CN115590905A - 一种提高金荞麦茎叶提取物中黄酮和多酚含量的萃取分离方法 - Google Patents
一种提高金荞麦茎叶提取物中黄酮和多酚含量的萃取分离方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种提高金荞麦茎叶提取物中黄酮和多酚含量的萃取分离方法,所述方法为将金荞麦茎叶粉碎,加入一定浓度的异丙醇和硫酸铵水溶液形成双水相体系,以超声提取黄皮叶中总黄酮,所述方法在单因素试验结果基础上设计响应面试验,优选出总黄酮最佳提取条件确定为硫酸铵浓14.77%,32%乙醇溶液,超声时间46min,料液比38:1;多酚的最佳提取条件确定为硫酸铵浓17.66%,32%乙醇溶液,超声时间46min,料液比45:1;本发明的方法操作简便,提取快速,效率高,提取黄酮和多酚含量高。
Description
技术领域
本发明属于天然产物有效成分的分离纯化领域,具体涉及一种提 高金荞麦茎叶提取物中黄酮和多酚含量的萃取分离方法。
背景技术
金荞麦(Fagopyrum dibotrys(D.Don)Hara)系双子叶植物纲蓼 科荞麦属植物,是中医中常用的一味中药,其干燥的根茎入药味微辛、 涩,性凉,具有清热解毒、排脓祛痰、祛风化湿之功效,现代药理研 究发现,金荞麦根茎中含有多酚类、甾体、萜类、有机酸类、苷类等 物质,具有较强的抗菌活性以及增强机体免疫能力等功能,目前金荞 麦广泛应用于医药制品、保健食品、饮品和牧草等领域。就金荞麦的 牧草功能而言,研究表明金荞麦营养价值较高(孕蕾期金荞麦粗蛋白 质(CP)、必需氨基酸(EAA)和总氨基酸(TAA)含量分别为20.57%、 7982mg·100g-1和18792mg·100g-1,有机物质体外消化率达73.03%), 而且金荞麦的茎叶部分生物产量较大,全年可刈割6~9次,1年可获得 15762kg.hm-2的金荞麦干草量[4]。金荞麦这几年来作为优质牧草资源, 被广泛应用于非常规饲料原料以及植物提取物替代抗生素的研究中。
研究发现植物提取物中的某些活性物质如黄酮类、多酚类、皂苷 类等可通过抗氧化缓解高温引发的生产性能下降、畜禽疾病增加等问 题。如松针中的黄酮可显著提高氧化应激状态的肥胖大鼠肝脏中的抗 氧化酶活性,槲皮素可以提高高温条件下奶牛乳腺上皮细胞的活性和 抗氧化能力,白茶中提取的多酚类物质能够使机体纹状体细胞免受过 氧化氢(H2O2)诱导的氧化应激损伤等。现代药理研究发现,金荞麦 (Fagopyrum dibotrys(D.Don)Hara)根茎中含有大量黄酮类、多酚 类等抗氧化活性物质,同时金荞麦在夏季高温频发的南方地区的生物 产量较高,充分挖掘金荞麦中的黄酮类化合物和多酚活性物质具有重 要的理论意义和现实意义。
目前,黄酮类化合物和多酚活性物质广泛存在于植物中,但不同 植物的不同部位其含量存在差异,提取方法也各有不同,有单一提取 方法如水提法、有机溶剂法,超声法、酶解法等,也有辅助提取法如 超声波酶提法、超声波醇提法、蒸汽爆破辅助、机械化学辅助等。近 年来,双水相提取技术是一种新型的萃取分离技术,是利用物质在互 不相融两相间溶解性的差异达到目标成分的萃取和分离,此技术已有 效用于提取植物中黄酮和多酚等活性物质,具有操作简便、溶剂量少 且安全、提取效率高等特点,但双水相萃取技术也存在提取周期较长 等不足。目前,双水相体系在金荞麦黄酮和多酚中的提取尚未报道。
本发明为了解决上述问题,研发了一种提高金荞麦茎叶提取物中 黄酮和多酚含量的萃取分离方法。本发明采用乙醇-硫酸铵双水相体 系提取金荞麦中黄酮和多酚活性物质,再辅以纤维素酶酶解植物细胞 壁中纤维素和超声波破坏植物细胞结构的作用,增强溶质在细胞膜的 透过率,有利于黄酮和多酚等活性物质的释放和溶出,同时以黄酮和 多酚含量为目标,考察了乙醇质量分数、硫酸铵质量分数、料液比、 提取温度、提取时间等单因素的影响,采用响应面分析法优化提取工 艺,为提取金荞麦黄酮和多酚等天然产物的深度开发提供方法参考。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高金荞麦茎叶提取物中黄酮和多酚 含量的萃取分离方法。
本发明所述方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为13%-21%硫酸铵置于烧杯中, 并加入相同体积的30%-35%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下, 搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比25-45:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤 维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液 即为黄酮和多酚提取物。
本发明所述提高金荞麦提取物中黄酮含量的方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为13%-17%硫酸铵置于烧杯中, 并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至 颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比30-40:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤 维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液, 即含量为50-85mg/g黄酮提取物。
进一步地,本发明所述提高金荞麦提取物中黄酮含量的方法包括 如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为14.77%硫酸铵置于烧杯中, 并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至 颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比38:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素 酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液,即 含量为80.5mg/g黄酮提取物。
本发明所述提高金荞麦提取物中多酚含量的方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为15%-21%硫酸铵置于烧杯中, 并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至 颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比35-45:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤 维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液 即含量为35-55mg/g多酚提取物。
进一步地,本发明所述提高金荞麦提取物中多酚含量的方法包括 如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为17.67%硫酸铵置于烧杯中, 并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至 颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比45:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素 酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液,即 含量为53.27mg/g多酚提取物。
本发明所述金荞麦茎叶粉末的制备为:将采集金荞麦茎叶于真空 干燥箱60烘干,然后放入研钵中研磨至粉状,过60目筛,过筛后的 金荞麦粉末避光于8℃冷藏。
本发明所述超声的时间为:20-60min。
进一步地,本发明所述超声的时间为:46min。
本发明所述水浴,离心具体步骤为:于35-45℃水浴160-200min 后,倒入10mL的离心管中,在3000-4000r/min的条件下离心8-12min。
进一步地,本发明所述水浴,离心具体步骤为:于40℃水浴 180min后,倒入10mL的离心管中,在3500r/min的条件下离心10min。
本发明具有的有益效果:
1、本发明采用乙醇-硫酸铵双水相体系提取金荞麦中黄酮和多酚 活性物质,再辅以纤维素酶酶解植物细胞壁中纤维素和超声波破坏植 物细胞结构的作用,增强溶质在细胞膜的透过率,有利于黄酮和多酚 等活性物质的释放和溶出,提高了综合利用率。
2、本发明采用乙醇-硫酸铵双水相体系提取金荞麦中黄酮活性物 质,以黄酮含量为目标,考察了乙醇质量分数、硫酸铵质量分数、料 液比、提取温度、提取时间等单因素的影响,采用响应面分析法优化 提取工艺,得到一种提高金荞麦提取物中黄酮含量的萃取分离方法, 得到最佳提取工艺:硫酸铵质量分数14.77%,液料比38:1,超声 46min,此条件下黄酮含量为80.5mg/g。
3、本发明采用乙醇-硫酸铵双水相体系提取金荞麦中多酚活性物 质,以多酚含量为目标,考察了乙醇质量分数、硫酸铵质量分数、料 液比、提取温度、提取时间等单因素的影响,采用响应面分析法优化 提取工艺,得到最佳提取工艺:硫酸铵质量分数17.67%,液料比45: 1,超声46min,此条件下多酚含量为53.27mg/g。
4、本发明的超声辅助双水相提取技术利用超声波加速了提取过 程,与单独双水相萃取法相比,缩短了提取周期,提高了金荞麦中黄 酮和多酚活性物质利用率。
附图说明
图1乙醇-硫酸铵体系双水相图
图2硫酸铵质量分数对金荞麦提取物黄酮和多酚含量的影响图
图3超声作用时间对金荞麦提取物黄酮和多酚含量的影响图
图4液料比对金荞麦提取物黄酮和多酚含量的影响图
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用于限制本发明的范围。
实施例1提高金荞麦提取物黄酮含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为14.77%硫酸铵置于烧杯中,并加 入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间46min的作用下, 搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比38:1称取准确 称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均 匀后于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,并在3500r/min 的条件下离心10min,得上相澄清液,即含量为80.5mg/g黄酮提取物。
实施例2提高金荞麦提取物多酚含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为17.67%硫酸铵置于烧杯中,并加 入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间46min的作用下, 搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比45:1称取准确 称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均 匀后于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,并在3500r/min 的条件下离心10min,得上相澄清液,即含量为53.27mg/g多酚提取 物。
实施例3提高金荞麦提取物黄酮含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为17%硫酸铵置于烧杯中,并加入相 同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间50min的作用下,搅 拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比40:1称取准确称 取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀 后于45℃水浴200min后,倒入10mL的离心管中,并在4000r/min 的条件下离心12min,得上相澄清液,即含量为72.4mg/g黄酮提取物。
实施例4提高金荞麦提取物黄酮含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为15%硫酸铵置于烧杯中,并加入相 同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间50min的作用下,搅 拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比35:1称取准确称 取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀 后于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,并在3000r/min 的条件下离心8min,得上相澄清液,即含量为81.7mg/g黄酮提取物。
实施例5提高金荞麦提取物多酚含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为21%硫酸铵置于烧杯中,并加入相 同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间50min的作用下,搅 拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比45:1称取准确称 取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀 后于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,并在3500r/min 的条件下离心10min,得上相澄清液,即含量为50.4mg/g多酚提取物。
实施例6提高金荞麦提取物多酚含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为15%硫酸铵置于烧杯中,并加入相 同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间50min的作用下,搅 拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比35:1称取准确称 取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀 后于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,并在3500r/min 的条件下离心10min,得上相澄清液,即含量为41.7mg/g多酚提取物。
实施例7提高金荞麦提取物多酚含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为18%硫酸铵置于烧杯中,并加入相 同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间50min的作用下,搅 拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比40:1称取准确称 取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀 后于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,并在3500r/min 的条件下离心10min,得上相澄清液,即含量为53.5mg/g多酚提取物。
实施例8提高金荞麦提取物黄酮含量的提取工艺方法
准确称取一定量的质量分数为15%硫酸铵置于烧杯中,并加入相 同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声时间40min的作用下,搅 拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。按料液比40:1称取准确称 取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀 后于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,并在3500r/min 的条件下离心10min,得上相澄清液,即含量为77.3mg/g黄酮提取物。
为了进一步验证本发明的可行性,发明人进行了一系列的实验, 摘录如下:
实验例
1、仪器设备及试剂试药
1.1仪器设备
干燥箱、研钵、电子天平、离心机、水浴锅、超声清洗机、超纯 水系统、紫外分光光度计、10ml离心管、容量瓶、玻璃棒、滴点管
1.2试剂与试药
乙醇,硫酸铵,纤维素酶,芦丁标准品,没食子酸标准品,亚硝酸 钠、硝酸铝、氢氧化钠、磷酸缓冲液(磷酸氢二钠、磷酸二氢钾)
1.3实验材料
金荞麦茎叶:贵阳麦坪刈割3年生地上部分的新鲜金荞麦茎叶。
2、含量测定方法
2.1金荞麦提取物总黄酮测定方法
实验以芦丁为标准品,采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法,选 用510nm为检测波长,测定金荞麦中总黄酮。
(1)精密称取芦丁20mg,加70%乙醇超声溶解,转至100ml 容量瓶定容,制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准液。
(2)吸取芦丁对照品溶液0ml,1mL、2mL、3mL、4mL、5mL, 置于25mL量瓶中,然后分别加入70%乙醇,使总体积达到5ml。 分别加入再加1mL 5% NaNO2溶液,摇匀,放置6min,加入1mL 10%的Al(NO3)3溶液,摇匀,放置6min,再加入10mL 4% NaOH 溶液,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,静置15min,空白对照,于510 nm波长处测定吸光度,以芦丁质量浓度作为横坐标,吸光度作为纵 坐标,绘制标准曲线并拟合得回归方程。
(3)取2.2步骤中的待测液5ml,并以其替代芦丁对照液,按(2) 的步骤,测定吸光度。将吸光度值代入标准曲线,计算出样品溶液中 黄酮的浓度。
金荞麦黄酮类成分提取率按下列公式计算:Y=C*V*n/M
其中Y(mg/g)—金荞麦总黄酮含量
C—样品溶液中黄酮的浓度
V—样品提取液的体积
n—稀释倍数
M—金荞麦的干重
2.2金荞麦提取物多酚测定方法
实验以没食子酸为标准品,采用Folin-Ciocalteu显色法,选用 765nm为检测波长,测定金荞麦中多酚含量。
(1)精确称取没食子酸标准品25mg,用水溶解并定容到250 mL,得0.1mg/mL的对照品标准溶液.精确吸取对照样品溶液0.1mL、 0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL容量瓶中,再加入1 mLFolin-Ciocalteau试剂,摇匀后加入2mL15%Na2CO3溶液定容到10 mL,室温下反应2h后测定A765,绘制标准曲线.
(2)取提取液1ml,按(1)的步骤,测定吸光度值,据此方程 求得提取液中多酚提取率(%)
E/%=CAV/M*100%
式中:E为金荞麦多酚得率,%;
C为待测液中多酚的浓度,μg/ml;
V为提取液总体积,ml;
M为称取金荞麦粉末质量,g;
A为稀释倍数
3、双水相体系预实验
本试验旨在确定以乙醇溶液和硫酸铵溶液为基础的双水体系的 有机相乙醇容易的浓度参数。为后续的单因素和响应面试验奠定基础。
3.1制作乙醇和硫酸铵双水体系相图
用浊度滴定法测定并制作乙醇-硫酸铵体系相图。
准确称取4.5g硫酸铵于锥形瓶中,加入10ml蒸馏水,用玻璃棒 搅拌至硫酸铵完全溶解,静置。用滴定管向锥形瓶中缓慢滴加无水乙 醇并震荡锥形瓶,直到混合溶液出现浑浊为止,记录此时消耗的无水 乙醇体积。用滴定管向上述混合体系中滴加蒸馏水并震荡锥形瓶,直 至体系重新变为澄清状态,记录此时消耗的蒸馏水体积。不断重复上 述操作,记录所加入的乙醇体积和水体积,计算状态改变时体系中硫 酸铵和乙醇的质量分数,并绘制双水相相图。见图1。
图中横坐标和纵坐标分别表示提取试剂硫酸铵和乙醇溶液的浓 度,曲线上方为双相区域,曲线下方为均相区域,为确保双水相的形 成,在以下试验中,在曲线上方区域选择曲线乙醇和硫酸铵浓度。在 双水相区域,上相为富乙醇相,下相为富盐相。因此,极性小的黄酮 类物质会被富集于上相,而且还可以通过调节两相组成来控制萃取能 力,以最大限度的提高萃取率。
试验结果得出当乙醇溶液的质量分数为32%以上时,我们所选取 的所有硫酸铵浓度混合体系均能分相,因此在进一步的试验研究中将 乙醇溶液固定为32%。
4、单因素试验
为确定影响植物提取物总黄酮和多酚提取率的主要影响因子,本 试验将硫酸铵质量分数、液料比和超声时间为因子,进行金荞麦总黄 酮和多酚的单因素筛选试验,确定各因子适宜的参数范围,为多因子 响应面试验奠定基础。
4.1硫酸铵质量分数多总黄酮和多酚获含量的影响
准确称取硫酸铵(质量分数为13%、15%、17%、19%、21%、), 置于烧杯中,按照液料比30:1的比例加入32%的乙醇溶液,在超声 50min的作用下,搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相。准确称 取一定量的金荞麦茎叶粉末、1%纤维素酶,加入烧杯中,混合均匀 后于40℃水浴180min,加热一定时间后,倒入10mL的离心管中, 并在3500r/min的条件下离心10min,取上相澄清液作为待测液。按 照附录A中总黄酮和多酚的检测方法检测待测液。
4.2超声时间对黄酮和多酚含量的影响
按照4.1的方法,固定乙醇质量分数为32%,硫酸铵质量分数为 15%,液料比为30:1,分别设置超声时间为20、30、40、50、60min, 检测待测液黄酮和多酚含量。
4.3液料比对黄酮和多酚含量的影响
按照4.1的方法,固定乙醇质量分数为32%,硫酸铵质量分数为 15%,超声时间为50min,分别设置液料比为25:1、30:1、35:1、40:1、 45:1,检测待测液黄酮和多酚含量。
5、单因素试验结果
5.1硫酸铵质量分数对金荞麦提取物黄酮和多酚含量的影响
试验结果发现,硫酸铵质量分数为15%时,金荞麦提取物中黄酮 和多酚含量最高。见图2。
5.2超声作用时间对金荞麦提取物黄酮和多酚含量的影响
试验结果发现,超声波作用时间为50min时,金荞麦提取物中黄 酮和多酚含量最高。见图3。
5.3液料比对金荞麦提取物黄酮和多酚含量的影响
试验结果发现,液料比对金荞麦提取物中黄酮和多酚含量的无显 著影响。见图4。
6、响应面方法优化试验
6.1试验设计
为了进一步优化分离萃取方法,本试验是在单因素试验结果的基 础上开展响应面设计的优化试验。以超声时间、料液比以及硫酸铵这 三个因素为自变量,以总黄酮提取率为响应值。运用Box-Benhnken 中心组和设计方案,利用Design expert 10.0.1软件对实验数据进行回 归分析,试验因素水平见表1、2:
表1黄酮响应面设计的因素与水平
表2多酚响应面设计的因素与水平
6.2响应面方法优化试验结果
6.2.1黄酮含量的响应面试验结果
根据Box-Benhnken设计原理,进行三因素三水平共17个响应面 分析试验,具体结果见表3。利用Design expert 10.0.1软件对响应面 试验数据进行分析和多元回归拟合,建立以黄酮含量为函数的二次回 归方程,并对回归方程进行方差分析和显著性检验,结果见表4。黄 酮含量(Y)与硫酸铵质量分数(A)、液料比(B)和超声时间(C) 的二元回归方程为:
Y=77.54-2.45*A+6.21*B-5.56*C+1.38*AB-0.18*AC+4.15*BC-6.54*A 2-3.67*B2-5.17*C2。通过回归方程确定最佳提取工艺:硫酸铵质量分 数14.77%,液料比38:1,超声46min,此条件下黄酮含量为80.5mg/g。
表3黄酮响应面试验结果
表4黄酮响应面试验回归模型方差分析
6.2.2多酚含量的响应面试验结果
根据Box-Benhnken设计原理,进行三因素三水平共17个响应面 分析试验,具体结果见表5所示。利用Design expert 10.0.1软件对响 应面试验数据进行分析和多元回归拟合,建立以多酚含量为函数的二 次回归方程,并对回归方程进行方差分析和显著性检验,结果见表6。 多酚含量(Y)与硫酸铵质量分数(A)、液料比(B)和超声时间(C) 的二元回归方程为:
Y=51.18+1.33*A+2.44*B-2.09*C-1.20*AB+2.10*AC-0.32*BC-3.13*A2 -0.80*B2-3.45*C2。通过回归方程确定最佳提取工艺:硫酸铵质量分数 17.67%,液料比45:1,超声46min,此条件下多酚含量为53.27mg/g。
表5多酚响应面试验设计及结果
表6多酚响应面试验回归模型方差分析
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发 明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作出一些修改或改 进,这对本领域技术人员而言是显而易见的,因此,在不偏离本发明 精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种提高金荞麦茎叶提取物中黄酮和多酚含量的萃取分离方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为13%-21%硫酸铵置于烧杯中,并加入相同体积的30%-35%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比25-45:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液即为黄酮和多酚提取物。
2.根据权利要求1所述的萃取分离方法,其特征在于,所述提高金荞麦提取物中黄酮含量的方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为13%-17%硫酸铵置于烧杯中,并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比30-40:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液,即含量为50-85mg/g黄酮提取物。
3.根据权利要求2所述的萃取分离方法,其特征在于,所述提高金荞麦提取物中黄酮含量的方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为14.77%硫酸铵置于烧杯中,并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比38:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液,即含量为80.5mg/g黄酮提取物。
4.根据权利要求1所述的萃取分离方法,其特征在于,所述提高金荞麦提取物中多酚含量的方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为15%-21%硫酸铵置于烧杯中,并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比35-45:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液,即含量为35-55mg/g多酚提取物。
5.根据权利要求4所述的萃取分离方法,其特征在于,所述提高金荞麦提取物中多酚含量的方法包括如下步骤:
(1)准确称取一定量的质量分数为17.67%硫酸铵置于烧杯中,并加入相同体积的32%质量分数的乙醇溶液,在超声作用下,搅拌至颗粒完全溶解,静置直到溶液分相;
(2)按料液比45:1准确称取金荞麦茎叶粉末,与1%的纤维素酶混合后加入烧杯中,混合均匀后,水浴,离心,得上相澄清液,即含量为53.27mg/g多酚提取物。
6.根据权利要求1-5任一项所述的萃取分离方法,其特征在于,所述金荞麦茎叶粉末的制备为:将采集金荞麦茎叶于真空干燥箱60℃烘干,然后放入研钵中研磨至粉状,过60目筛,过筛后的金荞麦粉末避光于8℃冷藏。
7.根据权利要求1-5任一项所述的萃取分离方法,其特征在于,所述超声的时间为:20-60min。
8.根据权利要求7所述的萃取分离方法,其特征在于,所述超声的时间为:46min。
9.根据权利要求1-5任一项所述的萃取分离方法,其特征在于,所述水浴,离心具体步骤为:于35-45℃水浴160-200min后,倒入10mL的离心管中,在3000-4000r/min的条件下离心8-12min。
10.根据权利要求9所述的萃取分离方法,其特征在于,所述水浴,离心具体步骤为:于40℃水浴180min后,倒入10mL的离心管中,在3500r/min的条件下离心10min。
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CN104644815A (zh) * | 2015-03-17 | 2015-05-27 | 柳州师范高等专科学校 | 一种利用双水相体系与超声集成提取黄皮叶总黄酮的方法 |
CN105708919A (zh) * | 2016-03-21 | 2016-06-29 | 吉林大学 | 一种黑果腺肋花楸中多酚和黄酮的提取方法 |
CN111184123A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-05-22 | 西昌市正中食品有限公司 | 一种从苦荞麦中连续制取蛋白、黄酮、糖浆和膳食纤维的工艺 |
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