CN103923159A - 一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，将枇杷叶粉碎过筛后与乙醇、司盘-65或司盘-85中的任意一种混合均匀超声波提取，提取液通过微滤和超滤，浓缩干燥得粗品熊果酸；粗品熊果酸粉碎，洗脱，脱色，过滤，浓缩沉淀，抽滤得类白色沉淀；再加入乙醇加热至沸腾，放冷至结晶完全；母液继续浓缩，同法操作得二次结晶，合并两次结晶真空干燥，得精制熊果酸。可以达到最大限度的分离、纯化作用，有效除杂，熊果酸的纯度提高，提取率提高25％以上；其生产工序简化，生产成本降低，技术合理、操作安全、环境友好，利于产业化应用。

Description

一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法

技术领域

本发明涉及天然植物提取物制备领域，尤其是从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法。

背景技术

熊果酸(ursolic acid，简称UA)又名乌索酸、乌苏酸，分子式为C₃₀H₄₈O₃，为乌苏烷型三萜，属ɑ-香树脂醇型五环三萜类化合物，在植物界分布较广，以枇杷叶、山楂叶为主。熊果酸为白色针状结晶，熔点227-228℃，易溶于二氧六环、吡啶，溶于甲醇、乙醇、丁酮，略溶于丙酮，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水和石油醚。

熊果酸具有广泛的生物学活性，现代药学研究表明，熊果酸具有消炎、增强免疫、抑制血小板凝集、降血糖、抗肿瘤、降血脂、抗病毒、保肝等临床药理作用，是治疗急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎的理想药物，且毒性低，副作用少。

目前国内外已经开展了对枇杷叶中熊果酸进行分离纯化的初步研究，但是现有方法步骤相对比较繁琐,提取率低，成本过高，不仅延长了生产时间,增加了生产设备，而且大大增加了生产成本，不利于产业化应用。

发明内容

为克服上述弊端，本发明所要解决的技术问题是，提供一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，能从枇杷叶中制备高纯度熊果酸，具有技术合理、操作安全、工艺简便、经济可行、环境友好等特点。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，其特征在于，该提取方法包括以下步骤：

(1)取鲜的或晒干处理过的枇杷叶粉碎，过10～12目筛；再将粉碎后的枇杷叶与乙醇、司盘-65或司盘-85中的任意一种混合均匀，司盘-65或司盘-85的加入量为粉碎后的枇杷叶与乙醇总重量的0.1～0.8％，然后进行超声波提取,用8～10倍95％乙醇溶液提取2次,提取温度为70～80℃；滤去药渣后,合并滤液,过O.1～1.0μm孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为1000Da～5000Da的膜超滤，得超滤液；

(2)将超滤液浓缩至溶液相对密度为1.1～1.2g/ml，进行真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,温度50℃～60℃,得纯度为70％～85％的粗品熊果酸；

(3)将粗品熊果酸粉碎,加入2倍重量的硅胶混匀,装入硅胶柱的顶端,硅胶柱中的硅胶装填重量为粗品熊果酸的6倍,用无水乙醇洗脱,自检识浓缩液有沉淀起开始收集,至沉淀极少时停止收集,合并此段乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液转入搅拌罐中,在不断搅拌下加入溶液量0.5％的活性碳脱色,搅拌10min后,板框过滤,得滤液；将滤液真空减压浓缩至无醇味,控制真空度≥0.07Mpa,温度50℃～60℃；静置沉淀4h；沉淀完全以后,抽滤,得类白色沉淀；再加入沉淀重量15倍浓度80％～85％乙醇,加热至沸腾,在结晶罐中逐渐放冷至结晶完全；分取结晶,母液继续浓缩,同法操作得二次结晶,合并第1次与第2次结晶,送真空干燥,控制真空度≥0.08Mpa,温度50℃～60℃,得纯度为95％～99％的精制熊果酸。

采用本发明的技术方案，在特定步骤加入了特定量的司盘-65或司盘-85，能降低枇杷叶药材与乙醇溶剂之间的表面张力，使润湿角变小，促进药材表面的润湿性，增加药材细胞的渗透性，使溶剂最大限度地溶解或增溶药材中有效成分，进而显著增大枇杷叶中熊果酸提取的收率。同时，在溶液中加入司盘-65或司盘-85后，能有效提高溶液的澄清度，便于过滤，在微孔滤膜中不会堵塞膜孔，便于后续工作的进行。

本发明中采用了微孔滤膜和超滤膜的分子筛过滤组合，有效去除大分子物质，提高了有效成分熊果酸的提取率。在传统的从枇杷叶中提取熊果酸的生产方法，大多采用了脱色、上柱吸附、解析等过程，生产过程繁琐，使用微孔滤膜和超滤膜后，减少了这些繁琐的生产过程，极大的缩短了生产周期。

故而，本发明的有益效果在于：(1)通过该方法，可以达到最大限度的分离、纯化作用，有效除杂，枇杷叶提取物中熊果酸的纯度提高，提取率提高25％以上，使有效成分得到富集，药效得以提高；(2)采用本发明方法，提高除杂效率，减少多次吸附、解析的过程，简化生产工序，大大降低了生产成本，其技术合理、操作安全、环境友好，利于产业化应用。

下面将结合具体实施方式对本发明做进一步说明。

具体实施方式

实施例1：本发明所述从枇杷叶中提取熊果酸的方法，包括以下步骤：

(1)取鲜的或晒干处理过的枇杷叶2Kg，粉碎，过10～12目筛；再将粉碎后的枇杷叶与乙醇、司盘-85混合均匀进行超声波提取,司盘-85的加入量为粉碎后的枇杷叶与乙醇的总重量的0.1％。提取时用8～10倍95％乙醇溶液提取2次,提取温度为70～80℃；滤去药渣后,合并滤液,过O.7μm孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为4000Da的超滤膜进行超滤，得超滤液；

(2)将超滤液浓缩至溶液相对密度为1.1～1.2g/ml，进行真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,温度50℃～60℃,得粗品熊果酸24.4g，纯度为76.8％；

(3)将粗品熊果酸粉碎,加入2倍重量的硅胶混匀,装入硅胶柱的顶端,硅胶柱中的硅胶装填重量为粗品熊果酸的6倍,用无水乙醇洗脱,自检识浓缩液有沉淀起开始收集,至沉淀极少时停止收集,合并此段乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液转入搅拌罐中,在不断搅拌下加入溶液量0.5％的活性碳脱色,搅拌10min后,板框过滤,得滤液；将滤液真空减压浓缩至无醇味,控制真空度≥0.07Mpa,温度50℃～60℃；静置沉淀4h；沉淀完全以后,抽滤,得类白色沉淀；再加入沉淀重量15倍浓度80％～85％乙醇,加热至沸腾,在结晶罐中逐渐放冷至结晶完全；分取结晶,母液继续浓缩,同法操作得二次结晶,合并第1次与第2次结晶,送真空干燥,控制真空度≥0.08Mpa,温度50℃～60℃,得纯度为98.1％的精制熊果酸17.231g。

实施例2～7：与实施例1的不同之处在于司盘-85或司盘-65用量不同，微孔滤膜孔径和超滤膜粒径的设置不同，产物纯度和提取率有差异，详见下表。其余均相同，不再赘述。

各实施例的含量检测结果表

对照组的生产方法:

(1)取鲜的或晒干处理过的枇杷叶2Kg，粉碎，过10～12目筛；再将粉碎后的枇杷叶进行回流提取,提取时用8～10倍95％乙醇溶液提取2次,提取温度为70～80℃；滤去药渣后,合并滤液,将滤液真空减压浓缩至料液比1︰0.7～1.2,控制真空度≥0.07Mpa,温度50℃～60℃,然后静置沉淀5h以上；沉淀完全以后,将混合液沉降离心,滤液再过管式离心,收集沉降离心渣与管式离心渣,合并,得沉淀；

(2)将沉淀投入搅拌罐中,在不断搅拌下加入沉淀重量10～14倍浓度为80～85％的乙醇溶液,将溶解后的混合液过管式离心机,得滤液；将滤液通过型号为D900弱碱性阴离子交换树脂层析柱,待滤液全部通过树脂柱以后,先用80％～85％乙醇洗至液出液呈色极浅,此部分乙醇液送回收乙醇；然后用浓度80～85％乙醇加4％稀盐酸解吸,至流出液颜色由深变极浅；再用浓度80～85％乙醇加4％氢氧化钠洗脱,至流出液颜色变浅,合并酸性乙醇与碱性乙醇解液,得解吸液；

(3)将解吸液PH调至6.0～7.0后真空减压浓缩,控制真空度≥0.07Mpa,温度50℃～60℃,然后静置沉淀5h以上；沉淀完全以后,将混合液抽滤,得沉淀；用水将沉淀洗涤至中性；真空干燥,控制真空度≥0.08Mpa,温度50℃～60℃,得粗品熊果酸24.6g,经HPLC法检测，含量为61％。

(4)将粗品熊果酸经过反复重结晶，得精品熊果酸15.1g，含量为90％。

本发明描述的上述实现方式仅是为了清楚的说明本发明的技术方案，而不能理解为对本发明作出任何限制。本发明在本技术领域具有公知的多种替代或者变形，在不脱离本发明实质意义的前提下，均落入本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，其特征在于，该提取方法包括以下步骤：

(1)取鲜的或晒干处理过的枇杷叶粉碎，过10～12目筛；再将粉碎后的枇杷叶与乙醇、司盘-65或司盘-85中的任意一种混合均匀，司盘-65或司盘-85的加入量为粉碎后的枇杷叶与乙醇总重量的0.1～0.8％，然后进行超声波提取,用8～10倍95％乙醇溶液提取2次,提取温度为70～80℃；滤去药渣后,合并滤液,过O.1～1.0μm孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为1000Da～5000Da的膜超滤，得超滤液；

(2)将超滤液浓缩至溶液相对密度为1.1～1.2g/ml，进行真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,温度50℃～60℃,得纯度为70％～85％的粗品熊果酸；

(3)将粗品熊果酸粉碎,加入2倍重量的硅胶混匀,装入硅胶柱的顶端,硅胶柱中的硅胶装填重量为粗品熊果酸的6倍,用无水乙醇洗脱,自检识浓缩液有沉淀起开始收集,至沉淀极少时停止收集,合并此段乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液转入搅拌罐中,在不断搅拌下加入溶液量0.5％的活性碳脱色,搅拌10min后,板框过滤,得滤液；将滤液真空减压浓缩至无醇味,控制真空度≥0.07Mpa,温度50℃～60℃；静置沉淀4h；沉淀完全以后,抽滤,得类白色沉淀；再加入沉淀重量15倍浓度80％～85％乙醇,加热至沸腾,在结晶罐中逐渐放冷至结晶完全；分取结晶,母液继续浓缩,同法操作得二次结晶,合并第1次与第2次结晶,送真空干燥,控制真空度≥0.08Mpa,温度50℃～60℃,得纯度为95％～99％的精制熊果酸。