파라밀론의 평균 밀도는 유글레나 그라실리스(E. gracilis) Z에서는 1.53, 유글레나 그라실리스 바르. 바실라리스(E. gracilis var. bacillaris) SM-L1에서는 1.63이다.
파라밀론은 분말 도형법을 사용한 X선 해석에 의하면, 3개의 직쇄상 β-글루칸이 오른쪽으로 감는 새끼줄과 같이 서로 비틀린 완만한 나선 구조를 취하고 있다. 이 글루칸 분자가 몇개인가 모여서 파라밀론 과립을 형성한다. 파라밀론 과립은 결정 구조 부분이 매우 많아 약90%를 차지하여, 다당류 중에서 가장 결정 구조율이 높은 화합물이다. 또 파라밀론은 물을 포함하기 어렵다(유글레나 생리와 생화학(기타오카 쇼자부로편, 가부시키가이샤 각카이슛판센터)).
파라밀론 입자는 배양된 유글레나속으로부터 임의의 적절한 방법으로 단리 및 미립자상으로 정제되고, 통상 분말체로서 제공되어 있다.
예를 들면 파라밀론 입자는 (1)임의의 적절한 배지 중에서의 유글레나 세포의 배양; (2)당해 배지로부터의 유글레나 세포의 분리; (3)분리된 유글레나 세포로부터의 파라밀론의 단리; (4)단리된 파라밀론의 정제; 및 필요에 따라 (5)냉각 및 그 후의 동결 건조에 의해 얻을 수 있다.
파라밀론의 단리는 예를 들면 대부분이 생물 분해되는 종류의 비이온성 또는 음이온성의 계면활성제를 사용하여 행해질 수 있다. 파라밀론의 정제는 실질적으로는 단리와 동시에 행해질 수 있다.
또한 유글레나로부터의 파라밀론의 단리 및 정제는 주지이며, 예를 들면 E. Ziegler, "Die naturlichen und kunstlichen Aromen" Heidelberg, Germany, 1982, Chapter 4.3 "Gefriertrocken", DE 43 28 329, 또는 일본 특표 2003-529538호 공보에 기재되어 있다.
파라밀론의 가공품으로서는 예를 들면 아몰퍼스 파라밀론, 에멀전 파라밀론을 들 수 있다.
아몰퍼스 파라밀론은 유글레나 유래의 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화한 물질이다.
본 실시형태에서 사용하는 아몰퍼스 파라밀론은 유글레나로부터 공지의 방법으로 생성된 결정성의 파라밀론에 대한 상대결정도가 1~20%이다.
단 이 상대결정도는 일본 특허 제5612875호 공보에 기재된 방법에 의해 구한 것이다.
즉, 아몰퍼스 파라밀론 및 파라밀론을 각각 분쇄기(Retsh사제 볼밀 MM400)로 진동수 20회/초로 5분간 분쇄 후, X선 회절 장치(스펙트리스사제 H' PertPRO)를 사용하여 관 전압 45KV, 관 전류 40mA로 2θ가 5° 내지 30°의 범위에서 스캔을 행하고, 파라밀론과 아몰퍼스 파라밀론의 2θ=20°의 부근의 회절 피크 Pc, Pa를 얻는다.
이 Pc, Pa의 값을 사용하여, 아몰퍼스 파라밀론의 상대결정도를
아몰퍼스 파라밀론의 상대결정도=Pa/Pc×100(%)
에 의해 산출한다.
본 실시형태에서 사용하는 아몰퍼스 파라밀론은 일본 특허 제5612875호 공보에 기재된 방법에 따라, 결정성의 파라밀론 분말을 알칼리 처리한 후에 산으로 중화하고, 그 후 세정, 수분 제거 공정을 거쳐 건조를 행함으로써 조제된다.
파라밀론의 가공품에는 그 밖에 공지의 각종 방법에 의해 파라밀론을 화학적 또는 물리적으로 처리하여 얻은 수용성 파라밀론, 황산화 파라밀론 등이나, 파라밀론 유도체도 포함된다.
에멀전 파라밀론은 그 가공 방법 및 물성이 유화물에 유사한 점에서 에멀전 파라밀론이라고도 불리는 물질로서, 파라밀론에 물을 가하여 얻은 유체를 초고압으로 세공 노즐로부터 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 충돌 처리를 행함으로써 얻어지고, 4배 이상의 물과 결합하여 팽윤한 가공 파라밀론이다.
에멀전 파라밀론은 분체 등의 고체에 수용성 용매를 가한 슬러리를 세공 노즐로부터 초고압으로 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 공지의 물성 개질 장치(예를 들면 일본 특개 2011-88108호 공보, 일본 특개 평6-47264호 공보에 기재된 장치)로, 분출시의 노즐 압력 245MPa로, 1회 이상 충돌 처리를 행함으로써 얻을 수 있다.
에멀전 파라밀론은 레이저 회절/산란식 입도 분포 측정 장치로 입도를 측정했을 때의 메디안 직경이 파라밀론의 5배 이상이며, 7μm 이상으로서, 광학 전자 현미경에 의해 입자가 인접하는 입자와 부착되어 있는 것이 관찰되고, 파라밀론에 대하여 4배 이상의 물과 결합하여 팽윤하고 있다.
원료 파라밀론과 물을 혼합한 슬러리는 졸졸 흐르는 유체이지만, 에멀전 파라밀론은 파라밀론이 수분자 중에 분산되어 점도가 증가하여 점성을 가져, 만졌을 때에 손에 부착되는 것 같은 점착성과 탄력성을 가지고, 풀과 같은 촉감을 구비하고 있다.
또한 그 처리 방법과 물성으로부터, 얻어진 가공 파라밀론을 본 명세서에 있어서 에멀전 파라밀론이라고 부르고 있지만, 에멀전화하고 있는지 여부는 불분명하며, 파라밀론이 물과 결합하여 팽윤하고 있는 상태이다.
본 실시형태의 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제 및 류마티스 관절염 치료제는 류마티스 관절염 억제제, 류마티스 관절염 예방제 또는 류마티스 관절염 치료제를 함유하는 의약 조성물, 식품 조성물, 화장품 조성물 등의 조성물 등으로서 이용할 수 있다.
본 실시형태의 류마티스 관절염 치료제는 류마티스 관절염의 확정 진단을 받은 환자에게 항류마티스약으로서 투여된다.
본 실시형태의 류마티스 관절염 억제제 및 류마티스 관절염 예방제는 의약 조성물, 건강 식품 등으로서 구성되며, 류마티스 관절염의 자각 증상이 발현된 자나, 유전적으로 또는 생활 환경으로부터 고려하여 류마티스 관절염에 이환할 가능성이 높은 자 등에게 예방적으로 투여된다.
유글레나 유래 물질은 식품으로서도 섭취 가능하며 부작용이 없기 때문에, 류마티스 관절염의 확정 진단을 받기 전이어도 투여 가능하다. 또 확정 진단을 받기 전부터 확정 진단을 받은 후의 임의의 시점, 예를 들면 관해에 이른 시점, 치유에 이른 시점이나, 다른 항류마티스약 등의 류마티스 관절염 치료약으로 전환하는 시점 등까지 계속해서 투여 가능하다.
또 본 실시형태의 류마티스 관절염 억제제 및 류마티스 관절염 예방제는 류마티스 관절염의 환자가 치료에 의해 관해에 이른 후, 관해에 이른 환자에 대하여 증상의 재발을 억제하는 것을 목적으로 하여 투여된다.
여기서 「관해」는 치료에 의해 류마티스 관절염의 병상이 제어되어, 류마티스 관절염의 제증상이 진정된 상태를 말하고, 영속적인 관해가 얻어진 상태를 의미하는 「치유」에 이르기 전의 상태이다.
<<의약 조성물>>
의약의 분야에서는 류마티스 억제, 예방, 치료 작용을 유요하게 발휘할 수 있는 양의 유글레나 유래 물질과 함께, 약학적으로 허용되는 담체나 첨가제를 배합함으로써, 류마티스 억제, 예방, 치료 작용을 가지는 의약 조성물이 제공된다. 당해 의약 조성물은 의약품이어도 의약부외품이어도 된다.
당해 의약 조성물은 내용적으로 적용되어도, 또 외용적으로 적용되어도 된다. 따라서 당해 의약 조성물은 내복제, 정맥 주사, 피하 주사, 피내 주사, 근육 주사 및/또는 복강내 주사 등의 주사제, 경점막 적용제, 경피 적용제 등의 제제 형태로 사용할 수 있다.
당해 의약 조성물의 제형으로서는 적용의 형태에 따라 적당히 설정할 수 있는데, 예를 들면 정제, 과립제, 캡슐제, 분말제, 산제 등의 고형 제제; 액제, 현탁제 등의 액상 제제, 연고제, 겔제 등의 반고형제를 들 수 있다.
<<식품 조성물>>
식품의 분야에서는 류마티스 억제, 예방, 치료 작용을 생체 내에서 발휘할 수 있는 유효한 양의 유글레나 유래 물질을 식품 소재로 하여 각종 식품에 배합함으로써 류마티스 억제, 예방, 치료 작용을 가지는 식품 조성물을 제공할 수 있다. 즉 본 발명은 식품의 분야에 있어서, 류마티스 억제, 예방, 치료용이라고 표시된 식품 조성물을 제공할 수 있다. 당해 식품 조성물로서는 일반의 식품 외에 특정 보건용 식품, 영양 보조 식품, 기능성 식품, 병원 환자용 식품, 서플리먼트 등을 들 수 있다. 또 식품 첨가물로서 사용할 수도 있다.
여기서 특정 보건용 식품은 생리학적 기능 등에 영향을 주는 보건 기능 성분을 포함하는 식품으로서, 소비자청 장관의 허가를 얻어 특정의 보건의 용도에 적합한 취지를 표시 가능한 것이다. 본 발명에 있어서는 특정의 보건의 용도로서 신부전 진행의 억제, 신부전의 예방, 개선, 요독증의 예방, 개선, 그리고 생체 내에 있어서의 인독실황산의 산생 저해 등이라고 표시하여 판매되는 식품이 된다.
또 영양 기능 식품은 영양 성분(비타민, 미네랄)의 보급을 위해서 이용되는 식품으로서, 영양 성분의 기능을 표시하는 것이다. 영양 기능 식품으로서 판매하기 위해서는 1일당 섭취 기준량에 포함되는 영양 성분량이 정해진 상한값, 하한값의 범위 내에 있을 필요가 있고, 영양 기능 표시 뿐만아니라 주의 환기 표시 등도 할 필요가 있다.
또 기능성 표시 식품은 사업자의 책임에 있어서 과학적 근거에 기초한 기능성을 표시한 식품이다. 판매 전에 안전성 및 기능성의 근거에 관한 정보 등이 소비자청 장관에게 신고된 것이다.
당해 식품 조성물로서는 예를 들면 조미료, 축육 가공품, 농산 가공품, 음료(청량 음료, 알코올 음료, 탄산 음료, 유음료, 과즙 음료, 차, 커피, 영양 드링크 등), 분말 음료(분말 주스, 분말 수프 등), 농축 음료, 과자류(캔디, 쿠키, 비스켓, 검, 구미, 초콜렛 등), 빵, 시리얼 등을 들 수 있다. 또 특정 보건용 식품, 영양 보조 식품, 기능성 식품 등의 경우, 캡슐, 트로키, 시럽, 과립, 분말 등의 형상이어도 된다.
실시예
이하, 본 발명을 구체적 실시예에 의해 상세하게 설명하는데, 본 발명의 기술적 범위는 이하의 구체적 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
(실시예 1)
유글레나 글라실리스 분말(가부시키가이샤 유글레나제)을 실시예 1의 유글레나로 했다.
(실시예 2)
결정성의 파라밀론 분말을 이하의 순서에 의해 조제했다.
즉, 실시예 1의 유글레나 글라실리스 분말(가부시키가이샤 유글레나제)을 증류수에 넣고, 실온에서 2일간 교반했다. 이것을 초음파 처리하여 세포막을 파괴하고, 원심분리에 의해 조제(粗製) 파라밀론 입자를 회수했다. 회수한 파라밀론 입자를 1% 도데실황산나트륨 수용액에 분산하고, 95℃에서 2시간 처리하고, 다시 원심분리에 의해 회수한 파라밀론 입자를 0.1% 도데실황산나트륨 수용액에 분산하여 50℃에서 30분간 처리했다. 당해 조작에 의해 지질이나 단백질을 제거하고, 그 후 아세톤 및 에터로 세정한 후, 50℃에서 건조시켜, 정제 파라밀론 입자를 얻었다.
조제한 파라밀론 1g을 공지의 캡슐에 격납하여, 실시예 2의 파라밀론을 조제했다.
(실시예 3)
실시예 2에서 조제한 파라밀론을 사용하여 일본 특허 제5612875호 공보에 기재된 방법에 따라 아몰퍼스 파라밀론을 조제했다.
즉, 실시예 2에서 조제한 결정성의 파라밀론 분말을 1N의 수산화나트륨 수용액에 파라밀론 분말을 5%(w/v) 첨가하여 용해시키고, 1~2시간 스터러로 교반하고, 알칼리 처리했다. 그 후, 1N의 염산을 파라밀론 분말이 용해한 1N 수산화나트륨 수용액에 적하하여 중화했다. 원심분리의 상청을 버리고, 침전을 증류수로 세정하는 공정을 반복한 후, 침전된 겔을 회수하여 동결시킨 후 동결 건조기로 동결 건조하여, 실시예 3의 아몰퍼스 파라밀론을 얻었다.
(실시예 4)
실시예 2에서 조제한 파라밀론을 사용하여 이하의 순서에 따라 에멀전 파라밀론을 조제했다.
결정성의 파라밀론 분말(가부시키가이샤 유글레나제)에 이온 교환수를 가하여, 파라밀론 농도가 10wt%의 파라밀론 슬러리를 얻었다.
습식 미립화 장치(스타버스트 18KW 중형기, 가부시키가이샤 스기노머신제, 사향 충돌 챔버)의 장치 회로 내를 이온 교환수로 치환했다. 장치의 노즐을 가압하여, 파라밀론 슬러리를 회로 내에 공급하고, 초기 토출액을 회로 내 데드 볼륨으로서 폐기했다. 그 후, 서로 각도를 가지고 대향하는 한 쌍의 노즐로부터 파라밀론 슬러리의 분류를 각각 분출시켜 서로 충돌시키는 사향 충돌에 의한 분류 충돌을 행했다. 유출로로부터 슬러리 처리물을 회수하여 1패스로 했다. 이 때의 처리 압력은 245MPa, 슬러리 처리량은 240mL, 노즐 직경은 0.17mm로 했다.
이 처리를 3회 반복하여 3패스의 처리를 행하여, 실시예 4의 에멀전 파라밀론을 얻었다.
실시예 4의 에멀전 파라밀론은 슬러리 조제시에 가한 이온 교환수와 분리되지 않고, 물과 결합하여 팽윤하고 있었다.
(시험예 1 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가 1)
본 시험예에서는 실시예 1 및 2의 피험 물질의 류마티스 관절염에 대한 작용에 대해서, 마우스의 콜라겐 관절염 모델에 대해서 평가를 행했다.
닭 II형 콜라겐(SIGMA)을 0.01M 아세트산 수용액에 2mg/mL가 되도록 용해하고, 이것에 등량의 Freund's complete adjuvant(Difco)를 가하여 제작한 에멀전(콜라겐 1mg/mL)을 아이소플루레인에 의한 흡입 마취하에서 마우스의 미근부에 0.1mL(콜라겐량으로서 0.1mg) 피내 투여하여 콜라겐에 감작시켰다. 또 3주간 후 마찬가지로 투여를 행하여 부스트로 했다. 또 무처치 동물에게는 감작 및 부스트는 행하지 않았다.
마우스를 무처치 동물군, 대조군, 유글레나군, 파라밀론군으로 나누었다(각 군 n=5). 고형 사료 CE-2(니혼쿠레아 가부시키가이샤)에 실시예 1, 2의 피험 물질을 각각 2% 섞어 먹이고, 각각 유글레나군, 파라밀론군의 마우스에 부스트 5일 후로부터 매일 경구로 자유 섭취시켰다.
◎ 관절염 스코어의 측정
콜라겐에 감작시킨 날(이하 「감작일」이라고 함)로부터 사지에 있어서의 관절염의 증상에 대해서 육안 관찰에 의해 스코어를 매기고, 사지의 스코어의 합계값을 산출했다.
스코어를 매기는 것은 가키모토 외(신생화학실험강좌 12, 분자면역학 II, 도쿄화학동인 : 360-372, 1989.)의 스코어에 준하여, 표 1의 관절염 스코어에 따라 3회/주(월·수·금）의 빈도로 평가를 행하고, 사지의 스코어의 합계값을 산출했다.
관절염 스코어
스코어 증상
0
1
2
3
4		 증상 없음
손가락 등 소관절 1개의 경도 발적종창
소관절이 2개 이상 또는 큰 관절의 발적종창
일지의 발적종창
일지의 전체가 최대한으로 발적종창
일지당 스코어는 0점~4점이기 때문에, 사지를 합계했을 때의 최저점은 0점(사지 모두에 증상이 없는 경우)이며, 최고점은 16점(사지 모두의 전체가 최대한으로 발적종창하는 경우)이다.
관절염 스코어의 측정 결과를 도 1에 나타낸다.
스코어 측정 최종일에 있어서, 대조군과 비교하여 유글레나군, 파라밀론군에 있어서 유의하게 낮은 값이 되고(p<0.05), 피험 물질을 계속 섭취하는 것에 의한 관절염 증상의 억제가 인정되었다.
대조군의 스코어 평균값은 8(일지당 2)을 넘는 시기가 있었던 것에 대해, 유글레나군, 파라밀론군의 스코어 평균값은 측정 기간 내의 전체에 있어서 6 미만(일지당 1.5 미만)으로 억제되어 있었다. 특히 스코어 측정 35일부터 최종일(49일） 동안, 유글레나군의 스코어 평균값은 4(일지당 1) 이하, 파라밀론군의 스코어 평균값은 4.2(일지당 1.05) 이하이며, 관절염의 증상은 경도 발적종창으로 억제되어 있었다.
◎ 사이토카인의 측정
감작일의 7주간 후에 방혈 안락 치사를 시켜, 쥐 경부 림프절(무처치를 제외한 전체 군), 무릎 관절(전체 군·양측)의 순서로 적출했다.
쥐 경부 림프절에 대해서는 림프구를 분획 후 3등분하고, 닭 II형 콜라겐(SIGMA)을 첨가한 배지에서 각각 배양을 행했다. 배양 개시 후 약48시간 후에 배양 상청을 채취하고, 배양 상청의 사이토카인(IL-6, IL-17A, IFN-γ) 분비량을 멀티플렉스 서스펜션 어레이로 측정했다.
측정 결과를 도 2~도 4에 나타낸다.
도 2~도 4에 나타내는 바와 같이 사이토카인 IL-6, IL-17A, IFN-γ에 대해서, 유글레나군 및 파라밀론군 모두 대조군과 비교하여 유의하게 낮은 값을 나타내고 있었다(p<0.05).
(시험예 2 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용한 평가 2)
본 시험예에서는 상기 시험예 1에서 평가를 행한 실시예 1, 2의 피험 물질에 더해, 실시예 3, 4의 피험 물질도 아울러, 류마티스 관절염에 대한 작용에 대해서 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용하여 평가를 행했다.
마우스를 무처치 동물군, 대조군, 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군, 에멀전 파라밀론군(각 군 n=5)으로 나눈 것을 제외하고는 시험예 1과 마찬가지의 동물, 순서로 각 군의 마우스에 콜라겐 감작 처리 및 사료 섭취시키는 처리를 행했다.
즉, 실험용의 동물로는 마우스(DBA/1J Jms Slc(SPF), 6주령 수컷, 니혼에스엘씨 가부시키가이샤)를 사용했다.
닭 II형 콜라겐(SIGMA)을 0.01M 아세트산 수용액에 2mg/mL가 되도록 용해하고, 이것에 등량의 Freund's complete adjuvant(Difco)를 가하여 제작한 에멀전(콜라겐 1mg/mL)을 아이소플루레인에 의한 흡입 마취하에서 마우스의 미근부에 0.1mL(콜라겐량으로서 0.1mg) 피내 투여하여 콜라겐에 감작시켰다. 또 3주간 후 마찬가지로 투여를 행하여 부스트로 했다. 또 무처치 동물에게는 감작 및 부스트는 행하지 않았다.
마우스를 무처치 동물군, 대조군, 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군, 에멀전 파라밀론군으로 나누었다(각 군 n=5). 고형 사료 CE-2(니혼쿠레아 가부시키가이샤)에 실시예 1~4의 피험 물질을 각각 2% 섞어 먹이고, 각각 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군, 에멀전 파라밀론군의 마우스에 부스트 5일 후로부터 매일 경구로 자유 섭취시켰다.
◎ 관절염 스코어의 측정
콜라겐에 감작시킨 날(이하 「감작일」이라고 함)로부터 사지에 있어서의 관절염의 증상에 대해서 육안 관찰에 의해 스코어를 매기고, 시험예 1과 마찬가지의 방법으로 사지의 스코어의 합계값을 산출했다.
관절염 스코어의 측정 결과를 도 5에 나타낸다.
스코어 측정 최종일에 있어서, 대조군과 비교하여 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군, 에멀전 파라밀론군 모든 군에 있어서 유의하게 낮은 값이 되어, 피험 물질을 계속 섭취하는 것에 의한 관절염 증상의 억제가 인정되었다.
◎ 항콜라겐 IgG의 측정
감작일의 7주간 후에 동물을 아이소플루레인에 의한 흡입 마취하에서 개복하고, 복부 후대정맥으로부터 채혈을 행했다. 얻어진 혈액은 원심분리하여 혈청을 분취하고, 혈청 중의 콜라겐 IgG의 정량(ELISA법)을 행했다.
항콜라겐 IgG의 측정 결과를 도 6에 나타낸다.
유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군, 에멀전 파라밀론군 모두 대조군과 비교하여 변화가 없고, 콜라겐 관절염을 유도할 수 있는 것이 확인되었다. 즉, 본 항콜라겐 관절염 모델의 실험계가 유효하게 기능하고 있는 것을 확인할 수 있었다.
◎ 사이토카인의 측정
감작일의 7주간 후에 채혈을 행한 동물은 채혈 후 방혈 안락 치사를 시키고, 쥐 경부 림프절(무처치를 제외한 전체 군), 무릎 관절(전체 군·양측)의 순서로 적출했다.
쥐 경부 림프절에 대해서는 림프구를 분획 후 3등분하고, 항CD3 항체를 첨가한 배지에서 각각 배양을 행했다. 배양 개시 후 약48시간 후에 배양 상청을 채취하고, 배양 상청의 사이토카인(IL-17A, IFN-γ) 분비량을 멀티플렉스 서스펜션 어레이로 측정했다.
측정 결과를 도 7, 도 8에 나타낸다.
사이토카인 IL-17A, IFN-γ에 대해서, 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군, 에멀전 파라밀론군 모두 대조군과 비교하여 낮은 값을 나타내고 있었다.
◎ 관절 조직의 관찰
적출 후의 왼쪽 무릎 관절을 10% 중성 완충 포르말린으로 고정하고, 10% 폼산 포르말린 탈회액으로 탈회 후, 도 9(A)의 대퇴골 활차구에서, 단면 A에서 잘라내고, 파라핀 절편을 제작 후에 H.E. 염색을 행했다.
평가는 다음의 무릎 관절 조직의 평가법에 따랐다. 즉, 활막의 조직에 대해서는 부종, 염증성 세포 침윤, 활막 세포 증생, 육아 조직 형성, 선유화, 관절강내 삼출물, 대퇴골 활차구의 조직에 대해서는 판누스 형성, 관절연골의 파괴(변성·선유화), 골파괴(흡수), 골극 형성(반응성 유골 형성)에 대해서 인정된 소견을 변화 없음(평점 0), 경미(평점 1), 경도(평점 2), 중등도(평점 3), 고도(평점 4)의 5단계로 평가했다.
또한 각 군의 대표예의 선택에 대해서는 사지의 합계 스코어의 평균값의 가까운 동물을 지표로 선택했다. 무처치군과 대조군은 2예, 피험 물질 섭취군은 3예를 선택했다.
결과를 표 2, 표 3에 나타낸다.

기관
·
조직

소견

 성별 수컷
군 무처치 대조 유글레나
투여량(%, 섞어 먹임) 0 0 2
동물수 2 2 3
정도(평점) 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3


활막


 부종
염증 세포 침윤
활막 세포 증생
육아 조직 형성
선유화
관절강내 삼출물		 2
2
2
2
2
2		 1 1
1 1
1 1
2
1 1
1 1		 3
3
3
2 1
3
3

대퇴골
활차구
 판누스 형성
관절연골의 파괴(변성·선유화)
골파괴(흡수)
골극 형성(반응성 유골 형성)		 2
2
2
2		 1 1
1 1
2
2		 3
3
3
3
병리조직학적 소견의 정도(평점)
0:현저한 변화 없음, 1:경미, 2:경도. 3:중등도

기관
·
조직

소견

 성별 수컷
군 파라밀론 아몰퍼스
파라밀론		 에멀전
파라밀론
투여량(%, 섞어 먹임) 2 2 2
동물수 3 3 3
정도(평점) 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3


활막


 부종
염증 세포 침윤
활막 세포 증생
육아 조직 형성
선유화
관절강내 삼출물		 3
2 1
1 2
2 1
1 1 1
3		 3
3
3
2 1
3
3		 2 1
2 1
1 1 1
2 1
3
3

대퇴골
활차구
 판누스 형성
관절연골의 파괴(변성·선유화)
골파괴(흡수)
골극 형성(반응성 유골 형성)		 2 1
1 1 1
3
3		 3
3
3
3		 2 1
2 1
3
3
병리조직학적 소견의 정도(평점)
0: 현저한 변화 없음, 1: 경미, 2: 경도. 3: 중등도
각 군의 대표예의 왼쪽 무릎 관절 조직의 병리 표본의 사진을 도 10~도 15에 나타낸다.
도 10에 나타내는 바와 같이, 무처치군에서는 활막 및 대퇴골 활차구에 관절염에 기인한다고 생각되는 소견은 인정되지 않았다.
도 11의 대조군에서는 활막의 부종, 염증, 육아 조직 형성, 선유화, 삼출물이 경미(평점 1)로부터 중등도(평점 3)로 인정되었다. 대퇴골 활차구에 대해서는 판누스 형성 및 연골 파괴가 경도(평점 2)로 인정되었다.
도 12의 유글레나군 및 도 14의 아몰퍼스 파라밀론군에 대해서는 활막의 육아 조직 형성이 경미(평점 1)로 인정된 것 이외에는 소견은 인정되지 않았다.
도 13의 파라밀론군에서는 활막의 염증, 육아 조직 형성, 선유화 및 대퇴골 활차구의 판누스 형성, 연골 파괴가 경미(평점 1)로부터 경도(평점 2)로 인정되었다.
도 15의 에멀전 파라밀론군에 대해서는 활막의 부종·염증, 육아 조직 형성, 선유화, 삼출물이 경미(평점 1)로 인정되었다. 대퇴골 활차구에 대해서는 판누스 형성 및 연골 파괴가 경도(평점 2)로 인정되었다.
◎ 억제성 T세포 : Th17/Treg의 측정
감작일의 7주간 후에 적출한 쥐 경부 림프절에 대해서, 플로우 사이트 미터를 사용하여 세포 집단의 분포 해석을 행했다. 억제성 T세포의 측정에는 Mouse Th17/Treg Phenotyping Kit(BD pharmingen)를 사용했다.
플로우 사이트 미터를 사용한 해석으로 얻어진 CD4 양성 T세포 중의 IL-17 산생 세포수를 도 16에 나타낸다.
도 16의 IL-17A 산생 세포수에 대해서, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군에 대해서는 대조군보다 감소하고 있었다. 에멀전 파라밀론군에서는 대조군과 비교하여 유의하게 감소하고 있었다.
◎ 시험예 1 및 시험예 2의 결과의 정리
대조군에서는 관절염 스코어의 경일적인 증가, 혈청 IgG 농도의 증가가 인정되었다. 무릎 관절의 병리조직학적 검사에서는 활막의 염증, 육아 조직 형성, 선유화, 삼출물, 대퇴골 활차구에 대해서는 판누스 형성 및 연골 파괴가 각각 경미로부터 중등도로 인정되었다.
이상의 병태에 대하여 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군 및 에멀전 파라밀론군에 대해서는 육안적 스코어가 대조군과 비교하여 낮은 값으로 추이하고, 통계학적인 유의차도 인정되었다. 　병리조직학적 검사에서는 유글레나군 및 아몰퍼스 파라밀론군에서 활막의 육아 조직 형성이 경미하게 인정된 것 이외에는 소견은 인정되지 않았다. 파라밀론군에 대해서는 활막의 염증, 육아 조직 형성, 선유화 및 대퇴골 활차구의 판누스 형성, 연골 파괴가 인정되었지만, 그 정도는 대조군과 비교하여 현저하지 않았다.
림프의 배양 상청 중의 사이토카인에 대해서는 Anti-CD3에 의해 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군 및 에멀전 파라밀론군에서 모두 대조군과 비교하여 분비의 저하가 인정되었다. 특히 유글레나군 및 아몰퍼스 파라밀론군에서 그 저하는 현저했다.
이상으로부터 마우스의 콜라겐 관절염 모델을 사용하여 유글레나 유래 물질의 자기면역질환에 대한 작용에 대해서 검토를 행한 결과, 유글레나군, 파라밀론군, 아몰퍼스 파라밀론군 및 에멀전 파라밀론군에서 관절염의 발증 억제 작용이 인정되었다. 특히 유글레나군 및 아몰퍼스 파라밀론군에서는 그 작용이 현저하며, 조직학적으로도 현저한 억제가 인정되었다.
a…대퇴골
b…경골
c…슬개골
d…후십자인대
e…반월판
f…전십자인대

Claims (8)

  1. 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하고,
    상기 유글레나 유래 물질은 유글레나의 조체, 상기 유글레나 유래의 파라밀론, 이 파라밀론에 알칼리 처리 및 중화 처리를 시행한 수용성의 아몰퍼스 파라밀론 및 상기 파라밀론 수용액을 초고압으로 세공 노즐로부터 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 처리를 시행한 에멀전 파라밀론을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 물질인 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 억제용 약학 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 류마티스 관절염에 있어서의 면역 이상을 개선함으로써 류마티스 관절염의 활동성을 컨트롤하는 항류마티스약으로서 사용되는 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 억제용 약학 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 류마티스 관절염의 확정 진단을 받고 있지 않은 생체용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 억제용 약학 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 생체에 류마티스 관절염의 확정 진단 전부터 확정 진단을 받은 후의 관해(寬解)에 이른 시점까지 계속해서 투여되는 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 억제용 약학 조성물.
  5. 삭제
  6. 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하고,
    상기 유글레나 유래 물질은 유글레나의 조체, 상기 유글레나 유래의 파라밀론, 이 파라밀론에 알칼리 처리 및 중화 처리를 시행한 수용성의 아몰퍼스 파라밀론 및 상기 파라밀론 수용액을 초고압으로 세공 노즐로부터 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 처리를 시행한 에멀전 파라밀론을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 물질인 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 예방용 약학 조성물.
  7. 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하고,
    상기 유글레나 유래 물질은 유글레나의 조체, 상기 유글레나 유래의 파라밀론, 이 파라밀론에 알칼리 처리 및 중화 처리를 시행한 수용성의 아몰퍼스 파라밀론 및 상기 파라밀론 수용액을 초고압으로 세공 노즐로부터 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 처리를 시행한 에멀전 파라밀론을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 물질인 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 치료용 약학 조성물.
  8. 유글레나 유래 물질을 유효 성분으로서 함유하고,
    상기 유글레나 유래 물질은 유글레나의 조체, 상기 유글레나 유래의 파라밀론, 이 파라밀론에 알칼리 처리 및 중화 처리를 시행한 수용성의 아몰퍼스 파라밀론 및 상기 파라밀론 수용액을 초고압으로 세공 노즐로부터 분출시켜 피충돌물에 충돌시키는 처리를 시행한 에멀전 파라밀론을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 물질이며,
    류마티스 관절염의 예방 또는 개선에 사용되는 것을 특징으로 하는 류마티스 관절염 억제용 식품 조성물.
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