CN102475766B - 一种治疗心力衰竭的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有治疗心力衰竭作用的药物组合物及其制备方法和检测方法，本发明药物组合物的原料药为：红参、制附子、丹参、红景天、淫羊藿等九味，经过筛选实验得出本发明药物组合物是最佳制备工艺路线和准确可靠的质量检测方法。通过药效学实验，表明本发明药物组合物在治疗心力衰竭方面具有显著效果。

Description

一种治疗心力衰竭的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法、检测方法和用途，特别涉及一种具有治疗心力衰竭作用的药物组合物及其制备方法、检测方法和用途。 

背景技术

心力衰竭是由各种心血管疾病引起的以动脉系统缺血、静脉系统瘀血的临床综合征，是各种心血管疾病的终末阶段。椐世界卫生组织统计，慢性心力衰竭在人群中的发病率为1.5％-5.6％，65岁以上达7.4％，近年中国心力衰竭流行病学调查结果为中国成人心力衰竭的患病率为0.9％，按这个患病率计算，我国目前35-74岁成年约有400万心力衰竭患者。在过去40年中，由于心力衰竭导致的死亡增加了6倍，而随着人口的老龄化，心力衰竭发病率呈逐年增高趋势，心力衰竭一旦发生，病情将呈进行性加重，需要反复住院治疗，每年国家需要支付沉重的医疗费用，并为家庭与个人带来了极大的精神负担，心力衰竭正在成为我国心血管领域的重要公共问题。心力衰竭是心血管疾病研究领域的最后的战场，也是人类战胜心血管疾病的严峻挑战。 

心力衰竭患者均有导致心力衰竭的基础心脏病因，同时又存在使心功能恶化的诱因。原发性心脏损害是心力力衰竭的主要原因，如冠心病、心肌炎、心肌病等均可引起心力衰竭的发生。心脏前后负荷过重如各种心脏瓣膜疾病、高血压病、心包疾病等是引起心力衰竭的常见原因。由于人口老龄化和经济发展导致的生活、医疗水平的改善，心力衰竭的病因构成、发病率等均发生了明显的变化，发展中国家逐渐向发达国家靠拢。全球范围来看，瓣膜性疾病导致的心力衰竭所占比率逐渐降低，而冠心病逐渐成为第一位的病因。 

发明内容

本发明目的在于公开一种具有治疗心力衰竭作用的药物组合物，本发明的目的还在于公开该药物组合物的制备方法，本发明的目的还在于公开该药物组合物的检测方法，本发明的目的还在于公开该药物组合物的用途。 

本发明目的是通过如下方案实现的。 

本发明药物组合物的原料组成为： 

红参 500-600重量份  制附子 300-500重量份 

丹参 500-600重量份  红景天 300-500重量份 

淫羊藿 300-500重量份   川芎   500-600重量份 

延胡索 200-300重量份   葶苈子 200-300重量份 

冰片   2-6重量份。 

本发明药物组合物的原料组成优选为： 

红参   534重量份 制附子 400重量份 

丹参   534重量份 红景天 400重量份 

淫羊藿 400重量份 川芎   534重量份 

延胡索 267重量份 葶苈子 267重量份 

冰片   4重量份。 

本发明药物组合物的原料组成优选为： 

红参   580重量份  制附子 320重量份 

丹参   520重量份  红景天 480重量份 

淫羊藿 480重量份  川芎   520重量份 

延胡索 220重量份  葶苈子 280重量份 

冰片   5重量份。 

本发明药物组合物的原料组成优选为： 

红参   520重量份  制附子 480重量份 

丹参   580重量份  红景天 320重量份 

淫羊藿 320重量份  川芎   580重量份 

延胡索 280重量份  葶苈子 220重量份 

冰片   3重量份。 

其中，延胡索优选为制延胡索。 

取上述本发明药物组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成临床接受的剂型：颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。 

本发明药物组合物颗粒剂的原料组成中还加入如下辅料： 

β-环糊精20-40重量份 乳糖400-500重量份 

阿司帕坦2-10重量份   硬脂酸镁5-15重量份。 

本发明药物组合物颗粒剂的原料组成中还优选加入如下辅料： 

β-环糊精30重量份  乳糖463重量份 

阿司帕坦6重量份    硬脂酸镁10重量份。 

本发明药物组合物颗粒剂的原料组成中还加入如下辅料： 

β-环糊精25重量份 乳糖420重量份 

阿司帕坦9重量份   硬脂酸镁12重量份。 

本发明药物组合物颗粒剂的原料组成中还加入如下辅料： 

β-环糊精35重量份  乳糖480重量份 

阿司帕坦3重量份    硬脂酸镁6重量份。 

本发明药物组合物的制备方法包括如下步骤： 

取原料药红参，加3-7体积倍40％-80％乙醇提取2-4次，每次0.5-2小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加10-15体积倍的水，加热提取1-3次，每次1-2小时，药液滤过，在40℃-60℃下浓缩至相对密度1.01-1.07，加95％乙醇至含醇量40％-80％，3℃-5℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；再直接加入冰片，或将冰片用β-环糊精包合，包合方法为：将β-环糊精加入10℃-30℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95％乙醇溶解的冰片，10℃-30℃下搅拌0.5-2小时，3℃-5℃冷藏12-36小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥12-36小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成临床接受的剂型：颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。 

本发明药物组合物的制备方法优选包括如下步骤： 

取原料药红参，加5体积倍60％乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95％乙醇至含醇量60％，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；再直接加入冰片，或将冰片用β-环糊精包合，包合方法为：将β-环糊精加入20℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95％乙醇溶解的冰片，20℃下搅拌1小时，4℃冷藏24小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥24小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成临床接受的剂型：颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。 

本发明药物组合物的检测方法包括鉴别、检查和/或含量测定方法中的一种或几种： 

鉴别方法： 

(1)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/20-1/10，加0.2％盐酸20-30ml回流提取0.5-2小时，滤过，滤液加氯化钠2-4g使溶解，加醋酸乙酯提取2-4次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至干，残渣加乙醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参药材0.5-2g，加5-10重量倍水煎煮1-3次，每次提取0.5-2小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照品溶液各3-5μl，对照药材溶液1-3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝2-8∶3-5∶1-3为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 

(2)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/20-1/10，置于具塞离心管中，加无水乙醇0.5-2ml，浸泡6-24小时后，超声处理10-30分钟，离心每10-30分钟3000转，上清液作为供试品溶液；取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.2-0.8mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品及对照品溶液各5-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60℃～90℃石油醚-乙醚＝5-10∶2-4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-7％香草醛硫酸液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

(3)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/10-1/5，加水10-30ml使溶解，滤过，滤液加水饱合正丁醇提取2-4次，每次10-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次10-30ml，再用水10-30ml洗涤，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Rb₁、Re、Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml各含1-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，，吸取供试品溶液4-8μl、对照品溶液1-3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，点成条状，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水＝10-20∶30-50∶20-25∶5-15于5℃-15℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-15％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红斑点； 

(4)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/5-2/5，加水20-40ml使溶解，用氨试液调节pH值至9-10，加氯仿提取2-4次，每次10-30ml，合并氯仿，浓缩至干，残渣加甲醇0.2-0.8ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索药材0.5-2g，加5-10重量倍水煎煮1-3次，每次提取0.5-2小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品溶液5-15μl，对照药材溶液及对照品溶液各1-3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚＝3-5∶0.5-2，氨水饱和为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 

(5)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/20-1/10，加水10-30ml使溶解，滤过，滤液加醋酸乙酯提取1-3次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至0.5-2ml，作为供试品溶液；另取红景天药材0.5-2g，加5-10重量倍水煎煮1-3次，每次提取0.5-2小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照药材溶液各2-4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝5-10∶1-3∶0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-3％三氯化铁乙醇液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

检查方法： 

乌头碱限量：取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的5/3-5，加乙醚250-350ml振摇5-15分钟，加氨试液10-30ml，振摇20-40分钟，分取醚液，蒸干，加无水乙醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含1-3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)实验，吸取供试品溶液4-8μl，对照品溶液各2-7μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚＝0.5-2∶2-3为展开剂，氨水饱和，展开，取出，晾干，喷以按《中国药典》2005版附录XVB方法配制的改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点应小于对照斑点，或不出现斑点； 

含量测定方法： 

照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2005年版一部附录VID)测定； 

色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-水＝25-30∶70-75为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品2-3mg，置20-30ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，每1ml含淫羊藿苷0.1mg，即得； 

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/150-1/50，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理10-20分钟，功率100W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得； 

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本发明药物组合物日用制剂量含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于10.0-20.0mg。 

本发明药物组合物的检测方法优选包括鉴别、检查和/或含量测定方法中的一种或几种： 

鉴别方法： 

(1)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/15，加0.2％盐酸25ml回流提取1小时，滤过，滤液加氯化钠3g使溶解，加醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照品溶液各4μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝5∶4∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 

(2)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/15，置于具塞离心管中，加无水乙醇1ml，浸泡12小时后，超声处理20分钟，离心每20分钟3000转，上清液作为供试品溶液；取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品及对照品溶液各9μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60℃～90℃石油醚-乙醚＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

(3)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的2/15，加水20ml使溶解，滤过，滤液加水饱合正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用水20ml洗涤，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Rb₁、Re、Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，点成条状，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶40∶22∶10于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红斑点； 

(4)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的4/15，加水30ml使溶解，用氨试液调节pH值至9-10，加氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿，浓缩至干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚＝4∶1，氨水饱和为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 

(5)取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的1/15，加水20ml使溶解，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取红景天药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照药材溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝8∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

检查方法： 

乌头碱限量：取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的10/3，加乙醚300ml振摇10分钟，加氨试液20ml，振摇30分钟，分取醚液，蒸干，加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)实验，吸取供试品溶液6μl， 对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚＝1∶2.5为展开剂，氨水饱和，展开，取出，晾干，喷以按《中国药典》2005版附录XVB方法配制的改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点应小于对照斑点，或不出现斑点； 

含量测定方法： 

照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-水＝27∶73为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品2.5mg，置25ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，每1ml含淫羊藿苷0.1mg，即得； 

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物研细，称取日用制剂量的2/150，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，功率100W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得； 

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本发明药物组合物日用制剂量含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于15.0mg。 

本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。本发明药物组合物检测方法可以应用于本发明药物组合物的各种剂型：颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂，由于不同剂型的制剂其中所含的相当生药量是相同的，因此各个剂型在进行质量检测时，所选用样品量可统一折算为相当生药量，本发明药物组合物检测方法中颗粒剂每100重量份含相当生药量280-390重量份，根据药用部分不同用量有所差异；口服制剂日服用剂量的相当生药量为42-58g。 

本发明公开了一种具有治疗心力衰竭作用的药物组合物及其制备方法和检测方法，本发明药物组合物的原料药为：红参、制附子、丹参、红景天、淫羊藿等九味，经过筛选实验得出本发明药物组合物是最佳制备工艺路线和准确可靠的检测方法。通过药效学实验，表明本发明药物组合物在治疗心力衰竭方面具有显著效果，对结扎冠脉所致心力衰竭有明显的保护作用：其作用主要为改善心脏功能异常，降低心脏及左室指数，减轻心脏肥厚程度，改善心电图t波升高，降低血清cTnI及CK-MB水平，心肌损伤程度降低，病理改变减轻；对压力超负荷性心力衰竭有明显的保护作用：其作用主要为 逆转由于腹主动脉狭窄造成的后负荷增加所引起的心脏功能异常，抑制心电图t波升高，改善心衰心脏指数，降低心脏肥厚程度，调整血清ALD水平；对戊巴比妥钠所致犬实验性心力衰竭有明显的改善作用，主要表现为升高LVSP及dp/dtmax，升高BP，缩短R-dp/dtmax，降低LVEDP，同时明显增加RBP。 

附图说明

图1：淫羊藿苷对照品的HPLC图谱； 

图2：本发明药物组合物样品的HPLC图谱； 

图3：淫羊藿苷的标准曲线； 

图4：缺淫羊藿的本发明药物组合物样品的HPLC图谱； 

图5：各给药组LVSP变化的比较； 

图6：各给药组dp/dtmax变化的比较； 

图7：各给药组R-dp/dtmax变化的比较； 

图8：各给药组LVMCF变化的比较； 

图9：各给药组LVEDP变化的比较； 

图10：各给药组CO变化的比较； 

图11：各给药组RBF变化的比较； 

图12：各给药组SP变化的比较； 

图13：各给药组DP变化的比较。 

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。 

实验例1本发明药物组合物制备工艺研究实验 

1.红参乙醇提取条件的优选： 

(1)正交实验 

方法：称取9份红参饮片，每份40g，按表1的因素水平和表2的实验条件安排实验，分别加入不同浓度的乙醇提取，每次1小时，提取液冷藏过夜，滤过，滤液回收乙醇后，减压干燥成干浸膏。测定出膏率和人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的含量(2000年版中国药典方法)，并按人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的含量之和进行方差分析，结果见表3。 

表1因素水平表 

表2正交实验表 

表3方差分析表 

*：F_1-0.05(2，2)＝19.0           **：F_1-0.01(2，2)＝99.0 

由表3可知，A因素(乙醇浓度)对结果有显著的影响，A₁为最佳条件；B因素(乙醇用量)对结果无显著性影响，以B₂为最佳；C因素(提取次数)对结果有明显影响，确定C₃为最佳。故红参醇提最佳条件为A₁B₂C₃，也即：红参饮片加60％乙醇5倍，加热提取3次，每次1小时。 

(2)红参醇提最佳条件验证实验 

取红参100g，按最佳条件平行提取三份，测定出膏率和人参皂苷Re、Rg1的含量，结果见表4。 

表4红参醇提最佳工艺验证实验结果 

由表4结果可知，筛选出的红参醇提工艺基本稳定。 

2.淫羊藿、红参药渣、制附子等群药的水提取工艺筛选 

(1)正交实验 

分别称取红参药渣适量(相当红参饮片16g)、制附子12g、淫羊藿12g、红景天12g、丹参16g、葶苈子8g、川芎16g、延胡索8g，共9份，按表5的因素水平和表6的实验条件安排实验，加水提取，水提取液冷藏过夜，离心后取上清液分别浓缩干燥，按药典法测定淫羊藿苷的含量和出膏率，并对其进行方差分析，结果见表7。 

表5因素水平表 

表6正交实验表 

表7方差分析表 

由表7可知，A因素(加水量)对结果无显著的影响，A₃为最佳条件；B因素(提取时间)对结果无显著性影响，B₁与B₃结果相差不多，考虑到处方中除淫羊藿以外均为根茎类药材，半小时煎煮时间较短，故选定B₃；C因素(提取次数)对结果无影响，确定C₂为最佳。故淫羊藿等药水提最佳条件为A₃B₃C₂，也即：饮片加水12倍，加热提取2次，每次1.5小时。 

(2)淫羊藿、红参药渣、制附子等群药水提最佳条件验证实验 

按实施例1所述的处方比例取日服剂量(不包括冰片)10倍药材500g，按最佳工艺条件平行提取三份，测定淫羊藿苷的含量，结果见表8。 

表8淫羊藿等水提最佳工艺重复性实验结果 

由表4结果可知，筛选出的群药水提工艺基本稳定。 

3.冰片β-环糊精包合工艺研究 

方法：将β-环糊精(β-CD)加入20℃的适量蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-CD饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用乙醇溶解的冰片(β-CD与冰片的投料重量比为7.4∶1)，20℃下搅拌1h，然后置冰箱内冷藏24h，抽滤，以少量蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-CD，低温真空干燥24h，研碎，过80目筛，即得白色疏松状包合物粉末。计算包合物收率，结果见表9。 

表9β-CD包合冰片的验证实验结果 

由表9结果可见，冰片包合工艺比较稳定，易于操作，可用于制备工艺中。 

4.分离与纯化工艺研究 

(1)淫羊藿等水提取液醇沉条件的优选： 

分别取相当50g生药量的水煎药液浓缩至50ml，共4份，除一份外，其它分别用乙醇沉淀使含醇量分别达到60％、70％、80％，冷藏过夜，滤过，滤液回收乙醇后浓缩，减压干燥，按药典方法测定淫羊藿苷的含量。结果见表10。 

表10淫羊藿等水提取液醇沉条件优选数据表 

“-”：不醇沉。 

由表10结果可见，随着醇沉浓度的增加，出膏率逐渐减少，淫羊藿苷的含量也有逐渐减少。其中60％醇沉后淫羊藿苷的损失最少，故选用60％醇沉比较适宜。 

(2)淫羊藿等水提取液醇沉前浓度的优选 

取相当30g生药量的水煎药液3份，分别按表11浓缩至不同浓度，加乙醇使含醇量达到60％，冷藏过夜，滤过，滤液回收乙醇后浓缩，减压干燥，按药典方法测定淫羊藿苷的含量。结果见表11。 

表11淫羊藿等水提取液浓缩程度的优选 

由表11结果可见，随着药液浓度的增加，醇沉后淫羊藿苷的含量有下降的趋势，故采用药液浓缩比例为1∶1时进行醇沉操作，此时药液的相对密度为1.03-1.05。 

5.浓缩与干燥工艺研究 

取红参醇提取液与其它群药水提醇沉药液合并，回收乙醇至无醇味，分为两份，一份浓缩至相对密度1.10，备用。另一份浓缩至相对密度1.30，备用。分别进行喷雾干燥(进口温度170℃±5℃，出口温度75℃±5℃，压力1kg/cm²)和减压干燥(温度不超过60℃，)实验，结果喷雾干燥出粉困难，黏壁现象严重。60℃减压干燥时浸膏易膨起，干燥效果较好。干浸膏疏松，有利于下一步粉碎、制粒等操作。故采用浓缩至相对密度1.30，控制干燥温度60℃以下进行减压干燥的浓缩与干燥工艺。 

实验例2本发明药物组合物颗粒剂制粒用辅料品种及用量的选择 

1、填充剂品种的选择 

方法：取本发明实施例1方法制备的本发明药物组合物提取物，按处方比例加入β-CD包合物，分别对预胶化淀粉、乳糖、糊精等辅料进行优选，以颗粒合格率及吸湿百分率为考察指标，辅料种类、用量及制粒情况见表12。 

表12填充剂品种的选择 

从表12可知用预胶化淀粉(1号)和糊精(3号)作填充剂制粒时成型性不好，故不采用；而用乳糖(2号)作填充剂比较适宜。 

2、助流剂、润滑剂品种与用量的选择 

为了提高进一步改善颗粒的成型情况和药物粉末的流动性，又对助流剂和润滑剂品种与用量进行了选择。方法：取本发明实施例1方法制备的本发明药物组合物提取物，按处方比例加入β-CD包合物、乳糖，分别加入不同助流剂和润滑剂，混匀制粒，结果见表13。 

表13助流剂和润滑剂品种与用量的选择 

由表13可见，3种处方的颗粒成型率和制粒情况均比较好，故选择1％硬脂酸镁作为助流剂和润滑剂。 

实验例3本发明药物组合物检测方法中含量测定方法的研究实验 

实施例1所述的本发明药物组合物颗粒剂由红参、附子(制)、丹参、红景天、淫羊藿、川芎、延胡索(制)、葶苈子和冰片组成，其中红参为君药。在实验中曾探索复方中红参的含量测定方法，分别采用脱脂后或不脱脂的样品，用乙醇提取后加正丁醇萃取3次，萃取液蒸干后用甲醇溶解，以人参皂苷Rg1为对照品，用HPLC法在203nm测定含量，结果由于人参皂苷的含量较低，且吸收峰处有干扰，无法进行人参皂苷的测定含量。通过实验研究，最终建立了高效液相法测定本制剂中淫羊藿苷含量的方法。 

1、仪器与试剂 

仪器HP1100型高效液相色谱仪。 

试剂水为纯水，乙晴为色谱纯，甲醇为优级纯，其他试剂均为分析纯。 

淫羊藿苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110737-200312，为含量测定规格。 

淫羊藿药材购于北京市药材公司。 

2、色谱分析条件 

色谱柱ZY1104-型液相色谱柱，填料为：Kromasil-C₁₈，5μm，4.6×250mm(北京分析仪器厂)。 

流动相 乙晴-水(27∶73)。 

柱温 30℃。 

检测波长 270nm。 

流    速 1.0ml/min。 

分离度(R)淫羊藿苷峰与相邻杂峰分离度大于1.5。 

理论板数 按淫羊藿苷峰计算应不低于3000。 

3、方法与结果 

(1)流动相选择：采用不同流动相进行实验，如：乙晴∶水(30∶70)、(29.5∶70.5)、(28.5∶71.5)、(27∶73)、(26∶74)；甲醇∶水∶冰醋酸(55.5∶43∶1.5)等，结果显示，以乙晴∶水(27∶73)作为流动相，可使峰与邻峰能达到基线分离。见附图1和2。(2)线性关系考察 

精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(0.1004mg/ml)2、4、6、8、10μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以淫羊藿苷浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y＝-9946+1903753，r＝0.9998。结果表明，淫羊藿苷在0.1004～1.004μg范围内有良好的线性关系，结果见表14，附图3。 

表14淫羊藿苷线性关系 

(3)提取溶媒选择 

取本发明药物组合物研细，取1.2克，平均分6份(为何取六份，下面结果显示只用了三份)，分别加入甲醇、50％甲醇、50％乙醇，超声处理30分钟，按本发明实施例7所述方法测定，结果见表15。 

表15不同溶媒提取比较 

上述结果表明，采用甲醇提取本发明药物组合物，淫羊藿苷含量最高，50％甲醇与50％乙醇提取淫羊藿苷含量稍低，且溶液颜色较深，杂质含量较高。故选择甲醇作为提取溶媒。 

(4)提取方法选择 

取实施例1所述的本发明药物组合物颗粒剂研细，取1.2克，平均分6份，加入70％甲醇，分别以冷浸过夜、加热回流30分钟、超声处理30分钟等方式提取，按本发明实施例7所述方法测定，结果见表16。 

表16不同提取方式样品中淫羊藿苷含量 

上述结果表明，采用冷浸过夜、超声处理及回流提取淫羊藿苷含量接近，为方便起见，采用超声提取即可。 

(5)提取时间选择 

取实施例1所述的本发明药物组合物颗粒剂研细，加入甲醇，分别以超声处理15、30、45分钟提取，按本发明实施例7所述方法测定，结果见表17。 

表17不同提取时间比较结果 

上述结果表明，不同超声处理时间提取，淫羊藿苷含量相差甚微，选择15分钟，作为样品的提取时间即可。 

(6)空白实验 

按实施例1所述的处方药的比例，自配不含淫羊藿的群药，按制剂工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制成空白溶液，依法测定，结果表明空白溶液在与淫羊藿苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰(见附图4)。 

(6)精密度实验 

精密称取实施例1方法制备得到的本发明药物组合物(批号：041105)按实施例7所述方法制成供试品溶液，重复进样5次，测定峰面积，结果见表18。 

表18精密度实验结果 

(7)稳定性实验 

精密称取实施例1方法制备得到的本发明药物组合物(批号：041105)，按实施例7所述方法制成供试品溶液，分别于制备后0、3、6、9、12、24小时依法测定，结果表明淫羊藿苷在24小时内基本稳定，结果见表19。 

表19稳定性实验结果 

(8)重复性实验 

按实施例7所述的含量测定方法，对同一批号(批号：041105)按实施例1方法制备的本发明药物组合物颗粒剂进行测定，求得相对标准偏差小于5％，结果见表20。 

表20重复性实验 

(9)回收率实验 

采用加样回收法，精密称取已知含量的同一批号(批号：041105)按实施例1方法制备的本发明药物组合物颗粒剂约150mg，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.1004mg/ml)2ml，按实施例7所述的供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件，测定，按下式计算回收率，结果见表21。 

表21淫羊藿苷回收率测定结果 

(10)样品测定 

按实施例7所述的含量测定方法，取3批按实施例1方法制备的本发明药物组合物颗粒剂依法测定，结果见表22。 

表22样品测定结果 

根据以上测定结果，再根据药材所含淫羊藿苷的含量，暂定本发明药物组合物每袋(5克)含淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)应不得少于5.0mg。 

实验例4本发明药物组合物对大鼠结扎冠脉所致心力衰竭的保护作用 

1、实验材料 

(1)动物：Wistar种大鼠90只，SPF级，雄性，体重200～220g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2002-0003。 

(2)药物：本发明药物组合物，由本发明实施例1方法制备而成；地高辛片，0.25mg/片，批号040705，上海信谊药厂生产。cTnI免放药盒，天津九鼎医学生物工程有限公司提供，批号050225；CK-MB试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号100151。 

(3)仪器：生理记录仪(PlowerLab/8sp)，澳大利亚埃德仪器国际贸易有限公司(Ad instruments)生产；Z-5000原子吸收光谱仪；全自动γ计数仪(FT-630G)，北京核仪器厂生产；TECHNICON RA-1000型全自动生化分析仪，美国产。 

2、实验方法 

动物分为6组：假手术组(蒸馏水)，模型组(蒸馏水)，地高辛100μg/kg组，本发明药物组合物9、4.5、2.25g生药/kg组。药物以蒸馏水配至所需浓度，给药体积为3ml/kg，给药途径为口服。 

动物戊巴比妥钠腹腔麻醉(0.45％，10ml/kg)，仰位固定，钝性分离，迅速开胸，挤出心脏，于冠状动脉左前降支根部穿线(0号缝合线)，结扎，心脏放回胸腔，关胸，动物恢复自主呼吸。术后七天开始灌胃给药，每日一次，连续一个月。 

实验结束后观测以下指标：1、心脏功能：以生理记录仪(PlowerLab/8sp)测定各项指标。动物麻醉，分离左颈总动脉，插管测量血压，导管继续插入左心室，测量动脉血压峰值(SAP)、左室压(LVP)、左室末期舒张压(LVDEP)、及左室压最大上升速率(dp/dtmax)，同时测量心电图。2、腹主动脉取血，测定血清cTnI、CK-MB含量。3、摘取各脏器测定脏器指数(脏器重量g/体重g×100)：心脏指数，左室指数，肺脏指数，肝脏指数。4、取左室心尖处心肌测定K+、Na+、Ca++含量。5、取心脏、肺脏及肝脏(同部位)作病理检查。 

3、实验结果： 

(1)本发明药物组合物对血流动力学及心电图各项指标的影响 

表23本发明药物组合物对血流动力学的影响 

#：与假手术组比较P＜0.05。*与模型组比较P＜0.05 

表24本发明药物组合物对心电图的影响 

#：与假手术组比较P＜0.05。*与模型组比较P＜0.05 

实验结果证实，模型组LVEDP值升高，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05)；地高辛组及本发明药物组合物9g/kg组LVEDP值降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。 

心电图观察到，模型组心率减慢，t波增加，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05)，地高辛组及本发明药物组合物2.25g/kg组t波降低，与模型组比较有显著性(P＜0.05)差异。 

(2)本发明药物组合物对脏器指数(脏器重量g/体重g， 

)的影响 

表25本发明药物组合物对脏指数(脏器重量g/体重g×100)的影响 

注：###与假手术组比较P＜0.05，P＜0.01；*、**与模型组比较P＜0.05、P＜0.01. 

实验结果证实，模型组心脏指数、左室指数增加，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05～P＜0.01)；地高心组及本发明药物组合物9g/kg组心脏指数、左室指数降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05～P＜0.01)。 

(2)本发明药物组合物对心肌K+、Na+、Ca++含量的影响 

表26本发明药物组合物对心肌K+、Na+、Ca++含量的影响(mg/kg 

) 

# ##与假手术组比较P＜0.05，P＜0.01 

模型组心肌K+含量降低，Na+及Ca++含量增加，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05～P＜0.01)；实验结果显示，本发明药物组合物9g/kg组动物心肌Ca++水平有所下降，但与模型组比较未达到明显的统计学差异；本实验未能观察到各给药组对心肌K+、Na+水平的改善。 

(4)本发明药物组合物对血清cTnI、CK-MB含量的影响 

表27本发明药物组合物对血清cTnI、CK-MB含量的影响 

# ##与假手术组比较P＜0.05，P＜0.01；*、**与模型组比较P＜0.05、P＜0.01. 

实验结果证实，模型组cTnI、CK-MB水平增加，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05～P＜0.01)；地高辛组cTnI值降低，本发明药物组合物2.25g/kg组cTnI、CK-MB值降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05～P＜0.01)。 

(5)病理检查结果 

病理镜下检查结果证实，假手术组心脏三层结构可见，内膜上皮光滑，心肌细胞排列有序，间质内未见炎性细胞浸润及纤维组织缺失；肺脏肺泡清楚，细小支气管可见，部分区域肺泡壁略有增厚。模型组心脏可见心肌壁变薄，片状纤维组织增生，灶性肌纤维断裂缺失，由灶性纤维组织增生替代，并见炎性细胞浸润及纤维组织增生；地高辛组 心脏与模型组比较有所好转，发生病理改变的心脏数减少；本发明药物组合物大剂量组心脏与模型组比较有明显改善，大部分心肌细胞排列整齐，未见肌纤维断裂、缺失及片状、灶状纤维化，少数心脏肌间可见极少炎性细胞浸润及点状纤维化；中剂量组心脏与模型组比较有所好转，作用强度不及大剂量组；小剂量组病理状态有明显改善，个别心脏可见肌层内灶性肌纤维断裂缺失，及肌间纤维化，但范围较小，呈点状。 

4、结论 

实验结果证实，本发明药物组合物对结扎冠脉所致心力衰竭有明显的保护作用。其作用主要为改善心脏功能异常，降低心脏及左室指数，减轻心脏肥厚程度，改善心电图t波升高，降低血清cTnI及CK-MB水平，心肌损伤程度降低，病理改变减轻。 

实验例5本发明药物组合物对大鼠狭窄腹主动脉所致慢性心力衰竭的保护作用 

1、实验材料 

(1)动物：Wistar种大鼠71只，SPF级，雄性，体重200～220kg，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2002-0003。 

(2)药物：本发明药物组合物，由本发明实施例1方法制备而成；地高辛片，0.25mg/片，批号040705，上海信谊药厂生产。A I、AII、ANP、ALD放免试剂盒，北京原子能所提供，批号分别为050225、050225、050225、050225。 

(3)仪器：生理记录仪(PlowerLab/8sp)，澳大利亚埃德仪器国际贸易有限公司(Ad instruments)生产；全自动γ计数仪(FT-630G)，北京核仪器厂生产。 

2、实验方法 

动物分为6组：假手术组(蒸馏水)，模型组(蒸馏水)，地高辛100μg/kg组，本发明药物组合物9、4.5、2.25g生药/kg组。药物以蒸馏水配至所需浓度，给药体积为3ml/kg，给药途径为口服。 

动物戊巴比妥钠腹腔麻醉(0.45％，10ml/kg)，仰位固定，腹中线开腹，在双侧肾动脉分枝梢上处找到腹主动脉，分离，穿线(0号线)，以7号针头(φ＝0.7mm)顺血管结扎后抽出，造成腹主动脉狭窄，关腹。术后一个月开始灌胃给药，每日一次，连续一个月。 

给药结束后观测以下指标：1、心脏功能：以生理记录仪(PlowerLab/8sp)测定各项指标：动物麻醉，分离左颈总动脉，插管测量血压，导管继续插入左心室，测量动脉血压峰值(SAP)、左室压(LVP)、左室末期舒张压(LVDEP)、及左室压最大上升速率(dp/dt _max)，同时测量心电图。2、腹主动脉取血，测定血浆ANP、A I、II及血清ALD含量。3、 摘取各脏器测定脏器指数(脏器重量g/体重g×100)：心脏指数，左室指数，肺脏指数，肝脏指数。4、取心脏、肺脏及肝脏作病理检查。 

3、实验结果： 

(2)本发明药物组合物对血流动力学及心电图各项指标的影响 

表28本发明药物组合物对血流动力学的影响 

##：与假手术组比较、P＜0.01；*、：与模型组比较P＜0.05. 

表29本发明药物组合物对心电图的影响 

#：与假手术组比较P＜0.05；*、：与模型组比较P＜0.05. 

实验结果证实，模型组由于腹主动脉狭窄，心室后负荷增加，导致SAP、LVP、LVEDP升高，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01)；地高辛组LVEDP降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)；本发明药物组合物9g/kg组SAP、LVP及LVEDP降低、4.5g/kg组LVP降低，2.25g/kg组LVEDP降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。 

心电图观察证实，模型组心率减慢，t波升高，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05)，本发明药物组合物4.5g/kg组t波增加改善，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。 

(2)本发明药物组合物对脏器指数(脏器重量mg/体重g)的影响 

表30本发明药物组合物对脏指数(脏器重量g/体重g×100)的影响 

注：##与假手术组比较P＜0.01；*、**与模型组比较P＜0.05、P＜0.01. 

实验结果证实，模型组心脏指数、左室指数、肺脏指数及肝脏指数增加，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01)；地高辛组心脏、左室、肺脏及肝脏指数降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)；本发明药物组合物9g/kg组心脏指数、左室指数降低，2.25g/kg组心脏及肝脏指数降低，与模型组比较有明显差异(P＜0.05)。 

(3)本发明药物组合物对血浆ANF、AII、A I及血清ALD含量的影响 

表31本发明药物组合物对血浆ANP、AII、A I及血清ALD含量的影响 

#：与假手术组比较P＜0.05；*、：与模型组比较P＜0.05. 

实验结果证实，模型组ALD及AII含量增加，与假手术组比较有明显差异(P＜0.05)；本发明药物组合物4.5g/kg组ALD含量降低，与模型组比较有明显差异(P＜0.05)。 

(5)病理检查结果 

病理镜下检查结果证实，假手术组心脏三层结构可见，内膜上皮光滑，心肌细胞排列有序，间质内未见炎性细胞浸润及纤维组织缺失；肺脏肺泡清楚，细小支气管可见，部分区域肺泡壁略有增厚。模型组心脏可见肌间或血管周有炎性细胞浸润及纤维组织增生，造成肌间点状及灶状间质纤维化；肺脏肺泡壁明显增厚，个别区域肺泡壁破坏。地高辛组心脏三层结构可见，内膜上皮光滑，细胞排列有序，仅一只间质可见少许纤维化； 肺脏肺泡壁略有增厚。本发明药物组合物大剂量组心脏大部分三层结构可见，内膜上皮光滑，细胞排列整齐，少数心脏肌间可见极少炎性细胞浸润及点状纤维化；中剂量组心脏同地高辛组，仅一只血管周围可见少许炎性细胞浸润；小剂量组心脏4只可见血管周围炎性细胞浸润或肌间纤维化，但范围较小，呈点状；本发明药物组合物三个剂量组肺脏肺泡壁略有增厚。 

4、结论 

本实验采用腹主动脉狭窄法导致大鼠慢性心力衰竭：腹主动脉狭窄至φ＝0.7mm，术后一个月心肌增厚，逐渐形成心力衰竭，术后一个月开始给药，药后一个月检测各项指标。实验结果证实，模型组SAP、LVP及LVEDP升高；血浆ALD及AII含量增加，与假手术组比较均有显著性差异(P＜0.05-0.01)，显示了压力超负荷性心力衰竭的病理特征。本发明药物组合物组SAP、LVP、LVEDP，心脏、左室指数，血浆ALD水平均有明显改善，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05～P＜0.01)。病理镜下检查结果证实，模型组心脏及肺脏可见显著病理改变，本发明药物组合物大中剂量组病理改变程度较轻，范围较小，发生病理改变的心脏数减少，明显优于模型组。 

实验结果证实，本发明药物组合物对压力超负荷性心力衰竭有明显的保护作用。其作用主要为逆转由于腹主动脉狭窄造成的后负荷增加所引起的心脏功能异常，抑制心电图t波升高，改善心衰心脏指数，降低心脏肥厚程度，调整血清ALD水平。 

实验例6本发明药物组合物对犬急性实验性心力衰竭的影响实验 

1.药物：本发明药物组合物提取清膏，按本发明实施例1方法制备而成，5.357g生药/g膏，由北京市中西医结合医院提供(批号：041110)，临床拟用剂量50.05g生药/人/日。实验用生理盐水配成所需浓度，给药剂量按生药量计算。戊巴比妥钠(化学纯)，广东佛山市化工实验厂进口分装(批号：860901)；地高辛片，0.25mg/片，杭州民生药厂生产(批号：0004-660)。肝素钠注射液，2ml∶12500u/支，南京生物化学制药厂生产〔批号：021102〕。0.9％氯化钠注射液，北京双鹤药业有限公司生产(批号：040312312)。 

2.动物：健康成年杂种犬42只，体重16.33±0.83kg，雌雄兼用。由北京市通利实验动物养殖厂提供[京动许字(2000)第010号]。 

3.实验方法 

实验分为两个部分7组进行，第一部分为正常犬给药组，共分两组：(1)空白对照组(n＝6)，生理盐水3ml/kg；(2)本发明药物组合物组(n＝6)，1.5g生药/kg。第二部分为模型给药组，共分六组：(1)空白对照组(n＝6)，生理盐水3ml/kg；(2)阳性对照药组(n＝6)，地高辛片，100ug/kg；(3)本发明药物组合物组(n＝6)，0.75g生药/kg；(4)本发明药物组合 物组(n＝6)，1.5g生药/kg；(5)本发明药物组合物组(n＝6)，3.0g生药/kg。上述实验药物均在实验前用生理盐水配制成等体积(3ml/kg)，经十二指肠给药。 

实验动物戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉，气管插管，联接电动人工呼吸机(SC-3型，上海医疗设备厂)；分离右侧股静脉，连接电脑微量注射泵(AJ-5803型，上海)，以备输入戊巴比妥钠；分离右侧股动脉插管，测量动脉血压(BP)；左侧第四肋间开胸，暴露心脏，剪开心包，做心包床，分离主动脉，放置电磁流量计(MFV-1100型，日本光电)探头，测量心输出量(CO)；左心室尖部插管，连接压力换能器(MPU-0.5A)，经载波放大器(AP-601G)测定左室内压峰值(LVSP)，经直流放大器(AD-601G)放大10倍，测定左室舒张末期压(LVEDP)，将上述载波放大器(AP-601G)输出信号经微分器(ED-601G)测定左心室内压变化速率最大值(dp/d_tmax)；用心率计(AT-601G)测定心率(HR)并描记变化曲线；以心电放大器(AC-601G)记录标准II导心电图(ECG)，根据心电R波峰判断心室开始收缩的起点至dp/d_tmax的间隔时间(R-dp/d_tmax)^<1>；在左心室表面纵向放置心肌张力换能器(TG-12T)，经载波放大器(AP-601G)测量左室心肌收缩力(LVMCF)。腹部手术游离肾动脉，放置SAGE-300型超声多普勒血流计(美国TRITON公司)探头(Cuff-E，Φ＝2.0mm，20MHz)，测量肾血流量(RBF)。上述各项指标同步记录于MP-100多导生理记录仪(美国BIOPAC)。 

施腹部手术，十二直肠插管，以备给予所试药物。静脉推注肝素注射液(125u/kg)进行肝素化，30min后，记录各项指标，作为心衰前基础值，经电脑微量注射泵恒速输入2％戊巴比妥钠，输入量为0.2ml/min.kg。以dp/dt_max下降70％作为心力衰竭指标^<2>，达此值后调整戊巴比妥钠给入量为0.08ml/min·kg，持续15min，保持dp/dt_max、LVSP相对稳定，记录各项心衰后指标〔药前值〕，十二指肠给入所试药物，分别于药后15、30、45、60、90、120、180min记录各项观测指标。 

正常给药组观察正常犬血流动力学相关指标，术后直接给药，分别于药前、药后15、30、45、60、90、120、180min记录各项指标。 

实验结果进行统计学处理，以药后不同时间的实测值与药前(心衰后)进行自身比较，给药组不同时间变化百分率与对照组进行组间比较，以t检验判断其显著性。 

4.实验结果 

正常给药组血流动力学实验显示，本发明药物组合物1.5g生药/kg可于药后60min至120min增加CO，与药前和对照组相比均有显著性差异P＜0.05-0.01)；也可于药后15、90min时增加正常动物LVSP，与药前和对照组相比均有显著性差异(P＜0.05-0.01)；同时可增加dp/dt_max、RBF，与药前相比有显著性差异(P＜0.05)；而对正常动物LVEDP、R-dp/dt_max、BP、HR、LVMCF及心电图等均无明显改变，与对照组比较无显著差异。 

戊巴比妥钠造成犬急性实验性心力衰竭后，血流动力学指标发生明显变化，30只犬实验结果统计显示：LVSP由145.00±1.55mmHg降至62.43±5.60mmHg，下降56.86±3.17％；dp/dtmax由3098.33±52.33mmHg/s降至1016.69±50.13mmHg/s，下降67.33±1.45％；SP由165.23±3.68mmHg降至73.90±6.86mHg，下降55.17±3.36％；LVEDP由5.10±0.50mmHg升至15.10±1.12mmHg，上升206.01±11.80％；R-dp/dtmax由68.77±2.58ms增至112.63±2.59ms，增加64.58±7.56％；HR由155.25±7.11beats/min减慢至113.30±5.67beats/min，减慢27.04±2.32％；CO由1.310±0.096L/min下降至0.687±0.116L/min，下降46.25±5.77％；LVMCF由26.42±1.34mm减至13.58±1.84mm，下降48.68±4.09％。结果表明，静脉恒速输入一定浓度戊巴比妥钠，麻醉犬出现典型的急性心力衰竭，持续时间可达3hr。各给药组对各项指标的影响如下： 

(1)对左室内压峰值(LVSP)的影响 

表32.本发明药物组合物对犬左室内压峰值(LVSP/mmHg)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表32，附图5。对照组(生理盐水3ml/kg)药后15min至180min，LVSP保持较低的水平。本发明药物组合物三个剂量组药后30min即有明显增加LVSP的作用，并一直持续至药后180min。本发明药物组合物(3.0g生药/kg)剂量组药前(心衰后)LVSP为56.82±7.55mmHg，药后30min时为85.65±18.75mmHg，随着时间的推移，作用逐渐加强，120min时为106.18±26.71mmHg，分别增加了50.64±22.58％和88.00±41.84％，与药前比较(P＜0.01)及与对照组比较(P＜0.05-0.01)差异均非常显著。 

(2)对左室压最大上升速率(dp/dtmax)的影响 

表33本发明药物组合物对犬左室压最大上升速率dp/dtmax(mmHg/s)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表33，附图6。dp/dt_max作为评价心肌收缩性及强心甙作用的重要指标之一，本实验以戊巴比妥钠造成犬心衰模型，心衰后dp/dt_max明显下降，本发明药物组合物则能明显增加dp/dt_max，药后90-120min作用最为显著，本发明药物组合物3.0g生药/kg剂量组分别由药前920.8±197.9mmHg/s上升至2086.0±636.1mmHg/s和2016.3±607.6mmHg/s，上升率分别为132.37±72.54％和125.19±71.67％，与药前及对照组比较均有显著性差异(P＜0.01和P＜0.05)；中剂量和小剂量也分别表现出不同程度的增加作用，药后不同时间点的dp/dt_max高于相应的药前对照组；三个剂量组增加dp/dt_max 作用可维持至药后180min。地高辛作用强度较大，起效速度与本发明药物组合物基本相当；生理盐水组则无明显改变。 

(3)对左室收缩至发生dp/dtmax间隔时间(R-dp/dtmax)的影响 

表34本发明药物组合物对犬左室收缩至发生dp/dtmax间隔时间R-dp/dtmax(ms)的影响 

注：与正常值比较：^△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表34，附图7。戊巴比妥钠诱发动物心衰后R-dp/dt_max明显延长，本发明药物组合物则可在一定程度上缩短R-dp/dt_max，加快心肌细胞的反应速度。1.5g生药/kg剂量组药效作用在药后45min即可表现出来，并一直持续至药后90min，90min时本发明药物组合物1.5g生药/kg剂量组剂量组的R-dp/dt_max与药前相比分别缩短了17.98±5.80％与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。 

(4)对左室心肌收缩力(LVMCF)的影响 

表35本发明药物组合物对犬左室心肌收缩力(mm)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表35，附图8。生理盐水对照组LVMCF给药后随时间延长因动物代偿性恢复而有所增加，但与药前相比无明显差异。本发明药物组合物3.0g/kg剂量组LVMCF药后15至180min明显增加，中剂量组1.5g生药/kg药后也有明显地增加，与药前比较差异显著(P＜0.05-0.01)，LVMCF接近心衰前水平。 

(5)对左室舒张末期压(LVEDP)的影响 

表36本发明药物组合物对犬左室舒张末期压(mmHg)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表36，附图9。心衰后心脏心肌收缩张力降低、左室内压下降的同时，LVEDP显著增加，本发明药物组合物在增加心衰后心脏LVMCF、LVSP的同时，显著降低LVEDP，3.0g生药/kg剂量组药后120、180min时LVEDP分别下降32.12％和35.14％，与药前及对照组比较差异显著(P＜0.001和P＜0.05)。 

(6)对心输出量(CO)的影响 

表37本发明药物组合物对犬心输出量(L/min)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表37，附图10。本发明药物组合物三个剂量组有不同程度的增加CO的作用，但与对照组比较(P＞0.05)无显著性差异。 

(7)对肾血流量(RBF)的影响 

表38本发明药物组合物对犬肾血流量(ml/min)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表38，附图11。本实验以戊巴比妥钠诱发动物急性心衰后导致外周血流量降低，实验观察到动物RBF明显降低，生理盐水对RBF无明显影响。本发明药物组合物三个剂量组有不同程度的增加肾血流量的作用，3.0g生药/kg药后120-180min，RBF与对照组比较(P＜0.05)，有显著性差异。 

(8)对动脉血压(BP)的影响 

表39本发明药物组合物对犬动脉收缩压(mmHg)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

表40本发明药物组合物对犬动脉舒张血压(mmHg)的影响 

注：与正常值比较：△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001；给药前后自身比较：#P＜0.05，##：P＜0.01 ###：P＜0.001；：与对照组比较：*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.001 

结果见表39、40，图12，13。生理盐水对心衰后血压无明显影响。本发明药物组合物三个剂量组药后均增加股动脉收缩压(SP)、舒张压(DP)，药后SP、DP比药前增加可达80％以上，与药前及盐水组比较均有非常显著性差异，其作用可维持至药后180min。 

5、结论 

本实验观察到本发明药物组合物对戊巴比妥钠所致犬实验性心力衰竭有明显的改善作用，主要表现为升高LVSP及dp/dtmax，升高BP，缩短R-dp/dtmax，降低LVEDP，同时明显增加RBP。正常给药组血流动力学实验显示，本发明药物组合物1.5g生药/kg可于药后60min至120min增加CO，与药前和对照组相比均有显著性差异(P＜0.05-0.01)；也可于药后15、90min时增加正常动物LVSP，与药前和对照组相比均有显著性差异(P＜0.05-0.01)；同时可增加dp/dt_max、RBF，与药前相比有显著性差异(P＜0.05)；而对正常动物LVEDP、R-dp/dt_max、BP、HR、LVMCF及心电图等均无明显改变，与对照组比较无显著差异。 

下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。 

具体实施方式

实施例1：本发明药物组合物颗粒剂的制备 

红参     534kg  制附子    400kg 

丹参     534kg  红景天    400kg 

淫羊藿   400kg  川芎      534kg 

制延胡索 267kg  葶苈子    267kg 

冰片     4kg    β-环糊精 30kg。 

乳糖     463kg  阿司帕坦6kg 硬脂酸镁10kg。 

取原料药红参，加5体积倍60％乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95％乙醇至含醇量60％，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；冰片用β-环糊精包合，包合方法为：将β-环糊精加入20℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95％乙醇溶 解的冰片，20℃下搅拌1小时，4℃冷藏24小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥24小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入乳糖、阿司帕坦和硬脂酸镁，按照常规工艺制成颗粒剂；每日口服三次，每次5克。 

实施例2：本发明药物组合物片剂的制备 

红参     580kg  制附子    320kg 

丹参     520kg  红景天    480kg 

淫羊藿   480kg  川芎      520kg 

制延胡索 220kg  葶苈子    280kg 

冰片     5kg    β-环糊精 25kg。 

取原料药红参，加5体积倍60％乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95％乙醇至含醇量60％，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；冰片用β-环糊精包合，包合方法为：将β-环糊精加入20℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95％乙醇溶解的冰片，20℃下搅拌1小时，4℃冷藏24小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥24小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成片剂。 

实施例3：本发明药物组合物口服液的制备 

红参   520kg  制附子  480kg 

丹参   580kg  红景天  320kg 

淫羊藿 320kg  川芎    580kg 

延胡索 280kg  葶苈子  220kg 

冰片   3kg。 

取原料药红参，加5体积倍60％乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95％乙醇至含醇量60％，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；直接加入冰片，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成口服液。 

实施例4：本发明药物组合物颗粒剂的制备 

红参     534kg  制附子    400kg 

丹参     534kg  红景天    400kg 

淫羊藿   400kg  川芎      534kg 

制延胡索 267kg  葶苈子    267kg 

冰片     4kg    β-环糊精 30kg。 

乳糖     420kg 阿司帕坦9kg 硬脂酸镁12kg。 

取原料药红参，加5体积倍60％乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95％乙醇至含醇量60％，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；冰片用β-环糊精包合，包合方法为：将β-环糊精加入20℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95％乙醇溶解的冰片，20℃下搅拌1小时，4℃冷藏24小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥24小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入乳糖、阿司帕坦和硬脂酸镁，按照常规工艺制成颗粒剂；每日口服三次，每次5克。 

实施例5：本发明药物组合物丸剂的制备 

红参     580kg  制附子 320kg 

丹参     520kg  红景天 480kg 

淫羊藿   480kg  川芎   520kg 

制延胡索 220kg  葶苈子 280kg 

冰片     5kg。 

取原料药红参，加5体积倍60％乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95％乙醇至含醇量60％，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；冰片用β-环糊精25kg包合，包合方法为：将β-环糊精加入20℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95％乙醇溶解的冰片，20℃下搅拌1小时，4℃冷藏24小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部 分未包合β-环糊精，低温真空干燥24小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成丸剂。 

实施例6：本发明药物组合物缓释制剂的制备 

红参   520kg  制附子  480kg 

丹参   580kg  红景天  320kg 

淫羊藿 320kg  川芎    580kg 

延胡索 280kg  葶苈子  220kg 

冰片   3kg。 

取原料药红参，加5体积倍60％乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95％乙醇至含醇量60％，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；冰片用β-环糊精35kg包合，包合方法为：将β-环糊精加入20℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95％乙醇溶解的冰片，20℃下搅拌1小时，4℃冷藏24小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥24小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成缓释制剂。 

实施例7：本发明实施例1所述的药物组合物颗粒剂的检测方法 

鉴别方法： 

(1)取本发明药物组合物颗粒剂1g研细，加0.2％盐酸25ml回流提取1小时，滤过，滤液加氯化钠3g使溶解，加醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照品溶液各4μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝5∶4∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 

(2)取本发明药物组合物颗粒剂1g研细，置于具塞离心管中，加无水乙醇1ml，浸泡12小时后，超声处理20分钟，离心每20分钟3000转，上清液作为供试品溶液；取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法 (中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品及对照品溶液各9μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60℃～90℃石油醚-乙醚＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

(3)取本发明药物组合物颗粒剂2g研细，加水20ml使溶解，滤过，滤液加水饱合正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用水20ml洗涤，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Rb₁、Re、Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，点成条状，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶40∶22∶10于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红斑点； 

(4)取本发明药物组合物颗粒剂4g研细，加水30ml使溶解，用氨试液调节pH值至9-10，加氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿，浓缩至干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚＝4∶1，氨水饱和为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 

(5)取本发明药物组合物颗粒剂1g研细，加水20ml使溶解，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取红景天药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照药材溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝8∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

检查方法： 

乌头碱限量：取本发明药物组合物颗粒剂50g研细，加乙醚300ml振摇10分钟，加氨试液20ml，振摇30分钟，分取醚液，蒸干，加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)实验，吸取供试品溶液6μl，对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚＝1∶2.5为展开剂，氨水饱和，展开，取出，晾干，喷以按《中国药典》2005版附录XVB方法配制的改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点应小于对照斑点，或不出现斑点； 

含量测定方法： 

照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-水＝27∶73为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品2.5mg，置25ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，每1ml含淫羊藿苷0.1mg，即得； 

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物颗粒剂0.2g研细，，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，功率100W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得； 

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本发明药物组合物日用制剂量含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于15.0mg。 

实施例8：本发明实施例2所述的药物组合物片剂的检测方法 

含量测定方法： 

照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-水＝27∶73为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品2.5mg，置25ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，每1ml含淫羊藿苷0.1mg，即得； 

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物片剂研细，称取日用制剂量的2/150，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，功 率100W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得； 

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本发明药物组合物片剂日用制剂量含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于15.0mg。 

实施例9：本发明实施例4所述的药物组合物颗粒剂的检测方法 

鉴别方法： 

(1)取本发明药物组合物颗粒剂1g研细，加0.2％盐酸25ml回流提取1小时，滤过，滤液加氯化钠3g使溶解，加醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照品溶液各4μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝5∶4∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 

(2)取本发明药物组合物颗粒剂1g研细，加水20ml使溶解，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取红景天药材1g，加水煎煮2次，每一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)实验，吸取供试品、对照药材溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸＝8∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

含量测定方法： 

照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2005年版一部附录VID)测定； 

色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-水＝27∶73为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品2.5mg，置25ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，每1ml含淫羊藿苷0.1mg，即得； 

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物颗粒剂0.2g研细，，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，功率100W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得； 

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本发明药物组合物日用制剂量含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于15.0mg。 

实施例10：本发明药物组合物颗粒剂的制备 

红参     534kg  制附子    400kg 

丹参     534kg  红景天    400kg 

淫羊藿   400kg  川芎      534kg 

制延胡索 267kg  葶苈子    267kg 

冰片     4kg    β-环糊精 30kg。 

乳糖4    63kg   阿司帕坦6kg 硬脂酸镁10kg。 

取原料，按照常规工艺制成颗粒剂；每日口服三次，每次5克。 

实施例11：本发明药物组合物片剂的制备 

红参     580kg  制附子  320kg 

丹参     520kg  红景天  480kg 

淫羊藿   480kg  川芎    520kg 

制延胡索 220kg  葶苈子  280kg 

冰片     5kg。 

取原料药，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成片剂。 

Claims (11)

1.一种具有治疗心力衰竭作用的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

红参     500-600重量份    制附子 300-500重量份

丹参     500-600重量份    红景天   300-500重量份

淫羊藿   300-500重量份    川芎     500-600重量份

延胡索   200-300重量份    葶苈子   200-300重量份

冰片     2-6重量份。

2.如权利要求1所述的的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

红参     534重量份        制附子 400重量份

丹参     534重量份        红景天   400重量份

淫羊藿   400重量份        川芎     534重量份

延胡索   267重量份        葶苈子   267重量份

冰片     4重量份；

或

红参     580重量份        制附子 320重量份

丹参     520重量份        红景天   480重量份

淫羊藿   480重量份        川芎     520重量份

延胡索   220重量份        葶苈子   280重量份

冰片     5重量份；

或

红参     520重量份        制附子 480重量份

丹参     580重量份        红景天   320重量份

淫羊藿   320重量份        川芎     580重量份

延胡索   280重量份        葶苈子   220重量份

冰片     3重量份。

3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于其中所述的延胡索为制延胡索。

4.如权利要求1-3任一所述的药物组合物，其特征在于取药物组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成临床接受的颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于其中该药物组合物颗粒剂的原料组成中还加入如下辅料：

β-环糊精20-40重量份   乳糖 400-500重量份    阿司帕坦2-10重量份  硬脂酸镁5-15重量份。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于其中该药物组合物颗粒剂的原料组成加入的辅料为：

β-环糊精30重量份    乳糖 463重量份    阿司帕坦6重量份

硬脂酸镁10重量份；

或

β-环糊精25重量份    乳糖 420重量份    阿司帕坦9重量份

硬脂酸镁12重量份；

或

β-环糊精35重量份    乳糖 480重量份    阿司帕坦3重量份

硬脂酸镁6重量份。

7.如权利要求1-6任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

取原料药红参，加3-7体积倍40%-80%乙醇提取2-4次，每次0.5-2小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加10-15体积倍的水，加热提取1-3次，每次1-2小时，药液滤过，在40℃-60℃下浓缩至相对密度1.01-1.07，加95%乙醇至含醇量40%-80%，3℃-5℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；再直接加入冰片，或将冰片用β-环糊精包合，包合方法为：将β-环糊精加入10℃-30℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95%乙醇溶解的冰片，10℃-30℃下搅拌0.5-2小时，3℃-5℃冷藏12-36小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥12-36小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成临床接受的颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

8.如权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

取原料药红参，加5体积倍60%乙醇提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，备用；另取红参饮片药渣与除冰片外其它原料药加12体积倍的水，加热提取2次，每次1.5小时，药液滤过，在50℃下浓缩至相对密度1.03-1.05，加95%乙醇至含醇量60%，4℃冷藏过夜，滤过，与红参提取液合并；回收乙醇至无醇味，于60℃以下进行减压干燥，浸膏粉碎过100目筛，得药粉；再直接加入冰片，或将冰片用β-环糊精包合，包合方法为：将β-环糊精加入20℃的蒸馏水中搅拌至溶解，制成β-环糊精饱和溶液，边搅拌边缓慢滴加用95%乙醇溶解的冰片，20℃下搅拌1小时，4℃冷藏24小时，抽滤，以蒸馏水洗涤，以洗去部分未包合β-环糊精，低温真空干燥24小时，研碎，过80目筛，即得白色疏松状冰片包合物粉末，混合均匀，再加入其他常规辅料，按照常规工艺制成临床接受的颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

9.如权利要求1-6任一所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括鉴别、检查和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别方法：

(1)取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/20-1/10，加0.2%盐酸20-30ml回流提取0.5-2小时，滤过，滤液加氯化钠2-4g使溶解，加醋酸乙酯提取2-4次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至干，残渣加乙醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参药材0.5-2g，加5-10重量倍水煎煮1-3次，每次提取0.5-2小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验，吸取供试品、对照品溶液各3-5μl，对照药材溶液1-3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯—甲酸=2-8：3-5：1-3为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（2）取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/20-1/10，置于具塞离心管中，加无水乙醇0.5-2ml，浸泡6-24小时后，超声处理10-30分钟，离心每10-30分钟3000转，上清液作为供试品溶液；取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.2-0.8mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验,吸取供试品及对照品溶液各5-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60℃～90℃石油醚—乙醚=5-10：2-4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-7%香草醛硫酸液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（3）取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/10-1/5，加水10-30ml使溶解，滤过，滤液加水饱合正丁醇提取2-4次，每次10-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次10-30ml，再用水10-30ml洗涤，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Rb₁ 、Re、Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml各含1-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验，吸取供试品溶液4-8μl、对照品溶液1-3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，点成条状，以氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水=10-20：30-50：20-25：5-15 于5℃-15℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-15%硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红斑点；

（4）取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/5-2/5，加水20-40ml使溶解，用氨试液调节pH值至9-10，加氯仿提取2-4次，每次10-30ml，合并氯仿，浓缩至干，残渣加甲醇0.2-0.8ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索药材0.5-2g，加5-10重量倍水煎煮1-3次，每次提取0.5-2小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验,吸取供试品溶液5-15μl，对照药材溶液及对照品溶液各1-3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿—乙醚=3-5：0.5-2，氨水饱和为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/20-1/10，加水10-30ml使溶解，滤过，滤液加醋酸乙酯提取1-3次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至0.5-2ml，作为供试品溶液；另取红景天药材0.5-2g，加5-10重量倍水煎煮1-3次，每次提取0.5-2小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验，吸取供试品、对照药材溶液各2-4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯—甲酸=5-10：1-3：0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-3%三氯化铁乙醇液，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查方法：

乌头碱限量：取药物组合物研细，称取日用制剂量的5/3-5，加乙醚250-350ml振摇5-15分钟，加氨试液10-30ml，振摇20-40分钟，分取醚液，蒸干，加无水乙醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含1-3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB的薄层色谱法实验,吸取供试品溶液4-8μl，对照品溶液各2-7μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿—乙醚=0.5-2：2-3为展开剂，氨水饱和，展开，取出，晾干，喷以按《中国药典》2005版附录XVB方法配制的改良碘化铋钾试液，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点应小于对照斑点，或不出现斑点；

含量测定方法：

照中华人民共和国药典2005年版一部附录VID的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴—水=25-30：70-75为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品2-3mg，置20-30ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，每1ml含淫羊藿苷 0.1mg，即得；

供试品溶液的制备：取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/150-1/50，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理10-20分钟，功率100W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

药物组合物日用制剂量含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于10.0-20.0mg。

10.如权利要求9所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括鉴别、检查和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别方法：

(1)取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/15，加0.2%盐酸25ml回流提取1小时，滤过，滤液加氯化钠3g使溶解，加醋酸乙酯提取3次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参药材1g，加水煎煮2次，第一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验，吸取供试品、对照品溶液各4μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯—甲酸=5：4：2为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（2）取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/15，置于具塞离心管中，加无水乙醇1ml，浸泡12小时后，超声处理20分钟，离心每20分钟3000转，上清液作为供试品溶液；取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验,吸取供试品及对照品溶液各9μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60℃～90℃石油醚—乙醚=7：3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（3）取药物组合物研细，称取日用制剂量的2/15，加水20ml使溶解，滤过，滤液加水饱合正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用水20ml洗涤，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Rb₁ 、Re、Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验,，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，点成条状，以氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水=15：40：22：10 于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红斑点；

（4）取药物组合物研细，称取日用制剂量的4/15，加水30ml使溶解，用氨试液调节pH值至9-10，加氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿，浓缩至干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索药材1g，加水煎煮2次，第一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验,吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿—乙醚=4：1，氨水饱和为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）取药物组合物研细，称取日用制剂量的1/15，加水20ml使溶解，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取红景天药材1g，加水煎煮2次，第一次加8重量倍水，第二次加6重量倍水，每次提取1小时，水煎液按同法制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB的薄层色谱法实验，吸取供试品、对照药材溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯—甲酸=8：2：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇液，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查方法：

乌头碱限量：取药物组合物研细，称取日用制剂量的10/3，加乙醚300ml振摇10分钟，加氨试液20ml，振摇30分钟，分取醚液，蒸干，加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB的薄层色谱法实验,吸取供试品溶液6μl，对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿—乙醚=1：2.5为展开剂，氨水饱和，展开，取出，晾干，喷以按《中国药典》2005版附录XVB方法配制的改良碘化铋钾试液，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点应小于对照斑点，或不出现斑点；

含量测定方法：

照中华人民共和国药典2005年版一部附录VID的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴—水=27：73为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品2.5mg，置25ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，每1ml含淫羊藿苷 0.1mg，即得；

供试品溶液的制备：取药物组合物研细，称取日用制剂量的2/150，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，功率100W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

药物组合物日用制剂量含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于15.0mg。

11.如权利要求1-6任一所述的药物组合物在制备具有治疗心力衰竭作用的药物中的应用。

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