CN101116722A - 一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂及其制备方法和原料、制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂及其制备方法、质量控制方法，和原料人参、麦冬、五味子的质量控制方法。该药物制剂中含有人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分。在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.08mg～12mg，人参总多糖1mg～460mg，总皂苷5mg～800mg，五味子醇甲0.036mg～6mg。该药物制剂中可以添加或不添加起协同作用的药物。该药物制剂可以是任何可药用的剂型，包括口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。本发明还提供了人参、麦冬、五味子的质量控制方法，和该药物制剂的质量控制方法。

Description

一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂及其制备方法和原料、制剂的质量控制方法

技术领域

本发明是属于药物领域，具体的说，涉及一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂及其制备方法、质量控制方法，和原料人参、麦冬、五味子的质量控制方法。

背景技术

古方“生脉散”由人参、麦冬、五味子组成，具有益气养阴、复脉固脱作用，主治气阴两亏，脉虚欲脱的心悸、气短、四肢厥冷、汗出、脉欲绝。

现代医学研究证明，该药具有扩张血管、增加冠状动脉血流量的作用，可用于治疗心肌梗塞、心源性休克、感染性休克等心血管疾病。

人参中含有皂苷类成分、多糖类成分、β-榄香烯、人参炔醇、维生素等；麦冬中含有皂苷类成分、β-谷甾醇、氨基酸、多量葡萄糖及其葡萄糖苷等成分；五味子中含有木脂素类成分(如五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素等)、有机酸、维生素等成分，其中五味子的特征性有效成分之一为五味子醇甲。

目前市场上有生脉注射液销售，同时有多项有关生脉注射液、生脉注射用冻干粉针等在中国申请的已公开的专利。但在制剂成品中保留人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分作为主要有效成分的药物制剂尚未见报道。

人参中的多糖类成分具有多种活性，如人参中的多糖类成分可以从多种途径发挥抗肿瘤的作用；对机体的特异性免疫和非特异性免疫均有明显的促进作用；具有降血糖作用等多种生理活性；能抗溃疡；能提高休克病人的抵抗力并对其恢复具有促进作用。

中药材因产地、生长条件、栽培采收时间和方法等产生的成分差异很大。

中药复方中的成分复杂，其中的成分并不都是有效成分，有些成分甚至是对人体有害的成分。从中药复方中提取分离出来的许多成分都能产生药理作用，但并不是所有的能产生药理作用的成分都是该中药复方的主要有效成分。并不是所有的成分都适合注射给药，特别是静脉注射给药。

将中药复方用于口服给药时，如在制剂成品中全面地保留处方中的各类能产生药理作用的成分，常能较好的保存该方原有的功效，但也常存在服药量过大的问题。

将中药复方制成注射剂时，如果尽最大努力保留处方中所有能产生药理作用的成分，所制成的注射剂要么保留了过多的杂质，注射给药时带入各种风险无法控制的杂质，制成的注射剂很难找到安全有效的质量控制方法，安全性和稳定性很难保证；要么分离纯化各单体成分的生产工艺极其复杂，成本极其高昂，没有现实意义。

更进一步的开发质量稳定、可控，有效成分种类保留更合适、有效成分含量更高的生脉的药物制剂，更加合理的发扬传统古方的药效，能为临床使用提供更多更好的用药选择，也是更好的发展传统中药学的需要。

发明内容

本发明人在实验过程中意外的发现：对于人参、麦冬、五味子的药物制剂，在制剂成品中保留了人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、和五味子的木脂素类成分的药物制剂的药理作用明显优于未保留人参的多糖类成分的药物制剂；且其保留的有效成分种类合适，具有良好的制剂性能，具有开发可靠性强的质量控制方法的可能。

药物制剂必须安全、稳定、有效。注射剂起效迅速，作用强，目前在临床上用途广泛。注射剂对安全性要求非常高。对于采用中药复方制备注射剂，选择性的保留其中主要的、比较安全的、能较好保留处方原有功效的有效成分，采用可控性强的质量控制方法，是制备安全、稳定、有效、成本合适的中药复方注射剂的一种有益方法。

本发明人在前述发现的基础上，经过大量的研究探索，研制出了一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂。该药物制剂中含有人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分。同时本发明提供了该药物制剂的制备方法。为了更好的保证本发明药物制剂的质量，本发明提供了原料人参、麦冬、五味子的质量控制方法，和该药物制剂的质量控制方法。

本发明的一个目的是提供一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂。

本发明的药物制剂的原料中含有人参、麦冬、五味子，同时在该药物制剂中可以不添加或添加一种或一种以上的无配伍禁忌的、能起协同作用的中药、天然药物、中药提取物、天然药物提取物、中药有效部位、天然药物有效部位、中药有效化合物单体、天然药物有效化合物单体、化学药物等药物。

该药物制剂中的人参、麦冬、五味子为野生品或人工栽培品，为道地药材或非道地药材。如所述的人参可为人参或山参或林下参或园参等，如所述的五味子可为五味子或北五味子或南五味子等。

同时所述的人参、麦冬、五味子为其鲜药材或依传统方法炮制而成的炮制品或依现代方法炮制而成的炮制品。如所述的人参可为人参或生晒山参或生晒参或红参等，所述的五味子可为五味子或醋五味子等。

本发明的一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。

所述的口服固体制剂可为颗粒剂、片剂、丸剂、滴丸剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、固体分散剂、散剂、微颗粒剂、微丸剂、微囊剂、微球剂、和其它药学上可接受的口服固体制剂。所述的口服液体制剂可为口服液和其它药学上可接受的口服液体制剂。所述的注射剂可为注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂、氯化钠注射液、葡萄糖注射液和其它药学上可接受的注射剂。

本发明的药物制剂，优选的是颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、固体分散剂、口服液、注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂、氯化钠注射液、葡萄糖注射液。

本发明的药物制剂，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指单剂量制剂，如注射剂的每支，每瓶，口服制剂的每粒，每片等。

本发明的药物制剂，原料中人参∶麦冬∶五味子的比例为1～400∶1～400∶1～400，优选50～200∶100～360∶75～300，更优选75～150∶160～350∶100～230，最优选100∶312∶156。

本发明的药物制剂，在每一单位剂量的制剂中，按原料计含有人参0.1g～10g，麦冬0.312g～31.2g，五味子0.156g～15.6g；优选含有人参0.125g～8g，麦冬0.39g～24.96g，五味子0.195g～12.48g；更优选含有人参0.167g～6g，麦冬0.52g～18.72g，五味子0.26g～9.36g。

本发明的药物制剂，在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.08mg～12mg，人参总多糖1mg～460mg，总皂苷5mg～800mg，五味子醇甲0.036mg～6mg；

优选含有人参皂苷Rg₁和Re0.1mg～9.6mg，人参总多糖1.25mg～368mg，总皂苷6.25mg～640mg，五味子醇甲0.045mg～4.8mg；

更优选含有人参皂苷Rg₁和Re0.133mg～7.2mg，人参总多糖1.66mg～276mg，总皂苷8.33mg～480mg，五味子醇甲0.06mg～3.6mg。

具体的可为：在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.8mg～1.2mg；人参总多糖以葡萄糖计，为20mg～46mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为50mg～80mg；五味子醇甲0.36mg～0.6mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re1.6mg～2.4mg；人参总多糖以葡萄糖计，为40mg～92mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为100mg～160mg；五味子醇甲0.72mg～1.2mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re4mg～6mg；人参总多糖以葡萄糖计，为100mg～230mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为250mg～400mg；五味子醇甲1.8mg～3mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.4mg～0.6mg；人参总多糖以葡萄糖计，为10mg～23mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为25mg～40mg；五味子醇甲0.18mg～0.3mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.25mg～0.4mg；人参总多糖以葡萄糖计，为6.6mg～15.4mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为16.6mg～26.7mg；五味子醇甲0.12mg～0.2mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.2mg～0.3mg；人参总多糖以葡萄糖计，为5mg～11.5mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为12.5mg～20mg；五味子醇甲0.09mg～0.15mg。

本发明的药物制剂中含有量均分子量为30～36×10⁴、8～12×10⁴、3.5～7.5×10⁴的人参的多糖类成分中的一种或几种，其中量均分子量为33.0445×10⁴、或9.8878×10⁴、或5.4087×10⁴的人参的多糖类成分的含量较高。

本发明的药物制剂在必要时还含有或使用药物可接受的辅料(或载体)，所述辅料为药学上可接受的制剂辅助剂。

本发明的药物制剂中优选含有0.05％～90％(重量百分比)的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子醇甲(五味子的木脂素类成分中的一种)，及99.95％～0％(重量百分比)的药学上可用的辅料。在所述制剂中人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子醇甲的含量更优选为0.08％～80％，更优选0.1％～75％，更优选0.18％～70％。

对于口服固体制剂和口服半固体制剂，所述辅料选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、助流剂、抗粘剂、润滑剂、色、香、味及其调节剂、固体分散体载体材料、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、PH调节剂和其它药学上可接受的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质。

所述稀释剂是选自糖粉、糊精、淀粉、可压性淀粉、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、硫酸钙、碳酸钙和其它药学上可接受的稀释剂中的一种或一种以上的物质；

所述润湿剂是选自一定浓度的乙醇、水和其它药学上可接受的润湿剂中的一种或一种以上的物质；

所述粘合剂是选自淀粉浆、50％至70％蔗糖溶液、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙纤维素、聚维酮、明胶、聚乙二醇、海藻酸钠溶液和其它药学上可接受的粘合剂中的一种或一种以上的物质；

所述崩解剂是选自羧甲基淀粉钠、干淀粉、泡腾崩解剂、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮和其它药学上可接受的崩解剂中的一种或一种以上的物质；

所述助流剂、抗粘剂、润滑剂是选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、聚乙二醇类、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、氢化植物油和其它药学上可接受的助流剂、抗粘剂、润滑剂中的一种或一种以上的物质；

所述色、香、味及其调节剂是选自药用色素、食用色素、香精和其它药学上可接受的色、香、味及其调节剂中的一种或一种以上的物质；

所述固体分散体载体材料是选自纤维素衍生物、聚乙二醇类、表面活性剂类、有机酸类、聚维酮类、糖类与醇类、纤维素类、聚丙烯酸树脂类、β-谷甾醇、胆固醇、胆固醇硬脂酸酯、棕榈酸甘油酯、氢化蓖麻油、蓖麻油蜡、蜂蜡、巴西棕榈蜡和其它药学上可接受的固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质，每类固体分散体载体材料可不选或选用该类固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质。

对于口服液体制剂，所述辅料选自溶剂、增溶剂、助溶剂、潜溶剂、防腐剂、抗氧剂、金属离子络合剂、矫味剂、着色剂、pH调节剂和其它药学上可接受的液体制剂附加剂中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质。

所述溶剂是选自水、一定浓度的乙醇、丙二醇、甘油和其它药学上可接受的液体制剂用溶剂中的一种或一种以上的物质；

所述防腐剂是选自对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等对羟基苯甲酸酯类、山梨酸及其盐、苯甲酸及其盐、薄荷油和其它药学上可接受的液体制剂用防腐剂中的一种或一种以上的物质；

所述矫味剂是选自糖精钠、蔗糖、薄荷挥发油、单糖浆、果汁糖浆、山梨醇、甘油、甘露醇和其它药学上可接受的液体制剂用矫味剂中的一种或一种以上的物质。

对于注射剂，所述辅料选自药学上可接受的注射用溶剂、增溶剂、抑菌剂、镇痛剂、抗氧剂、稳定剂、络合剂、等渗调节剂、缓冲剂、pH调节剂，以及药学上可接受的具有其它辅助功能的药物中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质。

所述注射用溶剂是选自注射用水、一定浓度的乙醇、甘油、丙二醇、苯甲醇和其它药学上可接受的注射用溶剂中的一种或一种以上的物质；

所述增溶剂是选自聚山梨酯80、聚山梨酯60、聚山梨酯40、聚山梨酯20和其它药学上可接受的注射剂用增溶剂中的一种或一种以上的物质；

所述抑菌剂是选自羟丙甲酯、羟丙丁酯、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯酚和其它药学上可接受的注射剂用抑菌剂中的一种或一种以上的物质；

所述抗氧剂是选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠和其它药学上可接受的注射剂用抗氧剂中的一种或一种以上的物质；

所述络合剂是选自乙二胺四醋酸二钠、环己二胺四醋酸钠、N-羟基二乙胺三醋酸、二乙基三胺六醋酸和其它药学上可接受的络合剂中的一种或一种以上的物质。

所述pH调节剂是选自一定浓度的氢氧化钠溶液、一定浓度的盐酸溶液、磷酸、醋酸盐缓冲溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液和其它药学上可接受的pH调节剂中的一种或一种以上的物质。

其中所述的注射用冻干制剂还可以在制剂中不加入或加入了一种或一种以上的药物可接受的适量的赋形剂。所述赋形剂选自甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、葡萄糖、氯化钠和其它药学上可接受的赋形剂中的一种或一种以上的物质。所述的赋形剂优选甘露醇、山梨醇。

本发明的药物制剂在使用时根据患者具体情况确定用法用量，可每日使用1～4次，每次使用1～20单位剂量的药物制剂，如每次使用1～20片或粒或支。

本发明的注射液每一单位剂量为1ml～100ml，即每一单位包装中含有1ml～100ml注射液，如每一支为1ml、2ml、5ml、10ml、15ml、20ml、30ml、40ml、50ml、60ml、80ml、或100ml等，可用于肌内注射、静脉滴注等用途。用于静脉滴注时，需用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液或适当浓度的葡萄糖氯化钠注射液稀释后才可用于静脉滴注。

本发明的注射用冻干制剂需先用适量的注射用水充分溶解，再用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液或适当浓度的葡萄糖氯化钠注射液稀释后才可用于静脉滴注。

本发明另一目的是提供一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂的制备方法。

本发明的药物制剂的制备方法如下：

处方：

人参、麦冬、五味子、起协同作用的药物(添加或不添加)、辅料(添加或不添加)制备方法：

提取人参、麦冬、五味子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分，添加或不添加起协同作用的药物，添加或不添加辅料，制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。

优选的制备方法：

一、人参、麦冬、五味子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分的提取：

(1)人参的处理：将人参切片，分别加4～8倍量(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)60～80％乙醇提取(提取方法采用回流提取法或超声提取法或减压提取法)2～4次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，药液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.1～1.9g，每次加入0.8～2倍量的水饱和的正丁醇萃取3～8次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～8.0，即得人参的皂苷类成分中间体，备用；

(2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加6～12倍量水(第一次因为是干药材，多加2～4倍量)提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)2～4次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为0.6～1.2g生药/ml，温度为20～60℃，加入90～95％的乙醇醇沉使含醇量达到70～85％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，粉碎，加适量水溶解后，冷藏，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.5～2.5g生药/ml，加入90～95％的乙醇使含醇量达到60～80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量注射用水溶解后，离心，取上清液，

上一步所得上清液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；

或上一步所得上清液采用截留分子量100K～800K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或将上一步所得上清液先用截留分子量100K～800K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量1K～10K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

(3)麦冬的处理：麦冬加7～13倍量水，浸泡15～180分钟，提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)1～3小时，再分别加5～11倍量水提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)1～3次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液的相对密度为1.1～1.5(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入90～95％的乙醇使含醇量达到70～85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.0～1.4(相对密度为药液温度为30℃时值)，每次加入1～3倍量的水饱和的正丁醇萃取3～8次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～8.0，即得麦冬的皂苷类成分中间体，备用；

(4)五味子的处理：五味子粉碎，分别加5～11倍量水(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)2～4次，每次1～3小时，分别收集水蒸气馏出液(收集或不收集)和水提液，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为1.1～1.7g生药/ml，加入90～95％的乙醇使含醇量达到70～85％，静置过夜，滤过，醇液调节pH值至6.5～8.7，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度为3～6.5g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到80～90％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～8.0，即得五味子中间体，备用；

二、起协同作用的药物的处理：

(5)起协同作用的药物的处理：起协同作用的药物是中药或天然药物的，提取其有效部位或有效成分单体，(精制)，水溶，调节pH值至6.0～8.0，滤过，即得中间体，备用；起协同作用的药物是化学药物的，水溶，pH值调至6.0～8.0，滤过，即得中间体，备用；(备注：用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可以不水溶)

三、各药物制剂成品的制备：

(6)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”、“(5)(加入或不加入)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)；浓缩成清膏[或将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)，浓缩成清膏，与“(5)(加入或不加入)”未水溶的中间体混合]，加入适量的口服固体制剂用辅料混匀，制软材，制粒，干燥，整粒，按剂量分装，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的颗粒剂；

将制得的已干燥、整粒的颗粒压片或装入胶囊，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的片或胶囊。

(7)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的液体制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的液体制剂用辅料或不加辅料]，加纯化水或注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，(滤过)，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至口服液包装容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的口服液。

(8)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，(滤过)，加入0.02～0.5％活性炭加热至沸，保持微沸10～40分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.5μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，按剂量分装至注射液包装用容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液。

(9)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，(滤过)，加入0.02～0.5％活性炭加热至沸，保持微沸10～40分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.5μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1～8ml药液，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射用冻干制剂。

(10)冷冻干燥工艺如下：

a预冻阶段：普通预冻，预冻温度-60℃～-45℃，预冻时间约2.5～7小时。或选择反复预冻，预冻温度-57℃～-42℃；回温温度-22℃～-19℃，保温1～3.5小时；再将产品温度降至-57℃～-42℃，保温2～5小时。

b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-60℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-23℃～-18℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。

c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～25℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。

更优选的制备方法：

本发明的药物制剂更优选的制备方法为：

一、人参、麦冬、五味子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分的提取：

(1)人参的处理：将人参切片，分别加5～7倍量(第一次因为是干药材，多加1～2倍量)60～80％乙醇回流提取2～3次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，药液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.2～1.8g，每次加入0.8～1.5倍量的水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～7.5，即得人参的皂苷类成分中间体，备用；

(2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加7～11倍量水(第一次因为是干药材，多加2～4倍量)煎煮提取或回流提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为0.7～1.1g生药/ml，温度为25～50℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，粉碎，加适量水溶解后，冷藏，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.7～2.3g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到65～75％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量注射用水溶解后，离心，取上清液，

上一步所得上清液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；

或上一步所得上清液采用截留分子量100K～600K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或将上一步所得上清液先用截留分子量100K～600K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量1K～8K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

(3)麦冬的处理：麦冬加8～12倍量水，浸泡15～90分钟，煎煮提取或回流提取1～3小时，再分别加6～10倍量水煎煮提取或回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液的相对密度为1.15～1.45(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.03～1.33(相对密度为药液温度为30℃时值)，每次加入1.5～2.5倍量的水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～7.5，即得麦冬的皂苷类成分中间体，备用；

(4)五味子的处理：五味子粉碎，分别加6～10倍量水(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)煎煮提取或回流提取2～4次，每次1～3小时，分别收集水蒸气馏出液(收集或不收集)和水提液，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为1.2～1.6g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，醇液调节pH值至6.7～8.3，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度为3.5～6g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到80～90％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～7.5，即得五味子中间体，备用；

二、起协同作用的药物的处理：

(5)起协同作用的药物的处理：起协同作用的药物是中药或天然药物的，提取其有效部位或有效成分单体，(精制)，水溶，调节pH值至6.0～7.5，滤过，即得中间体，备用；起协同作用的药物是化学药物的，水溶，pH值调至6.0～7.5，滤过，即得中间体，备用；(备注：用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可以不水溶)

三、各药物制剂成品的制备：

(6)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”、“(5)(加入或不加入)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)；浓缩成清膏[或将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)，浓缩成清膏，与“(5)(加入或不加入)”未水溶的中间体混合]，加入适量的口服固体制剂用辅料混匀，制软材，制粒，干燥，整粒，按剂量分装，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的颗粒剂；

将制得的已干燥、整粒的颗粒压片或装入胶囊，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的片或胶囊。

(7)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的液体制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的液体制剂用辅料或不加辅料]，加纯化水或注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，(滤过)，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至口服液包装容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的口服液。

(8)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，(滤过)，加入0.05～0.3％活性炭加热至沸，保持微沸15～35分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，按剂量分装至注射液包装用容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液。

(9)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，(滤过)，加入0.05～0.3％活性炭加热至沸，保持微沸15～35分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1～6ml药液，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射用冻干制剂。

(10)冷冻干燥工艺如下：

a预冻阶段：普通预冻，预冻温度-60℃～-45℃，预冻时间约2.5～7小时。或选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃；回温温度-22℃～-19℃，保温1.5～3小时；再将产品温度降至-56℃～-45℃，保温2～5小时。

b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-22℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。

c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～23℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。

本发明药物制剂的制备方法中“五味子的处理”中五味子的水提液经过一次醇沉后的醇液调pH值的说明：

本发明人在工艺筛选中发现，如果将五味子的水提液直接进行两次醇沉，得到的总提取物量较高，膜过滤较困难，时间放置久后，瓶底有沉淀。

而将五味子的水提液在一次醇沉后的醇液调pH值，发现pH值在一定范围内，随着pH增高，调pH值后过滤，滤液中总提取物量逐渐减少。当调pH至7.7左右，过滤，滤液中的总提取物量大幅减少，而五味子醇甲的含量损失较小，同时可能是由于去除了很多杂质，使膜过滤较容易，所得的中间体稳定。醇液调pH值后，滤过，二次醇沉后的总提取物量继续显著减少，而五味子醇甲的含量损失较小。

故在五味子的处理方法中选用：五味子的水提液经过一次醇沉后的醇液调pH值至7.7左右，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，再进行二次醇沉。

本发明的再一个目的是提供一种人参、麦冬、五味子的质量控制方法。

中药材因产地、生长条件、栽培采收时间和方法等产生的成分差异很大。要控制中药制剂的质量，使其成分稳定，必须先控制中药制剂所使用的原料----中药材的质量。本发明人为了更好的监测和控制制剂原料人参、麦冬、五味子的质量，分别建立人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱，可以较全面的监测和控制人参、麦冬、五味子的质量，可靠性与只监控其中的一种至几种成分相比，大大提高。采用指纹图谱技术监测合格的原料，所制成的制剂稳定性更好，可以更好的保证制剂的质量。

本发明所建立的人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱可以单独使用或任意组合使用或与其它质量控制方法任意组合使用，可以用于人参、麦冬、五味子的质量控制，可以用于一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂的质量控制，可以用于制剂原料中含有人参、麦冬、五味子中的一种或一种以上药材的制剂的质量控制。

本发明的人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱如下：

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[1]人参药材指纹图谱

本人参药材指纹图谱中的人参选用红参，红参为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎。

[1.1]色谱条件  色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈与水为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(％)
			0205560	10～2025～3545～5510～20	90～8075～6555～4590～80

柱温：20～40℃；分析时间：60～120min；流速：0.6～1.0ml/min；ELSD检测器，漂移管100～120℃，载气流速2.0～4.0L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁峰计应不低于5000。

[1.2]对照品溶液的制备取干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，置2～25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.2～2.0mg/ml的溶液，即得。

[1.3]供试品溶液的制备 取红参药材粉末(过10～40目筛)1～4g，精密称定，加70％乙醇回流提取两次，每次0.8～1.5小时，第一次加6～8倍量，第二次加5～7倍量；提取液滤过，合并，滤液回收乙醇，浓缩至药液浓度为1.2～1.8g生药/ml，用等量水饱和的正丁醇振摇提取3～7次，合并正丁醇液，并用等量的氨试液洗涤；洗涤液弃去，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解并转移至5～20ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

[1.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[1.5]结果 共标定出10个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％。规定相对保留时间为0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相对峰面积对数比为0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。

[2]麦冬药材指纹图谱

本麦冬药材指纹图谱中的麦冬为百合科植物麦冬0phiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。

[2.1]色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；乙腈与水(0.05～0.3％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(0.05～0.3％H3PO4)(％)
			020405060	0～100～1020～4050～7050～70	100～90100～9080～6050～3050～30

柱温：20～40℃；检测波长：240～260nm；分析时间：60～120min；流速：0.8～1.2ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.2]对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品2～10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.3]供试品溶液的制备 将麦冬药材剪碎，取6.3～9.3g，精密称定，分别加8～12倍、6～10倍、6～10倍量水各煎煮提取1.5～2.5小时，滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.1～1.5(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使醇含量达80％，醇沉，上清液蒸干后加5～20ml水溶解，用10～40ml水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇层，蒸干，加水溶解，定容至250ml，过滤，精密吸取续滤液0.5～2ml，加入25～100μl五味子醇甲对照品溶液(0.2～0.8mg/ml)，即可进行测定。

[2.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[2.5]结果 共标定出7个共有峰(如加五味子醇甲峰则为8个共有峰)。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，根据五味子醇甲的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.190±10％、0.365±10％、0.421±10％、0.594±10％、0.634±10％、0.653±10％、0.703±10％、1.000。以峰面积最大的相对保留时间为0.365±10％的峰的峰面积为1.000，规定相对保留时间为0.421±10％的峰的的相对峰面积比为0.084～0.140。

[3]五味子药材指纹图谱

本五味子药材指纹图谱中的五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。

[3.1]色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；乙腈与水(0.05～0.3％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(0.05～0.3％H3PO4)(％)
			020405060	0～100～1020～4050～7050～70	100～90100～9080～6050～3050～30

柱温：20～40℃；检测波长：240～260nm；分析时间：60～120min；流速：0.8～1.2ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[3.2]对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品2～10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.3]供试品溶液的制备 取五味子药材粗粉(过10～40目筛)6.3～9.3g，精密称重，分别加7.5～11.5倍、6～10倍、6～10倍量水各煎煮提取1.5～2.5小时，滤过，滤液合并，浓缩至药液浓度为1.2～1.6g生药/ml，浓缩液加入95％乙醇沉淀，使含醇量达80％，滤过，滤液用饱和NaOH溶液调pH至6.5～7.5，滤过，上清液蒸干，加水溶解，定容到500ml容量瓶中，即得。

[3.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.5]结果 共标定出14个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.049±10％、0.081±10％、0.142±10％、0.162±10％、0.368±10％、0.407±10％、0.575±10％、0.587±10％、0.633±10％、0.703±10％、0.931±10％、1.000、1.028±10％、1.061±10％。规定相对保留时间为0.368±10％、0.407±10％的峰的相对峰面积比为0.380～0.634，0.869～1.304。

本发明的人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱，其各具体测定方法如下：

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[1]人参药材指纹图谱

本人参药材指纹图谱中的人参选用红参，红参为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎。

[1.1]色谱条件 色谱柱：ODS HYPERSIL C₁₈(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(％)
			0205560	15305015	85705085

柱温：30℃；分析时间：60min；流速：0.8ml/min；ELSD检测器，漂移管110℃，载气流速3.0L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁峰计应不低于5000。

[1.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[1.3]供试品溶液的制备 取红参药材粉末(过20目筛)2g，精密称定，加70％乙醇回流提取两次，每次1小时，第一次加7倍量，第二次加6倍量；提取液滤过，合并，滤液回收乙醇，浓缩至药液浓度为1.5g生药/ml，用等量水饱和的正丁醇振摇提取5次，合并正丁醇液，并用等量的氨试液洗涤；洗涤液弃去，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解并转移至10ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。

[1.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[1.5]结果 共标定出10个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％。规定相对保留时间为0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相对峰面积对数比为0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。

[2]麦冬药材指纹图谱

本麦冬药材指纹图谱中的麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。

[2.1]色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒径5μm；乙腈与水(0.1％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(0.1％H3PO4)(％)
			020405060	00306060	100100704040

柱温：30℃；检测波长：250nm；分析时间：60min；流速：1.0ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.2]对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品4mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.3]供试品溶液的制备 将麦冬药材剪碎，取7.8g，精密称定，分别加10倍、8倍、8倍量水各煎煮提取2小时，滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.3(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使醇含量达80％，醇沉，上清液蒸干后加10ml水溶解，用20ml水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇层，蒸干，加水溶解，定容至250ml，过滤，精密吸取续滤液1ml，加入50μl五味子醇甲对照品溶液(0.4mg/ml)，即可进行测定。

[2.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[2.5]结果 共标定出7个共有峰(如加五味子醇甲峰则为8个共有峰)。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，根据五味子醇甲的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.190±10％、0.365±10％、0.421±10％、0.594±10％、0.634±10％、0.653±10％、0.703±10％、1.000。以峰面积最大的相对保留时间为0.365±10％的峰的峰面积为1.000，规定相对保留时间为0.421±10％的峰的的相对峰面积比为0.084～0.140。

[3]五味子药材指纹图谱

本五味子药材指纹图谱中的五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。

[3.1]色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒径5μm；乙腈与水(0.1％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(0.1％H3PO4)(％)
			020405060	00306060	100100704040

柱温：30℃；检测波长：250nm；分析时间：60min；流速：1.0ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[3.2]对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品4mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.3]供试品溶液的制备 取五味子药材粗粉(过20目筛)7.8g，精密称重，分别加9.5倍、8倍、8倍量水各煎煮提取2小时，滤过，滤液合并，浓缩至药液浓度为1.4g生药/ml，浓缩液加入95％乙醇沉淀，使含醇量达80％，滤过，滤液用饱和NaOH溶液调pH至7，滤过，上清液蒸干，加水溶解，定容到500ml容量瓶中，即得。

[3.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.5]结果 共标定出14个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.049±10％、0.081±10％、0.142±10％、0.162±10％、0.368±10％、0.407±10％、0.575±10％、0.587±10％、0.633±10％、0.703±10％、0.931±10％、1.000、1.028±10％、1.061±10％。规定相对保留时间为0.368±10％、0.407±10％的峰的相对峰面积比为0.380～0.634，0.869～1.304。

本发明的再一个目的是提供一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂的质量控制方法。使本发明的药物制剂的质量稳定可控。

本发明优选的提供一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射剂的质量控制方法，包括下述的鉴别、含量测定、指纹图谱：

所述的鉴别、含量测定、指纹图谱及其中的单个的具体方法可分别选用或任意组合使用，用于一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制。

所述的鉴别、含量测定、指纹图谱包括人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re的鉴别、麦冬的鉴别、五味子醇甲的HPLC鉴别；人参皂苷Rg1和Re的含量测定、人参总多糖的含量测定、总皂苷的含量测定、五味子醇甲的含量测定；皂苷类成分指纹图谱、非皂苷类成分指纹图谱。

本发明建立了一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射剂中的皂苷类成分指纹图谱、非皂苷类成分指纹图谱，质量控制方法的可靠性与只监控其中的一种至几种成分相比，大大提高。采用指纹图谱技术可以更好的保证制剂的质量。

所述的一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法如下：

[1]鉴别

[1.1]人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.5～0.7g，加水溶解至5～15ml(或直接取制备好的注射液7～13ml)，用等量的水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇层，正丁醇层用等量的氨试液洗涤1～2次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用1～4ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg₁、Re对照品，加甲醇制成每1ml各含0.1～0.4mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各1～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(70～80∶15～25∶1～4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～15％硫酸乙醇溶液，在100～110℃烘数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[1.2]麦冬的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.5～0.7g，加3～10ml水溶解(或直接取制备好的注射液7～13ml；或取注射液7～13ml，浓缩成3.5～6.5ml)，加盐酸1～3ml回流5-15分钟，放冷，溶液加氯仿萃取1～4次，每次15～50ml，合并氯仿层，蒸干，残渣用1～4ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取麦冬药材1～4g，至量瓶中，密塞，加入甲醇，超声1～4次，每次10～40ml，每次15～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用5～20ml水溶解，加盐酸1～4ml，回流5-15分钟，放冷，加氯仿振摇萃取1～4次，每次15～50ml，分取氯仿液，蒸干，残渣加甲醇1～4ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各1～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(1～3∶0.5～1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～15％硫酸乙醇溶液，在100～110℃烘约2～10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[1.3]五味子醇甲的HPLC鉴别：

在“五味子醇甲的含量测定”项下，供试品图谱中有与对照品图谱中主峰相对应的色谱峰。

[2]含量测定

[2.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.1.1]色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-0.05～0.3％磷酸溶液(15～23∶85～77)为流动相，检测波长193～213nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

[2.1.2]对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的人参皂苷Rg₁及人参皂苷Re对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.1～0.6mg、人参皂苷Re0.1～0.4mg的溶液，即得。

[2.1.3]供试品溶液的制备 取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，置2～10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.1.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10～40μl(注射液进样量为20～80μl)，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg₁、Re的量之和应为0.4～2.4mg。

[2.2]人参总多糖的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.2.1]对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的葡萄糖对照品10～30mg于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.2.2]标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液0.0，0.05～0.15，0.15～0.25，0.25～0.35，0.35～0.45，0.45～0.55，0.55～0.65，0.65～0.75，0.75～0.85ml，分别置10～20ml具塞试管中，分别加蒸馏水使成1.0～2.0ml，各精密加入新鲜配制的0.1～0.3％蒽酮-75～85％硫酸溶液4～12ml，摇匀，在100℃水浴中保温7～15分钟，迅速冷却后，以第一份为空白，照紫外-可见分光光度法在610～630nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.2.3]供试品溶液的配制 取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，加水1～4ml溶解后(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液7～13ml，浓缩成1.4～2.6ml)，加入90～95％乙醇9～15ml，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，定容至200ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.2.4]测定法 精密量取上述供试品溶液0.15～0.45ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水使成1.0～2.0ml”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.2.5]制备好的注射剂每支含人参总多糖以葡萄糖计，应为10～92mg。

[2.3]总皂苷的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《(中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.3.1]对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的人参皂苷Re对照品适量，于2～25ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.2～2.0mg/ml的溶液，即得对照品溶液。

[2.3.2]标准曲线的制备 精密量取上述人参皂苷Re对照品溶液0.05～0.15，0.15～0.25，0.25～0.35，0.4～0.6，1.1～1.3，1.6～2.0ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，加入高氯酸3～8ml，摇匀，于50～70℃水浴上加热10～25min，取出，迅速冷却，以相应的试剂作为空白，照紫外-可见分光光度法于380～400nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.3.3]供试品溶液的制备 取装量差异项下制备好的注射剂内容物60～70mg，精密称定(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液0.7～1.3ml)，加蒸馏水2～10ml溶解，置分液漏斗中，用5～20ml水饱和的正丁醇萃取3～7次，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇溶解并定容至10～50ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.3.4]测定法 精密量取上述供试品溶液0.5～2ml于具塞试管中，照“标准曲线的制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.3.5]制备好的注射剂每支含总皂苷以人参皂苷Re计，应为25～160mg。

[2.4]五味子醇甲的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.4.1]色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇-水(60～80∶40～20)为流动相，检测波长240～260nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.4.2]对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲20～80μg的溶液，即得。

[2.4.3]供试品溶液的制备 取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，置5～20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.4.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.4.5]制备好的注射剂每支含五味子醇甲应为0.18～1.2mg。

[3]指纹图谱

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[3.1]皂苷类成分指纹图谱

[3.1.1]色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈与水，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(％)
			0205560	10～2025～3545～5510～20	90～8075～6555～4590～80

柱温：20～40℃；分析时间：60～120min；流速：0.6～1.0ml/min；ELSD检测器，漂移管100～120℃，载气流速2～4L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁计算应不低于5000。

[3.1.2]对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品2～10mg，加甲醇溶解并定容至5～25ml，摇匀，制成浓度为0.2～2.0mg/ml的溶液，即得。

[3.1.3]供试品溶液的制备 取制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，加水溶解至2～10ml(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液7～13ml，浓缩成3.5～6.5ml)，分别用5～20ml水饱和正丁醇萃取3～7次，合并正丁醇层，用等量的氨试液洗涤1～2次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用水溶解并定容至2～10ml量瓶中，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.1.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.1.5]结果 共标定出16个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，其相对保留时间分别为：0.057±10％、0.105±10％、0.136±10％、0.436±10％、0.629±10％、0.939±10％、1.000、1.040±10％、1.061±10％、1.088±10％、1.188±10％、1.461±10％、1.540±10％、1.596±10％、1.696±10％、1.735±10％。规定相对保留时间为0.105±10％、0.436±10％、0.629±10％、1.040±10％、1.088±10％的峰的相对峰面积对数比为0.687～1.145、0.632～1.174、0.633～1.176、0.693～1.155、0.637～1.183。

[3.2]非皂苷类成分指纹图谱

[3.2.1]色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈与水(0.05～0.3％H₃PO₄)，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(0.1％H3PO4)(％)
			020405060	0～100～1020～4050～7050～70	100～90100～9080～6030～5050～30

柱温：20～40℃；检测波长：240～260nm；分析时间：60～120min；流速：0.8～1.2ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计应不低于2000。

[3.2.2]对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品2～10mg，置25～50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.2.3]供试品溶液的制备 取制备好的注射剂内容物90～110mg，精密称定，置5～20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液6.5～8.9ml，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度)，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.2.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.2.5]结果 共标定出17个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积作为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.044±10％、0.069±10％、0.120±10％、0.162±10％、0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％、0.500±10％、0.543±10％、0.565±10％、0.615±10％、0.638±10％、0.691±10％、0.710±10％、0.721±10％、1.000、1.028±10％。规定相对保留时间为0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％的峰的相对峰面积比为5.311～8.852、2.262～3.770、1.880～3.492。

所述的一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法，其各具体方法如下：

[1]鉴别

[1.1]人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.6g，加水溶解至10ml(或直接取制备好的注射液10ml)，用等量的水饱和的正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，正丁醇层用等量的氨试液洗涤1次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg₁、Re对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(75∶20∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[1.2]麦冬的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.6g，加5ml水溶解(或直接取制备好的注射液10ml；或取注射液10ml，浓缩成5ml)，加盐酸2ml回流7-10分钟，放冷，溶液加氯仿萃取2次，每次30ml，合并氯仿层，蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取麦冬药材2g，至量瓶中，密塞，加入甲醇，超声(功率250W，频率50kHz)2次，每次20ml，每次30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用10ml水溶解，加盐酸2ml，回流7-10分钟，放冷，加氯仿振摇萃取2次，每次30ml，分取氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[1.3]五味子醇甲的HPLC鉴别：

在“五味子醇甲的含量测定”项下，供试品图谱中有与对照品图谱中主峰相对应的色谱峰。

[2]含量测定

[2.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.1.1]色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-0.1％磷酸溶液(19∶81)为流动相，检测波长203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

[2.1.2]对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的人参皂苷Rg₁及人参皂苷Re对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.3mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液，即得。

[2.1.3]供试品溶液的制备 取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，置5ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.1.4]测定法  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl(注射液进样量为40μl)，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg₁、Re的量之和应为1.0±0.2mg。

[2.2]人参总多糖的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.2.1]对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的葡萄糖对照品20mg于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.2.2]标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8ml，分别置10ml具塞试管中，分别加蒸馏水使成1.0ml，各精密加入新鲜配制的0.2％蒽酮-80％硫酸溶液8ml，摇匀，在100℃水浴中保温10分钟，迅速冷却后，以第一份为空白，照紫外-可见分光光度法在620nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.2.3]供试品溶液的配制 取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，加水2ml溶解后(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液10ml，浓缩成2ml)，加入95％乙醇12ml，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，定容至200ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.2.4]测定法 精密量取上述供试品溶液0.3ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水使成1.0ml”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.2.5]制备好的注射剂每支含人参总多糖以葡萄糖计，应为38±8mg。

[2.3]总皂苷的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.3.1]对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的人参皂苷Re对照品4mg于10ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

[2.3.2]标准曲线的制备 精密量取上述人参皂苷Re对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.5，1.2，1.8ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，加入高氯酸5ml，摇匀，于60℃水浴上加热15min，取出，迅速冷却，以相应的试剂作为空白，照紫外-可见分光光度法于390nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.3.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物65mg，精密称定(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液1ml)，加蒸馏水5ml溶解，置分液漏斗中，用10ml水饱和的正丁醇萃取5次，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇溶解并定容至25ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.3.4]测定法精密量取上述供试品溶液1ml于具塞试管中，照“标准曲线的制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.3.5]制备好的注射剂每支含总皂苷以人参皂苷Re计，应为65±15mg。

[2.4]五味子醇甲的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.4.1]色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇-水(70∶30)为流动相，检测波长250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.4.2]对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲40μg的溶液，即得。

[2.4.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.4.4]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.4.5]制备好的注射剂每支含五味子醇甲应为0.48±0.12mg。

[3]指纹图谱

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[3.1]皂苷类成分指纹图谱

[3.1.1]色谱条件 色谱柱：ODS HYPERSIL C₁₈(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(％)
			0205560	15305015	85705085

柱温：30℃；分析时间：60min；流速：0.8ml/min；ELSD检测器，漂移管110℃，载气流速3.0L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁计算应不低于5000。

[3.1.2]对照品溶液的制备  精确称取干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品5mg，加甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，即得。

[3.1.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，加水溶解至5ml(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液10ml，浓缩成5ml)，分别用10ml水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，用等量的氨试液洗涤1次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用水溶解并定容至5ml量瓶中，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.1.4]测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.1.5]结果共标定出16个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，其相对保留时间分别为：0.057±10％、0.105±10％、0.136±10％、0.436±10％、0.629±10％、0.939±10％、1.000、1.040±10％、1.061±10％、1.088±10％、1.188±10％、1.461±10％、1.540±10％、1.596±10％、1.696±10％、1.735±10％。规定相对保留时间为0.105±10％、0.436±10％、0.629±10％、1.040±10％、1.088±10％的峰的相对峰面积对数比为0.687～1.145、0.632～1.174、0.633～1.176、0.693～1.155、0.637～1.183。

[3.2]非皂苷类成分指纹图谱

[3.2.1]色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈(Φ4.6×150mm)，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水(0.1％H₃PO₄)，梯度条件见下表：

梯度条件

时间(min)	乙腈(％)	水(0.1％H3PO4)(％)
			020405060	00306060	100100704040

柱温：30℃；检测波长：250nm；分析时间：60min；流速：1.0ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计应不低于2000。

[3.2.2]对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品4mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.2.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物100mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液7.7ml，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度)，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.2.4]测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.2.5]结果共标定出17个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积作为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.044±10％、0.069±10％、0.120±10％、0.162±10％、0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％、0.500±10％、0.543±10％、0.565±10％、0.615±10％、0.638±10％、0.691±10％、0.710±10％、0.721±10％、1.000、1.028±10％。规定相对保留时间为0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％的峰的相对峰面积比为5.311～8.852、2.262～3.770、1.880～3.492。

本发明的药物制剂，含有人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分，可以添加起协同作用的药物，更好的保留和发扬了传统古方“生脉散”的优良药效，同时提供了先进的质量控制方法，如指纹图谱技术，对原药材、制剂成品进行更好的质量控制，使本发明的药物制剂的质量稳定可控，一改中药制剂的质量可控性较差的缺点。能发挥更好的临床疗效，为临床使用提供更多更好的用药选择。

同时发明的人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱可以用于人参、麦冬、五味子的质量控制，可以用于一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂的质量控制，可以用于制剂原料中含有人参、麦冬、五味子中的一种或一种以上药材的制剂的质量控制。

本发明的口服固体制剂携带服用方便，大幅减少了药物体积，改变了传统中药量大、携带服用不便的缺点；本发明的注射剂的有效成分的种类保留合适，能更好的发扬古方的疗效，起效迅速；其中发明的注射用冻干制剂储存时间更长，性质更稳定。同时本发明人通过大量的正交筛选实验，优选适宜的制备方法，在本发明中可以采用超滤技术，除去大分子杂质，也可以再除去小分子杂质，更好的保证制剂的稳定性。

同时本发明的药物制剂的制备方法不繁琐，可以较好的控制成本。制成的制剂性质稳定，质量可控，可口服给药或注射给药。具有益气养阴、复脉固脱作用，可用于治疗气阴两亏，脉虚欲脱的心悸、气短，四肢厥冷、汗出、脉欲绝及心肌梗塞、心源性休克、感染性休克等具有上述证候者及其它原“生脉散”所治疾病。能为临床使用提供更多更好的用药选择。

本发明药物制剂的主要药效学实验表明本发明的药物制剂具有优良的药理作用。

从本发明的药物制剂中的注射用冻干制剂的主要药效学实验中可以看出，本发明制得的“注射用生脉(冻干)”，主要药效学实验表明在同等剂量下，其升高血压作用明显优于目前市场上销售的生脉注射液(江苏苏中药业股份有限公司生产，20ml/支，批号：040912)。证明了本发明的有益效果。

具体实施方式

下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容做进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明的技术特征所作的同等替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。

实施例1

处方：

	处方1		处方2		处方3
						人参(红参/生晒参)	1000g	人参(红参/生晒参)	950g	人参(红参/生晒参)	1100g
麦冬	3120g	麦冬	3200g	麦冬	3000g
						五味子	1560g	五味子	1520g	五味子	1510g
淀粉	275g	淀粉	297g	淀粉	319g
						糖粉	137.5g	糊精	115.5g	乳糖	93.5g
微晶纤维素	110g	微晶纤维素	110g	微晶纤维素	110g
						羧甲基淀粉钠	27.5g	羧甲基淀粉钠	27.5g	羧甲基淀粉钠	27.5g
95％乙醇	适量	95％乙醇	适量	95％乙醇	适量
						硬脂酸镁(颗粒剂可以不使用)	5.5g	硬脂酸镁(颗粒剂可以不使用)	5.5g	硬脂酸镁(颗粒剂可以不使用)	5.5g
制成	3000袋颗粒/或3000片/或3000粒胶囊

制备方法：

(1)人参的处理：将人参切片，分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，药液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.5g，每次加入1倍量的水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.5～7.5，即得人参的皂苷类成分中间体，备用；

(2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为0.8g生药/ml，温度为40℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，粉碎，加适量水溶解后，冷藏，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为2.0g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量注射用水溶解后，离心，取上清液，

上一步所得上清液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

(3)麦冬的处理：麦冬加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮提取或回流提取2小时，再分别加8倍量水煎煮提取或回流提取2次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，调整药液的相对密度为1.3(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.18(相对密度为药液温度为30℃时值)，每次加入2倍量的水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.5～7.5，即得麦冬的皂苷类成分中间体，备用；

(4)五味子的处理：五味子粉碎，分别加8倍量水(第一次因为是干药材，多加1.5倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，分别收集水蒸气馏出液(收集或不收集)和水提液，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为1.4g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，醇液调节pH值至7.7，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度为5.0g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过，精滤(过0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.5～7.5，即得五味子中间体，备用；

(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)；浓缩成清膏，

(6)将除95％乙醇、硬脂酸镁外的辅料过60～80目筛，混匀，与“(5)”所得物混匀，加入适量的95％乙醇，制成软材，挤压过20～24目筛制粒，40℃至65℃干燥1h至4h，过20目筛整粒，

(7)将“(6)”所得颗粒按剂量分装，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的颗粒剂。

(8)将“(6)”所得颗粒加入硬脂酸镁，混匀，压片，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的片。

(9)将“(8)”所得片包薄膜衣或包糖衣，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的薄膜衣片或糖衣片。

(10)将“(6)”所得颗粒加入硬脂酸镁，混匀，填充至胶囊，然后将所得胶囊抛光，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的胶囊。

(备注：1、本制备方法中调节pH值使用1mol/L或2mol/L氢氧化钠溶液，和使用1mol/L或2mol/L盐酸溶液。2、调整药液浓度采用浓缩和/或稀释。)

实施例2

处方：

	处方4	处方5	处方6	处方7	处方8
						人参(红参)	500g	1000g	1000g	1000g	2000g
麦冬	1560g	3120g	3120g	3120g	6240g
						五味子	780g	1560g	1560g	1560g	3120g
加纯化水或注射用水至	5000ml	5000ml	10000ml	20000ml	20000ml
						制成	1000支口服液

	处方9	处方10	处方11	处方12	处方13
						人参(红参)	500g	1000g	1000g	1000g	2000g
麦冬	1560g	3120g	3120g	3120g	6240g
						五味子	780g	1560g	1560g	1560g	3120g
加注射用水至	5000ml	5000ml	10000ml	20000ml	20000ml
						制成	1000支注射液

	处方14	处方15	处方16	处方17	处方18
						人参(红参)	1000g	1000g	1000g	1000g	1000g
麦冬	3120g	3120g	3120g	3120g	3120g
						五味子	1560g	1560g	1560g	1560g	1560g
甘露醇	280g	292g	302g	350g	400g
						加注射用水至	3000ml	3000ml	3000ml	3000ml	3000m1
制成	1000支注射用冻干制剂

	处方19	处方20	处方21	处方22	处方23
						人参(红参)	1100g	1200g	1500g	900g	800g
麦冬	3100g	3050g	2900g	3150g	3200g
						五味子	1500g	1450g	1300g	1630g	1680g
甘露醇	280g	290g	295g	300g	350g
						加注射用水至	3000ml	3000ml	3000ml	3000ml	3000ml
制成	1000支注射用冻干制剂

	处方24	处方25	处方26	处方27	处方28
						人参(红参)	1000g	1000g	1000g	1000g	1000g
麦冬	3120g	3120g	3120g	3120g	3120g
						五味子	1560g	1560g	1560g	1560g	1560g
山梨醇	290g	300g	320g	350g	400g
						加注射用水至	3000ml	3000ml	3000ml	3000ml	3000ml
制成	1000支注射用冻干制剂

制备方法：

备注：本实施例中同类制剂处方的制备方法相同。

(1)人参的处理：将人参切片，分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，药液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.5g，每次加入1倍量的水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，调节pH值至6.5～7.5，即得人参的皂苷类成分中间体，备用；

(2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为0.8g生药/ml，温度为40℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，粉碎，加适量水溶解后，冷藏，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为2.0g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量注射用水溶解后，离心，取上清液，

上一步所得上清液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服液体制剂的制备；

或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

(3)麦冬的处理：麦冬加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮提取或回流提取2小时，再分别加8倍量水煎煮提取或回流提取2次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，调整药液的相对密度为1.3(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.18(相对密度为药液温度为30℃时值)，每次加入2倍量的水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，调节pH值至6.5～7.5，即得麦冬的皂苷类成分中间体，备用；

(4)五味子的处理：五味子粉碎，分别加8倍量水(第一次因为是干药材，多加1.5倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，分别收集水蒸气馏出液(收集或不收集)和水提液，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为1.4g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，醇液调节pH值至7.7，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度为5.0g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，调节pH值至6.5～7.5，即得五味子中间体，备用；

(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；加纯化水或注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.5～7.5，(滤过)，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至管制口服液瓶/或其它口服液包装容器中，封口，热压灭菌/或流通蒸气灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的口服液。

(6)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.5～7.5，(滤过)，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸30分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.5～7.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，按剂量分装至安瓿/或其它注射液包装用容器中，封口，流通蒸气灭菌/或热压灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液。

(7)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入处方量的甘露醇/或山梨醇，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.5～7.5，(滤过)，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸30分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.5～7.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，按剂量无菌分装至各管制注射剂玻璃瓶中，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射用冻干制剂。

(8)冷冻干燥工艺如下：

a预冻阶段：普通预冻，预冻温度-60℃～-45℃，预冻时间约2.5～7小时。或选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃；回温温度-22℃～-19℃，保温1.5～3小时；再将产品温度降至-56℃～-45℃，保温2～5小时。

b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-22℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。

c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～22℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。

(备注：1、本制备方法中调节pH值使用1mol/L或2mol/L氢氧化钠溶液，和使用1mol/L或2mol/L盐酸溶液。2、调整药液浓度采用浓缩和/或稀释。)

实施例3

处方：

	处方29	处方30
			人参(红参)	1000g	1000g
麦冬	3120g	3120g
			五味子	1560g	1560g
甘露醇	290g	300g
			加注射用水至	3000ml	3000ml
制成	1000支注射用冻干制剂

制备方法：

(1)人参的处理：将人参切片，分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，药液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.5g，每次加入1倍量的水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，调节pH值至6.5～7.5，即得人参的皂苷类成分中间体，备用；

(2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为0.8g生药/ml，温度为40℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，粉碎，加适量水溶解后，冷藏，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为2.0g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量注射用水溶解后，离心，取上清液，先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

(3)麦冬的处理：麦冬加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮提取或回流提取2小时，再分别加8倍量水煎煮提取或回流提取2次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，调整药液的相对密度为1.3(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.18(相对密度为药液温度为30℃时值)，每次加入2倍量的水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，调节pH值至6.5～7.5，即得麦冬的皂苷类成分中间体，备用；

(4)五味子的处理：五味子粉碎，分别加8倍量水(第一次因为是干药材，多加1.5倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为1.4g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，醇液调节pH值至7.7，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度为5.0g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，调节pH值至6.5～7.5，即得五味子中间体，备用；

(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体，混匀；药液加入处方量的甘露醇，加注射用水调整体积至约2980ml，调节pH值至6.5～7.5，(滤过)，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸30分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至约2980ml，调节pH值至6.5～7.5，加注射用水调整体积至3000ml，测pH值，精滤(过0.45μm微孔滤膜)，无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含3ml药液，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射用冻干制剂。本实施例制得的一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射用冻干制剂又称“注射用生脉(冻干)”。

(6)冷冻干燥工艺如下：

a预冻阶段：选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃；回温温度-21℃～-19℃，保温2～3小时；再将产品温度降至-56℃～-45℃，保温2～4小时。

b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-21℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。

c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～22℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。

(备注：1、本制备方法中调节pH值使用1mol/L氢氧化钠溶液和1mol/L盐酸溶液。2、调整药液浓度采用浓缩和/或稀释。)

实施例4

以下是本发明的药物制剂中的注射用冻干制剂的主要药效学试验。

1实验目的及内容

根据注射用生脉(冻干)的临床用途，在动物上进行主要药效学验证，主要进行以下实验：注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠的治疗作用；注射用生脉(冻干)对感染性休克大鼠的治疗作用；注射用生脉(冻干)对心源性休克犬的治疗作用及对心脏血流动力学、血氧含量的影响；注射用生脉(冻干)的增强免疫功能试验；注射用生脉(冻干)对家兔血液流变性的影响。

2注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠的治疗作用

2.1.实验材料及主要仪器

2.1.1受试药物：注射用生脉(冻干)(浓缩液)，由天津市轩宏医药技术有限公司提供，含生药材2.272g/ml，批号20040720，采用本发明实施例3中的处方30和制备方法制成；

2.1.2现有制备工艺制剂成品对照药：生脉注射液，江苏苏中药业股份有限公司生产，20ml/支，批号：040912；

2.1.3阳性药：重酒石酸去甲肾上腺素注射液，天津金耀氨基酸有限公司生产，1ml:2mg，批号：040508；

2.1.4动物：清洁级SD大鼠，250～300g，♀♂兼有，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号：SCXK(沪)2002-0010；

2.1.5SEL型大鼠层流架：洁净度＜1万，苏州吴县实验动物设施设备厂生产；

2.1.6PB303-N电子精密天平：梅特勒-托利多仪器(上海)公司；

2.1.70.9％氯化钠注射液：2.25g/250ml，南京市小营制药厂生产，批号2004060701；

2.1.8动物饲养环境：SPF级，合格证号：SYXK(苏)2002-0007；

2.1.9MP-100多道生理信号分析系统，美国进口。

2.2实验方法

取清洁级大鼠80只，随机分成8组，每组10只，雌雄兼有，分别为伪手术对照组、模型对照(失血)组、阳性药对照(去甲肾上腺素)组、注射用生脉(冻干)大、中、小剂量组、生脉注射液对照组、注射用生脉(冻干)口服对照组。分别简称为：空白组、模型组、阳性药组、大剂量组、中剂量组、小剂量组、生脉注射液对照组、口服组。各组的平均体重为：

组别	动物数(只)	平均体重(g)
			伪手术对照组模型对照组阳性药对照组注射用生脉(冻干)大剂量组	10101010	350±13368±25352±26350±31

注射用生脉(冻干)中剂量组注射用生脉(冻干)小剂量组生脉注射液对照组口服对照组

10101010

354±22355±81363±33390±28

实验前禁食不禁水12h，实验时腹腔注射3.5％戊巴比妥钠1.0ml/kg麻醉后，进行颈部手术，暴露气管，做气管插管；同时分离右侧颈总动脉，插入充满肝素生理盐水溶液的动脉插管，连接TSD-104A型压力换能器，并与MP-100型多道生理记录仪相联，观察10min左右，待血压平稳后记录正常血压曲线，记录血压(SAP、DAP、MAP)和心率，然后开始造模。除伪手术对照组外，其余各组大鼠均从动脉插管处放血4～6ml，使动物收缩压(SAP)降至大鼠正常值约1/3时，稳定5～10分钟，制成大鼠失血性休克模型。除口服组大鼠十二指肠插管给药0.2ml/100g(剂量同大剂量组)外，其余各组动物均静脉注射给药0.2ml/100g，空白组和模型组注射等体积生理盐水，阳性药组注射去甲肾上腺素30ug/kg，注射用生脉(冻干)大剂量组静脉注射的剂量为2.4g生药/kg(按体重计，约相当于拟临床人用量的12倍)，中剂量组1.2g生药/kg，小剂量组0.6g生药/kg。均将供试品配成一定浓度后，按2.0ml/kg的给药量注射给药，以避免因注射容积不同引起的血压偏差。生脉注射液对照组注射生脉注射液2.0ml/kg(按生药材量计算，与粉针剂中剂量组的剂量相仿)。分别记录造模前正常、造模失血后10min、药后5、10、20、30、45、60、90min的血压(SAP、DAP、MAP)和心率的变化，计算造模后的下降百分率和给药后的上升百分率。实验结果与模型对照组进行组间及造模、给药前后自身t检验统计学比较。

2.3实验结果(见表1～表4。)

表1注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠SAP(mmHg)的影响(

，n＝10)

组别	剂量(g/kg)	造模前	造模后10min(下降率)	药后5min(增加率)	药后10min(增加率)
						空白组模型组阳性药组大剂量	2.0ml2.0ml3×10-52.4	150.1±13.5/159.8±21.7▲▲▲/159.3±16.9▲▲▲/159.6±17.2▲▲▲	147.9±13.5***(1.4％)48.8±9.7(69.5％)51.3±9.0(67.8％)55.3±14.8	148.2±13.4***(0.2％)58.2±14.3▲(19.4％)96.4±34.2**▲▲(87.7％)103.7±20.0***▲▲▲	148.5±14.7***(0.4％)50.1±8.0(2.7％)90.1±29.0***▲▲(75.5％)106.6±16.0***▲▲▲

中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组

1.20.62.0ml2.4

/160.5±19.0▲▲▲/162.6±20.1▲▲▲/160.6±9.2▲▲▲/158.9±19.2▲▲▲/

(65.3％)53.6±11.0(66.6％)57.9±12.2(64.4％)55.1±9.4(65.7％)59.8±13.8(62.4％)

(87.4％)91.2±30.9**▲▲(70.0％)67.7±22.3(17.0％)90.1±19.4***▲▲▲(63.4％)69.7±19.5(16.7％)

(92.7％)101.7±26.9***▲(89.7％)65.6±20.0*(13.2％)74.9±19.1**▲(35.9％)69.4±22.6(16.1％)

注：与模型组比较，^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001；

与造模后自身比较，_▲：P＜0.05；_▲▲：P＜0.01；_▲▲▲：P＜0.001。下同。(续上表)

组别	药后20min(上升率)	药后30min(上升率)	药后45min(上升率)	药后60min(上升率)	药后90min(上升率)
						空白组模型组阳性药组大剂量组中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组	150.1±14.0***(1.5％)57.7±13.0(18.3％)100.7±24.7***▲▲▲(96.3％)109.1±23.2***▲▲▲(97.2％)102.4±26.6***▲▲▲(90.9％)69.1±18.2▲(19.4％)85.6±19.5**▲▲(55.3％)76.8±25.0*▲(28.5％)	152.8±14.9***(3.3％)56.4±13.1(15.7％)102.0±25.7***▲▲▲(98.8％)113.0±24.7***▲▲▲(104.3％)106.2±13.8***▲▲▲(98.1％)731±17.2*▲▲(26.3％)84.7±15.1***▲▲▲(53.6％)81.2±28.3*▲(35.9％)	149.8±13.3***(1.3％)52.3±9.2(7.4％)102.9±22.9***▲▲▲(100.6％)110.7±25.8***▲▲▲(100.0％)95.6±12.4***▲▲▲(78.3％)73.0±16.8**▲(26.1％)94.6±23.4***▲▲(71.7％)76.0±283*(27.1％)	147.8±14.0***(-0.1％)52.3±14.0(7.2％)114.9±16.8***▲▲▲(123.9％)113.5±22.7***▲▲▲(105.1％)98.1±21.3***▲▲▲(82.9％)76.3±13.2***▲(31.8％)99.1±18.7***▲▲▲(79.8％)78.1±33.2*(30.7％)	149.8±15.2***(1.2％)46.9±10.2(-3.8％)115.0±16.1***▲▲▲(124.0％)113.0±20.3***▲▲▲(104.2％)106.2±24.3***▲▲▲(98.2％)75.2±16.5***▲(29.8％)97.2±29.5***▲▲(76.4％)79.4±35.6*(32.9％)

2.3.1对失血性休克模型大鼠SAP的影响：

模型组造模后10min至药后90min各时间点的SAP明显低于空白对照组(P＜0.001)，但静脉注射等体积生理盐水(NS)后，可能是血容量有所增加，给药后5min模型组的SAP有所回升(P＜0.05)，但升幅＜20％，无实际评价意义；其余各时间点SAP与造模后10min自身比较无显著性差异(P＞0.05)。各给药组动物造模后10min的SAP明显降低(P＜0.001)，平均下降66％左右，并稳定在相当于造模型前的1/3水平，此时各组SAP与模型组之间无显著差异(P＞0.05)。注射用生脉(冻干)大、中剂量组在药后5、10、20、30、45、60、90min，小剂量20、30、45、60、90min时的SAP均明显上升(P＜0.05～0.001)，其中大剂量组的升幅在87～105％之间，作用强度与静脉注射30ug/kg去甲肾上腺素的阳性药组相当。中剂量组的升幅在70～98％之间，SAP升高作用十分显著。小剂量组的升幅在13～32％之间，作用稍次，表明其对SAP的升高作用呈一定的剂量依赖性。口服组的剂量与注射给药大剂量组的剂量相当，但升血压作用不明显，平均升压幅度仅在16～36％之间，但在给药后20～30min时比模型对照组有明显升高(P＜0.05)。生脉注射液对照组静脉注射给药后大鼠的SAP也有明显上升(P＜0.05～0.001)，但作用强度稍次于与其剂量(按生药材计算)相当的中剂量组，平均升高幅度在36～80％之间。

表2注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠DAP(mmHg)的影响(，n＝10)

组别	剂量(g/kg)	造模前	造模后10min(下降率％)	药后5min(增加率％)	药后10min(增加率％)
						空白组模型组阳性药组大剂量组中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组	2.0ml2.0ml3×10-52.41.20.62.0ml2.4	117.7416.4/119.3±13.3▲▲▲/118.3±17.7▲▲▲/114.1±15.9▲▲▲/108.3±16.6▲▲▲/120.4±12.7▲▲▲/123.2±8.1▲▲▲/113.2±18.1▲▲▲/	108.8±23.9***(7.5％)26.4±7.3(77.8％)30.5±13.6(74.2％)28.1±10.7(75.4％)27.6±6.6(74.5％)27.9±7.2(76.8％)33.5±9.5(72.8％)29.4±12.6(74.1％)	114.1±18.1***(4.8％)31.5±9.8▲▲(19.4％)62.7±28.8**▲▲(105.6％)65.8±21.6***▲▲▲(134.3％)55.1±25.0*▲▲(99.6％)35.4±16.3(26.9％)58.2±20.5**▲▲(73.6％)40.2±18.4▲(37.0％)	113.3±19.2***(4.2％)28.2±8.3(6.8％)58.1±27.0**▲▲(90.4％)68.1±18.0***▲▲▲(142.5％)62.3±24.5***▲▲(125.8％)33.9±13.5(21.4％)44.8±17.1*▲(33.6％)39.2±16.3(33.7％)

注：与模型组比较，^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001；

与造模后自身比较，_▲：P＜0.05；_▲▲：P＜0.01；_▲▲▲：P＜0.001。下同。

(续上表)

组别

药后20min(增加率％)

药后30min(增加率％)

药后45min(增加率％)

药后60min(增加率％)

药后90min(增加率％)

空白组模型组阳性药组大剂量组中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组

114.0±16.2***(4.8％)32.9±11.3(24.3％)66.4±24.4***▲▲▲(117.7％)72.9±23.9***▲▲▲(159.4％)62.0±22.4**▲▲(124.5％)36.6±12.9▲(31.1％)52.2±15.5**▲▲(55.7％)44.1±19.8▲(50.1％)

114.4±22.4***(5.1％)31.7±10.8(19.8％)64.6±24.4***▲▲▲(111.9％)77.4±25.0***▲▲▲(175.4％)63.0±14.3***▲▲▲(128.3％)39.6±14.9▲▲(41.9％)50.5±13.0**▲▲(50.9％)48.6±25.1▲(65.6％)

112.8±15.3***(3.66％)28.2±7.6(6.7％)66.6±24.2***▲▲▲(118.3％)73.6±26.4***▲▲▲(161.7％)53.8±10.4***▲▲▲(95.1％)38.5±10.9*▲▲(37.7％)55.7±21.1**▲▲(66.3％)51.8±22.5**▲▲(76.3％)

110.9±17.9***(1.9％)28.6±11.4(8.2％)74.3±18.2***▲▲▲(143.6％)75.6±25.8***▲▲▲(169.0％)50.8±13.5***▲▲▲(83.9％)39.2±10.6*▲(40.2％)59.2±21.3***▲▲▲(76.8％)45.8±29.2(55.8％)

112.4±19.4***(3.3％)24.3±7.3(-7.9％)75.8±14.9***▲▲▲(148.4％)74.1±19.3***▲▲▲(163.8％)60.3±19.1***▲▲▲(118.3％)39.7±10.4**▲(42.1％)56.2±27.9**▲(67.7％)48.5±31.5*(65.1％)

2.3.2对失血性休克大鼠DAP的影响：

模型组造模后10min至药后90min各时间点的DAP明显低于空白对照组(P＜0.001)，模型组给药后5min的DAP有所回升(P＜0.01)，但升幅＜20％，无实际意义，其它各时间点DAP与造模后10min自身比较无差异(P＞0.05)，各组动物造模后10min的DAP明显低于造模型前(P＜0.001)，此时各组DAP与模型组之间无显著差异(P＞0.05)。注射用生脉(冻干)大、中剂量组在药后5、10、20、30、45、60、90min，小剂量组在20、30、45、60、90min的DAP均明显上升(P＜0.05～0.001)。大剂量组的DAP平均升高幅度超过150％，稍高于静脉注射30ug/kg去甲肾上腺素的阳性对照组(平均升幅低于120％)，也明显优于同剂量的口服对照组(平均升幅50％左右)。中剂量组的DAP平均升高幅度在110％左右，而剂量相近的生脉注射液对照组的平均升高幅度约60％，说明本实验使用的注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠DAP的升高作用优于本实验使用的生脉注射液。小剂量组的DAP平均升高幅度在40％左右，亦体现出一定的剂量依赖性。本实验使用的注射用生脉(冻干)对DAP的升高幅度高于SAP的上升幅度，这在临床治疗上也有一定实际意义，有利于休克患者血压的恢复。

表3注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠MAP(mmHg)的影响(

，n＝10)

组别	剂量(g/kg)	造模前	造模后10min(下降率％)	药后5min(增加率％)	药后10min(增加率％)
						空白组	2.0ml	128.5±15.0/	121.8±19.4***(5.2％)	125.4±16.2***(2.9％)	125.1±17.5***(2.6％)

模型组阳性药组大剂量组中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组

2.0ml3×10-52.41.20.62.0ml2.4

132.8±15.8▲▲▲/123.6±29.9▲▲▲/129.2±15.9▲▲▲/125.7±17.1▲▲▲/134.5±14.0▲▲▲/135.7±7.6▲▲▲/128.4±17.5▲▲▲/

33.9±7.8(74.5％)37.4±10.4(69.7％)37.2±11.7(71.2％)36.3±7.9(71.1％)37.9±8.1(71.8％)40.7±7.0(70.0％)39.5±12.6(69.3％)

40.4±11.1▲▲(19.4％)73.9±30.4**▲▲(97.5％)78.5±20.8***▲▲▲(111.0％)67.1±26.7**▲▲(85.0％)46.2±17.9(21.9％)68.8±20.0***▲▲▲(69.0％)50.1±18.3▲(26.7％)

35.5±7.8(4.8％)68.7±27.5**▲▲(83.6％)81.0±16.9***▲▲▲(117.8％)75.4±25.0***▲▲▲(108.0％)44.5±15.2(17.3％)54.8±17.6**▲(34.6％)46.8±20.1(18.6％)

注：与模型组比较，^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001；

与造模后自身比较，_▲：P＜0.05；_▲▲：P＜0.01；_▲▲▲：P＜0.001。下同。

(续上表)

组别	药后20min(增加率％)	药后30min(增加率％)	药后45min(增加率％)	药后60min(增加率％)	药后90min(增加率％)
						空白组模型组阳性药组大剂量组中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组	126.1±15.2***(3.5％)41.1±11.6(21.4％)77.9±24.2***▲▲▲(107.9％)85.0±23.5***▲▲▲(128.5％)75.4±23.4***▲▲(108.0％)47.4±14.2▲(25.1％)63.3±16.6**▲▲(55.6％)55.0±21.2▲(39.2％)	127.2±19.0***(4.4％)39.9±11.3(17.9％)77.1±24.1***▲▲▲(105.9％)89.3±24.5***▲▲▲(140.1％)77.4±13.9***▲▲▲(113.4％)50.8±15.1▲▲(34.0％)61.9±13.5***▲▲▲(52.1％)59.5±25.8*▲(50.6％)	125.1±13.8***(2.7％)36.2±7.5(7.0％)78.7±23.5***▲▲▲(110.26％)85.9±25.9***▲▲▲(131.1％)67.8±10.8***▲▲▲(86.8％)50.0±12.5**▲(31.9％)68.7±21.7***▲▲(68.7％)59.8±23.2**▲(51.5％)	123.2±16.2***(1.1％)36.5±11.8(7.7％)87.9±17.6***▲▲▲(134.6％)88.2±24.2***▲▲▲(137.4％)66.5±15.4***▲▲▲(83.4％)51.5±10.8**▲(35.9％)79.2±19.9***▲▲▲(78.1％)56.5±30.2(43.2％)	124.8±17.5***(2.4％)31.9±7.6(-5.9％)88.8±14.6***▲▲▲(137.2％)87.1±19.0***▲▲▲(134.3％)75.6±20.8***▲▲▲(108.4％)51.5±12.0***▲(35.8％)69.9±28.0***▲▲(71.7％)58.8±32.7*(48.8％)

2.3.3对失血性休克大鼠MAP的影响：

模型组造模后10min至药后90min各时间点的MAP明显低于空白对照组(P＜0.001)，模型组给药后5minMAP有所回升(P＜0.01)，但升幅也＜20％，无实际意义，其它各时间点MAP与造模后10min自身比较无差异(P＞0.05)，各组动物造模后10min的MAP明显低于造模型前(P＜0.001)，此时各组MAP与模型组之间无显著差异(P＞0.05)。注射用生脉(冻干)大、中剂量组在药后5、10、20、30、45、60、90min，小剂量20、30、45、60、90min MAP均明显上升(P＜0.05～0.001)。其升高情况与SAP、DAP的变化情况基本一致。

表4注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠HR(beats/min)的影响(

，n＝10)

组别	剂量(g/kg)	造模前	造模后10min(下降率％)	药后5min(增加率％)	药后10min(增加率％)
						空白组模型组阳性药组大剂量组中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组	2.0ml2.0ml3×10-52.41.20.62.0ml2.4	378±62/394±46▲▲▲/376±42▲▲▲/365±35▲▲▲/373±27▲▲▲/381±34▲▲▲/427±26▲▲▲/402±61▲▲/	345±53(6.7％)316±42(19.7％)308±52(18.2％)275±48(24.7％)318±40(14.7％)289±36(24.1％)342±42(19.7％)344±63(14.3％)	380±82(10.2％)340±25(7.5％)343±42(11.3％)300±35*▲(9.1％)323±39(1.3％)284±29***(-1.9％)387±40**▲▲(13.0％)375±64(8.9％)	370±75(7.2％)323±41(2.1％)335±41(9.0％)314±41▲(14.1％)326±46(2.3％)276±18***(-4.5％)373±36**(8.9％)370±58(7.5％)

注：与模型组比较，^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001；

与造模后10min自身比较，_▲：P＜0.05；_▲▲：P＜0.01；_▲▲▲：P＜0.001。下同。

(续上表)

组别	药后20min(增加率％)	药后30min(增加率％)	药后45min(增加率％)	药后60min(增加率％)	药后90min(增加率％)
						空白组模型组	357±64(3.5％)316±35(0.1％)	360±73(4.3％)318±37(0.8％)	368±92(6.6％)312±42(-1.3％)	360±95(4.4％)313±38(-0.8％)	367±94(6.5％)302±54(-4.5％)

阳性药组大剂量组中剂量组小剂量组生脉注射液对照组口服组

340±43(10.5％)334±50▲(21.4％)331±56(3.8％)288±30(-0.4％)368±29**(7.4％)364±28*(5.8％)

340±38(10.5％)333±48▲▲(21.2％)327±57(2.8％)287±33(-0.6％)376±22***(9.7％)362±61(5.2％)

323±49(7.2％)335±47▲(21.7％)331±50(4.0％)292±37(0.8％)387±25***▲(13.0％)360±60(4.5％)

336±43(9.2％)326±45▲(18.5％)331±51(-5.5％)295±37(2.0％)393±32***▲(14.7％)361±82(4.8％)

337±51(9.4％)313±47(13.8％)324±55(1.9％)279±51(2.9％)371±44**(8.3％)358±89(4.0％)

2.3.4对失血性休克大鼠HR的影响：

各组动物造模后10min的心率明显低于造模型前(P＜0.01～0.001)，此时各组HR与模型组之间无显著差异(P＞0.05)。注射用生脉(冻干)大剂量组在药后5、10、20、30、45、60min的HR与造模后10min自身比较有明显增加(P＜0.05～0.01)，但增加的平均幅度也低于20％，且仍低于造模前的正常水平，除给药后5min时HR有明显低于相同时刻的模型对照组外，其它时间点与模型组比较亦未见显著性统计学差异。生脉注射液对照组给药后的心率变化情况与大剂量组相仿，其余各给药组也基本未见有实际意义的明显改变。表明本实验使用的注射用生脉(冻干)有一定的强心作用，但不至于增加心脏的负担，如引起耗氧量增加等。

2.4小结

用大鼠动脉插管放血制成大鼠失血性休克模型后，与模型对照组比较，注射用生脉(冻干)大、中剂量组在药后5、10、20、30、45、60、90min，小剂量20、30、45、60、90min的SAP、DAP、MAP均有明显上升(P＜0.05～0.001)，且对DAP的升高幅度高于SAP的上升幅度，这有利于临床休克患者血压的恢复。注射用生脉(冻干)大剂量组在药后5、10、20、30、45、60min的HR与造模后10min自身比较虽有明显增加(P＜0.05～0.01)，但增加的平均幅度也低于20％，且仍低于造模前的正常水平。实验结果表明，注射用生脉(冻干)对失血性休克大鼠的血压(SAP、DAP、MAP)有明显的升高作用，可推荐用于治疗失血性休克，且注射用生脉(冻干)的升高血压作用明显优于生脉注射液对照组。

3注射用生脉(冻干)对感染性休克大鼠的治疗作用

实验结果表明本品大剂量使用后可抑制因感染引起的心率下降，有一定的强心作用。实验结果提示本品注射给药后对感染性休克大鼠有明显的升血压作用。

4注射用生脉(冻干)对心源性休克犬的治疗作用及对心脏血流动力学、血氧含量的影响

应用麻醉犬开胸结扎左冠状动脉前降支作为心源性休克动物模型，注射用生脉(冻干)按2.4和0.6g生药/kg的剂量静脉注射给药后，观察对麻醉犬心源性休克的抗休克作用，同时观察对血流动力学及血氧代谢的影响。实验结果表明：注射用生脉(冻干)静脉滴注快速给药后，大、小剂量组家犬的SAP、DAP、MAP比模型组均有显著升高(P＜0.05～0.01)，基本与伪手术组(未结扎冠状动脉)动物的血压水平持平，对心率则未见明显的影响，表明其对心源性休克犬有明显的抗休克作用。血流动力学试验表明，本品能升高心源性休克犬的LVSP和+dp/dt max，使大剂量组的LVEDP明显下降，同时总外周阻力(TPVR)也有明显的上升，其它和血流动力学指标均未见明显的改变，表明本品的抗休克作用可能是增强心脏的收缩功能和正向肌力，同时收缩外周血管而产生的。

由于本试验为一次给药的急性试验，故实验中未能观察到本品对血氧含量的的明显影响，犬动脉血液中的血气指标均未见明显的改变。

给药后家犬血清中SOD含量升高，LDH、CK-MB的活性明显受到抑制，表明对缺血心肌有一定的保护作用，可缓解心源性休克犬心肌缺血状态，改善休克犬的心脏功能。

5注射用生脉(冻干)的增强免疫功能试验

注射环磷酰胺(CTX)造成小鼠免疫功能低下模型，注射用生脉(冻干)按4.8、2.4、1.2g生药/kg的剂量连续8天腹腔注射给药，观察对小鼠免疫功能和血清SOD、MDA、GSH-Px的作用。实验结果表明：注射用生脉(冻干)注射给药后可提高T淋巴细胞酯酶染色率，提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及血清溶血素水平，抵制CTX对主要免疫器官(胸腺、脾)的抑制等，表明可提高免疫功能抑制小鼠的免疫功能。小鼠血清SOD、MDA、GSH-Px检测结果表明：注射用生脉(冻干)能升高受CTX抑制的小鼠的SOD、GSH-Px活力，降低血清MDA含量，促进造模小鼠体内氧自由基的代谢。实验结果提示本品有一定的增强机体免疫功能的作用。

6注射用生脉(冻干)对家兔血液流变性的影响

家兔静脉注射高分子右旋糖酐造成血瘀模型。连续10天静脉注射注射用生脉(冻干)1.44、0.72、0.36g生药/kg后，与模型组比较，各组家兔在切变率为120s^-1、40s^-1时所测的全血粘度未见显著改变(P＞0.05)，而在8s^-1时中剂量组的全血粘度明显降低(P＜0.05)；给药大、中剂量组及阳性对照组的血浆粘度明显降低(P＜0.05)；大、中、小剂量组及阳性对照组的血沉明显下降(P＜0.05)、压积明显增高(P＜0.05)；大、中剂量组及阳性对照组的纤维蛋白原则明显升高(P＜0.05～0.01)。口服对照组的主要血液流变学指标基本未见明显改变(P＞0.05)。实验结果表明：注射用生脉(冻干)能明显改善血瘀模型家兔的血液流变学指标，具有一定的活血化瘀作用。

由本主要药效学实验结果可知，按本发明处方和制备方法制得的“注射用生脉(冻干)”，主要药效学实验表明在同等剂量下，其升高血压作用明显优于目前市场上销售的生脉注射液。证明了本发明的有益效果。

实施例5

取红参/或麦冬/或五味子，按“发明内容”中“一种人参、麦冬、五味子的质量控制方法”中“人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱”中“人参药材指纹图谱”/或“麦冬药材指纹图谱”/或“五味子药材指纹图谱”中的方法进行检测，符合该指纹图谱中的规定。

实施例6

取本发明实施例中所使用的红参/或麦冬/或五味子，按“发明内容”中“一种人参、麦冬、五味子的质量控制方法”中“人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱”中“人参药材指纹图谱”/或“麦冬药材指纹图谱”/或“五味子药材指纹图谱”中的方法进行检测，符合该指纹图谱中的规定。

实施例7

取实施例2中处方11按相应的制备方法(保留了5K～500K分子量的人参中的多糖类成分)制成的注射液，按“发明内容”中“一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法”中的方法进行检测，符合该质量控制方法中的规定。

实施例8

取实施例3中处方30所使用的原料和所得制剂，按“发明内容”中“一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法”中的方法进行检测，符合该质量控制方法中的规定。

Claims (17)

1.一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂，其特征在于所述制剂中含有人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分。

2.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所述药物制剂的原料主要为人参、麦冬、五味子，人参∶麦冬∶五味子的比例为1～400∶1～400∶1～400，或50～200∶100～360∶75～300，或75～150∶160～350∶100～230，或100∶312∶156。

3.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所述人参、麦冬、五味子为野生品或人工栽培品，为道地药材或非道地药材，为其鲜药材或依传统方法炮制而成的炮制品或依现代方法炮制而成的炮制品。

4.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.08mg～12mg，人参总多糖1mg～460mg，总皂苷5mg～800mg，五味子醇甲0.036mg～6mg；或者含有人参皂苷Rg₁和Re0.1mg～9.6mg，人参总多糖1.25mg～368mg，总皂苷6.25mg～640mg，五味子醇甲0.045mg～4.8mg；或者含有人参皂苷Rg₁和Re0.133mg～7.2mg，人参总多糖1.66mg～276mg，总皂苷8.33mg～480mg，五味子醇甲0.06mg～3.6mg。

5.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.8mg～1.2mg；人参总多糖以葡萄糖计，为20mg～46mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为50mg～80mg；五味子醇甲0.36mg～0.6mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re1.6mg～2.4mg；人参总多糖以葡萄糖计，为40mg～92mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为100mg～160mg；五味子醇甲0.72mg～1.2mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re4mg～6mg；人参总多糖以葡萄糖计，为100mg～230mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为250mg～400mg；五味子醇甲1.8mg～3mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.4mg～0.6mg；人参总多糖以葡萄糖计，为10mg～23mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为25mg～40mg；五味子醇甲0.18mg～0.3mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.25mg～0.4mg；人参总多糖以葡萄糖计，为6.6mg～15.4mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为16.6mg～26.7mg；五味子醇甲0.12mg～0.2mg。

或在每一单位剂量的制剂中，含有人参皂苷Rg₁和Re0.2mg～0.3mg；人参总多糖以葡萄糖计，为5mg～11.5mg；总皂苷以人参皂苷Re计，为12.5mg～20mg；五味子醇甲0.09mg～0.15mg。

6.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所述的药物制剂中含有量均分子量为30～36×10⁴、8～12×10⁴、3.5～7.5×10⁴的人参的多糖类成分中的一种或几种，其中量均分子量为33.0445×10⁴、或9.8878×10⁴、或5.4087×10⁴的人参的多糖类成分的含量较高。

7.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所述制剂为口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、或注射剂；

所述口服固体制剂可为颗粒剂、片剂、丸剂、滴丸剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、固体分散剂、散剂、微颗粒剂、微丸剂、微囊剂、微球剂、或者其它药学上可接受的口服固体制剂；所述口服液体制剂可为口服液或者其它药学上可接受的口服液体制剂；所述注射剂可为注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂、氯化钠注射液、葡萄糖注射液或者其它药学上可接受的注射剂。

8.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所述制剂是颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、固体分散剂、口服液、注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂、氯化钠注射液、或者葡萄糖注射液。

9.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所述的药物制剂在必要时还含有或使用药物可接受的辅料(或载体)，所述辅料为药学上可接受的制剂辅助剂；

对于口服固体制剂和口服半固体制剂，所述辅料选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、助流剂、抗粘剂、润滑剂、色、香、味及其调节剂、固体分散体载体材料、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、PH调节剂和其它药学上可接受的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质；

所述稀释剂是选自糖粉、糊精、淀粉、可压性淀粉、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、硫酸钙、碳酸钙和其它药学上可接受的稀释剂中的一种或一种以上的物质；

所述润湿剂是选自一定浓度的乙醇、水和其它药学上可接受的润湿剂中的一种或一种以上的物质；

所述粘合剂是选自淀粉浆、50％至70％蔗糖溶液、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙纤维素、聚维酮、明胶、聚乙二醇、海藻酸钠溶液和其它药学上可接受的粘合剂中的一种或一种以上的物质；

所述崩解剂是选自羧甲基淀粉钠、干淀粉、泡腾崩解剂、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮和其它药学上可接受的崩解剂中的一种或一种以上的物质；

所述助流剂、抗粘剂、润滑剂是选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、聚乙二醇类、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、氢化植物油和其它药学上可接受的助流剂、抗粘剂、润滑剂中的一种或一种以上的物质；

所述色、香、味及其调节剂是选自药用色素、食用色素、香精和其它药学上可接受的色、香、味及其调节剂中的一种或一种以上的物质；

所述固体分散体载体材料是选自纤维素衍生物、聚乙二醇类、表面活性剂类、有机酸类、聚维酮类、糖类与醇类、纤维素类、聚丙烯酸树脂类、β-谷甾醇、胆固醇、胆固醇硬脂酸酯、棕榈酸甘油酯、氢化蓖麻油、蓖麻油蜡、蜂蜡、巴西棕榈蜡和其它药学上可接受的固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质，每类固体分散体载体材料可不选或选用该类固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质；

对于口服液体制剂，所述辅料选自溶剂、增溶剂、助溶剂、潜溶剂、防腐剂、抗氧剂、金属离子络合剂、矫味剂、着色剂、pH调节剂和其它药学上可接受的液体制剂附加剂中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质；

所述溶剂是选自水、一定浓度的乙醇、丙二醇、甘油和其它药学上可接受的液体制剂用溶剂中的一种或一种以上的物质；

所述防腐剂是选自对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等对羟基苯甲酸酯类、山梨酸及其盐、苯甲酸及其盐、薄荷油和其它药学上可接受的液体制剂用防腐剂中的一种或一种以上的物质；

所述矫味剂是选自糖精钠、蔗糖、薄荷挥发油、单糖浆、果汁糖浆、山梨醇、甘油、甘露醇和其它药学上可接受的液体制剂用矫味剂中的一种或一种以上的物质。

对于注射剂，所述辅料选自药学上可接受的注射用溶剂、增溶剂、抑菌剂、镇痛剂、抗氧剂、稳定剂、络合剂、等渗调节剂、缓冲剂、pH调节剂，以及药学上可接受的具有其它辅助功能的药物中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质；

所述注射用溶剂是选自注射用水、一定浓度的乙醇、甘油、丙二醇、苯甲醇和其它药学上可接受的注射用溶剂中的一种或一种以上的物质；

所述增溶剂是选自聚山梨酯80、聚山梨酯60、聚山梨酯40、聚山梨酯20和其它药学上可接受的注射剂用增溶剂中的一种或一种以上的物质；

所述抑菌剂是选自羟丙甲酯、羟丙丁酯、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯酚和其它药学上可接受的注射剂用抑菌剂中的一种或一种以上的物质；

所述抗氧剂是选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠和其它药学上可接受的注射剂用抗氧剂中的一种或一种以上的物质；

所述络合剂是选自乙二胺四醋酸二钠、环己二胺四醋酸钠、N-羟基二乙胺三醋酸、二乙基三胺六醋酸和其它药学上可接受的络合剂中的一种或一种以上的物质。

所述pH调节剂是选自一定浓度的氢氧化钠溶液、一定浓度的盐酸溶液、磷酸、醋酸盐缓冲溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液和其它药学上可接受的pH调节剂中的一种或一种以上的物质；

其中所述的注射用冻干制剂还可以在制剂中不加入或加入了一种或一种以上的药物可接受的适量的赋形剂。所述赋形剂选自甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、葡萄糖、氯化钠和其它药学上可接受的赋形剂中的一种或一种以上的物质。所述的赋形剂优选甘露醇、山梨醇。

10.一种权利要求1所述的药物制剂的制备方法，其特征在于所述药物制剂的制备方法为：提取人参、麦冬、五味子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分，添加或不添加起协同作用的药物，添加或不添加辅料，制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。

11.一种权利要求1所述的药物制剂的制备方法，其特征在于所述药物制剂的制备方法为：

一、人参、麦冬、五味子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分的提取：

(1)人参的处理：将人参切片，分别加4～8倍量(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)60～80％乙醇提取(提取方法采用回流提取法或超声提取法或减压提取法)2～4次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，药液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.1～1.9g，每次加入0.8～2倍量的水饱和的正丁醇萃取3～8次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～8.0，即得人参的皂苷类成分中间体，备用；

(2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加6～12倍量水(第一次因为是干药材，多加2～4倍量)提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)2～4次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为0.6～1.2g生药/ml，温度为20～60℃，加入90～95％的乙醇醇沉使含醇量达到70～85％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，粉碎，加适量水溶解后，冷藏，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.5～2.5g生药/ml，加入90～95％的乙醇使含醇量达到60～80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量注射用水溶解后，离心，取上清液，

上一步所得上清液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；

或上一步所得上清液采用截留分子量100K～800K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或将上一步所得上清液先用截留分子量100K～800K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量1K～10K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

(3)麦冬的处理：麦冬加7～13倍量水，浸泡15～180分钟，提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)1～3小时，再分别加5～11倍量水提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)1～3次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液的相对密度为1.1～1.5(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入90～95％的乙醇使含醇量达到70～85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.0～1.4(相对密度为药液温度为30℃时值)，每次加入1～3倍量的水饱和的正丁醇萃取3～8次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～8.0，即得麦冬的皂苷类成分中间体，备用；

(4)五味子的处理：五味子粉碎，分别加5～11倍量水(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)提取(提取方法采用煎煮提取法或回流提取法或超声提取法或减压提取法)2～4次，每次1～3小时，分别收集水蒸气馏出液(收集或不收集)和水提液，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为1.1～1.7g生药/ml，加入90～95％的乙醇使含醇量达到70～85％，静置过夜，滤过，醇液调节pH值至6.5～8.7，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度为3～6.5g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到80～90％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～8.0，即得五味子中间体，备用；

二、起协同作用的药物的处理：

(5)起协同作用的药物的处理：起协同作用的药物是中药或天然药物的，提取其有效部位或有效成分单体，(精制)，水溶，调节pH值至6.0～8.0，滤过，即得中间体，备用；起协同作用的药物是化学药物的，水溶，pH值调至6.0～8.0，滤过，即得中间体，备用；(备注：用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可以不水溶)

三、各药物制剂成品的制备：

(6)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”、“(5)(加入或不加入)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)；浓缩成清膏[或将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)，浓缩成清膏，与“(5)(加入或不加入)”未水溶的中间体混合]，加入适量的口服固体制剂用辅料混匀，制软材，制粒，干燥，整粒，按剂量分装，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的颗粒剂；

将制得的已干燥、整粒的颗粒压片或装入胶囊，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的片或胶囊。

(7)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的液体制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的液体制剂用辅料或不加辅料]，加纯化水或注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，(滤过)，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至口服液包装容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的口服液。

(8)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，(滤过)，加入0.02～0.5％活性炭加热至沸，保持微沸10～40分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.5μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，按剂量分装至注射液包装用容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液。

(9)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，(滤过)，加入0.02～0.5％活性炭加热至沸，保持微沸10～40分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～8.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.5μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1～8ml药液，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射用冻干制剂。

(10)冷冻干燥工艺如下：

a预冻阶段：普通预冻，预冻温度-60℃～-45℃，预冻时间约2.5～7小时。或选择反复预冻，预冻温度-57℃～-42℃；回温温度-22℃～-19℃，保温1～3.5小时；再将产品温度降至-57℃～-42℃，保温2～5小时。

b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-60℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-23℃～-18℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。

c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～25℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。

12.根据权利要求11所述的药物制剂的制备方法，其特征在于所述药物制剂的制备方法为：

一、人参、麦冬、五味子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、麦冬的皂苷类成分、五味子的木脂素类成分的提取：

(1)人参的处理：将人参切片，分别加5～7倍量(第一次因为是干药材，多加1～2倍量)60～80％乙醇回流提取2～3次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，药液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.2～1.8g，每次加入0.8～1.5倍量的水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～7.5，即得人参的皂苷类成分中间体，备用；

(2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加7～11倍量水(第一次因为是干药材，多加2～4倍量)煎煮提取或回流提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为0.7～1.1g生药/ml，温度为25～50℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，粉碎，加适量水溶解后，冷藏，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.7～2.3g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到65～75％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量注射用水溶解后，离心，取上清液，

上一步所得上清液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；

或上一步所得上清液采用截留分子量100K～600K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；

或将上一步所得上清液先用截留分子量100K～600K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量1K～8K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；

(3)麦冬的处理：麦冬加8～12倍量水，浸泡15～90分钟，煎煮提取或回流提取1～3小时，再分别加6～10倍量水煎煮提取或回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，(滤过)，调整药液的相对密度为1.15～1.45(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.03～1.33(相对密度为药液温度为30℃时值)，每次加入1.5～2.5倍量的水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过/或离心，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～7.5，即得麦冬的皂苷类成分中间体，备用；

(4)五味子的处理：五味子粉碎，分别加6～10倍量水(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)煎煮提取或回流提取2～4次，每次1～3小时，分别收集水蒸气馏出液(收集或不收集)和水提液，合并提取液，(滤过)，调整药液浓度为1.2～1.6g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，醇液调节pH值至6.7～8.3，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度为3.5～6g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达到80～90％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解，冷藏，滤过，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，调节pH值至6.0～7.5，即得五味子中间体，备用；

二、起协同作用的药物的处理：

(5)起协同作用的药物的处理：起协同作用的药物是中药或天然药物的，提取其有效部位或有效成分单体，(精制)，水溶，调节pH值至6.0～7.5，滤过，即得中间体，备用；起协同作用的药物是化学药物的，水溶，pH值调至6.0～7.5，滤过，即得中间体，备用；(备注：用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可以不水溶)

三、各药物制剂成品的制备：

(6)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”、“(5)(加入或不加入)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)；浓缩成清膏[或将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀，(滤过)，浓缩成清膏，与“(5)(加入或不加入)”未水溶的中间体混合]，加入适量的口服固体制剂用辅料混匀，制软材，制粒，干燥，整粒，按剂量分装，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的颗粒剂；

将制得的已干燥、整粒的颗粒压片或装入胶囊，即制成一种原料中含有人参、麦冬、五味子的片或胶囊。

(7)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的液体制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的液体制剂用辅料或不加辅料]，加纯化水或注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，(滤过)，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至口服液包装容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的口服液。

(8)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，(滤过)，加入0.05～0.3％活性炭加热至沸，保持微沸15～35分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，按剂量分装至注射液包装用容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液。

(9)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体、五味子水蒸气馏出液(加入或不加入)，混匀；药液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料[或药液加入“(5)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料]，加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，(滤过)，加入0.05～0.3％活性炭加热至沸，保持微沸15～35分钟，滤过，药液水损失明显时添加注射用水调整体积至近处方量，调节pH值至6.0～7.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1～6ml药液，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射用冻干制剂。

(10)冷冻干燥工艺如下：

a预冻阶段：普通预冻，预冻温度-60℃～-45℃，预冻时间约2.5～7小时。或选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃；回温温度-22℃～-19℃，保温1.5～3小时；再将产品温度降至-56℃～-45℃，保温2～5小时。

b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-22℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。

c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～23℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。

13.一种权利要求10所述的药物制剂的制备方法，其特征在于所述的五味子的处理中：五味子的水提液经过一次醇沉，一次醇沉后的醇液调pH值至6.5～8.7，或至6.7～8.3，或至7.7，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，再进行二次醇沉。

14.一种权利要求1所述的药物制剂的质量控制方法，其特征在于所述的优选的提供的一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射剂的质量控制方法，包括下述的鉴别、含量测定、指纹图谱；

所述的鉴别、含量测定、指纹图谱及其中的单个的具体方法可分别选用或任意组合使用，用于一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制；

所述的一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法如下：

[1]鉴别

[1.1]人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.5～0.7g，加水溶解至5～15ml(或直接取制备好的注射液7～13ml)，用等量的水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇层，正丁醇层用等量的氨试液洗涤1～2次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用1～4ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg₁、Re对照品，加甲醇制成每1ml各含0.1～0.4mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各1～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇-水(70～80∶15～25∶1～4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～15％硫酸乙醇溶液，在100～110℃烘数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[1.2]麦冬的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.5～0.7g，加3～10ml水溶解(或直接取制备好的注射液7～13ml；或取注射液7～13ml，浓缩成3.5～6.5ml)，加盐酸1～3ml回流5-15分钟，放冷，溶液加氯仿萃取1～4次，每次15～50ml，合并氯仿层，蒸干，残渣用1～4ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取麦冬药材1～4g，至量瓶中，密塞，加入甲醇，超声1～4次，每次10～40ml，每次15～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用5～20ml水溶解，加盐酸1～4ml，回流5-15分钟，放冷，加氯仿振摇萃取1～4次，每次15～50ml，分取氯仿液，蒸干，残渣加甲醇1～4ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各1～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(1～3∶0.5～1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～15％硫酸乙醇溶液，在100～110℃烘约2～10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[1.3]五味子醇甲的HPLC鉴别：

在“五味子醇甲的含量测定”项下，供试品图谱中有与对照品图谱中主峰相对应的色谱峰。

[2]含量测定

[2.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.1.1]色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-0.05～0.3％磷酸溶液(15～23∶85～77)为流动相，检测波长193～213nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

[2.1.2]对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的人参皂苷Rg₁及人参皂苷Re对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.1～0.6mg、人参皂苷Re0.1～0.4mg的溶液，即得。

[2.1.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，置2～10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.1.4]测定法  分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10～40μl(注射液进样量为20～80μl)，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg₁、Re的量之和应为0.4～2.4mg。

[2.2]人参总多糖的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.2.1]对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的葡萄糖对照品10～30mg于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.2.2]标准曲线的制备精密量取葡萄糖对照品溶液0.0，0.05～0.15，0.15～0.25，0.25～0.35，0.35～0.45，0.45～0.55，0.55～0.65，0.65～0.75，0.75～0.85ml，分别置10～20ml具塞试管中，分别加蒸馏水使成1.0～2.0ml，各精密加入新鲜配制的0.1～0.3％蒽酮-75～85％硫酸溶液4～12ml，摇匀，在100℃水浴中保温7～15分钟，迅速冷却后，以第一份为空白，照紫外-可见分光光度法在610～630nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.2.3]供试品溶液的配制  取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，加水1～4ml溶解后(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液7～13ml，浓缩成1.4～2.6ml)，加入90～95％乙醇9～15ml，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，定容至200ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.2.4]测定法精密量取上述供试品溶液0.15～0.45ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水使成1.0～2.0ml”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.2.5]制备好的注射剂每支含人参总多糖以葡萄糖计，应为10～92mg。

[2.3]总皂苷的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.3.1]对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的人参皂苷Re对照品适量，于2～25ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.2～2.0mg/ml的溶液，即得对照品溶液。

[2.3.2]标准曲线的制备精密量取上述人参皂苷Re对照品溶液0.05～0.15，0.15～0.25，0.25～0.35，0.4～0.6，1.1～1.3，1.6～2.0ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，加入高氯酸3～8ml，摇匀，于50～70℃水浴上加热10～25min，取出，迅速冷却，以相应的试剂作为空白，照紫外-可见分光光度法于380～400nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.3.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物60～70mg，精密称定(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液0.7～1.3ml)，加蒸馏水2～10ml溶解，置分液漏斗中，用5～20ml水饱和的正丁醇萃取3～7次，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇溶解并定容至10～50ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.3.4]测定法精密量取上述供试品溶液0.5～2ml于具塞试管中，照“标准曲线的制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.3.5]制备好的注射剂每支含总皂苷以人参皂苷Re计，应为25～160mg。

[2.4]五味子醇甲的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.4.1]色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇-水(60～80∶40～20)为流动相，检测波长240～260nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.4.2]对照品溶液的制备精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲20～80μg的溶液，即得。

[2.4.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，置5～20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.4.4]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.4.5]制备好的注射剂每支含五味子醇甲应为0.18～1.2mg。

[3]指纹图谱

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[3.1]皂苷类成分指纹图谱

[3.1.1]色谱条件  色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈与水，梯度条件见下表：

梯度条件

   时间(min)     乙腈(％)     水(％)    0205560     10～2025～3545～5510～20     90～8075～6555～4590～80

柱温：20～40℃；分析时间：60～120min；流速：0.6～1.0ml/min；ELSD检测器，漂移管100～120℃，载气流速2～4L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁计算应不低于5000。

[3.1.2]对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品2～10mg，加甲醇溶解并定容至5～25ml，摇匀，制成浓度为0.2～2.0mg/ml的溶液，即得。

[3.1.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物0.6～0.7g，精密称定，加水溶解至2～10ml(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液7～13ml，浓缩成3.5～6.5ml)，分别用5～20ml水饱和正丁醇萃取3～7次，合并正丁醇层，用等量的氨试液洗涤1～2次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用水溶解并定容至2～10ml量瓶中，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.1.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.1.5]结果共标定出16个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，其相对保留时间分别为：0.057±10％、0.105±10％、0.136±10％、0.436±10％、0.629±10％、0.939±10％、1.000、1.040±10％、1.061±10％、1.088±10％、1.188±10％、1.461±10％、1.540±10％、1.596±10％、1.696±10％、1.735±10％。规定相对保留时间为0.105±10％、0.436±10％、0.629±10％、1.040±10％、1.088±10％的峰的相对峰面积对数比为0.687～1.145、0.632～1.174、0.633～1.176、0.693～1.155、0.637～1.183。

[3.2]非皂苷类成分指纹图谱

[3.2.1]色谱条件  色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈与水(0.05～0.3％H₃PO₄)，梯度条件见下表：

梯度条件

    时间(min)     乙腈(％)     水(0.1％H₃PO₄)(％)     020405060     0～100～1020～4050～7050～70     100～90100～9080～6030～5050～30

柱温：20～40℃；检测波长：240～260nm；分析时间：60～120min；流速：0.8～1.2ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计应不低于2000。

[3.2.2]对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品2～10mg，置25～50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.2.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物90～110mg，精密称定，置5～20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液6.5～8.9ml，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度)，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.2.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.2.5]结果共标定出17个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积作为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.044±10％、0.069±10％、0.120±10％、0.162±10％、0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％、0.500±10％、0.543±10％、0.565±10％、0.615±10％、0.638±10％、0.691±10％、0.710±10％、0.721±10％、1.000、1.028±10％。规定相对保留时间为0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％的峰的相对峰面积比为5.311～8.852、2.262～3.770、1.880～3.492。

15.根据权利要求14所述的药物制剂的质量控制方法，其特征在于所述的一种原料中含有人参、麦冬、五味子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法，其各具体方法如下：

[1]鉴别

[1.1]人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.6g，加水溶解至10ml(或直接取制备好的注射液10ml)，用等量的水饱和的正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，正丁醇层用等量的氨试液洗涤1次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg₁、Re对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(75∶20∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[1.2]麦冬的鉴别：

称取制备好的注射剂内容物0.6g，加5ml水溶解(或直接取制备好的注射液10ml；或取注射液10ml，浓缩成5ml)，加盐酸2ml回流7-10分钟，放冷，溶液加氯仿萃取2次，每次30ml，合并氯仿层，蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取麦冬药材2g，至量瓶中，密塞，加入甲醇，超声(功率250W，频率50kHz)2次，每次20ml，每次30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用10ml水溶解，加盐酸2ml，回流7-10分钟，放冷，加氯仿振摇萃取2次，每次30ml，分取氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[1.3]五味子醇甲的HPLC鉴别：

在“五味子醇甲的含量测定”项下，供试品图谱中有与对照品图谱中主峰相对应的色谱峰。

[2]含量测定

[2.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.1.1]色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-0.1％磷酸溶液(19∶81)为流动相，检测波长203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

[2.1.2]对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的人参皂苷Rg₁及人参皂苷Re对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.3mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液，即得。

[2.1.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，置5ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.1.4]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl(注射液进样量为40μl)，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg₁、Re的量之和应为1.0±0.2mg。

[2.2]人参总多糖的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.2.1]对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的葡萄糖对照品20mg于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.2.2]标准曲线的制备精密量取葡萄糖对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8ml，分别置10ml具塞试管中，分别加蒸馏水使成1.0ml，各精密加入新鲜配制的0.2％蒽酮-80％硫酸溶液8ml，摇匀，在100℃水浴中保温10分钟，迅速冷却后，以第一份为空白，照紫外-可见分光光度法在620nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.2.3]供试品溶液的配制  取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，加水2ml溶解后(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液10ml，浓缩成2ml)，加入95％乙醇12ml，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，定容至200ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.2.4]测定法精密量取上述供试品溶液0.3ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水使成1.0ml”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.2.5]制备好的注射剂每支含人参总多糖以葡萄糖计，应为38±8mg。

[2.3]总皂苷的含量测定：

照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)测定。

[2.3.1]对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的人参皂苷Re对照品4mg于10ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

[2.3.2]标准曲线的制备精密量取上述人参皂苷Re对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.5，1.2，1.8ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，加入高氯酸5ml，摇匀，于60℃水浴上加热15min，取出，迅速冷却，以相应的试剂作为空白，照紫外-可见分光光度法于390nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。

[2.3.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物65mg，精密称定(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液1ml)，加蒸馏水5ml溶解，置分液漏斗中，用10ml水饱和的正丁醇萃取5次，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇溶解并定容至25ml量瓶中，即得供试品溶液。

[2.3.4]测定法精密量取上述供试品溶液1ml于具塞试管中，照“标准曲线的制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度，依据上述标准曲线计算，即得。

[2.3.5]制备好的注射剂每支含总皂苷以人参皂苷Re计，应为65±15mg。

[2.4]五味子醇甲的含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

[2.4.1]色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇-水(70∶30)为流动相，检测波长250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.4.2]对照品溶液的制备精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲40μg的溶液，即得。

[2.4.3]供试品溶液的制备取装量差异项下制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(或直接取装量差异项下制备好的注射液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[2.4.4]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

[2.4.5]制备好的注射剂每支含五味子醇甲应为0.48±0.12mg。

[3]指纹图谱

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[3.1]皂苷类成分指纹图谱

[3.1.1]色谱条件  色谱柱：ODS HYPERSIL C₁₈(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水，梯度条件见下表：

梯度条件

   时间(min)     乙腈(％)     水(％)    0205560     15305015     85705085

柱温：30℃；分析时间：60min；流速：0.8ml/min；ELSD检测器，漂移管110℃，载气流速3.0L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁计算应不低于5000。

[3.1.2]对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品5mg，加甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，即得。

[3.1.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物0.65g，精密称定，加水溶解至5ml(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液10ml，浓缩成5ml)，分别用10ml水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，用等量的氨试液洗涤1次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用水溶解并定容至5ml量瓶中，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.1.4]测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.1.5]结果共标定出16个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，其相对保留时间分别为：0.057±10％、0.105±10％、0.136±10％、0.436±10％、0.629±10％、0.939±10％、1.000、1.040±10％、1.061±10％、1.088±10％、1.188±10％、1.461±10％、1.540±10％、1.596±10％、1.696±10％、1.735±10％。规定相对保留时间为0.105±10％、0.436±10％、0.629±10％、1.040±10％、1.088±10％的峰的相对峰面积对数比为0.687～1.145、0.632～1.174、0.633～1.176、0.693～1.155、0.637～1.183。

[3.2]非皂苷类成分指纹图谱

[3.2.1]色谱条件  色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈(Φ4.6×150mm)，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水(0.1％H₃PO₄)，梯度条件见下表：

梯度条件

    时间(min)     乙腈(％)     水(0.1％H₃PO₄)(％)     020405060     00306060     100100704040

柱温：30℃；检测波长：250nm；分析时间：60min；流速：1.0ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计应不低于2000。

[3.2.2]对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品4mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.2.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物100mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(或直接精密量取装量差异项下制备好的注射液7.7ml，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度)，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[3.2.4]测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.2.5]结果共标定出17个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积作为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.044±10％、0.069±10％、0.120±10％、0.162±10％、0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％、0.500±10％、0.543±10％、0.565±10％、0.615±10％、0.638±10％、0.691±10％、0.710±10％、0.721±10％、1.000、1.028±10％。规定相对保留时间为0.307±10％、0.328±10％、0.349±10％的峰的相对峰面积比为5.311～8.852、2.262～3.770、1.880～3.492。

16.一种人参、麦冬、五味子的质量控制方法，其特征在于所述的质量控制方法包括人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱；

所述的人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱可以单独使用或任意组合使用或与其它质量控制方法任意组合使用，用于人参、麦冬、五味子的质量控制，或者用于一种原料中含有人参、麦冬、五味子的药物制剂的质量控制，或者用于制剂原料中含有人参、麦冬、五味子中的一种或一种以上药材的制剂的质量控制；

所述的人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱如下：

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[1]人参药材指纹图谱

本人参药材指纹图谱中的人参选用红参，红参为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎。

[1.1]色谱条件  色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈与水为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

   时间(min)     乙腈(％)     水(％)    0205560     10～2025～3545～5510～20     90～8075～6555～4590～80

柱温：20～40℃；分析时间：60～120min；流速：0.6～1.0ml/min；ELSD检测器，漂移管100～120℃，载气流速2.0～4.0L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁峰计应不低于5000。

[1.2]对照品溶液的制备取干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，置2～25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.2～2.0mg/ml的溶液，即得。

[1.3]供试品溶液的制备  取红参药材粉末(过10～40目筛)1～4g，精密称定，加70％乙醇回流提取两次，每次0.8～1.5小时，第一次加6～8倍量，第二次加5～7倍量；提取液滤过，合并，滤液回收乙醇，浓缩至药液浓度为1.2～1.8g生药/ml，用等量水饱和的正丁醇振摇提取3～7次，合并正丁醇液，并用等量的氨试液洗涤；洗涤液弃去，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解并转移至5～20ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

[1.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[1.5]结果共标定出10个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％。规定相对保留时间为0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相对峰面积对数比为0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。

[2]麦冬药材指纹图谱

本麦冬药材指纹图谱中的麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。

[2.1]色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；乙腈与水(0.05～0.3％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

  时间(min) 乙腈(％) 水(0.05～0.3％H₃PO₄)(％)

    020405060     0～100～1020～4050～7050～70     100～90100～9080～6050～3050～30

柱温：20～40℃；检测波长：240～260nm；分析时间：60～120min；流速：0.8～1.2ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.2]对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品2～10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.3]供试品溶液的制备将麦冬药材剪碎，取6.3～9.3g，精密称定，分别加8～12倍、6～10倍、6～10倍量水各煎煮提取1.5～2.5小时，滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.1～1.5(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使醇含量达80％，醇沉，上清液蒸干后加5～20ml水溶解，用10～40ml水饱和的正丁醇萃取4～7次，合并正丁醇层，蒸干，加水溶解，定容至250ml，过滤，精密吸取续滤液0.5～2ml，加入25～100μl五味子醇甲对照品溶液(0.2～0.8mg/ml)，即可进行测定。

[2.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[2.5]结果共标定出7个共有峰(如加五味子醇甲峰则为8个共有峰)。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，根据五味子醇甲的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.190±10％、0.365±10％、0.421±10％、0.594±10％、0.634±10％、0.653±10％、0.703±10％、1.000。以峰面积最大的相对保留时间为0.365±10％的峰的峰面积为1.000，规定相对保留时间为0.421±10％的峰的的相对峰面积比为0.084～0.140。

[3]五味子药材指纹图谱

本五味子药材指纹图谱中的五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。

[3.1]色谱条件  色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；乙腈与水(0.05～0.3％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

   时间(min)     乙腈(％)     水(0.05～0.3％H₃PO₄)(％)    020405060     0～100～1020～4050～7050～70     100～90100～9080～6050～3050～30

柱温：20～40℃；检测波长：240～260nm；分析时间：60～120min；流速：0.8～1.2ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[3.2]对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品2～10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.3]供试品溶液的制备取五味子药材粗粉(过10～40目筛)6.3～9.3g，精密称重，分别加7.5～11.5倍、6～10倍、6～10倍量水各煎煮提取1.5～2.5小时，滤过，滤液合并，浓缩至药液浓度为1.2～1.6g生药/ml，浓缩液加入95％乙醇沉淀，使含醇量达80％，滤过，滤液用饱和NaOH溶液调pH至6.5～7.5，滤过，上清液蒸干，加水溶解，定容到500ml容量瓶中，即得。

[3.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.5]结果共标定出14个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.049±10％、0.081±10％、0.142±10％、0.162±10％、0.368±10％、0.407±10％、0.575±10％、0.587±10％、0.633±10％、0.703±10％、0.931±10％、1.000、1.028±10％、1.061±10％。规定相对保留时间为0.368±10％、0.407±10％的峰的相对峰面积比为0.380～0.634，0.869～1.304。

17.根据权利要求16所述的质量控制方法，其特征在于所述的人参药材指纹图谱、麦冬药材指纹图谱、五味子药材指纹图谱，其各具体测定方法如下：

参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[1]人参药材指纹图谱

本人参药材指纹图谱中的人参选用红参，红参为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎。

[1.1]色谱条件  色谱柱：ODS HYPERSIL C₁₈(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

   时间(min)     乙腈(％)     水(％)    0205560     15305015     85705085

柱温：30℃；分析时间：60min；流速：0.8ml/min；ELSD检测器，漂移管110℃，载气流速3.0L/min。理论板数以人参皂苷Rb₁峰计应不低于5000。

[1.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb₁对照品5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[1.3]供试品溶液的制备  取红参药材粉末(过20目筛)2g，精密称定，加70％乙醇回流提取两次，每次1小时，第一次加7倍量，第二次加6倍量；提取液滤过，合并，滤液回收乙醇，浓缩至药液浓度为1.5g生药/ml，用等量水饱和的正丁醇振摇提取5次，合并正丁醇液，并用等量的氨试液洗涤；洗涤液弃去，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解并转移至10ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。

[1.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[1.5]结果共标定出10个共有峰。将人参皂苷Rb₁峰设定为参照物峰，以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb₁峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.93 1±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％。规定相对保留时间为0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相对峰面积对数比为0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。

[2]麦冬药材指纹图谱

本麦冬药材指纹图谱中的麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。

[2.1]色谱条件色谱柱：ZORBAX  SB-C₁₈(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒径5μm；乙腈与水(0.1％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

    时间(min)     乙腈(％)     水(0.1％H₃PO₄)(％)     020405060     00306060     100100704040

柱温：30℃；检测波长：250nm；分析时间：60min；流速：1.0ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[2.2]对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品4mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[2.3]供试品溶液的制备将麦冬药材剪碎，取7.8g，精密称定，分别加10倍、8倍、8倍量水各煎煮提取2小时，滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.3(相对密度为药液温度为30℃时值)，加入95％的乙醇使醇含量达80％，醇沉，上清液蒸干后加10ml水溶解，用20ml水饱和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇层，蒸干，加水溶解，定容至250ml，过滤，精密吸取续滤液1ml，加入50μl五味子醇甲对照品溶液(0.4mg/ml)，即可进行测定。

[2.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[2.5]结果共标定出7个共有峰(如加五味子醇甲峰则为8个共有峰)。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，根据五味子醇甲的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.190±10％、0.365±10％、0.42l±10％、0.594±l0％、0.634±10％、0.653±10％、0.703±l0％、1.000。以峰面积最大的相对保留时间为0.365±10％的峰的峰面积为1.000，规定相对保留时间为0.421±10％的峰的的相对峰面积比为0.084～0.140。

[3]五味子药材指纹图谱

本五味子药材指纹图谱中的五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。

[3.1]色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒径5μm；乙腈与水(0.1％H₃PO₄)为流动相，梯度条件见下表：

梯度条件

   时间(min)     乙腈(％)   水(0.1％H₃PO₄)(％)    020405060     00306060   100l00704040

柱温：30℃；检测波长：250nm；分析时间：60min；流速：1.0ml/min；理论板数以五味子醇甲峰计算应不低于2000。

[3.2]对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品4mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

[3.3]供试品溶液的制备取五味子药材粗粉(过20目筛)7.8g，精密称重，分别加9.5倍、8倍、8倍量水各煎煮提取2小时，滤过，滤液合并，浓缩至药液浓度为1.4g生药/ml，浓缩液加入95％乙醇沉淀，使含醇量达80％，滤过，滤液用饱和NaOH溶液调pH至7，滤过，上清液蒸干，加水溶解，定容到500ml容量瓶中，即得。

[3.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[3.5]结果共标定出14个共有峰。将五味子醇甲峰设定为参照物峰，以其峰面积为1.000，根据五味子醇甲峰的保留时间计算，各峰的相对保留时间分别为：0.049±10％、0.08l±10％、0.142±10％、0.162±10％、0.368±10％、0.407±10％、0.575±10％、0.587±l0％、0.633±10％、0.703±10％、0.931±10％、1.000、1.028±10％、1.061±10％。规定相对保留时间为0.368±10％、0.407±10％的峰的相对峰面积比为0.380～0.634，0.869～1.304。