CN102703548A - 高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法 - Google Patents
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Abstract
一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，它采用如下工艺步骤：（1）配料（2）固定化酶转化（3）脱色过滤（4）离交（5）色谱分离（6）分离母液（7）蔗糖酶酶解（8）异构（9）果葡糖浆（10）干燥（11）果葡糖粉；首先，本发明采用氧化铝-卡拉胶-戊二醛交联固定化技术固定化的果糖基转移酶转化，并采用色谱分离技术制备生产高纯度低聚果糖，同时生成以单糖和蔗糖为主要组分的分离母液；分离母液组分复杂，通常状态下无法利用，直接排掉，造成了资源的浪费和环境的污染；因此本发明同时采用蔗糖酶酶解分离母液中的蔗糖和少量低聚果糖，精制、异构生产果葡糖浆，并采用先进的真空干燥技术制备果葡糖粉，实现了低聚果糖分离母液的综合利用，同时取得可观的经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的新技术，高纯度低聚果糖是采用固定化果糖基转移酶转化，精制、色谱分离技术来制备的，同时产生低聚果糖分离母液；并对分离母液进行综合利用，实现高纯度低聚果糖与果葡糖粉的联合生产，属于糖的制备领域。
背景技术
低聚果糖由于其独特的结构，不被消化道的胃酸和酶消化，能直达大肠，被人体有益的菌群双歧杆菌迅速选择性吸收，使双歧杆菌迅速增殖，并产生短链脂肪酸，使肠道PH值偏向酸性，抑制有害菌群的生长，同时降低某些有害还原酶的活性，减少肠道内致癌物和有害代谢物的生成和积累，真正起到清除肠道垃圾的作用。普通级的低聚果糖中含有约30%的单糖（葡萄糖和果糖）和15%-20%的蔗糖，从而限制了低聚果糖的应用范围，如对于特殊群体，尤其对糖尿病人及龋齿患者不适用。而高纯度低聚果糖几乎不含有单糖和二糖，因此，高纯度低聚果糖适用于肥胖人群、糖尿病人及特定患者群体。
目前，低聚果糖多是以蔗糖为原料发酵生产的，采用发酵法生产，后处理工艺繁琐，导致低聚果糖生产成本高，而且产生大量的废弃物，污染环境。同时，采用发酵法或酶法直接生产的低聚果糖，其有效成分含量一般在55%，高纯度低聚果糖需要进一步采用色谱分离技术进行提纯，将低聚果糖中的单糖和二糖分离出去，同时产生以单糖和二糖为主要组分的分离母液。分离母液中由于组分复杂，难以直接利用，直接排掉，既污染环境又造成了资源的浪费。
中国发明专利ZL 96106345.9采用菌体发酵制备低聚果糖。然而采用菌体发酵，工艺繁琐，成本高，污染严重。中国发明专利ZL 201010102631.6采用蔗糖酶酶解蔗糖溶液，并采用色谱分离技术制备高纯度果糖液和葡萄糖液，然后将葡萄糖液异构生产果葡糖浆，其中没有生产低聚果糖的相关信息，同时其直接采用蔗糖为原料，不涉及低聚果糖分离母液的应用，而且工业中多以淀粉为原料，经过液化、糖化、异构、脱色离交、浓缩来生产果葡糖浆。
中国发明专利ZL 200910026901.7以大孔阴离子树脂固定化果糖基转移酶，所得固定化酶的酶活回收率81.2%，循环使用10次。该固定化酶的酶活回收率低，循环使用率低，树脂预处理复杂，且树脂用量大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的新技术，本技术中高纯度低聚果糖以蔗糖为原料，利用固定化果糖基转移酶转化、色谱分离技术制备的。本发明在于提供一种低聚果糖分离母液综合利用的新技术，并实现了高纯度低聚果糖与果葡糖粉的联合生产。
本发明的技术方案是：一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是它包括以下步骤：（1）配制蔗糖溶液; 配制30%-40%的蔗糖溶液，调节pH4.0-6.0，温度50-60℃。
（2）固定化酶转化：在配制好的蔗糖溶液中加入固定化果糖基转移酶，保温6-8h，低聚果糖含量55%以上，即低聚果糖55液，过滤，收集固定化酶；所述固定化酶转化是采用氧化铝-卡拉胶-戊二醛交联固定化技术固定化的果糖基转移酶进行低聚果糖的转化制备低聚果糖;
（3）高纯度低聚果糖与低聚果糖分离母液制备：经固定化酶转化后的低聚果糖55液经脱色过滤、离交、色谱分离制备含量在95%以上的高纯度低聚果糖;此过程中，同时产生以单糖和蔗糖为主要组分的分离母液;
（4）蔗糖酶酶解：将低聚果糖分离母液浓缩到30%-50%，调pH3~6.5，按100-300g/t（蔗糖）加入蔗糖酶，温度50~60℃，酶解时间12~48h，灭酶;
（5）精制：将蔗糖酶酶解所得的料液，加入活性炭一次脱色过滤、一次离交;
（6）异构：将一次脱色、离交所得的料液，调节pH7.0-9.0，温度50~65℃，加入硫酸镁0.5~1.0kg/m3料液，亚硫酸钠0.5~1.0kg/m3料液，糖浓30%-50%，搅拌15min，然后将料液打入异构柱，柱内温度：50~65℃，流速30~40m3/h;
（7）精制：将异构后料液，加入活性炭二次脱色过滤、二次离交;
（8）浓缩、干燥、粉碎：精制后料液经浓缩、干燥、粉碎得果葡糖粉产品。
本方案的具体特点还有，所述固定化果糖基转移酶进行低聚果糖的转化制备低聚果糖的条件为：蔗糖溶液30%-40%，pH4-6，温度50-60℃，保温6-8h，且该固定化果糖基转移酶的加入量为2000-3000u/kg蔗糖。
所述固定化果糖基转移酶采用氧化铝-卡拉胶-戊二醛交联固定化技术固定是指固定化果糖基转移酶是以氧化铝为载体初次固定，再以卡拉胶包埋，戊二醛为交联剂，再次固定；固定化条件：氧化铝和酶液的体积比为1:2-3，50-60℃水浴，pH 6.0-7.0，以100-200rpm（转/分钟）的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.2%-0.4%，于4-10℃、80-100rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶；再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于戊二醛溶液中硬化6-8h。
该固定化果糖基转移酶最适pH4-6，温度50-60℃，卡拉胶溶液的浓度为20g/L，戊二醛浓度为0.2%-0.4%。
固定化果糖基转移酶其固定化技术为：氧化铝和酶液的体积比为1:2.5，在pH 6.5，55℃水浴，以150rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.3%，于4-10℃、90rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶；
配制20g/L卡拉胶溶液，水浴加热至溶化，然后静置降至常温，得卡拉胶溶液，将初次固定化果糖基转移酶按照10%-20%的重量百分比加入卡拉胶溶液中，再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于0.2%-0.4%的戊二醛溶液中硬化6-8h，用pH7.0的磷酸盐缓冲液将戊二醛冲洗干净，即得再次固定化的果糖基转移酶。
载体氧化铝的物理性质：颗粒直径为2-3mm，堆积密度：0.2-0.4g/cm3，孔容0.5cm3/g，比表面200-300m2/g。
氧化铝和酶液的体积比为1:2.5，在pH 6.5，55℃水浴，以150rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.3%，于4-10℃、90rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶；将初次固定化果糖基转移酶按照15%的重量百分比加入20g/L卡拉胶溶液中，再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于0.2%-0.4%的戊二醛溶液中硬化6-8h，用pH7.0的磷酸盐缓冲液将戊二醛冲洗干净，即得再次固定化的果糖基转移酶。本该固定化果糖基转移酶的酶活回收率可达到88%以上，可重复使用90次以上；该固定化果糖基转移酶的酶活力可达386U/g。
所述蔗糖酶是诺维信β-呋喃果糖苷酶（invertase），其通用商品名为蔗糖酶，酶活力200000U/g，是一种由经选择的酿酒酵母菌株生产的酶制剂；该酶的反应条件为：温度50-60℃，pH3-6.5，加酶量100-300g/t蔗糖，酶解时间12~48h。
采用六效蒸发器对二次离交后的料液进行浓缩。将二次脱色、离交所得的料液打入六效蒸发器干燥，浓缩料液，进料浓度：30%-50%，进料温度：60~65℃；压力：15MPa ~20MPa，出料浓度：50%-60%。
采用带式真空连续干燥法对浓缩后料液进行干燥，得到糖饼；进料浓度50%-60%，真空度-0.08~-0.09MPa，传送带速度为13-20cm/min。
将干燥得到的糖饼，粉碎过60~100目筛子，得到果葡糖粉。
步骤6中异构前料液组分为葡萄糖50%-70%、果糖10%-30%，低聚果糖1%-4%。
本发明的有益效果：
（1）本发明实现了高纯度低聚果糖与果葡糖粉的联合生产，在生产高纯度低聚果糖的同时，既充分利用了高纯度低聚果糖制备过程中产生的分离母液，又生产出高质量的果葡糖粉。
（2）本发明采用固定化果糖基转移酶生产低聚果糖，该技术生产周期短，而且所固定化果糖基转移酶可以重复利用，较发酵法明显简化生产工艺，生产周期短，大大降低了生产成本。本发明是利用固定化果糖基转移酶来生产高纯度低聚果糖，简化了低聚果糖的生产工艺；由于该果糖基转移酶是以氧化铝为载体，初次固定，然后采用卡拉胶包埋，戊二醛为交联剂，再次固定，所以该固定化果糖基转移酶的酶活回收率可达到88%以上，可重复利用90次以上。该技术最大酶活力可达386u/g固定化果糖基转移酶，不污染环境，降低生产成本。
本发明所述固定化果糖基转移酶的技术，采用二次固定，避免的了单次固定中存在酶活回收率低，重复利用率低，酶活力低的问题。当只采用氧化铝为载体固定化果糖基转移酶时，酶活回收率仅为60%，重复利用20次，酶活力仅为210U/g。同时，初次固定化过程中，采用戊二醛交联后再过滤得初次固定化果糖基转移酶，解决了在氧化铝为载体的初次固定化过程中，采用先过滤，再用戊二醛交联，酶活回收率低，酶的固定化得率低，固定化不完全的问题。因此，该固定化果糖基转移酶经两次固定后，大大提升了酶的固定化得率。
（3）本发明利用蔗糖酶将低聚果糖分离母液中的蔗糖和少量低聚糖酶解，并将含有50-70%葡萄糖，10-30%果糖，1-4%低聚果糖的酶解液异构生产果葡糖浆，并采用先进的带式真空连续干燥技术实现了果葡糖粉的生产。
（4）本发明不仅实现了低聚果糖分离母液的综合利用，而且减少对环境的污染以及资源的浪费，经济效益明显。 本发明采用色谱分离技术生产高纯度低聚果糖过程中，每生产1t F95低聚果糖粉，将产生6.7t低聚果糖分离母液，分离母液浓度为10%-30%，按年产1000t F95低聚果糖粉计，将产生6700t低聚果糖分离母液10%-30%。充分利用分离母液可生产出700t果葡糖粉，综合创造400余万元的经济效益。
本发明利用蔗糖酶将低聚果糖分离母液中的蔗糖和少量低聚果糖酶解，精制、异构、浓缩、干燥生产果葡糖粉，实现了低聚果糖分离母液的综合利用。
本发明立足高纯度低聚果糖和果葡糖粉的联合生产，以综合利用资源为目标，充分利用了低聚果糖分离母液，生产出高质量的果葡糖浆，并采用先进的真空带式干燥技术生产果葡糖粉。同时，响应国家节能环保的号召，保护了环境，并在环保的同时，赢得了更多的经济效益。
附图说明
附图1是技术改进前的工艺流程框图；附图2 是技术改进后的工艺流程框图。
具体实施方式
实施例1
一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，它包括如下步骤：
（1）固定化果糖基转移酶：氧化铝和酶液的体积比为1:2.5，在pH 6.5，55℃水浴，以150rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.3%，于4-10℃、90rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶。将初次固定化果糖基转移酶按照15%的重量百分比加入20g/L卡拉胶溶液中，再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于0.2%-0.4%的戊二醛溶液中硬化6-8h，用pH7.0的磷酸盐缓冲液将戊二醛冲洗干净，即得再次固定化的果糖基转移酶。
（2）配料：配制30%-40%的蔗糖溶液，调节pH4.0-6.0，温度50-60℃。
（3）固定化酶转化：在配制好的蔗糖溶液中加入固定化的果糖基转移酶，加入量为2000-3000u/kg蔗糖，保温6-8h，低聚果糖含量55%以上，过滤，收集固定化酶。固定化后酶活回收率88%，可重复利用90次以上，最高酶活386U/g。
（4）高纯度低聚果糖与低聚果糖分离母液制备：酶转化液经脱色过滤、离交、色谱分离制备高纯度低聚果糖。采用色谱分离技术生产高纯度低聚果糖时，还生成一部分以单糖和蔗糖为主要组分的分离母液。
（5） 酶解：将低聚果糖分离母液浓缩到40%，调pH3~4.5，按140g/t（蔗糖）加入蔗糖酶（蔗糖酶是诺维信β-呋喃果糖苷酶，其通用商品名为蔗糖酶，酶活力200000U/g），温度50~60℃，酶解时间12~48h，灭酶。
（6）精制：将蔗糖酶酶解所得的料液，加入活性炭一次脱色过滤、一次离交;
（7）异构：将一次脱色、离交所得的料液，调节pH8.0-9.0，温度60~65℃，加入硫酸镁0.5~1.0kg/m3料液，亚硫酸钠0.5~1.0kg/m3料液，糖浓40%，搅拌15min，然后将料液打入异构柱，柱内温度：60~65℃，流速30~40m3/h;
（8）精制：将异构后料液，加入活性炭二次脱色过滤、二次离交;
（9）浓缩：将精制后的料液打入六效蒸发器干燥，浓缩料液，进料浓度：40%，进料温度：60~65℃；压力：15MPa ~20 MPa，出料浓度50%-60%。
（10）干燥：将浓缩后所得到的果葡糖浆采用带式真空连续干燥法干燥，得到糖饼；进料浓度50%-60%，真空度-0.08~-0.09MPa，传送带速度为13-20cm/min。
（11）粉碎：将干燥后得到的糖饼粉碎过60~100目筛子，得到果葡糖粉。
实施例2
一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，它包括如下步骤：
（1）固定化果糖基转移酶：氧化铝和酶液的体积比为1:3，在pH 7.0，55℃水浴，以200rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.4%，于4-10℃、100rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶。将初次固定化果糖基转移酶按照20%的重量百分比加入20g/L卡拉胶溶液中，再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于0.2%-0.4%的戊二醛溶液中硬化6-8h，用pH7.0的磷酸盐缓冲液将戊二醛冲洗干净，即得再次固定化的果糖基转移酶。配料：配制30%-40%的蔗糖溶液，调节pH4.0-6.0，温度50-60℃。
（2）固定化酶转化：在配制好的蔗糖溶液中加入固定化果糖基转移酶，加入量为2000-3000u/kg蔗糖，保温6-8h，低聚果糖含量55%以上，过滤，收集固定化酶。酶活回收率75%，可重复利用80次以上，最高酶活338U/g。
（3） 高纯度低聚果糖：酶转化液经脱色过滤、离交、色谱分离制备高纯度低聚果糖。
（4）低聚果糖分离母液：采用色谱分离技术生产高纯度低聚果糖时，还生成一部分以单糖和蔗糖为主要组分的分离母液。
（5）酶解：将低聚果糖分离母液浓缩到35%，调pH4.5~6.5，按180g/t（蔗糖）加入蔗糖酶（该蔗糖酶是从诺维信购买的），温度50~60℃，酶解时间12~48h，灭酶。
（6）精制：将蔗糖酶酶解所得的料液，加入活性炭一次脱色过滤、一次离交;（7）异构：将一次脱色、离交所得的料液，加入0.5-1.0kg/m3的硫酸镁，0.5-1.0kg/m3的亚硫酸钠，pH7.0-8.0，料液温度50-60℃，糖浓35%，搅拌15min后，打入异构柱进行异构，柱内温度50-60℃，流速30-40m3/h。
（8） 精制：将异构后所得的料液，加活性炭二次脱色过滤、二次离交。
（9）浓缩：将精制后的料液打入六效蒸发器干燥，浓缩料液，进料浓度：35%，进料温度：50~60℃；压力：15MPa ~20MPa，出料浓度50%-60%。
（10）干燥：将浓缩后所得到的果葡糖浆采用带式真空连续干燥法干燥，得到糖饼；进料浓度50%-60%，真空度-0.08~-0.09MPa，传送带速度为13-20cm/min。
（11）粉碎：将干燥后得到的糖饼粉碎过60~100目筛子，得到果葡糖粉。
实施例3
一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，它包括如下步骤：
（1）固定化果糖基转移酶：氧化铝和酶液的体积比为1:2.5，在pH 6.0，55℃水浴，以100rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.2%，于4-10℃、90rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶。
（2）高纯度低聚果糖及果葡糖粉生产工艺参数按照实施例1进行。按照上述方法所得固定化果糖基转移酶用于高纯度低聚果糖及果葡糖粉的生产酶活回收率60%，重复利用20次以上，最高酶活210U/g。
实施例4
一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，它包括如下步骤：
（1）固定化果糖基转移酶：氧化铝和酶液的体积比为1:2，在pH 6.0，55℃水浴，以100rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.2%，于4-10℃、80rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶。将初次固定化果糖基转移酶按照10%的重量百分比加入20g/L的卡拉胶溶液中，再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于0.2%-0.4%的戊二醛溶液中硬化6-8h，用pH7.0的磷酸盐缓冲液将戊二醛冲洗干净，即得再次固定化的果糖基转移酶。
（2）高纯度低聚果糖及果葡糖粉生产工艺参数按照实施例1进行。按照上述方法所得固定化果糖基转移酶用于高纯度低聚果糖及果葡糖粉的生产，酶活回收率70%，重复利用70次以上，最高酶活302U/g。
Claims (10)
1.一种高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是它包括以下步骤：
（1）配制蔗糖溶液;
（2）固定化酶转化：在配制好的蔗糖溶液中加入固定化果糖基转移酶，保温6-8h，低聚果糖含量55%以上，过滤，收集固定化酶；所述固定化酶转化是采用氧化铝-卡拉胶-戊二醛交联固定化技术固定化的果糖基转移酶进行低聚果糖的转化制备低聚果糖;
（3）高纯度低聚果糖与低聚果糖分离母液制备：固定化酶转化后得到的低聚果糖55液经脱色过滤、离交、色谱分离制备含量在95%以上的高纯度低聚果糖;此过程中，同时产生以单糖和蔗糖为主要组分的分离母液;
（4）蔗糖酶酶解：将低聚果糖分离母液浓缩到30%-50%，调pH3~6.5，按100-300g/t（蔗糖）加入蔗糖酶，温度50~60℃，酶解时间12~48h，灭酶;
（5）精制：将蔗糖酶酶解所得的料液，加入活性炭一次脱色过滤、一次离交;
（6）异构：将一次脱色、离交所得的料液，调节pH7.0-9.0，温度50~65℃，加入硫酸镁0.5~1.0kg/m3料液，亚硫酸钠0.5~1.0kg/m3料液，糖浓30%-50%，搅拌15min，然后将料液打入异构柱，柱内温度：50~65℃，流速30~40m3/h;
（7）精制：将异构后料液，加入活性炭二次脱色过滤、二次离交;
（8）浓缩、干燥、粉碎：精制后料液经浓缩、干燥、粉碎得果葡糖粉产品。
2.根据权利要求1所述高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是所述固定化果糖基转移酶进行低聚果糖的转化制备低聚果糖的条件为：蔗糖溶液30%-40%，pH4-6，温度50-60℃，保温6-8h，且该固定化果糖基转移酶的加入量为2000-3000u/kg蔗糖。
3.根据权利要求1中所述的高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是所述固定化果糖基转移酶采用氧化铝-卡拉胶-戊二醛交联固定化技术固定是指固定化果糖基转移酶是以氧化铝为载体初次固定，再以卡拉胶包埋，戊二醛为交联剂，再次固定；固定化条件：氧化铝和酶液的体积比为1:2-3，50-60℃水浴，pH 6.0-7.0，以100-200rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.2%-0.4%，于4-10℃、80-100rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶；再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于戊二醛溶液中硬化6-8h。
4.根据权利要求3所述的高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是该固定化果糖基转移酶最适pH4-6，温度50-60℃，卡拉胶溶液的浓度为20g/L，戊二醛浓度为0.2%-0.4%。
5.根据权利要求3或4中所述的高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是固定化果糖基转移酶其固定化技术为：氧化铝和酶液的体积比为1:2.5，在pH 6.5，55℃水浴，以150rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.3%，于4-10℃、90rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶；
配制20g/L卡拉胶溶液，水浴加热至溶化，然后静置降至常温，得卡拉胶溶液，将初次固定化果糖基转移酶按照10%-20%的重量百分比加入卡拉胶溶液中，再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于0.2%-0.4%的戊二醛溶液中硬化6-8h，用pH7.0的磷酸盐缓冲液将戊二醛冲洗干净，即得再次固定化的果糖基转移酶。
6.根据权利要求3或4或5所述高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是载体氧化铝的物理性质：颗粒直径为2-3mm，堆积密度：0.2-0.4g/cm3，孔容0.5cm3/g，比表面200-300m2/g。
7.根据权利要求5中所述的高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是氧化铝和酶液的体积比为1:2.5，在pH 6.5，55℃水浴，以150rpm的转速振荡吸附2-4h，加入戊二醛溶液，交联剂戊二醛的最终浓度为0.3%，于4-10℃、90rpm缓慢振荡下交联4-6h后，过滤，用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲液洗涤，冲洗戊二醛残留及未固定的游离酶，直至洗出液无酶活力，即得初次固定化果糖基转移酶；将初次固定化果糖基转移酶按照15%的重量百分比加入20g/L卡拉胶溶液中，再以卡拉胶包埋，28℃恒温箱中干燥5h，切成小块，置于0.2%-0.4%的戊二醛溶液中硬化6-8h，用pH7.0的磷酸盐缓冲液将戊二醛冲洗干净，即得再次固定化的果糖基转移酶。
8.根据权利要求1中所述的高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是所述蔗糖酶是诺维信β-呋喃果糖苷酶（invertase），其通用商品名为蔗糖酶，酶活力200000U/g，是一种由经选择的酿酒酵母菌株生产的酶制剂；该酶的反应条件为：温度50-60℃，pH3-6.5，加酶量100-300g/t蔗糖，酶解时间12~48h。
9.根据权利要求1中所述的高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是采用六效蒸发器对二次离交后的料液进行浓缩；采用带式真空连续干燥法对浓缩后料液进行干燥，得到糖饼；进料浓度50%-60%，真空度-0.08~-0.09MPa，传送带速度为13-20cm/min；将干燥得到的糖饼，粉碎过60~100目筛子，得到果葡糖粉。
10.根据权利要求1中所述的高纯度低聚果糖联产果葡糖粉的方法，其特征是步骤6中异构前料液组分为葡萄糖50%-70%、果糖10%-30%，低聚果糖1%-4%。
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