CN102781421B - 华中五味子果实提取物和包含它的化妆品、皮肤病学和营养药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种包含华中五味子果实提取物的化妆品、皮肤病学或营养药组合物。所述华中五味子果实提取物选自肽与糖提取物、粗制油、精制油、精制油浓缩物或所述浓缩物的不可皂化成分。本发明也涉及用于制备华中五味子果实的肽与糖提取物、精制油和浓缩物以及油的不可皂化成分的方法。最后，本发明涉及所述提取物的皮肤病学、化妆品和营养药用途。

Description

华中五味子果实提取物和包含它的化妆品、皮肤病学和营养药组合物

简介

本发明涉及一种化妆品、皮肤病学或营养药组合物，其包含合适的赋形剂和华中五味子(Schisandra sphenanthera)提取物。

华中五味子植物

具有植物学名称五味子，这种植物属于木兰纲(Magnoliopsida)和木兰目(Magnoliales)。植物学的科是五味子科(Schisandraceae)。完整拉丁语名称是华中五味子(Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.)。该植物的俗名：橙色花五味子(schisandre àfleurs orangées)(在法国)、南方五味子与柠檬木(在英格兰)以及华中五味子(hua zhong wu wei zi)与南五味子(nan wu wie zi)(在中国)。

这些灌木源自中国北部及俄罗斯和韩国的毗连地区。世界上存在约25个属于五味子属的物种。这些物种中大约16个是中国的。在中国，将两个物种正式认可作为药物：五味子(S.chinensis)和华中五味子(S.sphenanthera)(He等人，1997)。在传统中药中使用它们的浆果来治疗咳嗽、哮喘、盗汗、遗精和慢性腹泻。也使用它们作为强壮药和治疗慢性疲劳。

单独使用的术语“五味子(Schisandra)”可以指两种不同的植物：五味子(Schisandra chinensis)和华中五味子(Schisandra sphenanthera)。长久以来已经将这两个物种视为等效：它们可能根据其起源命名：五味子为“北五味子”和华中五味子为“南五味子”。

五味子是雌雄异体的植物(具有迥异的雄花和雌花)。所述果实为悬挂成簇的形式，其与醋栗灌丛的果实多少相似。所述果实在其上部(大致5-10cm)具有裸露的花梗，所述花梗在其下部被比醋栗略大、更紧凑和坚实的鲜红色浆果覆盖。球状种子在尺寸上是数毫米。

所述果实特征

虽然五味子(S.chinensis)的果实已经成为大量文献的主题(传统用途、化学组成、药理学作用和皮肤病学作用：尤其，见WO 2005/044289)，但是对华中五味子(S.sphenanthera)的研究工作少得多。

-根据中国传统就其用途而言名声较差，

-在西方几乎不使用，

-与五味子(S.chinensis)相比总新木脂体的比例较低。

然而，商业上，认为华中五味子的果实在成本上低于五味子的果实。

华中五味子果实以其高的去氧五味子素含量为特征。相反，与五味子种子相比，华中五味子果实的五味子素和γ-五味子素含量极低(Zhu等人，2007)。近来，Huyke等人(2007)的文章报道了五味子和华中五味子提取物对细胞增殖的作用的对比研究。

五味子的干燥果实包含大约20％精油，其包含7％至30％不可皂化物(unsaponifiable)(Huyke等人，2007)。所述油的不可皂化成分中含有木脂体。其他活性组分包括植物甾醇以及维生素C和E。

精油(单萜和倍半萜烯)

所述精油富含倍半萜烯衍生物(Song等人，2007)：

δ-杜松烯：25.6％，

γ-杜松烯，

β-雪松烯，

檀香醇。

五味子果实的精油比华中五味子果实的精油含有更多的单萜烃(monoterpene hydrocarbon)(Huyke等人，2007)。

甾类

谷甾醇(Huyke等人，2007)(在果实中＜0.1％)

三萜醇

五味子醇(I)(Schisanol(I))(Yue等人，1994)

木脂体(Lignans)

A.定性数据

将木脂体视为该果实中用于皮肤病学、化妆品或药物应用的活性物质。已经在五味子果实中发现多于40种二苯并[a，c]环辛二烯骨架新木脂体(dibenzo[a，c]cyclooctadiene-skeleton neolignans)，或多或少被有机酸(乙酸、苯甲酸、当归酸或巴豆酸)酯化。这些新木脂体是新颖组分。木脂体的一般结构如下：

去氧五味子素：R_1，3，5＝H；R_2，4，6-11＝CH₃

表I中提供在华中五味子果实中鉴定到的新木脂体的名单。对于其结构，见Hancke等人，1999；He等人，1997；和Huyke等人，2007的出版物。

表I

(1)：Liu等人，1978；(2)：Huyke等人，2007；(3)Zhu等人，2007；(4)：Yue等人，1994；(5)Ikeya等人，1991；(6)：Ikeya等人，1990。

已经在五味子果实的种子内鉴定到一种二芳基丁烷木脂体，称作华中五脂素(sphenanlignan)(I)(Jiang等人，2005)，并且其具有以下结构：

B.定量数据

通过薄层色谱(TLC)-光密度测定法(TLC-densitometry)对10个五味子物种实施的分析解释了各物种之间色谱图形方面的差异(Wang等人，1991)。存在来自高效液相色谱(HPLC)分析华中五味子新木脂体的几个数据集，例如：Zhou等人，2005。

根据以英语发表的文章，下表II提供华中五味子果实中的主要新木脂体含量。

表II

(*)：通过乙醇提取物外推所得的结果

(**)：命名不完整；五味子酯A的异构结构。

华中五味子果实以其高的去氧五味子素含量为特征。相反，与五味子种子相比，其五味子素和γ-五味子素含量极低(Zhu等人，2007)。

果实提取物：使用的形式

除了在中国以脱水状态下的传统用途之外，华中五味子果实也以提取物的形式使用，其中通过能够夹带该果实的新木脂体的提取溶剂获得所述提取物。文献中提到的溶剂是乙醇、与共溶剂联合或不联合的超临界CO₂(SC-CO₂)、和己烷。

几项发表的研究曾试图比较SC-CO₂、氯仿和50％甲醇与乙醇相对于果实新木脂体的提取能力。

根据最近公开，通过CO₂或CO₂+5％乙醇或通过己烷提取华中五味子果实产生了就新木脂体而言十分相似的提取物组合物。相反，乙醇的使用导致两种新木脂体(脱氢五味子素和戈米辛O)的较劣提取，以及γ-五味子素的明显较好提取(Huyke等人，2007)。

已经在Yang(2001)的文章中提出华中五味子果实新木脂体(去氧五味子素，γ-五味子素等)的最佳SC-CO₂提取条件：21Mpa、37℃和CO₂流速5升/分钟。

赤-红血丝(erythro-couperose)和酒渣鼻(rosacea)的生理病理学

酒渣鼻是主要侵袭面部的常见皮肤病，并且可见面红外观(血管舒缩性潮红(vasomotor flashes))、永久红斑、丘疹、小疱和毛细血管扩张。次要标准经常可以显现为烧灼或螫刺感觉、红斑块、皮肤干燥、面部水肿及皮肤肿块和眼部表现。

这种皮肤病可以由许多因素触发和加重，如：热饮料、含酒精的饮料、温度变化、辛辣食物、锻炼、应激和强烈情绪、阳光等。

长久以来将酒渣鼻的生理病理定位为不甚了解和多因素性(遗传因素、炎性因素和血管因素)。

最近，发现并且证明多种机制参与酒渣鼻的引发(Yamasaki K.和Gallo RL.，2009)：

1)先天免疫改变：抗菌肽(cathelicidin)(LL37)的变体以高于正常的量存在；另外，这些变体具有炎性特征并且诱导IL-8分泌；

2)血管病症：新血管发生导致毛细血管扩张(可见的小血管)；反复的血管舒缩反应造成淋巴系统的损害，所述的损害是持续炎症的原因；

3)微生物作用；

4)氧化应激和阳光。

这些多样机制相互关联。尤其，抗菌肽(cathelicidin)也可以触发血管病症。

现有技术

文献中未发现关于华中五味子工业用途的信息。似乎该物种的果实未曾被开发用于新木脂体的分离，即便在美国(US 5,484,595)的一份专利中也是如此。

医药用途：

凡诺华公司(Phynova)的申请WO 2007/020382描述了包含四种植物(包括五味子或华中五味子)的提取物的组合物，所述组合物用于治疗肝病、代谢病和/或免疫病，并且更具体地意图治疗丙型肝炎。

广州中一药业(Guang Zhou Zhongyi Pharmaceutical)的申请WO2006/122485和WO 2006/1222454描述了意图治疗糖尿病的组合物，所述组合物包含几种植物(包括华中五味子)的混合物。

Zhao先生的申请US 2003/0026854描述了用于治疗肝病的基于五味子素的药物；特别地所述五味子素是从五味子或华中五味子中提取。

申请WO 2007/005760描述了治疗抗化疗癌细胞的组合物，所述组合物包含五味子素家族的化合物、戈米辛和源于五味子果实提取物及华中五味子果实提取物的其他化合物。

在欧洲，主管机关批准的药物均不含有华中五味子提取物。通常认为，华中五味子在药用上劣于五味子并且它仅用作活性木脂体的备选资源。

皮肤病学和化妆品用途：

Huyke等人(2007)的文章描述并且比较了华中五味子提取物和五味子提取物对于培养下的细胞的作用：人永生化表皮细胞(HaCaT)和A431表皮细胞的增殖以剂量依赖性方式受到这些提取物抑制，而非极性提取物比极性提取物更有效。华中五味子的SC-CO₂提取物证明最有活性，IC₅₀为20μg/ml。在采用游离细胞的酶抑制试验中，所述SC-CO₂提取物强烈地抑制环氧化酶2(重组COX-2)产生前列腺素(与吲哚美辛的1μg/ml相比，IC₅₀＝0.2μg/ml)。它也减少由紫外线B诱导的PGE₂产生(IC₅₀＝4μg/ml)和HaCaT角质形成细胞中的COX-2表达。该项研究的作者得出结论：华中五味子的SC-CO₂提取物可以用于预防和治疗皮肤的炎性或过度增生性疾病。

已经在专利申请KR 2001931中描述了五味子提取物在预防痤疮方面的用途，在组合物中还包含选自如木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的植物蛋白酶的剥脱剂或者源于微生物的剥脱剂。

已经在CN 11040971中描述了传统中药的抗痤疮组合物：它包含10份称作“石菖蒲(shi chang pu)”的菖蒲(Acorus calamus)、8份五味子果实和3份其他植物。

发明描述

本发明人已经发现，华中五味子果实提取物具有此前从未描述过的美容性质和皮肤病学性质。尤其，华中五味子提取物第一次因其特殊性质而使用并且不作为五味子(Schisandra chinensis)的替代物使用。

本发明的目的是一种化妆品、皮肤病学或营养药组合物，其包含任选地与合适赋形剂组合的华中五味子果实提取物。

可以获得并且单独或组合地使用几种华中五味子果实提取物。

所述华中五味子果实提取物选自至少：

-一种肽与糖提取物；

-一种具有下表3中所示分析结果的粗制油：

表3：粗制华中五味子油的分析结果

油成分	％
		C14	0
C16	7.7
		C16′	0.4
C18	2.4
		C18′	13.3
C18″	75.0
		C18″′	0.5
C20	0.5
		C20′	0.2
C22	0
		C22′	0
C24	0
		生育酚含量(g/100g)	0.01
甾醇含量(g/100g)	0.54
		木脂体含量(g/100g)	6.2
萜烯含量(g/100g)	21.4

-一种精制油，其具有表4中所显示的特征并且尤其没有或具有极少(不显著量的)的萜烯：

表4：精制华中五味子油的分析结果

油成分	％
		C14	0
C16	7.5
		C16′	0.1
C18	2.4
		C18′	13.3
C18″	75.5
		C18″′	0.5
C20	0.5
		C20′	0.2
C22	0
		C22′	0
C24	0
		生育酚含量(g/100g)	0.01
甾醇含量(g/100g)	0.74
		木脂体含量(g/100g)	7.8

-所述精制油的一种浓缩物，或者

-源于所述精制油浓缩物的一种不可皂化物。

根据本发明的第一变例，所述华中五味子果实提取物是肽与糖提取物不包含木脂体。

术语“肽提取物”指主要由肽组成的提取物。

术语“糖提取物”指主要由单糖组成的提取物。

本发明的肽提取物有利地具有以下规格：

肽含量(％)	5-90
		总糖含量(％)	5-90

根据本发明的优选方面，所述肽与糖提取物包括以重量计10％至50％的肽和以重量计10％至60％的糖，其中所述百分数相对于所述提取物的总重量计算。

根据本发明的第二变例，所述华中五味子果实提取物是脂质提取物，该脂质提取物选自粗制油、精制油、所述精制油的浓缩物或源于所述浓缩物的不可皂化物。

所述脂质提取物(粗制油、精制油)可以通过几种方法获得：

-物理提取法，如在机械压力机(mechanical press)上冷榨、在双螺杆挤出机上压榨等；

-使用有机溶剂(脂肪族烷、醇类、氯代溶剂、氟代溶剂等)的化学提取法；

-使用单独和/或随同共溶剂一起的二氧化碳，在超临界介质中提取。

对于华中五味子油的提取，将优选使用在超临界介质如二氧化碳中的溶剂。

根据分子蒸馏方法精制粗制华中五味子油以消除萜烯成分。精制的油因而是“无萜烯的粗制油”。

术语“浓缩物”指已经经历过分子蒸馏步骤的精制油。

术语“不可皂化物”指精制油浓缩物的不可皂化成分，所述的不可皂化成分在皂化步骤和使用合适溶剂提取不可皂化物的步骤后获得。

本发明也涉及用于从本发明的粗制油中制备精制华中五味子油的方法，所述方法包括分子蒸馏所述粗制油的步骤。

所述分子蒸馏步骤优选地使用选自离心分子蒸馏器和刮膜式分子装置(wiped-film molecular device)的装置实施。

离心分子蒸馏器是本领域技术人员已知的。例如，申请EP 493 144描述了这个类型的分子蒸馏器。通常，待蒸馏的产物以薄层铺摊在高速转动的锥形转子的受热表面(热表面)上。所述蒸馏室置于真空下。在这些条件下，所述油的组分(如萜烯)从热表面蒸发而不沸腾，其优点在于所述油及其组分，特别是不可皂化物(认为这些产物脆弱)在此操作过程中不降解。

本领域技术人员也已知的刮膜式分子蒸馏器包含配备有转动刮片(wiperblade)的蒸馏室，所述的刮片能够将待蒸馏的产物在蒸发表面(热表面)上连续展开。通过置于蒸馏室中央的冷指(cold finger)冷凝产物的蒸气。外周供给系统和真空系统与离心蒸馏器极相似(供给泵、回转叶片式真空泵、油扩散泵等)。通过重力流回收残余物和馏出物。

本发明还涉及用于制备在其不可皂化成分中浓缩的精制华中五味子果实油浓缩物的方法。该方法包括分子蒸馏精制油的步骤。尤其，所述分子蒸馏步骤使用选自上文所述的离心分子蒸馏器和刮膜式分子装置的装置实施。

本发明还涉及用于制备华中五味子果实不可皂化物的方法，其包括以下步骤：皂化本发明的精制华中五味子果实油浓缩物，并且随后使用合适的溶剂提取所述不可皂化物。随后洗涤所述提取物直至彻底消除皂类，并且随后将溶剂蒸发。最后，不可皂化物经历蒸汽除臭，随后经历氮汽提以消除痕量的溶剂和水。

本发明还以用于制备华中五味子果实的肽与糖提取物的方法作为目的。这种用于制备华中五味子果实的肽与糖提取物的方法包括以下相继步骤：

a)从五味子果实开始，提取粗制油和油饼并且回收分散于水中的所述油饼；

b)用纤维素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的酶混合物酶处理所述油饼；随后

c)热处理以抑制所述酶；

d)离心、超滤并且在具有15kDa截止值的膜上透滤以消除残余蛋白质；

e)纳米过滤以消除例如矿物盐或游离氨基酸；

f)可以将肽提取物在活性炭存在下漂白并且将它在过滤后回收。

有利地，可以将所述肽与糖提取物冻干。

根据本发明的一个方面，化妆品、皮肤病学或营养药组合物包含至少两种华中五味子果实提取物。尤其，所述组合物包含肽与糖提取物和粗制油，或肽与糖提取物和精制油，或肽与糖提取物和精制油浓缩物，或肽与糖提取物和不可皂化物。

根据本发明的另一个方面，所述化妆品、皮肤病学或营养药组合物可以进一步包含除所述华中五味子果实提取物之外的至少一种其他活性化合物。

所述的其他化合物可以选自下文提到的全部化合物及其功能性等同物。

所述的其他化合物尤其可以选自通常在皮肤病学中使用的活性剂如润肤剂、润湿性活性剂、角蛋白合成激活物、角质层调节剂、角质层分离剂、重构皮肤屏障的物质(皮肤脂质合成的激活物)、过氧化物酶体增殖物激活的受体(peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR)激动药、RXR或LXR激动物、维生素D或皮质类固醇受体激动物、角质形成细胞分化活化物(类视黄醇、(开奥希多)、钙)、皮脂调节剂、抗刺激剂、安抚剂(soothingagent)、抗炎药、抗氧化剂和抗老化剂。

所述的其他化合物也可以选自具有互补性治疗作用的活性剂，如抗生素、益生元(prebiotics)和益生菌(probiotics)、抗菌药、抗真菌化合物、抗病毒药、防腐剂、免疫调制剂(他克莫司或吡美莫司)、唑啉、生长因子、结瘢剂或促营养分子、色素沉着或色素消褪剂、脂肪分解剂或脂肪生成抑制剂或抗蜂窝组织(anti-cellulite agent)剂或缩减剂(reducing agent)、(色素性或超细)无机或有机滤光物和遮光物、传统或功能性食物：升血糖或降血糖、抗脂肪或抗蜂窝组织营养物、抗胆固醇、抗氧化、供能、重构、影响更年期继发体征的食物。

所述的其他化合物也可以选自天然的植物提取物(来自可以在水相或油相中提取的植物：多酚、类黄酮(flavonoids)、其他肽和糖等)、含有植物油不可皂化物的复合物(compound)、甾醇不可皂化物或含有它们的产物(植物油不可皂化物，特别是豆油不可皂化物、植物脂不可皂化物或油性物质(butyraceousmatter)及其混合物、天然蜡不可皂化物、油提取物不可皂化物、油脂工业副产品的不可皂化物、动物脂肪提取物不可皂化物、海洋动物油不可皂化物、乳脂提取物不可皂化物、从单细胞生物提取的脂质不可皂化物、从藻类和海洋生物提取的脂质不可皂化物)、甾醇、甾烷醇、植物甾醇、植物甾烷醇、生育酚、向日葵和/或油菜籽和/或棕榈油浓缩物、微量元素、维生素、ω-3或-6或-9脂肪酸、降血糖性或升血糖性或增甜植物。

最常使用的润湿/润肤活性剂是甘油或其衍生物、脲、吡咯烷酮羧酸及其衍生物、任何分子量的透明质酸、葡萄糖胺聚糖和海洋源、植物源或生物技术源的任何其他多糖，例如黄原胶、岩藻聚糖某些脂肪酸如月桂酸、肉豆蔻酸、多不饱和以及单不饱和ω-3、-6、-7和-9脂肪酸，如亚油酸和棕榈油酸、向日葵油精华素(oleodistillate)、鳄梨肽、古朴阿苏果油(cupuacubutter)。

可以组合使用的角蛋白合成活化物有利地是类视黄醇、羽扇豆肽、角质层或颗粒层关键蛋白(角蛋白)和角化粒、鳄梨糖、昆诺阿藜(quinoa)肽提取物。

抗炎性/抗刺激剂和安抚剂限制了由细胞因子或花生四烯酸代谢介质造成的炎症反应，并且具有安抚和抗刺激性质。最常规的是甘草次酸(甘草衍生物)和其盐及酯、硫辛酸、β-胡萝卜素、维生素B3(烟酰胺(niacinamide)、尼克酰胺(nicotinamide))、维生素E、维生素C、维生素B12、类黄酮(绿茶、槲皮素等)、番茄红素或叶黄素、鳄梨糖、鳄梨油精华素(oleodistillate)、阿拉伯半乳聚糖、羽扇豆肽、羽扇豆总提取物、昆诺阿藜肽提取物、循环神经酰胺(唑啉衍生物)、异黄酮，例如染料木黄酮/染料木苷、黄豆苷原/黄豆苷、泉水或温泉水(雅漾(eau d’Avène)、理肤泉(eau de la RochePosay)、圣泉薇(eau de Saint Gervais)、依泉(eau d’Uriage)、珂玛德(eau deGamarde))、枸杞(Lycium barbarum)提取物、植物氨基酸肽或复合物、局部用氨苯砜、或甾体抗炎药(SAID)如皮质类固醇类或非甾体抗炎药(NSAID)。

常使用的角质层调节剂/角质层分离剂包括：最常使用的角质层调节剂/角质层分离剂包括：果实的α-羟酸(AHAS)(柠檬酸、羟乙酸、苹果酸、乳酸等)、AHA酯、AHAS与其他分子的组合如苹果酸和杏仁蛋白的组合((克瑞托莱特))、羟乙酸或乳酸与精氨酸的组合或羟酸与脂质分子如(脂-羟酸)的组合、两性羟酸复合物(AHCare)、柳树皮(白柳树皮提取物)、壬二酸和其盐及酯、水杨酸及其衍生物如辛酰基水杨酸或与其他分子的组合如水杨酸和多糖(β-羟酸或BHA)的组合、他扎罗汀、阿达帕林、以及维甲酸家族的分子如类视黄醇、视黄醛、异维甲酸和视黄醇。

可以组合使用的皮脂调节剂有利地选自包括5-α-还原酶抑制剂(例如活性物质5-α(阿沃库塔))的组。锌(和其葡萄糖酸盐、水杨酸盐和焦谷氨酸)也具有皮脂抑制活性。也可以提到在12周应用后显著降低皮脂分泌速率的螺内酯，一种抗雄激素和醛固酮拮抗剂。其他分子(例如从西葫芦(Cucurbitapepo)，从南瓜籽、南瓜种子油以及扇叶菜棕(palm cabbage)提取)通过抑制5-α-还原酶转录和活性限制皮脂产生。影响皮脂性质的其他脂源皮脂调节剂如亚油酸是有意义的。

可以组合使用的生长因子有利地是贝卡普勒明(becaplermin)和转化生长因子β(TGF-β)、表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)和血管内皮生长因子(VEGF)。

术语“抗氧化剂”指减少或防止其他化学物质氧化的分子。可以组合使用的抗氧化有利地选自由以下物质组成的组：硫醇和酚、甘草衍生物如甘草次酸和其盐及酯、α-没药醇、银杏提取物、金盏花(Calendula)提取物、环神经酰胺(唑啉衍生物)、鳄梨肽、微量元素如铜、锌和硒、硫辛酸、维生素B12、维生素B3(烟酰胺、烟酰胺)、维生素C、维生素E、辅酶Q10、磷虾、谷胱甘肽、丁羟甲苯(BHT)、丁羟茴醚(BHA)、番茄红素或叶黄素、β-胡萝卜素、多酚的巨大家族如单宁、酚酸、花青素、类黄酮，例如绿茶、红浆果、可可、葡萄、粉色西番莲(Passiflora incarnata)或柑橘(Citrus)的提取物，或异黄酮，例如染料木黄酮/染料木苷和黄豆苷原/黄豆苷。抗氧化剂类群还包括抗糖化剂如肌肽或某些肽、N-乙酰半胱氨酸以及抗氧化或游离基清除酶，如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、硫氧还蛋白还原酶及其拮抗剂。

可以组合使用的结瘢/修复屏障功能并且刺激表皮的关键脂质合成的物质有利地是维生素A、泛醇(维生素B5)、鳄梨糖、羽扇醇、玛卡肽提取物、藜麦肽提取物、阿拉伯半乳聚糖、氧化锌、镁、硅、羟基积雪草酸或积雪草酸、硫酸葡聚糖、辅酶Q10、葡糖胺及其衍生物、硫酸软骨素和总体糖胺聚糖(GAGs)、硫酸葡聚糖、神经酰胺、胆固醇、角鲨烷、磷脂、发酵或未发酵过的大豆肽、植物肽、海洋多糖、植物多糖或生物技术多糖，如藻类提取物或蕨类提取物、微量元素、富含单宁的植物的提取物如从没食子酸衍生的单宁，其称作没食性单宁或可水解单宁，最初在栎树瘿中找到，和从黄烷单元聚合产生的儿茶素单宁，其模型由儿茶(Acacia catechu)提供。

可以使用的微量元素有利地选自由铜、镁、锰、铬、硒、硅、锌及其混合物组成的组。也可以使用向日葵浓缩物，更有利地是亚油酸性向日葵浓缩物，如由法国科延公司(Laboratoires Expanscience)出售活性物质(索林)、植物油不可皂化物如鳄梨呋喃PPAR激动物(罗格列酮、吡格列酮)、RXR和LXR。

可以组合使用以治疗成熟受试者中痤疮的抗老化剂是抗氧化剂，并且尤其是维生素C、维生素A、视黄醇、视黄醛、任何分子量的透明质酸、鳄梨呋喃羽扇豆肽和玛卡肽提取物。

可以组合使用的抗真菌化合物有利地是益康唑和酮康唑。

可以组合使用的杀菌防腐剂例如是三氯生、氯己定和季铵。

可以组合使用的抗生素有利地是夫西地酸、青霉素、四环素、普那霉素红霉素、克林霉素、莫匹罗星、米诺环素和多西环素。可以组合使用的抗病毒药有利地是阿昔洛韦和伐昔洛韦。

可以组合使用的防腐剂例如是在化妆品或营养药中通常使用的那些防腐剂，具有抗细菌活性的分子(假防腐剂)如辛酸衍生物(例如辛酰甘氨酸辛酸甘油酯等)，如己二醇和乙酰丙酸钠、锌和铜衍生物(葡糖酸盐和PCA)、植物鞘氨醇及其衍生物、过氧苯甲酰、吡罗克酮乙醇胺、巯氧吡啶锌、二硫化硒。

可以组合使用的防晒活性物质包括UVB和/或UVA滤光或遮光物，或本领域技术人员已知的任何无机和/或有机遮光或滤光剂，所述技术人员将根据所寻求的保护程度调整它们的选择和其浓度。

作为防晒活性物质的实例，可以具体提到二氧化钛、氧化锌、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚(品牌名称：Tinosorb M(天来施M))和双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(品牌名称：Tinosorb S(天来施S))、辛-水杨酸、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷、对苯二亚甲基二樟脑磺酸、4-甲基亚苄基樟脑、二苯酮、甲氧基肉桂酸乙基己酯、二甲基对氨基苯甲酸(PABA)乙基己酯和二乙基己基丁酰胺基三嗪酮。

可以组合使用的还原剂有利地是咖啡因、海草(wrack)、植物提取物(例如：常春藤、可可、瓜拉那(guarana)、花竹柏(假叶树属(Ruscus))、绿茶、maté、四川胡椒(Sichuan pepper)和欧洲七叶树提取物)、积雪草(Centellaasiatica)、肉碱、海罂粟碱、七叶素、异黄酮类例如染料木黄酮和银杏(Ginkgobiloba)、福司柯林、视黄醇和其他维甲酸类、根皮苷和海茴香(sea fennel)。

预防脱发和/或强化头发和指甲的物质有利地是植物甾醇、异黄酮类例如，大豆异黄酮、视黄醇、锌及其衍生物、neoruscine、维生素E、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素PP、维生素B5(泛醇，bepanthen)、维生素B8(维生素H或生物素)、维生素B9(叶酸)、α羟酸、奎宁和某些氨基酸如半胱氨酸、胱氨酸和甲硫氨酸。可以使用的其他化合物包括5-α-还原酶抑制剂例如，非那雄胺、度他雄胺、锯叶棕(Serenoa serrulata或Serenoa repens)、西葫芦提取物或某些植物甾醇。也可以提到角蛋白、微量元素、矿物盐、某些植物蛋白质或脂质提取物例如，苋科(Pfaffia)、鼠尾草、柠檬、人参、金鸡纳树、霍霍巴(jojoba)、七叶树、蜂蜜、小麦、荨麻、紫锥菊(echinea)或椰子提取物。

抗头皮屑物质(用于头皮)有利地选自豆瓣菜属(Nasturtium)提取物、维生素F、麝香草酚、粘土、巯氧吡啶锌、锌PCA、葡萄糖酸锌、硫酸锌、樟脑、桃金娘提取物、水杨酸、维生素B5、氯咪巴唑、鱼石脂、硒及其衍生物、南瓜籽提取物、红花属(Carthamus)提取物、白千层(Melaleuca)油提取物、琉璃苣和含羞草(Mimosa tenuiflora)油、蜂胶、科泰奥(kertyol)、羟乙酸、克鲁埃米德(keluamid)、环匹罗司乙醇胺、吡罗克酮乙醇胺、辛酰甘氨酸和5-αAvocuta。

可以组合使用的药物或化妆品物质有利地是适于预防和/或治疗以下病症的药物：

-特异反应性：皮质类固醇如氢化可的松、地奈德、氟轻松、丙酸氟替卡松、抑制钙神经的局部用免疫调制剂如他克莫司和吡美莫司、环孢菌素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、维生素B12、抗微生物分子、抗组胺药如羟嗪和苯海拉明、抗生素、益生菌、纳曲酮、PPAR-α激动物如向日葵油精华素、含有神经酰胺或其他关键性表皮脂质的润肤剂，

-座疮：抗生素、过氧苯甲酰、维甲酸、壬二酸、维生素PP、维生素B3、锌、细胞周期蛋白。

-湿疹：免疫调制剂、润肤剂、鲑鱼油、琉璃苣油、益生菌，

-酒渣鼻：珀摩丝奥(permethol)、染料木黄酮、七叶苷、硫酸葡聚糖、橙皮苷甲基查尔酮、维甲酸、甘草查耳酮、羟甲唑啉、激动素、甘草提取物、多酚、类黄酮、原花青素(绿茶)、类维生素P、花竹柏提取物、国槐(Sophorajaponica)、金缕梅(Hamamelis)提取物和抗生素如多西环素，

-银屑病：皮质类固醇、卡泊三醇、骨化三醇、他扎罗汀、杜松油、阿维A酸和PUVA疗法。

可以组合使用的药物或食物有利地是升血脂和/或降血脂药物或食物。尤其可以提到基于磺酰脲和基于格列奈的药物、基于α-葡糖苷酶抑制剂的药物、基于双胍的药物(二甲双胍)、胰岛素敏感性活化物或含有作为PARR激动剂的噻唑烷二酮类(TZD、吡格列酮、罗格列酮)的药物、他汀家族或贝特家族(PPAR-α激动剂)降血脂药物、奥利司他(赛尼可)和西布曲明(瑞都克提尔(Reductyl)或辛布垂(Sibutral))。

可以组合使用的抗脂肪营养物有利地选自由组成的组阻断脂肪吸收的营养物如壳聚糖、能够增加生热的营养物(脂肪燃烧者)如麻黄碱(中药“麻黄”)、咖啡因、茶碱和可可碱和酸橙、能够控制食欲的营养物(饥饿抑制剂)如L-苯丙氨酸和L-酪氨酸、能够控制血糖症的营养物如矿物质，例如铬或钒或镁，或印度草药武靴藤(Gymnema sylvestre)、脂肪生成抑制剂如藤黄果提取物(Garcinia cambogia)羟基柠檬酸提取物和能够运输脂肪的营养物如L-肉碱。

使血糖再平衡的升血糖性食物或疗法的实例包括抗逆转录病毒药、糖皮质素、免疫抑制剂、IFN-α、性甾体类、THS、口服避孕丸、生长激素、拟效感神经药、心血管药物、利尿药、β-阻滞剂、钙制剂和拟效感神经药物。

可以组合使用的降血糖性植物有利地选自由组成的组胡芦巴(Trigonellafoenum-graecum)、科罗索酸(大花紫薇(Lagerstroemia speciosa)树的叶的活性化合物)、武靴藤(Gymnema sylvestre)、苦瓜(Momordica charantia)果汁、桉树(蓝桉(Eucalyptus globulus))、人参(Panax ginseng)和欧洲越桔(黑果越桔(Vaccinium myrtillus))叶。

可以组合使用的免疫调制剂有利地是他克莫司、吡美莫司和唑啉。可以组合使用的唑啉有利地是选自由2-十一基-4-羟甲基-4-甲基-1，3-唑啉、2-十一基-4，4-甲基-1，3-唑啉、(E)-4，4-甲基-2-十七碳-8-烯-1，3-唑啉、4-羟甲基-4-甲基-2-十七基-1，3-唑啉、(E)-4-羟甲基-4-甲基-2-十七碳-8-烯-1，3-唑啉和2-十一基-4-乙基-4-羟甲基-1，3-唑啉组成的组中的唑啉。甚至更有利地，所述唑啉是称作OX-100或环神经酰胺的2-十一基-4，4-甲基-1，3-唑啉。

可以组合使用的色素消褪剂或除色素剂包括氢醌及其衍生物、熊果苷、维A酸、视黄醇、视黄醛、维甲酸、氢醌、皮质类固醇类、曲酸、壬二酸、鞣花酸、丙酮酸、羟乙酸、维生素B3(烟酰胺)或PP、维生素C、环神经酰胺间苯二酚衍生物、白藜芦醇甘草或桑白皮提取物、α-硫辛酸、亚油酸、吲哚美辛、阳离子螯合剂如乙二胺四乙酸(EDTA)和大豆提取物如染料木黄酮。也可以提到由Seppic出售的(N-碳烯酰基-L-苯丙氨酸)，它是美容用除色素剂。

可以组合使用的色素沉着剂例如是使皮肤染色的物质如二羟丙酮和黑色素类；刺激天然色素沉着过程的物质如在皮肤病学中具有治疗性质的补骨脂素类(8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、4，5′，8-三甲基补骨脂素或补骨脂(Psoralea corylifolia)和大阿米芹(Ammi majus)的植物提取物)、类胡萝卜素类(番茄红素、斑蝥黄)、刺激环AMP途径的物质如(1.cAMP类似物，如8-溴-cAMP或双丁酰cAMP，2.福司柯林，3.异丁基-甲基-黄嘌呤或茶碱)、蛋白激酶C活化物(二酰甘油，尤其，油酰基-乙酰基-甘油)、脂族或环状二醇(1，2-丙二醇、5-降莰烷-2，2-二甲醇、降莰烷-2，2-二甲醇)、双环单萜二醇、酪氨酸衍生物(L-酪氨酸、L-DOPA)、二甲基亚砜、亲溶酶体物质、胸腺嘧啶二核苷酸、DNA片段、黑素细胞刺激激素类似物、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、硝酸供体(Brown，光化学和光生物学杂志B：生物学(Journal of photochemistryand photobiology B：biology)63(2001)148-161)；或植物提取物如稻肽，和显示促黑色素生成活性的藻类：掌状海带(Laminaria digitata)(来自Codif的)。

特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实肽与糖提取物和植物及动物不可皂化物，例如，鳄梨和大豆不可皂化物和不可皂化的植物油或动物油浓缩物，例如，向日葵油或棕榈油浓缩物，或含有不可皂化物的植物油，例如，大豆油和菜籽油，以及不可皂化物的衍生物如鳄梨呋喃、甾醇酯和维生素衍生物。“甾醇”不可皂化物是这样的不可皂化物，其甾醇(甲基甾醇和三萜醇)的含量相对于该不可皂化物的总重量是以重量计20％至95％，优选地以重量计45％至65％。

特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和鳄梨糖(如申请WO 2005/115421中所述)。所述组合物特别适于治疗皮肤屏障修复和炎症。

特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和鳄梨肽(如国际申请WO 2005/105123中所述)。所述组合物特别适于治疗刺激和炎症。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和鳄梨油(如国际申请WO 2004/012496、WO 2004/012752、WO2004/016106、WO 2007/057439中所述)。

另一个特别有利的本发明组合是是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和鳄梨呋喃(鳄梨呋喃，其可以通过国际申请WO 01/21605中所述的方法获得)。所述组合物特别适于治疗炎症、促进瘢痕形成和适于其抗老化性质。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和和5-α(鳄梨油酸丁酯)。所述组合物特别适于抑制5-α-还原酶(见WO 01/52837和WO 02/06205)和适于调节痤疮和头皮屑中存在的皮脂溢出分泌物增加。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和鳄梨及大豆不可皂化物。可以组合使用的鳄梨及大豆不可皂化物有利地分别是处于大约1∶3-2∶3比例的鳄梨呋喃性不可皂化物和大豆不可皂化物的混合物。鳄梨及大豆不可皂化物甚至更有利地是由Laboratoires Expanscience出售的产品

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和向日葵油精华素，甚至更有利地是具有亚油酸性向日葵浓缩物的向日葵油精华素(oleodistillate)，如由Laboratoires Expanscience出售的活性物质(见国际申请WO 01/21150)。所述组合物特别适于治疗炎症和皮肤屏障修复。

另一个特别有利的本发明组合是是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和大豆不可皂化物，如根据国际申请WO 01/51596中所述的方法获得的大豆不可皂化物。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和羽扇醇(FR 2,822,821，FR 2,857,596)。所述组合物特别适于支持瘢痕形成。

另一个特别有利的本发明组合是是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和羽扇豆肽，如根据申请WO 2005/102259中所述的方法获得的羽扇豆肽。所述组合物特别适于治疗炎症，并且因其抗老化性质而使用。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和总羽扇豆提取物(见国际申请WO 2005/102259)。所述组合物特别适于治疗刺激。

另一个特别有利的本发明组合是是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和羽扇豆油，有利地是甜味白色羽扇豆油，如国际申请WO 98/47479中所述的甜味白色羽扇豆油。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和玛卡肽提取物(见国际申请WO 2004/112742)。所述组合物因其结瘢性质和抗老化性质而特别受赏识。

特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实肽与糖提取物和稻肽(见国际申请2008/009709)。所述组合物因其与刺激黑素形成和与黑色素转移相关的性质而特别受赏识。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和环神经酰胺(唑啉衍生物)，如国际申请WO 2004/050052、WO 2004/050079和WO 2004/112741中所述。所述组合物特别适于治疗炎症反应。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和藜麦提取物，尤其肽提取物(见国际申请WO 2008/112742)。所述组合物特别适于治疗炎性疾病和皮肤屏障修复。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和古朴阿苏果油。所述组合物因其润湿性质而特别受赏识。

另一个特别有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和油菜籽浓缩物。

另一个有利的本发明组合是一种组合物，该组合物包含华中五味子果实提取物和玉米浓缩物。

除华中五味子果实提取物之外，全部这些组合包含至少一种其他活性化合物，并且可以包含如上所述的两种、三种、四种或更多种活性化合物。

本发明的组合物可以以适于局部施加或适于口服、直肠、阴道、鼻部、耳部、支气管或肠胃外给药的多种制剂形式制备。

根据第一变例，多种制剂适于局部施加，并且包括乳膏剂、乳剂、乳、香膏剂、洗剂、油剂、水溶液剂或氢化-醇或乙醇酸溶液剂、粉剂、贴剂、喷雾剂或用于外部施加的任何其他产品。

根据第二变例，多种制剂适于口服给药，其中可以在膳食组合物或膳食补充剂中包含所述五味子果实提取物。在本发明背景下，可以以原样华中五味子果实提取物(例如精制油)的形式或者以硬质或软质明胶或植物胶囊剂的形式提供膳食补充剂。所述膳食补充剂因而可以含有以重量计10％至100％的华中五味子果实提取物。

根据本发明的这个第二变例，在不限制的情况下，也可以在包括以下制品的食物、饮料和营养药中并入本发明的华中五味子果实提取物：

1)乳制品如乳酪、黄油、乳和其他乳状饮料、含有乳产品、冰淇淋和酸乳的混合物和糊状食品；

2)基于脂肪的制品如人造黄油、糊状食品、蛋黄酱、烹调用脂肪、油炸用油和维纳格雷酸辣沙司(vinaigrette)；

3)由谷物组成的基于谷物的制品，如面包和面食制品，无论这些食品是否经过烹煮、焙烘或加工；

4)糖果如巧克力、糖食、口香糖、甜品、顶端配料(topping)、清凉果汁饮料(sorbet)、蛋糕糖衣(icing)和其他饰菜(garnishe)；

5)酒精或无酒精饮料，包括苏打水和其他软饮料、果汁、膳食补充物、饮料形式的正餐代用品如在品牌名称Boost^TM和Ensure^TM下销售的那些正餐代用品，和；

6)多种制品如蛋类、加工食品如汤、即用型面食制品调味汁、准备好的菜肴和相同类型的其他制品。

可以借助技术如混合、灌注、注射、掺混、吸附、揉捏和喷洒在食物中、营养药中、膳食产品，尤其高蛋白产品中，或饮料中直接并且在无其他修饰下并入本发明的组合物。

可以根据建立适于患者或适于动物的药物疗法、尤其皮肤学疗法或兽医疗法时通常所考虑的标准例如，该患者或动物的年龄或体重、该患者或动物整体状态的严重性、对所述疗法的耐受性、明显的副作用和皮肤类型，确定本发明化合物和组合物的给药模式及、投予方案和最佳植物制剂形式。根据想要的给药法的类型，本发明的有效组合物和/或化合物可以进一步包含至少一种可药用的赋形剂，尤其皮肤病学可接受的赋形剂。根据第一变例，使用适于体外局部施加的赋形剂。本发明的组合物还可以包含本领域技术人员已知的至少一种药用佐剂，其选自增稠剂、防腐剂、香料、色料、化学或无机滤料(filter)、润湿剂、温泉水等。

包含了具有所示规范的华中五味子果实提取物的组合物特别意图用于化妆品、皮肤病学或营养药用途。

在美容或皮肤病学用途的背景下，将会有利地以适于局部施加的制剂形式配制所述组合物。包含肽与糖提取物的组合物特别意图用于化妆品或皮肤病学用途。

在营养药用途的背景下，针对营养或美容目的(美容食物)，将会有利地以适于口服给药的制剂形式配制所述组合物。该组合物将不包含赋形剂并且将整体地被包含于精制华中五味子油中。

本发明也以使用选自华中五味子果实肽与糖提取物或华中五味子果实脂质提取物的华中五味子果实提取物用于制造化妆品或皮肤病学或食物组合物作为目的，其中所述的华中五味子果实脂质提取物选自由粗制油、精制油、浓缩物或不可皂化物组成的组。

在第一方面，本发明以选自如上文定义的肽与糖提取物或粗制油或精制油或浓缩物或不可皂化物中的华中五味子果实提取物在化妆品组合物中的用途作为目的，用于预防和治疗过敏性、炎性或刺激性反应或病变，或者皮肤和/或粘膜屏障或稳态的和/或不成熟、正常或成熟/老化的上皮附属物的病症。

在第二方面，本发明以选自如上文定义的肽与糖提取物或粗制油或精制油或浓缩物或不可皂化物中的华中五味子果实提取物在食物组合物(如功能性食物)中的用途作为目的，用于预防和治疗过敏性、炎性或刺激性反应或病变，或者皮肤和/或粘膜屏障或稳态的和/或不成熟、正常或成熟/老化的上皮附属物的病症。

功能性食物是常规食物或可视作常规食物，所述常规食物是正常膳食的一部分并且以提供超过该食物常见营养功能的有利生理益处或降低慢性病风险作为特征。

尤其，所述功能性食物意图预防和治疗过敏性、炎性或刺激性反应或病变，或者以下对象的屏障或稳态病症：

-皮肤，如痤疮、酒渣鼻(赤-红血丝)、皮肤发红、银屑病、血管病、尿布疹、特应性皮炎、湿疹、接触性皮炎、刺激性皮炎、过敏性皮炎、脂溢性皮炎(乳痂)、银屑病、敏感皮肤、反应性皮肤、干性皮肤(干燥病)、皮肤脱水、发红的皮肤、皮肤红斑、老化和光老化的皮肤、光敏感性皮肤、色素沉着的皮肤(黑斑病、炎症后色素沉着等)、失色素的皮肤(白癫风)、患有蜂窝织炎的皮肤、松弛皮肤、具有牵拉痕的皮肤、粗皮病、皲裂、虫咬、裂痕，尤其，乳房裂痕、晒伤、因全部类型射线所致的炎症、由化学病原因素、物理病原因素(抗张力：孕妇)、细菌学病原因素、真菌或病毒病原因素、寄生性病原因素(虱、螨、癣、蜱螨、皮肤真菌)或放射学因素或由先天性免疫缺损(抗微生物肽)或获得性性免疫缺损(细胞、体液、细胞因子)所致的刺激，和/或

-粘膜，如患有牙龈炎的齿龈和牙周组织(新生儿中敏感齿龈、因使用烟草所致的卫生问题等)、牙周病或伴有男性或女性生殖器区域内部或外部刺激的生殖器粘膜，和/或

-上皮附属物如不成熟、正常或成熟/老化的甲(易碎、脆弱甲等)和毛发(秃发、头皮屑、多毛症、脂溢性皮炎、毛囊炎)，尤其显示头皮病症如雄性、急性、局限性、瘢痕性或先天性秃发、新生儿中枕部秃发、斑秃、因化疗法/放疗法所致的秃发或休止期期脱发、再生期脱发、毛发营养不良、拔毛症、癣或者油性或干性头皮屑。

本发明也涉及食物或营养药组合物，其包含选自华中五味子果实肽与糖提取物或华中五味子果实脂质提取物的华中五味子果实提取物，其中所述的脂质提取物本身选自由粗制油、精制油、浓缩物或不可皂化物组成的组。

在第三方面，本发明以选自如上文定义的肽与糖提取物或粗制油或精制油或浓缩物或不可皂化物中的华中五味子果实提取物的治疗用途作为目的，用于预防和治疗过敏性、炎性或刺激性反应或病变，或者皮肤和/或粘膜屏障或稳态的和/或不成熟、正常或成熟/老化的上皮附属物的病症。

根据优选的方面，本发明以华中五味子果实肽与糖提取物在化妆品组合物中用于治疗和预防皮肤发红、赤-红血丝和酒渣鼻的用途作为目的。

根据另一个优选的方面，本发明以华中五味子果实肽与糖提取物在食物组合物中用于治疗和预防皮肤发红、赤-红血丝和酒渣鼻的用途作为目的。

根据第三优选的方面，本发明以华中五味子果实肽与糖提取物用于治疗和预防皮肤发红、赤-红血丝和/或酒渣鼻的治疗用途作为目的。

实施例

实施例1：用于局部施加的组合物

本发明人在下文提供几种用于局部施加的组合物。可以将所述油、木脂体中浓缩的精制油、不可皂化成分和华中五味子肽与糖提取物并入多种化妆产品中，如洁肤水(cleansing water)、水包油乳液、油包水乳液、油、乳、洗液、洗发剂、泡沫产品和喷雾剂，下文提出它们的组成。

润湿性洁肤水

原料/品牌名称	％
		纯水	补足余量至(QSP)100％
生物糖胶(Biosaccharide gum)	1％-5％
		丁二醇	1％-5％
透明质酸	0％-5％
		五味子肽与糖提取物	0.01％-5％
防腐剂	0％-1％
		柠檬酸一水合物	0％-1％
氨丁三醇	0％-1％

用于敏感皮肤的洁肤水

原料/品牌名称	％
		辛酰甘氨酸	0％-1％
苏打碱液(Soda lye)	0％-1％
		多价螯合剂	0％-1％
丁二醇	1％-5％
		β-萝卜素	0％-2％
五味子浓缩物	0.01％-5％
		防腐剂	0％-1％
PEG-32	1％-5％
		PEG-7棕榈椰油酸酯(palmcocoate)	1％-5％
葡萄糖酸锌	0％-1％
		柠檬酸	0％-1％
纯水	QSP 100％
		香料(Fragrance)	0％-1％
泊洛沙姆184	1％-5％

抗老化乳剂

原料/品牌名称	％
		液体异链烷烃	5％-20％
异鲸蜡醇硬脂酸酯	5％-20％
		Al-Mg羟硬脂酸盐	5％-20％
Abil WE 09	1％-5％
		甘油	1％-5％
凡士林油	1％-5％
		微粉化氧化锌	1％-5％
丁二醇	1％-5％
		视黄醇	0％-1％
维生素C	0％-5％
		五味子不可皂化成分	0.01％-5％
异壬酸异壬酯	1％-5％
		蜂蜡	1％-5％
酒石酸钠	1％-5％
		氯化钠	0％-5％
甘氨酸	1％-5％
		防腐剂	0％-1％
胆固醇	0％-1％
		植物鞘氨醇	0％-1％
酒石酸	0％-1％
		纯水	QSP 100％

重构用乳剂

还原油(Reducing oil)

原料/品牌名称	％
		增溶剂	0％-1％
甜杏仁油	5％-20％
		椰油辛酸/癸酸酯(Copra caprylate/caprate)	QSP 100％
精制澳洲坚果油(macadamia oil)	5％-20％
		甘油辛酰癸酸酯(Glycerol caprylocaprate)	5％-20％
天然α-没药醇	0％-1％
		α-生育酚	0％-1％
常春藤提取物	0％-5％
		精制五味子油	0.01％-5％
防腐剂	0％-1％
		酯	0％-1％

用于干性、特异反应性皮肤的乳

原料/品牌名称	％
		甜杏仁油	1％-5％
玉米油	1％-5％
		硬脂酸	1％-5％
C16-C18鲸蜡酸	0％-1％
		消泡剂70414	0％-1％
月桂醇11OE	1％-5％
		PEG 300单月桂酸酯	0％-1％
单油酸甘油酯	0％-1％
		单硬脂酸甘油酯	1％-5％
维生素B12	0％-5％
		五味子浓缩物	0.1％-5％
防腐剂	0％-1％
		柠檬酸	0％-1％
柠檬酸三钠	0％-1％
		纯水	QSP 100％
香料	0％-1％
		花生油	1％-5％
氢化棕榈油	1％-5％

泡沫

原料/品牌名称	％
		纯水	QSP 100％
月桂酰两性基乙酸盐	5％-20％
		椰油基葡糖苷	5％-20％
表面活性剂1	5％-20％
		表面活性剂2	5％-20％
PEG 6000二硬脂酸酯	1％-5％
		防腐剂	1％-5％
五味子油	0.1％-5％
		洋甘菊提取物(Chamomile extract)	1％-5％
柠檬酸一水合物	0％-1％
		多价螯合剂	0％-1％
香料	0％-1％
		苏打碱液	0％-1％

顺滑喷雾剂(Soothing spray)

原料/品牌名称	％
		纯水	QSP 100％
三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯	1％-5％
		碳酸二辛酯	1％-5％
丁二醇	1％-5％
		赤藓醇酯(Erythrityl ester)	1％-5％
液体凡士林油	1％-5％
		雪亚脂(Shea butter)	0％-1％
植物油	0％-1％
		防腐剂	0％-1％
番茄红素	0％-5％
		五味子不可皂化成分	0.01％-5％
苏打碱液	0％-1％
		香料	0％-1％
黄原胶	0％-1％
		卡波姆	0％-1％
多价螯合剂	0％-1％
		柠檬酸	0％-1％

纯化清洁霜

原料/品牌名称	％
		纯水	QSP 100％
阿拉同恩(Arlatone)	10％-30％
		椰油基葡糖苷	5％-20％
羟丙基瓜尔胶(Hydroxypropyl guar)	1％-5％
		辛酰甘氨酸	0％-2％
防腐剂	0％-2％
		香料	0％-1％
柠檬酸	0％-1％
		锌吡咯烷酮羧酸(PCA)	0％-1％
五味子肽与糖提取物	0.01％-5％

抗痤疮乳剂

原料/品牌名称	％
		PEG40硬脂酸酯	1％-5％
PEG5硬脂酸甘油酯	1％-5％
		地蜡	1％-5％
单硬脂酸甘油酯	1％-5％
		失水山梨醇硬脂酸酯	0％-2％
鲸蜡醇	0％-2％
		苹果酸氢酯醇	5％-20％
维生素E	0％-1％
		维生素B3	0％-5％
亚油酸	0％-1％
		五味子肽与糖提取物	0.01％-5％
丁二醇	1％-5％
		吡罗克酮乙醇胺(Piroctolamine)	0％-1％
防腐剂	0％-1％
		甘油	1％-10％
黄原胶	0％-1％
		锌PCA	0％-2％
米淀粉	1％-5％
		尼龙6	0％-2％
聚丙烯酰胺凝胶	1％-5％
		维生素B6	0％-1％
香料	0％-1％
		纯水	QSP 100％

抗发红乳剂

原料/品牌名称	％
		PEG40硬脂酸酯	1％-5％
PEG5硬脂酸甘油酯	1％-5％
		地蜡	1％-5％
单硬脂酸甘油酯	1％-5％
		失水山梨醇硬脂酸酯	0％-2％
鲸蜡醇	0％-2％
		苹果酸氢酯醇(Dimalate alcohol)	5％-20％
七叶苷(Esculoside)	0％-2％
		国槐(Sophora japonica)	0％-5％
维生素E	0％-1％
		五味子油	0.01％-5％
丁二醇	1％-5％
		吡罗克酮乙醇胺(Piroctolamine)	0％-1％
防腐剂	0％-1％
		甘油	1％-10％
黄原胶	0％-1％
		锌PCA	0％-2％
米淀粉	1％-5％
		尼龙6	0％-2％
聚丙烯酰胺凝胶	1％-5％
		维生素B6	0％-1％
香料	0％-1％
		纯水	QSP 100％

修复护理

原料/品牌名称	％
		PEG40硬脂酸酯	1％-5％
PEG5硬脂酸甘油酯	1％-5％
		地蜡	1％-5％
单硬脂酸甘油酯	1％-5％
		失水山梨醇硬脂酸酯	0％-2％
鲸蜡醇	0％-2％
		苹果酸氢酯醇	5％-20％
维生素E	0％-1％
		辅酶Q10	0％-2％
神经酰胺	0％-5％
		精制五味子油	0.01％-5％
丁二醇	1％-5％
		吡罗克酮乙醇胺	0％-1％
防腐剂	0％-1％
		甘油	1％-10％
黄原胶	0％-1％
		锌PCA	0％-2％
米淀粉	1％-5％
		尼龙6	0％-2％
聚丙烯酰胺凝胶	1％-5％
		维生素B6	0％-1％
香料	0％-1％
		纯水	QSP 100％

除色素乳剂

原料/品牌名称	％
		异壬酸异壬酯	1％-10％
异鲸蜡醇硬脂酸酯	1％-10％
		PEG40硬脂酸酯	1％-5％
PEG5硬脂酸甘油酯	1％-5％
		防腐剂	0％-1％
C16-C18鲸蜡醇	0％-2％
		PPG/SMDI聚合物	0％-1％
水杨酸	0％-2％
		角鲨烷凝胶	0％-2％
二辛醚	1％-10％
		苹果酸氢酯醇	1％-10％
向日葵提取物	1％-10％
		氨丁三醇	1％-5％
丁二醇	1％-10％
		柠檬酸三钠	0％-1％
小核菌胶	0％-1％
		米淀粉	1％-10％
聚丙烯酰胺凝胶	0％-1％
		维生素C	0％-2％
甘氨酸	0％-2％
		香料	0％-1％
维生素E	0％-2％
		柠檬酸	0％-1％
Sepiwhite(酰苯胺)	0％-2％
		五味子浓缩物	0.01％-5％
纯水	QSP 100％

抗细菌滚搽棒(stick roll-on)

原料/品牌名称	％
		纯水	QSP 100％
丁二醇	1％-5％
		过氧化苯甲酰	0％-2％
辛酰甘氨酸	0％-5％
		锌PCA	0％-5％
五味子油	0.1％-5％
		卡波姆(Carbomer)	0％-2％
防腐剂	0％-1％
		柠檬酸	0％-1％
氨丁三醇	0％-1％

擦剂(scrub)

原料/品牌名称	％
		Arlatone duo(阿拉同恩多)	5％-20％
表皮剥脱剂	1％-10％
		小核菌胶	1％-10％
防腐剂	0％-1％
		辛酰甘氨酸	0％-1％
苏打	0％-1％
		五味子肽与糖提取物	0.01％-5％
多价螯合剂	0％-1％
		柠檬酸	0％-1％
纯水	QSP 100％
		香料	0％-1％

角化液

原料/品牌名称	％
		鲸蜡醇	1％-5％
硅氧烷345(silicone 345)	1％-5％
		抗氧化剂	0％-1％
纯水	QSP 100％
		西曲氯铵	0％-5％
奎宁	0％-5％
		维生素B5	0％-5％
五味子油	0.01％-5％
		水解小麦蛋白	0％-1％
防腐剂	0％-2％
		香料	0％-1％
pH调节剂	0％-1％

抗头皮屑洗发剂

原料/品牌名称	％
		纯水	QSP 100％
月桂酰两性基乙酸盐	5％-20％
		椰油基葡糖苷	5％-20％
PEG6000二硬脂酸酯	1％-5％
		防腐剂	0％-2％
维生素F	0％-5％
		吡罗克酮乙醇胺(Piroctone olamine)	0％-2％
五味子浓缩物	0.01％-5％
		吡硫锌	0％-1％
pH调节剂	0％-1％
		多价螯合剂	0％-1％
香料	0％-1％

调理剂

原料/品牌名称	％
		鲸蜡硬脂醇/鲸蜡硬脂醇聚醚-33	1％-5％
季铵盐-82(Quaternium-82)	0％-2％
		纯水	QSP 100％
水解小麦蛋白	0％-5％
		防腐剂	0％-2％
pH调节剂	0％-1％
		香料	0％-1％
半胱氨酸	0％-5％
		精制五味子油	0.01％-5％

毛细血管强化洗液

原料/品牌名称	％
		纯水	QSP 100％
甲基丙二醇	5％-20％
		防腐剂	0％-2％
pH调节剂	0％-1％
		香料	0％-1％
生物素	0％-5％
		维生素B9	0％-5％
五味子浓缩物	0.01％-5％
		β-谷固醇	0％-1％
椰油酸乙基己酯	0％-5％
		PEG-40蓖麻油	0％-5％

光防护棒(Photoprotecting stick)

原料/品牌名称	％
		蓖麻油	QSP100％
油醇	10％-20％
		棕榈油	10％-20％
聚甘油-3-蜂蜡	10％-20％
		小烛树蜡	10％-20％
锂蒙脱石	10％-20％
		二氧化钛	0％-5％
五味子不可皂化成分	0.01％-5％
		雪亚脂	0％-5％
维生素E	0％-1％

防晒系数(SPF)50+防晒霜

原料/品牌名称	％
		B4纯水	QSP 100％
钛氧化物	10％-20％
		环五硅氧烷	5％-15％
棕榈酸辛酯	5％-15％
		C12-C15烷基苯甲酸酯	5％-10％
戊酸癸酯	5％-10％
		锌氧化物	5％-10％
甘油	1％-5％
		PEG-45/十二烷甘醇共聚物	1％-5％
五味子肽与糖提取物	0.01％-5％
		氯化钠	1％-5％
糊精棕榈酸酯	1％-2％
		维生素E	0％-2％
防腐剂	0％-2％
		羟丙基瓜尔胶(Hydroxypropyl guar)	0％-1％
芦荟(Aloe vera)	0％-1％
		苏打碱液	0％-1％
乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA 2-Na)	0％-1％
		葡萄糖酸锌	0％-1％

SPF50+防晒喷雾剂

抗发红乳剂

原料/品牌名称	％
		PEG40硬脂酸酯	1％-5％
PEG5硬脂酸甘油酯	1％-5％
		地蜡	1％-5％
单硬脂酸甘油酯	1％-5％
		失水山梨醇硬脂酸酯	0％-2％
鲸蜡醇	0％-2％
		苹果酸氢酯醇	5％-20％
国槐(Sophora japonica)	0％-5％
		维生素E	0％-1％
五味子肽与糖提取物	0.01％-5％
		丁二醇	1％-5％
吡罗克酮乙醇胺(Piroctolamine)	0％-1％
		防腐剂	0％-1％
甘油	1％-10％
		黄原胶	0％-1％
锌PCA	0％-2％
		米淀粉	1％-5％
尼龙6	0％-2％
		聚丙烯酰胺凝胶	1％-5％
维生素B6	0％-1％
		香料	0％-1％
纯水	QSP 100％

抗老化抗发红乳剂

原料/品牌名称	％
		液体异链烷烃	5％-20％
异鲸蜡醇硬脂酸酯	5％-20％
		Al-Mg羟硬脂酸盐	5％-20％
Abil WE 09	1％-5％
		甘油	1％-5％
凡士林油	1％-5％
		微粉化锌氧化物	1％-5％
丁二醇	1％-5％
		视黄醇	0％-1％
维生素C	0％-5％
		五味子肽与糖提取物	0.01％-5％
异壬酸异壬酯	1％-5％
		蜂蜡	1％-5％
酒石酸钠	1％-5％
		氯化钠	0％-5％
甘氨酸	1％-5％
		防腐剂	0％-1％
胆固醇	0％-1％
		植物鞘氨醇	0％-1％
酒石酸	0％-1％
		纯水	QSP 100％

实施例2：用于口服给药的组合物

将所述五味子油、浓缩物和肽以能够每日给药50mg至200mg五味子提取物的组成集成入口服组合物中。

2.1软胶囊剂形式的抗牵拉痕组合物

A-组合物1

-五味子肽与糖提取物                    30mg

-星果棕油(Awara oil)                   60mg

-不可皂化物丰富的油菜籽油              300mg

-B族维生素(B1、B2、B3、B5、B6、B9、B12)QSP 100％RDA

-生育三烯酚                            QSP 50％RDA

-维生素E

-蜂蜡

-大豆卵磷脂

-滋养性明胶

-丙三醇                                QSP 1软胶囊剂

所述组合物作为每日4至6粒500mg胶囊剂给药。

B-组合物2

-五味子油                              30mg

-富含神经酰胺和极性脂质的谷物油        300mg

-羽扇豆油                              50mg

-维生素E                               QSP 100％RDA

-维生素C                               QSP 50％RDA

-蜂蜡

-大豆卵磷脂

-滋养性明胶

-丙三醇                                QSP 1软胶囊剂

所述组合物作为每日4至6粒500mg胶囊剂给药。

2.2抗脱发片剂

-五味子浓缩物          25mg

-含硫氨基酸丰富的谷物提取物(玉米、荞麦、谷子、斯佩尔特小麦)                        200mg

-维生素C               QSP 50％RDA

-鱼软骨葡萄糖胺聚糖    200mg

-糖酸(Glucidex)IT 19(压缩剂(compression agent))

                       QSP一个800mg片剂

所述组合物作为每日5至8个片剂给药。

-五味子不可皂化成分      200mg

-含硫氨基酸丰富的谷物提取物(玉米、荞麦、谷子、斯佩尔特小麦)                          200mg

-螯合物形式的Zn          QSP 100％RDA

-维生素C                 QSP 50％RDA

-鱼软骨葡萄糖胺聚糖      200mg

-果味料(柑橘果实、红浆果)、丁磺氨钾、糖酸(Glucidex)IT19(压缩剂)                     QSP一个2,000mg片剂

所述组合物每日给药一次。

2.3还原性粉棒(reducing powder stick)的实例

-五味子肽与糖提取物                    100mg

-富含多酚的茶提取物                    100mg

-富含低聚原花青素(OPC)的葡萄提取物     50mg

-植物β-葡聚糖                         100mg

-黄原胶                                1mg

-抗坏血酸钠                            0.3mg

-麦芽糊精                              QSP5g

所述组合物每日施用给药二两次。

-五味子不可皂化成分                 100mg

-积雪草(Centella asiatica)提取物    100mg

-镁、硒、锰                         QSP 100％RDA

-黄原胶                             1mg

-抗坏血酸钠                         0.3mg

-麦芽糊精                           QSP5g

所述组合物每日施用给药二两次。

2.4巧克力味压缩饼干的实例

-精制五味子油                              200mg

-番茄红素                                  6mg

-虾青素                                    4mg

-岩藻黄质(Fucoxanthin)                     4mg

-微胶囊化形式的叶黄素                      4mg

-微胶囊化的生育三烯酚    QSP 100％RDA 以维生素E计

-黑巧克力、低聚果糖、糖、果糖糖浆、减脂可可(fat-reduced cocoa)、松脆谷物(crunchy cereal)、脱脂乳粉、杏仁、甘油、山梨糖醇、植物油、葡萄糖浆、调味料、甜炼乳、大豆卵磷脂、脂肪酸甘油一酯和甘油二酯、焦糖化糖浆、麦芽糊精、盐、山梨酸钾、α-生育酚

                                         QSP一个50g的条

所述组合物每日给药一次。

2.5香草味压缩饼干(cereal bar)的实例

-五味子油                         200mg

-含硫氨基酸丰富的谷物提取物(玉米、荞麦、谷子、斯佩尔特小麦)                                   200mg

-鱼软骨葡萄糖胺聚糖               200mg

-富含多酚的绿茶提取物             200mg

-低聚果糖、糖、果糖糖浆、松脆谷物(crunchy cereal)、脱脂乳粉、杏仁、甘油、山梨糖醇、植物油、葡萄糖浆、调味料、甜炼乳、大豆卵磷脂、脂肪酸甘油一酯和甘油二酯、焦糖化糖浆、麦芽糊精、盐、山梨酸钾、α-生育酚

                                  QSP一个50g的条

所述组合物每日给药一次。

2.6果仁糖味乳状饮料的实例

-五味子浓缩物                        200mg

-富含多酚的绿茶提取物                100mg

-B族维生素(B 1、B2、B3、B5、B6、B9、B 12)

                                     QSP 100％RDA

-Zn、Mg、Se                          QSP 100％RDA

-脱脂奶粉、调味料、果糖、蛋清、榛子果仁、糖、焦糖、β-胡萝卜素、黄原胶、阿斯巴甜、丁磺氨钾、大豆卵磷脂、麦芽糊精

                                      QSP一个30g包装

所述组合物每日给药一次。

实施例3：华中五味子肽与糖提取物在酒渣鼻的炎性阶段中的活性

在实施例3至5中，“五味子肽”的表述指含有某个百分数的肽的华中五味子肽与糖提取物。

为了评价五味子肽在酒渣鼻炎性阶段的潜在活性，我们研究了这种活性物质复合物对角质形成细胞中受维生素D类似物(骨化三醇(calcitriol))诱导的激肽释放酶5(KLK5)和抗菌肽(cathelicidin)(LL37)基因表达的影响。

材料与方法

正常的人表皮角质形成细胞(NHEK)在补充有Ca++的培养基中培养以使所述细胞进入分化状态。

在10^-7M骨化三醇(维生素D类似物)存在或不存在下，用0.05％(w/v)五味子肽处理角质形成细胞24小时。

在所述处理结束时，排除培养上清液，并且使用提取试剂盒(RNeasyMini试剂盒，凯杰(Qiagen))提取总RNA。随后，将总RNA在芯片中使用Experion^TM系统和Experion RNA StdSens试剂盒(伯乐(Bio-Rad))分析并且随后使用iScript cDNA合成试剂盒(Bio-Rad)逆转录成cDNA。

使用SybrGreen技术(iQ SybrGreen试剂盒，Bio-Rad)，在iQ5系统(Bio-Rad)上通过实时PCR选择性扩增新合成的与目的基因(KLK5和LL37)或与参考基因相关的cDNA。

实时RT-PCR方法能够相对于参考基因的表达水平，将对应于给定处理的目的基因表达水平相对定量。

结果的定量分析基于阈循环的收集。

阈循环(Ct)是荧光发射信号统计地和显著高于背景时的时点。阈循环与靶DNA的初始拷贝数直接相关。

对于每份样品，目的基因的表达水平由最稳定的参考基因的表达水平归一化。使用GeNorm macro，确定最稳定的参考基因；在这个情况下，它是GAPDH基因。

ΔCt因而计算如下：

ΔCt＝Ct_靶基因-Ct_参考基因

在第二步骤中，确定作为处理和目的基因拷贝数的函数的变异。ΔΔCt因而计算如下：

ΔΔCt＝ΔCt_对照-ΔCt_处理

最后，计算相对量(RQ)：RQ＝(1+E)ΔΔCt。

将E(效率)视为等于1，并且因而：

RQ＝2ΔΔCt

通过单因素方差分析，随后通过Tukey检验(GraphPad Prism 5.02版软件，GraphPad Software，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)对ΔCt值验证结果的显著性。

结果

KLK5基因表达：

骨化三醇(维生素D类似物)强烈并且显著地刺激角质形成细胞的激肽释放酶5基因表达(+149％，p＜0.01)。

五味子肽显著地抑制由骨化三醇诱导的KLK5表达(54％抑制，p＜0.01)。

$$：p＜0.01相对于对照细胞

**：p＜0.01相对于受刺激的对照

LL37基因表达

骨化三醇强烈并且显著地刺激角质形成细胞的LL37基因表达(+795％，p＜0.01)。

五味子肽显著地抑制由骨化三醇诱导的LL37表达(58％抑制，p＜0.01)。

$$$：p＜0.001相对于对照细胞

**：p＜0.01相对于受刺激的对照

结论

在这些实验条件下，五味子肽调节酒渣鼻中增加的一种标记抗菌肽(cathelicidin)(LL37)的表达，以及负责该标记成熟的酶(激肽释放酶5)的表达。

因而，五味子肽可以辅助调节酒渣鼻中炎症反应的诱导。

实施例4：华中五味子肽与糖提取物对于炎症其他参数的活性 材料与方法

正常的人角质形成细胞与浓度0.005％和0.05％的五味子肽或10^-7M地塞米松(抗炎参考分子)预孵育24小时。

随后在五味子肽或地塞米松始终存在下，通过用10μg/ml PMA(佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯，Sigma)处理24小时诱导炎症。

在孵育结束时，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量培养上清液中存在的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-6(IL-6)的量。

平行地，通过中性红试验确定生物活跃细胞的数目。通过除以在中性红试验结束时获得的OD₅₄₀值，将对于每种条件所分析的细胞因子的量还原成活细胞的数目。

通过单因素方差分析，随后通过Tukey检验(GraphPad Prism 5.02版软件，GraphPad Software，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)验证结果的显著性。

结果

IL-1β分泌：

用PMA处理明确地刺激IL-1β由角质形成细胞释放，并且地塞米松明确地抑制这种释放(-65％)；这些结果验证了该试验。

在所测试的两个浓度上，五味子肽显著地抑制角质形成细胞中由PMA诱导的IL-1β分泌：在0.005％，64％抑制(p＜0.001)；和在0.05％，56％抑制(p＜0.001)。

$$$：p＜0.001相对于对照细胞

***：p＜0.001相对于受刺激的对照

IL-8分泌：

用PMA处理明确地刺激IL-8由角质形成细胞释放，并且地塞米松明确地抑制这种释放(-53％)；这些结果验证了该试验。

在所测试的两个浓度上，五味子肽显著地抑制由PMA诱导的IL-8释放：在0.005％，58％抑制(p＜0.001)；和在0.05％，37％抑制(p＜0.001)。

$$$：p＜0.001相对于对照细胞

***：p＜0.001相对于受刺激的对照

IL-6分泌：

用PMA处理显著地诱导IL-6由角质形成细胞分泌，并且地塞米松抑制这种释放；这些结果验证了该试验。

在所测试的两个浓度上，五味子肽强烈并且显著地抑制由PMA诱导的IL-6释放：在0.005％，-70％(p＜0.001)；和在0.05％，-74％(p＜0.001)。

$$：p＜0.01相对于对照细胞

***：p＜0.001相对于受刺激的对照

结论

在这些实验条件下，五味子肽对初级细胞因子(IL-1β)和两种次级细胞因子(IL-8和IL-6)显示炎症调节作用。

实施例5：华中五味子肽与糖提取物对于血管参数的活性

5.1.限制内皮细胞增殖

材料与方法

将正常人真皮微血管内皮细胞在浓度0.05％和0.1％的五味子肽不存在(对照)或存在下和在10ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)(参考活化物)不存在和存在下孵育24或48小时。

在孵育结束时，通过胞内磷酸酶活性的分光光度分析评价细胞活力。

通过单因素方差分析，随后通过Holm-Sidak检验评价统计显著性。

结果

在VEGF不存在下的内皮细胞增殖：

在基线条件(无VEGF)下，在用所测试的两个浓度上的五味子肽处理24小时后，内皮细胞生长显著地减少：

在VEGF存在下的内皮细胞增殖：

相对于对照细胞，VEGF显著地刺激内皮细胞生长：在24小时孵育后+41.4％(p＜0.01)和在48小时孵育后+96.3％(p＜0.01)。这个结果验证所述试验。

在所测试的两个浓度上，五味子肽显著地抑制由VEGF诱导的内皮细胞增殖：

结论

通过限制内皮细胞增殖，五味子肽可以限制血管发生的早期阶段。

5.2.对角质形成细胞中血管发生标记表达的影响

为了理解五味子肽的抗血管发生作用，研究了角质形成细胞中的参与血管发生的某些基因或蛋白质标记的表达，尤其，促血管发生性生长因子VEGF和纤维生长因子-2(FGF-2)以及抗血管发生性标记血小板反应蛋白-1(THBS-1)的表达。

A.促血管发生性标记(VEGF，FGF-2)基因的表达

材料与方法

将正常的人表皮角质形成细胞(NHEK)在0.05％和0.1％(w/v)五味子肽存在下孵育48小时。

在所述处理结束时，排除培养上清液，并且使用提取试剂盒(RNeasyMini试剂盒，Qiagen)提取总RNA。随后，将总RNA在芯片中使用Experion^TM系统和Experion RNA StdSens试剂盒(Bio-Rad)分析并且随后使用iScript cDNA合成试剂盒(Bio-Rad)逆转录成cDNA。

使用SybrGreen技术(iQ SybrGreen试剂盒，Bio-Rad)，在iQ5系统(Bio-Rad)上通过实时PCR选择性扩增新合成的与目的基因(VEGF、FGF-2、HIF-1α、THBS-1)或与参考基因相关的cDNA。

实时RT-PCR方法能够相对于参考基因的表达水平，将对应于给定处理的目的基因表达水平相对定量。

结果的定量分析基于阈循环的收集。

阈循环(Ct)是荧光发射信号统计地和显著高于背景时的时点。阈循环与靶DNA的初始拷贝数直接相关。

对于每份样品，目的基因的表达水平由最稳定的参考基因的表达水平归一化。使用GeNorm macro，确定最稳定的参考基因；在这个情况下，它是YWHAZ基因。

ΔCt因而计算如下：

ΔCt＝Ct_靶基因-Ct_参考基因

在第二步骤中，确定作为处理和目的基因拷贝数的函数的变异。ΔΔCt因而计算如下：

ΔΔCt＝ΔCt_对照-ΔCt_处理

最后，计算相对量(RQ)：RQ＝(1+E)ΔΔCt。

将E(效率)视为等于1，并且因而：

RQ＝2ΔΔCt

通过单因素方差分析，随后通过Dunnett检验(GraphPad Prism 5.02版软件，GraphPad Software，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)对ΔCt值验证结果的显著性。

结果

血管内皮生长因子(VEGF)基因表达：

在所测试的两个浓度上，五味子肽极强烈并且显著地抑制角质形成细胞的VEGF基因表达：在0.05％，89％抑制(p＜0.001)；和在0.1％，93％抑制(p＜0.001)。

***：p＜0.001相对于对照细胞

碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)基因表达：

在所测试的两个浓度上，五味子肽极强烈并且显著地抑制角质形成细胞的FGF-2表达：在0.05％，93％抑制(p＜0.001)；和在0.1％，95％抑制(p＜0.001)。

***：p＜0.001相对于对照细胞

血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1)基因表达：

在所测试的两个浓度上，五味子肽显著地刺激角质形成细胞的血小板反应蛋白-1(一种抗血管发生因子)表达：在0.05％，+118％(p＜0.01)；和在0.1％，+60％(p＜0.05)。

*：p＜0.05相对于对照细胞

**：p＜0.01相对于对照细胞

B.血管发生标记蛋白(VEGF)的表达

材料与方法

正常的人角质形成细胞与浓度0.005％、0.05％和0.1％的五味子肽或10^-7M地塞米松(抗炎参考分子)预孵育24小时。

随后在五味子肽或地塞米松始终存在下，通过用10μg/ml PMA处理24小时诱导炎症。

在孵育结束时，通过ELISA测量培养上清液中存在的VEGF的量。

平行地，通过中性红试验确定生物活跃细胞的数目。通过除以在中性红试验结束时获得的OD₅₄₀值，将对于每种条件所分析的细胞因子的量还原成活细胞的数目。

通过单因素方差分析，随后通过Tukey检验(GraphPad Prism 5.02版软件，GraphPad Software，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)验证结果的显著性。

结果

用PMA处理显著地诱导VEGF由角质形成细胞分泌，并且地塞米松抑制这种释放(-46％)；这些结果验证了该试验。

在所测试的三个浓度上，五味子肽强烈并且显著地抑制由PMA诱导的VEGF释放：分别是63％、72％和69％抑制(p＜0.001)。

$：p＜0.05相对于对照细胞

***：p＜0.001相对于受刺激的对照

C.结论

在上文描述的实验条件下，我们展示了五味子肽调节了角质形成细胞中参与诱导血管发生的因子的表达，并且因而具有抗血管发生作用。

实际上，五味子肽减少促血管发生性标记(FGF-2，VEGF)的表达并且增加抗血管发生性标记(THBS-1)的表达。

因而通过抑制血管发生(新血管形成的早期现象)，五味子肽可以限制内皮细胞的活化和新血管的生成。

5.3.对血管舒张的影响：内皮素-1的表达

内皮素是一种具有强力血管收缩活性的神经肽。它由内皮和表皮细胞(角质形成细胞)、成纤维细胞、脂肪细胞和巨噬细胞分泌。研究了五味子肽对内皮细胞产生内皮素的影响。

材料与方法

将单层培养的正常成人真皮微血管内皮细胞在0.05％和0.1％的五味子肽或16.7nM胰岛素(参考活化物)不存在(对照)或存在下孵育6小时。

在孵育时间结束时，通过ELISA定量分泌的内皮素。平行地，细胞裂解物中含有的蛋白质由Bradford方法定量。

测定的内皮素的量因而用总蛋白的量归一化，并且结果随后表述为内皮素(ng)对细胞层中总蛋白(μg)的比率。

通过单因素方差分析，随后通过Holm-Sidak检验评价所述结果的统计显著性。

结果

在所测试的两个浓度上，五味子肽显著地增加内皮细胞的内皮素产生：在0.05％，+67％(p＜0.05)；和在0.1％，+78％(p＜0.05)。

*：p＜0.05相对于对照细胞

结论

通过影响内皮素激活，五味子肽可以影响血管舒张并且因而减少皮肤发红。

Claims (6)

1.华中五味子果实肽与糖提取物在制备化妆品组合物中的用途，所述化妆品组合物用于预防和治疗炎性反应或病变，

其中，所述肽与糖提取物包括以重量计10％至50％的肽和以重量计10％至60％的糖，其中所述百分数相对于所述提取物的总重量计算；

所述肽与糖提取物通过包括以下相继步骤的方法获得：

-从五味子果实开始，通过超临界CO₂提取粗制油并且回收脱脂油饼；

-水相分散所述油饼；

-用纤维素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的酶混合物酶处理所述油饼；随后

离心、超滤并且在具有15kDa截止值的膜上透滤以消除残余蛋白质，纳米过滤并且回收所述肽提取物。

2.华中五味子果实肽与糖提取物在制备食物组合物中的用途，所述食物组合物用于预防和治疗炎性反应或病变，

其中，所述肽与糖提取物包括以重量计10％至50％的肽和以重量计10％至60％的糖，其中所述百分数相对于所述提取物的总重量计算；

所述肽与糖提取物通过包括以下相继步骤的方法获得：

-从五味子果实开始，通过超临界CO₂提取粗制油并且回收脱脂油饼；

-水相分散所述油饼；

-用纤维素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的酶混合物酶处理所述油饼；随后

离心、超滤并且在具有15kDa截止值的膜上透滤以消除残余蛋白质，纳米过滤并且回收所述肽提取物。

3.华中五味子果实肽与糖提取物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和治疗炎性反应或病变，

其中，所述肽与糖提取物包括以重量计10％至50％的肽和以重量计10％至60％的糖，其中所述百分数相对于所述提取物的总重量计算；

所述肽与糖提取物通过包括以下相继步骤的方法获得：

-从五味子果实开始，通过超临界CO₂提取粗制油并且回收脱脂油饼；

-水相分散所述油饼；

-用纤维素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的酶混合物酶处理所述油饼；随后

离心、超滤并且在具有15kDa截止值的膜上透滤以消除残余蛋白质，纳米过滤并且回收所述肽提取物。

4.华中五味子果实肽与糖提取物在制备化妆品组合物中的用途，所述化妆品组合物用于治疗和预防皮肤发红、赤-红血丝和酒渣鼻的用途，

其中，所述肽与糖提取物包括以重量计10％至50％的肽和以重量计10％至60％的糖，其中所述百分数相对于所述提取物的总重量计算；

所述肽与糖提取物通过包括以下相继步骤的方法获得：

-从五味子果实开始，通过超临界CO₂提取粗制油并且回收脱脂油饼；

-水相分散所述油饼；

-用纤维素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的酶混合物酶处理所述油饼；随后

离心、超滤并且在具有15kDa截止值的膜上透滤以消除残余蛋白质，纳米过滤并且回收所述肽提取物。

5.华中五味子果实肽与糖提取物在制备食物组合物中的用途，所述食物组合物用于治疗和预防皮肤发红、赤-红血丝和酒渣鼻的用途，

其中，所述肽与糖提取物包括以重量计10％至50％的肽和以重量计10％至60％的糖，其中所述百分数相对于所述提取物的总重量计算；

所述肽与糖提取物通过包括以下相继步骤的方法获得：

-从五味子果实开始，通过超临界CO₂提取粗制油并且回收脱脂油饼；

-水相分散所述油饼；

-用纤维素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的酶混合物酶处理所述油饼；随后

离心、超滤并且在具有15kDa截止值的膜上透滤以消除残余蛋白质，纳米过滤并且回收所述肽提取物。

6.华中五味子果实肽与糖提取物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和预防皮肤发红、赤-红血丝和/或酒渣鼻的治疗用途，

其中，所述肽与糖提取物包括以重量计10％至50％的肽和以重量计10％至60％的糖，其中所述百分数相对于所述提取物的总重量计算；

所述肽与糖提取物通过包括以下相继步骤的方法获得：

-从五味子果实开始，通过超临界CO₂提取粗制油并且回收脱脂油饼；

-水相分散所述油饼；

-用纤维素酶、蛋白酶和α-淀粉酶的酶混合物酶处理所述油饼；随后

离心、超滤并且在具有15kDa截止值的膜上透滤以消除残余蛋白质，纳米过滤并且回收所述肽提取物。