CN102659904B

CN102659904B - 一种常春藤皂苷元及其盐的制备方法

Info

Publication number: CN102659904B
Application number: CN201210157754.9A
Authority: CN
Inventors: 周清; 黄娟; 叶治营; 马仁强
Original assignee: SHANGHAI FAMASI MEDICAL BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: SHANGHAI FAMASI MEDICAL BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2012-05-21
Filing date: 2012-05-21
Publication date: 2014-03-12
Anticipated expiration: 2032-05-21
Also published as: CN102659904A

Abstract

本发明公开了一种常春藤皂苷元及其盐的制备方法，取续断通过乙醇提取，提取液减压回收溶剂，再通过大孔吸附树脂纯化或正丁醇萃取纯化后得到续断总皂苷，续断总皂苷经过碱水解、酸水解后再通过结晶或大孔吸附树脂精制后得到高纯度的常春藤皂苷元，皂苷元经与碱反应最终制成常春藤皂苷元的盐。本发明的原料来源丰富、价廉，整个制备过程中避免了有毒试剂的使用，安全低毒，制备工艺简单，分离纯化效率高，大大提高了产物的纯度和产率，适于工业化生产，容易推广应用，且药理作用显著，为治疗和研究高血脂症提供了一种新的药物来源。

Description

一种常春藤皂苷元及其盐的制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种常春藤皂苷元及其盐的制备方法。

背景技术

续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C.Y. Cheng et T. M. Ai（或Dipsacus asper Wall）的干燥根，在《神农本草经》中被列为上品。

近代研究表明，续断中主要含有三萜皂苷、生物碱类、挥发油等成分。有药理实验报道，续断总皂苷及其苷元具有促进骨愈合、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、抗抑郁、降血糖等药理活性。迄今为止已从川续断药材中分离出39种三萜皂苷类化学成分，其中37个为齐墩果烷型，其中有33个母核为常春藤皂苷元，即C-23位连接羟基。

目前，从药材中分离常春藤皂苷元的工艺报道很多，如中国专利02109764.X是用川续断乙醇提取，提取液脱色、过滤,大孔树脂纯化得到总皂苷，总皂苷加入含盐酸或硫酸的乙醇溶液进行降解，放置，析晶,得常春藤皂苷元。虽然此工艺制备的常春藤皂苷元纯度高，但是药材的利用率较低，常春藤皂苷元的产率较低，成本高。中国专利200710146725.1是将干燥瘤果黑种草籽，石油醚脱脂后，用乙醇提取，提取液用不同极性的溶剂萃取，萃取液过大孔树脂纯化，纯化后进一步采用硅胶柱层析或凝胶色谱进行分离，氯仿-甲醇或甲醇-水梯度洗脱，再用氯仿-甲醇重结晶常春藤皂苷元。该工艺操作复杂，成本较高，所用溶剂毒性较大，对环境污染比较严重，且产率较低，不适合进行大规模工业生产，且常春藤皂苷元的水溶性差，生物利用度低，制成盐后水溶性较好，生物利用度，服用剂量减少。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，本发明的首要目的在于提供一种常春藤皂苷元及其盐的制备方法。

本发明的另一目的在于提供常春藤皂苷元或其盐在制备治疗高血脂药物中的应用。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种常春藤皂苷元及其盐的制备方法，包括如下步骤：

1）取续断药材，用5~15倍量浓度50~80%的乙醇提取，提取液滤过，滤液减压浓缩，加

水调整滤液体积使含固物为50~500mg/ml，放置，滤过或离心除去沉淀，得到上清液；

2）将上清液通过大孔树脂纯化或萃取的方法，得到续断总皂苷；

3）将续断总皂苷，加水溶解溶液使其浓度为10~200mg/ml，加入1~10%的NaOH，在

50~100℃条件下水解2～6小时，水解液调pH值为酸性，放置冷却，滤过，滤渣加入浓度30~80%的乙醇溶液使浓度为10~200mg/ml，加入1~10%H₂SO₄，50~100℃条件下水解2～6小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；

4）将常春藤皂苷元粗品加入含碱液的30~90%乙醇，进一步采用大孔树脂或者采用结晶的

方法进行精制，得到常春藤皂苷元纯品；

5）将常春藤皂苷元纯品与碱液反应，得到常春藤皂苷元的盐。

上述制备方法中步骤1）所述的乙醇提取为乙醇回流提取、乙醇温浸提取或乙醇渗漉提取；

所述乙醇回流提取方法可以为取续断药材，用5~15倍量50~80%的乙醇溶液，回流提取1~3次，每次1~3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩；

所述乙醇渗漉提取的方法可以为取续断药材，用5~15倍量50~80%乙醇溶液渗漉提取，渗漉流速3～10ml/kg.min，收集渗漉液，减压浓缩。

本发明步骤2）所述的大孔吸附树脂为D101、SA-1、ADS-2中的一种或多种。

步骤2）所述大孔树脂纯化的方法是指将上清液经大孔吸附树脂吸附至树脂饱和，用3~9倍柱体积的0.1%~10%碱液洗脱后用蒸馏水冲洗柱子至流出液pH值为中性，弃去洗脱液，再用3~9倍柱体积的50~90%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得到续断总皂苷；所述萃取的方法是指将上清液用0.3～2倍量的水饱和正丁醇萃取1～4次，正丁醇液再用0.3～2倍量0.1%~10%碱液萃取1～4次，正丁醇液减压浓缩，得到续断总皂苷。

步骤4)所述的精制是采用下述方法之一处理：

a、常春藤皂苷元粗品加入含0.1~10%碱液的30~90%乙醇配制成浓度为5~50mg/ml溶液，

再调节pH值到酸性，缓慢冷却至开始析出晶体，4～10℃冷藏，静置养晶，滤过，得到常春藤皂苷元纯品；

b、将常春藤皂苷元粗品加入含0.1~10%碱液的30~90%乙醇配制成浓度为2~10mg/ml溶液，

通过ADS-5或AB-8大孔吸附树脂吸附纯化，吸附后树脂采用10~60%乙醇洗脱除杂质，再用60~90%乙醇洗脱，洗脱液浓缩，滤过，水洗得到常春藤皂苷元纯品。

上述步骤中所述的碱液是NaOH水溶液、KOH水溶液、Na₂CO₃水溶液、NaHCO₃水溶液、氨水中的一种或多种的混合液。

为了提高生物利用度，可将常春藤皂苷元进一步制成盐。本发明所述的常春藤皂苷元的盐可通过以下方法制备得到：将常春藤皂苷元纯品用95%乙醇溶解，再与NaOH、KOH和氨水反应生成常春藤皂苷元的钠盐、钾盐及铵盐。

本发明是以续断为原料，经乙醇提取，提取液减压回收溶剂，放置，滤过或离心除去沉淀，再通过大孔吸附树脂纯化或萃取的方法得到续断总皂苷，分离纯化得到的续断总皂苷纯度可达到80%以上，此时得到的续断总皂苷中主要含有齐墩果烷三萜皂苷和常春藤皂苷，步骤3）中先将续断总皂苷经过碱水解，通过碱水解除去齐墩果烷，得到续断次级皂苷，续断次级皂苷再进一步酸水解，析出常春藤皂苷元，常春藤皂苷元纯度可达到90%以上，再经过进一步的精制后纯度可达95.0%～99.9%，大大提高了常春藤皂苷元的纯度和产率。

本发明制备方法中，其原料来源丰富、价廉，整个制备过程中避免了有毒试剂的使用，安全低毒，环保，制备工艺简单，分离纯化效率高，药材利用率高，适于工业化生产，且容易推广应用。

本发明提出了常春藤皂苷元及其盐在制备治疗高血脂药物中的应用。是以本发明制备得到的常春藤皂苷元或其盐为原料作为主要活性成分，加入药学可接受的载体，通过本领域公知的常用的生产方法制成药学可接受的剂型；所述的药学可接受载体包括微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、明胶、淀粉、糊精、硬脂酸镁、乳糖、葡萄糖、滑石粉、氯化钠、磷酸缓冲盐水、甘油、乙醇等；所述的剂型可以是片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、注射剂等，优选口服液和注射剂。

本发明进一步对制备得到的常春藤皂苷元或其盐的药理活性进行了验证，实验表明，常春藤皂苷元其活性与续断提取物活性相当，常春藤皂苷元的盐的生物利用度进一步提高，常春藤皂苷元或其盐均对降血脂具有明显的治疗作用，其药理作用显著，性质稳定，可用于制备降血脂的药物。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

实施例1

取续断药材1kg，用5L50%乙醇溶液，回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加水调整滤液体积使含固物约50mg/ml，静置8小时以上，滤过，除去沉淀，得到上清液；上清液液经D101大孔吸附树脂吸附至饱和，先用3倍柱体积的0.1%NaOH水溶液除去杂质，再用水冲洗至流出液pH值为中性，最后用3倍柱体积的50%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得到续断总皂苷；加水溶解使续断总皂苷浓度为10mg/ml，加入1%NaOH， 50℃条件下水解2小时，水解液调pH值到2～4，放置冷却，滤过，滤渣加30%乙醇溶液溶解使浓度为10mg/ml，加入1%H₂SO₄，50℃条件下水解2小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；常春藤皂苷元粗品加入含1%NaOH的30%乙醇溶液至5mg/ml浓度，再调节pH值到2～4，缓慢冷却至开始析出晶体、4℃冷藏、静置养晶，过滤，得到常春藤皂苷元纯品17.6g，纯度99.1%，产率1.8%。

实施例2

取续断药材1kg，用10L60%乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加水调整滤液体积使含固物约100mg/ml，静置8小时以上，滤过，除去沉淀，得到上清液；上清液液经D101大孔吸附树脂吸附至饱和，先用6倍柱体积的0.5%NaOH水溶液除去杂质，再用水冲洗至流出液pH值为中性，最后用6倍柱体积的60%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得到续断总皂苷；加水溶解使续断总皂苷浓度为25mg/ml，加入5%NaOH， 80℃条件下水解4小时，水解液调pH值到2～4，放置冷却，滤过，滤渣加50%乙醇溶液溶解使浓度为100mg/ml，加入5%H₂SO₄，80℃条件下水解4小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；常春藤皂苷元粗品加入含5%NaOH的80%乙醇溶液至20mg/ml浓度，再调节pH值到2～4，缓慢冷却至开始析出晶体、6℃冷藏、静置养晶，过滤，得到常春藤皂苷元纯品19.9g，纯度97.4%，产率2.0%。

实施例3

取续断药材1kg，用15L80%乙醇溶液，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加水调整滤液体积使含固物约250mg/ml，静置8小时以上，滤过，除去沉淀，得到上清液；上清液液经D101大孔吸附树脂吸附至饱和，先用9倍柱体积的10%NaOH水溶液除去杂质，再用水冲洗至流出液pH值为中性，最后用9倍柱体积的90%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得到续断总皂苷；加水溶解使续断总皂苷浓度为100mg/ml，加入10%NaOH， 100℃条件下水解4小时，水解液调pH值到2～4，放置冷却，滤过，滤渣加80%乙醇溶液溶解使浓度为100mg/ml，加入5%H₂SO₄，100℃条件下水解4小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；常春藤皂苷元粗品加入含10%NaOH的90%乙醇溶液至50mg/ml浓度，再调节pH值到2～4，缓慢冷却至开始析出晶体、8℃冷藏、静置养晶，过滤，得到常春藤皂苷元纯品20.8g，纯度98.9%，产率2.1%。

实施例4

取续断药材1kg，用10L60%乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加水调整滤液体积使含固物约100mg/ml，静置8小时以上，滤过，除去沉淀，得到上清液；上清液液经D101大孔吸附树脂吸附至饱和，先用6倍柱体积的0.5%NaOH水溶液除去杂质，再用水冲洗至流出液pH值为中性，最后用6倍柱体积的80%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得到续断总皂苷；加水溶解使续断总皂苷浓度为20mg/ml，加入5%KOH， 80℃条件下水解4小时，水解液调pH值到2～4，放置冷却，滤过，滤渣加50%乙醇溶液溶解使浓度为100mg/ml，加入5%H₂SO₄，80℃条件下水解4小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；常春藤皂苷元粗品加入含5%NaOH的80%乙醇溶液至20mg/ml浓度，再调节pH值到2～4，缓慢冷却至开始析出晶体、10℃冷藏、静置养晶，过滤，得到常春藤皂苷元纯品21.2g，纯度97.1%，产率2.1%。

实施例5

取续断药材1kg，用10L60%乙醇溶液，回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加水调整滤液体积使含固物约250mg/ml，静置8小时以上，滤过，除去沉淀，得到上清液；上清液用0.5倍量的水饱和正丁醇萃取3次，正丁醇液再用1倍量1%NaOH水溶液萃取3次，正丁醇液减压浓缩，得到续断总皂苷；加水溶解使续断总皂苷浓度为25mg/ml，加入3%NaOH， 100℃条件下水解4小时，水解液调pH值到2～4，放置冷却，滤过，滤渣加70%乙醇溶液溶解使浓度为15mg/ml，加入5%H₂SO₄，80℃条件下水解4小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；常春藤皂苷元粗品加入含1%NaOH的80%乙醇溶液至20mg/ml浓度，再调节pH值到2～4，缓慢冷却至开始析出晶体、7℃冷藏、静置养晶，过滤，得到常春藤皂苷元纯品20.1g，纯度99.3%，产率2.0%。

实施例6

取续断药材1kg，用7L80%乙醇溶液渗漉提取，渗漉流速5ml/（kg·min），收集渗漉液，减压浓缩，调整浓缩液使含固物为200mg/ml，滤过，除去沉淀，上清液用0.5倍量的水饱和正丁醇萃取3次，正丁醇液再用1倍量1%NaOH水溶液萃取3次，正丁醇液减压浓缩，得到续断总皂苷，加水溶解使续断总皂苷浓度为25mg/ml，加入3%NaOH，100℃条件下水解4小时，水解液调pH值到2～4，放置冷却，滤过，滤渣加70%乙醇溶液使浓度为15mg/ml，加入5%H₂SO₄， 100℃条件下回流水解4小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；常春藤皂苷元粗品加入含1%NaOH的80%乙醇溶液至20mg/ml浓度，再调节pH值到2～4，缓慢冷却至开始析出晶体，6℃冷藏、静置养晶，过滤，得到常春藤皂苷元纯品约19.7g，纯度98.7%，产率约2.0%。

实施例7

按实施例5制得常春藤皂苷元粗品；常春藤皂苷元粗品加入含0.2%NaOH的50%乙醇液配制成5mg/ml溶液，过ADS-5大孔吸附树脂吸附纯化，用30%乙醇洗脱除去杂质，再用60%乙醇洗脱，减压浓缩，滤过，水洗得到常春藤皂苷元纯品约19.2g，纯度97.6%，产率1.9%。

实施例8

取常春藤皂苷元纯品10g，用95%乙醇400ml制成混悬液，取1gNaOH用适量95%乙醇溶解，在搅拌条件下，滴加入上述混悬液中，反应5h，浓缩回收乙醇，干燥，得10.421g常春藤皂苷元钠盐。

实施例9

取常春藤皂苷元纯品10g，用95%乙醇400ml制成混悬液，取1.5gKOH用适量95%乙醇溶解，在搅拌条件下，滴加入上述混悬液中，反应5h，浓缩回收乙醇，干燥，得10.783g常春藤皂苷元钾盐。

实施例10

取常春藤皂苷元纯品10g，用95%乙醇400ml制成混悬液，在搅拌条件下，滴加氨水1ml，反应5h，浓缩回收乙醇，干燥，得10.513g常春藤皂苷元铵盐。

对比例1

参照专利02109764.X中实施例二，取续断药材1kg，用70%的乙醇提取三次，第一次用70%乙醇4000ml，回流提取3h，第二次用70%乙醇3000ml回流提取2h，第三次用70%乙醇3000ml回流提取1.5h，合并提取液，用2%药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇，再用去离子水稀释到1500ml，在D101大孔吸附树脂6cm×100cm上纯化，先用去离子水3000ml，再用70%乙醇4000ml洗脱，收集70%乙醇洗脱液，加压回收乙醇，浓缩液干燥得到总皂苷；总皂苷加入2N的硫酸乙醇溶液，乙醇浓度45%，在100℃水解3h，滤液不溶物用水洗去多余酸，再用85%乙醇溶解，加3%活性炭脱色，过滤，回收乙醇至原体积的一半，放置，析晶，过滤，干燥，得到常春藤皂苷元9.2g，纯度为95.8%，产率0.91%。

对比例2

参照专利申请号为00910067016.3中的实施例二，取续断药材1kg，用6倍量60%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液，加入20g氧化钙，搅拌，放置过液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水至2000ml，通过处理过的大孔树脂柱，先用含PH值为13的30%乙醇洗4倍柱体积，再水洗至中性，最后用60%乙醇洗脱，收集60%洗脱液，并减压浓缩至干；用2N盐酸的含45%乙醇溶液10倍量水解3h，滤过，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，再用90%乙醇加热至沸，加75g的药用活性炭，趁热滤过，滤液减压浓缩回收、干燥，得续断总苷元，含量为91.4%。取续断总苷元，再用95%乙醇加热溶解，重结晶3次，得常春藤皂苷元4.2g，纯度96.3%，产率0.43%。

常春藤皂苷元钠盐的结构确认：

所得的常春藤皂苷元钠盐为白色结晶，易溶于甲醇、丙酮，能溶于水。

UV：λMeOH Maxnm：209。

IR：υKBr Maxcm-1：3453，3307（(醇羟基-OH的伸缩振动引起)；2583，3009；2943，2913，2882，2851(甲基的对称与反对称伸缩振动)；1698(υC=O)；1467（羧基中的C=O呼吸振动引起)；1435，1388，1378(甲基对称变角振动)；1303(羧基)1268，1327，1232(六碳环)；1163，1143，1207，1289；1037，1012(υC-OH)；988，972，960，813(双键)；779，730。

1^HNMR(DMSO-d6)δ0.53(3H，-CH3)；0.71(3H，-CH3)；0.82～0.87(10H，-CH3，-CH2-)；0.97，1.68(21H，-CH<，-CH3，-CH2- )；1.81(2H，-CH2-)；0.91(1H，-CH2-)；2.74(1H，-CH<)；3.07， 3.32(2H，-CH2-)；3.43(1H，>CH-)；4.14，37(2H，-OH)；5.16(1H，-CH<)；12.01(1H，-COOH)。

13^CNMR(DMSO-d6) δ:37.94(C-1)，26.54(C-2)，70.43(C-3)，41.35(C-4)，46.49(C-5)，17.54(C-6)，33.38(C-7)，38.84(C-8)，47.12(C-9)，36.30(C-10)，22.94(C-11)，121.57(C-12)，143.81(C-13)，41.83(C-14)，27.23(C-15)，22.64(C-16)，45.34(C-17)，40.81(C-18)，45.69(C-19)，30.38(C-20)，32.12(C-21)，32.02(C-22)，64.64(C-23)，12.60(C-24)， 15.50(C-25)，16.76(C-26)，25.66(C-27)，178.55(C-28)，32.87(C-29)，23.38(C-30)。

EI-MSm/z(%)：471(M-H+：100)，425(M-H+：7.5)，405(M-H+：-0.5)，393(M-H+：100)。质谱中分子离子为 m/z471，表明化合物的分子量为478，m/z425为m/z471失去-COOH峰，m/z393为m/z471失去-COOH，-CH₂OH的离子碎片。以上数据分析结合文献对照，确定从得到的成分为常春藤皂苷元钠。

药效学研究

1、试验材料

1.1 实验动物

SD大鼠，体重200±20g，雄性，由广东省医学实验动物中心提供(许可证号：SCXK(粤)2003-2002，粤监证字2008A006)。动物饲养条件：温度（23℃士2℃）。购回后适应性饲养3d后进行实验；

1.2 药品与试剂

受试药物：常春藤皂苷元(HED)，由广州博济医药生物股份技术有限公司制作提供，批号：20101031。常春藤皂苷元钠盐，由广州博济医药生物股份技术有限公司制作提供，批号：20101115。

对照药：血脂康胶囊：北京北大维信生物科技有限公司，生产批号：20091205.

TC、TG、HDL-C、LDL-C试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号：20091120。

实验方法

取SD大鼠80只，喂养基础饲料一周后，禁食不禁水12小时，选取动物并在称量体重后由眼睛球后静脉丛采血测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的正常值，据TC水平随机分为7组，包括正常对照组、模型组(灌服蒸馏水)、空白对照组(灌服蒸馏水)、血脂康组(灌服血脂康120mg/kg)、常春藤皂苷元低剂量组(灌服常春藤皂苷元50mg /kg)、常春藤皂苷元高剂量组(灌服常春藤皂苷元150mg /kg)，常春藤皂苷元钠盐低剂量组(灌服常春藤皂苷元钠盐40mg /kg)、常春藤皂苷元钠盐高剂量组(灌服常春藤皂苷元钠盐120mg /kg)，其中正常对照组喂以基础饲料，其余7组动物喂以6周高脂饲料，6周后除模型组动物外，全部的大鼠改为喂饲基础饲料，并开始每天灌胃给药一次，连续4周，第4周给药末30min，采眼球后静脉丛血，分离血清供测定TC、TG、LDL-C、HDL-C的含量。

实验结果

模型组与空白对照组大鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量均显著高于正常对照组，而血清HDL-C的水平显著低于正常对照组 ( P < 0.01 )；与空白对照组相比，常春藤皂苷元的两个个剂量组均显著的降低大鼠血清中TC、TG、 LDL-C水平 ( P < 0.01)，抑制率分别为22.25%、42.15%；61.18%、70.59%；26.63%、44.56%；常春藤皂苷元小剂量对HDL-C有升高的趋势，但无显著性差异，大剂量均能显著升高HDL-C水平 ( P < 0.01，) ( 见表1. )，升高率为10.44%、28.70%，常春藤皂苷元钠盐的两个剂量组同样能显著降低大鼠血清中TC、TG、 LDL-C水平，均能显著升高HDL-C水平 ( P < 0.01，)。所有上述作用与血脂康相仿或稍强。

表1. 常春藤皂苷元对大鼠血清脂质水平的影响 (n =10,

±s)

与正常对照组相比 ^△△P<0.01,；与空白对照组相比 *P<0.05,**P<0.01,；与模型组相比 *P<0.05,**P<0.01

结果表明常春藤皂苷元两个剂量组(50g/kg， 150g/kg)能显著降低高血脂大鼠的血清TC、TG、 LDL-C水平，对高血脂有明显的治疗作用。制成钠盐后给药剂量降为原来的一半一样具有同等强度的降血脂作用。试验结果说明制成钠盐后生物利用度提高，口服剂量降低至原来的一半即有常春藤皂苷元的降血脂的效果。

Claims

1.一种常春藤皂苷元及其盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）取续断药材，用5~15倍量浓度50~80%的乙醇提取，提取液滤过，滤液减压浓缩，加水调整滤液体积使含固物为50~500mg/ml，放置，滤过或离心除去沉淀，得到上清液；

3）将续断总皂苷，加水溶液溶解使其浓度为10~200mg/ml，加入1~10%NaOH，在50~100℃条件下水解2～6小时，水解液调pH值为酸性，放置冷却，滤过，滤渣加入浓度30~80%的乙醇溶液使浓度为10~200mg/ml，加入1~10%H₂SO₄，50~100℃条件下水解2～6小时，水解液放冷，析出常春藤皂苷元粗品；

4）将常春藤皂苷元粗品加入含碱液的30~90%乙醇，进一步采用大孔树脂或者采用结晶的方法进行精制，得到常春藤皂苷元纯品；

5）任选地将常春藤皂苷元纯品与碱液反应，得到常春藤皂苷元的盐;

其中，步骤2）所述大孔树脂纯化方法是指将上清液经大孔吸附树脂吸附至树脂饱和，用3~9倍柱体积的0.1%~10%碱液洗脱后用蒸馏水冲洗柱子至流出液pH值为中性，弃去洗脱液，再用3~9倍柱体积的50~90%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得到续断总皂苷；所述萃取方法是指将上清液用0.3～2倍量的水饱和正丁醇萃取1～4次，正丁醇液再用0.3～2倍量0.1%~10%碱液萃取1～4次，正丁醇液减压浓缩，得到续断总皂苷;

步骤2）所述的大孔吸附树脂为D101、SA-1、ADS-2中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的常春藤皂苷元及其盐的制备方法，其特征在于：步骤1）所述的乙醇提取为乙醇回流提取、乙醇温浸提取或乙醇渗漉提取。

3.根据权利要求2所述的常春藤皂苷元及其盐的制备方法，其特征在于：所述乙醇回流提取是指取续断药材，用5~15倍量50~80%的乙醇溶液，回流提取1~3次，每次1~3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩；所述乙醇渗漉提取是指取续断药材，用5~15倍量50~80%乙醇溶液渗漉提取，渗漉流速3～10ml/kg.min，收集渗漉液，减压浓缩。

4.根据权利要求1所述的常春藤皂苷元及其盐的制备方法，其特征在于：步骤4）所述的精制是采用下述方法之一处理：

a、常春藤皂苷元粗品加入含0.1~10%NaOH的30~90%乙醇配制成浓度为5~50mg/ml溶液，

b、常春藤皂苷元粗品加入含0.1~10%NaOH的30~90%乙醇配制成浓度为2~10mg/ml溶液，

5.根据权利要求1-4任一项所述的常春藤皂苷元及其盐的制备方法，其特征在于：所述的碱液是NaOH水溶液、KOH水溶液、Na₂CO₃水溶液、NaHCO₃水溶液、氨水中的一种或多种的混合液。

6.根据权利要求1所述的常春藤皂苷元及其盐的制备方法，其特征在于：所述的常春藤皂苷元的盐为常春藤皂苷元钾盐、钠盐或铵盐。