CN102805750B - 一种七叶皂苷衍生物及其盐的组合物、其制备方法和医药用途 - Google Patents
一种七叶皂苷衍生物及其盐的组合物、其制备方法和医药用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102805750B CN102805750B CN201110142334.9A CN201110142334A CN102805750B CN 102805750 B CN102805750 B CN 102805750B CN 201110142334 A CN201110142334 A CN 201110142334A CN 102805750 B CN102805750 B CN 102805750B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aescine
- compositions
- pharmaceutically acceptable
- acceptable salt
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供一种新的七叶皂苷衍生物组合物、其盐，以及其制备方法和医药用途。该组合物属于七叶总皂苷的生物酶水解产物，其抗炎、抗水肿活性强于七叶皂苷，溶血安全性较好，制备工艺具有很强的工业生产可实施性，可用于开发抗炎、抗水肿药物。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种新的七叶皂苷衍生物及其盐的组合物、其制备方法和医药用途。
背景技术
七叶皂苷是由传统中药娑罗子(Aesculus chinesis Bge)以及七叶树科其他植物的干燥成熟果实中提取的含多酯键三萜皂苷混合物，具有抗炎、抗渗出、增强静脉张力、神经保护等作用。其药用起源于德国，后在日本、我国以及其他国家得以推广，目前已有包括静脉注射剂、片剂、外用等制剂上市。在我国七叶总皂苷以其钠盐的形式制成注射剂，适应症为脑水肿、创伤或手术所致肿胀，静脉回流障碍性疾病。临床研究证实七叶皂苷钠对各种原因引起的水肿有很高的治疗价值，但长期使用过程中发现药物对肌肉和粘膜具有强刺激作用，而且静脉反复给药，多于80％的患者出现不同程度的血管条索红肿、疼痛，甚至血管硬化等血管刺激反应，严重影响临床使用。其不良反应产生机制尚不明确，但现有的分析结果主要归因于其所含皂苷类成分的溶血作用。
七叶皂苷钠主要是以A，B，C，D四个皂苷成分组成，其中皂苷A、B称之为β型，C、D称为α型。β型是七叶总皂苷中的抗炎活性主体物质，但溶血性和刺激性也很强，治疗指数仅为5。有文献报道，当七叶皂苷中β型和α型比例为6∶4～5∶5时抗炎活性最强而毒性最小，目前市售的静脉注射用产品中成分比例基本都在此范围，但仍有静脉炎等难以克服的不良反应发生。发明专利CN100428940C、CN10018535C公开了七叶皂苷与赖氨酸、谷胱苷肽组合物、CN1158302C公开了精氨酸七叶皂苷、以及CN1974595A、CN1687103A公开了七叶皂苷的氨丁醇盐。这些发明专利公开的技术路线均以有机碱盐复合物的形式改善七叶皂苷的血管刺激性，但组合物中活性和毒性物质基础没有改变，很难从根本上避免现有的不良反应。
发明内容
本发明针对七叶皂苷类静脉注射用产品现有的技术局限性，提供一种新的七叶皂苷衍生物组合物，该组合物属于七叶总皂苷的生物酶水解产物，其抗炎、抗水肿活性强于七叶皂苷，而且具有较好的溶血安全性，有望解决七叶皂苷类产品现有的技术难题。
本发明的药物组合物是由如下通式结构的化合物组成的：
通式I
通式II
本发明提供药物组合物中DGE-A占重量百分比为20～50％，和DGE-B占重量百分比为20～40％，通式I和通式II化合物的含量比为9∶1～5∶5。
上述通式I、II中，R是H、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、葡甲胺基或锂、钠、钾、镁、NH4 +基；
本发明的另一个目的是提供上述药物组合物的制备方法，所述制备方法包括下述步骤：
a.使用按常规方法制备的七叶皂苷提取物作为原料，往其中加入适当溶剂配制药液；所述七叶皂苷提取物，其中总七叶皂苷的含量为5-95％W/W，优选20-95％W/W；所述药液浓度为原料∶溶液＝1∶1-1∶8000g∶ml，优选原料∶溶液＝1∶5-1∶8000g∶ml；所述溶剂选自水、低级醇或含水低级醇，所述低级醇选自碳数为1-3的一元醇；所述药液中低级醇的最终浓度为1-30％(V/V)，优选5-20％(V/V)。
b.加入水解酶在恒温下进行水解得到水解液；所述水解酶选自β-糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、橙皮苷酶、纤维素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、糖化酶、果胶酶、淀粉酶中一种或数种酶的混合物，酶与原料配比为1∶50-200∶1(W∶W)，优选配比为1∶20-200∶1(W∶W)。
c.分离水解产物：水解液经苯乙烯为骨架的大孔吸附树脂，先用水洗脱1-2个柱体积，后用20-50％的乙醇溶液洗脱1-3个柱体积，最后用70-95％乙醇溶液洗脱1-3个柱体积，收集高浓度乙醇洗脱部分，减压浓缩至使溶液含少量乙醇或无醇味，见白色沉淀析出。所述水解产物∶树脂比为0.1∶1-800∶1(mg∶ml)，
d.纯化分离得到的产物。
上述制备工艺步骤a中，当原料为水难溶性提取物时，原料需要用适当浓度的低级醇增溶，有助于提高水解效率。增溶剂选自甲醇和乙醇，更优选乙醇。
上述制备工艺步骤b中，所述用于水解的酶，优选β-糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、纤维素酶。所述酶与原料重量配比优选1∶20-200∶1(W∶W)。
上述制备工艺步骤c中，所述水解产物-树脂优选配比为0.5∶1-400∶1(mg∶ml)。
在本发明的实施方案中，所述水解在20-60℃下恒温进行12-72小时，优选48-72小时，溶液适合的pH值为4-7。
在本发明的实施方案中，所述水解产物的纯化按如下步骤进行：
过滤分离得到的所述白色沉淀物，用低级醇或含水低级醇或水溶解，过滤，浓缩滤液至溶液微见浑浊。放置，待析出结晶。过滤得结晶，再用低级醇或含水低级醇或水重结晶，得杂质5％以下的QYY。所述低级醇为碳数1-5的一元醇或多元醇，优选选自甲醇和乙醇。
本发明提供的七叶皂苷衍生物制备工艺采用生物酶水解法，突出了生物酶催化反应的专一性，可针对性地制备所需的目标化合物，反应条件温和、收率高，产物稳定，制备过程无需使用毒害有机溶剂或强酸碱性试剂而环保，具有很强的工业生产可实施性。
七叶皂苷属于含多酯键三萜结构，水溶性较差，本发明又一个目的是提供七叶皂苷衍生物组合物的药学上可接受的盐，以解决制剂学上溶解性差的问题。所述药学上可接受的盐，其中的盐选自有机盐或无机盐。有机盐为：氨基酸盐、葡甲胺盐；无机盐为锂、钠、钾、镁、NH4 +等离子盐等。
本发明所述的氨基酸盐是选自生理性的碱性氨基酸如：精氨酸、赖氨酸、组氨酸等等。
所述无机盐优选钠、钾、NH4 +离子生成的盐；有机碱盐优选与葡甲胺、精氨酸、赖氨酸生成的盐。
本发明提供的七叶皂苷衍生物的盐可按常规方法制备，如：
将本发明七叶皂苷衍生物组合物配制成适当浓度的醇溶液，加入等当量无机碱溶液成盐，析晶，过滤而得；
或将等摩尔比的七叶皂苷衍生物和所选有机碱加水溶解，浓缩至小体积，加入适量丙酮或无水乙醇，使沉淀析出，过滤沉淀，即得；
或将等摩尔比的七叶皂苷衍生物和所选有机碱加水溶解，使之成盐，配制成适当浓度的盐溶液，在适当条件下冷冻干燥，即得。
本发明的再一个目的是提供具有通式I、II结构的七叶皂苷衍生物及其盐。
按照本发明提供的方法制备的七叶皂苷衍生物组合物，经常规的色谱分离方法，如C18烷基相硅胶低压柱层析或高效液相制备色谱分离，可以得到具有通式I、II结构的单体化合物，而且可以通过常规方法制备其盐。
本发明还提供了含上述七叶皂苷衍生物组合物，或其药学上可接受的盐和药剂学可接受的药用辅料的药物制剂。药剂学可接受的药用辅料包括稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、溶剂等。
所述稀释剂包括但不限于淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、低分子右旋糖苷、高岭土、氯化钠、甘露醇等；所述润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、硼酸、氯化钠、油酸钠、DL-亮氨酸、月桂醇硫酸钠、聚乙二醇4000-6000、泊洛沙母等；所述粘合剂包括但不限于水、乙醇、淀粉浆、糖浆、明胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、茄替胶、聚乙烯吡咯烷酮等；所述崩解剂包括但不限于淀粉、羧甲基淀粉钠、泡腾混合物即碳酸氢钠和枸橼酸、酒石酸、低取代羟丙基纤维素等；所述稳定剂包括但不限于多糖如金合欢胶、琼脂、藻酸、瓜耳胶、黄芪胶、丙烯酸酸树脂、纤维素醚和羧甲基甲壳酯等；所述溶剂包括但不限于林格式溶液、水、磷酸盐缓冲液、平衡的盐溶液等；
活性成份与辅料成份的组合比例根据制剂的不同而不同，可以根据治疗的目的，适当的调整剂量。所述的组合物根据治疗需要的不同，可以制成各种不同的制剂，包括各种固体口服制剂、液体口服制剂、注射剂、膜剂、气雾剂外用制剂等。药剂学可接受的口服剂固体制剂有：普通片剂、分散片、缓控释、肠溶片、颗粒、胶囊、滴丸、散剂等等，口服液体制剂有口服液、乳剂；注射剂有：小水针、输液、冻干粉针；外用制剂为软膏、贴剂、喷雾剂、凝胶剂等。各制剂可以根据常规的工艺制备而成。
本发明同时提供所述七叶皂苷衍生物组合物在抗炎、抗水肿方面的治疗用途。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以此作为对本发明的限制。
实施例1
(1)七叶皂苷衍生物组合物(QYY)的制备：
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量15％)10g，加水稀释至提取物：药液比为1∶100W∶V，加β-糖苷酶15g溶解，调整溶液pH值为5.0，在55℃恒温下酶解72小时，过滤，滤液经200ml大孔吸附树脂吸附，依次用2个柱体积的水、1个柱体积的10％乙醇溶液洗脱，最后以75％乙醇洗脱2个柱体积，收集75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，见白色沉淀析出，过滤，得到沉淀，再用70％乙醇复溶，过滤，滤液浓缩至溶液开始变浑浊，放置待析出结晶，过滤得QYY结晶(白色无定型粉末)。
(2)QYY的精氨酸盐的制备：QYY0.4g，精氨酸0.07g，加蒸馏水适量，搅拌，溶解，减压浓缩至小体积，加溶液量5倍体积的丙酮，搅拌，析出白色沉淀，过滤沉淀，干燥，即得。
实施例2
(1)七叶皂苷衍生物组合物(QYY)的制备：
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)2g，加药用乙醇100ml溶解，加水稀释至提取物∶药液比为1∶500W∶V，加β-葡萄糖苷酶30g溶解，调整溶液pH值为6.0，在40℃酶解24小时，过滤，滤液经100mlD101大孔吸附树脂吸附，依次用1个柱体积的水、2个柱体积的15％乙醇溶液洗脱，最后以85％乙醇洗脱2个柱体积，收集85％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。过滤得到沉淀，再用乙醇复溶，过滤，滤液浓缩至溶液开始变浑浊，放置待析出结晶，过滤，得QYY纯品(白色针状粉末)。
(2)QYY的赖氨酸盐的制备：
QYY0.5g，赖氨酸0.07g，加蒸馏水适量，搅拌，溶解，装于冷冻干燥瓶，液面高度2.5ml，冷冻干燥，即得。
实施例3
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶800W∶V，加纤维素酶80g，β-葡萄糖苷酶40g溶解，调整溶液pH值为4.5，在55℃酶解48小时，过滤，滤液经500mlD101大孔吸附树脂吸附，依次用2个柱体积的水、2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后以70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。过滤得到沉淀，再用甲醇复溶，过滤，滤液浓缩至溶液开始变浑浊，放置待析出结晶，过滤得到结晶，再以甲醇-水重结晶，得QYY纯品(白色针状粉末)。
单体成分的制备：
QYY纯品1g经高效液相制备柱层析分离得到DGE-A、DGE-B、DGE-C、DGE-D，4个单体化合物。
色谱条件：C18烷基相硅胶制备柱(10μm，25×250mm)；流动相：乙腈-10mmol醋酸胺-醋酸：48∶52∶1％；检测波长：240nm；流速：16ml/min。
结构确证：
DGE-A：1HNMR(in pyridine-5)δ(ppm)：0.67，1.09，1.641.82，1.90，1.95，4.98，5.61，6.24，6.57，7.07；
13CNMR：38.59(C-1)，26.72(C-2)，90.78(C-3)，43.79(C-4)，56.16(C-5)，18.59(C-6)，33.27(C-7)，39.98(C-8)，46.77(C-9)，36.44(C-10)，24.07(C-11)，123.3(C-12)，142.91(C-13)，41.72(C-14)，34.66(C-15)，68.09(C-16)，48.01(C-17)，40.12(C-18)，36.50(C-19)，36.50(C-20)，79.43(C-21)，74.37(C-22)，22.57(C-23)，63.41(C-24)，15.62(C-25)，16.75(C-26)，27.45(C-27)，63.80(C-28)，29.58(C-29)，20.17(C-30)，168.06(C-1````)，129.54(C-2````)，136.9(C-3````)，14.27(C-4````)，12.46(C-5````)，171.06(C-1`````)，20.92(C-2`````)，105.16(C-1`)，81.83(C-2`)，78.51(C-3`)，72.97(C-4`)，78.30(C-5`)，172.39(C-6`)，104.84(C-1``)，75.85(C-2``)，78.30(C-3``)，69.92(C-4``)，77.79(C-5``)，61.63(C-6``)；
DGE-B：1HNMR(in pyridine-5)δ(ppm)：0.670.750.79，1.07，1.30，1.37，1.81，1.91，2.01，2.09，3.05，3.35，4.44，4.99，5.61，5.97，6.19，6.60；
13CNMR：38.6(C-1)，26.3(C-2)，90.8(C-3)，43.8(C-4)，56.2(C-5)，18.6(C-6)，33.3(C-7)，40.0(C-8)，46.8(C-9)，36.3(C-10)，24.1(C-11)，123.8(C-12)，142.9(C-13)，41.7(C-14)，34.7(C-15)，68.1(C-16)，47.3(C-17)，40.2(C-18)，36.5(C-19)，36.3(C-20)，79.0(C-21)，74.4(C-22)，22.6(C-23)，63.4(C-24)，15.9(C-25)，16.8(C-26)，27.5(C-27)，63.9(C-28)，29.5(C-29)，20.3(C-30)，167.9(C-1````)，129.0(C-2````)，137.2(C-3````)，15.4(C-4````)，20.9(C-5````)，171.0(C-1`````)，21.1(C-2`````)，105.2(C-1`)，81.8(C-2`)，78.3(C-3`)，73.0(C-4`)，78.3(C-5`)，172.4(C-6`)，104.8(C-1``)，75.9(C-2``)，78.3(C-3``)，69.9(C-4``)，77.8(C-5``)，61.7(C-6``)
实施例4
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量15％)4g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1000W∶V，加纤维素酶15g，淀粉酶20g，β-葡萄糖苷酶8g溶解，调整溶液pH值为5.0，在60℃酶解48小时，过滤，滤液经50mlAB-8大孔吸附树脂吸附，依次用2个柱体积的水、2个柱体积的30％乙醇溶液洗脱，最后以80％乙醇洗脱2个柱体积，收集80％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。过滤得到沉淀，再用乙醇复溶，过滤，滤液浓缩至溶液开始变浑浊，放置待析出结晶，过滤得结晶，再以乙醇-水重结晶，得QYY纯品(白色无定型粉末)。
实施例5
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量85％)1g，加药用乙醇150ml溶解，加水稀释至提取物∶药液比为1∶2000W∶V，加β-葡萄糖苷酶5g，木聚糖酶80g溶解，调整溶液pH值为4.8，在40℃酶解48小时，过滤，滤液经350mlD101大孔吸附树脂吸附，依次用2个柱体积的水、2个柱体积的35％乙醇溶液洗脱，最后以70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。过滤得到沉淀，再用水复溶，过滤，滤液浓缩至溶液开始变浑浊，放置待析出结晶，过滤得QYY纯品(白色无定型粉末)。
QYY的葡甲胺盐的制备：QYY0.4g，葡甲胺0.07g，加蒸馏水适量，搅拌，溶解，减压浓缩至小体积，加溶液量5倍体积的丙酮，搅拌，析出白色沉淀，过滤沉淀，干燥，即得。
实施例6
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量15％)2g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶200W∶V，加纤维素酶10g，糖化酶10g，葡聚糖酶15g溶解，调整溶液pH值为7.0，在50℃酶解24小时，过滤，滤液经25mlD101大孔吸附树脂吸附，依次用1个柱体积的水、2个柱体积的40％乙醇溶液洗脱，最后以70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。过滤得到沉淀，再用甲醇复溶，过滤，滤液浓缩至溶液开始变浑浊，放置待析出结晶，过滤得QYY纯品(白色无定型粉末)。
实施例7
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)1g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶3000W∶V，加纤维素酶35g溶解，调整溶液pH值为5.0，在45℃酶解72小时，过滤，滤液经500mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的25％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。过滤得到沉淀，再用乙醇复溶，过滤，滤液浓缩至溶液开始变浑浊，放置待析出结晶，过滤得结晶，再用乙醇-水重结晶，得QYY纯品(白色无定型粉末)。
实施例8
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)2g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1000W∶V，加β-葡萄糖苷酶75g溶解，调整溶液pH值为4.5，在55℃酶解48小时，过滤，滤液经300mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的15％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例9
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)0.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶600W∶V，加纤维素酶20g溶解，调整溶液pH值为5.5，在60℃酶解72小时，过滤，滤液经30mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的30％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例10
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)2g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1500W∶V，加β-葡萄糖苷酶110g溶解，调整溶液pH值为4.8，在50℃酶解48小时，过滤，滤液经300mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的25％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例11
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)3g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶300W∶V，加纤维素酶250g溶解，调整溶液pH值为5.0，在45℃酶解48小时，过滤，滤液经400mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
QYY钾盐的制备：QYY0.5g，加80％乙醇溶解，加等当量氢氧化钾乙醇溶液搅拌，冷藏放置，过滤沉淀，干燥，即得。
实施例12
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)0.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1000W∶V，加β-葡萄糖苷酶40g溶解，调整溶液pH值为4.5，在50℃酶解24小时，过滤，滤液经80mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的15％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例13
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)0.3g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶3000W∶V，加纤维素酶15g溶解，调整溶液pH值为4.0，在60℃酶解48小时，过滤，滤液经100mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例14
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)0.8g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1500W∶V，加纤维素酶40g，果胶酶10g溶解，调整溶液pH值为4.5，在30℃酶解72小时，过滤，滤液经60mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的30％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例15
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)1.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1200W∶V，加纤维素酶45g，β-葡萄糖苷酶15g溶解，调整溶液pH值为5.0，在50℃酶解48小时，过滤，滤液经500mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的25％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
QYY钠盐的制备：QYY0.5g，加95％乙醇溶解，加等当量氢氧化钠乙醇溶液搅拌，减压浓缩至干，即得。
实施例16
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)1g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶4000W∶V，加β-葡萄糖苷酶30g溶解，调整溶液pH值为5.5，在40℃酶解24小时，过滤，滤液经350mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例17
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)1.2g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶500W∶V，加纤维素酶84g溶解，调整溶液pH值为4.8，在50℃酶解48小时，过滤，滤液经250mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的15％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例18
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)0.6g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶700W∶V，加β-葡萄糖苷酶2.4g溶解，调整溶液pH值为4.5，在45℃酶解24小时，过滤，滤液经120mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的30％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例19
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)0.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶3500W∶V，加β-葡萄糖苷酶5g溶解，调整溶液pH值为5.0，在55℃酶解72小时，过滤，滤液经750mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例20
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)2.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1600W∶V，加纤维素酶75g溶解，调整溶液pH值为5.5，在50℃酶解48小时，过滤，滤液经350mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的25％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例21
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)1.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶600W∶V，加纤维素酶60g溶解，调整溶液pH值为4.5，在45℃酶解24小时，过滤，滤液经200mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的15％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例22
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)1.2g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶900W∶V，加纤维素酶96g溶解，调整溶液pH值为4.8，在55℃酶解48小时，过滤，滤液经600mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的40％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例23
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)0.1g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶8000W∶V，加纤维素酶15g溶解，调整溶液pH值为5.0，在50℃酶解24小时，过滤，滤液经200mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的25％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例24
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量15％)15g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶250W∶V，加β-葡萄糖苷酶1g溶解，调整溶液pH值为4.5，在55℃酶解72小时，过滤，滤液经450mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的35％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例25
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)0.8g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1500W∶V，加β-葡萄糖苷酶15g溶解，调整溶液pH值为5.5，在45℃酶解48小时，过滤，滤液经400mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的25％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例26
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)1g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶900W∶V，加β-葡萄糖苷酶16g溶解，调整溶液pH值为4.8，在50℃酶解24小时，过滤，滤液经150mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例27
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)2.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶2000W∶V，加β-葡萄糖苷酶175g溶解，调整溶液pH值为5.0，在55℃酶解48小时，过滤，滤液经600mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的30％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例28
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)1.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶400W∶V，加纤维素酶45g溶解，调整溶液pH值为4.5，在45℃酶解48小时，过滤，滤液经200mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例29
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量40％)2g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1000W∶V，加纤维素酶50g溶解，调整溶液pH值为5.0，在50℃酶解72小时，过滤，滤液经400mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的15％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例30
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)2g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶2500W∶V，加纤维素酶100g溶解，调整溶液pH值为4.8，在40℃酶解48小时，过滤，滤液经500mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的20％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例31
七叶皂苷提取物(总七叶皂苷含量70％)2.5g，加水稀释至提取物∶药液比为1∶1200W∶V，加纤维素酶150g溶解，调整溶液pH值为5.5，在60℃酶解48小时，过滤，滤液经800mlD101大孔吸附树脂吸附，先用2个柱体积的水洗脱，再用2个柱体积的25％乙醇溶液洗脱，最后用70％乙醇洗脱2个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，待析出白色沉淀。后操作同实施例7。
实施例32
QYY10g，加40g乳糖∶微晶纤维＝5∶1、硬脂酸镁1％，用70％乙醇制粒、压片即得1000片片剂。规格：10mg/片。
实施例33
QYY钠盐0.8g，甘露醇9.2g，加1000ml注射用水溶解，加适量活性炭除热源，0.2μm微孔滤膜滤过，灌装，冷冻干燥，得冻干粉针剂。
实施例34
QYY赖氨酸盐1g，甘露醇15g，右旋糖酐4g，加1000ml热注射用水溶解，加适量活性炭除热源，0.2μm微孔滤膜滤过，灌装，冷冻干燥，供静脉注射用。
实施例35
QYY精氨酸盐10g，加糊精10g、乳糖30g用60％乙醇制粒、干燥、装胶囊，制得1000粒胶囊剂。
实施例36
(一)七叶皂苷衍生物组合物对小鼠腹膜炎的抑制作用
动物：昆明种小鼠，雄性，体重20-22g，随机分组，每组10只；
样品与试剂：七叶总皂苷(DEAC-06)，七叶皂苷衍生物(DEAC20-2)
造模方法：静脉给药后30min，尾静脉注射1％的伊文思兰0.1ml/10g体重，即刻腹腔注射0.6％的醋酸0.1ml/10g体重；
样品处理：造模后40min断颈椎处死动物，腹腔剪开小口用生理盐水冲洗腹腔，共6ml，分三次冲洗，收集冲洗液定容到同一刻度，3000转/min离心，取上清液200ul于96孔板中；
测定指标：酶标仪590nm测定溶液吸光度，结果用t检验处理，计算抑制率(％)。结果见表1。
表1七叶皂苷衍生物组合物对小鼠腹膜炎腹腔炎性渗出的影响(n＝10)
试验结果：
由表1可以看出七叶皂苷衍生物组(DEAC20-2)在所试剂量下显示剂量相关的抗炎性渗出作用，4.5mg/kg剂量下其作用显著强于同剂量的七叶总皂苷。
(二)七叶皂苷衍生物组合物体外溶血试验
样品与试剂
七叶总皂苷(DEAC06)，DEAC系列衍生物(DEAC20-2)，由天津药物研究院药物创新中心制备。各样品精确称量，DMSO溶解，生理盐水稀释到所需浓度。
动物
大耳白兔，雄性，体重：2.0～2.5kg，天津市山川红实验动物科技有限公司，SCXK(津)2009-0001。
实验方法
家兔耳动脉取血，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10min，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入生理盐水溶液约10倍量，摇匀，1500r/min，10min离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用生理盐水配制成2％的混悬液，供试验用。
取洁净试管若干，进行编号，设阴性对照管，阳性对照管，各样品管(0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.15mg/ml)。每管依次加入2％红细胞悬液、生理盐水溶液或蒸馏水及样品液，终体积为5ml，混匀后，立即置37℃恒温水浴箱中进行温育，开始分别于15min，30min，1h，2h，3h观察溶血情况。
表1七叶皂苷及其衍生物溶血反应浓度-时间关系
注：“-”未溶血，“+”溶血。
实验结果：
由表1可见，DEAC06在0.05mg/ml浓度，各时间段均未出现溶血，而0.1、0.15mg/ml浓度下30min开始出现溶血；DEAC20-2在0.05、0.1、0.15mg/ml浓度下各时间段均未出现溶血现象。
结论：
七叶皂苷衍生物组合物抗炎、抗渗出作用强于七叶总皂苷，溶血安全性较七叶总皂苷好。
Claims (17)
1.一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述组合物是由以下通式结构的化合物组成：
所述组合物中，化合物DGE-A占重量百分比为20～50％，和化合物DGE-B占重量百分比为20～40％，通式Ⅰ和通式Ⅱ化合物的含量比为9：1～5：5；
通式Ⅰ、Ⅱ中，R是-H。
2.根据权利要求1所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述组合物是按照以下工艺步骤制备：
a.使用按常规方法制备的七叶皂苷提取物作为原料，往其中加入适当溶剂配制药液；所述七叶皂苷提取物，其中总七叶皂苷的含量为5-95％W/W；药液浓度为原料：溶液＝1：1－1：8000g：ml；所述溶剂选自水、低级醇或含水低级醇，所述低级醇选自碳数为1－3的一元醇，药液中低级醇的最终浓度为1－30％(V/V)；
b.加入水解酶在恒温下进行水解，得到水解液；所述水解酶选自β－糖苷酶、β－葡萄糖苷酶、橙皮苷酶、纤维素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、糖化酶、果胶酶、淀粉酶中的一种或数种酶的混合物，酶与原料配比为1：50－200：1(W：W)；
c.分离水解产物：水解液经苯乙烯为骨架的大孔吸附树脂，先用水洗脱1－2个柱体积，后用10－50％的乙醇溶液洗脱1－3个柱体积，最后用70－95％乙醇溶液洗脱1－3个柱体积，收集高浓度乙醇洗脱部分，减压浓缩至使溶液含少量乙醇或无醇味，见白色沉淀析出；其中水解产物：树脂比为0.1：1－800：1mg：ml；
d.纯化分离得到的产物。
3.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中七叶皂苷提取物中总七叶皂苷的含量优选20-95％W/W。
4.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中药液浓度优选原料：溶液＝1：5－1：8000g：ml。
5.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中低级醇选自甲醇、乙醇。
6.根据权利要求2或5所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中低级醇为乙醇。
7.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中药液中低级醇的最终浓度优选5－20％V/V。
8.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中用于水解的酶选自β－糖苷酶、β－葡萄糖苷酶、纤维素酶。
9.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中酶与原料重量配比优选1：20－200：1。
10.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺分离步骤中水解产物－树脂优选配比为0.5：1－400：1mg：ml。
11.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中水解是在20－60℃下恒温进行48－72小时，溶液适合的pH值为4－7。
12.根据权利要求2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中水解产物的纯化按如下步骤进行：
过滤分离得到的所述白色沉淀物，用低级醇或含水低级醇或水溶解，过滤，浓缩滤液至溶液微见浑浊，放置，待析出结晶；过滤得结晶，再用低级醇或含水低级醇或水重结晶，得杂质5％以下的QYY；所述低级醇为碳数1－5的一元醇或多元醇。
13.根据权利要求12所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于所述制备工艺中低级醇选自甲醇或乙醇。
14.根据权利要求1所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于其药学上可接受的盐选自精氨酸、赖氨酸、葡甲胺盐或锂、钠、钾、NH4 +离子盐。
15.一种由权利要求1或2所述的七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物和药剂学可接受的药用辅料制备的药物制剂。
16.根据权利要求15所述的药物制剂，其特征在于所述药剂学可接受的药用辅料包括稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、溶剂。
17.权利要求1或2所述的一种七叶皂苷衍生物及其药学上可接受的盐的组合物在制备抗炎、抗水肿药物方面的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110142334.9A CN102805750B (zh) | 2011-05-31 | 2011-05-31 | 一种七叶皂苷衍生物及其盐的组合物、其制备方法和医药用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110142334.9A CN102805750B (zh) | 2011-05-31 | 2011-05-31 | 一种七叶皂苷衍生物及其盐的组合物、其制备方法和医药用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102805750A CN102805750A (zh) | 2012-12-05 |
| CN102805750B true CN102805750B (zh) | 2015-09-23 |
Family
ID=47229734
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110142334.9A Active CN102805750B (zh) | 2011-05-31 | 2011-05-31 | 一种七叶皂苷衍生物及其盐的组合物、其制备方法和医药用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102805750B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104288167B (zh) * | 2014-10-29 | 2017-08-25 | 马应龙药业集团股份有限公司 | 一种治疗痔疮的七叶皂苷钠制剂及其制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1105781C (zh) * | 1999-03-17 | 2003-04-16 | 金凤燮 | 酶法改变人参皂甙糖基制备人参皂甙的方法 |
| CN1158302C (zh) * | 2002-04-10 | 2004-07-21 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 具有消肿抗炎改善血液循环的精氨酸七叶皂苷及制备方法 |
| CN1268763C (zh) * | 2003-08-01 | 2006-08-09 | 金凤燮 | 酶法水解白头翁皂甙糖基制备低糖基白头翁皂甙的方法 |
| CN100357312C (zh) * | 2005-07-15 | 2007-12-26 | 武汉爱民制药有限公司 | 赖氨酸七叶皂苷及其制备方法和其用途 |
| CN100428940C (zh) * | 2005-07-15 | 2008-10-29 | 武汉爱民制药有限公司 | 七叶皂苷的药物组合物及其制备方法和其制药用途 |
-
2011
- 2011-05-31 CN CN201110142334.9A patent/CN102805750B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102805750A (zh) | 2012-12-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10624938B2 (en) | Total flavone extract of flower of abelmoschus manihot L. medic and preparation method thereof | |
| JP5294509B2 (ja) | シクロアストラゲノールモノグルコシド、その製造方法及び医薬用組成物としての使用 | |
| WO2006034655A1 (fr) | Composition pharmaceutique a base de saponines steroidiques, son procede de preparation et son utilisation | |
| CN103880910B (zh) | 一种环黄芪醇的制备方法及其用途 | |
| CN101434635B (zh) | 一类具抗肿瘤活性的水溶性酚性三萜化合物及其制备方法 | |
| AU2017394430B2 (en) | Panax plant extract and pharmaceutical composition and use thereof | |
| CN101284031B (zh) | 毛冬青提取物、其制备及应用 | |
| JP6389958B2 (ja) | 瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物抗腫瘍の薬物用途 | |
| CN104910240A (zh) | 光叶子花中三萜皂苷,以其为活性成分的降血糖药物,及其制备方法和应用 | |
| CN101863934A (zh) | 水杨酸甲酯糖苷类化合物、其合成方法与用途 | |
| CN104873520A (zh) | 一种11β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂、药用组合物及其用途 | |
| CN102805750B (zh) | 一种七叶皂苷衍生物及其盐的组合物、其制备方法和医药用途 | |
| CN101612183B (zh) | 一种乌骨藤皂苷提取物、药物组合物、制备方法及其应用 | |
| CN105777854A (zh) | 硫酸依替米星的药物组合物及其在生物医药中的应用 | |
| CN103183719A (zh) | 皂苷衍生物及其用途 | |
| CN105884796A (zh) | 别嘌醇的药物组合物及其在生物医药中的应用 | |
| CN101156882A (zh) | 三七原人参二醇型皂苷制备方法及其用途 | |
| CN103183715A (zh) | 呋甾烷型皂苷衍生物及其用途 | |
| CN103204860B (zh) | 具有神经保护作用的石蒜科生物碱类化合物 | |
| CN104644809A (zh) | 一种栀子总苷缓释片及其制备方法 | |
| CN105147710A (zh) | 一种降血糖药物及其制备方法和应用 | |
| CN106146600A (zh) | 乳香五环三萜酸类化合物或其盐、其组合物在制备糖尿病治疗药物中的用途 | |
| CN102641274A (zh) | 羟基积雪草酸的新用途 | |
| CN113278025B (zh) | 一类新骨架二萜二聚体化合物及其制备方法、药物组合物和应用 | |
| CN109718211A (zh) | 一种连翘苷元制剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 300193 Tianjin City, Nankai District Anshan West Road No. 308 Patentee after: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co.,Ltd. Address before: 300193 Tianjin City, Nankai District Anshan West Road No. 308 Patentee before: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20211224 Address after: 210000 28 Airport Road, Lishui Economic Development Zone, Nanjing, Jiangsu Province Patentee after: NANJING XINGYIN PHARMACEUTICAL GROUP Co.,Ltd. Address before: 300193 Tianjin City, Nankai District Anshan West Road No. 308 Patentee before: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co.,Ltd. |