KR20170053723A - 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제 - Google Patents

Abstract

인간 특히 신부전 환자를 대상으로 하는 신규의 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제를 제공한다. 유글레나 유래의 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로 하는 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제이다. 예를 들면 신부전 진행 억제제에서는 1회당 1~5g의 파라밀론이 만성 신부전에 이환되어 투석 요법을 받고 있는 환자에 대하여 1일 수 회 계속해서 경구 투여된다. 특히 당해 환자에 대하여 캡슐제 또는 분말제로서 다른 약제 투여 전후에 소정 시간을 비우고 단독으로 투여된다.

Description

신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제{RENAL INSUFFICIENCY PROGRESSION INHIBITOR, PROPHYLACTIC AGENT FOR RENAL INSUFFICIENCY AND INDOXYL SULFATE PRODUCTION INHIBITOR}

본 발명은 신규의 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제에 관한 것이다.

현재 일본에는 약30만명 이상의 말기 신부전 환자가 존재하고 있고, 그 수는 증가 일로를 걷고 있다. 말기 신부전에는 근본적인 치료 방법이 없고, 주요 신대체 요법으로서 혈액 투석, 복막 투석 및 신이식이 있다. 그러나 어느 대체 요법도 환자에게 큰 부담이 가해진다. 그 때문에 초기 증상일 때에 신부전의 진행을 억제하는 것이 중요하며, 유효한 신부전 진행 억제제, 신부전 치료제가 요망되고 있는 바이다.

신부전 환자의 체내에서는 신부전 진행 인자나 혈관 장애 인자가 되는 요독증 물질인 인독실황산의 혈중 농도, 신기능 장애의 지표인 크레아티닌의 혈중 농도, 죽상동맥경화증에 의한 심혈관계 질환의 위험 인자인 호모시스테인의 혈중 농도, 추가로 중성 지방의 값이 높아지는 것이 일반적으로 알려져 있다.

이 중에서도 특히 인독실황산은 신부전 진행 인자로서 증명된 요독증 물질이라는 보고가 이루어져 있고(비특허 문헌 1 참조), 만성 신부전 환자의 혈중 인독실황산 농도는 건상자의 혈중 인독실황산 농도와 비교하여 매우 높아진다.

인독실황산은 상기 서술한 바와 같이 신부전을 진행, 악화시키는 물질인 점에서, 신부전 환자의 혈중 인독실황산 농도를 저하시킴으로써, 신장 기능의 장애가 현저히 저감하고, 신부전의 진행을 억제할 수 있다고 생각되고 있다. 한편 상기 신대체 요법에 의해서도 제거할 수 없는 대단히 성가신 대사산물이다.

그래서 종래의 신부전 진행 억제제로서 구형흡착탄이 장관 내에서 인독실황산의 전구체인 인돌을 흡착하여 분변 중에 배설시킴으로써, 혈중 인독실황산 농도를 저하시키는 것이 알려져 있다. 그 결과 신부전의 진행을 억제하는 것 이외에, 신부전에 관여한 심장혈관병의 발증을 억제하여 심장혈관병에 따른 사망률도 낮춘다는 보고가 이루어져 있다.

그러나 구형흡착탄은 1일에 30캡슐 복용해야 하는 등의 이유로 내복이 부담스러울 뿐만아니라 부작용으로서 복부 팽만감, 변비 등의 증상이 심하여, 구형흡착탄의 장기에 걸친 내복에 의해 매우 고통을 수반하기 때문에, 중지 희망하는 환자도 많이 확인되고 있다.

그 때문에 보다 적은 투여량으로 또한 복부 팽만이나 변비를 일으키지 않는 등, 환자의 고통이나 부담을 경감한 새로운 약제가 요구되고 있다.

새로운 약제의 가능성으로서 예를 들면 흡착제로서 알려진 키토산을 포함하는 만성 신부전 예방제, 치료제가 제안되어 있다(특허문헌 1 참조).

구체적으로는 키토산을 유효 성분으로 하는 경구 투여제가 신부전 모델 래트를 사용한 동물 실험 결과에 의해 요독증 물질이며 산화 스트레스 환경을 야기하는 원인 물질인 인독실황산의 혈중 농도를 저하시키는 것이 보고되어 있다.

그러나 인간 특히 만성 신부전 환자를 대상으로 한 임상 시험 결과에 대해서는 보고되어 있지 않고, 당해 환자를 대상으로 하여 유효성이나 안전성을 검증하는 것이나, 당해 환자의 고통이나 부담을 경감하기 위해, 투여 시간, 투여 순서, 투여량 등의 용법 또는 용량을 추가로 검토할 필요가 있었다.

한편 식량, 사료, 연료 등으로서의 이용이 유망시되고 있는 생물 자원으로서 유글레나(속명 : Euglena, 일본어명 : 미도리무시)가 주목되고 있다.

유글레나는 비타민, 미네랄, 아미노산, 불포화 지방산 등, 인간이 살아가기 위해서 필요한 영양소의 대부분에 해당하는 59종류의 영양소를 구비하여, 다종류의 영양소를 밸런스 좋게 섭취하기 위한 서플리먼트로서의 이용이나, 필요한 영양소를 섭취할 수 없는 빈곤 지역에서의 식량 공급원으로서의 이용의 가능성이 제안되어 있다.

유글레나는 음식물 연쇄의 최저변에 위치하여 포식자에 의해 포식되는 것이나, 빛, 온도 조건, 교반 속도 등의 배양 조건이 다른 미생물에 비해 어렵거나 한 이유로부터, 대량 배양이 어렵다고 여겨져왔지만, 최근 본 발명자들의 예의 연구에 의해 대량 배양 기술이 확립되어, 유글레나 및 유글레나로부터 추출되는 파라밀론의 대량 공급의 길이 열렸다.

유글레나는 편모 운동을 하는 동물적 성질을 가지면서, 동시에 식물로서 엽록체를 가지고 광합성을 행하는 유니크한 생물이며, 유글레나 자체나 유글레나 유래의 물질에 많은 기능성이 있는 것이 기대되고 있다.

그 때문에 대량 공급 가능하게 된 유글레나 및 파라밀론 등의 유글레나 유래 물질의 기능이나, 기능성 발현의 메커니즘의 해명, 나아가서는 이들 물질의 이용법 등의 개발이 요망되고 있다.

일본 특개 2014-24817호 공보

니와 도시미츠, 현대의학 47권 1호:55-61(1999) Tanaka, R. et al.:Jpn. J.Pediatr., 33, 2483(1980)

본 발명은 상기한 과제를 감안하여 이루어진 것으로, 본 발명의 목적은 생체를 대상으로 하는 신규의 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제를 제공하는 것에 있다.

본 발명의 다른 목적은 인간 특히 신부전 환자의 체내에 있어서 투석 요법에 의해서도 제거하는 것이 곤란한 인독실황산의 혈중 농도를 저하시키는 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제를 제공하는 것에 있다.

본 발명의 다른 목적은 유글레나 유래 물질의 신규의 이용 방법이 되는 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제를 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은 예의 연구한 결과, 유글레나 유래의 파라밀론을 생체에 투여하면, 요독증 물질인 인독실황산의 혈중 농도가 저하하는 것을 알아냈다.

상세히 서술하면, 인독실황산의 전구체인 인돌은 식사 중의 단백질에 많이 포함되는 트립토판이 장내 유해균에 의해 분해됨으로써로 산생되는 부패 산물인 바, 본 발명자들은 인간 특히 신부전 환자에게 파라밀론 또는 파라밀론 가공품을 투여하면, 파라밀론이 인돌을 흡착하는 작용을 하여, 혈중 인독실황산 농도가 저하되는 것을 알아내어, 본 발명을 이루기에 이르렀다.

또 일반적으로 신부전으로 혈액의 인공 투석을 행하고 있는 환자의 장관에서는 대장균 등의 장내 유해균이 증가하는 한편, 비피더스균이나 유산균 등의 선옥의 혐기성균이 감소하고 있는 것이 알려져 있다. 그리고 비피더스균이나 유산균 등을 섭취함으로써, 장내 세균총이 개선되는 것이 확인되고 있다(비특허문헌 2).

그래서 본 발명자들은 예의 연구한 결과, 유글레나 유래의 파라밀론이 인간의 장내 환경의 개선에 기여하는 것을 알아냈다. 구체적으로는 유글레나 유래의 파라밀론을 생체에 투여하면, 장내 유해균이 감소하고, 장내의 비피더스균이나 유산균이 증가하는 것을 밝혀내어, 본 발명을 이루기에 이르렀다.

또 본 발명자들은 예의 연구한 결과, 유글레나 유래의 파라밀론을 생체에 투여하면, 종래의 구형흡착탄에는 없는 상승적인 작용으로서, 경구 섭취한 음식물의 장내 통과 시간이 단축되고, 장내에 있어서 트립토판이 분해되어 산생하는 인돌의 산생량이 억제되는 것을 밝혀내어, 본 발명을 이루기에 이르렀다.

따라서 상기 과제는 본 발명의 신부전 진행 억제제에 의하면, 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 것에 의해 해결된다.

상기 구성에 의해 신부전 환자에게 파라밀론 또는 그 가공품을 투여하면, 파라밀론이 혈중의 인독실황산 농도를 저하시키기 때문에, 본 발명을 신부전 질환의 진행 억제제로서 사용할 수 있다.

이 때 신부전에 이환되어 투석 요법을 받고 있는 환자에 대하여 투여되면 된다.

상기 구성에 의해 일반적으로 인독실황산은 투석 요법에 의해서도 제거하는 것이 곤란한 요독증 물질인 바, 투석 요법을 받고 있는 환자에게 파라밀론을 투여함으로써, 당해 환자의 인독실황산의 혈중 농도를 저하시킬 수 있고, 예를 들면 말기 신부전의 더 이상의 진행, 악화를 막을 수 있다.

이 때 만성 신부전에 이환되고, 연령 50세로부터 70세까지의 환자에 대하여 투여되면 된다.

상기 구성에 의해 일반적으로 투석 요법을 도입 개시하는 말기 신부전 환자의 평균 연령이 68.4세인 바(일본의 만성 투석 요법의 현황 2012년 12월 31일 현재, 일본투석의학회), 투석 요법을 도입하는 전단계에 있는 50세로부터 70세까지의 환자에 대하여 파라밀론을 투여함으로써, 투석 요법을 도입하는 전단계에서 환자의 신부전의 진행을 막을 수 있다.

이 때 1회당 1~5g의 상기 파라밀론 또는 그 가공품이 만성 신부전에 이환된 환자에 대하여 1일 3회 계속해서 투여되면 된다.

또 만성 신부전에 이환된 환자에 대하여 캡슐제 또는 분말제로서 경구 투여되면 된다.

또 만성 신부전에 이환된 환자에 대하여 다른 약제 투여 전후에 소정 시간을 비우고 단독으로 투여되면 된다.

상기 구성에 의해 신부전 환자를 대상으로 하여, 파라밀론의 유효성이 높은 투여 시간, 투여 순서, 투여량 등의 용법 또는 용량을 특정한 다음, 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로 하는 신부전 진행 억제제를 제공할 수 있다.

또 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 신부전 예방제, 요독증 치료제, 인독실황산 산생 저해제, 또는 심혈관계 질환 예방제도 실현할 수 있다.

또 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 신부전 진행 억제용 특정 보건용 식품도 실현할 수 있다.

또 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 조성물을 섭취시켜 신부전의 진행을 억제하기 위한 방법(인간에 대한 의료 행위를 제외함)도 실현할 수 있다.

그 밖에 파라밀론 또는 그 가공품의 유효량을 생체(인간) 특히 환자에게 투여하는 또는 섭취시키는 것을 포함하는 신부전의 진행을 억제하는 방법도 실현할 수 있다.

또 신부전의 진행을 억제하기 위한 의약의 제조를 위한 파라밀론 또는 그 가공품의 사용도 실현할 수 있다.

또 신부전 진행 억제 물질이 파라밀론 또는 그 가공품인 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제 물질의 신부전의 진행을 억제하는 의약품의 제조로의 응용도 실현할 수 있다.

본 발명에 의하면 생체를 대상으로 하는 신규의 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제를 제공할 수 있다.

또 인간 특히 신부전 환자의 체내에 있어서 투석 요법에 의해서도 제거하는 것이 곤란한 인독실황산의 혈중 농도를 저하시키는 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제를 제공할 수 있다.

또 유글레나 유래 물질의 신규의 이용 방법이 되는 신부전 진행 억제제, 신부전 예방제 및 인독실황산 산생 저해제를 제공할 수 있다.

도 1은 본 실시예의 신부전 진행 억제제를 신부전 환자에 대하여 9주간 투여했을 때의 혈중 인독실황산 농도의 변화량을 나타내는 그래프이다.
도 2는 신부전 진행 억제제를 50세 이상 70세 이하의 신부전 환자에 대하여 9주간 투여했을 때의 혈중 인독실황산 농도의 변화량을 나타내는 그래프이다.
도 3은 신부전 진행 억제제를 남성의 신부전 환자에 대하여 9주간 투여했을 때의 혈중 인독실황산 농도의 변화량을 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 실시예의 파라밀론을 인돌 용액에 혼화시켰을 때의 용액 중의 인돌 잔류 농도의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예의 파라밀론을 래트에 대하여 4주간 투여했을 때의 맹장에 있어서의 장내 세균총의 점유율을 비교한 그래프이다.
도 6은 도 5에 있어서 맹장에 있어서의 선옥균/악옥균의 비를 비교한 그래프이다.
도 7은 본 실시예의 파라밀론을 래트에 대하여 4주간 투여했을 때의 사육 개시 2주간째 및 4주간째의 장내 통과 시간을 비교한 그래프이다.
도 8은 본 실시예의 파라밀론을 래트에 대하여 4주간 투여했을 때의 사육 개시 2주간째 및 4주간째의 대변의 중량을 비교한 그래프이다.
도 9는 도 8에 있어서 사육 개시 2주간째 및 4주간째의 대변의 수분량을 비교한 그래프이다.

이하 본 발명의 실시형태에 대해서, 도 1~도 9를 참조하면서 설명한다.

본 실시형태는 유글레나 유래의 파라밀론 또는 그 가공품을 주성분으로 하여, 신부전 환자에게 투여함으로써 생체내에 있어서의 혈중 인독실황산 농도를 저하시키고, 신부전 질환의 진행, 악화를 억제하기 위한 신부전 진행 억제제의 발명에 관한 것이다.

<신부전 질환의 개요>

신부전은 신장 기능이 정상시의 약30% 이하까지 저하된 상태로서, 급격하게 신장 기능이 저하된 상태인 급성 신부전과, 오랜 세월에 걸쳐 서서히 신장 기능이 저하되어가는 상태인 만성 신부전이 있다.

우선 급성 신부전은 급격한 신장 기능의 저하의 결과, 혈중 크레아티닌 농도의 높은 값(예를 들면 1일에 0.5mg/dL 이상의 상승), 혈중 요소질소 농도의 높은 값(예를 들면 1일에 10mg/dL 이상의 상승), 체액 중의 수분, 전해질 농도의 이상 등이 일어나, 체액의 항상성을 유지할 수 없게 된 상태이다.

급성 신부전은 원인 부위에 의해 신전성과 신성과 신후성으로 분류된다.

신전성 급성 신부전은 혈액의 순환 동태의 악화에 의해, 신혈류량이 저하되고, 사구체 여과율이 저하된 병태로서, 주된 원인으로서 심부전, 심근경색, 심외막염, 혈관염, 동맥경화, 양측 신동맥 협착, 레닌·안지오텐신계의 활성화, 패혈증, 아나필락시, 간경변, 마취약, 출혈, 탈수, 구토, 설사, 부종, 복수 저류, 화상, 네프로제 증후군, 부신부전 등을 들 수 있다.

신성 급성 신부전은 신장의 사구체, 요세관, 간질의 장애에 의해 발생하는 병태로서, 주된 원인으로서 급성 사구체 신염, 교원병, 용혈성 요독증 증후군, 급성 요세관 괴사, 고Ca혈증, 약제 알레르기, 신우신염, NSAIDs, 신전성으로부터 경과한 협의의 급성 요세관 괴사, 항생 물질, 조영제, 중금속, 다발성 골수종, 고요산혈증, 횡문근융해증, DIC 등을 들 수 있다.

신후성 급성 신부전은 요로의 폐색에 의해 발생하는 병태로서, 주된 원인으로서 요관 폐색(결석, 종양, 후복막선유증), 전립선 비대증, 종양, 결석 등을 들 수 있다.

급성 신부전은 일반적으로 투석 요법을 필요로 하고, 투석 요법이 효과를 나타내면, 발증기, 핍뇨기, 이뇨기, 회복기의 순서로 치유로 향한다. 한편 중증인 경우에는 신장 기능이 회복되지 않고, 투석 요법의 계속으로 이행하는 경우도 있을 수 있다.

급성 신부전은 투석 요법의 진보에 의해 예후의 사망률이 감소하고 있지만, 아직도 사망률이 약50%이며, 신장병 중에서도 위험한 병으로 여겨지고 있다.

이어서 만성 신부전은 만성으로 진행하는 각종 신질환에 의해 불가역적으로 신장 기능이 저하되어가는 병태로서, 체액의 항상성을 유지할 수 없게 되어, 고혈압, 빈혈 골대사이상 등 다양한 병태를 나타낸다. 특히 말기 신부전에 출현하는 제증상을 요독증이라고 하고, 투석 요법에 의해 혈액을 정화하는 것이 필요하게 된다.

만성 신부전의 진행도는 일반적으로 만성 신장병(CKD : Chronic Kidney Disease)의 병 분류에 따라 제1 스테이지로부터 제5 스테이지로 분류된다(CKD 진료 가이드 2012, 일신회지 2012).

만성 신장병(CKD)은 일상 임상에서는 단백뇨와 사구체 여과율((GFR)ml/분/1.73m²)로 진단하고, 일상 진료에서는 혈중 크레아티닌(Cr) 농도와 연령과 성별로부터, 일본인의 GFR 추산식을 사용하여 산출한 추산 GFR(eGFR)로 평가한다.

또한 사구체 여과율(GFR)은 신기능의 좋고 나쁨(소변으로서 노폐물을 배설하는 능력)을 측정하는 지표로서, 이 값이 낮을수록 신기능이 저하되어 있는 것을 나타낸다.

CKD의 제1 스테이지는 신장애가 존재하지만 정상인 GFR값(GFR≥90)의 상태이며, 제2 스테이지는 신장애가 존재하고, 경도의 GFR값(GFR=60~89)의 상태이며, 이들 스테이지에서는 잔존 신기능이 작용하고 있어, 거의 무증상이다.

CKD의 제3 스테이지는 신장애가 존재하고, 중도의 GFR값(GFR=30~59)의 상태이며, 잔존 신기능의 대소가 불완전하게 되어, 요량의 증가나 혈중 요소질소의 상승이 확인되고, 빈혈도 경도 출현하며, 체액의 항상성을 유지할 수 없게 된다.

CKD의 제4 스테이지는 신장애가 존재하고, 고도의 GFR값(GFR=15~29)의 상태이며, 제3 스테이지의 증상이 증악한다. 또한 CKD의 제1~제4 스테이지는 투석 요법을 개시하기 전의 상태이며 보존기 신부전이라고도 한다.

그리고 CKD의 제5 스테이지는 말기 신부전이 되어 투석 요법을 필요로 하는 상태(GFR<15)이며, 체액 이상의 진행과 함께 요독증 증상이 출현한다.

만성 신부전을 야기하는 주된 원인 질환으로서는 당뇨병성 신증, 만성 신염(만성 사구체 신염), 신경화증 등을 들 수 있다.

말기 신부전이 된 경우에는 투석 요법에 의해 신기능을 대체하거나 신장 이식을 하지 않으면 죽음에 이르는 위험한 상태가 된다. 투석 요법 개시의 기준으로서는 일반적으로 혈중 크레아티닌값이 8mg/dl 이상, 또는 혈중 요소질소가 100mg/dl 이상이라고 일컬어지고 있다.

또한 투석 요법은 신부전이나 요독증으로 노폐물을 제거할 수 없게 된 경우 등에 인공적으로 투석을 행하여 혈액을 정화하는 치료법으로서, 주로 혈액 투석과 복막 투석의 2종류로 이루어진다.

또 혈액 투석보다 중분자량 물질의 제거에 우수한 혈액 여과나, 혈액 투석과 혈액 여과를 조합하여, 소분자 물질로부터 저단백 물질까지 폭넓은 제거에 우수한 혈액 여과 투석이나, 심기능이 저하되어 혈액 투석을 견딜 수 없는 환자를 위해 천천히 시간을 들여 행하는 지속적 혈액 여과 투석이나, 그 밖에 흡착제를 사용하여 특정 물질을 제거하는 혈액 흡착이나, 혈액으로부터 혈장을 분리하여 제거하고, 새로운 혈장 등을 보충하는 혈장 교환 등의 특별한 치료법도 포함하는 것이다.

<인독실황산의 개요>

이어서 신부전 환자의 체내에 있어서 높은 혈중 농도를 나타내는 요독증 물질이며, 신부전 질환의 진행 인자이기도 한 인독실황산에 대해서 설명한다.

인독실황산은 음식물 중의 단백질의 대사산물이다. 구체적으로는 단백질에 포함되는 트립토판이 대장균 등의 장내 유해균에 의해 분해됨으로써, 전구체인 인돌이 산생된다. 그리고 인돌이 소화관에서 흡수된 후에 간장에서 황산포합을 받음으로써 인독실황산이 생성된다.

인독실황산은 혈중에 방출되어 대부분이 알부민과 결합한 형태로 존재하고 있고, 대사를 받지 않고 주로 신장으로부터 요중에 배출되는데, 신부전 환자의 경우에는 신장 기능의 저하에 의해 혈중에 고농도로 축적된 채로 있다.

인독실황산은 신장의 선유화 및 사구체 경화 등에 관여하고, 활성 산소의 유도나 래디컬 스캐빈저의 감소를 야기하며, 심장혈관병을 야기하고, 신부전을 진행, 악화시키는 것으로서 알려져 있다.

또 생체내의 혈중 인독실황산 농도는 신장 기능의 지표가 되는 혈중 크레아티닌 농도 및 혈중 요소질소 농도와 상관하는 것이 알려져 있고, 혈중 인독실황산 농도가 저하됨으로써, 신부전에 의해 수반되는 신장 기능의 장애가 현저하게 저감되는 것으로 생각되고 있다.

따라서 신부전 환자의 생체내에 있어서의 혈중 인독실황산 농도를 저하시킴으로써, 신부전 질환의 진행을 억제하는 것으로 이어진다고 생각된다.

<신부전 진행 억제제>

신부전 진행 억제제의 주성분이 되는 파라밀론 또는 그 가공품은 유글레나 세포로부터 추출된 파라밀론, 파라밀론 분말이나, 각종 파라밀론의 가공품 등을 포함하는 것이다.

유글레나 세포로서는 유글레나·그라실리스(E. gracilis), 특히 유글레나·그라실리스(E. gracilis) Z주를 사용하는 것이 바람직하다. 그 밖에 유글레나·그라실리스·클레이프스, 유글레나·그라실리스·바르바실라스 등의 종, 유글레나·그라실리스(E. gracilis) Z주의 변이주 SM-ZK주(엽록체 결손주)나 변종의 var. bacillaris, 이들 종의 엽록체의 변이주 등의 유전자 변이주 유래의 β-1,3-글루카나아제, Euglena intermedia, Euglena piride 및 그 밖의 유글레나류, 예를 들면 Astaia longa여도 된다.

유글레나속은 연못이나 늪 등의 담수 중에 널리 분포되어 있고, 이들로부터 분리하여 사용해도 되고, 또 이미 단리되어 있는 임의의 유글레나속을 사용해도 된다.

본 발명에 따른 유글레나는 그 모든 변이주를 포함한다. 또 이들 변이주 중에는 유전적 방법, 예를 들면 재조합, 형질 도입, 형질 전환 등에 의해 얻어진 것도 함유된다.

유글레나 세포의 배양에 있어서, 배양액으로서는 예를 들면 질소원, 인원, 미네랄 등의 영양 염류를 첨가한 배양액, 예를 들면 개변 Cramer-Myers 배지((NH₄)₂HPO₄ 1.0g/L, KH₂PO₄ 1.0g/L, MgSO₄·7H₂O 0.2g/L, CaCl₂·2H₂O 0.02g/L, Fe₂(SO₂)₃·7H₂O 3mg/L, MnCl₂·4H₂O 1.8mg/L, CoSO₄·7H₂O 1.5mg/L, ZnSO₄·7H₂O 0.4mg/L, Na₂MoO₄·2H₂O 0.2mg/L, CuSO₄·5H₂O 0.02g/L, 티아민염산염(비타민 B₁) 0.1mg/L, 사이아노 코발라민(비타민 B₁₂), (pH3.5))을 사용할 수 있다. 또한 (NH₄)₂HPO₄는 (NH₄)₂SO₄나 NH₃aq로 변환하는 것도 가능하다. 또 그 밖에 유글레나 생리와 생화학(기타오카 쇼자부로 편, 가부시키가이샤 각카이슛판센터)의 기재에 기초하여 조제되는 공지의 Hutner 배지, Koren-Hutner 배지를 사용해도 된다.

배양액의 pH는 바람직하게는 2 이상, 또 그 상한은 바람직하게는 6 이하, 보다 바람직하게는 4.5 이하이다. pH를 산성측으로 함으로써, 광합성 미생물은 다른 미생물보다 우세하게 생육할 수 있기 때문에 컨태미네이션을 억제할 수 있다.

또 유글레나 세포의 배양은 예를 들면 공급 배치법을 사용하여 행해질 수 있는데, 플라스크 배양이나 발효조를 사용한 배양, 회분 배양법, 반회분 배양법(유가 배양법), 연속 배양법(관류 배양법) 등, 어느 액체 배양법에 의해 행해도 된다.

유글레나 세포의 분리는 예를 들면 배양액의 원심분리 또는 단순한 침강에 의해 행해진다.

파라밀론(paramylon)은 약700개의 글루코스가 β-1,3-결합에 의해 중합한 고분자체(β-1,3-글루칸)로 다공질이며, 유글레나속이 함유하는 저장 다당이다. 파라밀론 입자는 편평한 회전 타원체 입자이며, β-1,3-글루칸쇄가 나선 형상으로 서로 얽혀서 형성되어 있다.

파라밀론 입자는 배양된 유글레나 세포로부터 임의의 적절한 방법으로 단리 및 미립자상으로 정제되며, 통상 분말체로서 제공되어 있다.

예를 들면 파라밀론 입자는 (1) 임의의 적절한 배지 중에서의 유글레나 세포의 배양; (2) 당해 배지로부터의 유글레나 세포의 분리; (3) 분리된 유글레나 세포로부터의 파라밀론의 단리; (4) 단리된 파라밀론의 정제; 및 필요에 따라 (5) 냉각 및 그 후의 동결 건조에 의해 얻을 수 있다.

파라밀론의 단리는 예를 들면 대부분이 생물 분해되는 종류의 비이온성 또는 음이온성의 계면 활성제를 사용하여 행해진다. 파라밀론의 정제는 실질적으로는 단리와 동시에 행해진다.

또한 유글레나로부터의 파라밀론의 단리 및 정제는 주지이며, 예를 들면 E. Ziegler, "Die naturlichen und kunstlichen Aromen" Heidelberg, Germany, 1982, Chapter 4.3 "Gefriertrocken", DE 43 28 329, 또는 일본 특표 2003-529538호 공보에 기재되어 있다.

파라밀론의 가공품으로서는 예를 들면 아몰퍼스 파라밀론을 들 수 있다.

아몰퍼스 파라밀론은 유글레나 유래의 결정성 파라밀론을 아몰퍼스화한 물질이다.

아몰퍼스 파라밀론은 유글레나로부터 공지의 방법으로 생성된 결정성의 파라밀론에 대한 상대 결정도가 1~20%이다.

단 이 상대 결정도는 일본 특원 2010-52042호에 기재된 방법에 의해 구한 것이다.

즉 아몰퍼스 파라밀론 및 파라밀론을 각각 분쇄기(Retsh사제 볼밀 MM400)로 진동수 20회/초로 5분간 분쇄 후, X선 회절 장치(스펙트리스사제 H'PertPRO)를 사용하여 관전압 45KV, 관전류 40mA로 2θ가 5° 내지 30°의 범위에서 스캔을 행하고, 파라밀론과 아몰퍼스 파라밀론의 2θ=20°의 부근의 회절 피크 Pc, Pa를 얻는다.

이 Pc, Pa의 값을 사용하여 아몰퍼스 파라밀론의 상대 결정도를

아몰퍼스 파라밀론의 상대 결정도=Pa/Pc×100(%)

에 의해 산출한다.

아몰퍼스 파라밀론은 일본 특원 2010-52042호에 기재된 방법에 따라, 결정성의 파라밀론 분말을 알칼리 처리한 후에 산으로 중화하고, 그 후 세정, 수분 제거 공정을 거쳐 건조를 행함으로써 조제된다.

파라밀론의 가공품으로서는 그 밖에 공지의 각종 방법에 의해 파라밀론을 화학적 또는 물리적으로 처리하여 얻은 수용성 파라밀론, 황산화 파라밀론 등이나, 파라밀론 유도체도 포함된다.

<<신부전의 진행 억제 작용>>

신부전 진행 억제제는 파라밀론 또는 그 가공품이 신부전 환자에게 투여됨으로써, 상기 인독실황산의 혈중 농도를 저하시킬 수 있다.

구체적인 작용 메커니즘은 이하와 같다.

(1) 신부전 진행 억제제의 유효 주성분으로 하는 파라밀론 또는 그 가공품은 다공질로서, 신부전 환자의 장내에 있어서 인독실황산의 전구체인 인돌을 직접적으로 흡착하는 작용을 한다.

그리고 파라밀론 또는 그 가공품은 난소화성으로서, 인돌을 흡착한 상태에서 생체내에는 흡수되지 않고 소화관을 통과하여 인돌과 함께 분변 중에 배설된다.

따라서 인돌이 소화관에서 흡수되어 간장에서 황산포합을 받음으로써 산생되는 인독실황산의 산생량이 억제된다. 그리고 인독실황산이 혈중에 방출되는 것도 억제되는 점에서, 혈중 인독실황산 농도를 저하시킬 수 있다.

(2) 또 신부전 진행 억제제의 유효 주성분으로 하는 파라밀론 또는 그 가공품은 종래의 구형흡착탄에는 없는 작용으로서, 인간의 장내 환경의 개선에 기여하는 작용을 한다.

(2-1) 상세하게 서술하면, 파라밀론 또는 그 가공품이 생체에 투여되면, 인간의 장내의 비피더스균이나 유산균을 포함하는 선옥균을 활성화시켜 증식시키는 작용을 한다. 그 때문에 일반적으로 장내 유해균이 증가하는 한편, 선옥균이 감소하고 있는 신부전 환자의 장내균의 밸런스 개선을 할 수 있다.

따라서 장내 유해균의 증가를 억제함으로써, 식사 중의 단백질에 포함되는 트립토판으로부터 장내 유해균에 의해 분해되어 산생되는 인돌의 산생량이 억제되는 점에서 인독실황산의 산생량이 억제된다.

(2-2) 추가로 파라밀론 또는 그 가공품이 생체에 투여되면, 경구 섭취한 음식물의 장내 통과 시간이 단축되어, 장내 통과 중에 있어서 트립토판으로부터 산생되는 인돌의 산생량이 억제되는 점에서 인독실황산의 산생량이 억제된다.

적어도 상기 작용 메커니즘에 의해, 본 실시형태의 신부전 진행 억제제는 신부전 환자에게 투여됨으로써, 혈중 인독실황산 농도를 저하시키는 것이 가능하게 된다.

<<용도>>

본 실시형태의 신부전 진행 억제제는 급성 신부전 환자에게 투여됨으로써, 급성 신부전 질환의 진행, 악화를 억제하기 위해서 사용할 수 있다.

특히 급성 신부전 환자의 인독실황산 농도는 급격하게 상승하는 일이 있어, 인독실황산의 혈관 장애 작용에 의해 심장혈관병을 야기하여 사망하는 케이스도 보이는 점에서, 본 신부전 진행 억제제의 효과가 의미가 있는 것이 된다.

또 신전성, 신성, 신후성을 막론하고 어느 급성 신부전 환자에 대해서도 적용할 수 있고, 급성 신부전의 발증기, 핍뇨기, 이뇨기, 회복기를 막론하고 어느 시기의 환자에 대해서도 적용할 수 있다.

추가로 급성 신부전의 원인으로서 든 상기 서술한 질환에 이환되어 있는 환자 및 그 예비군에 대해서도 적용할 수 있어, 급성 신부전의 예방제로서 사용할 수 있다.

본 실시형태의 신부전 진행 억제제는 만성 신부전 환자에게 투여됨으로써, 만성 신부전 질환의 진행, 악화를 억제하기 위해서 사용할 수 있다.

또 CKD의 제1~제5 스테이지를 막론하고 어느 만성 신부전 환자에 대해서도 적용할 수 있고, 이미 신장 이식을 받은 후의 환자에 대해서도 적용할 수 있다. 예를 들면 CKD의 제1~제4 스테이지에 있는 보존기 신부전의 환자에 대하여 투석 도입까지 기간의 지연이 달성된다.

추가로 만성 신부전의 원인으로서 든 당뇨병성 신증, 만성 신염(만성 사구체 신염), 신경화증 등의 질환에 이환되어 있는 환자 및 그 예비군에 대해서도 적용할 수 있어, 만성 신부전의 예방제로서 사용할 수 있다.

본 실시형태의 신부전 진행 억제제는 신부전 진행 억제제를 함유하는 의약 조성물, 식품 조성물 등의 조성물 등으로서 이용할 수 있다.

(의약 조성물)

의약의 분야에서는 신부전의 진행 억제 작용, 즉 인독실황산의 혈중 농도를 저하시키는 작용을 유효하게 발휘할 수 있는 양의 파라밀론과 함께 약학적으로 허용되는 담체나 첨가제를 배합함으로써, 당해 작용을 가지는 의약 조성물이 제공된다. 당해 의약 조성물은 의약품이어도 되고 의약부외품이어도 된다.

특히 정장 작용을 가지는 유산균, 비피더스균, 낙산균 등과의 합제로 하는 것이 바람직하고, 본 신부전 진행 억제제의 작용 효과가 상승적으로 높아진다. 구체적으로는 상기 정장 작용에 의해 대장균 등의 장내 유해균의 증식을 억제하고, 장내 유해균에 의해 산생되는 부패 산물을 감소시키는 작용이 상승적으로 이루어질 수 있다.

또 장내 유해균의 증식을 억제하기 위해서 장내의 pH(수소 이온 농도 지수)를 저하시키기 위한 pH 조정제와의 합제로 하는 것도 바람직하고, 본 신부전 진행 억제제의 작용 효과가 상승적으로 높아진다.

당해 의약 조성물은 내용적으로 적용되어도 되고 또 외용적으로 적용되어도 된다. 따라서 당해 의약 조성물은 내복제, 정맥 주사, 피하 주사, 피내 주사, 근육 주사 및/또는 복강내 주사 등의 주사제, 경점막 적용제, 경피 적용제 등의 제제 형태로 사용할 수 있다.

당해 의약 조성물의 제형으로서는 적용의 형태에 따라 적당히 설정할 수 있는데, 예를 들면 정제, 과립제, 캡슐제, 분말제, 산제 등의 고형 제제, 액제, 현탁제 등의 액상 제제, 연고제 또는 겔제 등의 반고형제를 들 수 있다.

(식품 조성물)

식품의 분야에서는 신부전의 진행 억제 작용을 생체내에서 발휘할 수 있는 유효한 양의 파라밀론을 식품 소재로 하여 각종 식품에 배합함으로써, 당해 작용을 가지는 식품 조성물을 제공할 수 있다.

특히 정장 작용을 가지는 유산균, 비피더스균, 낙산균 등과 조합한 식품이나, pH 조정제를 조합한 식품으로 하는 것이 바람직하고, 본 신부전 진행 억제제의 작용 효과가 상승적으로 높아진다.

즉 본 발명은 식품의 분야에 있어서 신부전 진행 억제용 등으로 표시된 식품 조성물을 제공할 수 있다. 당해 식품 조성물로서는 일반의 식품 외에 특정 보건용 식품, 영양 기능 식품, 기능성 표시 식품, 병원 환자용 식품, 서플리먼트 등을 들 수 있다. 또 식품 첨가물로서 사용할 수도 있다.

당해 식품 조성물로서는 예를 들면 조미료, 축육 가공품, 농산 가공품, 음료(청량 음료, 알코올 음료, 탄산 음료, 유음료, 과즙 음료, 차, 커피, 영양 드링크 등), 분말 음료(분말 주스, 분말 수프 등), 농축 음료, 과자류(캔디, 쿠키, 비스켓, 검, 구미, 초콜릿 등), 빵, 시리얼 등을 들 수 있다. 또 특정 보건용 식품, 영양 기능 식품, 기능성 표시 식품 등의 경우, 캡슐, 트로키, 시럽, 과립, 분말 등의 형상이어도 된다.

여기서 특정 보건용 식품은 생리학적 기능 등에 영향을 주는 보건 기능 성분을 포함하는 식품으로서, 소비자청 장관의 허가를 얻어 특정의 보건의 용도에 적합한 취지를 표시 가능한 것이다. 본 발명에 있어서는 특정의 보건의 용도로서 신부전 진행의 억제, 신부전의 예방, 개선, 요독증의 예방, 개선, 그리고 생체내에 있어서의 인독실황산의 산생 저해 등으로 표시하여 판매되는 식품이 된다.

또 영양 기능 식품은 영양 성분(비타민, 미네랄)의 보급을 위해서 이용되는 식품으로서, 영양 성분의 기능을 표시하는 것이다. 영양 기능 식품으로서 판매하기 위해서는 1일당 섭취 기준량에 포함되는 영양 성분량이 정해진 상한값, 하한값의 범위 내에 있을 필요가 있고, 영양 기능 표시 뿐만아니라 주의 환기 표시 등도 할 필요가 있다.

또 기능성 표시 식품은 사업자의 책임에 있어서 과학적 근거에 기초한 기능성을 표시한 식품이다. 판매 전에 안전성 및 기능성의 근거에 관한 정보 등이 소비자청 장관에게 신고된 것이다.

상기에 있어서 본 발명은 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하고, 신부전 환자, 신부전에 이환된 인간 이외의 동물을 대상으로 한 신부전 진행 억제용 특정 보건용 식품이나, 신부전 진행 억제용 영양 기능 식품, 신부전 진행 억제용 기능성 표시 식품으로서 사용할 수 있다.

또 본 발명은 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하고, 생체 예를 들면 신부전에 이환되기 전의 인간, 신부전 예비군의 인간, 신부전의 진단 또는 치료를 받기 전의 인간, 인간 이외의 동물을 대상으로 한 신부전 예방용 특정 보건용 식품이나, 신부전 예방용 영양 기능 식품, 신부전 예방용 기능성 표시 식품으로서 사용할 수 있다.

<<용법 및 용량>>

본 실시형태의 신부전 진행 억제제의 용법으로서는 신부전 환자에 대하여 경구 투여하면 되고, 바람직하게는 만성 신부전 환자에 대하여 경구 투여하면 된다.

여기서 만성 신부전 환자로서는 투석 요법을 받고 있는 환자여도 되고, 투석 요법을 받기 전의 환자여도 되며, 또는 신장 이식을 받은 후의 환자여도 된다. 보다 바람직하게는 투석 요법을 받고 있는 만성 신부전 환자이면 된다. 한층 바람직하게는 연령 50세로부터 70세까지의 투석 요법을 받고 있는 만성 신부전 환자로서, 남성 환자이면 된다.

본 실시형태의 신부전 진행 억제제의 용법은 1일당 3~15g의 파라밀론 또는 파라밀론 가공품을 신부전 환자에 대하여 경구 투여하면 된다. 바람직하게는 1일당 3~9g, 보다 바람직하게는 1일당 6g 경구 투여하면 된다. 또 1일 1회에 소정량의 파라밀론 또는 파라밀론 가공품을 투여하는 것도 좋지만, 바람직하게는 1일 수회에 나누어서 투여하면 되고, 보다 바람직하게는 1일 3회에 나누어서 투여하면 된다.

또 신부전 진행 억제제의 용법은 신부전 환자에 대하여 계속 투여하는 것이 좋고, 바람직하게는 9주간 이상 계속 투여하면 된다.

추가로 신부전 진행 억제제 제형으로서는 바람직하게는 정제, 과립제, 캡슐제, 분말제, 산제 등의 고형 제제가 좋고, 보다 바람직하게는 캡슐제 또는 분말제가 좋다.

본 실시형태의 신부전 진행 억제제의 용법은 신부전 환자에 대하여 식전 또는 식후에 투여하는 것이 좋다.

또 신부전 진행 억제제의 용법은 신부전 환자에 대하여 다른 약제 등과 동시에 투여하지 않고 단독으로 투여하면 된다. 바람직하게는 다른 약제 투여 전후에 소정 시간을 비우고 투여하면 된다.

비교 대상으로서 종래의 신부전 진행 억제제인 구형흡착탄의 경우에는, 통상 1일당 6g(200mg 캡슐로서 30캡슐제 또는 2g/포의 과립 제제로서 3포)을 3회에 분할하여 복용할 필요가 있다. 이 복용량은 통상의 의약품과 비교하여 상당히 많은 복용량이며, 설령 과립 제제였다고 해도 구강내에서 버적거리는 느낌이 있어서 복용하기 힘들다. 덧붙여서 복부 팽만감, 변비 등의 부작용도 있기 때문에, 환자의 부담이 상당히 크다.

이에 대해 본 발명의 파라밀론 또는 파라밀론 가공품의 경우에는, 1일당 동일한 6g이라도 250mg 캡슐로서 24캡슐제 또는 분말제를 3회에 분할하여 복용하면 된다. 캡슐제의 복용 개수는 경감되어, 설령 분말제였다고 해도 식감은 좋고, 복부 팽만감, 변비 등의 부작용도 없다. 그 때문에 신부전 환자의 고통이나 부담이 경감되어, 당해 환자가 장기에 걸쳐 섭취하기 쉬운 것이 된다.

<신부전 치료제, 신부전 예방제>

본 실시형태에서는 주로 신부전 진행 억제제에 관하여 설명했는데, 그 밖에 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하고, 신부전 환자, 신부전에 이환된 인간 이외의 동물을 대상으로 한 신부전 치료제로서 사용할 수도 있다.

신부전 치료제는 파라밀론이 생체에 투여됨으로써, 생체내에 있어서의 혈중의 인독실황산 농도를 정상 범위까지 저하시킨다.

구체적으로는 혈중 인독실황산 농도를 저하시키는 작용을 유효하게 발휘할 수 있는 양의 파라밀론과 함께 약학적으로 허용되는 담체나 첨가제를 배합함으로써, 본 신부전 진행 억제제의 작용 효과를 상승적으로 높인 신부전 치료제를 제공할 수 있다.

또 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하고, 생체 예를 들면 신부전에 이환되기 전의 인간, 신부전 예비군의 인간, 신부전의 진단 또는 치료를 받기 전의 인간, 인간 이외의 동물을 대상으로 한 신부전 예방제로서 사용할 수도 있다.

신부전 예방제는 파라밀론이 생체에 투여됨으로써, 생체내에 있어서의 혈중의 인독실황산 농도를 정상 범위 내에서 컨트롤한다.

<인독실황산 산생 저해제 그 밖의 치료제, 예방제>

본 발명은 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하고, 생체내에서 산생되는 인독실황산의 혈중 농도를 저하시키는 인독실황산 산생 저해제로서 사용할 수도 있다.

인독실황산 산생 저해제는 신부전의 진행 억제제, 치료제 또는 예방제로서 기능하는 이외에 신부전이 관여하는 질환으로서 신염(사상체 신염), 신증(당뇨병성 신증, IgA 신증), 심장혈관병, 심부전, 심근경색, 뇌졸중 등의 치료제 또는 예방제로서도 기능한다. 추가로 혈중 인독실황산 농도의 저하에 의해 개선되는 질환의 예방제 또는 치료제로서도 기능한다.

또 본 발명은 요독증 환자에 대하여 투여되는 요독증 치료제, 만성 신장병(CKD) 환자에 대하여 투여되는 만성 신장병에 따른 심혈관계 질환 치료제로서 사용할 수도 있다.

그 밖에 신부전이 관여하는 질환으로서 예를 들면 신염(사상체 신염), 신증(당뇨병성 신증, IgA 신증), 심장혈관병, 심부전, 심근경색, 뇌졸중 등의 예방제 또는 치료제, 치료 후의 보조적인 컨디션의 미조정제로서 사용할 수도 있다.

실시예

<실시예>

유글레나 유래의 파라밀론을 이하의 순서에 의해 조제(제조)했다.

유글레나 그라실리스 분말((주)유글레나사제)을 증류수에 넣고, 실온에서 2일간 교반했다. 이것을 초음파 처리하여 세포막을 파괴하고, 원심분리에 의해 조제 파라밀론 입자를 회수했다. 회수한 파라밀론 입자를 1% 도데실황산 소듐 수용액에 분산하고, 95℃에서 2시간 처리하고, 다시 원심분리에 의해 회수한 파라밀론 입자를 0.1% 도데실황산 소듐 수용액에 분산하여 50℃에서 30분간 처리했다. 당해 조작에 의해 지질이나 단백질을 제거하고, 그 후 아세톤 및 에터로 세정한 후, 50℃에서 건조시켜, 정제 파라밀론 입자를 얻었다.

조제한 파라밀론을 고형 제제로서 공지의 캡슐에 격납하여 신부전 진행 억제제를 얻었다.

<시험예 1 만성 신부전 환자에 대한 신부전 진행 억제제 투여 시험>

실시예의 신부전 진행 억제제를 사용하여, 신부전 진행 억제 효과의 인간 임상 시험을 실시했다.

본 시험의 피험자는 투석 요법을 받고 있는 40~88세의 만성 신부전 환자 48명(남성 16명, 여성 32명)이며, 평균 연령은 67.81세, 평균 투석 치료력은 9.88년이었다.

피험자를 신부전 진행 억제제를 투여하는 파라밀론군(29명)과, 신부전 진행 억제제를 투여하지 않는 컨트롤군(19명)으로 무작위로 나누었다. 파라밀론군의 피험자에 대하여 실시예의 신부전 진행 억제제를 매일 1일 3회, 1회당 2g(8캡슐제 또는 분말제)씩 식간에 단독으로 경구 섭취시켰다. 특히 다른 약제 투여 전후에 소정 시간을 비우고 경구 섭취시켰다. 경구 섭취는 9주간 계속했다.

또한 파라밀론군의 피험자 29명 중 3명이 본 신부전 진행 억제제를 이유(캡슐량이 많아 내복이 힘들다 등)로 탈락하고, 4명이 제사정에 의해 탈락했다. 또 컨트롤군 19명 중 1명이 제사정에 의해 탈락했다.

신부전 진행 억제제의 섭취 개시 직전, 섭취 개시 9주간 후에 각각 각 피험자로부터 채혈했다. 채혈한 전혈을 사용하여 혈중 인독실황산 농도를 측정하고, 그 변화량을 모니터링했다. 구체적인 측정 방법은 이하와 같게 했다.

(1) 샘플 전 처리

피험자의 혈청 10μL에 트라이클로로아세트산(4% TCA)을 가하여 교반 후, 원심분리를 행하고, 상청액을 분석용 시료병에 채취하여 혈청 샘플로 했다(제단백질 처리). 혈청 샘플은 당해 처리에 의해 10배 희석되었다.

건상인의 혈청 10μL에 표준 인독실황산 보존액을 최종 농도가 0.0(무첨가), 5.0(μg/ml)이 되도록 첨가한 후, 상기 제단백질 처리를 행하여 외부 표준 검량선용 샘플 1, 2를 제작했다.

(2) 외부 표준 검량선법에 의한 HPLC 정량 분석

상기 스탠다드 1, 2의 각 상청액 2.5μL를 고효율 액체 크로마토그래피(HPLC) 장치(히타치하이테크제 L-2000)를 사용하여 분리 분석하여, 외부 표준 검량선법으로 농도(μg/ml)를 산출했다.

(3) 샘플 분석

상기 혈청 샘플을 소정의 시퀸스로 분석했다.

외부 표준법 검량선은 최초와 최후의 2회의 검량선용 샘플 1, 2의 분석 결과를 최소 제곱법으로 피팅하여 작성하여, 혈청 샘플 중의 인독실황산 농도(μg/ml)를 구했다.

최종적인 혈중 인독실황산 농도는 혈청 샘플의 분석 결과에 희석 배율 10을 곱하여 구해졌다. 또한 건상인의 혈청 샘플을 블랭크용으로서 제작하고, 피험자의 혈청 샘플의 분석 결과에 미리 가산했다.

각 피험자의 연령(년), 투석 요법력, 성별, 섭취 개시 전후의 혈중 인독실황산 농도의 측정 결과(μg/ml)를 컨트롤군과 파라밀론군으로 나누어서 각각 비교했다.

상기 측정 결과를 해석하여, 컨트롤군(22명)과 파라밀론군(18명)과의 섭취 개시 전후의 혈중 인독실황산 농도의 평균 변화량(평균 저하량)을 비교한 그래프를 도 1에 나타낸다.

또 피험자를 연령 50세 이상 70세 이하의 그룹(18명)으로 정하여, 컨트롤군(8명)과 파라밀론군(10명)과의 섭취 개시 전후의 혈중 인독실황산 농도의 평균 변화량(평균 저하량)을 비교한 그래프를 도 2에 나타낸다.

추가로 피험자를 남성의 그룹(22명)으로 정하여, 컨트롤군(6명)과 파라밀론군(16명)과의 섭취 개시 전후의 혈중 인독실황산 농도의 평균 변화량(평균 저하량)을 비교한 그래프를 도 3에 나타낸다.

도 1로부터 9주간의 투여 기간에 있어서 파라밀론군의 환자 전체의 혈중 인독실황산 농도는 유의하게 저하되어 있었다(t검정에 의해 P<0.05). 한편 컨트롤군의 환자 전체의 혈중 인독실황산 농도는 유의하게 변화되지 않았다.

또 도 2에 의해 연령 50세 이상 70세 이하의 그룹에 있어서 파라밀론군의 환자의 혈중 인독실황산 농도는 유의하게 저하되어 있었다(t검정에 의해 P<0.05). 한편 컨트롤군의 환자의 혈중 인독실황산 농도는 유의하게 변화되지 않았다.

또 도 3에 의해 남성의 그룹에 있어서 파라밀론군의 환자의 혈중 인독실황산 농도는 유의하게 저하되어 있었다(t검정에 의해 P<0.05). 한편 컨트롤군의 환자의 혈중 인독실황산 농도는 유의하게 변화되지 않았다.

(시험예 1의 고찰)

시험예 1의 결과로부터 투석 요법을 받고 있는 40~88세의 만성 신부전 환자에 대한 9주간의 실시예의 신부전 진행 억제제의 계속 투여에 의해, 혈중 인독실황산 농도가 우위로 저하되어 있었다.

특히 당해 환자에 대하여 신부전 진행 억제제를 매일 1일 3회, 1회당 2g(8캡슐제 또는 분말제)씩 식간에 단독으로 경구 투여함으로써, 또한 다른 약제 투여 전후에 소정 시간을 비우고 투여함으로써, 혈중 인독실황산 농도가 우위로 저하되어 있었다.

또 투석 요법을 받고 있는 40~88세의 만성 신부전 환자 중 특히 연령 50세 이상 70세 이하의 환자에 대하여 신부전 진행 억제제를 투여함으로써, 혈중 인독실황산 농도가 우위로 저하되어 있었다.

또 투석 요법을 받고 있는 40~88세의 만성 신부전 환자 중 특히 남성 환자에 대하여 신부전 진행 억제제를 투여함으로써, 혈중 인독실황산 농도가 우위로 저하되어 있었다.

또 일반적으로 신부전 환자에게 종래의 구형흡착탄을 계속해서 투여하는 경우에는, 당해 환자의 반수 전후가 내복이 힘들고, 복부 팽만감, 변비 등의 부작용이 심하다는 등의 이유에 의해 탈락하는 일이 많지만, 본 신부전 진행 억제제를 계속해서 투여한 경우에는, 파라밀론 투여군의 29명의 환자 중 불과 3명의 환자밖에 본 신부전 진행 억제제를 이유로 탈락하는 자는 없었다.

실제로 의사의 문진으로부터 피험자의 소감으로서 종래의 구형흡착탄과 비교하여 복용하기 쉽고, 복부 팽만감이 없고, 변비 등의 증상이 개선되었다는 결과가 얻어졌다.

게다가 본 시험예 1은 피험자에게 본 신부전 진행 억제제의 작용 효과를 알리지 않고 실시되었기 때문에, 미리 피험자에게 본 신부전 진행 억제제의 작용 효과를 알렸다면 탈락하는 환자는 더욱 적었을 것이라는 의사의 진단 결과가 얻어졌다.

특히 일반적으로 투석 치료를 받고 있는 신부전 환자는 수분 섭취의 제한으로 변비에 걸리는 경향이 있는 바, 미리 당해 환자(피험자)에게 본 신부전 진행 억제제의 작용 효과의 하나인 장내 환경의 개선 작용을 알렸다면 종래의 구형흡착탄의 작용에는 없는 변비의 개선 작용이 확인되기 때문에 탈락하는 환자는 더욱 적어졌을 것이라는 의사의 진단 결과가 얻어졌다.

이상으로부터 실시예의 신부전 진행 억제제는 생체내에 있어서의 혈중 인독실황산 농도를 저하시키는 것을 통하여, 투석 요법을 받고 있는 만성 신부전 환자의 신부전 질환의 진행을 억제하는 것을 알 수 있었다.

그리고 종래의 신부전 진행 억제제인 구형흡착탄과 비교하여, 복용하기 쉽고, 복부 팽만이나 변비 등의 부작용을 일으키기 어려우며, 만성 신부전 환자가 장기에 걸쳐 경구 섭취하기 쉬운 것인 것을 알 수 있었다.

<시험예 2 인돌 흡착능 시험>

실시예에서 조제한 파라밀론의 인돌 흡착 능력을 확인하는 시험을 행했다.

구체적인 방법은 이하와 같게 했다.

(1) 검량선의 작성

농도 0, 10, 20, 30, 40, 50ng/ml의 인돌 용액을 각각 제작하고, 형광 광도계(히타치하이테크제 F-2500)를 사용하여 여기 파장 342nm에 있어서의 흡광도를 각각 측정하고, 인돌 농도와 흡광도와의 관계를 나타내는 검량선을 작성했다.

(2) 파라밀론 혼화 후의 인돌 잔류 농도 측정

농도 30ng/ml의 인돌 용액에 2% 용량이 되도록 파라밀론을 첨가하고, 볼텍스 믹서를 사용하여 1분간 혼화시켰다. 그 후 원심기를 사용하여 회전수 6200rpm으로 1분간 원심하여 파라밀론을 침전시키고, 상청액을 샘플로서 회수했다.

구체적인 샘플로서 샘플 1:상기 혼화 후 금방 원심하여 회수한 것, 샘플 2:혼화 후 10분간 정치시키고나서 원심하여 회수한 것, 샘플 3:혼화 후 30분간 정치시키고나서 원심하여 회수한 것, 샘플 4:혼화 후 60분간 정치시키고나서 원심하여 회수한 것, 샘플 5:혼화 후 1440분(24시간) 정치시키고나서 원심하여 회수한 것의 계 5종류의 샘플을 준비하고, 형광 광도계를 사용하여 여기 파장 342nm에 있어서의 흡광도를 각각 측정했다.

한편 정제수에 2% 용량이 되도록 파라밀론을 첨가하고 마찬가지로 1분간 혼화시킨 후, 원심하여 파라밀론을 침전시키고, 상청액을 블랭크액으로서 회수하여, 여기 파장 342nm에 있어서의 흡광도를 측정했다.

샘플 1~5에서 측정한 흡광도의 값으로부터 블랭크액으로 측정한 흡광도의 값을 빼고, 인돌 용액 중의 인돌 잔류 농도를 각각 산출함으로써, 파라밀론에 의한 인돌 흡착 능력의 시간 경과에 따른 변화를 확인했다.

시험 결과로서 파라밀론 혼화 후의 정치 시간과 인돌 잔류 농도와의 관계를 나타내는 그래프를 도 4에 나타낸다.

도 4로부터 인돌 용액에 파라밀론을 혼화하면, 인돌 용액 중의 인돌 잔류 농도가 낮아지고 있는 것을 알 수 있었다.

또 인돌 용액에 파라밀론을 혼화한 후, 정치 시간을 길게 할수록 인돌 용액 중의 인돌 잔류 농도가 낮아져가는 것을 알 수 있었다.

(시험예 2의 고찰)

시험예 2의 결과로부터 인돌 용액에 파라밀론을 혼화하면, 파라밀론이 인돌 용액에 포함되는 인돌을 흡착하고 있는 것을 알 수 있었다.

또 인돌 용액에 파라밀론을 혼화한 후, 정치 시간을 길게 할수록 파라밀론의 인돌 흡착량이 많아지고 있는 것을 알 수 있었다.

이상으로부터 실시예의 파라밀론은 인간 특히 신부전 환자의 장내에 있어서 인돌을 흡착하는 작용을 하는 것을 알 수 있었다.

그리고 인독실황산의 전구체인 인돌의 절대량이 감소하는 점에서, 인독실황산이 혈중에 방출되는 것도 억제되는 점에서, 혈중 인독실황산 농도를 저하시킬 수 있는 것을 알 수 있었다.

<시험예 3 장내 선옥균의 증식 확인 시험>

래트에 실시예에서 조제한 파라밀론을 경구 섭취시켜, 파라밀론의 장내 환경의 개선 작용을 확인하는 시험, 구체적으로는 장내 세균총에 있어서의 선옥균의 점유율을 측정하는 시험을 행했다.

시험에는 3주령의 Wistar계 웅성 래트(니혼크레아 가부시키가이샤) 15마리를 사용했다. 사료와 음료수(증류수)는 자유 섭취로 했다.

래트는 1주간의 예비 사육 후, 3개의 군으로 5마리씩 나누어서 4주간 사육했다. 사료는 정제 사료(AIN-93N;니혼크레아 가부시키가이샤)에 기초하여 작성하고, 컨트롤군에는 셀룰로스를 제외한 사료를 경구 섭취시켰다. 또 셀룰로스군에는 셀룰로스를 5% 첨가하고, 파라밀론군에는 셀룰로스 대신에 실시예에서 조제한 파라밀론을 5% 첨가한 사료를 섭취시켰다(하기 표 1에 나타내는 사료 조성을 참조).

성분(%)	사료
	컨트롤군	셀룰로스군	파라밀론군
L-시스틴	0.2	0.2	0.2
미네랄 믹스	3.7	3.5	3.5
밀크 카제인	14.8	14.0	14.0
비타민 믹스	1.1	1.0	1.0
대두유	4.2	4.0	4.0
β-콘스타치	49.1	46.6	46.6
α-콘스타치	16.4	15.5	15.5
그래뉴당	10.6	10.0	10.0
t-뷰틸하이드로퀴논	0.0008	0.0008	0.0008
셀룰로스	-	5.0	-
파라밀론	-	-	5.0
합계	100	100	100

※ 합계의 값은 사사오입함으로써 100으로 했다.

시험은 각 래트의 장내 세균총에 있어서 선옥균으로 분류되는 락토바실러스속 및 비피도박테륨속과, 악옥균으로 분류되는 클로스트리듐속과, 일화견균으로 분류되는 프레보텔라속 및 박테로이데스속의 각 점유율을 군마다 측정했다. 또 선옥균과 악옥균과의 비를 구했다.

구체적으로는 각 래트의 맹장에 있어서의 장내 세균총에 대해서 세균총에 유래하는 16S rRNA 부분의 염기 배열의 해석을 공지의 방법에 기초하여 행했다.(Nagashima K, et al. (2003) "Application of New Primer-Enzyme Combination to Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism Profiling of Bacterial Populations in Human Feces" Appl Environ Microbiol, 69, 1251-1262.)

시험 결과로서 컨트롤군과, 셀룰로스군과, 파라밀론군과의 맹장에 있어서의 장내 세균총의 점유율을 비교한 그래프를 도 5에 나타낸다. 또 맹장에 있어서의 선옥균/악옥균의 비를 비교한 그래프를 도 6에 나타낸다.

도 5로부터 선옥균의 점유율에서는 파라밀론군 및 셀룰로스군은 컨트롤군과 비교하여 높았다. 악옥균의 점유율에서는 3군 사이에서 유의한 차는 확인되지 않았다. 일화견균의 점유율에서는 파라밀론군은 타군과 비교하여 높았다.

또 도 6으로부터 선옥균과 악옥균의 비에서는 파라밀론군은 타군과 비교하여 높았다.

(시험예 3의 고찰)

시험예 3의 결과로부터 불용성 음식물 섬유인 파라밀론 및 셀룰로스를 계속 섭취한 파라밀론군 및 셀룰로스군의 래트에서는 장내 세균총에 있어서의 선옥균의 점유율이 높았다. 또 파라밀론군의 래트에서는 장내 세균총에 있어서의 선옥균과 악옥균의 비에 있어서 타군보다 높은 값을 나타냈다.

즉 파라밀론에는 장내 환경의 개선 작용의 효과가 있고, 또 셀룰로스와 동등 또는 동등 이상의 장내 환경의 개선 작용의 효과가 있었다.

이상으로부터 파라밀론이 생체에 경구 투여되면, 장내의 비피더스균이나 유산균을 포함하는 선옥균을 활성화시켜 증식시키는 작용을 하여, 장내균의 밸런스 개선을 하는 것을 알 수 있었다.

그 결과 장내 유해균의 증가를 억제함으로써, 음식물 중의 단백질에 포함되는 트립토판으로부터 장내 유해균에 의해 분해되어 산생되는 인돌의 산생량이 억제되어, 인독실황산의 산생량이 억제되는 것을 알 수 있었다.

특히 종래의 구형흡착탄의 경우에는 소화관에 통과 장애를 가지는 신부전 환자에 대해서는 배설에 지장을 초래할 우려가 있기 때문에 투여할 수 없는 바, 본 파라밀론이면 당해 환자에 대해서도 배설에 지장을 초래하지 않고 투여 가능한 것을 알 수 있었다.

<시험예 4 경구 섭취한 음식물의 장내 통과 시간 측정 시험>

래트에 실시예에서 조제한 파라밀론을 경구 섭취시켜, 파라밀론의 장내 환경의 개선 작용을 확인하는 시험, 구체적으로는 경구 섭취한 파라밀론 함유 사료의 장내 통과 시간을 측정하는 시험을 행했다.

시험에는 시험예 2와 마찬가지로 3주령의 Wistar계 웅성 래트 15마리를 사용했다. 사료와 음료수(증류수)는 자유 섭취로 했다.

래트는 1주간의 예비 사육 후, 3개의 군으로 5마리씩 나누어서 4주간 사육했다. 컨트롤군에는 셀룰로스를 제외한 사료를 경구 섭취시켰다. 또 셀룰로스군에는 셀룰로스를 5% 첨가하고, 파라밀론군에는 셀룰로스 대신에 실시예에서 조제한 파라밀론을 5% 첨가한 사료를 섭취시켰다(상기 표 1에 나타내는 사료 조성을 참조).

시험은 사육 개시 2주간째(13일째)와, 사육 개시 4주간째(27일째)의 18시에 카르민 색소 5%를 첨가한 사료를 섭취시켜, 적색의 대변이 관찰될 때까지의 시간을 측정했다. 0시부터 3시까지는 1시간걸러 3시 이후에는 30분걸러 확인했다.

2주간째와 4주간째에 측정하는 장내 통과 시간에 맞추어, 사육 기간중에는 9시부터 18시까지는 절식시키고, 그 이외의 시간은 자유 섭취로 했다.

시험 결과로서 컨트롤군과, 셀룰로스군과, 파라밀론군과의 사육 개시 2주간째 및 4주간째의 장내 통과 시간을 각각 비교한 그래프를 도 7에 나타낸다.

도 7로부터 2주째에 측정한 장내 통과 시간에서는 컨트롤군, 셀룰로스군 및 파라밀론군 사이에서 유의한 차는 확인되지 않았다.

4주째에 측정한 장내 통과 시간에서는 파라밀론군이 가장 빨랐다. 파라밀론군 및 셀룰로스군은 컨트롤군과 비교하여 유의하게 빨랐다. 파라밀론군과 셀룰로스군 사이에서 유의한 차는 확인되지 않았다.

(시험예 4의 고찰)

시험예 4의 결과로부터 래트에 대한 파라밀론의 4주간의 계속 투여에 의해, 래트의 장내 통과 시간에 있어서 컨트롤군과 비교하여 단축이 보였다.

또 파라밀론의 계속 투여에 의해, 셀룰로스의 계속 투여와 동등한 장내 통과 시간의 단축이 보였다. 즉 파라밀론에는 셀룰로스와 동등한 장내 환경의 개선 작용의 효과가 있는 것을 알 수 있었다.

이상으로부터 파라밀론이 생체에 경구 투여되면, 경구 섭취한 음식물의 장내 통과 시간이 단축되는 것을 알 수 있었다.

그 결과 장내 통과 중에 있어서 트립토판으로부터 산생되는 인돌의 산생량이 억제되어, 인독실황산의 산생량이 억제되는 것을 알 수 있었다.

<시험예 5 대변의 중량 측정 시험>

래트에 실시예에서 조제한 파라밀론을 경구 섭취시켜, 파라밀론의 장내 환경의 개선 작용을 확인하는 시험, 구체적으로는 파라밀론의 경구 섭취 후에 배설한 대변 중량을 측정하는 시험을 행했다.

시험에는 시험예 2, 3과 마찬가지로 3주령의 Wistar계 웅성 래트 15마리를 사용했다. 사료와 음료수(증류수)는 자유 섭취로 했다.

래트는 1주간의 예비 사육 후, 컨트롤군과, 셀룰로스군과, 파라밀론군의 3개의 군으로 5마리씩 나누어서 4주간 사육했다.

시험은 사육 개시 2주간째의 3일간(11~13일째)과, 사육 개시 4주간째의 도살 전의 3일간(25~27일째)에 각각 대변을 채취하여, 대변의 건조 중량 그리고 수분량을 측정했다. 또한 대변의 수분량은 대변을 100℃에서 24시간 건조시킨 후에 칭량했다.

시험 결과로서 컨트롤군과, 셀룰로스군과, 파라밀론군의 사육 개시 2주간째 및 4주간째의 대변의 중량, 수분량을 각각 비교한 그래프를 도 8, 도 9에 나타낸다.

도 8로부터 2주째 및 4주째에 측정한 대변의 중량에서는 파라밀론군 및 셀룰로스군은 컨트롤군과 비교하여 유의하게 컸다(t검정에 의해 P<0.05). 파라밀론군과 셀룰로스군 사이에서 유의한 차는 확인되지 않았다.

도 9로부터 4주째에 측정한 대변의 수분량에서는 파라밀론군은 컨트롤군과 비교하여 유의하게 커지고, 셀룰로스군과 비교하여 높았다.(t검정에 의해 P<0.05).

(시험예 5의 고찰)

시험예 5의 결과로부터 래트에 대한 파라밀론의 4주간의 계속 투여에 의해, 래트가 배설한 대변의 중량, 수분량에 있어서 컨트롤군과 비교하여 증가가 보였다.

또 파라밀론의 계속 투여에 의해, 셀룰로스의 계속 투여와 동등한 대변량의 증가가 보였다. 즉 파라밀론에는 셀룰로스와 동등한 장내 환경의 개선 작용의 효과가 있는 것을 알 수 있었다.

이상으로부터 파라밀론이 생체에 경구 투여되면, 경구 섭취 후의 대변의 중량, 수분량이 증가하는 것을 알 수 있었다.

일반적으로 대변의 중량이 증가하여 대변의 보수성이 높아지면, 음식물의 장내 통과 시간이 단축되는 것이 보고되어 있다(오이카와 게이코, 소위 음식물 섬유 음료가 래트의 대변량과 소화관 통과 시간 및 인간의 변통에 미치는 영향, 이와테대학교육학부연구연보, 55, 111-118(1995)).

그 때문에 장내 통과 중에 있어서 트립토판으로부터 산생되는 인돌의 산생량이 억제되어, 인독실황산의 산생량이 억제되는 것을 알 수 있었다.

Claims (12)

1. 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제제.
2. 제 1 항에 있어서, 신부전에 이환되어, 투석 요법을 받고 있는 환자에 대하여 투여되는 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제제.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 만성 신부전에 이환되고, 연령 50세로부터 70세까지의 환자에 대하여 투여되는 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제제.
4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 1회당 1~5g의 상기 파라밀론 또는 그 가공품이 만성 신부전에 이환된 환자에 대하여 1일 3회 계속해서 투여되는 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제제.
5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 만성 신부전에 이환된 환자에 대하여 캡슐제 또는 분말제로서 경구 투여되는 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제제.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 만성 신부전에 이환된 환자에 대하여 다른 약제 투여 전후에 소정 시간을 비우고 단독으로 투여되는 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제제.
7. 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 신부전 예방제.
8. 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 요독증 치료제.
9. 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 인독실황산 산생 저해제.
10. 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환 예방제.
11. 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 신부전 진행 억제용 특정 보건용 식품.
12. 파라밀론 또는 그 가공품을 유효 성분으로서 포함하는 조성물을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 신부전의 진행을 억제하기 위한 방법(인간에 대한 의료 행위를 제외함).

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