CN102670694B - 一种治疗猪伪狂犬病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗猪伪狂犬病的中药组合物及其制备方法和应用。该组合物由白牛胆15～30重量份，槐栓菌6～18重量份，绞股蓝5～15重量份制成，该组合物的制备方法是将白牛胆，槐栓菌，绞股蓝煎煮2～3次，合并煎液浓缩至稠状，乙醇调至醇浓度60%～70%，沉淀、过滤，浓缩后的药液再加乙醇调至醇浓度75%～80%，沉淀、过滤、滤液浓缩，加蒸馏水冷藏沉淀，过滤、浓缩。该中药组合物用于治疗猪伪狂犬病副作用小，治愈率高，使用安全方便。
Description
技术领域
本发明属于中药制药领域，涉及一种治疗猪伪狂犬病的中药组合物，本发明还涉及该中药组合物的制备方法及该中药组合物在制备治疗猪伪狂犬病的中兽药中的应用。
背景技术
近年来广泛流行的猪传染病中，猪伪狂犬病是主要病原体之一。猪伪狂犬病毒可以感染各种动物，但一般动物的发病率比较低，唯有猪的伪狂犬病发病率很高。母猪感染伪狂犬病病毒后，造成母猪繁殖障碍（母猪流产、产死胎、弱仔等）。仔猪感染伪狂犬病病毒后，死亡率非常高。给养猪生产造成很大损失，猪伪狂犬病发生后，抗生素、磺胺类药物无治疗作用。我国中药资源丰富，现代医学研究结果表明，许多中药含有丰富的多糖类、生物碱类、有机酸类、甙类、挥发油类等物质，用这些物质制成的中药制剂用于动物，可具有激活免疫细胞，增强免疫功能，抗病毒、抗细菌、抗应激的作用，发明人探索一种治疗猪伪狂犬病的中兽药组合物，效果显著，迄今未见有本发明的同类药物治疗猪伪狂犬病的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗猪伪狂犬病的中药组合物。
本发明另一个目的是提供上述治疗猪伪狂犬病的中药组合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供上述中药组合物在制备治疗猪伪狂犬病的中兽药物中的应用。
本发明的目的是通过下列技术措施来实施的：
一种治疗猪伪狂犬病的中药组合物，该组合物由下列重量份的原料药制成：白牛胆15～30重量份，槐栓菌6～18重量份，绞股蓝5～15重量份。
上述组合物优选由下列重量份的原料药制成：白牛胆15～20重量份，槐栓菌6～10重量份，绞股蓝5～8重量份。
上述治疗猪伪狂犬病的中药组合物是通过下列步骤制备得到的：
白牛胆、槐栓菌、绞股蓝加水浸泡后煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60%～70%，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%～80%，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加蒸馏水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩；
上述治疗猪伪狂犬病的中药组合物优选制备剂型是注射液和口服液。
上述治疗猪伪狂犬病的中药组合物的制备方法，该方法包括下列步骤：
将白牛胆、槐栓菌、绞股蓝加蒸馏水浸泡后煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60%～70%，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%～80%，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加蒸馏水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩。
上述治疗猪伪狂犬病的中药注射液或口服液的制备方法包括以下步骤：
将白牛胆、槐栓菌、绞股蓝加蒸馏水浸泡后煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60%～70%，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%～80%，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加蒸馏水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含1～2g生药量的药液，调pH7.0，制成注射液或口服液。
上述治疗猪伪狂犬病的中药注射液或口服液的制备方法，具体包括以下步骤：
将白牛胆、槐栓菌、绞股蓝3味药材混合后，加入白牛胆、槐栓菌、绞股蓝3味药材总重量4～5倍量的蒸馏水，浸泡24～30小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5～1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95%乙醇调至醇浓度为60%～70%，充分搅拌混匀，沉淀24～60小时，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度为75%～80%，搅匀沉淀24～60小时，过滤，滤液回收乙醇再浓缩至无醇味，药液加蒸馏水冷藏沉淀24～48小时，过滤，滤液浓缩得到浓度为每mL含1～2g生药量的药液，调pH7.0，制成注射液或口服液。该注射液或口服液可在制备治疗猪伪狂犬病的中兽药物中应用。
本发明中药组合物在治疗猪伪狂犬病中应用，具有显著疗效，可应用于制备治疗猪伪狂犬病的中兽药物。
本发明的有益效果：本发明吸取中兽医学精髓，白牛胆Inula cappa(Buch.Ham.)DC.具有抗病毒、抗细菌、止泻、止咳、消肿解毒的功效。槐栓菌Trametes robiniohila murr.具有抗肿瘤、抗病毒、止血、止痢、增强机体免疫功能。绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino具有清热解毒、补虚、抗脑缺血，还有机体兴奋时起抑制，机体抑制时起兴奋的双向调节作用，还有增强机体免疫、延缓衰老等药理功能。仔猪伪狂犬病毒感染后，往往表现一系列神经症状，日龄越小症状越严重，死亡率越高。本发明的中药组合物，提高药物的协同增效作用，达到标本兼治的目的。
下面就药效实验进一步说明本发明的疗效。
一、本发明体外抗猪伪狂犬病病毒试验研究
1、试验鸡胚10日龄非免鸡胚，购自仪征市大仪种鸡场。
2、猪伪狂犬病容A株AV25毒株 由中国兽医药品监察所提供，毒株用生理盐水稀释，接种非免鸡胚，收集尿囊液，供试验用。鸡胚尿囊液的HA效价为7 log2。
3、药品本试验以本发明组合物为试验药品；利巴韦林注射液为西药对照药品，由济南利民制药有限公司生产，配成0.05g/mL浓度。鞣酸由上海凌锋化学试剂有限公司生产。
4、实验动物和红细胞的制备 成年Balb/c小鼠,购于扬州大学实验动物中心。红细胞的制备：用眼科剪剪去小鼠眼球，暴露眼底血管，采血数滴于加有抗凝剂的离心管中，用PBS洗涤3次，然后用PBS配成10％红细胞，与1/40000浓度鞣酸溶液等体积均匀混合，于37℃作用1小时离心，再用PBS洗涤3次，以1500r/min离心，每次5min,使用时加PBS配成1%红细胞悬液。
5、试验分组 10日龄鸡胚60枚，随机分成4组，具体分组情况见表1。
表1鸡胚分组情况
6、试验方法
(1)半数致死量测定 将病毒尿囊液稀释不同倍数，接种非免鸡胚，得出胚胎半数致死量。经过测定，鸡胚病毒尿囊液半数致死量的稀释度为1∶50，正式试验接种稀释度用1∶25的尿囊液。
(2)药物毒性试验中药原药液用生理盐水作倍比稀释，将中药原液及不同浓度的药液分别接种于4枚10日龄鸡胚尿囊腔中，每只0.2mL，置37.8℃温箱孵育72小时，每天观察存活情况，鸡胚全部存活的最高药液浓度为正式试验起始浓度，同时设生理盐水对照组，药物对鸡胚毒性试验结果见表2。
表2 中药对鸡胚毒性实验结果（n=4）
★分母为接种胚数，分子为存活胚数。
(3)本发明药物对猪伪狂犬病病毒增殖的抑制作用测定 用1：25尿囊液的稀释度和表2的药物浓度做为接种的依据。具体方法如下。
试验Ⅰ组 每个鸡胚尿囊腔同时接种本发明药物（按实施例1方法制备得到）0.2mL，病毒稀释液0.1mL。
试验Ⅱ组 每个鸡胚尿囊腔同时接种利巴韦林0.2mL，病毒稀释液0.1mL。
试验Ⅲ组 每个鸡胚尿囊腔同时接种生理盐水0.2mL，病毒稀释液0.1mL。
上述鸡胚在37.8℃恒温箱中孵育，每天照蛋2～3次，弃去24小时内死胚。收取72小时以后的活胚和24～72小时死胚尿囊液，低温保存备用。以血凝（HA）试验检测每组鸡胚尿囊液的病毒滴度。
7、中药对猪伪狂犬病病毒增殖的抑制作用
第Ⅰ组鸡胚在24～72小时死亡4枚，72小时存活11枚，收集4枚死亡的鸡胚与11枚存活的鸡胚尿囊液，HA滴度为0。
第Ⅱ组鸡胚在24～72小时死亡12枚，72小时存活3枚，收集12枚死胚与3枚活胚的尿囊液，HA滴度为4log2。
第Ⅲ组鸡胚在24～72小时死亡15枚，收集15枚死胚尿囊液，HA滴度为7 log2。
第Ⅳ组在72小时内无鸡胚死亡，收集所有活胚尿囊液，HA滴度为0，详细结果见表3。
表3中药对猪伪狂犬病病毒增殖的抑制作用测定结果
与第Ⅲ组比较，**P＜0.01
二、本发明对实验性伪狂犬病的治疗试验
1、试验动物 购30日龄昆明小鼠两批，第1批30只，用于病毒致死量测定。第2批90只，分成6组，每组15只，即中药预防组与中药治疗组（按实施例2方法制备得到），西药预防组与治疗组，感染对照组，空白对照组。
2、试验方法
(1)半数致死量测定 用30日龄昆明小鼠30只，随机分为5组，用经鸡胚复壮的猪伪狂犬病病毒尿囊液进行半数致死量测定。试验结果，半数致死量为尿囊液30倍稀释0.2mL/只口服。
(2)接种空白对照组的小鼠不用药，不接种尿囊液。其余5组的小鼠在同一时间里每只口服经测定最小致死量为1∶15稀释的尿囊液0.2mL。
(3)用药时间发明预防组接种尿囊液的同时，开始用本发明中药（按实施例2方法制备得到）口服，每只小鼠每次1mL，每天2次，连用5天。发明治疗组在接种尿囊液2天后（出现症状）用药（按实施例2方法制备得到）口服，每只小鼠每次1mL，每天用药2次，连用5天。西药预防组在接种尿囊液的同时，开始用0.05g/mL的利巴韦林口服，每只1mL，每日2次，连用5天。西药治疗组，在接种尿囊液2天后（出现症状）用药，用0.05g/mL的利巴韦林口服，每只小鼠每次1mL，每天用药2次，连用5天。感染对照组的小鼠只接种尿囊液，不用任何药物，结果见表4。
表4 猪伪狂犬病预防与治疗结果 单位：只·%
三、本发明对猪伪狂犬病的临床治疗结果
2011年4月1日，浙江杭州某规模猪场，有34日龄仔猪75头，出现精神沉郁，食欲减退或废绝。4月2日，体温上升到41℃左右，呼吸困难，腹泻，个别猪有划水样或转圈运动，口吐白沫，痉挛。剖检4头，剖检变化：喉头充血肿胀，肺水肿，淋巴结充血肿大，胃肠粘膜卡他性炎症，脾脏呈凝固性坏死。取病料送浙江农科院检查，用RT-PCR（反转录聚合酶链式反应）检测，诊断为猪伪狂犬病毒感染。立即用本发明药物（按照实施例3方法制备得到）治疗，并用利巴韦林为对照药物，共治疗4天，每头仔猪每次2mL（含利巴韦林0.2g），每天用药2次，治疗结果见表5。
表5 猪伪狂犬病临床疗效结果 单位：头·%
通过本次临床应用结果看，本发明中药注射液治疗猪伪狂犬病，疗效比利巴韦林效果明显，表明本发明中药组合物治疗猪伪狂犬病有甚高疗效。
本发明治疗猪伪狂犬病的中药组合物为纯中药配方，副作用小，使用安全方便，吸收快。经验证本发明实施例对猪伪狂犬病的治愈率均在90%以上，难以产生耐药性，并且避免了兽药残留和社会公害的发生。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述：
实施例1：
组方：白牛胆18g,槐栓菌8g，绞股蓝7g
具体制备过程如下：
将白牛胆，槐栓菌，绞股蓝混合，加3味药材总重量4倍的蒸馏水，浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时以上，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95%的乙醇调至溶液中乙醇浓度60%，充分搅拌混匀，沉淀48小时，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至溶液中醇浓度75%，搅匀，沉淀48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，药液加4倍量蒸馏水，搅匀，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩得到白牛胆、槐栓菌和绞股蓝的提取浓缩液，浓缩得浓度为每mL含生药1.5g的药液，调pH7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
实施例2：
组方：白牛胆15g，槐栓菌6g，绞股蓝8g
具体制备过程如下：
将白牛胆，槐栓菌，绞股蓝混合，加3味药材总重量4倍的蒸馏水，浸泡24小时后后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时以上，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95%的乙醇调至乙醇浓度60%，充分搅拌混匀，沉淀48小时，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度75%，搅匀沉淀48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，药液加4倍量蒸馏水冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩得到白牛胆、槐栓菌和绞股蓝的提取浓缩液；浓缩得浓度为每mL含生药1g的药液，调pH7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例3：
组方：白牛胆20g，槐栓菌10g，绞股蓝5g
具体制备过程如下：
将白牛胆，槐栓菌，绞股蓝混合，加3味药材总重量5倍的蒸馏水，浸泡浸泡24小时后后煎煮3次，每次煮沸后维持1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95%乙醇调至乙醇浓度65%，充分搅拌混匀，沉淀60小时，过滤，滤液回收乙醇。回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度80%，搅匀沉淀48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，药液加2倍量蒸馏水冷藏沉淀24小时，过滤，滤液浓缩得到白牛胆、槐栓菌和绞股蓝的提取浓缩液，浓缩得浓度为每mL含生药2g的药液，调pH 7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
实施例4：
组方：白牛胆30g，槐栓菌18g，绞股蓝15g
具体制备过程如下：
将白牛胆，槐栓菌，绞股蓝混合，加3味药材总重量5倍的蒸馏水，浸泡30小时后煎煮2次，每次煮沸后维持1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95%乙醇调至乙醇浓度70%，充分搅拌混匀，沉淀48小时，过滤，滤液回收乙醇。回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度80%，搅匀沉淀48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，药液加3倍量蒸馏水冷藏沉淀24小时，过滤，滤液浓缩得到白牛胆、槐栓菌和绞股蓝的提取浓缩液，浓缩得浓度达每mL含生药1.5g的浓度，调pH7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
Claims (7)
1.一种治疗猪伪狂犬病的中药组合物，其特征在于该组合物由下列重量份的原料药制成：白牛胆15～30重量份，槐栓菌6～18重量份，绞股蓝5～15重量份。
2.根据权利要求1所述的治疗猪伪狂犬病的中药组合物，其特征在于该组合物由下列重量份的原料药制成：白牛胆15～20重量份，槐栓菌6～10重量份，绞股蓝5～8重量份。
3.根据权利要求1或2所述的治疗猪伪狂犬病的中药组合物，其特征在于所述组合物制备的剂型是注射液或口服液。
4.一种权利要求1或2所述的治疗猪伪狂犬病的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：将白牛胆、槐栓菌、绞股蓝加水浸泡后煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60%～70%，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%～80%，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加蒸馏水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩。
5.根据权利要求3所述的治疗猪伪狂犬病的中药注射液或口服液的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：将白牛胆、槐栓菌、绞股蓝加蒸馏水浸泡后煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60%～70%，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%～80%，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加蒸馏水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含1～2g生药量的药液，调pH7.0，制成注射液或口服液。
6.权利要求1或2所述的治疗猪伪狂犬病的中药组合物在制备治疗猪伪狂犬病的中兽药物中的应用。
7.权利要求3所述的治疗猪伪狂犬病的注射液或口服液在制备治疗猪伪狂犬病的中兽药物中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: YAO YUGUO Effective date: 20141204 Owner name: TAIZHOU LONGSHUN APPAREL MANUFACTURING CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: LIU HAIXIA Effective date: 20141204 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 225300 TAIZHOU, JIANGSU PROVINCE TO: 225538 TAIZHOU, JIANGSU PROVINCE |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20141204 Address after: Jiangyan City, Jiangsu province 225538 Taizhou city Shen Gao Zhen industrial concentration area Patentee after: Taizhou long garment manufacturing Co., Ltd. Patentee after: Yao Yuguo Address before: 225300 College of animal science and technology, Jiangsu College of animal husbandry and veterinary medicine, 8 Fenghuang East Road, Taizhou, Jiangsu Patentee before: Liu Haixia |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20191128 Address after: 225300, Fenghuang East Road, Hailing District, Jiangsu, Taizhou, 8 Patentee after: Liu Haixia Address before: Jiangyan City, Jiangsu province 225538 Taizhou city Shen Gao Zhen industrial concentration area Co-patentee before: Yao Yuguo Patentee before: Taizhou long garment manufacturing Co., Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right |