CN102690367B

CN102690367B - 一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法

Info

Publication number: CN102690367B
Application number: CN2012102171693A
Authority: CN
Inventors: 查学强; 罗建平; 崔绍华; 王军辉; 潘利华; 杨雪飞; 钱鑫萍
Original assignee: Hefei University of Technology
Current assignee: Hefei University of Technology
Priority date: 2012-06-28
Filing date: 2012-06-28
Publication date: 2013-11-20
Anticipated expiration: 2032-06-28
Also published as: CN102690367A

Abstract

本发明涉及一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法。具体的操作步骤如下：1.海带的洗涤，2.海带的水分脱除，3.海带粉的制备，4.多糖提取，5.褐藻酸盐的去除，6.蛋白的脱除，7.多糖的沉淀。本发明的提取溶剂是蒸馏水，改变了传统工艺中采用酸液或碱液进行提取，大大降低了生产过程中酸液或碱液对设备的腐蚀及对环境造成的污染；本发明方法制备的海带多糖组分A和多糖组分B具有很强的抗动脉粥样硬化活性，与模型组相比，多糖组分A和多糖组分B对低密度脂蛋白受体缺陷型小鼠动脉内膜脂质沉积的抑制率分别高达75％和87％，提示水溶性海带多糖是海带发挥抗动脉粥样硬化活性的物质基础。

Description

一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法

技术领域

本发明属于海洋生物资源综合加工技术领域，具体涉及一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法。

背景技术

海带（Laminaria japonica）是我国历代本草中明确记载具有“减肥、消肿”功能的一种重要的海洋资源，迄今已有1500多年的食用与药用历史。目前，海带的人工养殖量很大，我国各沿海地区均有养殖，产量位居世界首位。药效学研究表明，海带富含多糖、维生素、牛磺酸、甘露醇等多种功能性成分，其中多糖已被证明是其发挥降血脂、抗氧化、降血压、降血糖、抗辐射和抗肿瘤功能的主要活性成分，在医药、食品、化妆品、农业等方面具有广阔的应用前景。海带多糖主要存在于海带细胞间和细胞内，由多种不同分子量的多糖组分构成，且不同分子量多糖组分的化学结构、理化性质和药理活性差异很大。不同多糖结构与活性的构效关系研究表明，多糖结构决定了其理化性质，并由此决定了其药理活性的有效发挥。因此，在多糖的提取分离纯化过程中，宜根据理化性质和药理活性的差异，采取相应的多糖制备方法。近年来，虽然国内外学者已经对海带多糖的提取分离纯化进行了研究，并取得了一定进展，但针对多糖的特定药理活性，采取何种多糖制备方法的研究很少报道。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法。

本发明方法的具体操作步骤如下：

（1）海带的洗涤：将鲜海带用自来水浸泡3天，每3小时换一次水并清洗；

（2）海带的水分脱除：将上述洗干净的海带干燥处理，得干海带；

（3）海带粉的制备：将干海带置于G－125型胶体磨中进行粉碎，过200目筛，得干燥的海带粉；

（4）多糖提取：按重量体积比1:50向干燥的海带粉中加入蒸馏水，超声功率为600W条件下进行超声处理10 min，得海带粉和水的混合液A；再将混合液A置于磁力搅拌器上，转速2000 rpm、温度60 ℃条件下，搅拌提取3小时，得提取混合液B；将提取混合液B进行离心，收集上清液，得海带多糖提取液；

（5）褐藻酸盐的去除：用浓度为1.5 M的盐酸溶液调节海带多糖提取液的pH值为1.2，得海带多糖提取液C，将海带多糖提取液C在转速12000 r/min下离心20 min，收集上清液D；离心所得沉淀为褐藻酸盐，弃去；

（6）蛋白的脱除：先向上清液D中加入胰蛋白酶，得混合液E，混合液E中胰蛋白酶的终浓度为5 U/mL；将混合液E置于磁力搅拌器上，在转速1500 rpm、温度60 ℃条件下，反应3小时，得混合液F；按体积比1: 10将混合液F与化学脱蛋白试剂充分混合，得混合液G，将混合液G在转速12000 r/min下离心20 min，收集上清液H；所述化学脱蛋白试剂由氯仿和正丁醇按体积比1：4混合均匀；

（7）多糖的沉淀：将上清液H进行减压浓缩，得浓缩液I；向浓缩液I中加入无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到40％，静置12小时，离心，得沉淀①和上清液J；向上清液J中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到60％，静置12小时，离心，得沉淀②和上清液K；向上清液K中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到80％，静置12小时，离心，得沉淀③和上清液L；将沉淀①、沉淀②和沉淀③分别用30mL蒸馏水溶解，经冷冻浓缩干燥得多糖组分A、多糖组分B和多糖组分C；经活体动物实验分析，多糖组分A和多糖组分B能显著抑制低密度脂蛋白受体缺陷型（LDL r^-/-）小鼠动脉内膜脂质沉积，与模型组相比，其抑制率分别达到75％和87％，表明通过该种方法制备的海带多糖具有较强的抗动脉粥样硬化活性，多糖组分C未见明显的抗动脉粥样硬化活性。

所述步骤（2）将上述洗干净的海带放置于通风干燥箱，在温度40℃下连续干燥48小时。

本发明的有益技术效果体现在以下方面：

1.本发明提出的抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法，其提取溶剂是蒸馏水，改变了传统工艺中采用酸液或碱液进行提取，大大降低了生产过程中酸液或碱液对设备的腐蚀及对环境造成的污染；

2.按本发明方法制备的海带多糖组分A和多糖组分B具有很强的抗动脉粥样硬化活性，与模型组相比，多糖组分A和多糖组分B对LDL r^-/-小鼠动脉内膜脂质沉积的抑制率分别高达75％和87％，提示水溶性海带多糖是海带发挥抗动脉粥样硬化活性的物质基础。

具体实施方式

下面结合具体的实施例，对本发明作进一步地说明。

实施例

步骤1：海带的洗涤：将鲜海带用自来水浸泡3天，每3小时换一次水并清洗。

步骤2：海带的水分脱除：将上述洗干净的海带放置于通风干燥箱，在温度40℃下连续干燥48小时。

步骤3：海带粉的制备：将上述干燥的海带置于G－125型胶体磨中进行粉碎，得粒径≤200目的海带粉。

步骤4：多糖提取：重量体积比1:50向上述制备的干燥海带粉中加入蒸馏水，得海带粉和蒸馏水得混合液，将海带粉和蒸馏水的混合液在超声功率为600W的条件下进行超声处理10 min，得海带粉和水的混合液A；将海带粉和水的混合液A放置于磁力搅拌器上，在转速为2000 rpm、温度为60 ℃条件下搅拌提取3小时，得提取混合液B；将提取混合液B在12000 rpm下离心20 min，收集上清液，得海带多糖提取液。

步骤5：褐藻酸盐的去除：用浓度为1.5 M的盐酸溶液调节海带多糖提取液的pH值至1.2，得海带多糖提取液C，将海带多糖提取液C在12000 r/min下离心20 min，收集上清液D。离心所得沉淀为褐藻酸盐，弃去。

步骤6：蛋白的脱除：先向上清液D中加入终浓度为5 U/mL的胰蛋白酶，得混合液E；将混合液E放置于磁力搅拌器上，在转速1500 rpm、温度60 ℃下搅拌反应3小时，得混合液F；将混合液F与化学脱蛋白试剂按体积比1: 10的比例充分混合，得混合液G，将混合液G在12000 r/min下离心20 min，收集上清液H。

步骤7：多糖的沉淀：将上清液H进行减压浓缩，得浓缩液I；向浓缩液I中加入无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到40％，静置12小时，离心，得沉淀①和上清液J；向上清液J中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到60％，静置12小时，离心，得沉淀②和上清液K；向上清液K中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到80％，静置12小时，离心，得沉淀③和上清液L；将沉淀①、沉淀②和沉淀③分别用30 mL蒸馏水溶解，经冷冻浓缩干燥得多糖组分A、多糖组分B和多糖组分C；经活体动物实验分析，多糖组分A和多糖组分B能显著抑制低密度脂蛋白受体缺陷型（LDL r^-/-）小鼠动脉内膜脂质沉积，与模型组相比，其抑制率分别达到75％和87％，表明通过该种方法制备的海带多糖具有较强的抗动脉粥样硬化活性。多糖组分C未见明显的抗动脉粥样硬化活性。

Claims

1.一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法，其特征在于按下述步骤进行：

（7）多糖的沉淀：将上清液H进行减压浓缩，得浓缩液I；向浓缩液I中加入无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到40％，静置12小时，离心，得沉淀①和上清液J；向上清液J中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到60％，静置12小时，离心，得沉淀②和上清液K；向上清液K中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到80％，静置12小时，离心，得沉淀③和上清液L；将沉淀①、沉淀②和沉淀③分别用30mL蒸馏水溶解，经冷冻浓缩干燥得多糖组分A、多糖组分B和多糖组分C；经活体动物实验分析，多糖组分A和多糖组分B能显著抑制低密度脂蛋白受体缺陷型小鼠动脉内膜脂质沉积，与模型组相比，其抑制率分别达到75％和87％，表明通过该种方法制备的海带多糖具有较强的抗动脉粥样硬化活性，多糖组分C未见明显的抗动脉粥样硬化活性。

2.根据权利要求1所述的抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）将上述洗干净的海带放置于通风干燥箱，在温度40℃下连续干燥48小时。