CN101818187A

CN101818187A - 从植物原料中提取熊果酸的方法

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Publication number: CN101818187A
Application number: CN 201010167895
Authority: CN
Inventors: 李开泉; 邹盛勤; 叶文峰
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-05-06
Filing date: 2010-05-06
Publication date: 2010-09-01

Abstract

本发明一种从植物原料中提取熊果酸的方法，按如下工艺步骤进行：1)将植物原料进行预发酵处理，制得提取物；2)提取物用乙醇作溶剂进行提取，过滤得提取液，回收乙醇溶剂，得浸膏；3)浸膏用水沉降洗涤处理后加除杂剂进行除杂处理；过滤，然后再用乙醇溶解后加入脱色剂进行脱色处理，得提取物粗品；从植物原料中提取熊果酸的方法，采用单一溶剂作萃取剂，对不同原料采用相同提取工艺，工艺简单，提取得率高，产量大，易于实现工业化和批量生产，并且产品的安全性好。

Description

从植物原料中提取熊果酸的方法

技术领域本发明涉及提取熊果酸的方法，特别是一种从植物原料中提取熊果酸的方法。

背景技术熊果酸是广泛存在于天然植物中的五环三萜类化合物，又名乌索酸，具有广泛的生物活性，毒性小，副作用少，在医学上有明显的安定与降温作用，对肝癌细胞培养具有非常显著的抑制率，实验证明熊果酸具有降低转氨酶的作用，因而被用作药品生产的原料，熊果酸在植物中分布虽然广泛，但其含量低，理论上一般含量在1克/公斤左右，提取分离难度大，而且每一种植物原料中分离提取熊果酸的工艺条件亦不尽相同，如中国专利号为ZL03108037.5《一种从植物中提取分离熊果酸的方法》其是以泡桐叶为原料，以甲醇，丙酮类溶剂为提取剂进行萃取，最后用甲醇-乙醇混合溶剂作重结晶剂，提取熊果酸；中国专利申请号为200710113984.4《从山楂中提取熊果酸的方法》是将山楂以乙醇作溶剂进行提取熊果酸，这两种提取熊果酸的方法，其原料不同，提取工艺和使用提取溶剂亦不同，同时在提取时原料中有机类杂质难以除去，其提取熊果酸得率低，提取成本高，不同原料要使用不同的提取溶剂和提取工艺，工艺复杂，产量小，溶剂消耗大，产品安全性差，因而难以工业化批量生产。

发明内容本发明的目的就是要提供一种从植物原料中提取熊果酸的方法，采用单一溶剂作萃取剂，对不同原料采用相同提取工艺，工艺简单，提取得率高，产量大，易于实现工业化和批量生产，并且产品的安全性好。

本发明的技术方案从植物原料中提取熊果酸的方法，按如下工艺步骤进行：

1)将植物原料进行预发酵处理；制得提取物；

2)提取物用乙醇作溶剂进行提取，过滤得提取液，回收乙醇溶剂，得浸膏；

3)浸膏用水沉降洗涤处理后加除杂剂进行除杂处理；过滤，然后再用乙醇溶解后加入脱色剂进行脱色处理，得提取物粗品；

4)将提取物粗品在酸性条件下经凝析、纯化、烘干处理制得熊果酸。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，优选按如下工艺步骤进行：

1)在植物原料中加入占植物原料重量1-10％的复合酶制剂，于室温下预发酵处理24-72小时，过滤去除酶解液得提取物；

2)将提取物干燥后，用提取物重量7-10倍浓度为50-98％的乙醇进行提取，过滤得提取液，再减压回收溶剂乙醇得浸膏；

3)将浸膏用水沉降洗涤后，加入浓度为1-10％一价或二价的金属氢氧化物和/或它们的混合溶液，作除杂剂进行除杂处理；将除杂处理后的溶液过滤沉淀；沉淀物再用乙醇溶解形成溶解液，调整溶解液的PH为9-12，然后加入脱色剂活性炭或白陶土或硅藻土进行脱色处理，时间20-120分钟，在除杂和脱色处理过程中控制溶液温度在室温至沸腾下进行，最后过滤，得滤液提取物粗品；

4)将滤液提取物粗品的PH调至1-2之间后进行结晶，凝析分离，纯化，精制，烘干制得熊果酸。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，步骤1)所述的复合酶制剂为固体或液体纤维素酶或与其它酶的混合，其用量为所述植物原料重量的2-8％。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，步骤3)所述除杂剂为浓度为2-8％的氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙和/或它们混合溶液。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，所述脱色剂为粉末或颗粒状的活性炭或白陶土或硅藻土；其用量为每升脱色溶液用1-10克脱色剂；时间30-100分钟。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，步骤2)所述提取物用浓度为95％的乙醇作溶剂在加热状态下进行回流提取2-3次，每次1-2小时。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，步骤3)浸膏用水沉降洗涤2-3次后，加除杂剂除杂处理2-3次。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，所用植物原料先经干燥粉碎后，再用温水湿润处理后进行提取。

本发明从植物原料中提取熊果酸的方法，所述的植物原料为枇杷叶，毛叶泡桐叶，女贞叶，丁香叶，柿叶，鸭脚树叶，迷迭香叶，山楂叶，夏枯草任意一种或几种。

所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，所用乙醇溶剂为工业用或食品级。

本发明生产工艺是将植物原料先进行干燥并粉碎后用温水湿润后加复合酶制剂在室温下(5-25℃)发酵预处理24小时以上，也可不加入酶制剂进行发酵，过滤去除酶解液，干燥后加倍量乙醇在加热或不加热的情况下进行提取，过滤除渣得提取液，将提取液减压回收乙醇得浸膏，浸膏经水洗沉降洗涤后，加除杂剂除杂处理2-3次；过滤用乙醇进行溶解，调整PH值，脱色处理过滤得熊果酸粗品，凝析分离，纯化即制得熊果酸精品。

本发明以植物原料采用醇提凝析法提取熊果酸，先对原料树叶材进行发酵预处理，加入复合酶制剂作发酵预处理剂，这样一方面使熊果酸与植物细胞壁脱离，从而加速熊果酸从原料中充分释放出来，又能使熊果酸苷转化为苷元；另一方面能将一些脂类，类脂类等杂质水

解转化为小分子水溶性物质，以利除去；经酶解处理后的原料用乙醇提取后，再加一价或二价金属氢氧化物作除杂剂，进一步除去脂类，类脂类，黄酮类叶绿素等杂质，利于熊果酸的富集和纯化，大大提高了熊果酸得率，降低了生产成本，简化了操作程序，实现多种原料均能使用本发明工艺方法进行提取。

将上述植物原料采用本发明方法提取出的产品为无色针状结晶，不溶于水和石油醚，易溶于甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯，乙醚等有机溶剂。经检测其分子式为C₃₀H₄₈O₃，分子量456.8与熊果酸对照品混合熔点不下降。其各项技术指标经国家标准样品核心实验室、中国海洋大学等多家单位进行紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、质谱(MS)、核磁共振谱(NMR)等定性检测说明本发明的产品纯度高、得率高(见表1)。

具体实施方式：

实施例1将干燥的泡桐叶10公斤粉碎，装入提取容器中，加温水湿润后，进行发酵预处理72小时，加泡桐叶重量7倍量浓度55％工业乙醇加热提取2次，每次2小时，过滤得提取液。将提取液减压回收乙醇得浸膏，经水沉降洗涤3次后，加除杂剂3％氢氧化钠溶液在室温20℃下处理2-3次，过滤，沉淀，沉淀物用工业乙醇溶解，调整溶液的PH值至9-10，每升需脱色溶液加8克固体粉末状活性炭煮沸脱色60分钟以上，过滤，得滤液提取物粗品再调整其溶液PH值至1-2，经凝析分离、纯化精制、烘干得纯度99.82％熊果酸13.6克。

实施例2将干燥的枇杷叶10公斤粉碎装入提取容器中，用温水湿润后，加入0.2公斤的酶制剂液体纤维酶，在室温20℃酶解处理48小时后，滤去酶解液得提取物，将提取物干燥后，加枇杷叶重量10倍量(100KG)浓度95％乙醇不加热提取3次，每次2小时，过滤得提取液。将提取液减压回收乙醇得浸膏，浸膏经水沉降洗涤2次后，加8％氢氧化钙溶液加热至沸腾，进行除杂处理2-3次，过滤，沉淀；沉淀物用乙醇溶解，调PH值至10-12，每升脱色溶液加2克颗粒状活性炭煮沸即温度80℃左右，脱色60分钟，过滤，得滤液提取物粗品再调溶液PH值至1-2，经结晶、凝析分离、纯化精制、烘干得纯度99.8％的熊果酸12.8克。

实施例3将干燥的迷迭香叶10公斤粉碎，装入提取容器中，加温水湿润后，加入0.5公斤的酶制剂固体纤维酶和其它酶，在室温5℃酶解进行发酵处理60小时，滤去酶解液得提取物；将提取物干燥后，加迷迭香叶重量8倍量的浓度80％乙醇加热提取3次，每次1小时，过滤得提取液。将提取液减压回收乙醇得浸膏，浸膏经水沉降洗涤2次后，加除杂剂5％氢氧化钾和氢氧化钠混合溶液加热至沸腾除杂处理2-3次，过滤，沉淀；沉淀物用乙醇溶解，调整溶液的PH值至9-10，每升需脱色溶液加5克固体颗粒状硅藻土煮沸脱色30分钟；过滤，得滤液提取物粗品再调整其溶液PH值至1-2，经凝析分离、纯化精制、烘干得熊果酸15.5克。

实施例4将干燥的山楂叶10公斤粉碎装入提取容器中，用温水湿润后，加入1公斤的酶制剂液体纤维酶和植物提取酶，在室温20℃酶解处理70小时后，滤去酶解液得提取物；将提取物干燥后，加山楂叶重量10倍量浓度95％食用乙醇加热沸腾，提取2次每次1小时，过滤得提取液。将提取液减压回收乙醇得浸膏，经水沉降洗涤3次后，加8％氢氧化钠溶液加热至沸腾除杂2-3次，过滤，沉淀；沉淀物用乙醇溶解，调PH值至10-12，每升需脱色溶液加10克颗粒状白陶土煮沸即温度80℃以下，脱色60分钟，过滤，得滤液提取物粗品再调整其溶液PH值至1-2，经凝析分离、纯化精制、烘干得纯度99.0％的熊果酸13.2克。

表1本发明所得产品有关技术指标参数

项目	指标	检测机构
项目	指标	检测机构	紫外光谱(UV)	λmax(MeOH)＝205nm	国家标准样品核心实验室
红外光谱(IR)	KBr_maxυcm^-1：3396，3249，3178(υOH)；2972，2947，2925，2868(υCH₃，CH₂)；1711(υC＝O)，1689，1658(υC＝C)；1453，1386(CH₃，CH₂)，1226，1194，1145，1091，1042，997，973，807，661；	中国海洋大学	紫外光谱(UV)	λmax(MeOH)＝205nm	国家标准样品核心实验室
红外光谱(IR)		中国海洋大学	质谱(MS)	HRESI-MS：m/z calced for C₃₀H₄₇O₃[M-H]^-455.3525；found 455.3541.：456(M+)，441(M-CH₃)，438(M-H₂O)，423(M-CH₃-H₂O)，411(M-COOH)，410(M-H-COOH)；D、E环离子a：248(a，100)，203(a-COOH)，189(a-CH₂COOH)，133；A、B环离子b：208(b)，207(b-H)，190(b-H₂O)，189(b-H₂O-H)；	中国海洋大学

项目	指标	检测机构
项目	指标	检测机构	核磁共振谱(NMR)	¹HNMR(DMSO-d₆，600MHz)δ：11.93(s，1H，COOH)，5.13(t-like，J＝3.2，3.7Hz，1H，H-12)，4.28(d，J＝5.0Hz，1H，OH-3)，3.02-2.98(m，1H，H-3)，2.11(d，J＝11.5Hz，1H，H-18)，1.92(td，J＝13.3，4.1Hz，1H，CH₂-16-2)，1.88-1.78(m，3H，CH₂-11，CH₂-15-2)，1.60-1.42(m，11H，CH₂-16-1，CH₂-1，CH₂-22，CH-9，CH₂-7-2，CH₂-21-2，CH₂-6-2，CH₂-2)，1.34-1.23(m，4H，CH-19，CH₂-7-1，CH₂-21-1，CH₂-6-1)，1.04(s，3H，CH₃-27)，1.01-0.98(m，1H，CH₂-15-1)，0.94-0.95(m，1H，CH-20)，0.91(d，J＝5.9Hz，3H，CH₃-30)，0.90(s，3H，CH₃-23)，0.87(s，3H，CH₃-24)，0.81(d，J＝6.4Hz，3H，CH₃-29)，0.75(s，3H，CH₃-26)，0.68(s，3H，CH₃-25)，0.68-0.66(m，1H，CH-5)¹³CNMR(DMSO-d₆，150MHz)δ：178.2(C-28)，138.2(C-13)，124.6(C-12)，76.8(C-3)，54.8(C-5)，52.4(C-18)，47.0(C-9)，46.8(C-17)，41.6(C-14)，38.5(C-19)，38.5(C-20)，38.4(C-8)，38.2(C-1)，38.2(C-4)，36.5(C-10)，36.3(C-22)，32.7(C-7)，30.2(C-21)，28.3(C-23)，27.5(C-15)，27.0(C-2)，23.8(C-16)，23.3(C-27)，22.8(C-11)，21.1(C-30)，18.0(C-6)，17.0(C-29)，16.9(C-26)，16.1(C-25)，15.2(C-24)。	中国海洋大学
含量	99.82％	国家标准样品核心实验室、国家生物医学分析中心等	核磁共振谱(NMR)		中国海洋大学

Claims

1.一种从植物原料中提取熊果酸的方法，按如下工艺步骤进行：

1)将植物原料进行预发酵处理，制得提取物；

4)将提取物粗品在酸性条件下经凝析、结晶、纯化、烘干处理制得熊果酸。

2.依据权利要求1所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是按如下工艺步骤进行：

3)将浸膏用水沉降洗涤后，加入浓度为1-10％一价或二价的金属氢氧化物和/或它们的混合溶液，作除杂剂进行除杂处理，经除杂处理后的溶液过滤，沉淀；沉淀物再用乙醇溶解形成溶解液调整溶解液的PH为9-12，然后加入脱色剂活性炭或白陶土或硅藻土进行脱色处理，时间20-120分；在除杂和脱色处理过程中控制溶液温度在室温至沸腾下进行，最后过滤，得滤液提取物粗品；

3.依据权利要求2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是步骤1)所述的复合酶制剂为固体或液体纤维素酶或与其它酶的混合，其用量为所述植物原料重量的2-8％。

4.依据权利要求1或2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是：步骤3)所述除杂剂为浓度2-8％的氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙和/或它们的混合溶液。

5.依据权利要求1或2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是所述脱色剂为粉末或颗粒状的活性炭或白陶土或硅藻土；其用量为每升脱色溶液1-10克脱色剂；时间30-100分钟。

6.依据权利要求1或2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是步骤2)所述提取物用浓度为95％的乙醇作溶剂在加热状态下进行回流提取2-3次，每次1-2小时。

7.依据权利要求1或2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是步骤3)浸膏用水沉降洗涤2-3次后，加除杂剂除杂处理2-3次。

8.依据权利要求1或2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是所用植物原料先经干燥粉碎，再用温水湿润处理后进行提取。

9.依据权利要求1或2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是所述的植物原料为枇杷叶，泡桐叶，女贞叶，丁香叶，柿叶，鸭脚树叶，迷迭香叶，山楂叶，夏枯草中任意一种或几种。

10.依据权利要求1或2所述的从植物原料中提取熊果酸的方法，其特征是所述的乙醇溶剂为工业用或食品级。