CN106554384B - 一种从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法，可包括步骤：1)丙酮沉淀，用3～5倍量低分子醇溶解娑罗子浸膏，在混悬状态下加入等体积丙酮，15～20℃静置沉淀，获取下层黄棕色沉淀物，减压浓缩即得七叶皂苷提取物；2)大孔吸附树脂纯化，用1～2倍量纯水将提取物完全溶解，以5g提取物/100mL树脂的上样量、0.1～0.3BV/h的流速通过大孔吸附树脂AB‑8进行吸附，乙醇洗脱，控制洗脱速度为0.5～1BV/h，收集七叶皂苷流分；3)丙酮洗涤脱色，减压浓缩七叶皂苷流分，所得粉末用丙酮洗涤脱色，真空干燥即得类白色七叶皂苷产品。本发明可实现从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷，具有工艺操作简便、高效、低能耗的优势，满足大规模工业提取、纯化七叶皂苷的生产需求。

Description

一种从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法

技术领域

本发明属于天然药物化学技术领域，涉及中药有效成分提取领域，具体涉及娑罗子中七叶皂苷的纯化方法。

背景技术

娑罗子为七叶树科Hippocastanaceae中华七叶树Aesculus chinensis Bunge.、浙江七叶树Aesculus chinensis Bunge var.chekiangensis(Hu et Fang)Fang或天师栗Aesculus wilsonii Rehd.的干燥成熟种子。娑罗子具有疏肝理气、胃止痛之功效，并已临床成药，用于治疗肝胃气滞、胸腹胀闷、胃脘疼痛等病症。

七叶皂苷是娑罗子提出物中重要的有效成分，属于五环三萜皂苷类化合物，其中七叶皂苷A-D的含量约占七叶总皂苷含量的90％。现代药理研究表明，七叶总皂苷具有显著的抗肿瘤、抗炎消渗、抗血管生成等作用，临床多以其钠盐形式用于治疗术后水肿、静脉炎、痔疮等疾病，现已开发出七叶皂苷钠冻干粉针剂、复方七叶皂苷钠凝胶、七叶皂苷钠片等剂型。

目前，国内关于七叶皂苷的提纯方法主要有：

(1)郭秀春等探讨了加速溶剂提取法(ASE)提取娑罗子中七叶皂苷的可行性。其所提供的方法为：利用快速溶剂萃取仪，以70％甲醇作为提取溶剂，100℃的提取温度，静态提取7min，循环提取1次(郭秀春,陈军辉,郑立等.加速溶剂提取法提取娑罗子中的七叶皂苷,《天然产物研究与开发》,2007,9(4):683-687.)。该方法具有耗时短、消耗溶剂少、提取效率高、操作过程自动化等优点，但因存在一次投料少、设备成本高、运行能耗高等缺点，无法满足工业级、规模化的生产需求，仅适用于实验室分析测试。

(2)高小宁等研究了娑罗子中七叶皂苷的提取工艺，其优化的提出方法为：95％乙醇浸提，浸提温度70℃，浸提时间3h，浸提溶液体积与样品质量比为8:1，浸提次数3次，活性炭脱色，氯仿萃取，水洗烘干。该方法浸提温度高致使乙醇挥发量大、皂苷混合物易水解，同时也存在萃取用氯仿毒性大、提取物中脂肪油含量高等问题。

(3)专利CN102309529A提供了娑罗子中七叶皂苷的微波提取方法。该专利所提供的提取工艺为：20～95％乙醇浸泡10～120min，500～3000w的微波辐照射1～30min，提取温度保持在25～75℃，微波照射后滤出提取液，减压浓缩干燥。该技术具有工艺参数变化幅度大，实施操作不可控，辐射设备要求高等缺点，因此无法满足工业化、可控性的生产要求。

为了充分有效提取、纯化娑罗子中的七叶皂苷，实现药物资源的产业化应用，本发明设计优化了一种娑罗子中七叶皂苷的纯化方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法。该方法有机溶剂用量少，提取、纯化环境友好，操作简便，纯化收率高，尽可能的满足了大规模工业提取、纯化七叶皂苷的生产需求。本发明所述方法通过乙醇提取、丙酮沉淀、大孔吸附树脂纯化、丙酮洗涤脱色、真空干燥等步骤，以简便、高效、低能耗的优势获得较高纯度的七叶皂苷产品。

具体而言，本发明给出的从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法，用于实现娑罗子浸膏中七叶皂苷的分离纯化，其包括下述操作步骤：

1)丙酮沉淀

用3～5倍量低分子醇溶解娑罗子浸膏，在混悬状态下加入等体积丙酮，15～20℃静置沉淀，获取下层黄棕色沉淀物，减压浓缩即得七叶皂苷提取物；

2)大孔吸附树脂纯化

用1～2倍量纯水将所述七叶皂苷提取物完全溶解，以5g提取物/100mL树脂的上样量、0.1～0.3BV/h的流速通过大孔吸附树脂AB-8进行吸附，先用2～3BV的10～20％乙醇洗脱除杂，再用3～5BV的50～70％乙醇洗脱并收集七叶皂苷流分，控制洗脱速度为0.5～1BV/h；

3)丙酮洗涤脱色

减压浓缩上述七叶皂苷流分，将所得粉末分散于铺有滤纸的布氏漏斗上，用丙酮洗涤脱色，放置挥干，重复2～3次，真空干燥即得类白色七叶皂苷产品。

在上述步骤的基础上，本发明还可包括娑罗子浸膏制备步骤。优选地，本发明提供一种制备娑罗子浸膏的具体实施方式。即所述娑罗子浸膏由下述方法制备：将干燥的娑罗子原料粉碎过筛，筛网目数为40目，用6～10倍量65％乙醇浸提，25～30℃超声提取3次，超声提取频率为25KHz，超声提取时间为每次0.5h，合并提取液并离心，减压浓缩获得娑罗子提取浸膏。

首先，本发明的药物原料是干燥的娑罗子，其可以是中华七叶树、浙江七叶树、天师栗的干燥成熟种子。将所需的娑罗子用粉碎设备粉碎成一定的细度，原料过40目筛，作为制备娑罗子浸膏的材料。

本发明所述方法的丙酮沉淀步骤中，所述低分子醇选用甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或其混合溶剂。作为一优选的实施方式，选用甲醇溶解娑罗子浸膏。为了加速娑罗子浸膏在低分子醇中的溶解，进一步，可采用超声辅助娑罗子浸膏溶解，使得娑罗子浸膏在低分子醇中呈混悬状态。

在丙酮沉淀步骤中，本发明优选的静置沉淀时间为2～3h。

在丙酮洗涤脱色步骤中，所述真空干燥的干燥温度为75℃，时间为5～7h。

作为优选的实施方式之一，所述减压浓缩为水浴真空减压浓缩，真空度小于等于0.095Mpa，水浴加热温度为50℃。

为了进一步明确本发明所述方法，使其更具操作性和实用性。在从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法中，所涉及的百分含量均是指体积含量，如65％乙醇，指的是100mL水溶液中含有65mL乙醇；所述倍量均是指体积质量比，如提取浸膏用3～5倍量低分子醇溶解，指的是用3～5mL的低分子醇溶解1g提取浸膏。

与现有技术相比，本发明所述方法至少具有下述的有益效果或优点：

通过一系列的正交试验，最终摸索出本发明所涉及的从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法。本发明采用65％乙醇浸提、辅助超声提取，浸膏得率为25.6％，易离心分层，条件温和；丙酮沉淀法七叶总皂苷得率为12.7％，操作简便，易于控制；大孔吸附树脂AB-8纯化，10～20％乙醇洗脱可除去大部分杂质，50～70％乙醇洗脱液中七叶皂苷得率为6.5％；丙酮洗涤脱色、真空干燥获得类白色七叶皂苷，品产纯度达85％以上。

在以下实施例中进一步描述本发明，而不以任何形式旨在限制如权利要求所表明的本发明的保护范围。

具体实施方式

实施例一

(1)娑罗子浸膏的制备

采收中华七叶树成熟的娑罗子，将原料娑罗子干燥，粉碎过40目筛网，备用。称取500g粉状娑罗子原料，加入8倍量65％乙醇(乙醇体积用量为4L)浸提过夜，并不断搅拌，在26℃条件下超声辅助提取3次，超声提取频率为25KHz，搅拌使处于混悬状态，超声提取时间为每次0.5h，合并提取液并离心。水浴真空减压浓缩，真空度小于等于0.095Mpa，水浴加热温度为50℃，获得娑罗子提取浸膏128.3g，得率25.6％。

(2)丙酮沉淀

向上述娑罗子提取浸膏中加入0.5L甲醇，超声辅助娑罗子浸膏溶解，使得浸膏在甲醇中完全溶解，再加入0.5L丙酮，搅拌使其处于混悬状态，于20℃环境下，静置沉淀3h，获取下层黄棕色沉淀物，减压浓缩(减压浓缩条件同上)，获得七叶皂苷提取物63.6g，得率12.7％。

(3)大孔吸附树脂纯化

用少量水(1～2倍量)完全溶解上述七叶皂苷提取物，加入到含有1.2L大孔吸附树脂AB-8的层析柱中吸附，以0.2BV/h(4mL/min)的流速进行吸附，先用2BV(2.4L)10％乙醇洗脱除杂，再用4BV(48L)60％乙醇洗脱并收集七叶皂苷流分，控制流速为0.5BV/h(10mL/min)，减压浓缩(减压浓缩条件同上)，获得七叶皂苷粗品32.5g，得率6.5％。

(4)丙酮洗涤脱色

上述七叶皂苷粗品散于铺有滤纸的布氏漏斗上，用少量丙酮洗涤脱色，放置挥干，重复3次，75℃真空干燥5h，得类白色七叶皂苷产品27.9g，纯度为85.8％。

实施例二

(1)娑罗子浸膏的制备

娑罗子浸膏的制备同实施例一的相关描述，所不同的是，所用的娑罗子来自于浙江七叶树。称取1000g粉状娑罗子原料，加入8倍量65％乙醇(乙醇体积用量为8L)浸提过夜，并不断搅拌，在30℃条件下超声辅助提取3次，超声提取频率为25KHz，搅拌使处于混悬状态，超声提取时间为每次0.5h，合并提取液并离心。减压浓缩，获得娑罗子提取浸膏254.7g，得率25.5％。

(2)丙酮沉淀

将4倍量(1L)甲醇或乙醇加入254.7g娑罗子提取浸膏中，并使浸膏完全溶解，再加入1L丙酮，搅拌使处于混悬状态，于16℃环境下，静置沉淀3h，获取下层黄棕色沉淀物，减压浓缩，获得七叶皂苷提取物126.6g，得率12.6％。

(3)大孔吸附树脂纯化

上述七叶皂苷提取物用少量水(1～2倍量)完全溶解，加入到含有2.5L大孔吸附树脂AB-8的层析柱中吸附，以0.1BV/h(4.1mL/min)的流速进行吸附，先用3BV(7.5L)12％乙醇洗脱除杂，再用4BV(10L)70％乙醇洗脱并收集七叶皂苷流分，控制流速为0.5BV/h(20.8mL/min)，减压浓缩，获得七叶皂苷粗品62.8g，得率6.2％。

(4)丙酮洗涤脱色

上述七叶皂苷粗品散于铺有滤纸的布氏漏斗上，用少量丙酮洗涤脱色，放置挥干，重复3次，75℃真空干燥5h，得类白色七叶皂苷产品52.9g，纯度为85.2％。

实施例三

(1)娑罗子浸膏的制备

娑罗子浸膏的制备同实施例一的相关描述，所不同的是，所用的娑罗子来自于天师栗。称取2000g粉状娑罗子原料，加入6倍量65％乙醇(乙醇体积用量为12L)浸提过夜，并不断搅拌，在28℃条件下超声辅助提取3次，超声提取频率为25KHz，搅拌使处于混悬状态，超声提取时间为每次0.5h，合并提取液并离心。减压浓缩，获得娑罗子提取浸膏502.4g，得率25.1％。

(2)丙酮沉淀

将3倍量(1.5L)甲醇加入502.4g娑罗子提取浸膏中，并使浸膏完全溶解，再加入1.5L丙酮，搅拌使处于混悬状态，于20℃环境下，静置沉淀2h，获取下层黄棕色沉淀物，减压浓缩，获得七叶皂苷提取物253.3g，得率12.6％。

(3)大孔吸附树脂纯化

上述七叶皂苷提取物用少量水(1～2倍量)完全溶解，加入到含有5L大孔吸附树脂AB-8的层析柱中吸附，以0.1BV/h(8.3mL/min)的流速进行吸附，先用3BV(15L)10％乙醇洗脱除杂，再用4BV(20L)65％乙醇洗脱并收集七叶皂苷流分，控制流速为0.5BV/h(41.7mL/min)，减压浓缩，获得七叶皂苷粗品129.5g，得率6.5％。

(4)丙酮洗涤脱色

上述七叶皂苷粗品散于铺有滤纸的布氏漏斗上，用少量丙酮洗涤脱色，放置挥干，重复3次，75℃真空干燥5h，得类白色七叶皂苷产品110.2g，纯度为85.1％。

本发明所述方法通过65％乙醇提取、丙酮沉淀、大孔吸附树脂纯化、丙酮洗涤脱色、真空干燥等步骤，以简便、高效、低能耗的优势获得较高纯度的七叶皂苷产品。上述实施例给出的仅为优选的纯化方式，除上述所给实施例外，还可以有其它的可优选的方式，比如，在丙酮沉淀步骤中，所述低分子醇还可选用乙醇、正丙醇、异丙醇或其混合溶剂。

上面结合实施例对本发明做了进一步的叙述，但本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。

Claims (3)

1.一种从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法，用于实现娑罗子浸膏中七叶皂苷的分离纯化，其特征在于包括下述步骤：

1)丙酮沉淀

用3～5倍量低分子醇溶解娑罗子浸膏，采用超声辅助娑罗子浸膏溶解，使得娑罗子浸膏在低分子醇中呈混悬状态下，加入等体积丙酮，15～20℃静置沉淀，静置沉淀时间为2～3h，获取下层黄棕色沉淀物，减压浓缩即得七叶皂苷提取物；

所述娑罗子浸膏由下述方法制备：将干燥的娑罗子原料粉碎过筛，筛网目数为40目，用6～10倍量65％乙醇浸提，25～30℃超声提取3次，超声提取频率为25KHz，超声提取时间为每次0.5h，合并提取液并离心，减压浓缩获得娑罗子提取浸膏；

所述低分子醇选用甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或其混合溶剂；

2)大孔吸附树脂纯化

用1～2倍量纯水将所述七叶皂苷提取物完全溶解，以5g提取物/100mL树脂的上样量、0.1～0.3BV/h的流速通过大孔吸附树脂AB-8进行吸附，先用2～3BV的10～20％乙醇洗脱除杂，再用3～5BV的50～70％乙醇洗脱并收集七叶皂苷流分，控制洗脱速度为0.5～1BV/h；

3)丙酮洗涤脱色

减压浓缩上述七叶皂苷流分，所得粉末用丙酮洗涤脱色，重复2～3次，真空干燥即得类白色七叶皂苷产品；

所述真空干燥的干燥温度为75℃，时间为5～7h；

所述减压浓缩为水浴真空减压浓缩，真空度小于等于0.095Mpa，水浴加热温度为50℃。

2.根据权利要求1所述的从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法，其特征在于，在丙酮沉淀步骤中，所述低分子醇选用甲醇。

3.根据权利要求1或2所述的从娑罗子浸膏中纯化七叶皂苷的方法，其特征在于，所述娑罗子来源于中华七叶树、浙江七叶树、天师栗的干燥成熟种子。