CN103784685B - 治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物及其制备方法和应用。该组合物由五指毛桃8~24重量份,仙鹤草10~30重量份,萱草根6~18重量份制成,该组合物的制备方法是将五指毛桃,仙鹤草,萱草根煎煮2~3次,合并煎液浓缩至稠状,乙醇调至醇浓度60%~70%,沉淀、过滤,浓缩后的药液再加乙醇调至醇浓度75%~80%,沉淀、过滤、滤液浓缩,加蒸馏水冷藏沉淀,过滤、浓缩。该中药组合物用于治疗鸡新城疫和猪伪狂犬病,副作用小,治愈率高,使用安全方便。

Description

治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于中药制药领域,涉及一种治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物,本发明还涉及该中药组合物的制备方法及该中药组合物在制备治疗鸡新城疫和猪伪狂犬病的药物中应用。
背景技术
鸡新城疫,猪伪狂犬病是常发病、多发病。鸡新城疫禽类均可感染,发病不分年龄、季节,但鸡的发病率、死亡率很高。猪伪狂犬病毒可以感染各种动物,但一般动物的发病率比较低,唯有猪的伪狂犬病发病率很高。母猪感染伪狂犬病病毒后,造成母猪繁殖障碍(母猪流产、产死胎、弱仔等)。仔猪感染伪狂犬病病毒后,死亡率非常高。给养猪生产造成很大损失。鸡新城疫、猪伪狂犬病发生后,抗生素、磺胺类药物无治疗作用。我国中药资源丰富,现代医学研究结果表明,许多中药含有丰富的多糖类、生物碱类、有机酸类、甙类、挥发油类等物质,用这些物质制成的中药制剂用于动物,可具有激活免疫细胞,增强免疫功能,抗病毒、抗细菌、抗应激的作用,发明人探索一种治疗鸡新城疫、猪伪狂犬病的药物组合物,效果显著,迄今未见有本发明的同类药物治疗鸡新城疫、猪伪狂犬病的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物。
本发明另一个目的是提供上述治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供上述中药组合物在制备治疗鸡新城疫、猪伪狂犬病的药物中的应用。
本发明的目的是通过下列技术措施来实现的:
一种治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物,该组合物由下列重量份的原料药制成:五指毛桃8~24重量份,仙鹤草10~30重量份,萱草根6~18重量份。
上述组合物优选由下列重量份的原料药制成:五指毛桃8~15重量份,仙鹤草10~15重量份,萱草根6~13重量份。
上述组合物最优选由下列重量份的原料药制成:五指毛桃8~10重量份,仙鹤草10~15重量份,萱草根6~8重量份。
上述治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物是通过下列步骤制备得到的:
五指毛桃、仙鹤草、萱草根加水浸泡后煎煮2~3次,合并煎液后浓缩至稠状,加乙醇调至醇浓度为60%~70%,充分搅拌混匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%~80%,搅匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味,药液加蒸馏水冷藏沉淀,过滤,滤液浓缩。
上述治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物优选制备剂型是注射液和口服液。
上述治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物的制备方法,该方法包括下列步骤:
将五指毛桃、仙鹤草、萱草根加水浸泡后煎煮2~3次,合并煎液后浓缩至稠状,加乙醇调至醇浓度为60%~70%,充分搅拌混匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%~80%,搅匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味,药液加水冷藏沉淀,过滤,滤液浓缩。
上述治疗畜禽病毒性传染病的中药注射液或口服液的制备方法包括以下步骤:
将五指毛桃、仙鹤草、萱草根加三味药材总重量4~5倍量的蒸馏水浸泡后煎煮2~3次,每次煮沸后维持0.5~1小时,合并煎液,浓缩至稠状,加乙醇调至醇浓度为60%~70%,充分搅拌混匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%~80%,搅匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味,药液加蒸馏水冷藏沉淀,过滤,滤液浓缩,得浓度为每毫升含1~2g生药量的药液,制成口服液或调pH7.0后制成注射液。
最优选上述治疗畜禽病毒性传染病的中药注射液或口服液的制备方法,具体包括以下步骤:
将五指毛桃、仙鹤草、萱草根3味药材混合后,加入五指毛桃、仙鹤草、萱草根3味药材总重量4~5倍量的蒸馏水,浸泡24~30小时后煎煮3次,每次煮沸后维持0.5~1小时,合并煎液并浓缩至稠状,加重量百分比浓度为95%乙醇调至醇浓度为60%~70%,充分搅拌混匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度为75%~80%,搅匀沉淀,过滤,滤液回收乙醇再浓缩至无醇味,药液加蒸馏水冷藏沉淀,过滤,滤液浓缩得到浓度为每mL含1~2g生药量的药液,制成口服液或调pH7.0后制成注射液。该注射液或口服液可在制备治疗鸡新城疫、猪伪狂犬病的药物中应用。
本发明中药组合物在治疗畜禽病毒性传染病中应用,具有显著疗效,可应用于制备治疗鸡新城疫、猪伪狂犬病的药物。
本发明的有益效果:本发明吸取中兽医学精髓,五指毛桃FicussimplicissimaLour.具有抗病毒、抗细菌、抗凝血、抑制肿瘤、免疫调节等功效。仙鹤草AgrimoniapilosaLedeb具有抗病毒、收敛止血、止痢、杀虫功能。萱草根为萱草Hemerocallisfulva(L.)L.的根,具有清热利湿、凉血止血、解毒消肿作用。本发明的中药组合物能提高药物的协同增效作用,达到标本兼治的目的。
下面就药效实验进一步说明本发明的疗效。
一、本发明体外抗猪伪狂犬病病毒试验研究
1、试验鸡胚10日龄非免鸡胚,购自仪征市大仪种鸡场。
2、猪伪狂犬病容A株AV25毒株由中国兽医药品监察所提供,毒株用生理盐水稀释,接种非免鸡胚,收集尿囊液,供试验用。鸡胚尿囊液的HA效价为7log2
3、药品本试验以本发明组合物为试验药品;利巴韦林注射液为西药对照药品,由济南利民制药有限公司生产,配成0.05g/mL浓度。鞣酸由上海凌锋化学试剂有限公司生产。
4、实验动物和红细胞的制备成年Balb/c小鼠,购于扬州大学实验动物中心。红细胞的制备:用眼科剪剪去小鼠眼球,暴露眼底血管,采血数滴于加有抗凝剂的离心管中,用PBS洗涤3次,然后用PBS配成10%红细胞,与1/40000浓度鞣酸溶液等体积均匀混合,于37℃作用1小时离心,再用PBS洗涤3次,以1500r/min离心,每次5min,使用时加PBS配成1%红细胞悬液。
5、试验分组10日龄鸡胚40枚,随机分成4组,具体分组情况见表1。
表1鸡胚分组情况
6、试验方法
(1)半数致死量测定将病毒尿囊液稀释不同倍数,接种非免鸡胚,得出胚胎半数致死量。经过测定,鸡胚病毒尿囊液半数致死量的稀释度为1∶50,正式试验接种稀释度用1∶25的尿囊液。
(2)药物毒性试验中药原药液用生理盐水作倍比稀释,将中药原液及不同浓度的药液分别接种于4枚10日龄鸡胚尿囊腔中,每只0.2mL,置37.8℃温箱孵育72小时,每天观察存活情况,鸡胚全部存活的最高药液浓度为正式试验起始浓度,同时设生理盐水对照组,药物对鸡胚毒性试验结果见表2。
表2中药对鸡胚毒性实验结果(n=4)
★分母为接种胚数,分子为存活胚数。
(3)本发明药物对猪伪狂犬病病毒增殖的抑制作用测定用1:25尿囊液的稀释度和表2的药物浓度做为接种的依据。具体方法如下。
试验Ⅰ组每个鸡胚尿囊腔同时接种本发明药物(按实施例1方法制备得到)0.2mL,病毒稀释液0.1mL。
试验Ⅱ组每个鸡胚尿囊腔同时接利巴韦林0.2mL,病毒稀释液0.1mL。
试验Ⅲ组每个鸡胚尿囊腔同时接种生理盐水0.2mL,病毒稀释液0.1mL。
试验Ⅳ组空白对照组,不接种病毒,不给药。
上述鸡胚在37.8℃恒温箱中孵育,每天照蛋2~3次,弃去24小时内死胚。收取72小时以后的活胚和24~72小时死胚尿囊液,低温保存备用。以血凝(HA)试验检测每组鸡胚尿囊液的病毒滴度。
7、中药对猪伪狂犬病病毒增殖的抑制作用
第Ⅰ组鸡胚在24~72小时死亡2枚,72小时存活8枚,收集2枚死亡的鸡胚与8枚存活的鸡胚尿囊液,HA滴度为0。
第Ⅱ组鸡胚在24~72小时死亡9枚,72小时存活1枚,收集9枚死胚与1枚活胚的尿囊液,HA滴度为5log2
第Ⅲ组鸡胚在24~72小时死亡10枚,收集10枚死胚尿囊液,HA滴度为7log2
第Ⅳ组在72小时内无鸡胚死亡,收集所有活胚尿囊液,HA滴度为0,详细结果见表3。
表3中药对猪伪狂犬病病毒增殖的抑制作用测定结果
与第Ⅲ组比较,**P<0.01
二、本发明对实验性伪狂犬病的治疗试验
1、试验动物购30日龄昆明小鼠两批,第1批35只,用于病毒致死量测定。第2批72只,分成6组,每组12只,即中药预防组与中药治疗组(按实施例2方法制备得到的口服液),西药预防组与治疗组,感染对照组,空白对照组。
2、试验方法
(1)半数致死量测定用30日龄昆明小鼠35只,随机分为5组,用经鸡胚复壮的猪伪狂犬病病毒尿囊液进行半数致死量测定。试验结果,半数致死量为尿囊液30倍稀释0.2mL/只口服。
(2)接种空白对照组的小鼠不用药,不接种尿囊液。其余5组的小鼠在同一时间里,每只口服经测定半数致死量浓度为15倍稀释的尿囊液0.2mL。
(3)用药时间发明预防组接种尿囊液的同时,开始用本发明中药(按实施例2方法制备得到的口服液)口服,每只小鼠每次1mL,每天2次,连用5天。发明治疗组在接种尿囊液2天后(出现症状)用药(按实施例2方法制备得到的口服液),每只小鼠每次1mL,每天用药2次,连用5天。西药预防组在接种尿囊液的同时,开始用0.05g/mL的利巴韦林口服,每只1mL,每日2次,连用5天。西药治疗组,在接种尿囊液2天后(出现症状)用药,用0.05g/mL的利巴韦林口服,每只小鼠每次1mL,每天用药2次,连用5天。感染对照组的小鼠只接种尿囊液,不用任何药物,结果见表4。
表4伪狂犬病预防与治疗结果单位:只·%
三、本发明对猪伪狂犬病的临床治疗结果
2013年5月1日,安徽亳州某规模猪场,有28日龄仔猪60头,出现精神沉郁,食欲减退或废绝。5月2日,体温上升到41℃左右,呼吸困难,腹泻,个别猪有划水样或转圈运动,口吐白沫,痉挛。剖检4头,剖检变化:喉头充血肿胀,肺水肿,淋巴结充血肿大,胃肠粘膜卡他性炎症,脾脏呈凝固性坏死。取病料送安徽农科院检查,用RT-PCR(反转录聚合酶链式反应)检测,诊断为猪伪狂犬病毒感染。立即用本发明药物(按照实施例3方法制备得到的注射液)治疗,并用利巴韦林为对照药物,共治疗4天,每头仔猪每次2mL(含利巴韦林0.2g),每天用药2次,治疗结果见表5。
表5猪伪狂犬病临床疗效结果单位:头·%
通过本次临床应用结果看,本发明中药注射液治疗猪伪狂犬病,疗效比利巴韦林效果明显。表明本发明中药制剂,治疗猪伪狂犬病有甚高疗效。
本发明治疗猪伪狂犬病的中药组合物为纯中药配方,副作用小,使用安全方便,吸收快。经验证本发明实施例对猪伪狂犬病的治愈率均在90%以上,难以产生耐药性,并且避免了兽药残留和社会公害的发生。
四、中药鸡胚接种抗新城疫病毒试验。
1、药品:本试验以本发明实施例中药组合物为试验药品,利巴韦林注射液为西药对照,由济南利民制药有限公司生产,配成0.05g/mL浓度。
2、鸡新城疫毒株鸡胚尿囊液的HA效价9log2,经测定,半数致死量为1:3000万倍稀释。
3、试验鸡胚10日龄非免鸡胚,购自仪征市大仪鸡场。
4、试验分组10日龄鸡胚52枚,具体分组情况见表6。
5、试验方法
(1)药物毒性实验:将中药原药液(按实施例1方法制备得到)用生理盐水作倍比稀释,将中药原液及不同浓度的药液分别接种于4枚10日龄鸡胚的尿囊腔中,每只接种0.2mL,置37.8℃温箱孵育72h,每天观察存活情况,鸡胚全部存活的最高药液浓度为正式实验起始浓度,同时设生理盐水对照组,药物对鸡胚毒性实验结果见表7。
表6实验分组情况
编号 组别 数量(枚) 处理
1 试验I组 13 接种病毒尿囊液,并用本发明药物
2 试验II组 13 接种病毒尿囊液,并用利巴韦林药物
3 试验III组 13 接种病毒尿囊液,按试验量给生理盐水
4 试验Ⅳ组 13 不接种病毒尿囊液、不给药
表7中药对鸡胚毒性实验结果(=4)
*分母为接种胚数,分子为存活胚数。
(2)具体方法:
试验I组每个鸡胚尿囊腔同时接种本发明药物(按实施例1方法制备得到的注射液)原液0.2mL,病毒稀释液0.1mL。
试验II组每个鸡胚尿囊腔同时接种利巴韦林0.2mL,病毒稀释液0.1mL。
试验III组每个鸡胚尿囊腔同时接种生理盐水0.2mL,病毒0.1mL。
试验Ⅳ组不接种病毒,不给药。
上述鸡胚在37.8℃恒温箱中继续孵化,每天照蛋2~3次,弃去24h内死胚,收取24~72h死胚和72h活胚的尿囊液,低温保存备用。以血凝(HA)实验检测鸡胚尿囊液的病毒效价。
(3)中药对鸡新城疫病毒增殖的抑制作用:第Ⅰ组鸡胚在24~72小时死亡3枚,72小时存活10枚,收集3枚死亡的鸡胚与10枚存活的鸡胚尿囊液,HA滴度为0。
第Ⅱ组鸡胚在24~72小时死亡11枚,72小时存活2枚,收集11枚死胚与2枚活胚的尿囊液,HA滴度为6log2
第Ⅲ组鸡胚在24~72小时死亡13枚,收集13枚死胚尿囊液,HA滴度为9log2
第Ⅳ组在72小时内无鸡胚死亡,收集所有活胚尿囊液,HA滴度为0,详细结果见表结果见表8。
表8中药对鸡新城疫病毒增殖的抑制作用测定结果
与阳性对照组比较:**P<0.01
五、本发明对实验性鸡新城疫的治疗试验
1、试验动物:本试验用30日龄艾维茵肉鸡90只,随机分为6组,每组15只,即中药预防组与治疗组(按实施例2制备得到),西药预防组与治疗组,感染对照组,空白对照组。
2、鸡新城疫毒株,鸡胚尿囊液的HA效价为9log2
3、试验方法:
(1)先测定尿囊液半数致死量,通过测定,尿囊液的半数致死量为2000倍稀释,接种时按1:1000倍稀释,每只鸡滴鼻与点眼稀释后的尿囊液0.2mL。
(2)操作空白对照组的鸡不用药,不接种尿囊液,其余5组的鸡在同一时间里每只滴鼻点眼稀释后的尿囊液0.2mL。
(3)用药时间发明预防组在接种尿囊液的同时,开始用本发明中药(按实施例2方法制备得到的口服液)口服,每只鸡每次1mL,每天用药2次,连用5天。发明治疗组在接种尿囊液4天后(出现病状)用药,每只鸡每次1mL,每天用药2次,连用5天。西药预防组在接种尿囊液的同时,开始用0.05g/mL的利巴韦林口服,每只鸡1mL,每日2次,连用5天。西药治疗组用0.05g/mL的利巴韦林,在接种尿囊液4天后(出现症状)用药,每只鸡每次1mL口服,每天2次,连用5天。感染对照组的鸡只接种尿囊液,不用任何药物,结果见表9。
六、本发明对鸡新城疫治疗的临床观察
鸡新城疫由新城疫病毒引起的一种急性高度接触性传染病,各种日龄的鸡均可发病,常呈败血症经过,主要特征是呼吸困难,下痢,神经机能紊乱,粘膜和浆膜出血,死亡率
表9鸡新城疫预防与治疗结果单位:只·%
高,可造成很大经济损失。用本发明药物(按实施例3方法制备得到的口服液),每只鸡每次口服1mL,每天用药两次,连用4天。在江苏省苏州市、扬州市、常州市、盐城市对发病鸡进行药物治疗试验,分别对鸡新城疫的疗效结果见表10。
表10鸡新城疫临床疗效结果
单位 例数 治愈数 死亡数 治愈率(%)
苏州市吴中区鸡场 375 357 18 95.2
扬州市仪征鸡场 298 274 24 91.9
常州市扬中鸡场 176 164 12 93.2
盐城市东台鸡场 305 277 28 90.8
合计 1154 1072 82 92.9
本发明药物治疗鸡新城疫一千余例,均取得较好疗效,一般治疗3天后停止死亡,4~5天后可治愈,治愈后一般不复发,表明本发明治疗鸡新城疫有甚高疗效。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述:
实施例1:
组方:五指毛桃10g,仙鹤草12g,萱草根8g
具体制备过程如下:
将五指毛桃,仙鹤草,萱草根混合,加3味药材总重量4倍的蒸馏水,浸泡24小时后煎煮3次,每次煮沸后维持0.5小时以上,合并煎液并浓缩至稠状,加重量百分比浓度为95%的乙醇调至乙醇浓度60%,充分搅拌混匀,沉淀48小时,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度75%,搅匀沉淀48小时,过滤,滤液回收乙醇,再浓缩至无醇味,药液加4倍量蒸馏水冷藏沉淀48小时,过滤,滤液浓缩得到五指毛桃、仙鹤草和萱草根的提取浓缩液,浓度为每mL浓缩液含生药1.5g,制成口服液或调pH7.0后制成注射液,分装,灭菌即得。
实施例2:
组方:五指毛桃8g,仙鹤草10g,萱草根6g
具体制备过程如下:
将五指毛桃,仙鹤草,萱草根混合,加3味药材总重量4倍的蒸馏水,浸泡24小时后后煎煮3次,每次煮沸后维持0.5小时以上,合并煎液并浓缩至稠状,加重量百分比浓度为95%的乙醇调至乙醇浓度60%,充分搅拌混匀,沉淀48小时,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度75%,搅匀沉淀48小时,过滤,滤液回收乙醇,再浓缩至无醇味,药液加4倍量蒸馏水冷藏沉淀48小时,过滤,滤液浓缩得到五指毛桃、仙鹤草和萱草根的提取浓缩液;浓度为每mL浓缩液含生药1g,制成口服液或调pH7.0后制成注射液。分装,灭菌即得。
实施例3:
组方:五指毛桃15g,仙鹤草14g,萱草根13g
具体制备过程如下:
将五指毛桃,仙鹤草,萱草根混合,加3味药材总重量5倍的蒸馏水,浸泡浸泡24小时后后煎煮3次,每次煮沸后维持1小时,合并煎液并浓缩至稠状,加重量百分比浓度为95%乙醇调至乙醇浓度65%,充分搅拌混匀,沉淀60小时,过滤,滤液回收乙醇。回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度80%,搅匀沉淀48小时,过滤,滤液回收乙醇,再浓缩至无醇味,药液加2倍量蒸馏水冷藏沉淀24小时,过滤,滤液浓缩得到五指毛桃、仙鹤草和萱草根的提取浓缩液,浓度为每mL浓缩液含生药2g,制成口服液或调pH7.0后制成注射液。分装,灭菌即得。
实施例4:
组方:五指毛桃24g,仙鹤草30g,萱草根18g
具体制备过程如下:
将五指毛桃,仙鹤草,萱草根混合,加3味药材总重量5倍的蒸馏水,浸泡24小时后煎煮2次,每次煮沸后维持1小时,合并煎液并浓缩至稠状,加重量百分比浓度为95%乙醇调至乙醇浓度70%,充分搅拌混匀,沉淀48小时,过滤,滤液回收乙醇。回收乙醇后的药液再加95%乙醇调至醇浓度80%,搅匀沉淀48小时,过滤,滤液回收乙醇,再浓缩至无醇味,药液加3倍量蒸馏水冷藏沉淀24小时,过滤,滤液浓缩得到五指毛桃、仙鹤草和萱草根的提取浓缩液,浓度为每mL浓缩液含生药1.5g,制成口服液或调pH7.0后制成注射液。分装,灭菌即得。

Claims (7)

1.一种治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物,其特征在于该组合物由下列重量份的原料药制成:五指毛桃8~24重量份,仙鹤草10~30重量份,萱草根6~18重量份。
2.根据权利要求1所述的治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物,其特征在于该组合物由下列重量份的原料药制成:五指毛桃8~15重量份,仙鹤草10~15重量份,萱草根6~13重量份。
3.根据权利要求1所述的治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物,其特征在于该组合物由下列重量份的原料药制成:五指毛桃8~10重量份,仙鹤草10~15重量份,萱草根6~8重量份。
4.根据权利要求1、2或3所述的治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物,其特征在于所述组合物制备的剂型是注射液或口服液。
5.一种权利要求1、2或3所述的治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤:将五指毛桃、仙鹤草、萱草根加水浸泡后煎煮2~3次,合并煎液后浓缩至稠状,加乙醇调至醇浓度为60%~70%,充分搅拌混匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%~80%,搅匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味,药液加水冷藏沉淀,过滤,滤液浓缩。
6.根据权利要求5所述的治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤:将五指毛桃、仙鹤草、萱草根加三味药材总重量4~5倍量的蒸馏水浸泡后煎煮2~3次,每次煮沸后维持0.5~1小时,合并煎液,浓缩至稠状,加乙醇调至醇浓度为60%~70%,充分搅拌混匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇,回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75%~80%,搅匀,沉淀,过滤,滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味,药液加蒸馏水冷藏沉淀,过滤,滤液浓缩,得浓度为每毫升含1~2g生药量的药液,制成口服液或调pH7.0后制成注射液。
7.权利要求1、2或3所述的治疗畜禽病毒性传染病的中药组合物在制备治疗鸡新城疫和猪伪狂犬病的药物中的应用。
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