CN102775349A - 草乌甲素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种高纯度草乌甲素的制备方法：包括提取、萃取分离、柱层析分离纯化、结晶纯化步骤，经高效液相色谱法(HPLC)检测所得产品草乌甲素含量大于98%。本方法采用室温提取，不会水解草乌甲素；且硅胶柱色谱分离洗脱剂仅使用二元体系，溶剂更容易回收利用，极性大小的调节更容易趋于一致，从而大大减低了生产成本；制备方法简单，易于工业化生产，流水化程度高，产品纯度高。
Description
技术领域：
本发明属于天然药物制备领域，具体涉及高纯度草乌甲素的制备方法。
背景技术：
草乌甲素（Bulleyaconitine A, 分子式为C35H49NO10, 分子量为643.77）具有较强的镇痛抗炎等药理活性，试验证实草乌甲素属于中枢性镇痛剂，具有较强的镇痛活性且无成瘾性。目前以草乌甲素为原料的草乌甲素片剂、口服液、注射剂等剂型用于临床，主要用于治疗癌症晚期疼痛、风湿及类风湿性关节炎、肩周炎、肩臂痛、落枕、骨关节炎、良性关节痛、腰及四肢关节扭伤、挫伤、腰肌劳损及腰背痛、坐骨神经痛、肌纤维炎及肋软骨炎、带状疱疹、感冒头痛、牙痛等。
现有技术中，中国专利200910094477. X公开了制备草乌甲素的方法为酸醇提取，纯化时洗脱剂为石油醚/环己烷-丙酮-二乙胺；CN101830849 A公开了制备草乌甲素的方法为草乌的块根用碱溶液提取，纯化时洗脱剂为石油醚/汽油/正己烷-乙酸乙酯-二乙胺/三乙胺。这些方法涉及的洗脱溶剂均为三元系统，溶剂回收后极性发生改变，不容易回收再利用，成本高且方法步骤复杂。
发明内容：
针对现有技术存在的上述不足，本发明通过科学实验，旨在发明一种提取率高、毒性低且适合工业化生产的草乌甲素的制备方法。
下述的技术方案是用来实现上述的发明目的：
一种草乌甲素的制备方法，包括提取、萃取分离、柱层析分离纯化、结晶纯化步骤，所述的提取是将干燥的直缘乌头块根粉碎，适量甲醇浸润24小时，用甲醇或乙醇进行渗滤提取，甲醇或乙醇的用量为药材量的8~15倍，合并渗滤液，浓缩至膏状；所述的萃取分离是将提取步骤所得的膏用1.5%的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继用25%浓氨水调pH至9，碱液用石油醚萃取2次，继用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯萃取部分并减压回收至膏状，得粗总碱；所述的柱层析分离纯化是将萃取分离步骤所得的粗总碱，用氯仿溶解吸附于1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以50-20:1-2的石油醚:二乙胺进行梯度洗脱，收集洗脱液，以草乌甲素为对照用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主含草乌甲素的流份，回收溶剂至干，得到主要含草乌甲素部分；所述的结晶纯化是将柱层析分离步骤所得的主要含草乌甲素的部分，用丙酮或甲醇或乙醇溶解进行结晶和重结晶，得草乌甲素纯品。
上述方法中，提取步骤所用的甲醇或乙醇的量为药材料量的8-10倍。
上述方法中，柱层析分离纯化步骤中所用的硅胶为200-300目，柱层析的硅胶用量为样品量的10 - 30倍。
本发明的方法以毛茛科乌头属植物直缘乌头（Aconitum transsectum Diels.）块根为原料，采用甲醇或乙醇渗滤提取，纯化时洗脱剂为石油醚-二乙胺，此方法为二元系统，较现有技术的三元系统相比，溶剂更容易回收再利用，极性大小的调节更容易趋于一致，从而大大减低了生产成本。此方法更为简单，流水化程度更高，更适合于工业化生产。
附图说明：
图1为本发明制备方法所得到的草乌甲素的HPLC检测结果图，草乌甲素含量检测采用2010年版《中国药典》的方法；
图2为本发明制备方法所得到的草乌甲素的结构示意图。
具体实施方式：
下面结合附图，用本发明的实施例进一步对本发明作详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1：
本发明提供的草乌甲素的制备方法具体包括以下工艺步骤：
（1）提取
将干燥的直缘乌头（Aconitum transsectum Diels.）块根粉碎，适量甲醇浸润24小时，用甲醇进行渗滤提取，甲醇的用量为药材量的8~15倍，合并渗滤液，浓缩至膏状。
（2）萃取分离
将步骤（1）所得的膏用1.5%的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继用浓氨水（25%）调pH至9，碱液用石油醚萃取2次，继用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯并减压回收氯仿至膏状，得粗总碱。
（3）柱层析分离纯化
将步骤（2）所得的粗总碱，用氯仿溶解吸附于1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以石油醚：二乙胺（50-20：1-2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以草乌甲素为对照用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并主含草乌甲素的流份，回收溶剂至干，得到主要含草乌甲素部分。
（4）结晶纯化
将步骤（3）所得主要含草乌甲素的部分，用丙酮、甲醇或乙醇溶解进行结晶和重结晶，即得草乌甲素纯品。
经上述步骤所得草乌甲素纯品，按2010年版《中国药典》草乌甲素项下的条件进行检测，按面积归一化法计算，纯度大于98%。
取直缘乌头干燥块根10 kg，粉碎，适量甲醇浸润24小时，用甲醇进行渗滤提取，甲醇的用量为药材量的12倍，合并渗滤液，浓缩至膏状，用1.5%的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继用浓氨水（25%）调pH至9，碱液用石油醚萃取2次，每次5升；继用氯仿萃取3次，每次5升，合并氯仿液，减压回收至膏状，得粗总碱108 g。粗总碱用氯仿300 ml溶解并吸附于162 g 200~300目硅胶上拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以石油醚：二乙胺（50:1-20:2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以草乌甲素为对照用薄层色谱[展开剂为石油醚:丙酮:二乙胺（20:1:1）]跟踪检测，合并主含草乌甲素的流份，回收溶剂至干，得到主要含草乌甲素部分35 g，继用丙酮200 ml溶解进行结晶，再用丙酮200 ml溶解进行重结晶，即得草乌甲素纯品24.5 g。所得纯品高效液相色谱法(HPLC)检测草乌甲素含量为98.6%（见图1）。
实施例2：
取直缘乌头干燥块根10 kg，粉碎，适量甲醇浸润24小时，用甲醇进行渗滤提取，甲醇的用量为药材量的10倍，合并渗滤液，浓缩至膏状，用1.5%的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液用浓氨水（25%）调pH至9，碱液用石油醚萃取2次，每次5升；继用氯仿萃取3次，每次5升，合并氯仿液，减压回收至膏状，得粗总碱110 g。粗总碱用300 ml氯仿溶解并吸附于164 g 200~300目硅胶上拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以石油醚：二乙胺（50:1-20:2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以草乌甲素为对照用薄层色谱[展开剂为石油醚:丙酮:二乙胺（20:1:1）]跟踪检测，合并主含草乌甲素的流份，回收溶剂至干，得到主要含草乌甲素部分37 g，继用丙酮200 ml溶解进行结晶，再用丙酮200 ml溶解进行重结晶，即得草乌甲素纯品25.2 g。所得纯品高效液相色谱法(HPLC)检测草乌甲素含量为98.8%。
实施例3：
取直缘乌头干燥块根10 kg，粉碎，适量甲醇浸润24小时，用甲醇进行渗滤提取，甲醇的用量为药材量的8倍，合并渗滤液，浓缩至膏状，用1.5%的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继用浓氨水（25%）调pH至9，碱液用石油醚萃取2次，每次5升；继用氯仿萃取3次，每次5升，合并氯仿液，减压回收至膏状，得粗总碱105 g。粗总碱用氯仿300 ml溶解并吸附于160 g 200~300目硅胶上拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以石油醚：二乙胺（50:1-20:2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以草乌甲素为对照用薄层色谱[展开剂为石油醚:丙酮:二乙胺（20:1:1）]跟踪检测，合并主含草乌甲素的流份，回收溶剂至干，得到主要含草乌甲素部分34 g，继用丙酮200 ml溶解进行结晶，再用丙酮200 ml溶解进行重结晶，即得草乌甲素纯品24.8 g。所得纯品高效液相色谱法(HPLC)检测草乌甲素含量为98.3%。
本发明草乌甲素的制备方法采用室温提取，不会水解草乌甲素；且硅胶柱色谱分离洗脱剂仅使用二元体系，溶剂更容易回收利用，极性大小的调节更容易趋于一致，从而大大减低了生产成本；制备方法简单，易于工业化生产，流水化程度高，产品纯度高。
Claims (3)
1.一种草乌甲素的制备方法，包括提取、萃取分离、柱层析分离纯化、结晶纯化步骤，所述的提取是将干燥的直缘乌头块根粉碎，适量甲醇浸润24小时，用甲醇或乙醇进行渗滤提取，甲醇或乙醇的用量为药材量的8~15倍，合并渗滤液，浓缩至膏状；所述的萃取分离是将提取步骤所得的浸膏用1.5%的盐酸溶液溶解，过滤，酸水液继用25%浓氨水调pH至9，碱液用石油醚萃取2次，继用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯萃取部分并减压回收至膏状，得粗总碱；所述的柱层析分离纯化是将萃取分离步骤所得的粗总碱，用氯仿溶解吸附于1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以50-20:1-2的石油醚:二乙胺进行梯度洗脱，收集洗脱液，以草乌甲素为对照用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主含草乌甲素的流份，回收溶剂至干，得到主要含草乌甲素部分；所述的结晶纯化是将柱层析分离步骤所得的主要含草乌甲素的部分，用丙酮或甲醇或乙醇溶解进行结晶和重结晶，得草乌甲素纯品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于提取步骤所用的甲醇或乙醇的用是为药材料量的8-10倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于柱层析分离纯化步骤中所用的硅胶为200-300目，柱层析的硅胶用量为样品量的10 - 30倍。
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