CN107073032B - 肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂 - Google Patents
肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107073032B CN107073032B CN201580052173.0A CN201580052173A CN107073032B CN 107073032 B CN107073032 B CN 107073032B CN 201580052173 A CN201580052173 A CN 201580052173A CN 107073032 B CN107073032 B CN 107073032B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- renal failure
- paramylon
- inhibitor
- indoxyl sulfate
- progression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/716—Glucans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/716—Glucans
- A61K31/718—Starch or degraded starch, e.g. amylose, amylopectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供以人、尤其是肾衰竭患者为对象的新型肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。该肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂以来自裸藻的裸藻淀粉或其加工品作为有效成分。例如就肾衰竭发展抑制剂而言,对患有慢性肾衰竭且接受透析疗法的患者,1日数次持续口服给药裸藻淀粉且每次给药1~5g。尤其是,对该患者以胶囊剂或粉末剂的形式在其他药剂给药前后空出规定时间单独进行给药。
Description
技术领域
本发明涉及一种新型的肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。
背景技术
现在,在日本本国存在约30万人以上的末期肾衰竭患者,其数量还在不断地增加。对末期肾衰竭并无根本性的治疗方法,作为主要的肾代替疗法,有血液透析、腹膜透析及肾移植。但是,任一种代替疗法均给患者带来很大的负担。因此,在初期症状时抑制肾衰竭的发展较为重要,期望存在有效的肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭治疗剂。
通常已知在肾衰竭患者的体内下述值变高:成为肾衰竭发展因子或血管障碍因子的尿毒症物质即硫酸吲哚酚的血中浓度、作为肾功能障碍的指标的肌酸酐的血中浓度、粥状动脈硬化症所致的心血管系统疾病的危险因子即高半胱氨酸的血中浓度、以及中性脂肪。
其中,尤其有报道显示硫酸吲哚酚是被证明为肾衰竭发展因子的尿毒症物质(参照非专利文献1),慢性肾衰竭患者的血中硫酸吲哚酚浓度比健康者的血中硫酸吲哚酚浓度异常变高。
如上所述,硫酸吲哚酚是使肾衰竭加剧、恶化的物质,因此认为通过降低肾衰竭患者的血中硫酸吲哚酚浓度,从而可以显著降低肾脏功能的障碍,抑制肾衰竭发展。另一方面,硫酸吲哚酚是利用上述肾代替疗法也无法除去的很难应对的代谢产物。
为此,已知作为以往的肾衰竭发展抑制剂的球形吸附炭在肠管内吸附硫酸吲哚酚的前体即吲哚,并使其排泄至粪便中,由此降低血中硫酸吲哚酚浓度。其结果有报道显示:除了抑制肾衰竭的发展外,还抑制与肾衰竭有关的心脏血管病的发病,与心脏血管病相伴的死亡率也下降。
然而,就球形吸附炭而言,由于每天必须服用30粒胶囊等理由,因而给内服造成负担,而且作为副作用的腹部膨胀感、便秘等症状严重,因长期内服球形吸附炭而伴有很大的痛苦,因此确认到很多患者希望中止服用球形吸附炭。
因此需要以更少的给药量且不引起腹部膨胀、便秘等而减轻患者的痛苦和负担的新型药剂。
作为新型药剂的可能性,提出了例如包含作为吸附剂而已知的几丁聚糖的慢性肾衰竭预防剂、治疗剂(参照专利文献1)。
具体而言,有报道显示:依据使用肾衰竭模型大鼠的动物实验结果,可知以几丁聚糖作为有效成分的口服给药剂使尿毒症物质、即属于引起氧化应激环境的原因物质的硫酸吲哚酚的血中浓度降低。
然而,并未对以人、尤其是慢性肾衰竭患者为对象的临床试验结果进行报道,为了验证以该患者为对象的有效性、安全性或为了减轻这些患者的痛苦和负担,需要对给药时间、给药步骤、给药量等的用法或用量进一步进行研究。
另一方面,作为有望被用作粮食、饲料、燃料等的生物资源,裸藻(属名:Euglena,日文名:ミドリムシ)备受注目。
裸藻具备维生素、矿物质、氨基酸、不饱和脂肪酸等、相当于人类赖以生存所需的营养素的大半的59种营养素,已经提出作为均衡摄取多种营养素的补充剂来加以利用、以及作为无法摄取必须营养素的贫困地区的粮食供给源来加以利用的可能性。
裸藻位于食物链的最底层,并且由于被捕食者所捕食以及光、温度条件、搅拌速度等培养条件比其他微生物难等理由而难以大量培养,但近年来,本发明人等通过深入研究确立了大量培养技术,开启了裸藻及从裸藻提取的裸藻淀粉的大量供给之路。
裸藻是具有进行鞭毛运动的动物性质、且同时作为植物具有叶绿体而进行光合作用的独特生物,预期裸藻本身以及来自裸藻的物质具有多种功能性。
因此,期望阐明已经能够大量供给的裸藻及裸藻淀粉等来自裸藻的物质的功能和功能性的表现机制,进而开发出这些物质的利用方法等。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2014-24817号公报
非专利文献
非专利文献1:丹羽利充,现代医学47卷1号:55-61(1999)
非专利文献2:Tanaka,R.et al.:Jpn.J.Pediatr.,33,2483(1980)
发明内容
发明要解决的课题
本发明是鉴于上述的课题而完成的发明,本发明的目的在于,提供以生体作为对象的新型的肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。
本发明的其他目的在于,提供使在人、尤其是肾衰竭患者的体内利用透析疗法也难以除去的硫酸吲哚酚的血中浓度降低的肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。
本发明的其他目的在于,提供来自裸藻的物质的新型利用方法即肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。
用于解决课题的手段
本发明人等进行了深入研究,结果发现:若将来自裸藻的裸藻淀粉给药至生体,则作为尿毒症物质的硫酸吲哚酚的血中浓度降低。
详细而言,硫酸吲哚酚的前体即吲哚是食物中的蛋白质所大量含有的色氨酸被肠内有害菌分解而产生的腐败产物,本发明人发现:若对人、尤其是肾衰竭患者给药裸藻淀粉或裸藻淀粉加工品,则发挥出裸藻淀粉吸附吲哚的作用,血中硫酸吲哚酚浓度降低,由此完成本发明。
另外已知:一般在因肾衰竭而进行血液的人工透析的患者的肠管中,大肠菌等肠内有害菌增加,另一方面,双岐乳酸菌、乳酸菌等对人体有益的厌氧菌减少。而且,确认到通过摄取双岐乳酸菌、乳酸菌等而改善了肠道菌群(非专利文献2)。
为此,本发明人等进行深入研究的结果发现来自裸藻的裸藻淀粉有助于改善人的肠内环境。具体而言,若对生体给药来自裸藻的裸藻淀粉,则明显使肠内有害菌减少且肠内的双岐乳酸菌和乳酸菌增加,由此完成本发明。
另外,本发明人等进行深入研究的结果发现并明确了:若对生体给药来自裸藻的裸藻淀粉,则作为在以往的球形吸附炭所没有的协同作用,口服摄取的食物的肠内通过时间缩短,使在肠内色氨酸被分解而产生的吲哚的产生量得到抑制,由此完成本发明。
因此,上述课题通过以下方案来解决,即,本发明的肾衰竭发展抑制剂包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分。
根据上述构成,若对肾衰竭患者给药裸藻淀粉或其加工品,则裸藻淀粉会降低血中的硫酸吲哚酚浓度,因此可以将本发明用作肾衰竭疾病的发展抑制剂。
此时,适宜对患有肾衰竭且接受透析疗法的患者进行给药。
根据上述构成,一般硫酸吲哚酚是利用透析疗法也难以除去的尿毒症物质,通过对接受透析疗法的患者给药裸藻淀粉,从而可以使该患者的硫酸吲哚酚的血中浓度降低,可以阻止例如末期肾衰竭的进一步加剧、恶化。
此时,适宜对患有慢性肾衰竭且年龄为50岁~70岁的患者进行给药。
根据上述构成,一般开始引入透析疗法的末期肾衰竭患者的平均年龄为68.4岁(日本本国的慢性透析疗法的现状2012年12月31日现在、日本透析医学会),通过对于处于引入透析疗法的前阶段的50岁~70岁的患者给药裸藻淀粉,从而可以在引入透析疗法的前阶段阻止患者的肾衰竭的发展。
此时,适宜对患有慢性肾衰竭的患者每天3次持续给药上述裸藻淀粉或其加工品且每次给药1~5g。
另外,适宜对患有慢性肾衰竭的患者以胶囊剂或粉末剂的形式进行口服给药。
另外,适宜对患有慢性肾衰竭的患者在给药其他药剂的前后空出规定时间进行单独给药。
根据上述构成,以肾衰竭患者作为对象,限定裸藻淀粉的有效性高的给药时间、给药步骤、给药量等的用法或用量,在此基础上可以提供以裸藻淀粉或其加工品作为有效成分的肾衰竭发展抑制剂。
另外,还可以实现包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分的肾衰竭预防剂、尿毒症治疗剂、硫酸吲哚酚产生抑制剂或心血管系统疾病预防剂。
另外,还可以实现包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分的肾衰竭发展抑制用特定保健用食品。
另外,还可以实现通过摄取包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分的组合物而用于抑制肾衰竭的发展的方法(排除对人的医疗行为)。
此外,还可以实现包括对生体(人)、尤其是患者给药或使其摄取有效量的裸藻淀粉或其加工品的步骤的抑制肾衰竭的发展的方法。
另外,还可以实现裸藻淀粉或其加工品在制造抑制肾衰竭的发展的药品上的使用。
另外,还可以实现以肾衰竭发展抑制物质为裸藻淀粉或其加工品为特征的肾衰竭发展抑制物质在制造抑制肾衰竭的发展的药品中的应用。
发明效果
根据本发明,可以提供以生体作为对象的新型的肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。
另外,可以提供使在人、尤其是肾衰竭患者的体内利用透析疗法也难以除去的硫酸吲哚酚的血中浓度降低的肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。
另外,可以提供来自裸藻的物质的新型利用方法即肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂。
附图说明
图1为表示对肾衰竭患者给药9周本实施例的肾衰竭发展抑制剂时的血中硫酸吲哚酚浓度的变化量的图表。
图2为表示对50岁以上且70岁以下的肾衰竭患者给药9周肾衰竭发展抑制剂时的血中硫酸吲哚酚浓度的变化量的图表。
图3为表示对男性的肾衰竭患者给药9周肾衰竭发展抑制剂时的血中硫酸吲哚酚浓度的变化量的图表。
图4为表示将本实施例的裸藻淀粉与吲哚溶液混合时的溶液中的吲哚残留浓度的经时性变化的图表。
图5为将对大鼠给药4周本发明的实施例的裸藻淀粉时的盲肠内的肠道菌群的占有率进行比较的图表。
图6为将图5中的盲肠内的有益菌/有害菌之比进行比较的图表。
图7为将对大鼠给药4周本实施例的裸藻淀粉时的饲养开始起的第2周及第4周的肠内通过时间进行比较的图表。
图8为将对大鼠给药4周本实施例的裸藻淀粉时的饲养开始起第2周及第4周的粪的重量进行比较的图表。
图9为将图8中的饲养开始起第2周及第4周的粪的水分量进行比较的图表。
具体实施方式
以下,参照图1~图9对本发明的实施方式进行说明。
本实施方式涉及一种肾衰竭发展抑制剂,其以来自裸藻的裸藻淀粉或其加工品作为主成分,并且通过对肾衰竭患者进行给药,从而使生体的血中硫酸吲哚酚浓度降低,抑制肾衰竭疾病的发展、恶化。
<肾衰竭疾病的概要>
肾衰竭是指肾脏功能降低至正常时的约30%以下的状态,包括肾脏功能急剧降低的状态的急性肾衰竭和肾脏功能长年缓慢降低的状态的慢性肾衰竭。
首先,急性肾衰竭是指:急剧的肾脏功能降低的结果,引起血中肌酸酐浓度的高值(例如每天上升0.5mg/dL以上)、血中尿素氮浓度的高值(例如每天上升10mg/dL以上)、体液中的水分、电解质浓度的异常等,处于无法维持体液的恒常性的状态。
急性肾衰竭会因原因部位而分为肾前性、肾性和肾后性。
肾前性急性肾衰竭是因血液的循环动态的恶化而导致肾血流量降低、肾小球滤过率降低的病态,作为主要原因,可列举心力衰竭、心肌梗塞、心外膜炎、血管炎、动脈硬化、两侧肾动脈狭窄、肾素-血管紧张素系统的活化、败血症、过敏症、肝硬变、麻醉药、出血、脱水、呕吐、腹泻、浮肿、腹水、烧伤、肾病综合征、肾上腺功能不全等。
肾性急性肾衰竭是因肾脏的肾小球、肾小管、间质的障碍而产生的病态,作为主要原因,可列举急性肾小球肾炎、胶原病、溶血性尿毒症综合症、急性肾小管坏死、高Ca血症、药剂过敏、肾盂肾炎、NSAIDs、从肾前性经过的狭义的急性肾小管坏死、抗生素、造影剂、重金属、多发性骨髓瘤、高尿酸血症、横纹肌溶解症、DIC等。
肾后性急性肾衰竭是因尿路的阻塞而产生的病态,作为主要原因,可列举输尿管阻塞(结石、肿瘤、腹膜后纤维化症)、前列腺肥大症、肿瘤、结石等。
急性肾衰竭一般需要透析疗法,若透析疗法发挥功效,则依次经历发病期、少尿期、利尿期、恢复期而达到治愈。另一方面,在重症情况下,也可能有无法恢复肾脏功能而过渡到继续透析疗法的情况。
急性肾衰竭虽然因透析疗法的进步而使预后的死亡率减少,但是死亡率仍有约50%,在肾脏病中也是危险的疾病。
接着,慢性肾衰竭是指因慢性发展的各种肾疾病而导致肾脏功能不可逆地逐渐降低的病态,无法维持体液的恒常性,呈现出高血压、贫血骨代谢异常等形形色色的病态。尤其,将在末期肾衰竭出现的诸多症状称作尿毒症,需要利用透析疗法净化血液。
慢性肾衰竭的发展程度一般根据慢性肾脏病(CKD:Chronic Kidney Disease)的疾病分类而分为第1阶段~第5阶段(CKD诊疗指南2012、日肾会志2012(CKD診療ガイド2012、日腎会誌2012))。
慢性肾脏病(CKD)在日常临床中利用蛋白尿和肾小球滤过率((GFR)ml/分/1.73m2)进行诊断,在日常诊疗中,根据血中肌酸酐(Cr)浓度、年龄和性别,采用使用日本人的GFR推算式计算出的推算GFR(eGFR)进行评价。
需要说明的是,肾小球滤过率(GFR)是测定肾功能的好坏(以尿的形式排泄废物的能力)的指标,该值越低,表示肾功能越低。
CKD的第1阶段是虽然存在肾障碍但是处于正常的GFR值(GFR≥90)的状态,第2阶段是存在肾障碍且处于轻度的GFR值(GFR=60~89)的状态,在这些阶段中,残存肾功能发挥作用,大致无症状。
CKD的第3阶段是存在肾障碍且处于中度的GFR值(GFR=30~59)的状态,残余肾功能的大小不完全,确认到尿量的增加、血中尿素氮的上升,还出现轻度贫血,无法维持体液的恒常性。
CKD的第4阶段是存在肾障碍且处于高度的GFR值(GFR=15~29)的状态,第3阶段的症状加重。需要说明的是,CKD的第1~第4阶段在开始透析疗法之前的状态下也称作保存期(原文:保存期)肾衰竭。
然后,CKD的第5阶段是处于末期肾衰竭且需要透析疗法的状态(GFR<15),在体液异常加剧的同时还出现尿毒症症状。
作为引起慢性肾衰竭的主要原因疾病,可列举糖尿病性肾病、慢性肾炎(慢性肾小球肾炎)、肾硬化症等。
在处于末期肾衰竭的情况下,若不利用透析疗法代替肾功能或进行肾脏移植,则处于濒临死亡的危险状态。作为开始透析疗法的基准,一般来说为血中肌酸酐值8mg/dl以上或血中尿素氮100mg/dl以上。
需要说明的是,透析疗法是指在因肾衰竭或尿毒症而无法除去废物的情况等,人为地进行透析来净化血液的治疗法,主要包括血液透析和腹膜透析两种。
另外,还包括:利用血液透析优异地除去中分子量物质的血液过滤、组合血液透析和血液过滤而优异地除去从小分子物质到低蛋白物质的宽泛范围的物质的血液过滤透析、面向心功能降低而无法耐受血液透析的患者而缓缓地耗时进行的持续的血液过滤透析、以及使用吸附剂除去特定物质的血液吸附、从血液分离除去血浆并补充新的血浆等的血浆交换等特别的治疗法。
<硫酸吲哚酚的概要>
接着,对既是在肾衰竭患者的体内显示高血中浓度的尿毒症物质又是肾衰竭疾病的恶化因子的硫酸吲哚酚进行说明。
硫酸吲哚酚是食物中的蛋白质的代谢产物。具体而言,蛋白质中所含的色氨酸被大肠菌等肠内有害菌分解,由此产生作为前体的吲哚。然后,吲哚被消化管吸收后,在肝脏内受到硫酸结合,生成硫酸吲哚酚。
硫酸吲哚酚被释放到血中而大部分以与白蛋白结合的形式存在,其不被代谢而主要从肾脏排放到尿中,在肾衰竭患者的情况下,因肾脏功能的降低而处于在血中以高浓度蓄积的状态。
硫酸吲哚酚与肾脏的纤维化及肾小球硬化等有关,并且被已知为引起活性氧的诱导、引起自由基清除剂的减少、引起心脏血管病、使肾衰竭发展、恶化的物质。
另外,生体内的血中硫酸吲哚酚浓度已知与作为肾脏功能的指标的血中肌酸酐浓度、及血中尿素氮浓度有关,并且认为通过降低血中硫酸吲哚酚浓度,从而与肾衰竭相伴的肾脏功能的障碍显著降低。
因此认为与通过降低肾衰竭患者的生体内的血中硫酸吲哚酚浓度而抑制肾衰竭疾病的发展有关。
<肾衰竭发展抑制剂>
作为肾衰竭发展抑制剂的主成分的裸藻淀粉或其加工品包括从裸藻细胞提取的裸藻淀粉、裸藻淀粉粉末、各种裸藻淀粉的加工品等。
作为裸藻细胞,理想的是使用细小裸藻(E.gracilis)、尤其是细小裸藻(E.gracilis)Z株。此外还可以是Euglena gracilis Krebs、Euglena gracilisBarubachirasu等种、细小裸藻(E.gracilis)Z株的变异株SM-ZK株(叶绿体缺失株)、变种的var.bacillaris、这些种的叶绿体的变异株等基因变异株来源的β-1,3-葡聚糖酶、Euglena intermedia、Euglena piride及其他裸藻类例如Astaia longa。
裸藻属广泛分布于池塘、沼泽等淡水中,可以由它们分离使用,此外,还可以使用已分离出的任意的裸藻属。
本发明的裸藻属包含其全部变异株。此外,这些变异株中还包含通过遗传学方法例如重组、转导、转化等获得的产物。
裸藻细胞的培养中,作为培养液,可以使用例如添加了氮源、磷源、矿物质等营养盐类的培养液,例如改进的Cramer-Myers培养基((NH4)2HPO4 1.0g/L、KH2PO4 1.0g/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、CaCl2·2H2O 0.02g/L、Fe2(SO2)3·7H2O 3mg/L、MnCl2·4H2O 1.8mg/L、CoSO4·7H2O 1.5mg/L、ZnSO4·7H2O 0.4mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.2mg/L、CuSO4·5H2O0.02g/L、盐酸硫胺(维生素B1)0.1mg/L、氰钴胺(维生素B12)、(pH3.5))。需要说明的是,(NH4)2HPO4还可以变更为(NH4)2SO4、NH3aq。此外,还可以使用基于“ユーグレナ生理と生化学”(北冈正三郎编、株式会社学会出版中心)的记载而制备的公知的Hutner培养基,Koren-Hutner培养基。
培养液的pH优选2以上,此外,其上限优选6以下、更优选4.5以下。通过使pH位于酸性侧,能够使光合微生物比其他微生物更占优势地生长发育,因此能够抑制污染。
另外,裸藻细胞的培养例如可以使用间歇补料(原文:供給バッチ)法来进行,也可以通过烧瓶培养、使用发酵槽的培养、分批培养法、半分批培养法(流加培养法)、连续培养法(灌流培养法)等任意液体培养法来进行。
裸藻细胞的分离例如利用培养液的离心分离或单纯的沉降来进行。
裸藻淀粉(paramylon)是约700个葡萄糖利用β-1,3-键聚合而成的高分子体(β-1,3-葡聚糖),其多孔,并且是裸藻属所含有的贮存多糖。裸藻淀粉粒子是扁平的旋转椭球体粒子,并且是β-1,3-葡聚糖链成螺旋状缠绕而形成的。
裸藻淀粉粒子以任意的合适方法由所培养的裸藻细胞分离并纯化为微粒状,通常以粉末体的形式来提供。
例如,裸藻淀粉粒子可以通过(1)在任意适合的培养基中培养裸藻细胞;(2)从该培养基分离裸藻细胞;(3)从分离出的裸藻细胞分离裸藻淀粉;(4)分离出的裸藻淀粉的纯化;以及根据需要的(5)冷却及之后的冷冻干燥而获得。
裸藻淀粉的分离可以使用例如大部分可被生物降解的种类的非离子性表面活性剂或阴离子性表面活性剂来进行。裸藻淀粉的纯化实质上可以与分离同时进行。
需要说明的是,自裸藻的裸藻淀粉的分离及纯化是公知的,记载于例如E.Ziegler,"Die naturlichen und kunstlichen Aromen"Heidelberg,Germany,1982,Chapter 4.3"Gefriertrocken"、DE 43 28 329、或日本特表2003-529538号公报中。
作为裸藻淀粉的加工品,可列举例如无定形裸藻淀粉。
无定形裸藻淀粉是指对来自裸藻的结晶性裸藻淀粉进行无定形化而得的物质。
无定形裸藻淀粉相对于通过公知方法由裸藻生成的结晶性裸藻淀粉的相对结晶度为1~20%。
其中,该相对结晶度通过日本特愿2010-52042号记载的方法求出。
即,将无定形裸藻淀粉及裸藻淀粉分别用粉碎机(Retsch公司制球磨机MM400)以20次/秒的振动数粉碎5分钟后,用X射线衍射装置(spectris公司制H’PertPRO)在管电压45KV、管电流40mA条件下对2θ在5°至30°范围进行扫描,获得裸藻淀粉和无定形裸藻淀粉在2θ=20°附近的衍射峰Pc、Pa。
使用该Pc、Pa的值,通过
无定形裸藻淀粉的相对结晶度=Pa/Pc×100(%)
而算出无定形裸藻淀粉的相对结晶度。
无定形裸藻淀粉可以如下制备:按照日本特愿2010-52042号记载的方法,将结晶性的裸藻淀粉粉末进行碱处理后用酸中和,然后经过洗涤、水分除去工序并进行干燥,从而制备。
作为裸藻淀粉的加工品,还包括通过各种公知方法对裸藻淀粉进行化学处理或物理处理而获得的水溶性裸藻淀粉、硫酸化裸藻淀粉等以及裸藻淀粉衍生物。
<<肾衰竭的发展抑制作用>>
肾衰竭发展抑制剂可以通过对肾衰竭患者给药裸藻淀粉或其加工品来降低上述硫酸吲哚酚的血中浓度。
具体的作用机制如以下所示。
(1)作为肾衰竭发展抑制剂的有效主成分的裸藻淀粉或其加工品为多孔,并且发挥在肾衰竭患者的肠内直接吸附作为硫酸吲哚酚的前体的吲哚的作用。
而且,裸藻淀粉或其加工品为难消化性,其在吸附有吲哚的状态下不被吸收至生体内而通过消化管,与吲哚一起被排泄到粪便中。
因此,吲哚被消化管吸收,抑制了其在肝脏内受硫酸结合而产生的硫酸吲哚酚的产生量。而且,还抑制硫酸吲哚酚被释放到血中,因此可以降低血中硫酸吲哚酚浓度。
(2)另外,作为肾衰竭发展抑制剂的有效主成分的裸藻淀粉或其加工品发挥出有助于改善人的肠内环境的作用,这是以往的球形吸附炭所不具有的作用。
(2-1)详细而言,若对生体给药裸藻淀粉或其加工品,则发挥使包括人的肠内的双岐乳酸菌或乳酸菌在内的有益菌活化、增殖的作用。因此,可以发挥通常肠内有害菌增加、另一方面有益菌减少的肾衰竭患者的肠内菌的平衡改善效果。
因此,通过抑制肠内有害菌的增加,从而抑制食物中的蛋白质所含的色氨酸被肠内有害菌分解所产生的吲哚的产生量,因此可以抑制硫酸吲哚酚的产生量。
(2-2)此外,若对生体给药裸藻淀粉或其加工品,则口服摄取的食物的肠内通过时间缩短,抑制在肠内通过过程中由色氨酸产生的吲哚的产生量,因此抑制硫酸吲哚酚的产生量。
根据至少上述作用机制,通过对肾衰竭患者给药本实施方式的肾衰竭发展抑制剂,从而可以降低血中硫酸吲哚酚浓度。
<<用途>>
通过对急性肾衰竭患者给药本实施方式的肾衰竭发展抑制剂,从而可以用于抑制急性肾衰竭疾病的发展、恶化。
尤其,急性肾衰竭患者的硫酸吲哚酚浓度有时会急剧上升,因硫酸吲哚酚的血管障碍作用而引起心脏血管病,还出现过死亡的案例,因此使得本肾衰竭发展抑制剂的效果变得有意义。
另外,本肾衰竭发展抑制剂对于无论是肾前性、肾性、肾后性的急性肾衰竭患者均可应用,并且对于无论是急性肾衰竭的发病期、少尿期、利尿期、恢复期的各个时期的患者均可应用。
此外,本肾衰竭发展抑制剂对于患有作为急性肾衰竭的原因所列举的上述疾病的患者及其高危者(原文:予備軍)也可以应用,可以用作急性肾衰竭的预防剂。
通过对慢性肾衰竭患者给药本实施方式的肾衰竭发展抑制剂,从而可以用于抑制慢性肾衰竭疾病的发展、恶化。
另外,本肾衰竭发展抑制剂对于无论CKD的第1~第5阶段的各阶段的慢性肾衰竭患者均可应用,对于已经接受肾脏移植后的患者也可以应用。例如对于处于CKD的第1~第4阶段的保存期肾衰竭的患者可以发挥延缓引入透析为止的期限的作用。
此外,本肾衰竭发展抑制剂对于患有作为慢性肾衰竭的原因所列举的糖尿病性肾病、慢性肾炎(慢性肾小球肾炎)、肾硬化症等疾病的患者及其高危者也可以应用,并且可以用作慢性肾衰竭的预防剂。
本实施方式的肾衰竭发展抑制剂可以作为含有肾衰竭发展抑制剂的药物组合物、食品组合物等组合物等来进行利用。
(药物组合物)
在医药的领域中,通过将能够有效发挥肾衰竭的发展抑制作用、即降低硫酸吲哚酚的血中浓度的作用的量的裸藻淀粉与药学上允许的载体、添加剂一起配合,从而提供具有该作用的药物组合物。该药物组合物可以是药品,也可以是准药品。
尤其理想的是制成与具有整肠作用的乳酸菌、双岐乳酸菌、丁酸菌等的合剂,本肾衰竭发展抑制剂的作用效果协同提高。具体而言,利用上述整肠作用来抑制大肠菌等肠内有害菌的增殖,可以协同地发挥减少因肠内有害菌所产生的腐败产物的作用。
另外,理想的还有制成与为了抑制肠内有害菌的增殖而用于降低肠内的pH(氢离子浓度指数)的pH调整剂的合剂,本肾衰竭发展抑制剂的作用效果协同提高。
该药物组合物既适合于内服又适合于外用。因此,该药物组合物可以以内服剂、静脉注射、皮下注射、皮内注射、肌肉注射和/或腹腔内注射等注射剂、经粘膜适用剂、经皮适用剂等制剂形态来使用。
作为该药物组合物的剂型,可以根据应用形态适当设定,可列举例如片剂、颗粒剂、胶囊剂、粉末剂、散剂等固态制剂,液剂、悬浊剂等液状制剂,软膏剂、凝胶剂等半固态剂。
(食品组合物)
在食品领域中,通过将能够在生物体内发挥肾衰竭的发展抑制作用的有效量的裸藻淀粉作为食品原材配合于各种食品,从而能够提供具有该作用的食品组合物。
尤其理想的是制成与具有整肠作用的乳酸菌、双岐乳酸菌、丁酸菌等组合的食品、或者组合有pH调节剂的食品,本肾衰竭发展抑制剂的作用效果协同提高。
即,本发明能够在食品领域中提供显示出肾衰竭发展抑制作用等的食品组合物。作为该食品组合物,除一般食品外,还可以列举特定保健用食品、营养功能食品、表示功能性的食品、医院患者用食品、补充剂等。此外,还可以作为食品添加剂使用。
作为该食品组合物,可列举例如调味料、畜肉加工品、农产加工品、饮料(清凉饮料、酒精饮料、碳酸饮料、乳饮料、果汁饮料、茶、咖啡、营养饮料等)、粉末饮料(粉末果汁、粉末汤等)、浓缩饮料、点心类(糖果、曲奇、饼干、口香糖、橡皮糖(原文:グミ)、巧克力等)、面包、谷类食品等。另外,在特定保健用食品、营养功能食品、表示功能性的食品等的情况下,还可以是胶囊、含片、糖浆、颗粒、粉末等形状。
在此,特定保健用食品是指包含对生理学功能等带来影响的保健功能成分的食品,是能够意指得到消费者厅长官的许可而适合于特定的保健用途的食品。在本发明中,是指表现为抑制肾衰竭发展、预防和改善肾衰竭、预防和改善尿毒症、以及阻碍生体内产生硫酸吲哚酚等作为特定的保健用途而出售的食品。
另外,营养功能食品是指为了补给营养成分(维生素、矿物质)而利用的食品,是表示营养成分的功能的食品。由于以营养功能食品的形式出售,因此需要处于对每天的摄取基准量所含的营养成分量进行了规定的上限值、下限值的范围内,其不仅需要表示营养功能,而且还需要对注意事项进行表示等。
另外,表示功能性的食品是指在事业者的责任内,表示基于科学根据的功能性的食品。在出售前将与安全性及功能性的根据有关的信息等呈报给消费者厅长官。
在上述中,本发明包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分,可以用作以肾衰竭患者、患有肾衰竭的除人以外的动物为对象的肾衰竭发展抑制用特定保健用食品、肾衰竭发展抑制用营养功能食品、表示肾衰竭发展抑制用的功能性的食品。
另外,本发明包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分,可以用作以生体、例如患有肾衰竭之前的人、肾衰竭高危者的人、接受肾衰竭的诊断或治疗之前的人、除人以外的动物为对象的肾衰竭预防用特定保健用食品、肾衰竭预防用营养功能食品、表示肾衰竭预防用的功能性的食品。
<<用法及用量>>
作为本实施方式的肾衰竭发展抑制剂的用法,适宜对肾衰竭患者进行口服给药,优选对慢性肾衰竭患者进行口服给药。
在此,作为慢性肾衰竭患者,可以是接受透析疗法的患者,也可以是接受透析疗法之前的患者、或接受肾脏移植后的患者。更优选为接受透析疗法的慢性肾衰竭患者。进一步优选为年龄50岁~70岁的接受透析疗法的慢性肾衰竭患者,适宜为男性患者。
本实施方式的肾衰竭发展抑制剂的用法适宜对肾衰竭患者口服给药每天3~15g的裸藻淀粉或裸藻淀粉加工品。优选以每天3~9g、更优选每天6g进行口服给药。另外,适宜每天给药一次规定量的裸藻淀粉或裸藻淀粉加工品,优选每天分几次进行给药,更优选每天分3次进行给药。
另外,肾衰竭发展抑制剂的用法适宜对肾衰竭患者持续给药,优选持续给药9周以上。
此外,作为肾衰竭发展抑制剂的剂型,优选为片剂、颗粒剂、胶囊剂、粉末剂、散剂等固态制剂,更优选为胶囊剂或粉末剂。
本实施方式的肾衰竭发展抑制剂的用法适宜对肾衰竭患者在餐前或餐后进行给药。
另外,肾衰竭发展抑制剂的用法适宜对肾衰竭患者进行单独给药而不与其他药剂等同时给药。优选在其他药剂给药前后空出规定时间进行给药。
作为比较对象,在以往的肾衰竭发展抑制剂即球形吸附炭的情况下,通常需要每天分成3次服用6g(就200mg胶囊而言为30粒胶囊剂、或者就2g/包的颗粒制剂而言为3包)。该服用量为大大多于通常药品的服用量,例如即使为颗粒制剂,在口腔内也有刷拉刷拉(原文:ジャリジャリ)感而难以服用。此外,还具有腹部膨胀感、便秘等副作用,因此患者的负担相当大。
对此,在本发明的裸藻淀粉或裸藻淀粉加工品的情况下,即使每天均同为6g,只要将作为250mg胶囊的24粒胶囊剂或粉末剂分成3次服用即可,减少胶囊剂的服用个数。例如使其为粉末剂,口感也良好,并且没有腹部膨胀感、便秘等副作用。因此,减轻肾衰竭患者的痛苦、负担,使该患者易于长期摄取。
<肾衰竭治疗剂、肾衰竭预防剂>
在本实施方式中,主要就肾衰竭发展抑制剂进行了说明,此外还可以用作包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分且以肾衰竭患者、患有肾衰竭的除人以外的动物为对象的肾衰竭治疗剂。
肾衰竭治疗剂通过对生体给药裸藻淀粉,从而使生体内的血中的硫酸吲哚酚浓度降低至正常范围。
具体而言,通过将能够有效地发挥降低血中硫酸吲哚酚浓度的作用的量的裸藻淀粉与药学上允许的载体、添加剂一起配合,从而可以提供协同提高本肾衰竭发展抑制剂的作用效果的肾衰竭治疗剂。
另外,还可以用作包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分且以生体,例如患有肾衰竭之前的人、肾衰竭高危者的人、接受肾衰竭的诊断或治疗之前的人、除人以外的动物为对象的肾衰竭预防剂。
肾衰竭预防剂通过对生体给药裸藻淀粉而将生体内的血中的硫酸吲哚酚浓度控制为正常范围内。
<除硫酸吲哚酚产生抑制剂外的治疗剂、预防剂>
本发明也可以用作包含裸藻淀粉或其加工品作为有效成分且使在生体内产生的硫酸吲哚酚的血中浓度降低的硫酸吲哚酚产生抑制剂。
硫酸吲哚酚产生抑制剂除作为肾衰竭的发展抑制剂、治疗剂或预防剂发挥功能外,还作为与肾衰竭相关的疾病即肾炎(丝状体肾炎)、肾病(糖尿病性肾病、IgA肾病)、心脏血管病、心力衰竭、心肌梗塞、中风等的治疗剂或预防剂发挥功能。此外,还作为通过降低血中硫酸吲哚酚浓度而得以改善的疾病的预防剂或治疗剂发挥功能。
另外,本发明还可以用作对尿毒症患者给药的尿毒症治疗剂、对慢性肾脏病(CKD)患者给药的与慢性肾脏病相伴的心血管系统疾病治疗剂。
此外,还可以用作与肾衰竭有关的疾病例如肾炎(丝状体肾炎)、肾病(糖尿病性肾病、IgA肾病)、心脏血管病、心力衰竭、心肌梗塞、中风等的预防剂或治疗剂、治疗后的辅助性的健康状态微调节剂。
实施例
<实施例>
利用以下的步骤制备(制造)来自裸藻的裸藻淀粉。
将细小裸藻粉末((株)Euglena公司制)加入蒸馏水中,在室温下搅拌2天。将其进行超声波处理,破坏细胞膜,利用离心分离回收粗制裸藻淀粉粒子。将回收的裸藻淀粉粒子分散到1%的十二烷基硫酸钠水溶液中,在95℃下处理2小时,再度进行离心分离,将所回收的裸藻淀粉粒子分散到0.1%的十二烷基硫酸钠水溶液中,在50℃下处理30分钟。利用该操作除去脂质、蛋白,之后用丙酮及醚进行清洗,然后以50℃进行干燥,得到精制裸藻淀粉粒子。
将制备的裸藻淀粉以固态制剂的形式收容到公知的胶囊中,得到肾衰竭发展抑制剂。
<试验例1 对慢性肾衰竭患者的肾衰竭发展抑制剂给药试验>
使用实施例的肾衰竭发展抑制剂,实施了肾衰竭发展抑制效果的人体临床试验。
本试验的受试者为接受透析疗法的40~88岁的慢性肾衰竭患者48人(男性16人、女性32人),平均年龄为67.81岁,平均透析治疗经历为9.88年。
将受试者随机分为给药肾衰竭发展抑制剂的裸藻淀粉组(29名)和未给药肾衰竭发展抑制剂的对照组(19名)。使裸藻淀粉组的受试者每天、每天3次且每次2g(8粒胶囊剂或粉末剂)在餐间单独口服摄取实施例的肾衰竭发展抑制剂。尤其是在其他药剂给药前后空出规定时间进行口服摄取。口服摄取持续9周。
需要说明的是,在裸藻淀粉组的受试者29人中,3人以本肾衰竭发展抑制剂为理由(胶囊量多而不易内服等)而脱离,4人因诸多情况而脱离。另外,在对照组19人中,1人因诸多情况而脱离。
在肾衰竭发展抑制剂的刚要开始摄取之前、摄取开始9周后分别从各受试者采集血液。使用所采集的全血,测定血中硫酸吲哚酚浓度,并对其变化量进行监测。具体的测定方法如以下所示。
(1)样品前处理
在受试者的血清10μL中加入三氯乙酸(4%TCA),搅拌后,进行离心分离,将上清液采集到分析用试样瓶中,制成血清样品(除蛋白处理)。血清样品通过该处理被稀释10倍。
在健康人的血清10μL中以使最终浓度达到0.0(无添加)、5.0(μg/ml)的方式添加标准硫酸吲哚酚保存液后,进行上述除蛋白处理,制作外标校准曲线(原文:外部標準検量線)用样品1,2。
(2)基于外标校准曲线法的HPLC定量分析
使用高效率液相色谱(HPLC)装置(日立高新技术制L-2000)对上述标准品1,2的各上清液2.5μL进行分离分析,利用外标校准曲线法计算浓度(μg/ml)。
(3)样品分析
以规定的顺序对上述血清样品进行了分析。
外标法校准曲线将最初和最后两次的校准曲线用样品1,2的分析结果通过最小二乘法进行拟合来制作,求得血清样品中的硫酸吲哚酚的浓度(μg/ml)。
最终的血中硫酸吲哚酚浓度通过将血清样品的分析结果乘以稀释倍率10来求得。需要说明的是,制作健康人的血清样品作为空白用,并且预先对受试者的血清样品的分析结果进行加和。
将各受试者的年龄(年)、透析疗法经历(年)、性别、摄取开始前后的血中硫酸吲哚酚浓度的测定结果(μg/ml)分成对照组和裸藻淀粉组,并对这两组分别进行比较。
分析上述测定结果,对对照组(22名)与裸藻淀粉组(18名)的摄取开始前后的血中硫酸吲哚酚浓度的平均变化量(平均降低量)进行比较的图表如图1所示。
另外,将受试者限定为年龄50岁以上且70岁以下的群体(18名),对对照组(8名)与裸藻淀粉组(10名)的摄取开始前后的血中硫酸吲哚酚浓度的平均变化量(平均降低量)进行比较的图表如图2所示。
此外,将受试者限定为男性群体(22名),对对照组(6名)与裸藻淀粉组(16名)的摄取开始前后的血中硫酸吲哚酚浓度的平均变化量(平均降低量)进行比较的图表如图3所示。
根据图1,在9周的给药期间,裸藻淀粉组的患者全体的血中硫酸吲哚酚浓度显著降低(利用t检验,P<0.05)。另一方面,对照组的患者全体的血中硫酸吲哚酚浓度未发生显著变化。
另外,根据图2,在年龄50岁以上且70岁以下的群体中,裸藻淀粉组的患者的血中硫酸吲哚酚浓度显著降低(利用t检验,P<0.05)。另一方面,对照组的患者的血中硫酸吲哚酚浓度未发生显著变化。
另外,根据图3,在男性群体中,裸藻淀粉组的患者的血中硫酸吲哚酚浓度显著降低(利用t检验,P<0.05)。另一方面,对照组的患者的血中硫酸吲哚酚浓度未发生显著变化。
(试验例1的考察)
根据试验例1的结果,通过对接受透析疗法的40~88岁的慢性肾衰竭患者的9周的实施例的肾衰竭发展抑制剂的持续给药,从而使血中硫酸吲哚酚浓度明显降低。
尤其,通过对该患者每天、每天3次且每次2g(8胶囊剂或粉末剂)在餐间单独口服给药肾衰竭发展抑制剂,且在其他药剂给药前后空出规定时间进行给药,从而使血中硫酸吲哚酚浓度明显降低。
另外,在接受透析疗法的40~88岁的慢性肾衰竭患者中,通过对尤其年龄50岁以上且70岁以下的患者给药肾衰竭发展抑制剂,从而使血中硫酸吲哚酚浓度明显降低。
另外,在接受透析疗法的40~88岁的慢性肾衰竭患者中,通过对尤其男性患者给药肾衰竭发展抑制剂,从而使血中硫酸吲哚酚浓度明显降低。
另外,一般在对肾衰竭患者持续给药以往的球形吸附炭的情况下,该患者的半数左右难以内服,大多因腹部膨胀感、便秘等副作用大等理由而脱离,在持续给药本肾衰竭发展抑制剂的情况下,在裸藻淀粉给药组的29名患者中,只有3名患者以本肾衰竭发展抑制剂为由脱离
根据实际医师的问诊,作为受试者的感想,得出比以往的球形吸附炭更易于服用、无腹部膨胀感、便秘等症状得到改善的结果。
而且得到如下的医师的诊断结果:本试验例1是在未告知受试者本肾衰竭发展抑制剂的作用效果的前提下实施,因此若预先告知受试者本肾衰竭发展抑制剂的作用效果,则脱离的患者应会更少。
尤其,还得到如下的医师的诊断结果:一般接受透析治疗的肾衰竭患者在水分摄取的限制下容易出现便秘,若预先告知该患者(受试者)本肾衰竭发展抑制剂的作用效果之一即肠内环境的改善作用,则可以确认到以往的球形吸附炭所不具备的作用即便秘的改善作用,因此脱离的患者还会更少。
基于以上内容可知:实施例的肾衰竭发展抑制剂通过降低生体内的血中硫酸吲哚酚浓度,从而抑制接受透析疗法的慢性肾衰竭患者的肾衰竭疾病的发展。
而且可知:与以往的肾衰竭发展抑制剂即球形吸附炭相比,更易于服用,不易引起腹部膨胀、便秘等副作用,使慢性肾衰竭患者易于长期口服摄取。
<试验例2 吲哚吸附能力试验>
进行确认实施例制备的裸藻淀粉的吲哚吸附能力的试验。
具体的方法如以下所示。
(1)校准曲线的作成
分别制作浓度0、10、20、30、40、50ng/ml的吲哚溶液,使用荧光光度计(日立高新技术制F-2500)分别测定在激发波长342nm下的吸光度,制作表示吲哚浓度与吸光度的关系的校准曲线。
(2)裸藻淀粉混合后的吲哚残留浓度测定
在浓度30ng/ml的吲哚溶液中以达到2%容量的量添加裸藻淀粉,使用涡流混合机使其混合1分钟。之后,使用离心机以转速6200rpm离心1分钟,使裸藻淀粉沉淀,将上清液作为样品进行回收。
作为具体的样品,准备样品1:上述混合后立即离心并回收的上清液、样品2:混合后使其静置10分钟后再离心并回收的上清液、样品3:混合后使其静置30分钟后再离心并回收的上清液、样品4:混合后使其静置60分钟后再离心并回收的上清液、样品5:混合后使其静置1440分钟(24小时)后再离心并回收的上清液共计5种样品,分别使用荧光光度计测定在激发波长342nm下的吸光度。
另一方面,在纯化水中以达到2%容量的量添加裸藻淀粉,同样使其混合1分钟后,进行离心,使裸藻淀粉沉淀,将上清液作为空白液进行回收,测定在激发波长342nm下的吸光度。
利用样品1~5测定的吸光度的值减去利用空白液测定的吸光度的值,分别计算吲哚溶液中的吲哚残留浓度,由此确认由裸藻淀粉所致的吲哚吸附能力的经时性变化。
作为试验结果,表示裸藻淀粉混合后的静置时间与吲哚残留浓度的关系的图表如图4所示。
由图4可知:若在吲哚溶液中混合裸藻淀粉,则吲哚溶液中的吲哚残留浓度下降。
另外可知:在吲哚溶液中混合裸藻淀粉后,静置时间越长,则吲哚溶液中的吲哚残留浓度越下降。
(试验例2的考察)
由试验例2的结果可知:若在吲哚溶液中混合裸藻淀粉,则裸藻淀粉吸附吲哚溶液中所含的吲哚。
另外可知:在吲哚溶液中混合裸藻淀粉后,静置时间越长,裸藻淀粉的吲哚吸附量越多。
由以上内容可知:实施例的裸藻淀粉发挥出在人、尤其肾衰竭患者的肠内吸附吲哚的作用。
而且可知:由于减少硫酸吲哚酚的前体即吲哚的绝对量,并且抑制硫酸吲哚酚被释放到血中,因此可以降低血中硫酸吲哚酚浓度。
<试验例3 肠内有益菌的增殖确认试验>
使大鼠口服摄取实施例制备的裸藻淀粉,进行确认裸藻淀粉的肠内环境的改善作用的试验、具体而言为进行测定肠道菌群的有益菌的占有率的试验。
在试验中使用3周龄的Wistar系雄性大鼠(日本CLEA株式会社)15只。饲料和饮料水(蒸馏水)自由摄取。
大鼠在预备饲养1周后每5只一组分成3组饲养4周。饲料基于纯化饲料(AIN-93N;日本CLEA株式会社)制作,使对照组口服摄取除去纤维素后的饲料。另外,使纤维素组摄取添加纤维素5%的饲料,使裸藻淀粉组摄取代替纤维素而添加了实施例制备的裸藻淀粉5%的饲料(参照下述表1所示的饲料组成)。
表1
※合计的值四舍五入为100。
试验中,对在各大鼠的肠道菌群中分类为有益菌的乳酸杆菌属及双歧杆菌属、分类为有害菌的梭状芽孢杆菌属、分类为条件致病菌的普氏菌(Prevotella)属及类杆菌(Bacteroides)属的各占有率按照菌群进行了测定。另外,求出有益菌和有害菌之比。
具体而言,对各大鼠的盲肠中的肠道菌群,基于公知的方法进行来自菌群的16SrRNA部分的碱基排列的解析。
(Nagashima K,et al.(2003)"Application of New Primer-EnzymeCombinations to Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism Profilingof Bacterial Populations in Human Feces"Appl Environ Microbiol,69,1251-1262.)
作为试验结果,对对照组、纤维素组和裸藻淀粉组的、盲肠的肠道菌群的占有率进行比较的图表如图5所示。另外,对盲肠中的有益菌/有害菌之比进行比较的图表如图6所示。
根据图5,就有益菌的占有率而言,裸藻淀粉组及纤维素组比对照组高。就有害菌的占有率而言,在3组之间未确认到显著的差异。就条件致病菌的占有率而言,裸藻淀粉组比其他组高。
另外,根据图6,就有益菌与有害菌之比而言,裸藻淀粉组比其他组高。
(试验例3的考察)
根据试验例3的结果,就持续摄取作为不溶性食物纤维的裸藻淀粉及纤维素的裸藻淀粉组及纤维素组的大鼠而言,肠道菌群中的有益菌的占有率高。另外,在裸藻淀粉组的大鼠中,肠道菌群中的有益菌与有害菌之比显示出比其他组更高的值。
即,裸藻淀粉具有肠内环境的改善作用的效果,并且具有与纤维素同等或同等以上的肠内环境的改善作用的效果。
由以上内容可知:若对生体口服给药裸藻淀粉,则发挥使肠内的包括双岐乳酸菌或乳酸菌在内的有益菌活化、增殖的作用,并且发挥肠内菌的平衡改善效果。
其结果可知:通过抑制肠内有害菌的增加,从而抑制由食物中的蛋白质所含的色氨酸被肠内有害菌分解而产生的吲哚的产生量,并且抑制硫酸吲哚酚的产生量。
尤其可知:在以往的球形吸附炭的情况下,对于有消化管通过障碍的肾衰竭患者,由于有造成排泄障碍的风险而无法进行给药,但是,若为本裸藻淀粉,则即使对该患者也能不给排泄造成障碍地进行给药。
<试验例4 口服摄取的食物的肠内通过时间测定试验>
使大鼠口服摄取实施例制备的裸藻淀粉,进行确认裸藻淀粉的肠内环境的改善作用的试验、具体而言为测定口服摄取的含裸藻淀粉的饲料的肠内通过时间的试验。
在试验中,与试验例2同样地使用3周龄的Wistar系雄性大鼠15只。饲料和饮料水(蒸馏水)自由摄取。
大鼠在预备饲养1周后每5只一组分成3组饲养4周。使对照组口服摄取除去纤维素后的饲料。另外,使纤维素组摄取添加纤维素5%的饲料,使裸藻淀粉组摄取代替纤维素而添加实施例制备的裸藻淀粉5%的饲料(参照上述表1所示的饲料组成)。
试验中,使大鼠在饲养开始第2周(第13天)和饲养开始第4周(第27天)的18时摄取添加有洋红色素5%的饲料,测定直至观察到红色的粪便为止的时间。在0小时~3小时内每隔1小时进行确认,在3时以后每隔30分钟进行确认。
按照在第2周和第4周测定的肠内通过时间,在饲养期间中使其从9时绝食至18时,除此以外的时间自由摄取。
作为试验结果,对对照组、纤维素组和裸藻淀粉组的、饲养开始第2周及第4周的肠内通过时间分别进行比较的图表如图7所示。
根据图7,就在第2周测定的肠内通过时间而言,在对照组、纤维素组及裸藻淀粉组之间未确认到显著的差异。
就在第4周测定的肠内通过时间而言,裸藻淀粉组最早。裸藻淀粉组及纤维素组与对照组相比显著较早。在裸藻淀粉组与纤维素组之间未确认到显著的差异。
(试验例4的考察)
根据试验例4的结果,通过对大鼠4周持续给药裸藻淀粉,从而观察到大鼠的肠内通过时间比对照组缩短。
另外,通过裸藻淀粉的持续给药,从而观察到与纤维素的持续给药同等的肠内通过时间的缩短。即可知裸藻淀粉具有与纤维素同等的肠内环境的改善作用的效果。
由以上内容可知:若对生体口服给药裸藻淀粉,则口服摄取的食物的肠内通过时间缩短。
其结果可知:抑制在肠内通过的过程中由色氨酸产生的吲哚的产生量,并且抑制硫酸吲哚酚的产生量。
<试验例5 粪便的重量测定试验>
使大鼠口服摄取实施例制备的裸藻淀粉,进行确认裸藻淀粉的肠内环境的改善作用的试验、具体而言为测定在裸藻淀粉的口服摄取后排泄的粪便的重量的试验。
在试验中,与试验例2、3同样地使用3周龄的Wistar系雄性大鼠15只。饲料和饮料水(蒸馏水)自由摄取。
大鼠在预备饲养1周后每5只一组分成对照组、纤维素组和裸藻淀粉组3组饲养4周。
试验中,在饲养开始第2周的3天(第11~13天)和饲养开始第4周的屠杀前的3天(第25~27天)分别采集粪便,测定粪便的干燥重量以及水分量。需要说明的是,粪便的水分量在使粪便在100℃干燥24小时后进行称重。
作为试验结果,对对照组、纤维素组和裸藻淀粉组的饲养开始第2周及第4周的粪便的重量、水分量分别进行比较的图表如图8、图9所示。
根据图8,就在第2周及第4周测定的粪便的重量而言,裸藻淀粉组及纤维素组明显比对照组大(利用t检验,P<0.05)。在裸藻淀粉组与纤维素组之间未确认到显著的差异。
根据图9,就在第4周测定的粪便的水分量而言,裸藻淀粉组明显比对照组大,且比纤维素组高。(利用t检验,P<0.05)。
(试验例5的考察)
根据试验例5的结果,通过对大鼠4周持续给药裸藻淀粉,从而观察到大鼠所排泄的粪便的重量、水分量比对照组增加。
另外,通过裸藻淀粉的持续给药,从而观察到与纤维素的持续给药同等的粪量的增加。即可知裸藻淀粉具有与纤维素同等的肠内环境的改善作用的效果。
由以上内容可知:若对生体给药裸藻淀粉,则口服摄取后的粪便的重量、水分量增加。
一般而言,据报道:若粪便的重量增加、粪便的保水性提高,则食物的肠内通过时间缩短(及川桂子,所谓的食物纤维饮料对大鼠的粪量和消化道通过时间以及人的便通造成的影响,岩手大学教育学部研究年报,55,111-118(1995))。
因此可知:抑制在肠内通过的过程中由色氨酸产生的吲哚的产生量,并且抑制硫酸吲哚酚的产生量。
Claims (4)
1.裸藻淀粉在肾衰竭发展抑制剂的制备中的应用。
2.裸藻淀粉在肾衰竭预防剂的制备中的应用。
3.裸藻淀粉在尿毒症治疗剂的制备中的应用。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的应用,其中,所述抑制剂、预防剂或治疗剂为用于阻碍硫酸吲哚酚产生的物质。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014-199433 | 2014-09-29 | ||
JP2014199433 | 2014-09-29 | ||
PCT/JP2015/077523 WO2016052509A1 (ja) | 2014-09-29 | 2015-09-29 | 腎不全進行抑制剤、腎不全予防剤及びインドキシル硫酸産生阻害剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107073032A CN107073032A (zh) | 2017-08-18 |
CN107073032B true CN107073032B (zh) | 2020-12-22 |
Family
ID=55630536
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201580052173.0A Active CN107073032B (zh) | 2014-09-29 | 2015-09-29 | 肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10231989B2 (zh) |
JP (1) | JPWO2016052509A1 (zh) |
KR (1) | KR20170053723A (zh) |
CN (1) | CN107073032B (zh) |
MY (1) | MY187270A (zh) |
SG (1) | SG11201702354TA (zh) |
WO (1) | WO2016052509A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112203668B (zh) * | 2017-12-15 | 2024-02-06 | 绿十字生命健康有限公司 | 用于抑制和预防肾病发展的益生菌和包含其的用于抑制和预防肾病发展的组合物 |
JP6996460B2 (ja) * | 2018-09-10 | 2022-01-17 | 国立大学法人 熊本大学 | 腎臓病の進行抑制剤、予防剤、および治療剤 |
KR102083165B1 (ko) * | 2019-09-18 | 2020-03-02 | 대상 주식회사 | 베타-1,3-글루칸 생산능을 갖는 신규의 유글레나 속 균주 및 이를 이용한 베타-1,3-글루칸을 함유하는 유글레나 균체의 제조방법 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102812048A (zh) * | 2010-03-09 | 2012-12-05 | 优瑞纳股份有限公司 | 过敏抑制物质 |
JP2014118374A (ja) * | 2012-12-14 | 2014-06-30 | Euglena Co Ltd | 糖尿病抑制剤 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT1274002B (it) | 1994-11-14 | 1997-07-14 | Isi Ist Sierovaccinogeno Ital | Uso di sostanze e composizioni di natura polimerica per il trattamentodell'uremia tramite il controllo di fattori tossici e/o dipsogenici e dell'equilibrio idricosalino |
ES2175863T3 (es) | 1999-02-10 | 2002-11-16 | Suwelack Skin & Health Care Ag | Producto liofilizado que contiene beta-1,3-glucano procedente de euglena, su preparacion y utilizacion. |
US20040197352A1 (en) | 1999-04-30 | 2004-10-07 | Natarajan Ranganathan | Methods of improving or augmenting kidney function |
EP1675617B1 (en) | 2003-09-30 | 2017-07-26 | Kibow Biotech, Inc. | Compositions for augmenting kidney function |
JP2006273772A (ja) | 2005-03-30 | 2006-10-12 | Japan Organo Co Ltd | 経口投与薬及びその製造方法 |
JP4305785B1 (ja) | 2008-10-15 | 2009-07-29 | 森永製菓株式会社 | プリン体吸収抑制剤及び血中尿酸値低減剤 |
JP2014024817A (ja) | 2012-07-30 | 2014-02-06 | Nippon Kayaku Food Techno Kk | 慢性腎不全予防剤又は慢性腎不全治療剤 |
-
2015
- 2015-09-29 CN CN201580052173.0A patent/CN107073032B/zh active Active
- 2015-09-29 MY MYPI2017700947A patent/MY187270A/en unknown
- 2015-09-29 JP JP2016552065A patent/JPWO2016052509A1/ja not_active Withdrawn
- 2015-09-29 WO PCT/JP2015/077523 patent/WO2016052509A1/ja active Application Filing
- 2015-09-29 US US15/514,966 patent/US10231989B2/en active Active
- 2015-09-29 KR KR1020177009985A patent/KR20170053723A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-09-29 SG SG11201702354TA patent/SG11201702354TA/en unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102812048A (zh) * | 2010-03-09 | 2012-12-05 | 优瑞纳股份有限公司 | 过敏抑制物质 |
JP2014118374A (ja) * | 2012-12-14 | 2014-06-30 | Euglena Co Ltd | 糖尿病抑制剤 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Antitumor activity of the β-glucan paramylon from Euglena against preneoplastic colonic aberrant crypt foci in mice;Toshiaki Watanabe, et al.;《Food Funct.》;20131231;第4卷;1685-1690 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US10231989B2 (en) | 2019-03-19 |
KR20170053723A (ko) | 2017-05-16 |
CN107073032A (zh) | 2017-08-18 |
MY187270A (en) | 2021-09-17 |
US20170224717A1 (en) | 2017-08-10 |
SG11201702354TA (en) | 2017-05-30 |
JPWO2016052509A1 (ja) | 2017-06-08 |
WO2016052509A1 (ja) | 2016-04-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108367030B (zh) | 普氏粪杆菌和惰性脱硫弧菌用于治疗或预防糖尿病和肠病 | |
US10828313B2 (en) | Synthetic composition for treating metabolic disorders | |
JP6148218B2 (ja) | 腎不全進行抑制剤、腎不全予防剤、尿毒症治療剤、インドキシル硫酸産生阻害剤、心血管系疾患予防剤、及び食品組成物 | |
US10517906B2 (en) | Gelatinous mixture of probiotics and prebiotics with synergic symbiotic action for treating chronic renal disease | |
WO2009005379A1 (en) | New medical applications of alpha-ketoglutarate | |
JP2008255063A (ja) | 血圧上昇抑制作用を有する組成物 | |
CN107073032B (zh) | 肾衰竭发展抑制剂、肾衰竭预防剂及硫酸吲哚酚产生抑制剂 | |
JP5740072B2 (ja) | β−1,3−1,6−D−グルカンを用いたストレス緩和剤 | |
JP5916288B2 (ja) | 自然免疫促進作用が増強された自然免疫活性化剤の製造方法及びその製造方法で製造されたローヤルゼリー由来の自然免疫活性化剤 | |
JP7104169B2 (ja) | 腎臓疾患進行抑制及び予防用プロバイオティクス及びこれを含む腎臓疾患進行抑制及び予防用組成物 | |
WO2019028402A1 (en) | ROSEBURIA HOMINIS, EUBACTERIUM ELIGENS AND COMBINATIONS THEREOF AS BIOTHERAPEUTIC AGENTS | |
US20040197352A1 (en) | Methods of improving or augmenting kidney function | |
CN116004481B (zh) | 一种肠道菌株及其应用 | |
TW201836669A (zh) | 抑制肌纖維變性用組成物 | |
EP3431090A1 (en) | Proliferative agent for bacteria of genus faecalibacterium | |
US7026160B2 (en) | Oral bacteriotherapy compositions and methods | |
JP5955236B2 (ja) | 血中クレゾール低下剤 | |
EP3688196A1 (en) | Gemella sanguinis as a biotherapeutics | |
JP2002272420A (ja) | 抗高血圧関連摂取物 | |
RU2341276C1 (ru) | Способ профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят | |
AU2018314228A1 (en) | Streptococcus Australis as a biotherapeutics | |
JP6996460B2 (ja) | 腎臓病の進行抑制剤、予防剤、および治療剤 | |
CN117256869A (zh) | 玉米低聚肽在制备改善肌肉衰减的特殊医学用途配方食品或药品中的用途 | |
Di Cerbo et al. | Lucia Palmieri, Valentina Rottigni, Tommaso Iannitti & Beniamino Palmieri |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |