CN107334813A - 一种四方蒿提取物及其制法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种四方蒿提取物及其制法和用途。它是以唇形科草本植物四方蒿全草为原料，经提取、浓缩、酸化、过滤、柱吸附等操作步骤制备得到的总酚酸有效部位，含有迷迭香酸和木犀草素‑7‑O‑葡萄糖苷，还可含有木犀草素、5‑羟基‑6,7‑二甲氧基黄酮、5‑羟基‑7,8‑二甲氧基黄酮等黄酮类化合物，这些酚酸性成分在四方蒿提取物中按特定配比组合，协同起效，具有显著的清除氧自由基、抗血小板聚集、抗心肌缺血、抗心律失常、抗炎、减小心肌梗死面积指数等作用，安全低毒。提取物外观呈棕色固体，不易吸潮，化学性质稳定，可方便地制成各种口服或注射剂型，用于冠心病的预防和/或治疗。

Description

一种四方蒿提取物及其制法和用途

技术领域

本发明属于植物药领域，涉及一种药用植物提取物，具体而言，是以四方蒿全草为原料提取的总酚酸有效部位及其在制备防治冠心病药物中的应用。

背景技术

冠心病是冠状动脉性心脏病的简称，也是一种最常见心脏病，是因冠状动脉粥样硬化狭窄或冠状动脉痉挛所致心肌缺血、缺氧或坏死的心脏病，亦称缺血性心脏病。近年来，冠心病发病率呈不断上升趋势，严重威胁人类健康，成为主要致死疾病之一。2012年发表于《柳叶刀》的全球疾病负担研究表明，在1990年～2010年间全球人群的235种死亡原因中，缺血性心脏病排名第一。2013年发表于《柳叶刀》的中国疾病负担研究表明，中国人群死因前三位依次是卒中、缺血性心脏病及慢阻肺，其中前两位占到全部心血管病(包括脑血管病)的90％左右，因此心血管病是中国公共卫生及健康事业所面临的严峻挑战。冠心病治疗主要包括药物治疗、介入和血运重建手术等方法。目前，药物治疗仍是减少患者心绞痛发作和提高生活质量的主要治疗方式。现有常用药物有硝酸酯、β-受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、抗凝剂等。许多报道显示，这些药物都存在比较严重的不良反应和耐药性问题，远期疗效不甚理想。介入和手术适合冠脉病变或心肌缺血严重的患者，其缓解心绞痛比单纯药物治疗更有效，但在提高生存率方面还存在争议，花费也很高。因此，研发新的治疗冠心病心绞痛药物依然是医药界面临的艰巨任务。长期的临床实践和现代药理学研究表明，中草药能通过多靶点、多途径、多层次治疗冠心病，不仅能显著改善患者的临床症状，而且能促进病理损伤的修复，从根本上延缓病程的进展，相对化学药具有一些独特优势。应用现代技术从中草药中寻找多样性有效成分并制成安全、有效、可控、使用方便的现代剂型，已成为新药创制的重要途径。

四方蒿是一种唇形科草本植物，学名Elsholtzia blanda Benth.，又称沙虫药、四棱蒿、黑头草、白香薷、大香薷、滇香薷、鸡肝散、鸡骨柴等，主要分布于我国西部地区，《云南省药材标准》收载的“鸡肝散”(云YCBZ0022-2005)即是四方蒿的干燥花序，为当地少数民族习用药材，其功能主治为清热、解表、利尿、明目，用于风热感冒、目赤肿痛、眼目昏花、夜盲、黄疸胁痛、小便不利、急性肾炎等。根据现有文献可知，四方蒿含黄酮、三萜、甾醇、挥发油及其它类型的多种化学成分[中国中药杂志，2005，20(3)：1589；植物学报，2001，43(5)：545；中国中药杂志，1999，24(2)：96；西北师范大学学报自然科学版，2002，(3)：58]。有学者曾从四方蒿的干燥花序中提取总黄酮并制成片剂，试图开发为治疗胸痹症的新药[中国中药杂志，2006，31(21)：1827]；中国发明专利申请200510106262.7、02133759.4、200510011048.3和201310414363.5还公开了四方蒿黄酮在治疗炎症、眼科疾病、心血管疾病、肺部感染性疾病方面的应用。以木犀草素-7-O-葡萄糖苷为主的四方蒿总黄酮一直是医药界研究和开发的重点，对于四方蒿中其它非黄酮酚性成分的结构和活性则鲜见报道，迄今也没有任何四方蒿药品上市。

发明内容

为了科学、高效地开发四方蒿资源，发明人对四方蒿全草进行了系统的化学研究，从中分离出木犀草素-7-O-葡萄糖苷(如下式1所示)、木犀草素-5-O-葡萄糖苷(如下式2所示)、木犀草素(如下式3所示)、5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮(如下式4所示)、5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮(如下式5所示)等已知的黄酮类化合物，同时意外发现，该植物还富含一种非黄酮成分——迷迭香酸(rosmarinic acid，如下式6所示)，其在叶片中的含量竟高达1％以上，与木犀草素-7-O-葡萄糖苷相当。进一步的优效性试验显示，四方蒿的两种主要酚性成分——木犀草素-7-O-葡萄糖苷和迷迭香酸，在大鼠急性心肌缺血模型上均显示保护作用，并有明显的协同效应，同等剂量下二者1：1混合物药效明显强于两个单体。这些突破性发现引起了发明人对四方蒿酚酸药用价值的浓厚兴趣。

本发明的目的之一是提供一种四方蒿的总酚酸有效部位(TPE)，含有迷迭香酸和木犀草素-7-O-葡萄糖苷这两种主成分，还可进一步含有木犀草素-5-O-葡萄糖苷、木犀草素、5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮、5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮等成分中的任何一种或更多种；总酚酸含迷迭香酸5％～50％(重量)，含木犀草素-7-O-葡萄糖苷5％～50％(重量)。化合物1和化合物6均为已知天然产物，它们在植物界广泛存在，但以如此高的含量和特定比例存在于四方蒿，正是本发明意外和有益的重要发现之一。附图1为本发明提取物的典型HPLC色谱图，反映了该总酚酸化学组成的基本概况。

为了说明迷迭香酸与四方蒿黄酮之间的配伍合理性，本发明应用冠脉结扎大鼠心肌缺血模型对二者进行了抗心肌缺血比较实验。需要特别解释的是，鉴于四方蒿总黄酮组成复杂，制备和质量控制均有一定难度，故选择含量最突出的木犀草素-7-O-葡萄糖苷单体作为四方蒿总黄酮的代表成分用于药理实验。

材料：供试药物迷迭香酸和木犀草素-7-O-葡萄糖苷由发明人自四方蒿乙醇提取物中分离得到，并经¹HNMR(见附图9和10)分析确证结构，HPLC纯度均为95％。阳性对照用盐酸普萘洛尔。动物选Wister大鼠，体重180～220g，雌雄各半。

方法：①分组及给药：将健康大鼠进行心电图筛选，弃去S-T段、T波及心律异常者。将筛选合格大鼠随机分为化合物1组(木犀草素-7-O-葡萄糖苷)、化合物6组(迷迭香酸)、混合物组(化合物1和化合物6等量混合)、模型组、假手术组、阳性对照组，每组10只。给药组剂量均为80mg/kg,阳性对照组剂量为2.8mg/kg,临用前加0.5％CMC溶液研磨成混悬液。模型组和假手术给予同体积0.5％CMC溶液。均灌胃给药，1次/d，给药7天。②模型制备：大鼠末次给药2小时后，戊巴比妥麻醉(30mg/kg)，剪开皮肤，分离肌肉层，剪断第四、五肋骨，气管插管，连接呼吸机辅助呼吸(吸呼比为1∶2，频率为64次/min，潮气量为12mL/kg)。钝性分离心包膜，暴露心脏，结扎冠状动脉左前降支，结扎后放回心脏，关闭胸腔，缝合肌肉及皮肤。③血样采集与处理：结扎5小时后，下腔静脉取血，离心(3000转，l0分钟)取血清，测定肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等指标。④梗死面积计算：取血后迅速剪下心脏，生理盐水冲洗，清除血管及脂肪组织，吸去水分，全心称重。将心脏置于冰箱中速冻，取出后由心尖至心底切成等厚5片，放入新配制的1％氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液中，37℃恒温水浴，染色15分钟。染色后流水冲洗去除多余染料，梗死区不染色，未梗死区呈红色。切取梗死区称重，计算梗死面积(％)。⑤统计学方法：数据采用SPSS10.0统计软件分析，计量资料以(χ±s)表示，采用方差分析，p<0.05为差异有统计学意义。

结果：

①对急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死面积的影响(表1)

与模型组比较，各给药组心肌梗死面积均减少，其中以化合物6、混合物组作用更为

显著。

表1.

组别	动物数	剂量(mg/kg)	梗死面积(％)
				假手术	10	--	0
模型	10	--	11.76±2.45
				化合物1	10	80	9.45±2.27*
化合物6	10	80	8.46±1.76**
				混合物	10	80	8.22±2.65**
阳性对照	10	2.8	8.25±2.45**

注：同模型组比较：*表示p<0.05；**表示<0.01

②对急性心肌缺血大鼠血清CK、CK-MB、LDH及AST的影响(表2)

与模型组比较，其它各组CK、CK-MB、LDH、AST含量均降低，以混合物组更为显著。

表2.

③对急性心肌缺血大鼠心肌血清MDA、SOD及NO的影响(表3)

同假手术组比较，各组MDA均升高，SOD、NO均下降；与化合物1和化合物6组比较，混合物组MDA含量升高更少，而SOD和NO含量下降更少。

表3.

组别	动物数	剂量(mg/kg)	MDA(nmol/L)	SOD(U/L)	NO(μmol/L)
						假手术	10	--	6.03±1.78	255.8±25.6**	124.6±17.7**
模型	10	--	9.72±2.11	131.8±34.8	67.8±18.3
						化合物1	10	80	8.32±1.98*	164.4±32.6*	95.3±20.1*
化合物6	10	80	7.28±2,35*	195.9±28.9**	103.5±18.8**
						混合物	10	80	6.87±2.43**	185.6±35.8*	108.2±18.9**
阳性对照	10	2.8	6.55±2.15**	180.1±26.6**	104.6±17.8**

上述试验表明，化合物1、化合物6和混合物组均能缩小冠脉结扎引起的模型大鼠心肌梗死面积，降低模型大鼠血清CK、CK-MB、AST、LDH、MDA的含量，提高模型大鼠血清NO、SOD含量，说明供试药物可通过不同途径对心肌细胞起保护作用，具有一定的抗心肌缺血作用，按强弱排序：阳性药>混合物>化合物6>化合物1。混合物的活性既大于化合物1，也大于化合物6，提示化合物1和化合物6之间存在协同关系，这对四方蒿提取物充分发挥抗心肌缺血药效是十分有益的。

本发明的目的之二是提供一种四方蒿总酚酸有效部位的制备方法(附图2)，包含如下顺序操作步骤：

a.取四方蒿全草，可为新鲜全草、干燥全草或药材，切碎，用水、乙醇或甲醇作溶媒，优选水，提取3～5次，合并提取液，浓缩，得浸膏；

b.浸膏加入3～10倍量的水，搅拌使充分溶解，滤过，滤液加稀硫酸或稀盐酸酸化至pH值1.5～3.0，静置，滤过，分为沉淀和水溶液两部分；

c.步骤b的沉淀用50％～95％乙醇溶解，滤过，滤液备用；

d.步骤b的水溶液通过聚酰胺柱进行吸附，先用水洗至流出液近无色且pH值>5，再用50％～95％的乙醇洗脱；

e.收集步骤d的乙醇洗脱液，与步骤c的滤液合并，浓缩，干燥，得总酚酸。

本发明方法路线简捷，操作方便，无需任何特殊设备、化学试剂或其它有机溶媒，安全环保，因此易于工业化。更重要的是，按照本方法制备的总酚酸外观为棕黄色固体，不易吸潮，是一种纯度高、质量可控、满足5类中药技术要求的植物药有效部位，可控物质含量达到50％以上，可作为原料药方便地用于各种口服制剂的制备，例如片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、颗粒剂、口服液等；也可以通过加碱成盐，使酚酸类成分可逆地转化为水溶性盐，制成注射液或冻干粉针等。

本发明的目的之三是提供四方蒿总酚酸(TPE)在制备防治冠心病药物中的应用。四方蒿的总酚酸有效部位防治冠心病是通过清除氧自由基、抗血小板聚集、抗心肌缺血、抗心律失常、抗炎、减小心肌梗死面积等途径实现。下面是TPE抗大鼠心肌缺血药效学研究的实验结果。

受试药物：四方蒿总酚酸(TPE)按照本发明提供的制法自制，含迷迭香酸24.2％，木犀草素-7-O-葡萄糖苷23.6％，木犀草素3.5％，5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮2.8％，5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮1.2％。临用前加0.5％CMC溶液研磨成混悬液。

动物：Sprague Dawley品系大鼠，由福建医大实验动物中心提供，鼠龄7～8周龄，体重220±20g，性别均为雄性。

1.TPE抗垂体后叶素诱发大鼠急性心肌缺血试验

方法：SD雄性大鼠81只，随机分为5组，TPE低、中、高剂量组分别ig TPE 100、150、200mg/kg，另设溶剂对照组ig 4ml/kg 0.5％CMC溶液，阳性对照组ig地奥心血康150mg/kg。各组大鼠均连续灌胃给药5d，第5天灌胃后40min，腹腔注射2g/kg乌拉坦麻醉，由Medlab5.5生物信号采集系统连续描记一段Ⅱ导心电图。灌胃后60min尾静脉注射垂体后叶素0.75U/kg，恒速10s内注完，连续记录心电图10min。分别测定注射前和注射后15s、30s、1、2、3、5、7、10min时心电图变化，心电图测量以PR段为基线，每个时点测5个心动周期，取其平均值，比较组间T波振幅和心率的变化，观察iv垂体后叶素后10min内心律失常发生的动物例数，计算心律失常发生的百分率，作统计分析。

实验结束后大鼠断头取血、取心脏，采用Olympus Au-2700全自动生化分析仪测定血清CK、Ca²⁺，采用硝酸还原酶法NO试剂盒测定NO。心脏用4℃生理盐水冲洗干净残留血液，分离左心室称重，加9倍重量4℃生理盐水制成10％心肌匀浆，以TBA法测定匀浆MDA含量，考马斯亮兰法测定蛋白含量，取匀浆上清测定Ca²⁺和NO，方法同血清，综合心电图以及生化指标评价药物的作用。

结果：与溶剂对照组(ig 0.5％CMC溶液4ml/kg)比较，TPE 200mg/kg能显著降低注射垂体后叶素后心律失常的发生率、对抗注射垂体后叶素后T波抬高和心率减慢(p<0.05，p<0.01)，TPE 100、150和阳性对照地奥心血康也有对抗心电图T波抬高和心率减慢的趋势，但无统计学意义；TPE 100、150和200mg/kg均可降低血清CK水平(p<0.05，p<0.01)，显著增加血清和心肌匀浆的NO水平(p<0.05，p<0.01)，增加血清钙离子浓度并降低心肌匀浆钙离子浓度(p<0.05，p<0.01)，有效地减轻了注射垂体后叶素后引起的心肌细胞内Ca²⁺超载。TPE100、150和200mg/kg还可降低心肌匀浆脂质过氧化产物丙二醛的含量(p<0.05)，从而降低了自由基对心肌的损伤作用。阳性对照药地奥心血康组也有上述变化，但其无抗自由基作用。

2.TPE抗大鼠冠脉结扎诱导心肌梗死试验

方法：SD雄性大鼠90只，随机分为6组，TPE低、中、高剂量组分别ig TPE 100、150、200mg/kg，另设溶剂对照组ig 4ml/kg 0.5％CMC溶液，阳性对照组ig地奥心血康150mg/kg，以及假手术组ig 4ml/kg 0.5％CMC溶液(只穿线，不结扎)。各组大鼠均连续灌胃给药5d，于第5天灌胃后20min，腹腔注射50mg/kg戊巴比妥钠麻醉，采用Medlab 5.5生物信号采集系统连续描记一段Ⅱ导心电图，分离气管后气管插管，连接动物人工呼吸机行人工呼吸，呼吸时比1：2，呼吸频率60次/min，潮气量3ml/100g。于左胸第二、三肋间开胸，暴露心脏，用细小弯针在动脉圆锥与左心耳之间冠脉左前支下穿一细线，3min后结扎冠脉，连续记录心电图15min，缝合胸壁，停止人工呼吸。分别于结扎后60、120、180min再记录一次心电图。180min后大鼠断头取血，测血清CK-MB、Ca²⁺、NO含量；取心脏，用4℃生理盐水冲洗干净残留血液，吸水纸吸干，分离左心室称重，0℃冷冻后将左心室平均分成0.1cm厚的薄片，置于37℃0.5％NBT液染色15min，10％福尔马林固定，区分心肌梗塞区与非梗塞区，分别称重，计算梗塞区占左室重量的百分比。并从心电图中计算冠脉结扎后15min内室性早搏(VE)出现的次数，作组间比较，观察各组出现室性心动过速(VT)、心室纤颤(VF)以及心脏停搏(HS)大鼠数目，作x²检验。

结果：与溶剂对照组(ig 0.5％CMC溶液4ml/kg)比较，TPE 100、150和200mg/kg均可显著减少大鼠冠脉结扎后左室梗死区的心肌重量(p<0.05，p<0.05)，增加大鼠左室非梗死区的心肌重量(p<0.05)，左室梗死区的比例明显减少(p<0.05，p<0.05)，阳性对照地奥心血康组也有上述变化；与假手术组比较，溶剂对照组、阳性对照组及TPE各剂量组大鼠的左室梗死区及左室梗死区百分比均有显著增加。

3.TPE抗乌头碱诱发大鼠心律失常试验

方法：SD雄性大鼠50只，随机分为5组，TPE低、中、高剂量组分别ig TPE 100、200、300mg/kg，另设溶剂对照组ig 10ml/kg 0.5％CMC溶液，阳性对照组ig奎尼丁30mg/kg。各组大鼠均ig给药5d，第5天ig后40min，ip 2g/kg乌拉坦麻醉，由Medlab5.5生物信号采集系统连续描记一段Ⅱ导心电图。ig给药后60min将2μg/ml乌头碱以2μg/min用微泵经股静脉恒速灌注，连续记录Ⅱ导心电图至大鼠死亡，观察大鼠出现VE、VT、VF和HS的时间，计算引起VE、VT、VF和HS所需乌头碱的剂量，作组间t检验。

结果：TPE各剂量组心律失常多表现为一过性室性早搏，持续时间多为10s～30s，均有抗心律失常的作用，呈剂量依赖性，以200mg/kg为显著(p<0.01)，100mg/kg、150mg/kg与200mg/kg比较也有显著性差异(p<0.05)。

与溶剂对照组比较，结扎后15min内，TPE150、200mg/kg均能显著减少VE的发生次数，发生VT的动物只数显著减少(p<0.05)。TPE各剂量组VF发生的动物数均有减少的趋势。溶剂组在结扎后15min内有一只动物死亡，其它各组未见动物死亡。提示TPE对冠脉结扎诱发的心律失常有较好的对抗作用，能减少VE的发生次数，降低恶性心律失常如VT、VF发生，从而有效减少由于心肌梗死诱发心律失常的死亡率。

与溶剂组比较，TPE各剂量组均能极显著提高乌头碱引起VE的阈值(p<0.01)，TPE300mg/kg还能显著提高乌头碱诱发大鼠VT、VF和HS的阈值(p<0.05，p<0.01)，阳性对照药奎尼丁极显著提高乌头碱诱发大鼠VE、VT、VF的阈值(p<0.05)。

4.结论：TPE对大鼠心肌缺血有一定的保护作用，能减小大鼠冠脉结扎后心肌梗死面积指数，对抗由垂体后叶素诱发的急性心肌缺血。其机理与TPE防止心肌钙超载、增加心肌组织NO含量和抗脂质过氧化有关。TPE具有抗心律失常作用，能对抗由冠脉结扎和iv垂体后叶素诱发的缺血性心律失常，提高乌头碱对大鼠的致颤阈。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

图1：本发明四方蒿总酚酸及主要单体的HPLC色谱图。

色谱条件：色谱柱C₁₈，4.6×150mm，5μm；

流动相：甲醇-0.1％甲酸梯度洗脱(时间0→40→50→60min，甲醇30％→70％→100％→100％，0.1％甲酸70％→30％→0％→0％)；

波长：330nm；

流速：1ml/min。

图2：本发明四方蒿总酚酸中木犀草素-5-O-葡萄糖苷的HPLC色谱图，色谱条件同上。

图3：本发明四方蒿总酚酸中木犀草素-7-O-葡萄糖苷的HPLC色谱图，色谱条件同上。

图4：本发明四方蒿总酚酸中迷迭香酸的HPLC色谱图，色谱条件同上。

图5：本发明四方蒿总酚酸中木犀草素的HPLC色谱图，色谱条件同上。

图6：本发明四方蒿总酚酸中5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮的HPLC色谱图，色谱条件同上。

图7：本发明四方蒿总酚酸中5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮的HPLC色谱图，色谱条件同上。

图8：本发明四方蒿总酚酸制备工艺流程图。

图9：本发明四方蒿总酚酸中木犀草素-7-O-葡萄糖苷的¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)图谱。

图10：本发明四方蒿总酚酸中迷迭香酸的¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)图谱。

具体实施方式

下面通过实施例具体说明本发明的内容：

实施例1：四方蒿总酚酸的制备

取四方蒿干燥全草10kg，粉碎，加入12倍量(质量体积比，下同)的水，煎煮三次，每次2h，滤过，合并提取液，减压浓缩，得浸膏1.6kg，放冷，加入6倍量纯水，搅拌使溶解，滤过，滤液加稀盐酸使pH值酸化至2，静置1h，滤过，分成沉淀和水溶液两部分，其中沉淀加80％乙醇溶解，滤过，滤液备用；水溶液通过30～60目聚酰胺柱进行吸附，先用水连续洗脱至流出液近无色，pH值5.5，改用60％乙醇继续洗脱直至流出液近无色，收集乙醇洗脱液，与前面的滤液合并，减压浓缩，残留物真空干燥，粉碎，得总酚酸415g。经HPLC法测定，总酚酸含迷迭香酸23.3％，含木犀草素-7-O-葡萄糖苷22.4％，含木犀草素3.1％，含5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮2.5％，含5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮0.8％。

实施例2：四方蒿总酚酸的制备

取四方蒿干燥全草10kg，粉碎，加入10倍量的80％乙醇，回流提取三次，每次2h，滤过，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得浸膏1.5kg，放冷，加入8倍量纯水，搅拌使溶解，滤过，滤液加稀盐酸使pH值酸化至2，静置1h，滤过，分成沉淀和水溶液两部分，沉淀加80％乙醇溶解，滤过，滤液备用；水溶液通过30～60目聚酰胺柱进行吸附，先用水连续洗脱至流出液近无色，pH值5.5，改用60％乙醇继续洗脱直至流出液近无色，收集乙醇洗脱液，与前面的滤液合并，减压浓缩，残留物真空干燥，粉碎，得总酚酸404g。经HPLC法测定，总酚酸含迷迭香酸24.2％，含木犀草素-7-O-葡萄糖苷23.6％，含木犀草素3.5％，含5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮2.8％，含5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮1.2％。

实施例3：片剂制备

取实施例1制备的总酚酸30g，与淀粉200g、糊精10g混匀，加入10％淀粉浆制软材，用14目尼龙筛网制粒，60～70℃通风干燥，16目筛整粒，加硬脂酸镁3g、羧甲基纤维素钠8g，混匀，压制成1000片，包衣，即得，每片含总酚酸30mg。

实施例4：冻干粉针制备

取实施例1制备的总酚酸20g，置于无菌容器内，加注射用水约900ml，搅拌下滴加5％NaOH，使完全溶解，调节pH值至7.0～7.5，加注射用水至1000ml，然后加配制量的0.02％活性炭搅拌5～10min，用无菌抽滤漏斗过滤，超滤，滤液检验合格后分装于安瓿中，低温冷冻干燥，无菌熔封即得，每支20mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250～500ml稀释后缓慢静脉滴注。

实施例5：胶囊的制备

取实施例1制备的总酚酸30g，加入淀粉148g及硬脂酸镁2g，混匀，直接填充胶囊，制成1000粒，即得。每粒胶囊装内容物180mg，含总酚酸30mg。

实施例6：滴丸的制备

取实施例1制备的总酚酸12g，投入32g加热熔融的聚乙二醇6000中，搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在80～90℃，调节滴丸机液滴定量阀门，由上往下滴入10～15℃的液状石蜡中，共制1000粒，将形成的滴丸沥干并擦除液状石蜡，干燥即得。

实施例7：颗粒剂的制备

取实施例1制备的总酚酸100g、糊精200g、蔗糖粉2700g及乙醇适量，混匀，过10目筛制成颗粒，于60～70℃干燥，整粒，分装成1000包，即得。

以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (8)

1.一种四方蒿提取物，其特征在于：所述四方蒿提取物为以唇形科植物四方蒿全草为原料提取的总酚酸有效部位，包括迷迭香酸、木犀草素-7-O-葡萄糖苷。

2.根据权利要求1所述的四方蒿提取物，其特征在于：还包括木犀草素-5-O-葡萄糖苷、木犀草素、5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮、5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的四方蒿提取物，其特征在于：按重量百分比计，所述四方蒿提取物中含迷迭香酸5％～50％，含木犀草素-7-O-葡萄糖苷5％～50％。

4.一种权利要求1所述的四方蒿提取物的制备方法，其特征在于：包含如下顺序操作步骤：

a.取四方蒿全草，用水、乙醇或甲醇提取3～5次，合并提取液，浓缩，得浸膏；

b.浸膏加入3～10倍量的水，搅拌使充分溶解，滤过，滤液调节pH值至1.5～3.0，静置，滤过，分为沉淀和水溶液两部分；

c.步骤b的沉淀用50％～95％乙醇溶解，滤过，滤液备用；

d.步骤b的水溶液通过聚酰胺柱进行吸附，先用水洗至流出液近无色且pH值>5，再用50％～95％的乙醇洗脱；

e.收集步骤d的乙醇洗脱液，与步骤c的滤液合并，浓缩，干燥，得总酚酸。

5.一种权利要求1所述的四方蒿提取物在制备防治冠心病药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述四方蒿提取物单独或者与药学上许可的其它物质组合，制成药学上许可的剂型。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述剂型包括片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、颗粒剂、口服液、注射液、冻干粉针。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述防治冠心病通过清除氧自由基和/或抗血小板聚集和/或抗心肌缺血和/或抗心律失常和/或抗炎和/或减小心肌梗死面积指数实现。