CN102763881A - 一种刺五加参麦饮料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种刺五加参麦饮料,它是由以重量份计的刺五加2500-3500份、麦冬1800-2200份、红参1000-1100份及五味子450-600份为原料制得的水提物,辅以乙酰磺胺酸钾18-27份、木糖醇4500-5500份、乙基麦芽酚6-8份、柠檬酸60-80份和山梨酸钾47-55份制得的。按上述原料组份制得的刺五加参麦饮料增强人体免疫功能与缓解体力疲劳的功效显著、且无任何副作用,口感好、产品稳定性佳。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法,具体涉及一种增强免疫力、缓解体力疲劳的刺五加参麦饮料及其制备方法。
背景技术
随着现代生活节奏的加快,社会竞争的加剧,很多人因为工作、学习的压力等原因引起持续性疲劳,机体长期处于亚健康状态。WHO的一项全球性调查表明,真正处于健康状态的人仅占有5%,患有疾病的人占20%,而75%的人处于亚健康状态。有调查显示,我国目前只有15%的人处于健康状态,15%的人处于疾病状态,有70%人处于亚健康状态。研究表明,经济较发达地区处于亚健康状态的人口在总人口中所占比例明显高于其他地区。其中北京为75.31%,上海为97.49%,广东为73.41%,陕西为94.9%,河南为62.83%。据调查上海、无锡、深圳等城市亚健康状态调查结果表明2000人中60%的人有失眠、多梦、不易入睡或白天打瞌睡,62%腰痛—背酸病,58%干活就累,48%脾气暴躁或焦虑。“白领阶层”是亚健康主要人群,而企业管理者中有85%以上的人处于亚健康状态。另有研究表明,女性亚健康状态发生率明显高于男性,31~50岁时亚健康状态的高发年龄,性格内向者亚健康状态的发生率明显高于性格外向者,教员、学员、医务工作者、编辑、工程师、技术员等从事脑力劳动较多的人员发生率明显高于其他人员。
总之,免疫力低下及疲劳已成为社会问题,严重影响了人们生活、工作及身体健康,而且二者常常同时发生。
抗疲劳保健食品在保健食品市场中占据着相当大的份额。以地区数据为例:上海市商业信息中心的最新统计显示,2009年第一季度,七大类保健品占据了上海市保健品市场75%的份额,其中抗疲劳类产品以23.2%的市场份额位列第一,美容类和增强抵抗力以14.4%和13.3%分别列第二和第三位。据中国保健协会市场工作委员会数据,截止到2010底,我国共批准“抗疲劳”、“缓解体力疲劳“保健食品1260种,其中国产保健食品1214种,进口保健食品46种。
目前市场上有少数具有增强人体的免疫功能,很少有缓解人体疲劳中药组合物或功能性饮料,缺乏同时具有增强人体免疫功能和缓解人体疲劳的中药组合物或功能性饮料。市场上有一些中药组合物有一定增强人体免疫功能或缓解人体疲劳的功效,但不作为产品的主要功效,主用于抗肿瘤、抗病毒感染、抗衰老、降血糖、治疗乙肝等各种病的辅助治疗,提高免疫功能或缓解人体疲劳作用而起到辅助治疗的作用。从另一个角度来说,作用越多,对于不需要相关治疗目的的服用者其副作用就越大,因此长期服用这些多用途的中成药,副作用较大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种口感好、稳定性较长的刺五加参麦饮料,该饮料具有同时增强人体免疫功能与缓解体力疲劳的功效、且无副作用。
本发明的另一目的在于提供上述刺五加参麦饮料的制备方法,该方法操作简便、对有效成分提取完全,便于工业规模生产。
本发明目的通过如下技术措施实现:
一种刺五加参麦饮料,其特征在于:它是由以重量份计的刺五加2500-3500份、麦冬1800-2200份、红参1000-1100份及五味子450-600份为原料制得的水提物,辅以乙酰磺胺酸钾18-27份、木糖醇4500-5500份、乙基麦芽酚6-8份、柠檬酸60-80份和山梨酸钾47-55份制得的。
进一步优选地,上述刺五加3000份、麦冬2000份、红参1000份及五味子500份,乙酰磺胺酸钾25份、木糖醇5000份、乙基麦芽酚7.5份、柠檬酸75份和山梨酸钾50份。
按上述原料组份制得的刺五加参麦饮料增强人体免疫功能与缓解体力疲劳的功效显著、且无任何副作用,口感好、产品稳定性佳。
进一步,为了使红参中的有效成分被更完全地提取出来,优选地,上述红参的水提物是采用水为提取溶剂连续逆流超声提取、过滤制得的;由于溶剂水在提取过程中是连续逆流状态,被提取物与溶剂水中所含有效成分的浓度差较大,这样提取更快、有效成分被提取得更完全。
为了在提取过程中逆流的溶剂水更接近零浓度、加大与被提取物的浓度差,使红参中有效成分实现更快速、更完全地被提取出来,同时还有效保证提取物的生物活性,本发明对红参的连续逆流超声提取中,溶剂水流量为300~500ml/min,进一步优选为350~450ml/min,最优为380~420ml/min;超声频率为40kHZ;提取时间为30~60分钟,进一步优选为35~50分钟,最优为40~45分钟;提取温度为60~90℃,进一步优选为65~80℃,最优为70~75℃。
采用上述连续逆流超声提取红参中有效成分的方法,其有效成分的转化率可高达93~96%。
将上述连续逆流超声提取后的红参提取液,进行超滤处理,采用的超滤膜的截留分子量为5000~90000(进一步优选选择截留分子量为20000-30000的超滤膜);所述超滤过程中进液口压强为0.1~0.5Mpa、出液口压强比进液口压力低0.25~0.5kpa,红参提取液温度为15~50℃,所述超滤过程周期性流量波动的流速波动差为0.6~1.2米/秒,间歇通入惰性气体为0.5小时~1.5小时通气一次,每次2分钟。
连续逆流超声提取所得的红参提取液经上述超滤处理,其人参总皂苷的纯度可达80-83%。
上述刺五加、麦冬及五味子的水提物优选按如下方法提取制得:
取上述量的麦冬、刺五加、五味子粉碎成粗粉、过筛、混合,加10重量倍的纯化水先浸泡2小时,再加热提取,保持微沸状态1.5小时,用100目不锈钢筛过滤、收集滤液;向药渣中再次加10重量倍量的纯化水、加热提取、保持微沸1.5小时,用100目不锈钢筛过滤,收集滤液,合并两次滤液,得总滤液,将总滤液用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得精滤液。
上述刺五加参麦饮料的制备方法,按如下步骤进行:
1.红参有效成分提取:按用量配比取红参粉碎成粗粉,将红参粉末置于连续逆流超声提取仪中,以水为溶剂对红参连续逆流超声提取,所述溶剂水的流量为380~420ml/min、超声频率为40kHZ、提取时间为40~45分钟;提取温度为70~75℃;将连续逆流超声提取后的红参提取液,采用截留分子量为20000-30000的醋酸纤维素膜进行超滤处理,所述超滤过程中进液口压强为0.1~0.5Mpa、出液口压强比进液口压力低0.25~0.5kpa,红参提取液温度控制在28~35℃,所述超滤过程周期性流量波动的流速波动差为0.6~1.2米/秒,间歇通入惰性气体为0.5小时~1.5小时通气一次,每次2分钟;得到超滤液。
2.刺五加、麦冬及五味子有效成分提取:
按用量配比称取麦冬、刺五加、五味子粉碎成粗粉、过筛、混合,加10重量倍的纯化水先浸泡2小时,再加热提取,保持微沸状态1.5小时,用100目不锈钢筛过滤、收集滤液;向药渣中再次加10重量倍量的纯化水、加热提取、保持微沸1.5小时,用100目不锈钢筛过滤,收集滤液,合并两次滤液,得总滤液,将总滤液用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得精滤液。
3.将步骤1所得超滤液和步骤2所得精滤液搅拌、混合,得A液,备用;
4.按用量配比称取山梨酸钾、乙酰磺胺酸钾、木糖醇、乙基麦芽酚,分别加纯化水使其刚好溶解,成为饱和溶液,煮沸30min,用尼龙布进行过滤,备用。
5.将上述山梨酸钾液、乙酰磺胺酸钾液、木糖醇液、乙基麦芽酚液加入到A液中,混合、搅拌均匀,然后加入柠檬酸调节pH为4.0-6.0,并于4-5℃冷藏静置24小时,用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得饮料原液。
本发明具有如下有益效果:
本发明刺五加参麦饮料增强免疫力、缓解疲劳的功效显著,且无任何副作用。本发明刺五加参麦饮料中有效成分以分子或微粒状态分散在介质中,分散度大、吸收快,可迅速的发挥功效;同时易于分剂量、携带方便、服用口感好,相对于其他增强免疫力或缓解疲劳的保健品更能被广大消费者所接受。本发明刺五加参麦饮料性状稳定、澄明度高,保质期长、货架期可达18个月,生物利用度高、预防治疗各类免疫力低下,易疲劳的人群疗效好且无毒副作用。本发明刺五加参麦饮料的制备方法对有效成分提取效率高、有效成分的转化率高,尤其是对人参总皂苷的提取效率可高达93-96%,纯化处理后有效成分含量高、纯度高,进一步加强了本发明保健饮料的功效,提高了其稳定性与口感;同时本发明刺五加参麦饮料的制备方法生产周期也大大缩短,实现了高效生产。
本产品规格可为250ml/罐,每天3次,每次1罐,服用方便,并且经过毒理安全性试验、动物功能试验以及稳定性试验证明,该产品食用安全、增强免疫力和缓解体力疲劳功能明确、质量稳定。总之,本发明为众免疫力低下者及易疲劳者提供了一个安全、有效、可靠、价廉的保健食品,和其他同类保健食品相比,具有综合优势。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述,有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明,不能理解为对本发明保护范围的限制,该领域的技术人员可以根据上述本发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
一种刺五加参麦饮料,它是由以重量份计的刺五加3000g、麦冬2000g、红参1000g及五味子500g为原料制得的水提物,辅以乙酰磺胺酸钾25g、木糖醇5000g、乙基麦芽酚7.5g、柠檬酸75g和山梨酸钾50g制得的;具体按如下步骤进行:
1.红参有效成分提取:按用量配比取红参粉碎成粗粉,将红参粉末置于连续逆流超声提取仪中,以水为溶剂对红参连续逆流超声提取,所述溶剂水的流量为380~420ml/min、超声频率为40kHZ、提取时间为40~45分钟;提取温度为70~75℃;将连续逆流超声提取后的红参提取液,采用截留分子量为20000-30000的醋酸纤维素膜进行超滤处理,所述超滤过程中进液口压强为0.1~0.5Mpa、出液口压强比进液口压力低0.25~0.5kpa,红参提取液温度控制在28~35℃,所述超滤过程周期性流量波动的流速波动差为0.6~1.2米/秒,间歇通入惰性气体为0.5小时~1.5小时通气一次,每次2分钟;得到超滤液。
2.刺五加、麦冬及五味子有效成分提取:
按用量配比称取麦冬、刺五加、五味子粉碎成粗粉、过筛、混合,加10重量倍的纯化水先浸泡2小时,再加热提取,保持微沸状态1.5小时,用100目不锈钢筛过滤、收集滤液;向药渣中再次加10重量倍量的纯化水、加热提取、保持微沸1.5小时,用100目不锈钢筛过滤,收集滤液,合并两次滤液,得总滤液,将总滤液用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得精滤液。
3.将步骤1所得超滤液和步骤2所得精滤液搅拌、混合、得A液,备用;
4.按用量配比称取山梨酸钾、乙酰磺胺酸钾、木糖醇、乙基麦芽酚,分别加纯化水刚好溶解,成为饱和溶液,煮沸30min,用尼龙布进行过滤,备用。
5.将上述山梨酸钾液、乙酰磺胺酸钾液、木糖醇液、乙基麦芽酚液加入到A液中,混合、搅拌均匀,然后加入柠檬酸调节pH为4.0-6.0,并于4-5℃冷藏静置24小时,用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得饮料原液,加纯净水定容成25000ml。共制成1000灌(250ml/罐)。
以上制得的刺五加参麦饮料增强免疫力、缓解疲劳的功效显著,生物利用度高,且无任何副作用,同时其性状稳定、澄明度高,保质期长、货架期达18个月。以上制备方法对有效成分提取效率高、有效成分的转化率高,对人参总皂苷的提取效率高达95-96%,纯化处理后有效成分含量高、纯度高,人参总皂苷的纯度可达83%;具体效果参见实验验证内容。
实施例2-6:按如下原料配比及工艺参数,其余与实施例1同。
以上制得的刺五加参麦饮料增强免疫力、缓解疲劳的功效显著,生物利用度高,且无任何副作用,同时其性状稳定、澄明度高,保质期长。以上制备方法对有效成分提取效率高、有效成分的转化率高,对红参有效成分的提取率高达93-96%,纯化处理后有效成分含量高、纯度高,人参总皂苷的纯度可达80-83%。
为了更好的理解本发明,以下通过本发明药物药效学试验来进一步阐述发明药物的有益效果,下面试验旨在进一步说明药物的作用,而非对本发明的限制。
一.实施例1刺五加参麦饮料制备工艺与常规生产工艺对比:
实施例1刺五加参麦饮料制备工艺与常规的制备方法(煎煮过滤法,水提醇沉法,醇提水沉法)进行对比(所加辅料与新工艺一样),考察其生产周期和成品中的每1g饮料中所含总皂苷的百分浓度,其结果如表1:
表1
由上表可知,刺五加参麦饮料按照新工艺进行制备,不仅大大缩短了生产周期,而且总皂苷百分浓度相对于其他几种常规方法也较高,是一种值得推广的新技术,新工艺。
二.稳定性试验:
(1)加速试验
试验方法:将实施例1制得的饮料采用上市包装,置加速实验箱中,一定时间取样,考察其感官,微生物指标,含量等。
温度:30±2℃,RH65±5%,试验日期:2010.6.8~2010.12.8,考察时间:0,1,2,3,6月,考察结果见表2:
表2
结论:本饮料加速试验6个月感官指标与微生物指标均以及人参总皂苷的含量均无明显变化,均符合生产用质量标准草案的相关要求。
(1)长期试验
试验方法:将实施例1制得的饮料采用上市包装,置于长期实验箱中,一定时间取样,考察其感官,微生物指标,以及人参总皂苷的含量:
温度:25±2℃,RH60±10%,试验日期:2010.6.8~2011.12.8,考察时间:长期0月,3月,6月,9月,12月,18月,考察结果见表3:
表3
结论:保健饮料长期18个月感官指标与微生物指标以及含量均无显著变化,均符合生产用。
(1)稳定性试验结论:
结论:加速试验表明:本饮料加速试验6个月,感官指标,微生物指标,含量均无明显变化,质量稳定,均符合生产用质量标准草案的各项相关规定。根据加速试验结果初步确定本品的有效期为2年。长期试验表明:保健饮料长期18个月,感官指标,微生物指标,含量均无明显变化,质量稳定,均符合生产用质量标准草案的各项相关规定。故本品保质期较长,质量稳定。
三.味道、口感市场调查
本发明饮料是经过严格辅料配伍,经过多次调味形成的刺五加参麦饮料。具有口感极好,味道甜美,能被广大消费者所接受,具有良好的市场前景。
方法:随机选择18岁以上的人群1000人,进行味道品尝,现将品尝结果统计如表4:
表4
非常好 | 较好 | 一般 | 差 |
794 | 127 | 75 | 4 |
根据味道品尝市场调查可知,本品易于受广大消费者所接受,具不完全统计,觉得味道非常好的占整个人群的79.4%,觉得味道比较好的占12.7%,觉得一般的占7.5%,觉得味道差的只占0.4%。故本品具有口感好,易受广大消费群体所接受的特点。
四.刺五加参麦饮料增强免疫力作用的动物试验报告
1.材料和方法
1.1样品:实施例1制得的刺五加参麦饮料,250ml/罐,人拟用剂量为每日750ml/60kg.BW,所送样品为棕色固体粉末。1.8g固体粉末相当于1罐饮料。折合人拟用剂量为5.4g/60kg.BW.日。
1.2实验动物:18~22g雌性SPF级昆明种小鼠160只,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,合格证号:SCXK(京)2006-00090159786。
1.3实验动物饲养环境:饲料由天津市华荣实验动物科技有限公司提供。SPF级实验动物室,合格证号:SYXK(津)2008-0004。温度:20~25℃,湿度:40~70%RH。
1.4剂量选择:试验设低、中、高三个剂量组,分别为0.45、0.90、2.70g/kg.BW,即相当于人拟用剂量的5倍,10倍,30倍。低,中,高剂量组分别取刺五加参麦饮料固体粉末4.5g,9.0g,27.0g,均加蒸馏水至200ml,充分混匀,按0.2ml/10g.BW灌胃,对照组给予等量蒸馏水,每日1次,连续30天,末次给药后24小时测定各项指标。将实验动物分成4个大组,每组40只,然后每组40只动物又分成4个小组,每组10只。其中1组进行HC50测定、抗体生成细胞检测、迟发型变态反应(足趾增厚法);2组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、脏/比值测定;3组进行碳廊;4组进行小鼠淋巴细胞转化试验、NK细胞活性测定试验。
1.5仪器与试剂:洁净工作台、无菌解剖器材、RPMI1640细胞培养液、刀豆蛋白、异丙醇、MTT、游标卡尺、SRBC、微量注射器、都氏试剂、印度墨汁鸡红细胞、LDH基液、计时器、血色素吸管、TU-1201型紫外可见分光光度计、离心机、生理盐水、碳酸钠、24孔培养板、二氧化碳培养箱、酶标仪等。
1.6实验方法
1.6.1脏器/体重比值测定:给药30天后,称取脾脏、胸腺、计算脏/体比。
1.6.2迟发型变态反应(足趾增厚法):给药30天,第25天腹腔注射2%SRBC,免疫4天后,测量左右足趾部厚度,同时在测量部位注射20%SRBC 20μl,24小时后再次测量。
1.6.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法):给药30天,无菌取脾,制成单细胞悬液,Hank’s液洗3遍,调整细胞浓度为3×106个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养箱中,每孔1ml,一孔加75μl ConA液(100μg/ml),另一孔为对照,置5%CO2,37℃孵箱中培养72h。培养结束前4h,每孔吸去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/ml 50μl/孔,继续培养4小时。培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,吹打均匀,使紫色结晶完全溶解,以570nm波长测定光密度值。
1.6.4半数溶血值(HC50)的测定:给药30天,于第25天腹腔注射2%SPBC,免疫5天后,摘眼球收集血清,试管内加入300倍稀释的血清1ml、10%SRBC0.5ml、补体1ml,37℃水浴20分钟,终止反应,离心,取上清液1ml,加都氏试剂3ml,10分钟后540nm比色。
1.6.5给药30天,于25天腹腔注射2%SRBC,免疫5天后,脱臼处死,取脾,制成细胞悬液,200目筛网过滤,用Hanks液洗3次,每次1000r/min离心10min,将细胞悬浮5mlRPMI1640培养液中,并调整细胞浓度为5×106个/ml。将表层培养基加热溶解,45℃水浴保温,与等量2倍浓度Hanks液混合,分装小试管,每管0.5ml,加入50μl10%SRBC,20μl脾细胞悬液,混匀,倒片,二氧化碳培养箱中培养1小时,加入用SA缓冲液稀释的补体(1:10)继续培养1小时,计数溶血空斑数。
1.6.6小鼠碳廓实验:给药30天后,尾静脉注射3.5倍稀释的印度墨汁(每10克体重0.1ml),分别于第2、10分钟内睑取血20μl,加入到2.98ml 0.1%碳酸钠溶液中,600nm比色。另取肝,脾称重,计算吞噬指数。
1.6.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法):给药30天后,每鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1ml,每隔30min,颈椎脱臼处死动物,将其仰位固定于鼠板上,正中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水2ml,转动鼠板1min,吸出腹腔洗液1ml,平均分滴于2片载玻片上,放入垫有湿纱布的唐磁盘内,于37℃孵箱温育30分钟,孵毕,生理盐水漂洗,晾干,以1:1丙酮甲醇溶液固定,4%Giemsa染色10mn。计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数。
1.6.8NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法):试验前24h将YAC-1细胞(靶细胞)进行传代培养,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/ml。无菌取脾,制成单细胞悬液,Hank’s液洗3遍,调整细胞浓度为2×107个/ml。取靶细胞和效应细胞各100ml(效靶比50:1),加入U型96孔培养板,靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μl,均设三个复孔,于37℃、5%CO2培养箱中培养4h,每孔吸取上清液100μl置平底96孔培养板中,同时加入LDH基液100μl,反应3min,每孔加入1mol/L的HCL30μl,在酶标仪492nm测定光密度值。
1.7结果统计:实验数据用SPSS11.5for Windows进行统计检验,对照组与实验组采用方差分析,如方差不齐者采用数据转换,转换后仍不齐则采用非参数统计。
2.结果
2.1刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠体重的影响
表5受试样品对免疫1组小鼠体重的影响(g,均值±标准差)
表6受试样品对免疫2组小鼠体重的影响(g,均值±标准差)
表7受试样品对免疫3组小鼠体重的影响(g,均值±标准差)
表8受试样品对免疫4组小鼠体重的影响(g,均值±标准差)
由表5~8可见,经口给予不同剂量的刺五加参麦饮料固体粉末30天后,各组动物生长活动良好,各剂量组动物增重与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
表9受试样品对小鼠脏器/体重比值的影响(均值±标准差)
由表9可见,各剂量组小鼠脾脏、胸腺/体重比值与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)
2.3刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠细胞免疫功能的影响
2.3.1刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠迟发型变态反应的影响(足趾增厚法)
表10受试样品对小鼠迟发型变态反应(足趾增厚法)的影响(均值±标准差)
由表10可见,中,高剂量组小鼠攻击前后足趾厚度差值高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组小鼠攻击前后足趾厚度差值与对照组相比差异无统计学意义(P<0.05)。
2.3.2刺五加参麦饮料固体粉末对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)的影响
表11 受试样品对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)的影响(均值±标准差)
由表11可见,高剂量组的光密度差值高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低,中剂量组与对照组比较,差异无统计学意义(P<0.05)。
2.4刺五加参麦饮料固体粉末对体液免疫的影响
2.4.1刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠半数溶血值(HC50)的影响
表12受试样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响(均值±标准差)
由表12可见,中,高剂量组的小鼠半数溶血值(HC50)高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组小鼠半数溶血值(HC50)与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。
2.4.2刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠抗体生成细胞试验的影响
表13受试样品对小鼠抗体生成细胞的影响(均值±标准差)
由表13可见,中,高剂量组的小鼠抗体生成细胞数高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。
2.5刺五加参麦饮料固体粉末对单核-巨噬细胞功能的影响
2.5.1刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠碳廊清试验的影响
表14受试样品对小鼠碳廊清试验的影响(均值±标准差)
由表14可见,中、高剂量组的小鼠吞噬指数高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组的吞噬指数与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
2.5.2刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响
表15受试样品对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响(均值±标准差)
由表15可见,三个剂量组小鼠的吞噬百分率及吞噬指数与对照品比较,差异均无明显统计学意义(P>0.05)。
2.6刺五加参麦饮料固体粉末NK细胞活性的影响
表16受试样品对小鼠NK细胞活性的影响(均值±标准差)
由表16可见,中,高剂量组的NK细胞活性与对照组相比高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)
3.小结
经口给予不同剂量的刺五加参麦饮料固体粉末30天后,各组动物生长活动正常。迟发型变态反应试验显示,中、高剂量组的足趾厚度差值高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);小鼠脾淋巴细胞转化试验显示,高剂量组的光密度差值高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);小鼠半数溶血值(HC50)影响试验显示,中、高剂量组的半数溶血值(HC50)高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);中、高剂量组的小鼠抗体生成细胞数高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);小鼠碳廊清试验显示,中、高剂量组小鼠吞噬指数高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);小鼠NK细胞活性试验显示中、高剂量组NK细胞活性高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。其它各项试验未见免疫抑制现象。根据《保健食品检验与评价技术规范》《2003年版》,提示本样品具有增强动物免疫力功能的作用。
五、刺五加参麦饮料缓解动物体力疲劳功能动物实验报告
1.材料和方法
1.1样品:实施例1制得的刺五加参麦饮料,250ml/罐,人拟用剂量为每日750ml/60kg.BW,所送样品为棕色固体粉末。1.8g固体粉末相当于1罐饮料。折合人拟用剂量为5.4g/60kg.BW.日。
1.2试验动物:18~22g雄性SPF级昆明种小鼠160只,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,实验动物生产许可证号:SCXX-(京)2006-00090159652。
1.3实验动物饲养环境:SPF级动物实验室,合格证号:SYXK(津)2008-0004。动物房温度20~25℃,相对湿度40~70%。饲料由天津市华荣实验动物科技有限公司提供,生产许可证号:SCXK-(津)2006-0001。
1.4实验剂量与分组:刺五加参麦饮料,按成人拟用剂量5.4/60kg.BW,本试验设计了四个大组,分别用于负重游泳试验,血清尿素氮,肝糖原及血乳酸测定。每组40只,每大组又分对照组及低、中、高三个剂量组(每组10只),剂量分别为0.45g/kg.BW、0.90g/kg.BW、1.80g/kg.BW。即相当于人拟用剂量的5倍、10倍、20倍。称取4.50、9.00、18.00g受试物加蒸馏水至200ml,分别灌胃低、中、高剂量组小鼠,灌胃量为0.2ml/10g.BW,对照组给予等量蒸馏水,各组经口灌胃,每日一次,连续给予30天后按1.6实验方法进行测定。
1.5主要仪器:
游泳箱
紫外可见分光光度计(TU-1201)
全自动生化分析仪(TOSHIBA TBA-40FR)
乳酸测定仪(YSI 2300 STAT PLUS)
1.6实验方法:
1.6.1负重游泳试验:小鼠连续经口灌胃受试物30天,末次给予受试样品30min后,将尾根部负荷5%体重铅皮进行游泳试验,记录小鼠入水至力竭身亡时的游泳时间。
1.6.2血清尿素氮测定:小鼠连续经口灌胃受试物30天,末次给予受试样品30min后,在30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后从眼球处采全血,分离血清,然后用全自动生化分析仪进行尿素氮含量测定。尿素氮试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。
1.6.3肝糖原测定:小鼠连续经口灌胃受试物30天,末次给予受试样品30min后处死动物,取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干,精确称取肝脏100mg加入8mlTCA后每管匀浆1分钟,将匀浆液倒入离心管以3000转/分离心15分钟,取上清液1ml放入10ml离心管中每管加入95%的乙醇4ml充分混匀,用干净塞子塞上竖立过夜,沉淀完全沉淀后将试管于3000转/分离心15分钟,倒掉上清液并使试管倒立10分钟,用2ml的蒸馏水溶解糖原振荡直至完全溶解,将10ml蒽酮试剂用力加入各管,置冷水中冲凉,达到冷水温度后,将其浸于沸水浴15分钟后,置冷水中冲凉,当所有试管都达到室温后,用紫外可见分光光度计在620nm波长下测定吸光度,计算肝糖原含量。
1.6.4血乳酸测定:小鼠连续经口灌胃受试物30天,末次给予受试样品30min后采小鼠尾血约40μl,滴入已放入8μl破膜液(4μl 15%EDTA和4μl2%SDS)的0.5ml Eppendorf(Ep)管中,充分混匀,冰浴保存。然后,将采血后小鼠放入30℃的水中不负重游泳10min后立即采血,休息20min后再次采血,三次的采血量及处理方法相同。然后用乳酸仪测定血乳酸。根据一下公式计算血乳酸曲线面积:
血乳酸曲线下面积=1/2×(游泳前血乳酸值+游泳后0min的血乳酸值)×10+1/2×(游泳后0min的血乳酸值+游泳后休息20min的血乳酸值)×20=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值)。1.6.5实验数据统计:各组数据均采用SPSS 11.5FOR WINDOWS中方差分析进行统计分析,方差不齐者采用数据转换,如转换后仍不齐则采用非参数统计。
2.结果
2.1刺五加参麦饮料固体粉末对实验小鼠体重的影响
表17实验一组小鼠体重(g,均值±标准差)
表18实验二组小鼠体重(g,均值±标准差)
表19实验三组小鼠体重(g,均值±标准差)
表20实验四组小鼠体重(g,均值±标准差)
由表17~20可见各剂量组小鼠实验初期、中期、末期体重及增重与对照品比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
2.2刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠负重游泳时间的影响
表21刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠负重游泳时间的影响(均值±标准差)
由表21可见,负重游泳试验中,中剂量组动物游泳时间长于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)
2.3刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠不负重游泳90分钟后血清尿素氮的影响
表22刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠90min后血清尿素氮的影响(均值±标准差)
由表22可见,血清尿素氮试验中,低剂量组尿素氮含量低于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)
2.4刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠肝糖原含量的影响
表23刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠肝糖原的影响(均值±标准差)
由表23可见,肝糖原试验中,中剂量组小鼠肝糖原含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)
2.5刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠血乳酸水平的影响
表24刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠肝糖原的影响(均值±标准差)
由表24可见,肝糖原试验中,中剂量组小鼠肝糖原含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)
2.5刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠血乳酸水平的影响
表25刺五加参麦饮料固体粉末对小鼠血乳酸水平的影响(均值±标准差)
由表25可见,对小鼠血乳酸水平的影响试验中,高剂量小鼠血乳酸曲线下面积低于对照组,且差异有统计学意义(P>0.05)。
3.小结
结口给予不同剂量的刺五加参麦饮料固体粉末30天,负重游泳试验中,中剂量组动物游泳时间长于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。血清尿素氮测定中,低剂量组尿素氮含量低于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。肝糖原试验中,中剂量组小鼠肝糖原含量高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。血乳酸测定实验中,高剂量组小鼠血乳酸曲线下面积低于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)之判断标准,提示本品有缓解动物体力疲劳的作用。
Claims (9)
1.一种刺五加参麦饮料,其特征在于:它是由以重量份计的刺五加2500-3500份、麦冬1800-2200份、红参1000-1100份及五味子450-600份为原料制得的水提物,辅以乙酰磺胺酸钾18-27份、木糖醇4500-5500份、乙基麦芽酚6-8份、柠檬酸60-80份和山梨酸钾47-55份制得的。
2.如权利要求1所述的刺五加参麦饮料,其特征在于:它是由以重量份计的刺五加3000份、麦冬2000份、红参1000份及五味子500份为原料制得的水提物,辅以乙酰磺胺酸钾25份、木糖醇5000份、乙基麦芽酚7.5份、柠檬酸75份和山梨酸钾50份制得的。
3.如权利要求1或2所述的刺五加参麦饮料,其特征在于:所述红参的水提物是采用水为提取溶剂连续逆流超声提取、过滤制得的。
4.如权利要求3所述的刺五加参麦饮料,其特征在于:所述红参水提物制备中采用的连续逆流超声提取,其溶剂水流量为300~500ml/min,超声频率为40kHZ,提取时间为30~60分钟,提取温度为60~90℃。
5.如权利要求4所述的刺五加参麦饮料,其特征在于:所述红参水提物制备中采用的连续逆流超声提取,其溶剂水流量为350~450ml/min,超声频率为40kHZ,提取时间为35~50分钟,提取温度为65~80℃。
6.如权利要求5所述的刺五加参麦饮料,其特征在于:所述红参水提物制备中采用的连续逆流超声提取,其溶剂水流量为380~420ml/min,超声频率为40kHZ,提取时间为40~45分钟,提取温度为70~75℃。
7.如权利要求3所述的刺五加参麦饮料,其特征在于:所述红参水提物制备中的过滤是采用截留分子量为5000~90000的超滤膜进行超滤;所述超滤过程中进液口压强为0.1~0.5Mpa、出液口压强比进液口压力低0.25~0.5kpa,红参提取液温度为15~50℃,所述超滤过程周期性流量波动的流速波动差为0.6~1.2米/秒,间歇通入惰性气体为0.5小时~1.5小时通气一次,每次2分钟。
8.如权利要求1-7任一项所述的刺五加参麦饮料,其特征在于,所述刺五加、麦冬及五味子的水提物按如下方法提取制得:取所述量的麦冬、刺五加、五味子粉碎成粗粉、过筛、混合,加10重量倍的纯化水先浸泡2小时,再加热提取,保持微沸状态1.5小时,用100目不锈钢筛过滤、收集滤液;向药渣中再次加10重量倍量的纯化水、加热提取、保持微沸1.5小时,用100目不锈钢筛过滤,收集滤液,合并两次滤液,得总滤液,将总滤液用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得精滤液。
9.如权利要求1-8任一项所述刺五加参麦饮料的制备方法,其特征在于,它按如下步骤进行:
a.红参有效成分提取:按用量配比取红参粉碎成粗粉,将红参粉末置于连续逆流超声提取仪中,以水为溶剂对红参连续逆流超声提取,所述溶剂水的流量为380~420ml/min、超声频率为40kHZ、提取时间为40~45分钟;提取温度为70~75℃;将连续逆流超声提取后的红参提取液,采用截留分子量为20000-30000的醋酸纤维素膜进行超滤处理,所述超滤过程中进液口压强为0.1~0.5Mpa、出液口压强比进液口压力低0.25~0.5kpa,红参提取液温度控制在28~35℃,所述超滤过程周期性流量波动的流速波动差为0.6~1.2米/秒,间歇通入惰性气体为0.5小时~1.5小时通气一次,每次2分钟;得到超滤液;
b.刺五加、麦冬及五味子有效成分提取:
按用量配比称取麦冬、刺五加、五味子粉碎成粗粉、过筛、混合,加10重量倍的纯化水先浸泡2小时,再加热提取,保持微沸状态1.5小时,用100目不锈钢筛过滤、收集滤液;向药渣中再次加10重量倍量的纯化水、加热提取、保持微沸1.5小时,用100目不锈钢筛过滤,收集滤液,合并两次滤液,得总滤液,将总滤液用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得精滤液;
c.将步骤a所得超滤液和步骤b所得精滤液搅拌、混合、得A液,备用;
d.按用量配比称取山梨酸钾、乙酰磺胺酸钾、木糖醇、乙基麦芽酚,分别加纯化水刚好溶解,煮沸30min,用尼龙布进行过滤,备用;
e.将所述山梨酸钾液、乙酰磺胺酸钾液、木糖醇液、乙基麦芽酚液加入到A液中,混合、搅拌均匀,然后加入柠檬酸调节pH为4.0-6.0,并于4-5℃冷藏静置24小时,用滤材为0.8μm微孔滤膜的板框压滤机进行精滤,得饮料原液。
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