CN108358822A - 一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物有效成分提取的方法，具体涉及一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，该方法是从枸杞残次果中连续提取枸杞多糖、黄酮、甜菜碱及胡萝卜素。本发明根据“相似相溶原理”，利用枸杞残次果中枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素的极性不同，通过筛选提取溶剂、提取步骤，采用蒸馏水、80％乙醇、石油醚：丙酮混合液分别作为提取溶剂，依次对枸杞残次果中枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素进行连续提取，获得快速、准确、高效、经济的连续提取枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素的提取方法。

Description

一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法
技术领域
本发明涉及一种提取天然产物活性物质的方法，特别是涉及一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法。
背景技术
柴达木枸杞(Lycium barbarum L.)简称柴杞,又名青海枸杞,为茄科(Solanaceae)枸杞属植物，是我国传统名贵药材,具有极高的营养价值和药用保健功效，是我国重要的经济植物及药食兼用的佳品，主要含枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、类胡萝卜素及类胡萝卜素酯、VC、莨菪亭、多种氨基酸及微量元素K、Na、Ca、Mg、Cu、Fe、Mn、Zn、P等成分。具有降血脂、抗氧化、抗肿瘤、增强机体免疫力等药理活性。现代药理学研究一般认为枸杞中的生物活性成分可归纳为4个主要方面：
①枸杞多糖:是枸杞的主要活性成分之一，其含量是反映枸杞品质的重要指标。枸杞多糖是枸杞中多聚糖与多肽或蛋白质结合的化合物，相对分子量大于2000，主要由葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖和半乳糖6种单糖组成。它是一种非特异性免疫增强剂，具有增强免疫力、抗癌、防衰老、增加造血功能、防止遗传损伤等作用。
②甜菜碱：甜菜碱是一类季铵盐化合物，化学名称为N-甲基代氨基酸。植物中的甜菜碱有12种，最简单也是最早发现和研究最多的是甘氨酸甜菜碱(Glycinebetaine)简称甜菜碱(Betaine)，于1883年首次从L.barbarum L.中分离得到，并称之为lycin。甜菜碱是柴达木枸杞中主要药效成分，在体内起甲基供体的作用，具有强烈的吸湿性能、抗脂肪肝、抗消化性溃疡及胃肠功能障碍，还能促进脂质代谢，2010版中华人民共和国药典中以甜菜碱和枸杞多糖作为评价枸杞质量的2个重要指标。
③类胡萝卜素：类胡萝卜素是枸杞中的主要色素，也是枸杞中的重要活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤等作用。枸杞果实中含有β-胡萝卜素、玉米黄素和多种类胡萝卜素酯，其中玉米黄素双棕榈酸酯是枸杞中含量最高的类胡萝卜素。β-胡萝卜素具有维生素A的活性，玉米黄素具有多种生理功能，如抗氧化、清除自由基、保护视力等。
④枸杞黄酮：黄酮类化合物(Flavonoid)是一大类植物次级代谢产物，具有C6-C3-C6结构，包括黄酮醇、黄酮、黄烷酮、黄烷醇、花青素和异黄酮等，具有消炎、抗癌、清除自由基、止咳、平喘、祛痰之功效，并能扩张冠状动脉及降低胆固醇，有增强心脏收缩、减少心脏搏动数及明显的抗氧化等作用。枸杞作为中国传统的中草药在几个世纪前已被广泛用于功能性食品的原料，经研究枸杞含有大量多糖、黄酮类化合物和类胡萝卜素等功能性成分，这也使枸杞具有抗氧化、抗肿瘤、保护神经和增强免疫力等功能。迄今为止，在枸杞中已发现的的黄酮类化合物有：槲皮素-鼠李糖-二己糖、芦丁、槲皮素-二鼠李糖、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素-二糖苷等。
目前，枸杞活性成分的研究多集中在单一的多糖、黄酮、甜菜碱以及胡萝卜素，而在实际生产过程中多种活性成分并存，尤其像枸杞这种名贵药材，仅提取单一的成分抛弃其它成分，是对枸杞资源的极大浪费。此外，枸杞在生产过程中，将会出现大量的枸杞残次果，通常这部分残次果将会被当作废品弃去，造成了很大的浪费，同时增加了企业的生产成本。经检测枸杞残次果中含有大量枸杞多糖、黄酮、甜菜碱以及胡萝卜素等活性成分，这些成分功效明确，逐步得到国内外的认可，应用领域不断扩展，具备广阔的市场前景。因此,利用枸杞残次果开发连续提取枸杞多糖、黄酮、甜菜碱以及胡萝卜素的方法至关重要。
而采用什么样的手段能够更有效的在短时间内提取枸杞残次果所含的活性成分，节约溶剂的同时又能避免了高温对活性成分的破坏，是人们目前所要解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于针对该领域已有技术所存在的问题而提供一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，从而提高提取效率，缩短提取时间，节约溶剂，并且避免了高温对活性成分的破坏，实现大规模生产。
本发明的目的通过如下技术方案实现：一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：它包括如下步骤：
(1)将枸杞残次果晾干到含水量为11.82％以下，用粉碎机粉碎，获得枸杞残次果粉末；
(2)对步骤(1)所得的枸杞残次果粉末按质量体积比为1：20-30加入蒸馏水，加热到75-85℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
(3)将步骤(2)中所得的过滤液浓缩至四分之一体积，加入3-5倍乙醇，静置24h，过滤，得到滤液和滤渣；其中滤渣即枸杞多糖溶液，过滤液即甜菜碱溶液；
(4)将步骤(2)中所得的滤渣烘干，按质量体积比为1：10-20置于乙醇中，在40-60℃温度下，采用超声波提取25-35min后，过滤，得到滤液和滤渣，所得滤液为黄酮溶液；
(5)将步骤(4)中所得的滤渣烘干，按质量体积比为1：10-20置于石油醚和丙酮的混合液中，搅拌均匀后，在30℃温度下，采用超声波提取25-35min后，过滤，得滤液和滤渣，弃滤渣，滤液为胡萝卜素溶液；其中石油醚和丙酮的体积比为4:1。
所述步骤(1)中的枸杞残次果是枸杞生产企业制备枸杞系列产品过程中产生的次品。
所述步骤(3)中的枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖的含量。
所述步骤(3)中的甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱的含量。
所述步骤(4)中的黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2-Al(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮的含量。
所述步骤(5)中的胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量。
所述步骤(3)中乙醇的体积百分比浓度为100％；步骤(4)中乙醇的体积百分比浓度为80％。
所述步骤(4)和步骤(5)中采用超声波提取的超声波发生器的功率200—300W。
本发明的有益效果：本发明所述的提取方法是以枸杞残次果为原料、通过一次投料而连续提取枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素的方法。本发明根据“相似相溶原理”，利用枸杞残次果中枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素的极性不同，筛选提取溶剂、提取步骤，采用蒸馏水、80％乙醇、石油醚：丙酮(体积比4：1)混合溶液依次对枸杞残次果中枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素进行连续提取，获得快速、准确、高效、经济的枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素。
其具体优点如下：
1.本发明以枸杞残次果为原料连续提取生物活性物质，提高了原料中具有保健和医疗活性成分的综合利用率，增加了枸杞残次果的经济价值。
2.本发明所述的提取方法工艺简单、成本低，连续提取多种活性成分提高了提取效率，而且省时、高效、节能和环保；节约溶剂，并且避免了高温对活性成分的破坏，实现大规模生产。
3.本发明所提取的枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素具有多种生物活性，可广泛用于食品、化妆品、制药和保健品等行业，具有较好的市场前景，值得推广应用。
附图说明
图1为本发明从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法工艺流程图。
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不作为对本发明的限定。
具体实施方式
实施例1
如图1所示，一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：它包括如下步骤：
(1)将枸杞残次果晾干到含水量为11.82％以下，用粉碎机粉碎，获得枸杞残次果粉末；
(2)对步骤(1)所得的枸杞残次果粉末按质量体积比为1：20-30加入蒸馏水，加热到75-85℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
(3)将步骤(2)中所得的滤液浓缩至四分之一体积，加入3-5倍乙醇，静置24h，过滤，得到滤液和滤渣；其中滤渣即枸杞多糖溶液，过滤液即甜菜碱溶液；
(4)将步骤(2)中所得的滤渣烘干，按质量体积比为1：10-20置于乙醇中，在40-60℃温度下，采用超声波提取25-35min后，过滤，得到滤液和滤渣，所得滤液为黄酮溶液；
(5)将步骤(4)中所得的滤渣烘干，按质量体积比为1：10-20置于石油醚和丙酮的混合液中，搅拌均匀后，在30℃温度下，采用超声波提取25-35min后，过滤，得滤液和滤渣，弃滤渣，滤液为胡萝卜素溶液；其中石油醚和丙酮的体积比为4:1。
实施例2
在实施例1的基础上，所述步骤(1)中的枸杞残次果是枸杞生产企业制备枸杞系列产品过程中产生的次品。
所述步骤(3)中的枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖的含量。
所述步骤(3)中的甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱的含量。
所述步骤(4)中的黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2-Al(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮的含量。
所述步骤(5)中的胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量。
所述步骤(3)中乙醇的体积百分比浓度为100％；步骤(4)中乙醇的体积百分比浓度为80％。
所述步骤(4)和步骤(5)中采用超声波提取的超声波发生器的功率200—300W。
实施例3
一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，包括如下步骤：
(1)将枸杞残次果晾干到含水量为11.82％以下，用粉碎机粉碎，获得枸杞残次果粉末；
(2)对步骤(1)所得的枸杞残次果粉末按质量体积比为1:20(g/mL)加入蒸馏水，在75℃加热提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
(3)对步骤(2)中所得的滤液浓缩至四分之一体积，加入3倍乙醇，静置24h，过滤，得到滤液和滤渣；乙醇的体积百分比浓度为100％。
(4)对步骤(3)中滤渣即枸杞多糖，加蒸馏水溶解即得枸杞多糖溶液；以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖的含量，枸杞多糖的含量为6.34％。
(5)对步骤(3)中滤液即为甜菜碱溶液；以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱的含量，甜菜碱的含量为0.62％。
(6)对步骤(2)中滤渣烘干，按质量体积比为1：10(g/mL)置于乙醇中，乙醇的体积百分比浓度为80％，在40℃温度，在超声功率200W提取25min后，过滤，得到滤液和滤渣，所得滤液为黄酮溶液；以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮的含量，枸杞黄酮的含量为1.30％。
(7)对步骤(2)中滤渣烘干，按质量体积比为1：10(g/mL)置于石油醚和丙酮的混合液中，搅拌均匀后，在30℃温度下，在超声功率200W提取25min后，过滤，得到滤液和滤渣，弃滤渣，滤液为胡萝卜素溶液；其中石油醚和丙酮的体积比为4:1。采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.15％。
实施例4
一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，包括如下步骤：
(1)将枸杞残次果晾干到含水量为11.82％以下，用粉碎机粉碎，获得枸杞残次果粉末；
(2)对步骤(1)所得的枸杞残次果粉末按质量体积比为1:25(g/mL)加入蒸馏水，在80℃加热提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
(3)对步骤(2)中所得的滤液浓缩至四分之一体积，加入4倍乙醇，静置24h，过滤，得到滤液和滤渣；其中，乙醇的体积百分比浓度为100％。
(4)对步骤(3)中滤渣即枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖溶液；以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖的含量，枸杞多糖的含量为6.55％。
(5)对步骤(3)中滤液即为甜菜碱溶液；以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱的含量，甜菜碱的含量为0.60％。
(6)对步骤(2)中滤渣烘干，按质量体积比为1：15(g/mL)置于乙醇中，其中乙醇的体积百分比浓度为80％，在50℃超声功率250W提取30min后，过滤，得到滤液和滤渣，所得滤液为黄酮溶液；以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮的含量，枸杞黄酮的含量为1.33％。
(7)对步骤(2)中滤渣烘干，按质量体积比为1：15(g/mL)置于石油醚和丙酮混合液中，在30℃超声功率250W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；其中石油醚和丙酮的体积比为4:1；滤液为胡萝卜素溶液，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.13％。
实施例5
一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，包括如下步骤：
(1)将枸杞残次果晾干到含水量为11.82％以下，用粉碎机粉碎，获得枸杞残次果粉末；
(2)对步骤(1)所得的枸杞残次果粉末，按质量体积比为1：30(g/mL)加入蒸馏水，在85℃加热提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
(3)对步骤(2)中所得的滤液浓缩至四分之一体积，加入5倍乙醇，静置24h，过滤，得到滤液和滤渣；其中，乙醇的体积百分比浓度为100％。
(4)对步骤(3)中滤渣即枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖溶液；以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖的含量，枸杞多糖的含量为6.77％。
(5)对步骤(3)中滤液即为甜菜碱溶液；以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱的含量，甜菜碱的含量为0.63％。
(6)对步骤(2)中滤渣烘干，按质量体积比为1：20(g/mL)置于乙醇中，乙醇的体积百分比浓度为80％，在60℃超声功率300W提取30min后，过滤，得到滤液和滤渣，所得滤液为黄酮溶液；以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮的含量，枸杞黄酮的含量为1.33％。
(7)对步骤(2)中滤渣烘干，按质量体积比为1：20(g/mL)置于石油醚和丙酮混合液，搅拌均匀，在30℃超声功率300W提取30min后，过滤，得到滤液和滤渣；其中石油醚和丙酮的体积比为4:1；弃滤渣，滤液为胡萝卜素溶液，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.11％。
实施例6(该实施例为比较例)
下述工艺过程与实施例基本相同，不同之处是用蒸馏水、80％乙醇以及石油醚：丙酮(体积比4：1)混合液提取的顺序不同。
对比试验
说明：方法四为本发明工艺。
方法一、
1、称取10g枸杞残次果粉末置于300mL体积百分比浓度为80％乙醇中，在40℃超声功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；
2、浓缩步骤1中滤液至30mL，加蒸馏水稀释浓缩液至300mL；
3、过滤步骤2中稀释液，得到滤液和滤渣；滤液为甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱含量，甜菜碱含量为0.51％。
4、取步骤3中滤渣烘干，置于300mL体积百分比浓度为80％乙醇中得黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮含量，黄酮含量为1.84％。
5、取步骤1中滤渣烘干，置于150mL石油醚：丙酮(体积比4:1)混合溶液中，搅拌均匀后，30℃超声波功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；滤液为胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.11％。
6、取步骤5中滤渣烘干，加300mL蒸馏水于80℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
7、将步骤6中滤液浓缩至40mL，加160mL体积百分比浓度为100％乙醇，醇沉24h，过滤，得到滤液和滤渣；弃滤液，滤渣为枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖的含量，枸杞多糖含量为5.01％。
方法二、
1、10g枸杞残次果粉末置于300mL体积百分比浓度为80％乙醇中，40℃超声功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；
2、浓缩步骤1中滤液至30mL，加蒸馏水稀释浓缩液至300mL；
3、过滤步骤2中稀释液，得到滤液和滤渣；滤液为甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱的含量，甜菜碱含量为0.52％。
4、取步骤3中滤渣烘干，置于300mL80％乙醇溶解得黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中黄酮含量，黄酮含量为1.87％。
5、取步骤1中滤渣烘干，加蒸馏水300mL于80℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
6、将步骤5中滤液浓缩至40mL，加160mL体积百分比浓度为100％乙醇，醇沉24h，过滤，得到滤液和滤渣；滤渣为枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖含量，枸杞多糖含量为5.94％。
7、取步骤5中滤渣烘干，置于150mL石油醚：丙酮(体积比4:1)混合溶液中，搅拌均匀后，30℃超声波功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；弃滤渣，滤液为胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.11％。
方法三、
1、取10g枸杞残次果粉末加蒸馏水300mL，80℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
2、取步骤1中滤液浓缩至40mL，加160mL体积百分比浓度为100％乙醇，醇沉24h，过滤；得到滤液和滤渣；
3、取步骤2中滤渣即枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖含量，枸杞多糖含量为6.78％。
4、取步骤2中滤液即甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱含量，甜菜碱含量为0.61％。
5、取步骤1中滤渣烘干，置于150mL石油醚：丙酮(体积比4:1)混合溶液中，搅拌均匀后，30℃超声波功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；滤液为胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.14％。
6、取步骤5中滤渣烘干，置于300mL体积百分比浓度为80％乙醇中，40℃超声功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；滤液为黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮含量，枸杞黄酮含量为0.94％。
方法四、
1、取10g枸杞残次果粉末加蒸馏水300mL，80℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
2、取步骤1中滤液浓缩至40mL，加160mL体积百分比浓度为100％乙醇，醇沉24h，过滤，得到滤液和滤渣；
3、取步骤2中滤渣即枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖含量，枸杞多糖含量为6.77％。
4、取步骤2中滤液即甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱含量，甜菜碱含量为0.63％。
5、取步骤1中滤渣烘干，置于300mL体积百分比浓度为80％乙醇中，40℃超声功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；滤液为黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮含量，枸杞黄酮含量为1.33％。
6、取步骤1中滤渣烘干，置于150mL石油醚：丙酮(体积比4:1)混合溶液中，搅拌均匀后，30℃超声波功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣；滤液为胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.11％。
方法五、
1、取150mL石油醚：丙酮(体积比4:1)混合溶液置于10g枸杞残次果粉末中，搅拌均匀，在30℃超声功率300W提取30min后，过滤，得到滤液和滤渣；滤液为胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.15％。
2、取步骤1中滤渣烘干，置于300mL体积百分比浓度为80％乙醇中，在40℃超声功率300W提取30min后，过滤，得滤液和滤渣；滤液为黄酮和甜菜碱溶液；
3、浓缩步骤2中滤液至30mL，加蒸馏水稀释浓缩液至300mL；
4、过滤步骤3中稀释液，得到滤液和滤渣；滤液为甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱含量，甜菜碱含量为0.49％。
5、取步骤4中滤渣烘干，置于体积百分比浓度为80％乙醇溶液即得黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮含量，枸杞黄酮含量为1.14％。
6、取步骤2中滤渣烘干，加蒸馏水300mL80℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；滤液浓缩至40mL，加160mL体积百分比浓度为100％乙醇，醇沉24h，过滤，得到滤液和滤渣；弃滤液，滤渣为枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖液中枸杞多糖含量，枸杞多糖含量为5.02％。
方法六、
1、取150mL石油醚：丙酮(体积比4:1)混合溶液置于10g枸杞残次果粉末中，搅拌均匀后，30℃超声波功率300W提取30min，过滤，得到滤液和滤渣，滤液为胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量，胡萝卜素含量为0.15％
2、取步骤1中滤渣烘干，加蒸馏水300mL，80℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
3、取步骤2中滤液浓缩至40mL，加160mL体积百分比浓度为100％乙醇，醇沉24h，过滤，得到滤液和滤渣；
4、取步骤3中滤渣即枸杞多糖，加蒸馏水溶解得枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖含量，枸杞多糖含量为6.07％。
5、取步骤3中滤液即甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱含量，甜菜碱含量为0.50％。
6、取步骤2中滤渣烘干，置于300mL体积百分比浓度为80％乙醇中，40℃超声功率300W超声波提取30min，过滤，得到滤液和滤渣，滤液为黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2一AI(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮含量，枸杞黄酮含量为0.97％。
从上述比较可以得出，按本发明的工艺步骤获得枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素效果最好。
关于胡萝卜素提取溶剂的确定：
取石油醚、石油醚：丙酮(4：1)、乙酸乙酯三种溶剂在相同条件下对枸杞残次果中的胡萝卜素进行超声提取，确定最佳提取溶剂。
通过实验得出：采用石油醚为提取溶剂时，胡萝卜素提取率是51.5％；采用石油醚：丙酮(4：1)的混合液为提取溶剂时：胡萝卜素提取率是86.7％；采用乙酸乙酯为提取溶剂时：胡萝卜素提取率是64.6％。从对比数据说明石油醚：丙酮(4：1)混合液提取效果最好。
本发明根据“相似相溶原理”，利用枸杞残次果中枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素的极性不同，通过筛选提取溶剂、提取步骤，采用蒸馏水、80％乙醇、石油醚：丙酮(4：1)混合液作为提取溶剂，依次对枸杞残次果中枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素进行连续提取，获得快速、高效、经济的连续提取枸杞多糖、黄酮、甜菜碱、胡萝卜素的提取方法。其中，将枸杞残次果晾干到含水量控制在11.82％以下，可以保证粉碎机能顺利进行粉碎、完成称量操作，否则无法完成操作或不好操作，并容易粘连在粉碎机、电子天平上。采用蒸馏水可以避免自来水中的钙离子、镁离子、碳酸根离子、碳酸氢根离子、氯离子等离子与提取试剂、检测试剂发生作用，从而影响提取效果。在浓缩和醇沉步骤中，加浓缩液3-5倍的纯乙醇，使溶液中乙醇含量达到75-83％，在此范围内能够最大程度沉淀多糖，保证醇沉的效果。在提取黄酮时采用80％乙醇是为了更好的提高黄酮溶解效果，黄酮只有在这个浓度时，溶解效果最好。

Claims (8)

1.一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：它包括如下步骤：
(1)将枸杞残次果晾干到含水量为11.82％以下，用粉碎机粉碎，获得枸杞残次果粉末；
(2)对步骤(1)所得的枸杞残次果粉末按质量体积比为1：20-30加入蒸馏水，加热到75-85℃提取3h，过滤，得到滤液和滤渣；
(3)将步骤(2)中所得的过滤液浓缩至四分之一体积，加入3-5倍乙醇，静置24h，过滤，得到滤液和滤渣；其中滤渣即枸杞多糖溶液，过滤液即甜菜碱溶液；
(4)将步骤(2)中所得的滤渣烘干，按质量体积比为1：10-20置于乙醇中，在40-60℃温度下，采用超声波提取25-35min后，过滤，得到滤液和滤渣，所得滤液为黄酮溶液；
(5)将步骤(4)中所得的滤渣烘干，按质量体积比为1：10-20置于石油醚和丙酮的混合液中，搅拌均匀后，在30℃温度下，采用超声波提取25-35min后，过滤，得滤液和滤渣，弃滤渣，滤液为胡萝卜素溶液；其中石油醚和丙酮的体积比为4:1。
2.根据权利要求1所述的一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：所述步骤(1)中的枸杞残次果是枸杞生产企业制备枸杞系列产品过程中产生的次品。
3.根据权利要求1所述的一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：所述步骤(3)中的枸杞多糖溶液，以葡萄糖为标品，采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖溶液中枸杞多糖的含量。
4.根据权利要求1所述的一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：所述步骤(3)中的甜菜碱溶液，以甜菜碱为标品，采用分光光度法测定甜菜碱溶液中甜菜碱的含量。
5.根据权利要求1所述的一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：所述步骤(4)中的黄酮溶液，以芦丁为标品，采用NaNO2-Al(NO3)3显色法测定黄酮溶液中枸杞黄酮的含量。
6.根据权利要求1所述的一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：所述步骤(5)中的胡萝卜素溶液，以β-胡萝卜素为标品，采用比色法测定胡萝卜素溶液中胡萝卜素含量。
7.根据权利要求1所述的一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：所述步骤(3)中乙醇的体积百分比浓度为100％；步骤(4)中乙醇的体积百分比浓度为80％。
8.根据权利要求1所述的一种从枸杞残次果中连续提取多种活性成分的方法，其特征是：所述步骤(4)和步骤(5)中采用超声波提取的超声波发生器的功率200—300W。
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