CN102666862A - 在联合生物加工生物体中生产丙醇、醇和多元醇 - Google Patents

Abstract

本发明提供了新的代谢通路，所述通路在联合生物加工系统(CBP)中引起丙醇、醇或多元醇的形成，其中木质纤维生物质被有效地转化为此类产物。更具体地，本发明提供了重组的微生物，其中所述微生物表达一种或多种天然和/或异源的酶；其中所述一种或多种酶在一个或多个工程化的代谢通路中起作用以实现：(1)将碳水化合物源转化为1，2-丙二醇、异丙醇(isopropropanol)、乙醇和/或甘油；(2)将碳水化合物源转化为正丙醇和异丙醇；(3)将碳水化合物源转化为异丙醇和甲醇；或(4)将碳水化合物源转化为丙二醇和丙酮；其中所述一种或多种天然和/或异源的酶被活化、上调或下调。

Description

在联合生物加工生物体中生产丙醇、醇和多元醇

发明背景

发明领域

联合生物加工(CBP)实质上描述了这样的操作模式，其中生物催化剂产生酶，其可将不昂贵的纤维素分解成为有用的糖，然后在单一的容器中同时将它们发酵成为附加价值的产物。降低了单元过程数目的CBP显著降低了与纤维素生物燃料生产相关的操作和资本花费。此外，CBP过程降低或消除了对于外部添加的昂贵纤维素酶的需求。见Lynd等人“Microbial cellulose utilization：Fundamentals andbiotechnology”，Microbiology and Molecular Biology Reviews66(3)：506-577(2002)；Lynd等人，“Consolidated bioprocessing ofcellulosic biomass：An update，″Current Opinion in Biotechnology16(5)：577-583(2005)；″Breaking the Biological Barriers to CellulosicEthanol：A Joint Research Agenda，″December 2005，Rockville，Maryland Publication Date：June 2006；DOE/SC-0095。CBP被广泛地认为是“终极低花费的纤维素水解和发酵配置”DOE/USA JointResearch Agenda(见DOE/SC-0095 Joint Research Agenda)。对于植物生物质(例如木质纤维生物质)，CBP也减少了依赖石化原料来生产可发酵的、有附加价值的产物(例如丙醇、醇和多元醇)的需求。

在植物生物质的形式中，木质纤维生物质(“生物质”)特别适于生产可发酵的、有附加价值的产物，因为其大规模的可获得性、低花费和环境良性的生产。阻碍生物质原料加工的主要障碍是一般性的缺少低花费的技术用于克服这些材料对于转化成为有用的产物的抵抗性。木质纤维生物质含有可被转化成为丙醇、醇和多元醇的碳水化合物级分(例如纤维素和半纤维素)。为了转化这些级分，纤维素和半纤维素必须最终被转化或水解成为单糖，历史上被发现有问题的正是水解。

木质纤维素原料抗拒水解以及随后糖的释放。浓缩酸预处理可释放糖，伴随相关地失去一些戊糖或己糖。然而，使用浓缩酸的更大问题是与这些预处理相关的额外的资本花费。资本花费的含义包括使用昂贵的构建材料、操作腐蚀性化学品和处理对环境的影响。事实上，木质纤维素预处理领域的一些知名学者已评论了虽然浓缩的矿物酸是有效的，当相对于所产生的糖的价值衡量时，它们太过昂贵而不实用。Mosier等人，(2005)，Bioresource Technology 96，673-686。

最近，一些公司作出了这样的技术声明：他们显示了实验室规模的浓缩酸再循环作为减少与使用浓缩酸预处理相关的花费的手段。关于这种再循环技术的一篇最近的文章澄清了他们只能够再循环所添加的酸的42％并且重申这种技术将仅在2010年下半年在试验性设备中被测试。Technology Review，Wednesday，June 10，2009(可在http://www.technologyreview.com/energy/22774/获得)。此外，此文章中包括工业专家反对使用浓缩的HCl来进行预处理的警告，因为工厂将需要昂贵的构建材料。CBP提供了由生物质生产可发酵糖的可行的备选方案。

涉及酶促或微生物水解的CBP生物质加工方案通常涉及四种生物学上介导的转化：(1)产生糖分解性酶(纤维素酶和半纤维素酶)；(2)将经预处理的生物质中存在的碳水化合物组分水解为糖；(3)己糖(例如葡萄糖、甘露糖和半乳糖)的发酵；以及(4)戊糖(例如木糖和阿拉伯糖)的发酵。在CBP中，这四种转化在一个步骤中发生，CBP与其它较少高度整合的配置的区别在于其不涉及用于纤维素酶和/或半纤维素酶生产的专门的方法步骤。

因此，与以专门的纤维素酶生产为特征的方法相比，CBP提供了花费更低和效率更高的潜在可能。这些益处一部分是由下述产生的：所避免的资本花费，底物和其它原材料，以及与纤维素酶生产相关的应用。此外，数个因素支持着实现更高的水解率，以及因而使用CBP的减少的反应器体积和资本投入，所述因素包括酶-微生物协同作用和使用嗜热生物体和/或复合的纤维素酶系统。此外，纤维素-附着的纤维素分解性微生物有可能成功地与非附着的微生物(例如污染物)竞争纤维素水解的产物，这能够增加基于微生物的纤维素利用的工业方法的稳定性。通过两种策略取得开发能够进行CBP的微生物方面的进展：工程化天然存在的纤维素分解性微生物以改善与产物相关的特性，例如产率和滴度；以及工程化显示出高产物产率和滴度的非-纤维素分解性生物体以表达能够利用纤维素和半纤维素的异源性纤维素酶和半纤维素酶系统。

许多细菌具有通过糖酵解过程将简单己糖发酵成为酸性和pH-中性产物的混合物的能力。糖酵解通路是丰富的并且包括一系列酶促步骤，其中六碳葡萄糖分子通过多个中间产物而被分解成为两个分子的三碳化合物：二羟丙酮磷酸和酸甘油醛3-磷酸。此过程引起ATP(生物学能量供应)和经还原的辅因子NADH的净生成。可利用CBP生物体的代谢机制而由这些三碳化合物制出许多下游的附加价值的产物，这包括例如丙醇、醇和多元醇。

工业化学品(例如丙醇、醇和多元醇)传统上源自石化原料。然而，由石化原料生产此类化学品有其问题，其中尤其是使用经受价格波动和严格调控的非可再生的资源。因此，本领域存在对于由允许大规模可获得性、低花费和有利于环境的生产(这些均为CBP的优势)的资源产生丙醇、醇和多元醇的需求。特别地，存在对于经工程化的生物体作为CBP系统的一部分的需求，所述经工程化的生物体能够将生物质转化成为丙醇、醇和多元醇。

发明简述

本发明提供了在联合生物加工系统(CBP)中引起丙醇，醇或多元醇形成的新的代谢通路，其中木质纤维生物质被有效地转化为此类产物。

本发明因此提供了重组的微生物，其中所述微生物表达一种或多种天然的和/或异源的酶；其中所述一种或多种酶在一个或多个工程化的代谢通路中起作用以实现：(1)将碳水化合物源转化为1，2-丙二醇，异丙醇(isopropropanol)，乙醇和/或甘油；(2)将碳水化合物源转化为正丙醇和异丙醇；(3)将碳水化合物源转化成为异丙醇和甲醇；或(4)将碳水化合物源转化成为丙二醇和丙酮。

在图1-5和7中概述了本发明的工程化的代谢通路。在沿所述通路的各种步骤中起作用的酶显示在表2-5中。利用了本发明的工程化的代谢通路来实现在细菌和酵母中的产物的高理论产率，所述产物特别是1，2-丙二醇、异丙醇、正丙醇和甲醇。

附图说明

图1显示了用于在细菌和酵母CBP平台中生产混合醇的理论代谢通路的图示。酵母特异性的分支通路由深灰色框中的EC编号显示。细菌特异性的分支通路由浅灰色框中的EC编号显示。

图2显示了用于在细菌CBP平台中生产正丙醇和异丙醇的理论代谢通路的图示。

图3显示了用于在细菌CBP平台中生产异丙醇和甲醇的理论代谢通路的图示。

图4显示了用于在细菌和酵母CBP平台中厌氧生产丙二醇和丙酮的理论代谢通路的图示。酵母特异性的分支通路由深灰色框中的EC编号显示。细菌特异性的分支通路由浅灰色框中的EC编号显示。

图5显示了用于在酵母CBP平台中好氧生产丙二醇的理论代谢通路的图示。

图6显示了解糖热厌氧杆菌(T.saccharolyticum)中丙二醇利用(pdu)基因组织结构的图示。

图7显示了用于在细菌和酵母CBP平台中生产正丙醇和异丙醇的理论代谢通路的图示。

发明详述

代谢通路工程化

许多细菌具有通过糖酵解过程而将简单己糖发酵成为酸性和pH中性产物的混合物的能力。糖酵解通路是丰富的并且包括一系列酶促步骤，其中六碳葡萄糖分子通过多个中间产物而被分解成为两个分子的三碳化合物丙酮酸。此过程引起ATP(生物学能量供应)和经还原的辅因子NADH的净生成。

丙酮酸是代谢的重要中间化合物。例如，在好氧条件下，丙酮酸可被氧化成为乙酰辅酶A(acetyl CoA)，其然后进入三羧酸循环(TCA)，转而产生合成的前体、CO2和经还原的辅因子。然后，所述辅因子通过经由一系列酶促步骤向氧提供氢等价物而被氧化，这引起水和ATP的形成。这种能量形成的过程已知为氧化磷酸化。

在厌氧条件下(没有可获得的氧)，发生发酵，其中有机化合物的降解产物作为氢供体和受体。来自糖酵解的过量NADH在涉及将有机底物还原为产物(例如乳酸和乙醇)的反应中被氧化。此外，在已知为底物水平磷酸化的过程中，由有机酸(例如乳酸)的生产产生了ATP。因此，糖酵解和丙酮酸代谢的发酵产物包括各种有机酸、醇和CO₂。

大多数兼性厌氧菌通过丙酮酸脱氢酶(PDH)和三羧酸循环(TCA)厌氧地代谢丙酮酸。在厌氧条件下，用于丙酮酸代谢的主要能量通路是通过丙酮酸-甲酸-裂解酶(PFL)通路以提供甲酸和乙酰辅酶A。然后乙酰辅酶A通过磷酸乙酸转移酶(PTA)和乙酸激酶(ACK)被转化为乙酸，伴随共产生ATP；或者乙酰辅酶A通过乙醛脱氢酶(AcDH)和醇脱氢酶(ADH)被还原为乙醇。为了保持还原性等价物的平衡，由糖酵解产生的过量NADH在丙酮酸被还原为乳酸的过程中被乳酸脱氢酶(LDH)重新氧化为NAD+。在乙酰辅酶A被还原为乙醇的过程中，NADH也可被AcDH和ADH重新氧化，但是这在具有有功能的LDH的细胞中是次要反应。

产乙醇的生物体(包括酵母，例如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae))能够进行第二种类型的厌氧发酵，这通常被称作醇发酵，其中丙酮酸被丙酮酸脱羧酶(PDC)代谢为乙醛和CO₂。然后，乙醛被ADH还原为乙醇，再生出NAD+。醇发酵导致将一个葡萄糖分子代谢为两个乙醇分子和两个CO₂分子。

本发明涉及修饰细菌和酵母中的传统糖酵解通路，如上文所述，以工程化能够生成或增加某些产物的产率的新代谢通路，所述产物否则不能被天然的生物体生成。此类产物包括正丙醇或异丙醇，以及醇、丙二醇、乙醇和甘油。

在具体实施方案中，本发明涉及在CBP酵母和细菌平台中生产混合醇。在其它实施方案中，本发明涉及在CBP细菌平台中生产正丙醇和异丙醇。在其它的实施方案中，本发明涉及在CBP细菌平台中生产异丙醇和甲醇。在某些其它实施方案中，本发明涉及在CBP酵母或细菌平台中生产丙二醇。在其它实施方案中，丙二醇可在工业应用中被直接利用或者被浓缩为丙烯或通过基于化学或微生物的生物催化被转化为丙醇。

本发明涉及工程化各种微生物(包括细菌和酵母)中的此类备选的代谢通路。如本申请中所使用的，术语“微生物”是指显微大小或亚显微大小的生物体，其仅能借助显微镜被看到并且通常仅由单个细胞组成。微生物包括细菌、原生动物以及某些藻类和真菌。

在某些实施方案中，细菌微生物是下列属的菌种：热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacterium)、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、梭菌属(Clostridium)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、糖球菌属(Saccharococcus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、热解纤维素菌属(Caldicellulosiruptor)、Anaerocellum或厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)。在某些实施方案中，所述微生物是选自下列的细菌：热产硫磺热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosulfurigenes)、嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumaotearoense)、解多糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumpolysaccharolyticum)、玉蜀黍热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumzeae)、解木聚糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumxylanolyticum)、解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumsaccharolyticum)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobium brockii)、热解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosaccharolyticum)、热硫化氢热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterthermohydrosulfuricus)、产乙醇热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterethanolicus)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter brocki)、热纤维素梭菌(Clostridium thermocellum)、解纤维梭菌(Clostridiumcellulolyticum)、Clostridium phytofermentans、Clostridiumstraminosolvens、热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillusthermoglucosidasius)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)、Saccharococcus caldoxylosilyticus、嗜热糖球菌(Saccharoccus thermophilus)、坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacilluscampinasensis)、黄热芽孢杆菌(Bacillus flavothermus)、Anoxybacilluskamchatkensis、Anoxybacillus gonensis、Caldicellulosiruptoracetigenus、解糖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor saccharolyticus)、Caldicellulosiruptor kristjanssonii、Caldicellulosiruptor owensensis、Caldicellulosiruptor lactoaceticus和嗜热厌氧纤维降解菌(Anaerocellum thermophilum)。在具体的实施方案中，所述微生物是热纤维素梭菌(Clostridium thermocellum)或解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterium saccharolyticum)。

在某些其它的实施方案中，酵母微生物选自：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)，马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)，巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)，多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)，红法夫酵母(Phaffiarhodozyma)，实用假丝酵母(Candida utliis)，Arxulaadeninivorans，树干毕赤酵母(Pichia stipitis)，汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，多形德巴利酵母(Debaryomycespolymorphus)，粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)，白色假丝酵母(Candida albicans)和西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)。在具体的实施方案中，酵母微生物是酿酒酵母。

在某些情形中，本发明的微生物是纤维素分解性的。术语“纤维素分解性”是指能够水解寡聚己糖和多聚己糖中的糖苷键。纤维素分解性活性也可包括使纤维素和半纤维素解聚或脱支的能力。

术语“产乙醇性”意在包括微生物由碳水化合物产生乙醇作为发酵产物的能力。此术语意在包括但不限于，天然存在的产乙醇性生物体、具有天然存在或引入的突变的产乙醇性生物体，经遗传修饰的产乙醇性生物体。

术语“发酵(fermenting)”和“发酵(fermentation)”意在包括这样的酶促过程(例如细胞的或无细胞的，例如裂解物或纯化的多肽混合物)，其中由碳水化合物产生乙醇，特别是作为发酵的产物。

“嗜热的”是指在约45℃或更高的温度下生长旺盛的生物体。

“嗜温的”是指在约20-约45℃的温度下生长旺盛的生物体。

术语“CBP生物体”意在包括本发明的微生物，例如具有适于CBP的性质的微生物。

在本发明的某些实施方案中，利用了一个或多个工程化的代谢通路来由葡萄糖组合生产丙二醇和异丙醇。组合生产丙二醇和异丙醇所需的代谢通路和各种不同的酶(表2)显示在图1中并在下面的实施例1中进一步描述。这些代谢通路可被细分为下列不同的生产途径：i)将二羟丙酮磷酸转化为丙二醇；ii)将丙酮酸转化为异丙醇；iii)将丙酮酸转化为乙醇(仅细菌平台)；和iv)将二羟丙酮磷酸转化为甘油(仅酵母平台)。

在本发明的某些其它实施方案中，利用一个或多个工程化的代谢通路来生产正丙醇和异丙醇。生产正丙醇和异丙醇所需的代谢通路和各种不同的酶(表3)显示在图2中并在下文的实施例2中进一步描述。所述代谢通路可被进一步细分为两种不同的生产途径：i)将二羟丙酮磷酸转化为正丙醇；和ii)将丙酮酸转化为异丙醇。

在本发明的其它实施方案中，利用了一个或多个工程化的代谢通路来由碳水化合物组合生产异丙醇和甲醇。生产异丙醇和甲醇所需的代谢通路和各种不同的酶(表4)显示在图3中并在下文中的实施例3中进一步描述。所述代谢通路可被细分为不同的生产途径：i)将丙酮酸转化为异丙醇；和ii)将甲酸转化为CO₂和甲醇。

在本发明的其它实施方案中，利用了一个或多个工程化的代谢通路来在嗜热梭菌和酵母(例如酿酒酵母)中由己糖和戊糖共生产丙二醇和丙酮。生产丙二醇和丙酮所需的代谢通路和各种不同的酶(表5)显示在图4和5中，并在下文的实施例4和5中进一步描述。所述代谢通路可被如下细分：i)由葡萄糖产生二羟丙酮磷酸和甘油醛-3-磷酸；ii)随后由二羟丙酮磷酸生成丙二醇；和iii)由甘油醛-3-磷酸生成丙酮。

本发明的通路的总结提供在如下的表1中：

代谢酶

如上文所描述的，工程化微生物中的代谢通路需要某些酶，以在沿所述通路的特定步骤处起作用，如图1-5中所示。

如本文所描述的，本发明的酶可以是微生物天然株系内源性的，并且可因此被理解为称作“天然的”或“内源性的”。如果生物体未经遗传工程化，或者未以有意改变所述生物体的遗传和/或表型构成的方式经人工操作的话，则所述生物体处于“天然状态”。例如，野生型生物体可被认为是处于天然状态。

例如，在某些实施方案中，当宿主细胞是特定的热厌氧杆菌菌株时，一种或多种代谢酶可以是源自同一热厌氧杆菌菌株的酶。可用启动子、终止子、复制起源或同源重组靶标对含有来自此类热厌氧杆菌菌株的整个基因组DNA的片段的来源文库进行宿主修饰。筛选这些文库可鉴别出编码目的酶的DNA，所述目的酶在一个或多个本发明的工程化的代谢通路中起作用。

在其它实施方案中，本发明的酶可以是非天然的或对于生物体为“异源性的”，并且可通过转化或本领域普通技术人员所知的其它方法而在载体上被引入生物体中，如下文中进一步描述的。

术语“活性(activity)”、“活性(activities)”、“酶促活性(enzymaticactivity)”和“酶促活性(enzymatic activities)”可互换地使用并意在包括通常归于所选择的多肽的任何功能活性。通常，所选多肽的活性涵盖与所产生的多肽相关的总的酶促活性。由宿主细胞产生并具有酶促活性的多肽可位于细胞的细胞内空间中、与细胞相关联、被分泌到细胞外环境中，或者它们的组合。

在某些实施方案中，在本发明的代谢通路中起作用的酶显示在下文中的表2-5中并包括下述：甲基乙二醛合酶，醛-酮还原酶，乙醛酸还原酶，甲基乙二醛脱氢酶，醛还原酶，丙酮酸甲酸裂解酶，硫解酶，辅酶A转移酶，乙酰乙酸脱羧酶，异丙醇，醛脱氢酶，醇脱氢酶，二醇-水解酶，脱氢酶，磷酸乙酰转移酶，氧化还原酶，甲酸脱氢酶，甲醛脱氢酶和甲醇脱氢酶。

如本申请中所使用的，术语“甲基乙二醛合酶”或“mgs”是指催化下述化学反应的酶：

如本申请中所使用的，术语“醛-酮还原酶”可指任何数目的、相关的单体NADPH依赖性氧化还原酶，例如醛糖还原酶、前列腺素F合酶、木糖还原酶和许多其它的酶。

如本申请中所使用的，术语“氧化还原酶”指催化从一个分子(还原剂，也称作氢或电子供体)向另一个(氧化剂，也称作氢或电子受体)转移电子的酶。

如本申请中所使用的，术语“乙醛酸还原酶”是指催化下述化学反应的酶：

这种酶属于氧化还原酶家族，特别是那些以NAD+或NADP+作为受体而作用于供体的CH-OH基团的酶。

如本申请中所使用的，术语“甲基乙二醛脱氢酶”是指将甲基乙二醛氧化为丙酮酸的酶。

如本申请中所使用的，术语“辅酶A转移酶”是这样的酶(例如乙酰辅酶A转移酶)，其催化下述化学反应：

术语“辅酶A转移酶”也指这样的酶，其催化下述化学反应：

如本申请中所使用的，术语“乙酰乙酸脱羧酶”或“ADC”是指参与人和其它动物中的酮体产生通路以及某些细菌中的溶剂生成的酶。其反应涉及乙酰乙酸的脱羧作用，这形成丙酮和二氧化碳。

如本申请中所使用的，术语“醛脱氢酶”是指催化醛的氧化(脱氢作用)的酶。

如本申请中所使用的，术语“脱氢酶”是指通过将一个或多个氢化物(H^-)转移至受体(通常为NAD⁺/NADP⁺)而氧化底物的酶。

如本申请中所使用的，术语“甲酸脱氢酶”是指这样的酶：其催化甲酸氧化成为重碳酸或二氧化碳，这向第二底物(例如甲酸：NAD⁺氧化还原酶中的NAD⁺)贡献电子。

如本申请中所使用的，术语“甲醛脱氢酶”是指这样的酶，其催化下述化学反应：

这种酶属于氧化还原酶家族，特别是以NAD⁺或NADP⁺作为受体而作用于供体的醛基或桥氧基的那些酶。

如本申请中所使用的，术语“甲醇脱氢酶”是催化下述化学反应的酶：

这种酶也属于氧化还原酶家族，特别是以NAD⁺或NADP⁺作为受体而作用于供体的醛或桥氧基的那些酶。

如本申请中所使用的，术语“丙酮酸甲酸裂解酶”或“PFL”意在包括能够将丙酮酸转化为乙酰辅酶A和甲酸的酶。

如本申请中所使用的，术语“醇脱氢酶”或“ADH”意在包括能够将醛(例如乙醛和丙醛)和酮(例如丙酮)转化为醇(例如乙醇、正丙醇或异丙醇)的酶。

如本申请中所使用的，术语“磷酸乙酰转移酶”或“PTA”意在包括能够将乙酰辅酶A转化为乙酰磷酸的酶。

如本申请中所使用的，术语“二醇脱水酶”意在包括能够将丙二醇转化为丙醛的酶。

术语“上调的”是指活性增加，例如与天然宿主中的活性相比，酶的酶促活性增加。

术语“下调的”是指活性的减少，例如与天然宿主中的活性相比，酶的酶促活性减少。

术语“活化的”是指经表达的或有代谢功能的。

相应于本发明的某些酶的多肽序列如下：

热纤维素梭菌蛋白

EC 2.3.1.54(Cthe0505；SEQ ID NO：1)

MDAWRGFNKGNWCQEIDVRDFIIRNYTPYEGDESFLVGPTDRTRKLWEKVSELLKKERENGGVLDVDTHTISTITSHKPGYIDKELEVIVGLQTDEPLKRAIMPFGGIRMVIKGAEAYGHSVDPQVVEIFTKYRKTHNQGVYDVYTPEMRKAKKAGIITGLPDAYGRGRIIGDYRRVALYGVDRLIAEKEKEMASLERDYIDYETVRDREEISEQIKSLKQLKEMALSYGFDISCPAKDAREAFQWLYFAYLAAVKEQNGAAMSIGRISTFLDIYIERDLKEGKLTEELAQELVDQLVIKLRIVRFLRTPEYEKLFSGDPTWVTESIGGMALDGRTLVTKSSFRFLHTLFNLGHAPEPNLTVLWSVNLPEGFKKYCAKVSIHSSSIQYESDDIMRKHWGDDYGIACCVSAMRIGKQMQFFGARCNLAKALLYAINGGKDEMTGEQIAPMFAPVETEYLDYEDVMKRFDMVLDWVARLYMNTLNIIHYMHDKYAYEALQMALHDKDVFRTMACGIAGLSVVADSLSAIKYAKVKPIRNENNLVVDYEVEGDYPKFGNNDERVDEIAVQVVKMFMNKLRKQRAYRSATPTLSILTITSNVVYGKKTGNTPDGRKAGEPLAPGANPMHGRDINGALAVLNSIAKLPYEYAQDGISYTFSIIPKALGRDEETRINNLKSMLDGYFKQGGHHINVNVFEKETLLDAMEHPEKYPQLTIRVSGYAVNFIKLTREQQLDVINRTIHGKI

EC 2.3.1.8(Cthe1029；SEQ ID NO：2)

VIIYSYKYYKYSFYDNSFGIMKGEEFMSFLEQIIERAKSDVKTIVLPESTDLRVIKAASMIMKKGIAKVVLIGNEKEIKSLAGDIDLEGVMIEDSLNSEKLEDYANTLYELRKSKGMTIEAARETIKDPLYYGVMMVKKGEADGMVAGAVNSTANTLRPALQILKTAPGTKLVSSFFVMVVPNCEYGHNGTFVYADCGLVENPDADQLSEIAISASKSFEMLVGAKPQVAMLSYSSYGSAKSELTEKVIKATQLAKEKAPHLAIDGELQVDAAIVPEVAKSKAKGSSVAGKANVLIFPDLDAGNIAYKLTQRLAKAEAYGPITQGLARPVNDLSRGCSAEDIVGVAAITAVQAQYVKA

EC 2.7.2.1(Cthe1028；SEQ ID NO：3)

MNILVINTGSSSLKYQLIDMTNESVLAKGVCDRIGLEHSFLKHTKTGGETVVIEKDLYNHKLAIQEVISALTDEKIGVIKSMSEISAVGHRIVHGGEKFKESAIIDEDVMKAIRDCVELAPLHNPSNIIGIEACKQILPDVPMVAVFDTAFHQTMPRHAYIYALPYEIYEKYKLRKYGFHGTSHKYVAHRAAQMLGKPIESLKLITCHLGNGASICAVKGGKSVDTSMGFTPLQGLCMGTRSGNVDPAVITYLMEKEKMNINDINNFLNKKSGVLGISGVSSDFRDVQDAAEKGDDRAQLALDIFCYGVRKYIGKYIAVLNGVDAVVFTAGIGENNAYIRREVLKDMDFFGIKIDLDKNEVKGKEADISAPDAKVKTLVIPTNEELEIARETLRLVKNL

EC 1.1.1.80(Cthe101；SEQ ID NO：4)

MINFVYKNPTKIIFGRGTELKVGEEVRQYSGKVLLHYGGGSIKKTGLYDRVVNSLKQAGVEVVELGGVMPNPRLGLVNEGIKICREKGIDFILAVGGGSAIDSAKAIAVGVPYDGDVWDFFCGKAEPKEALPVGVVLTIPAAGSEASPNSVITREDGLYKRGMYSELIRPVFAIMNPELTYTLPAYQTACGTADIMAHIMERYFTNETHTDLTDRLCEATLKTMIKNVPIALEEPDNYNARAEIMWAGTIAHNGLLGTGRIEDWASHNIEHEISAIYDVAHGAGLAVVFPAWMKYVYKNNLDRFVQFAVRVWNVEMNFDEPERTALEGIERLKKFFKEIGLPVSLKEMNIGDDRLEEMASKCTNGGKATIGNFVKLNREDVYNILKLAV

Cthe0394(SEQ ID NO：5)

MKAFNYYAPTEIIFGCGRVQEIGSITAQYGKKALLVTVPEFPEVKELYEKVKKSLRENGVEVVHFDGVIPNPTTDVVTEGANMAKAAGVDVVIGLGGGSSIDTAKAIAVEATHPGTAWDYNCHTPGPTSATLPIIAIGTTAGTGSQCTQCAVITKTSEKDKSAIWHKNIFPKVAIVDPEVTVTMPKSVTAQTGFDAFAHNFEAYLSVKTSPLVEMMAIEAIKMIKEYLPKALENPNDIEARSKMSLADTLGGLTNSNAGVTLPHGLGMQVGGHAPHVSHGQALAIIYPQFTRYTYAWAIEKFAKVGRIFNPALNELSDEEAAKEACVAIDDFLKKIGLWIGFKDVNVTKEQIREIADDGQVLGDYLNNPRVATIDEMYELLMNCYERKE

Cthe0423(SEQ ID NO：6)

MTKIANKYEVIDNVEKLEKALKRLREAQSVYATYTQEQVDKIFFEAAMAANKMRIPLAKMAVEETGMGVVEDKVIKNHYASEYIYNAYKNTKTCGVIEEDPAFGIKKIAEPLGVIAAVIPTTNPTSTAIFKTLIALKTRNAIIISPHPRAKNSTIEAAKIVLEAAVKAGAPEGIIGWIDVPSLELTNLVMREADVILATGGPGLVKAAYSSGKPAIGVGAGNTPAIIDDSADIVLAVNSIIHSKTFDNGMICASEQSVIVLDGVYKEVKKEFEKRGCYFLNEDETEKVRKTIIINGALNAKIVGQKAHTIANLAGFEVPETTKILIGEVTSVDISEEFAHEKLCPVLAMYRAKDFDDALDKAERLVADGGFGHTSSLYIDTVTQKEKLQKFSERMKTCRILVNTPSSQGGIGDLYNFKLAPSLTLGCGSWGGNSVSDNVGVKHLLNIKTVAERRENMLWFRTPEKIYIKRGCLPVALDELKNVMGKKKAFIVTDNFLYNNGYTKPITDKLDEMGIVHKTFFDVSPDPSLASAKAGAAEMLAFQPDTIIAVGGGSAMDAAKIMWVMYEHPEVDFMDMAMRFMDIRKRVYTFPKMGQKAYFIAIPTSAGTGSEVTPFAVITDEKTGIKYPLADYELLPDMAIVDADMMMNAPKGLTAASGIDALTHALEAYVSMLATDYTDSLALRAIKMIFEYLPRAYENGASDPVAREKMANAATIAGMAFANAFLGVCHSMAHKLGAFYHLPHGVANALMINEVIRFNSSEAPTKMGTFPQYDHPRTLERYAEIADYIGLKGKNNEEKVENLIKAIDELKEKVGIRKTIKDYDIDEKEFLDRLDEMVEQAFDDQCTGTNPRYPLMNEIRQMYLNAYYGGAKK

Cthe2445(SEQ ID NO：7)

MKGKMKVCVLTGKEKLEWVERDIPQPGRGELQIKLKHVGVCGSDLHFYKEGRLANWELDGPLALGHEPGGIVSAIGEGVEGFEIGDKVALEPGVPCGECEDCRKGHYNLCKHIKFMAIPHEKDGVFAEYCVHSASMCYKLPENVDTMEGGLMEPLSVALHATELSNAKIGETAIVLGSGCIGLCTVMALKARGVSEIYVTDVVDKRLEKALEVGATRVFNSQREDIVEFAKTLPGGGADQVYECAGSRVTTLQTCKLIKRAGKVTLVGVSPEPVLELDIATLNAMEGTVYSVYRYRNMYPIAIAAVSSGVIPLKKIVSHVFDFKDCIEAIEYSTNHKDEVIKSVIKF

Cthe2579(SEQ ID NO：8)

MNFKFKIGTKVFFGKECVKENKAVFKDFRKRALLVTGKNSAKASGAFSDVVEVLEEYGIDYEIYDRVANNPSLENVKEGGEAARKFDADFIIGIGGGSPLDASKAVAVLATNDIEPVDLYKNVFENKPLPIIAIPTTAGTGSEVTPYSILTRDDMKTKKSFGNEDTFPAVAFIDARYTESMSYETTVDTALDAFTHALEGYLGRRSTPVSDILAVEAIRIFGECLENLLNNKFDYDVREKLLYMSMLGGMVISHTGTTIIHGMGYSLTYFKDIPHGRANGMLVREYLKYNYEAAKEKTDNVLRLLKVPSIDAFGEIIDRLIPQKPVLTKEEIELYASLAMKQNSTLSNARTVVKEDMEEIFKNTFGKG

EC 4.2.2.3(Cthe0095；SEQ ID NO：9)

MNIALIAHDKKKELMASFCIAYRSILKNHTLFATGTTGAIIVEATGLNVHRFLPGVMGEQQISARAAYNELDLVIFFRDPISAKSDEPDIHSLLRECDINNIPFATNLGTAEMLIKGLERGDLDWRELIKK

EC 1.1.1.-(Cthe0152；SEQ ID NO：10)

LKYCKLGNTGLEVSKLCFGGLIIGPLQANLPPETGAEIILKSFELGVNFIDTAELYGTYSHIGKALKKTNKNIVVATKSYAYSAEGAKESLEKARKEMDIDVIDIFMLHEQESRLTLKGHREALEYYISMKEKGIIKAVGVSTHNVEVVEACCEMPEVDVIHPIVNKAGIGIGDGTIDDMLKAVEKAYSVGKGIYSMKPLGGGNLIKSYKEAMDFVLNIPYIHSIAVGMQSIEEVVMNVCIFEGKEVPQDVQKSLENKKRHLHIDWWCEGCGKCVERCKQKALKLVDGKAKVEEEKCVLCSYCASVCPVFAIKVS

Cthe0236(SEQ ID NO：11)

MQYRGLGKTGVKVSALGFGAMRLPQININGNTRVDEEKSIEMIHRAFELGVNYIDTAPGYCNGESEVVVGKALKGWRDKIYLSTKNPIENASGDDWRKRLENSLKKLDTDYIDFYHMWGINWETYETKIDVKGGPLEAARKAKEEGLIRHISFSFHDKPENLIKLIDTGNFETVLCQYNLLDRSNEKAIAHAKRKGLGVIIMGPVGGGKLGEPSETIKKLLPKKTVSCAEIALRFVLANPNVDCALSGMSTIEMVEENVRVASNDTPLTKEELEMIRASMEENKRMEDLYCTGCNYCMPCPVGVNIPLNFQLMNYHRVYKITDYARGQYSQIGKVEWYKGKPAHECIECGVCETKCPQKLEIRKQLKETARVLSVK

Cthe0283(SEQ ID NO：12)

MKYRKMGRTGLYISEISLGSWLTYGNSTDKETAVKVIDTAYSLGINYFDTANVYANGRAEVIVGEALKKYPRESYILATKAFWPMGTGPNDKGLSRKHVFEQVHASLKRLNVDYIDIFYCHRYDPETPLEETLRTIDDLLRQGKILYVGVSEWTAAQMAQALHIADRYLLDRIVVNQPQYNMFHRYIEKEIIPFGEKNGISQIVFSPLAQGVLTGKYKPGGNIPRDSRAADPNSNMYIGQFLKEDKLLKVEKLKAVADEMGITLSQLAIAWVLRQPNVTSALIGASKPEQVEENVKASGINLSDEILNKIEAILQ

EC 5.3.1.1.(Cthe0139；SEQ ID NO：13)

MSRKVIAAGNWKMNKTPKEAVEFVQALKGRVADADTEVVVGVPFVCLPGVVEAAKGSNIKVAAQNMHWEEKGAFTGEVSGPMLAELGVDYVIIGHSERRQYFGETDETVNKKVHAAFKYGLKPIICVGESLTQREQGVTAELVRYQVKIALLGLSAEQVKEAVIAYEPIWAIGTGKTATNEQAEEVCGIIRECIKELYGQDVAEAIRIQYGGSVNAANAAELFNMPNIDGGLVGGASLKLDDFEKIAKYNK

EC 1.2.7.1

Cthe2390(SEQ ID NO：14)

MGKVVEIRWHGRGGQGAKTASLLLADAAFNTGKYIQGFPEYGPERMGAPITAYNRISDEKLTIHSNIYEPDYVVVVDDTLLTSVDVTAGLKEDGAIIVNTPKTPDEIRPLLKGYKGKVCTIDARKISIETLGKYFPNTPMLGAVVKVSKIMDEEEFLKDMVESFKHKFANKPEVVEGNIKALERSMQEVKGL

Cthe2391(SEQ ID NO：15)

MSKELRDVKPDVTWKEITSGGVIDSPGNAHLFKTGDWRSMKPVWNEEKCKQCLLCNPVCPDSSIMVSEEGKMTGIDYDHCKGCGICSKVCPFKAIDFVEEV

Cthe2392(SEQ ID NO：16)

MGIRERLSGNEATAIAMRQINPDVVAAFPITPSTEIPQYFSSYVADGLVDTEFVAVESEHSAMSACIGAQAAGARAMTATSANGLAYMWEALYIAASMRLPIVLAAVNRALSGPINIHNDHSDTMGARDSGWIQLYSENNQEAYDNMLMAHRIGEHPDVMLPVMVCQDGFITSHAIENIELVEDEKVKAFVGEYKPTHYLLDRENPISVGPLDLQMHYFEHKRQQAQAMENAKKVILEVAEEFYKLTGRKYGFFEEYKTDDADVAIVVMNSTAGTVKYVIDEYRAKGKKVGLIKPRVFRPFPVDELAQALSKFKAVAVMDKADSFNAAGGPLFTEVTSALFTKGVFGPKVINYKFGLGGRDVKVDDIEVVCEKLLEIASTGKVDSVYNYLGVRE

Cthe2393(SEQ ID NO：17)

MAYNLKEVAKKPERLTGGHRMCAGCGAPIVVRQVLKALKPEDHAVISAATGCLEVSTFIYPYTAWKDSFIHSAFENTGATISGAEAAYKVLKKKGKIEGETKFIAFGGDGGTYDIGLQALSGAMERGHDMVYVCYDNGAYMNTGIQRSSATPKYADTTTSPVGKKIPGKMQPRKDLTEVLVNHRIPYVAQTAPFGNMKDLYEKAEKAIYTPGPAFLNVLAPCPRGWRYNTPDLMELSKLAVETCFWPLYEVIDGKYIINYKPKEKVPVKEFLKLQGRFKHLFKAGNEYMLEEIQKEVDLRWERLLKLAGEA

EC 1.1.1.27(Cthe1053；SEQ ID NO：18)

MNNNKVIKKVTVVGAGFVGSTTAYTLMLSGLISEIVLIDINAKKADGEVMDLNHGMPFVRPVEIYRGDYKDCAGSDIVIITAGANQKEGETRIDLVKRNTEVFKNIINEIVKYNNDCILLVVTNPVDILTYVTYKLSGFPKNKVIGSGTVLDTARFRYLLSEHVKVDARNVHAYIIGEHGDTEVAAWSLANIAGIPMDRYCDECHQCEEQISRNKIYESVKNAAYEIIRNKGATYYAVALAVRRIVEAIVRNENSILTVSSLLEGQYGLSDVCLSVPTIVGVNGIEEILNVPFNDEEIQLLRKSGNTLKEIIKTLDI

EC 1.12.7.2

Cthe425(SEQ ID NO：19)

MKVSICIGSSCHLKGAKQIVEQLQSLVADYNLKEKVELGGAFCMKNCVNGVSVTVDDKLFSVTPENVKSFFETEILKKLED

Cthe426(SEQ ID NO：20)

MTECLQTKKSNCKNCYKCIRHCPVKSLKFTDGQAHIVRDECVLCGECYVVCPQNAKQIRSDVEKAKQLVLKYDVYASIAPSFVAWFHNKSIHDMEQALIKLGFKGADETAKGAYIVKKQYEKMIEEKKSKIIISSCCHTVNTLIQRHYTGAIQYLADVVSPMLAHAQMLKKEHKGAKVVFIGPCISKKDEAEKYKGYVELVLTFDELDEWLKSENITIESNRGSSKEGRTRSFPVSGGIISSMDKDLGYHYMVVDGMENCINALENIERGEIDNCFIEMSACRGSCINGPPARRKSNNIVGAILAVNKNTGAKDFSVPMPEPEKLKKEFRFEGVHKIMPGGTAIEEILKKMGKTSIEHELNCGSCGYDTCRDKAVAVLNGKADLTMCLPYLKEKAESFSDAIIKNTPNGVIVLNEDLEIQQINNSAKRILNLSPSTDLLGSPVSRILDPIDYILALREGKNCYYKRKYFAEYKKYVDETIIYDKEYHVIIIIMRDVTEEEKIKALKNKQSEAAIEIADKVVEKQMRVVQEIALLLGETAAETKIALTKLKETMEDE

Cthe427(SEQ ID NO：21)

MNDLCVDLGYKSLNKFGEQLCGDMIQVVKDDDTTILVLADGLGSGVKANILSTLTSKIISTMIAAHMGIEECVNTIMSTLPVCKVRGIAYSTFTIIKITNNTYAEIIQYDNPLVILLRNGKKYDYPTQTKIISGKKIVESKIRLNCDDVFVVMSDGAIYAGVGQTLNYGWQRENIIEFIESHYDKSLSANALTSLLIDTCNNLYANMPGDDTTIAAIKIRKRQVVNLMFGPPQNPEDVHNMMSLFFAKQGRHIVCGGTTSTLAAKFLGKELETTIDYIDPRIPPIARIEGVDLVTEGVLTISRVLEYAKDYIGKNILYNEWHSKNDGASIIARMLFEEATDINFYVGKAINPAHQNPNLPIGFNIKMQLVEELSKILKQMGKTINLSYF

Cthe428(SEQ ID NO：22)

MSVTMSEAFDYSMIDNILSEHGTSETAIIAILQSIQEEYHYIPKEVFPYLSKKLKVSEARIFSVATFYENFSLEPKGKYIIKVCDGTACHVRKSIPIIERLRKELGLSGTKPTTDDLMFTVETVSCLGACGLAPVITVNDKVYAEMTPDKASELIKQLREGDADA

Cthe429(SEQ ID NO：23)

MLKNREELRKAREMYSRYLKAEKRRVLVCAGTGCVSGGSMEIFERLSELVSKRGMDCQVELKEEPHDNTIGMKKSGCHGFCEMGPLVRIEPEGYLYTKVKLEDCEEIVDRTIVAGEHIERLAYKQNGVVYKKQDEIPFYKKQTRLVLEHCGQIDSTSITEYLATGGYYALEKALFDMTGDEIINEITEANLRGRGGGGFPAGRKWAQVKRQNAKQKYVVCNGDEGDPGAFMDRSIMEGDPHRMIEGMIIAGIACGASEGYIYVRAEYPLAVSRLKRAIEQAKEFGLLGENILGSNFSFNIHINRGAGAFVCGEGSALTASIEGKRGMPRVKPPRTVEQGLFDMPTVLNNVETFANVPLIIKNGADWYKSIGTEKSPGTKAFALTGNIENTGLIEIPMGTTLREVIFDIGGGMRNGADFKAVQIGGPSGGCLSEKDLDLPLDFDSLKKAGAMIGSGGLVVMDSNTCMVEVARFFMNFTQNESCGKCVPCREGTKRMLEILERIVEGNGQDGDIELLLELADTISATALCGLGKAAAFPVVSTIKNFREEYEAHIYDKRCPTGNCQKLKTITIDASLCKGCSKCARSCPVGAITGKVKEPFVIDQSKCIKCGACIETCAFHAILEG

Cthe430(SEQ ID NO：24)

MDNREYMLIDGIPVEINGEKNLLELIRKAGIKLPTFCYHSELSVYGACRMCMVENEWGGLDAACSTPPRAGMSIKTNTERLQKYRKMILELLLANHCRDCTTCNNNGKCKLQDLAMRYNISHIRFPNTASNPDVDDSSLCITRDRSKCILCGDCVRVCNEVQNVGAIDFAYRGSKMTISTVFDKPIFESNCVGCGQCALACPTGAIVVKDDTQKVWKEIYDKNTRVSVQIAPAVRVALGKELGLNDGENAIGKIVAALRRMGFDDIFDTSTGADLTVLEESAELLRRIREGKNDMPLFTSCCPAWVNYCEKFYPELLPHVSTCRSPMQMFASIIKEEYSTSSKRLVHVAVMPCTAKKFEAARKEFKVNGVPNVDYVLTTQELVRMIKESGIVFSELEPEAIDMPFGTYTGAGVIFGVSGGVTEAVLRRVVSDKSPTSFRSLAYTGVRGMNGVKEASVMYGDRKLKVAVVSGLKNAGDLIERIKAGEHYDLVEVMACPGGCINGGGQPFVQSEEREKRGKGLYSADKLCNIKSSEENPLMMTLYKGILKGRVHELLHVDYASKKEAK

Cthe431

SEQ ID NO：25：

MLEIKICVGSSCHLKGSYNVINEFQHLIEEKALHDKIDIKATFCMKQCQKNGVAVEVNNEIFGVLPEAAEEFFKNVILPKV

EC 1.12.7.2

Hyd Cthe3019-24

Cthe3019(SEQ ID NO：26)

MSFFTMTKTLIKSIFHGPYTVRYPLEKKEPFPASRGRIEINIQDCIFCGLCARRCPTGAINVEKPESRWSINRLRCIQCGYCSEVCPKKCLKMNNMYPAPSFENIEDVYQNARVPDNKENNRNIAGAC

Cthe3020(SEQ ID NO：27)

MGKKTVIPFGPQHPVLPEPIHLDLVLEDETVVEAIPSIGYIHRGLEKLVEKKDYQQFVYVAERICGICSFMHGMGYCMSIENIMGVQIPERAEFLRTIWAELSRIHSHMLWLGLLADALGFESLFMHSWRLREQILDIFEETTGGRVIFSVCDIGGVRRDIDSEMLKKINSILDGFEKEFSEITKVFLNDSSVKLRTQGLGVLSREEAFELGAVGPMARASGIDIDMRKSGYAAYGKLKIEPVVETAGDCYARTSVRIREVFQSIDLIRQCISLIPDGEIKVKIVGNPSGEYFTRLEQPRGEVLYYVKANGTKFLERFRVRTPTFANIPALLHTLKGCQLADVPVLILTIDPCISCTER

Cthe3021(SEQ ID NO：28)

MAQQTINTISPNELLAYALRLKNANYRLVAISCTNAENGVEMSYSFDSGSDFTNLRITVAPGDEIESISSIYSYSFLYENEIKELFGVNITGISPDYKDKLYRISVKTPFNMKEGDKNG

Cthe3022(SEQ ID NO：29)

MNFSKKSPWILHYDGSSCNGCDIEVLACLTPLYDIERFGVINTGNPKHADILLITGSINEQNKSVVKQLYEQMADPKVVVAVGICAATGGIFSECYNVSGGVDKIIPVDVYVPGCAARPEAIIDGVVKALGILEERQKYARKKDK

Cthe3023(SEQ ID NO：30)

MSQIIRLVLYIIAIIIVAPLLGGLLTGIDRVITARMQGRKGPSVLQPFYDVLKLFQKESIEVNTMHRFFVYISLIFVIFTTVIMLLGGDILLALFALTLGSIFFVLGGYASNSPYSTIGSERELLQMMAFEPMLLLAAIGLYYGDKSFFIKDIVTARIPSIVYLPGVFLGLLYVLTFKLRKSPFDLSMSHHGHQEIVQGITTEYSGKDLAIIQITHWYETIIALALVYLFFAFRSPFSHVIAILACIIAFLLEIVVDNAFARAKWEFALKSTWIVTGVLASVNLIILSFFR

Cthe3024(SEQ ID NO：31)

MNAILILILFPLLASVTVLSVRKDAIRNIIVRIFAFITGILTLFVVCRYFKDGISLSIENRNIIDMTISLAEVLIAAYIIFTGIKNKKFIVSIFAAVQTALILWFEFTQKHGINVHSDIVFDRLSAVMVLIVGCIGSLILIYTVGYMKWYHIHHEGYKERKSFFFSVIFLFLFAMFGLIFSNNLIWMYFCWELTTLCSYLLIGYTRTPEAVNNSFHALAINLGGGLAFASAMVYIGTNFKTLELSALTAMKLELAVLIPVFLLCIAALTKSAQMPFSSWLLGAMVAPTPSSALLHSATMVKAGVYLLIRLAPLLAGTTIGKVIALLGAVTFLASSIIAISKSDAKKILAYSTISNLGLIVTCAAIGTQESLWAAILLLIFHSISKSLLFLTGGSVEHQIGSRNVEDMDILLQVSRRLSVYMIVGIAGMFLAPFGMLISKWVAMKAFIDSKNILTVIILGYGSATTLFYWTKWMGKLVANANRKDHIKHTFHIDEEIPIFIHAVLVVLSCFTFPLVSRYVLVPYLSGLFGPDVPIPIGTSDVNIMLIMLSMLLILPISFIPIYKSDRRRIVPIYMAGENTGDNESFYGAFDEKRKVELHNWYMKNFFSVKKLTFWSNLLCAVVILVGVVLLIGGITK

Cthe342(SEQ ID NO：32)

MQMVNVTIDNCKIQVPANYTVLEAAKQANIDIPTLCFLKDINEVGACRMCVVEVKGARSLQAACVYPVSE GLEVYTQTPAVREARKVTLELILSNHEKKCLTCVRSENCELQRLAKDLNVKDIRFEGEMSNLPIDDLSPSVVRDPNKCVLCRRCVSMCKNVQTVGAIDVTERGFRTTVSTAFNKPLSEVPCVNCGQCINVCPVGALREKDDIDKVWEALANPELHVVVQTAPAVRVALGEEFGMPIGSRVTGKMVAALSRLGFKKVFDTDTAADLTIMEEGTELINRIKNGGKLPLITSCSPGWIKFCEHNYPEFLDNLSSCKSPHEMFGAVLKSYYAQKNGIDPSKVFVVSIMPCTAKKFEAQRPELSSTGYPDVDVVLTTRELARMIKETGIDFNSLPDKQFDDPMGEASGAGVIFGATGGVMEAAIRTVGELLSGKPADKIEYTEVRGLDGIKEASIELDGFTLKAAVAHGLGNARKLLDKIKAGEADYHFIEIMACPGGCINGGGQPIQPSSVRNWKDIRCERAKAIYEEDESLPIRKSHENPKIKMLYEEFFGEPGSHKAHELLHTHYEKRENYPVK

Cthe430(SEQ ID NO：33)

MDNREYMLIDGIPVEINGEKNLLELIRKAGIKLPTFCYHSELSVYGACRMCMVENEWGGLDAACSTPPRAGMSIKTNTERLQKYRKMILELLLANHCRDCTTCNNNGKCKLQDLAMRYNISHIRFPNTASNPDVDDSSLCITRDRSKCILCGDCVRVCNEVQNVGAIDFAYRGSKMTISTVFDKPIFESNCVGCGQCALACPTGAIVVKDDTQKVWKEIYDKNTRVSVQIAPAVRVALGKELGLNDGENAIGKIVAALRRMGFDDIFDTSTGADLTVLEESAELLRRIREGKNDMPLFTSCCPAWVNYCEKFYPELLPHVSTCRSPMQMFASIIKEEYSTSSKRLVHVAVMPCTAKKFEAARKEFKVNGVPNVDYVLTTQELVRMIKESGIVFSELEPEAIDMPFGTYTGAGVIFGVSGGVTEAVLRRVVSDKSPTSFRSLAYTGVRGMNGVKEASVMYGDRKLKVAVVSGLKNAGDLIERIKAGEHYDLVEVMACPGGCINGGGQPFVQSEEREKRGKGLYSADKLCNIKSSEENPLMMTLYKGILKGRVHELLHVDYASKKEAK

Cthe3003(SEQ ID NO：34)

MDSFLMKGYIKEANIDYSCSRGSMEDLPKWEFREIPKVPRAVMPSLSLEERKNNFNEVELGLSEEVARKEARRCLKCGCSARFTCDLRKEASNHGIVYEEPIHDRPYIPKVDDHPFIVRDHNKCISCGRCIAACAEIEGPGVLTFYMKNGRQLVGTKSGLPLRDTDCVSCGQCVTACPCAALDYRRERGKVVRAINDPKKTVVGFVAPAVRSLISNTFGVSYEEASPFMAGLLKKLGFDKVFDFTFAADLTIVEETTEFLSRIQNKGVMPQFTSCCPGWINFVEKRYPEIIPHLSTCKSPQMMMGATVKNHYAKLMGINKEDLFVVSIVPCLAKKYEAARPEFIHDGIRDVDAVLTTTEMLEMMELADIKPSEVVPQEFDEPYKQVSGAGILFGASGGVAEAALRMAVEKLTGKVLTDHLEFEEIRGFEGVKESTIDVNGTKVRVAVVSGLKNAEPIIEKILNGVDVGYDLIEVMACPGGCICGAGHPVPEKIDSLEKRQQVLVNIDKVSKYRKSQENPDILRLYNEFYGEPNSPLAHELLHTHYTPKHGDSTCSPERKKGTAAFDVQEFTICMCESCMEKGAENLYNDLSSKIRLFKMDPFVQIKRIRLKETHPGKGVYIALNGKQIEEPMLSGNIPDESESE

Cthe3004(SEQ ID NO：35)

MKTLENHNRIKVTVNGREIEVYDNLTILQALLQEDIHIPHLCYDIRLERSNGNCGLCVVTLISPDGERDVKACQTPIKEGMVICTNTPKLENYRKIRLEQLLSDHNADCVAPCVMTCPANIDIQSYLRHVGNGDFEAAIRVIKERNPFPIVCGRVCPHTCESQCRRNLVDAPVAINYVKRFAADWDMARPEPWTPEKKPPTGKKIAIVGAGPSGLSAAYYSAIKGHDVTVFERQPHPGGMMRYGIPEYRLPKAILDKEIEMIKKLGVKIMTEKALGIHIRLEDLSKDFDAVYLAIGSWQATPMHIEGEKLDGVWAGINYLEQVAKNVDIPLGDNVVVIGGGNTAIDCARTALRKGAKSVKLVYRCTREEMPAAPYEVEEAIHEGVEMIFLMAPTKIIVKDGKKKLVCIRMQLGEPDRSGRRRPVPIEGSEVEIDADTIIGAIGQSTNTQFLYNDLPVKLNKWGDIEVNGKTLQTSEYNIFAGGDCVTGPATVI

Cthe0349(SEQ ID NO：36)

MPLVTSTEMFKKAYE GKYAIGAFNVNNMEIIQGITEAAKEVNAPLILQVSAGARKYANHTYLVKLVEAAVEETGLPICLHLDHGDSFELCKSCIDGGFTSVMIDGSHLPFEENIKLTKQVVDYAHSKGVVVEGELGRLAGIEDDVNVSEADAAFTDPDQAEEFVKRTGVDSLAIAIGTSHGAYKFKGEAKLRFDILEEIEKRLPGFPIVLHGASSVIPEYVDMINKYGGDMPGAKGVPEDMLRKAASMAVCKINIDSDLRLAMTATIRKYFAENPSHFDPRQYLGPARNAIKELVKHKIVNVLGCDGKA

Cthe1019(SEQ ID NO：37)

MDIQLKKSGIGVKEKKSKNHLLYSIKQNLFAYAMLIPTFVCMMCIHFIPMLQGIYLSLLDLNQLTMTKFLNAPFIGLKNYYEILFDEKSLIRRGFWFALRNTAIYTVVVTFATFALGIILAMLVNREFKGRGIVRTALLMPWVVPSYVVGMTWGFLWRQDSGLINIILCDILHILPEKPYWLVGSNQIWAIIIPTIWRGLPLSMILMLAGLQSISPDYYEAADIDGANGWQKFWHITLPLLKPILAINVMFSLISNIYSFNIVSMMFGNGAGIPGEWGDLLMTYIQRNTFQMWRFGPGAAALMIVMFFVLGIVALWYTLFKDDLVVK

Cthe0390(SEQ ID NO：38)

VDKFTKLDLNSITSNNRMNIFNCILEAKEINRAVIAKKVGLSIPAVMSITDDLIQKGIIYVIGKGKSSGGKRPELLAVVPDRFFFVGVDVGRTSVRVVVMNNCRDVVYKVSKPTESVEPDELINQITEMTMESINESKFPLDRVVGIGVAMPGLIERGTGRVIFSPNFGWNNIALQDELKKHLPFNVLVENANRALVIGEIKNTQPNPTSCIVGVNLGYGIGSAIVLPNGLYYGVSGTSGEIGHIIVENHGSYCSCGNYGCIESIASGEAIAREARIAIANKIQSSVFEKCEGDLKKIDAKMVFDAAKEGDHLAQSIVEKAADYIGKGLAITINMLDPEQIILCGGLTLSGDFFIDMIKKAVSKYQMRYAGGNVKIVVGKSGLYATAIGGAWIVANNIDFLSSN

Cthe2938(SEQ ID NO：39)

MYYIGIDLGGTNIAVGLVNEEGKILHKDSVPTLRERPYQEIIKDMAMLTLKVIKDADVSIDQVKSIGVGSPGTPNCKDGILIYNNNLNFRNVPIRSEIQKYIDLPVYLDNDANCAALAESVAGAAKGANTSVTITLGTGIGGGVVIDGKIYSGFNYAGGELGHTVLMMDGEPCTCGRKGCWEAYASATALIRQARKAAEANPDSLINKLVGGDLSKIDAKIPFDAAKQGDKTGEMVVQQYIRYIAEGLINMINIFMPEVLVIGGGVCKEGEYLLKPLRELIKQGVYSKEDIPQTELRTAQMGNDAGIIGAAMLGKEC

Cthe0217(SEQ ID NO：40)

MERIKFDYSKALPFVSEREVAYFENFVRSAHDMLHNKTGAGNDFVGWVDLPVNYDREEFARIKAAAEKIKSDSDALVVIGIGGSYLGARAAIEMLSHSFHNLMPKSKRNAPEIYFVGNNISSTYIADLLEVIEGKEISVNVISKSGTTTEPAIAFRIFKEYMENKYGKDGASKRIYATTDKEKGALRKLATEEGYETFVVPDDIGGRFSVLTAVGLLPIAVAGIDIDSMMKGAADARELYSNPNLMENDCYKYAAVRNALYRKNKTIEIMVNYEPSLHYFTEWWKQLYGESEGKDQKGIFPAGVDFTTDLHSMGQYIQDGLRNIFETVIRVEKPRKNIVIKEEKDNLDGLNFIAGKDVDYVNKKAMEGTVLAHTDGGVPNLVVTVPELSAYYFGNMVYFFEKACGISGYLLGVNPFDQPGVEAYKKNMFALLGKPG YEEQRKKLEERL

Cthe1261(SEQ ID NO：41)

MSSVRTIGVLTSGGDAPGMNAAIRSVVRTGLYYGFKVLGIRKGFNGLINGDIEELTARSVGDIIHRGGTILQTARSPQFKTEEGLKKAMSMAKVFGIDALVVIGGDGSYRGARDISKLGLNVIGIPGTIDNDIGCTDYTIGFDTAMNTVQDAIDKIRDTAYSHERCSVLEVMGRHAGYIAVNVSISGGAEAVVLPEKPFDMDTDVIKPIIEGRNRGKKHYLVIVAEGGEGKAIEIAKEITEKTGIEARATILGHIQRGGSPTVYDRVMASQMGAKAVEVLMENKRNRVIVFKDNQIGDMDLEEALQVKKTISEDLIQLSKILAL

解糖热厌氧杆菌蛋白

反应6b，EC or0411(SEQ ID NO：42)

MSYIPNENRYEKMIYRRCGRSGIMLPAISLGLWHNFGGYDVFENMREMVKKAFDLGITHFDLANNYGPPPGSAEENFGKILRTDLRGYRDELLISTKAGYTMWPGPYGDWGSRKYLLSSLDQSLKRMGIDYVDIFYSHRRDPNTPLEETMSALAQAVRQGKALYVGISNYNAEDTKKAAEILRQLGTPLLINQPSYSMFNRWIEDGLTDVLEEEGVGSIAFSPLAQGLLTDKYLNGVPDDSRAVRKNTSLRGNLTEENINKVRELKKIADKRGQSIAQMALAWDLRKVTSVIIGASRVSQIEENVKALDNLEFSHEELKOIDEILSK

EC4.2.3.4 or2316(SEQ ID NO：43)

LNIALIAHDMKKSIMVDFAIAYKEILKKCNIYATGATGQLVEEATGIKVNKFLPGPMGGDQQIGAMIAENNMDLVIFLRDPLTAQPHEPDILALLRVCDVHSIPLATNLATAEVLIKGLDAGFLEWRDAVK

EC5.3.1.1 or2687(SEQ ID NO：44)

LRRPIIAGNWKMYMTPSEAVNLVNELKPLVSGAEAEVVVIPPFVDLVDVKKAIDASNIKLGAQNMHWEEKGAFTGEVSPIMLKEIGVEYVVIGHSERRQYFAETDETVNKKVKSALSHGLKPIVCVGESLSQREAGEAFNVVREQTKKALDGIKSEDVLNVVIAYEPIWAIGTGKTATSKDANDVIKVIRETIADIYSIDIANEVRIQYGGSVKPDNAKELMSESDIDGALVGGASLKAQDFAKIVNY

反应7(gldA)or104(SEQ ID NO：45)

MYMKTNFTYFMPTEIFGPGTLGKLATVKLPGKKALLVIGSGNSMRRHGYLDRVVNYLKQNGVDYVVYDKILPNPIAEHVAEGAKVAKDNGCDFVIGLGGGSTIDSSKAIAVMAKNPGDYWDYVSGGSGKGMEVKNGALPIVAIPTTAGTGTESDPWAVVTKTETNEKIGFGCKYTYPTLSIVDPELMVSIPPKFTAYQGMDAFFHSVEGYLATVNQPGSDVLALQSISLITENLPKAVADGNNMEARTALAWASTAAGIVESLSSCISHHSLEHALSAYHPEIPHGAGLIMLSVSYFSFMASKAPERFVDIAKAMGEEIVGNTVEEQAMCFINGLKKLIRNIGMEDLSLSSFGVTEDEATKLAKNAMDTMGGLFNVDPYKLSLDEVVSIYKNCF

EC2.3.1.54(SEQ ID NO：46)

VDDKKVFDHLFILTDDTGMMQHSVGSVPDPKYGYTTDDNGRALIACAMMYEKYKDDAYINLIKKYLSFLMYAQEDDGRFRNFMSFDRKFIDEDFSEDCFGRCMWALGYLINSNIDERVKLPAYKMIEKSLLLVDTLNYIRGKAYTLIGLYYIYNSFKNLDKDFVRKKMDKLAHDIVEEYEKNSSEDWQWFEDVVSYDNGVIPLSLLKYFSIAKDEEVLDIALKTIDFLDSVCFKNGYFKAVGCKGWYRKGKDIAEYDEQPVEAYTMALMYIEAYKLTGDEKYKKRAIDCDKWFYGKNSKGLSLYDEDSGGCSDGITEDGVNSNEGAESLISIMISHCAIDQLK

EC2.3.1.8(SEQ ID NO：47)

MKTSELLAMVVEKGASDLHITVGVPPVLRINGQLIKLNLPQLTPQDTEEITKDLLSSDELKKLEDMGDIDLSYSVKGLGRFRINAYKQRGTYSLAIRSVALRIPTIDELGLPEVIKELALKTRGLIIVTGPTGSGKSTTLASMIDLINEERNCHILTLEDPIEYLHKHKKSIVNQREIGHDAASYASALRAALREDPDVILVGEMRDLETIQIAITAAETGHLVLSTLHTIGSAKTIDRIIDVFPPHQQQQIKVQLSNVLEGIVSQQLLPKIDNSGRVVAVEVMIATPAIRNLIREGKSFQIQSMVQTGNKFGMVTMDMWISQLLKRNLISMDDALTYCVDRENFSRLVV

EC 2.7.2.1(SEQ ID NO：48)

MIKKKLGDLLVEVGLLDESQLNNAIKIQKKTGEKLGKILVKEGYLTEEQIIEALEFQLGIPHIDMKKVFIDANVAKLIPESMAKRHVAIPIKKENNSIFVAMADPLNIFAIDDIKLVTKLDVKPLIASEDGILKAIDRVFGKEEAERAVQDFKKELSHDSAEDDGNLLRDISEDEINNAPAVRLVNSIIEQAVKNRASDVHIEPTENDLRIRFRIDGELHEAMRVFKSTQGPVITRIKIMANMNIAERRIPQDGKIEMNAGGKNIDIRVSSLPTIYGEKLVLRILDKSGYIITKDKLGLGNDDLKLFDNLLKHPNGIILLTGPTGSGKTTTLYAMLNELNKPDKNIITVEDPVEYTLEGLNQVQVNEKAGLTFASALRSILRQDPDIIMIGEIRDRETAEIAIRSSITGHLVLSTLHTNDSAGAITRLIDMGIEPYLVSSSVVGVIAQRLARKICDNCKIEYDASKREKIILGIDADESLKLYRSKGCAVCNKTGYRGRVPIYEIMMMTPKIKELTNEKAPADVILNEAVSNGMSTLKESAKKLVLSGVTTVDEMLRLTYDDAY

EC 1.2.7.1 or0047(SEQ ID NO：49)

MSKVMKTMDGNTAAAHVAYAFTEVAAIYPITPSSPMAEHVDEWSAHGRKNLFGQEVKVIEMQSEAGAAGAVHGSLAAGALTTTFTASQGLLLMIPNMYKIAGELLPGVFHVSARALASHALSIFGDHQDVMACRQTGFALLASGSVQEVMDLGSVAHLAAIKGRVPFLHFFDGFRTSHEYQKIEVMDYEDLRKLLDMDAVREFKKRALNPEHPVTRGTAQNPDIYFQEREASNRYYNAVPEIVEEYMKEISKITGREYKLFNYYGAPDAERIVIAMGSVTETIEETIDYLLKKGEKVGVVKVHLYRPFSFKHFMDAIPKTVKKIAVLDRTKEAGAFGEPLYEDVRAAFYDSEMKPIIVGGRYGLGSKDTTPAQIVAVFDNLKSDTPKNNFTIGIVDDVTYTSLPVGEEIETTAEGTISCKFWGFGSDGTVGANKSAIQIIGDNTDMYAQAYFSYDSKKSGGVTISHLRFGKKPIRSTYLINNADFVACHKQAYVYNYDVLAGLKKGGTFLLNCTWKPEELDEKLPASMKRYIAKNNINFYIINAVDIAKELGLGARINMIMQSAFFKLANIIPIDEAVKHLKDAIVKSYGHKGEKIVNMNYAAVDRGIDALVKVDVPASWANAEDEAKVERNVPDFIKNIADVMNRQEGDKLPVSAFVGMEDGTFPMGTAAYEKRGIAVDVPEWQIDNCIQCNQCAYVCPHAAIRPFLLNEEEVKNAPEGFTSKKAIGKGLEGLNFRIQVSVLDCTGCGVCANTCPSKEKSLIMKPLETQLDQAKNWEYAMSLSYKENPLGTDTVKGSQFEKPLLEFSGACAGCGETPYARLVTQLFGDRMLIANATGCSSIWGGSAPSTPYTVNKDGHGPAWANSLFEDNAEFGFGMALAVKQQREKLADIVKEALELDLTQDLKNALKLWLDNFNSSEITKKTANIIVSLIQDYKTDDSKVKELLNEILDRKEYLVKKSQWIFGGDGWAYDIGFGGLDHVLASGEDVNVLVFDTEVYSNTGGQSSKATPVGAIAQFAAAGKGIGKKDLGRIAMSYGYVYVAQIAMGANQAQTIKALKEAESYPGPSLIIAYAPCINHGIKLGMGCSQIEEKKAVEAGYWHLYRYNPMLKAEGKNPFILDSKAPTASYKEFIMGEVRYSSLAKTFPERAEALFEKAEELAKEKYETYKKLAEQN

EC 1.1.1.2

Or180(SEQ ID NO：50)

MSKVAIIGSGFVGATSAFTLALSGTVTDIVLVDLNKDKAIGDALDISHGIPLIQPVNVYAGDYKDVKGADVIVVTAGAAQKPGETRLDLVKKNTAIFKSMIPELLKYNDKAIYLIVTNPVDILTYVTYKISGLPWGRVFGSGTVLDSSRFRYLLSKHCNIDPRNVHGRIIGEHGDTEFAAWSITNISGISFNEYCSICGRVCNTNFRKEVEEEVVNAAYKIIDKKGATYYAVAVAVRRIVECILRDENSILTVSSPLNGQYGVKDVSLSLPSIVGRNGVARILDLPLSDEEVEKFRHSASVMADVIKQLDI

EC 2.3.1.54(SEQ ID NO：51)

MINEWRGFQEGKWQKTIDVQDFIQKNYTLYEGDDSFLEGPTEKTIKLWNKVLELMKEELKKGVLDIDTKTVSSITSHDAGYIDKDLEEIVGLQTDKPLKRAIMPYGGIRMVKKACEAYGYKVDPKVEEIFTKYRKTHNDGVFDAYTPEIRAARHAGIITGLPDAYGRGRIIGDYRRVALYGIDRLIEEKEKEKLELDYDEFDEATIRLREELTEQIKALNEMKEMALKYGYDISKPAKNAKEAVQWTYFAFLAAIKEQNGAAMSLGRVSTFLDIYIERDLKEGTLTEKQAQELMDHFVMKLRMVRFLRTPDYNELFSGDPVWVTESIGGVGVDGRPLVTKNSFRILNTLYNLGPAPEPNLTVLWSKNLPENFKRFCAKVSIDTSSIQYENDDLMRPIYNDDYSIACCVSAMKTGEQMQFFGARANLAKALLYAINGGIDERYKTQVAPKFNPITSEYLDYDEVMAAYDNMLEWLAKVYVKAMNIIHYMHDKYAYERSLMALHDRDIVRTMAFGIAGLSVAADSLSAIKYAKVKAIRDENGIAIDYEVEGDFPKFGNDDDRVDSIAVDIVERFMNKLKKHKTYRNSIPTLSVLTITSNVVYGKKTGATPDGRKAGEPFAPGANPMHGRDTKGAIASMNSSKIPYDSSLDGISYTFTIVPNALGKDDEDKINNLVGLLDGYAFNAGHHININVLNRDMLLDAMEHPEKYPQLTIRVSGYAVNFNKLTREQQLEVISRTFHESM

EC1.2.7.1(下列四种蛋白)

Or1545(SEQ ID NO：52)

MVITVCVGSSCHLKGSYDVINKLKEMIKNYGIEDKVELKADFCMGNCLRAVSVKIDGGACLSIKPNSVERFFKEHVLGELK

Or1546(SEQ ID NO：53)

MSVINFKEANCRNCYKCIRYCPVKAIKVNDEQAEIIEYRCIACGRCLNICPQNAKTVRSDVERVQSFLNKGEKVAFTVAPSYPALVGHDGALNFLKALKSLGAEMIVETSVGAMLISKEYERYYNDLKYDNLITTSCPSVNYLVEKYYPDLIKCLVPVVSPMVAVGRAIKNIHGEGVKVVFIGPCLAKKAEMSDFSCEGAIDAVLTFEEVMNLFNTNKIGVECTKENLEDVDSESRFKLYPIEGKTMDCMDVDLNLRKFISVSSIENVKDILNDLRAGNLHGYWIEANACDGGCINGPAFGKLESGIAKRKEEVISYSRMKERFSGDFSGITDFSLDLSRKFIDLSDRWKMPSEMEIKEILSKIGKFSVEDELNCGACGYDTCREKAIAVFNGMAEPYMCLPYMRGRAETLSNIIISSTPNAIIAVNNEYEIQDMNRAFEKMFLVNSAMVKGEDLSLIFDISDFVEVIENKKSIFNKKVSFKNYGIIALESIYYLEEYKIAIGIFTDITKMEKQKESFSKLKRENYQLAQQVIDRQMKVAQEIASLLGETTAETKVILTKMKDMLLNQGDDE

or1547(SEQ ID NO：54)

MSHYIDIAHASLNKYDEELCGDSVQIIRKKDYAMAVMADGLGSGVKANILSTLTTRIVSKMLDMGSELRDVVETVAETLPICKERNIAYSTFTVVSIYGDNAHLVEYDNPSVFYFKNGVHKKVDRKCVEIGDKKIFE SSFKLDLNDALIVVSDGVIHAGVGGILNLGWQWDNVKQYLSKVLEVYSDASDICSQLITTCNNLYKNRPGDDTTAIVIKVNESKKVTVMVGPPILKNMDEWVVKKLMKSEGLKVVCGGTAAKIVSRILNKDVITSTEYIDPDIPPYAHIDGIDLVTE GVLTLRKTVEIFKEYMNDKDSNLLRFSKKDAATRLFKILNYATDVNFLVGQAVNSAHQNPDFPSDLRIKVRIVEELISLLERLNKNVEVNYF

or1548(SEQ ID NO：55)

LFKFNTDVQMLKYEVLYNVAKLTLEDRLEDEYDEIPYEIIPGTKPRFRCCVYKERAIIEQRTKVAMGKNLKRTMKHAVDGEEPIIQVLDIACEECPIKRYRVTEACRGCITHRCTEVCPKGAITIINKKANIDYDKCIECGRCKDACPYNAISDNLRPCIRSCSAKAITMDEELKAAINYEKCTSCGACTLACPFGAITDKSYIVDIIRAIKSGKKVYALVAPAIASQFKDVTVGQIKSALKEFGFVDVIEVALGADFVAMEEAKEFSHKIKDIKVMTSSCCPAFVAHIKKSYPELSQNISTTVSPMTAISKYIKKHDPMAVTVFIGPCTAKKSEVMRDDVKGITDFAMTFEEMVAVLDAAKIDMKEQQDVEVDDATLFGRKFARSGGVLEAVVEAVKEIGADVEVNPVVCNGLDECNKTLKIMKAGKLPNNFIEGMACIGGCIGGAGVINNNVNQAKLAVNKFGDSSYHKSIKDRISQFDTDDVDFHVDSGEDESSETSFKEA

EC 1.2.1.43

or2328(SEQ ID NO：56)

MDKVRITIDGIPAEVPANYTVLQAAKYAKIEIPTLCYLEEINEIGACRLCVVEIKGVRNLQASCVYPVSDGMEIYTNTPRVREARRSNLELILSAHDRSCLTCVRSGNCELQDLSRKSGIDEIRFMGENIKYQKDESSPSIVRDPNKCVLCRRCVATCNNVQNVFAIGMVNRGFKTIVAPSFGRGLNESPCISCGQCIEACPVGAIYEKDHTKIVYDALLDEKKYVVVQTAPAVRVALGEEFGMPYGSIVTGKMVSALKRLGFDKVFDTDFAADLTIIEEGNELLKRLNEGGKLPMITSCSPGWINYCERYYPEFIDNLSTCKSPHMMMGAIIKSYFAEKEGIDPKDIFVVSIMPCTAKKYEIDRPQMIVDGMKDVDAVLTTRELARMIKQSGIDFVNLPDSEYDNPLGESSGAGVIFGATGGVMEAALRTVADIVEGKDIENFEYEEVRGLE GIKEAKIDIGGKEIKIAVANGTGNAKKLLDKIKNGEAEYHFIEVMGCPGGCIMGGGQPIHNPNEKDLVRKSRLKAIYEADKDLPIRKSHKNPMITKLYEEFLISPLGEKSHHLLHTTYSKKDLYPMND

EC 4.1.2.13

or0260(SEQ ID NO：57)

LNDILVKARNNKYAIGGFNFNFYDDALGIISAAYELKSPIILMASE GCVKFLGVKHIVNFVNQLKDEYNIPIILHLDHGKDIEIIKNCIDNKFDSIMYDGSLLNFEENIKNTKFIADLCHDKGMTIEGELGRISGAEENIENSEDVFTDPDSVAEFTERSDVDSLAVAIGNAHGLYKGRPRLDFERLSKINKISKVPLVLHGGTGIPYEDIQKAIQLGISKVNVGTEIKIAYIKSIKKHLETINDNDIRHLVSMVQNDIKELVKQYLDIFGTANKYSQLQSM

or0330(SEQ ID NO：58)

MLVTGIELLKKANEEGYAVGAFNTSNLEITQAIVEAAEEMRSPAIIQVSEGGLKYAGIETISAIVRTLATKASVPIALHLDHGTDFNNVMKCLRNGWTSVMMDASKLPLEKNIEVTKNVVTIAHGMGVSVEAEIGKIGGTEDNVTVDEREASMTDPDEAFKFAKETGVDYLAISIGTAHGPYKGEPKLDFDRLVKIKEMLKMPIVLHGASGVPEADIRKAVSLGVNKINIDTDIRQAFAARLRELLKNDEEVYDPRKILGPCKEAMKEVIKNKM RMFGSEGRA

or0272(SEQ ID NO：59)

MITGDQLLIKQINKSIVLNTIRKKGLISRADLANITGLNKSTVSSLVDELIKEGFVEEEGPGESKGGRKPIMLMINSLAGCVIGVDLDVNYILVILTDILANILWQKRINLKLGESKEDIISKMLELIDEAIKNSPNTVKGILGIGIGVPGITDYKRGVVLKAPNLNWENVELKKMVEERFNLKVYIDNEANTGAIGEKWFGGGRNAKNFVYVSAGIGIGTGIIINNELYRGSNGLAGEMGHMTIDINDHMCSCGNRGCWENYASEKSLFRYIKERLEAGQEDDFIDSENIDSLDINDIAGYAELGSKLAIDAINEISKNLSVGIVNIVNTFNPDLVLIGNTLSAIGDMLIDAVKEYVREKCLVSRYNDIAIEISKLGMLERAIGAVTLVISEVFSYPGL

or1389(SEQ ID NO：60)

MTNVLNFDYSNALNFVNEHEISYLEKQALLSLDMVLNKTAQGSDFLGWVDLPKDYDKEEFARIKKAAEKIKSDSDALVVIGIGGSYLGARAAIEMLTHSFYNVLPQSVRKAPEIYFAGNSISSTYLQDLLEILEGKDVSINVISKSGTTTEPAIAFRVFRDFLEKKYGKEEAKSRIYVTTDRQKGALKKLADEEGYETFVIPDDVGGRYSVLTAVGLLPIAAAGIDIDEMMKGAYDASIVFKKPDIKENLSMQYAVLRNALYRKGKSVEILVNYEPRLHYFSEWWKQLYGESEGKDHKGIYPASVDFSTDLHSMGQFIQDGSRIMFETVINVEKPLKEITINEDKDNVDGLNFLTGKTVDLVNKKAFEGTVLAHNDGGVPNLIVNVPEISAYNFGYLVYFFEMACGISGYLNGVNPFDQPGVEAYKKNMFALLGKPGYEKEKEELEKRLKR

or2875(SEQ ID NO：61)

MYNIQLDSPNLGDKEKDYLVKCIESGYVSTVGPFVPEFERRFAEFLNVNHCVSVQSGTAALYMALYELGIKDGDEVIVPAITFVATVNPIVYCGATPVFVDVDKDTWNIDPKEIEKAITPKTKAIIPVHLYGNPCDMDKIMEIAKENNIYVIEDATESLGALYKGRMTGTIGHIGCFSFNGNKVITTGGGGMVASNNEDWVSHIRFLVNQARDMTQGYFHTEIGFNYRMTNLEASLGIAQLERLAGFLEKKRMYFEIYKKIFNGIEEISLQTEYEGAKSSDWLSSVKIDCKKVGMTIHQIQDELKRRGIPTRRIFNPIVDLPPYKKYKKGSYSNSYEIYENGLNLPSSTLNTYEDVKYVAKTLLDILSIKKR

解糖热厌氧杆菌pdu基因or228-or200

or228

SEQ ID NO：62：

MLAIERRKRIMRLIQENQSVLVPELSKLFNVTEETIRRDLEKLEAEGLLKRTYGGAVINENSSADIPLNIREITNIESKQAISMKVAEYIEDGDTLLLDSSSTVLQVAKQLKFKKKLTVITNSEKIILELANAKDCKVISTGGVLKQNSMSLIGNFAEDMIKNFCVDKAIISSKGFDMTNGITESNEMEAEIKKAMANSAEKVFLLLDHNKFDKSSFVKMFDLDKIDYLFTDRKLSLEWEEFLKKHNIDLIYC

SEQ ID NO：63：

ATGCTTGCGATAGAACGAAGGAAGAGGATAATGAGGCTTATACAGGAAAATCAAAGCGTTTGGTGCCTGAGTTAAGTAAATTGTTTAATGTGACAGAGGAAACTATAAGGAGAGATTTAGAGAAACTTGAAGCAGAAGGGCTTTTAAAGAGGACTTATGGTGGTGCTGTTATAAATGAAAATTCAAGTGCTGATATCCCCTTAAATATAAGGGAAATAACGAATATAGAAAGCAAACAGGCCATAAGTATGAAGGTTGCCGAATACATTGAAGATGGTGATACACTTTTGCTTGATTCAAGCTCTACAGTTCTTCAAGTAGCAAAGCAATTAAAATTCAAAAAGAAGCTTACAGTCATAACAAATTCGGAAAAGATAATATTAGAATTAGCAAATGCGAAAGATTGCAAAGTCATTTCTACAGGAGGAGTATTGAAGCAAAATTCTATGTCGCTAATTGGAAATTTCGCGGAAGATATGATAAAAAATTTCTGTGTAGATAAAGCCATAATATCATCAAAAGGTTTTGACATGACAAATGGCATTACAGAGTCAAACGAAATGGAAGCTGAAATAAAAAAAGCCATGGCCAACTCGGCAGAAAAAGTGTTTTTACTTCTTGATCACAACAAATTTGACAAGTCATCGTTCGTCAAGATGTTTGACTTAGATAAAATCGATTATCTATTTACCGATAGAAAGCTGTCTTTAGAATGGGAAGAATTCTTGAAAAAACACAATATTGATTTAATCTATTGTTAG

or227

SEQ ID NO：64：

VYSEYEVKKQICEIGKRIYMNGFVAANDGNITVRIGENEIITTPTGVSKGFMTPDMLLNINLNGEVLKSSGDYKPSTEIKMHLRVYRERPDVKSVIHAHPPFGTGFAIVGIPLTKPIMPEAVISLGCVPIAEYGTPSTEELPDAVSKYLQNYDALLLENHGALTYGPDLISAYYKMESLEFYAKLTFISTLLGGPKELSDSQVEKLYEIRRKFGLKGRHPGDLCSTLGCSTNSAKSNDDDISELVNVITKKVLEQLKYN

SEQ ID NO：65：

GTGTATTCTGAATATGAGGTAAAAAAACAGATCTGCGAAATAGGAAAGAGAATCTACATGAATGGGTTTGTGGCAGCGAATGACGGCAATATCACCGTTAGGATTGGTGAAAATGAAATAATAACGACGCCTACCGGTGTCAGCAAAGGTTTCATGACTCCAGACATGCTATTAAATATTAATTTAAACGGTGAAGTATTAAAATCTTCAGGCGACTACAAACCGTCCACAGAAATAAAGATGCATCTTAGAGTCTATAGAGAAAGGCCAGATGTCAAATCAGTCATACATGCACATCCACCATTTGGCACAGGTTTTGCTATTGTAGGGATCCCGCTTACAAAGCCAATAATGCCAGAAGCAGTTATATCTTTAGGCTGTGTGCCGATAGCCGAATACGGGACGCCTTCTACAGAAGAGCTGCCAGATGCCGTCTCTAAATATTTGCAAAATTACGATGCGCTTTTATTAGAAAATCATGGTGCGTTGACATACGGTCCTGATTTAATTAGCGCATACTACAAGATGGAATCACTTGAATTTTACGCAAAATTGACATTTATTTCTACACTTCTCGGAGGTCCAAAAGAATTATCAGATAGCCAAGTAGAAAAGCTTTATGAAATTAGGAGAAAATTCGGTTTAAAAGGAAGACATCCAGGCGATTTGTGCAGTACATTAGGATGCAGCACAAATTCTGCAAAATCGAATGATGATGACATTTCTGAACTTGTGAATGTTATCACTAAGAAAGTATTAGAACAATTGAAATACAATTAA

or226

SEQ ID NO：66：

MKHSKRFEVLGKRPVNQDGFINEWPEKGFIAMCSPNDPKPSIKIENDKIVEMDGKRREDFDFIDLFIADHAINIYQAEKSMKMNSLDIAKMLVDINVERKTIIKVVSGLTPAKIMEVVNHLNVVEMMMAMQKMRARKIPANQSHITNLKDNPVQIAADAAECALRGFREEETTVGVTKYAPFNAIALLIGSQALKRGVLTQCAVEEATELELGMRGFTTYAETISVYGTESVFIDGDDTPYSKAFLASAYASRGLKMRFTSGTGSEVLMGNAEGKSMLYLEIRCIMVTKGAGVQGLQNGAISCIGITSSVPSGIRAVLAENLIASMLDLEVASGNDQTFTHSDIRRTARTMMQFLPGTDFIFSGYSGTPNYDNMFAGSNFDAEDFDDYNVLQRDLMVDGGLRPVKEEDVVEVRRKAAKALQDVFRELNLGVVTDEEVEAAAYAHGSKDMPERDVLSDLESIDEMMKRGITGIDIVKALYRSGHEDIAENILNMLKQRISGDYLQTSAILDEDFNVISAINCPNDYLGPGTGYRIDKDRWEEIKNIPYTINPDNL

SEQ ID NO：67：

ATGAAACATTCTAAGCGATTTGAGGTTCTCGGCAAAAGACCTGTAAATCAGGATGGATTTATAAATGAATGGCCAGAAAAAGGCTTCATAGCAATGTGTAGTCCCAATGATCCTAAGCCATCAATAAAGATTGAAAACGACAAGATCGTTGAGATGGATGGGAAGAGAAGAGAAGACTTTGATTTTATAGATTTATTCATAGCTGATCACGCTATAAATATTTATCAGGCTGAGAAATCCATGAAAATGAACTCGCTTGATATAGCCAAAATGCTTGTAGATATAAATGTAGAGAGAAAGACTATAATAAAAGTAGTTTCGGGACTTACACCTGCCAAAATAATGGAAGTTGTAAATCATCTTAATGTCGTTGAAATGATGATGGCTATGCAGAAAATGCGAGCAAGAAAGATTCCGGCTAATCAATCACATATTACAAATCTTAAAGATAATCCTGTGCAGATTGCAGCGGATGCTGCCGAATGTGCTTTAAGAGGTTTTAGGGAAGAAGAGACCACCGTAGGAGTGACAAAATATGCTCCGTTTAATGCAATAGCGTTATTGATAGGGTCTCAGGCATTAAAAAGAGGCGTGCTTACTCAATGTGCTGTTGAGGAGGCGACGGAACTTGAATTAGGCATGAGGGGATTTACCACATACGCTGAGACTATATCTGTTTATGGAACTGAAAGTGTTTTTATAGATGGTGACGATACACCTTACTCCAAAGCATTCCTTGCTTCTGCTTATGCGTCAAGAGGATTGAAAATGAGGTTTACGTCAGGTACAGGTTCAGAAGTTCTTATGGGAAATGCAGAGGGTAAATCGATGTTGTACCTGGAAATCAGGTGCATCATGGTTACAAAAGGTGCAGGAGTGCAGGGGCTTCAAAATGGTGCAATAAGCTGTATAGGCATAACTAGCTCAGTTCCTTCAGGTATAAGGGCGGTGCTGGCTGAAAACCTTATAGCATCTATGCTTGATTTAGAGGTAGCATCAGGCAATGATCAGACTTTTACACATTCAGACATAAGAAGGACAGCAAGGACTATGATGCAGTTTTTACCCGGTACTGATTTCATATTTTCAGGTTACAGTGGAACGCCTAATTATGACAATATGTTTGCAGGTTCCAATTTTGATGCAGAAGATTTTGATGACTACAATGTACTGCAAAGGGATTTAATGGTAGATGGAGGGTTAAGGCCTGTAAAAGAAGAAGATGTGGTAGAAGTGAGGCGAAAGGCAGCTAAAGCTTTGCAGGATGTATTTAGAGAGTTAAATCTTGGAGTAGTTACAGATGAAGAAGTAGAAGCAGCAGCATATGCACACGGCAGCAAAGATATGCCTGAAAGAGATGTTTTGTCTGACCTTGAATCAATCGATGAGATGATGAAAAGAGGGATTACAGGCATTGACATCGTAAAGGCTTTATATAGATCTGGACATGAGGATATAGCGGAAAACATTTTAAACATGTTAAAACAGCGCATATCTGGAGACTATTTGCAGACATCAGCTATTCTTGATGAAGATTTTAATGTTATAAGCGCCATAAATTGTCCAAATGATTACTTAGGACCTGGAACAGGATATAGGATTGATAAAGATAGATGGGAAGAGATAAAGAATATTCCTTACACCATTAATCCTGACAATTTGTAA

or225

SEQ ID NO：68：

MYVDEELLKEITKRVIEELNNKHKTDNVPSYFIENGVAYKGKNIEEVVIGVGPAFGKHIKKTINGLDHRDVIKEIIAGIEEEGMVHRIVRVLKTSDVAFIGKEAALLSGSGIGIGIQSKGTTVIHQKDLYPLSNLELFPQAPLLNLELYREIGKNAARYAKGMMVKPILIQNDYMVRPKYQVKAAIMHIKETEKILKNAQSIQLTIDL

SEQ ID NO：69：

ATGTACGTAGATGAAGAACTGTTAAAAGAAATTACTAAACGTGTTATAGAAGAATTAAATAATAAGCATAAAACTGATAATGTGCCTTCGTATTTTATTGAAAATGGAGTTGCCTATAAGGGTAAAAATATAGAGGAAGTCGTCATTGGTGTTGGGCCTGCATTTGGAAAGCATATAAAAAAGACTATAAATGGCCTTGACCATAGAGATGTCATAAAAGAAATAATTGCAGGCATCGAAGAAGAAGGTATGGTTCATAGAATTGTAAGAGTTCTAAAGACTTCTGATGTGGCGTTCATAGGCAAAGAAGCTGCTTTATTAAGCGGATCGGGAATAGGCATAGGCATACAATCAAAAGGTACTACAGTGATTCATCAAAAAGATTTATATCCTTTAAGCAATTTAGAACTGTTTCCACAAGCTCCACTGCTAAATTTAGAATTATACAGGGAAATAGGCAAAAATGCGGCGAGATATGCTAAAGGCATGATGGTAAAGCCTATTTTGATTCAAAATGATTACATGGTGAGACCTAAATACCAAGTGAAAGCTGCTATAATGCATATAAAAGAGACGGAAAAGATATTGAAAAATGCTCAATCAATCCAATTGACGATAGACTTGTAA

or224

SEQ ID NO：70：

MEEYPLSKSAFDKLVTKTGKHLNEINIENVMKGNVKPDDIKISKEVLLMQGQIAERYGRHQMKENFTRASELTDVPDEKILEIYESLRPFRSTKEELINLAYELRDKYNAINCANLILEAAEVYEKRNILKT

SEQ ID NO：71：

ATGGAAGAATATCCGCTATCAAAAAGTGCTTTTGATAAATTGGTGACAAAAACAGGCAAACATTTGAATGAAATAAATATTGAAAATGTAATGAAGGGAAACGTAAAACCCGATGATATCAAGATATCCAAAGAAGTGCTTTTAATGCAAGGGCAAATTGCAGAAAGATACGGCAGGCATCAGATGAAGGAGAATTTCACAAGAGCATCGGAGCTTACAGATGTTCCAGATGAAAAGATTTTGGAAATATATGAGAGCTTAAGGCCGTTTAGATCTACAAAGGAAGAGCTTATAAATCTTGCCTATGAATTAAGAGATAAGTACAATGCCATTAACTGTGCAAACTTGATACTTGAGGCTGCTGAAGTATATGAAAAAAGAAATATTTTGAAAACTTAA

or223

SEQ ID NO：72：

MKLIAGVDIGNSTTEVCIAAIKDDNTLEFLSSSLTATTGVKGTVDNVTGVINGLTEALKKIGKNIRDLSLIRINEAAPVVCGAAMETITETVITGSTMIGHNPSTPGGVGLGVGEIIHINDLADATKGKNYIVVIPKEIGYEEASIMINKSFENDIDVKAAIVQSDEAVLINNRLKKIIPIVDEVRQIEKIPSGVVAAVEVAPE GKSISTLSNPYGIATIFDLTPEETKYVIPISKSLMGKKSAVVIKTPRGQVKERIIPAGNLLIMGPTMSSKVSVDSGAEAIMESVEEVGTIDDVEGEENTNVGNMIKNLKNKMANITGQKVDKIKIKDIFAVDTTVPVKVEGGLAGETSMEKAVVLAAMVKTDTLPMIEIAEKLQRKLGVFVKIAGVEAVMATLGALTTPGTKLPLAILDIGGGSTDAALIDEKGIVKSIHMAGAGELVTMLIDSELGLNDRYLSEEIKRNPIGKVESLFHIRMENREIKFFDKPLNPRYYGRIVILKENDMIPVFKEDLTMEKIIYVRRQAKDKVFVKNAIRALKKIAPENNLRRIPNVVLVGGSALDFEIPEMILSELSKYKIIAGRGNIRKIEGPRNAVATGLVMSYLG

SEQ ID NO：73：

ATGAAACTCATAGCAGGTGTTGATATTGGCAATTCTACAACAGAAGTGTGTATAGCCGCTATTAAAGATGACAATACATTAGAATTTTTAAGCAGTTCCTTGACAGCTACGACAGGTGTAAAAGGCACTGTGGATAATGTGACAGGGGTTATTAATGGATTGACTGAGGCACTAAAAAAAATTGGCAAGAATATTAGGGATTTAAGCCTCATTAGAATCAATGAAGCCGCCCCAGTTGTCTGTGGTGCTGCTATGGAGACAATAACGGAAACTGTTATCACTGGTTCGACTATGATAGGTCATAATCCATCCACGCCGGGTGGTGTCGGACTTGGAGTAGGCGAGATAATACATATAAATGATTTAGCTGATGCTACTAAAGGCAAAAATTACATTGTGGTTATACCTAAGGAGATTGGCTATGAAGAAGCTTCAATAATGATAAACAAATCTTTTGAAAACGATATTGATGTAAAAGCTGCTATAGTTCAAAGCGATGAAGCAGTTTTAATCAACAACAGGCTTAAAAAGATTATACCAATTGTTGACGAAGTAAGGCAGATAGAAAAGATTCCATCGGGTGTTGTAGCGGCTGTAGAGGTGGCACCAGAAGGCAAGTCCATAAGCACGTTATCAAATCCTTATGGTATCGCAACAATATTTGACTTAACTCCAGAAGAGACAAAGTATGTCATACCGATTTCGAAAAGTTTGATGGGGAAAAAGTCAGCAGTTGTCATAAAAACACCGAGGGGACAAGTGAAAGAAAGAATAATTCCGGCTGGTAATCTCTTAATCATGGGGCCTACTATGTCATCAAAAGTAAGTGTTGATTCTGGTGCTGAAGCTATAATGGAATCAGTTGAAGAAGTCGGCACAATTGATGACGTAGAAGGTGAAGAAAATACAAATGTTGGGAATATGATAAAAAATCTAAAAAACAAGATGGCAAATATAACTGGGCAAAAAGTAGATAAGATAAAGATTAAAGATATCTTCGCTGTTGATACGACAGTCCCTGTTAAAGTAGAGGGCGGACTTGCTGGTGAGACTTCAATGGAAAAAGCAGTCGTGTTGGCGGCTATGGTAAAGACAGATACGCTTCGATGATAGAAATTGCAGAAAAGCTTCAAAGAAAGTTGGGTGTATTTGTAAAAATAGCTGGAGTAGAAGCTGTGATGGCTACATTAGGTGCGCTTACAACTCCAGGCACAAAGTTGCCACTTGCAATACTGGATATCGGTGGGGGTTCTACAGATGCAGCTTTGATTGATGAAAAAGGCATTGTAAAATCTATACACATGGCAGGTGCTGGAGAATTAGTCACAATGCTTATTGATTCAGAATTAGGGTTAAATGATAGATATTTGTCTGAAGAAATAAAGAGAAATCCGATTGGAAAAGTTGAAAGCCTATTTCACATAAGAATGGAAAATAGGGAGATAAAGTTTTTTGACAAACCTTTAAATCCTCGATATTACGGTAGGATCGTAATTTTAAAAGAAAATGACATGATCCCTGTATTTAAAGAAGATTTGACAATGGAAAAGATTATTTACGTGCGAAGACAAGCGAAGGATAAAGTTTTCGTTAAAAATGCTATTAGAGCTTTGAAAAAAATTGCTCCGGAAAATAATTTAAGGCGAATACCAAATGTAGTCTTGGTTGGCGGTTCTGCTTTGGACTTTGAAATTCCAGAGATGATTTTATCAGAGCTATCAAAATACAAAATCATAGCAGGCAGAGGGAATATAAGAAAAATCGAAGGGCCAAGAAATGCTGTAGCGACAGGTCTTGTGATGTCTTATTTAGGGTGA

or222

SEQ ID NO：74：

MEFIKPQIVIFANTENKYIINEVIAGIEEEGALYRLSYNECADVMKMAYDAAKASVLGIGIGISGDLVCLHSKNLEINTPLILSKTSENFDPRLVGCNAAKYVKGLPLKYLD

SEQ ID NO：75：

ATGGAATTTATAAAGCCTCAAATAGTGATTTTTGCAAATACAGAAAACAAATATATAATAAACGAGGTTATAGCTGGCATTGAAGAAGAAGGTGCATTATATAGATTATCTTACAATGAATGTGCTGATGTTATGAAAATGGCTTATGATGCAGCAAAAGCATCTGTATTAGGTATCGGAATAGGCATATCTGGAGATTTAGTGTGTTTGCACTCTAAAAACTTGGAAATCAATACACCTTTGATTCTTTCAAAGACAAGTGAAAACTTTGATCCACGACTCGTTGGATGCAATGCTGCAAAATATGTAAAGGGTTTGCCACTTAAATACTTAGATTAG

or221

SEQ ID NO：76：

MSVYTKTGDDGYTLLLNGERIPKDDLRIETLGNLDELTSYLGFAKAQINDDSIKKR

SEQ ID NO：77：

ATGAGTGTTTATACTAAAACTGGTGATGATGGTTACACGTTGCTATTAAATGGAGAAAGAATTCCAAAGGACGATTTGAGAATAGAGACATTGGGAAATTTGGATGAATTGACAAGCTATTTAGGATTTGCAAAAGCTCAAATAAATGATGATTC CATAAAAAAGAGATAG

or220

SEQ ID NO：78：

MVKIKNGFVIPGKNQISALLDIVRTITRKTERSLIKVDKKYPVNINSKVYINRLSDYLFVLARYMEIRTEIEEKVKDVIRKHYGKNKGEIKLNLDIAKNLMAKVEKKAESINLPVAIAIVDMHGNLIAAHFMDGTLLESMNLAINKAYTSVVLKMSTQELSKLAQPGQPLYGINTTDNRIVVFGGGCPIKHQGEIVGGIGVSGGTVEQDIELSIYGADVFEEVIS

SEQ ID NO：79：

ATGGTAAAGATTAAAAATGGTTTTGTAATACCTGGTAAAAACCAAATCTCAGCATTATTAGATATTGTAAGGACTATAACGAGAAAAACTGAGAGAAGCTTAATCAAAGTTGACAAGAAATATCCTGTAAATATTAATTCGAAAGTTTACATCAATAGATTGTCTGATTATTTGTTTGTTTTAGCAAGGTATATGGAAATAAGAACGGAAATAGAAGAAAAAGTAAAAGACGTGATAAGAAAGCATTATGGAAAGAACAAAGGCGAAATAAAGCTAAATTTAGATATAGCAAAAAATTTAATGGCTAAGGTAGAAAAGAAGGCAGAAAGCATTAATCTACCGGTTGCTATTGCAATAGTTGACATGCATGGCAATTTGATAGCGGCTCATTTTATGGATGGTACACTTCTTGAAAGCATGAATCTAGCTATAAATAAAGCTTATACATCAGTGGTGCTTAAAATGTCGACGCAAGAGTTATCAAAACTTGCACAACCAGGGCAGCCTCTTTACGGGATAAATACAACTGATAATAGAATCGTAGTGTTTGGAGGTGGGTGCCCTATAAAACATCAAGGTGAAATAGTTGGTGGAATTGGAGTTAGCGGTGGTACAGTAGAACAAGATATAGAACTTTCTATTTATGGTGCAGATGTATTTGAGGAGGTTATATCATGA

or219

SEQ ID NO：80：

MKVKEEDIEAIVKKVLSEFNFEKNTKSFRDFGVFQDMNDAIRAAKDAQKKLRNMSME SREKIIQNIRKKIMENKKILAEMGVSETGMGKVEHKIIKHELVALKTPGTEDIVTTAWSGDKGLTLVEMGPFGVIGTITPSTNPSETVLCNSIGMIAAGNSVVFNPHPGAVNVSNYAVKLVNEAVMEAGGPENLVASVEKPTLETGNIMFKSPDVSLLVATGGPGVVTSVLSSGKRAIGAGAGNPPVVVDETADIKKAAKDIVDGATFDNNLPCIAEKEVVSVDKITDELIYYMQQNGCYKIEGREIEKLIELVLDHKGGKITLNRKWVGKDAHLILKAIGIDADESVRCIIFEAEKDNPLVVEELMMPILGIVRAKNVDEAIMIATELEHGNRHSAHMHSKNVDNLTKFGKIIDTAIFVKNAPSYAALGYGGE GYCTFTIASRTGEGLTSARTFTKSRRCVLADGLSIR

SEQ ID NO：81：

ATGAAAGTTAAAGAGGAAGATATTGAAGCGATCGTCAAAAAAGTCTTATCGGAATTTAATTTTGAAAAAAATACTAAAAGTTTCAGAGATTTTGGCGTATTTCAAGATATGAATGATGCTATTCGTGCTGCAAAAGATGCCCAGAAAAAATTGAGAAATATGTCCATGGAGTCGAGAGAAAAGATTATACAGAATATAAGAAAAAAGATTATGGAGAATAAAAAAATACTTGCAGAGATGGGCGTCAGTGAAACTGGCATGGGGAAAGTAGAGCACAAAATAATAAAACATGAGCTTGTAGCACTTAAGACACCTGGTACCGAAGATATAGTGACAACAGCATGGTCTGGCGATAAGGGACTGACATTGGTTGAAATGGGGCCATTTGGTGTAATAGGTACGATTACTCCTTCGACAAATCCAAGTGAAACCGTCCTTTGCAATAGCATAGGTATGATAGCCGCAGGTAATTCAGTCGTATTTAATCCACATCCAGGTGCGGTAAATGTATCTAATTACGCTGTCAAGTTAGTAAATGAAGCGGTGATGGAAGCTGGCGGCCCTGAGAATTTAGTCGCATCTGTTGAAAAACCTACACTTGAAACTGGAAATATTATGTTCAAGAGTCCTGATGTTTCGCTATTAGTAGCGACAGGCGGACCTGGTGTAGTAACATCGGTTCTCTCATCTGGCAAAAGGGCAATAGGAGCAGGAGCAGGAAATCCACCAGTTGTAGTTGATGAAACGGCAGATATAAAAAAAGCTGCGAAAGATATAGTCGATGGTGCTACATTTGACAACAATTTGCCTTGTATTGCTGAAAAGGAAGTAGTTTCTGTAGATAAAATAACAGATGAACTGATTTACTACATGCAACAGAATGGCTGCTACAAGATTGAGGGGCGAGAAATTGAAAAGCTCATTGAACTTGTATTGGATCACAAAGGTGGCAAGATAACATTAAACAGGAAATGGGTTGGCAAAGATGCTCATTTAATACTAAAAGCTATAGGCATAGATGCTGATGAAAGCGTAAGGTGCATAATTTTTGAGGCGGAAAAAGACAATCCGTTAGTGGTAGAAGAGCTGATGATGCCTATTTTAGGAATAGTAAGAGCCAAAAATGTAGATGAAGCGATAATGATTGCGACAGAGTTAGAACATGGCAATAGGCATTCAGCACATATGCATTCTAAAAACGTTGATAATTTAACAAAGTTTGGAAAAATAATTGACACTGCTATATTTGTAAAAAATGCTCCATCGTATGCCGCGTTAGGATATGGTGGTGAAGGTTATTGCACATTTACGATTGCAAGCAGAACAGGTGAAGGATTGACATCTGCAAGGACTTTTACTAAAAGTCGTAGATGTGTCTTGGCAGATGGATTATCAATAAGATAG

or218

SEQ ID NO：82：

MEVNQIDIEEIVKKILNDLRNEPKENIKESNSKIPSICRAAVLTDVKKIEVKEFNIPEINDDEMLVKVEGCGVCGTDVHEYKGDPFGLIPLVLGHEGTGEIVKLGKNVRRDSAGKEIKEGDKIVTSVVPCGECDICLNHPDKTNLCENSKIYGLISDDNYHLNGWFSEYIVIRKGSTFYKVNDINLNLRLLVEPAAVVVHAVERAKSTGLMKFNSKVLVQGCGPIGLLLLSVVKTLGVENIIAVDGDENRLNMAKRLGATALINFTKYSNIDELVDAVKKASDGIGADFAFQCTGVPSAASNIWKFVRRGGGLCEVGFFVNNGDCKINPHYDICNKEITAVGSWTYTPQDYLTTFDFLKRAKEIGLPIEELITHRFSLDKMNEAMEVNMKQEGIKVVYINDRF

SEQ ID NO：83：

ATGGAAGTCAATCAGATAGACATTGAGGAGATAGTTAAGAAAATATTAAATGATTTAAGAAATGAGCCTAAAGAAAACATTAAAGAGAGCAATTCAAAAATACCATCTATCTGCAGAGCTGCTGTACTTACAGATGTTAAAAAAATAGAAGTAAAAGAATTTAATATTCCAGAAATAAATGATGATGAAATGCTTGTCAAGGTGGAAGGCTGTGGCGTTTGCGGTACTGATGTTCATGAATACAAAGGAGATCCTTTTGGACTTATACCATTGGTTTTAGGACACGAAGGTACAGGTGAGATAGTCAAGCTGGGGAAAAACGTGAGACGAGATTCTGCTGGTAAAGAAATCAAAGAAGGCGATAAGATTGTTACATCTGTCGTTCCGTGCGGTGAATGCGATATATGTTTGAATCATCCAGACAAGACAAATTTGTGTGAAAACTCAAAGATTTACGGCTTAATATCCGATGATAATTACCATTTAAATGGTTGGTTCTCAGAGTACATCGTCATAAGGAAAGGCTCAACATTTTATAAGGTCAATGATATAAACCTTAATTTGAGGCTTTTGGTAGAACCGGCTGCAGTAGTCGTACATGCAGTAGAGCGCGCAAAATCCACAGGTCTTATGAAATTCAACAGTAAAGTTCTCGTACAAGGCTGTGGCCCTATAGGATTACTGCTATTGTCGGTTGTAAAGACGCTTGGAGTAGAAAATATCATAGCCGTCGACGGCGATGAGAATAGACTCAACATGGCTAAAAGATTAGGTGCTACAGCACTCATTAATTTTACTAAATACAGCAATATTGATGAGCTTGTTGATGCTGTTAAAAAAGCAAGCGATGGAATTGGCGCAGATTTTGCATTTCAATGTACAGGCGTTCCTTCTGCAGCGTCTAATATTTGGAAGTTTGTAAGGCGGGGAGGTGGTTTATGCGAAGTTGGATTTTTTGTAAATAATGGTGATTGTAAGATAAACCCCCATTATGATATTTGCAATAAGGAGATAACAGCAGTTGGCTCATGGACTTACACTCCTCAAGACTATTTGACAACTTTTGATTTTCTCAAAAGAGCTAAAGAAATAGGACTTCCAATTGAAGAGCTGATAACACATAGATTTTCACTTGATAAAATGAATGAAGCTATGGAAGTTAATATGAAGCAGGAAGGGATAAAAGTAGTGTATATAAATGACAGATTTTAG

or217

SEQ ID NO：84：

MQAVGLIEVYGLVAAFVAADAACKKANVVIESFDNNKPLNAEALPVPLIIVVKLRGDLEDVKIAVDAAVDAANKISGVVATNIIAKPEEDTEKLLKLNCLK

SEQ ID NO：85：

ATGCAGGCTGTTGGATTGATTGAAGTTTATGGATTAGTAGCGGCATTTGTGGCAGCAGATGCTGCATGCAAAAAAGCGAATGTCGTAATAGAGTCTTTTGACAACAATAAGCCATTAAATGCTGAAGCATTGCCAGTTCCATTGATAATAGTCGTTAAGCTCAGAGGAGATCTTGAGGATGTAAAAATAGCGGTAGATGCTGCAGTTGATGCAGCTAATAAAATATCTGGTGTAGTTGCTACAAATATAATAGCAAAACCAGAAGAAGATACTGAAAAGCTATTAAAGCTAAATTGTCTTAAATAA

or216

SEQ ID NO：86：

MVQEALGMVETRGLVAAIEAADAMVKAADVTLIGTEKIGSGLVTVMVRGDVGAVKAATEVGASAASKLGELVAVHVIPRPHTDVEKILPTIK

SEQ ID NO：87：

ATGGTACAAGAAGCATTGGGAATGGTAGAAACGAGAGGATTGGTAGCAGCAATAGAAGCAGCAGATGCTATGGTAAAGGCTGCGGATGTCACTTTGATAGGAACTGAAAAAATAGGTTCAGGACTTGTAACAGTCATGGTAAGAGGAGATGTCGGTGCAGTAAAAGCAGCGACAGAAGTTGGCGCAAGTGCAGCTTCAAAATTGGGAGAGTTAGTGGCTGTTCACGTAATACCAAGGCCTCATACTGATGTTGAAAAGATACTGCCGACAATTAAATAA

or215

SEQ ID NO：88：

MYAIGLIEVNGFVTAVETLDAMLKTANVEFVTWEKKLGGRLVTIIIKGDVSAVEEAILTGKIEADKITRTVAYAVIPNPHPETIKMVNISAGKLFKADGGEINEF

SEQ ID NO：89：

ATGTATGCAATTGGACTTATTGAAGTAAATGGGTTTGTCACAGCGGTTGAAACACTGGATGCAATGTTGAAAACAGCCAATGTAGAGTTTGTAACATGGGAGAAAAAACTTGGAGGCAGACTTGTGACAATCATTATTAAAGGAGATGTTTCAGCAGTTGAAGAAGCAATTTTAACTGGAAAGATTGAAGCTGACAAGATTACACGGACAGTAGCATACGCAGTTATTCCAAATCCACATCCAGAAACTATAAAGATGGTAAATATTAGTGCAGGAAAGCTATTTAAAGCAGATGGTGGTGAAATAAATGAGTTCTGA

or214

SEQ ID NO：90：

MSSEEKDTNAKDVKVEKQKNNLTKTSNKEFKEELIMEQQALGMVETRGLVAAIEAADAMVKAANVTLIGTEKIGSGLVTVMVRGDVGAVKAATETGANAAKKLGELVAVHVIPRPHADVEKILPTIK

SEQ ID NO：91：

ATGAGTTCTGAAGAAAAGGATACGAATGCAAAAGATGTTAAAGTCGAAAAGCAGAAAAATAATTTAACGAAAACATCAAATAAAGAATTTAAGGAGGAATTGATTATGGAACAACAAGCATTAGGAATGGTAGAGACGAGAGGATTGGTAGCAGCGATAGAAGCTGCTGATGCAATGGTAAAGGCTGCTAATGTCACGTTAATAGGAACTGAAAAAATAGGTTCAGGACTTGTAACAGTCATGGTAAGAGGAGATGTTGGTGCAGTAAAAGCAGCGACAGAGACTGGAGCAAATGCAGCTAAAAAGTTAGGGGAGTTAGTAGCTGTTCACGTAATACCAAGACCTCATGCAGATGTAGAGAAAATACTGCCTACGATAAAGTAG

or213

SEQ ID NO：92：

VITVNEKLIEIISKTIADTISERNSLKIPVGVSARHVHLTKEHLDILFGKDYILKKKKELMGGQFAAEECVTIIGFKLNAIEKVRVLGPLRDKTQVEISKTDAISLGLNPPIRESGDIKGSSPITIVGPRGAISLKEGCIIAKRHIHMSPEDSKRFNVKDDDIISVKINGQRGGILENVQIRVDEKYTLEMHIDTDEANCMGLKSGDFVEIVRDNRS

SEQ ID NO：93：

GTGATAACAGTGAACGAAAAATTGATAGAGATTATATCAAAAACTATAGCGGATACGATTAGTGAAAGGAATTCGCTTAAGATACCAGTAGGCGTATCAGCCCGACATGTACATCTGACTAAAGAACATTTGGATATATTATTTGGAAAAGATTATATCCTTAAAAAGAAAAAGGAATTGATGGGTGGACAGTTCGCAGCAGAGGAATGTGTGACAATTATCGGATTTAAATTAAATGCTATTGAGAAAGTGAGAGTTTTGGGTCCTTTAAGAGATAAAACGCAGGTAGAAATATCGAAGACCGATGCAATAAGTTTAGGGTTAAACCCTCCTATACGGGAATCAGGTGATATAAAAGGTTCATCGCCAATTACAATTGTAGGGCCGAGAGGAGCAATATCATTAAAAGAAGGATGTATAATAGCAAAACGACATATTCACATGTCACCGGAAGATTCCAAAAGATTCAATGTTAAAGACGACGATATAATATCAGTAAAAATAAATGGTCAGCGAGGCGGAATTTTAGAAAATGTACAGATTAGAGTTGACGAAAAGTATACACTTGAGATGCATATTGACACAGATGAAGCTAATTGCATGGGACTAAAAAGCGGCGATTTTGTTGAAATAGTAAGAGATAATAGGAGTTGA

or212

SEQ ID NO：94：

LIIAKVVGTVISTRKNQNLIGNKFLIVEPVSEMNYDSKNRVVAIDNVGAGVGEIVLVTFGSSARIGCGMPDSPVDAAIVGIVDSIKDIIIDD

SEQ ID NO：95：

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or211

SEQ ID NO：96：

MMNIDELKNIVFENGIVGAGGAGFPTHAKLTTGIDTIILNGAECEPLLRVDRQLLAIYTDEILMTLSFIVDTLGAKRGIVAIKSAYKTAISSVKNLIGNYKNLELKVLPDVYPAGDEVVLIYETTGRIVPEGSIPISVGTLVMNVETVLNVYNAIYLKHPVTEKYVTVTGDVKYPSTFKAKVGTSVARLIEKAGGCLEKDCEVIMGGPMTGKIVDVKTPITKTTKAIIVLPKDHPVITKRKTNIRIGLKRAMSVCSQCQMCTDLCPRNLLGHSIKPHKVMNAVANSIIDDTAAYTMTMLCSECGLCEMYSCHQSLSPRKIISQIKIKLRQNGVKNPHNKRPETANVMRDERLVPMERLISRLSLKKYDVDAPMNFDTVIPSHHVVMQLSQHVGAKAIPVVKVGDIVKEGDLIGDVPNNKLGAKLHASIDGIIIDVTDDSIVIKPRGDFDGQSDRIG

SEQ ID NO：97：

ATGATGAATATTGATGAACTTAAAAATATCGTATTTGAAAATGGAATAGTCGGTGCAGGCGGAGCTGGATTTCCTACACATGCAAAACTTACTACAGGTATAGATACAATCATATTAAATGGCGCTGAATGTGAACCGCTTTTAAGAGTAGATAGGCAGCTACTTGCAATATATACTGATGAAATATTGATGACTTTATCATTCATAGTTGATACTTTAGGAGCCAAACGTGGCATTGTAGCAATAAAATCAGCATACAAAACTGCCATCAGCTCAGTTAAGAATTTGATTGGTAATTATAAAAACTTGGAGTTAAAGGTATTGCCAGACGTTTATCCTGCTGGTGATGAAGTTGTATTAATATATGAAACGACTGGAAGAATTGTGCCAGAAGGTTCTATACCTATTTCTGTTGGCACGTTGGTAATGAATGTGGAAACTGTGCTTAATGTTTATAATGCTATTTATTTAAAACATCCAGTCACAGAAAAGTATGTAACAGTAACGGGAGATGTCAAATATCCCAGCACATTTAAAGCAAAAGTAGGAACATCTGTAGCTCGTCTTATTGAAAAAGCAGGAGGATGCTTAGAAAAAGATTGTGAAGTGATAATGGGTGGTCCTATGACTGGGAAAATAGTTGATGTAAAGACTCCAATAACAAAAACTACAAAAGCTATTATCGTTCTCCCAAAAGACCACCCTGTGATAACAAAGAGAAAGACAAACATAAGGATAGGGTTAAAACGAGCAATGTCTGTTTGCTCTCAATGCCAAATGTGCACAGATCTATGTCCTAGAAATTTATTAGGTCATTCCATCAAACCTCATAAAGTCATGAATGCAGTTGCAAATAGTATTATTGATGATACCGCTGCATATACGATGACAATGTTATGTTCTGAATGTGGATTGTGCGAGATGTATTCATGTCATCAAAGTTTGTCGCCGAGAAAGATAATAAGCCAGATAAAGATAAAATTAAGGCAAAATGGTGTAAAAAATCCACACAACAAAAGACCAGAAACAGCAAATGTCATGCGAGATGAGAGATTAGTGCCGATGGAAAGGCTTATTTCAAGACTTTCGCTCAAAAAATACGATGTAGATGCTCCGATGAATTTTGATACTGTTATTCCTTCACATCACGTTGTCATGCAACTAAGTCAGCATGTTGGTGCCAAAGCGATACCTGTAGTAAAGGTAGGAGATATTGTGAAAGAAGGAGATCTGATAGGCGATGTGCCTAATAATAAGCTGGGTGCTAAATTGCATGCCAGTATTGACGGCATTATAATAGATGTAACTGATGACAGTATTGTTATCAAACCAAGAGGTGATTTTGATGGACAAAGCGATAGGATTGGTTGA

or210

SEQ ID NO：98：

MDKAIGLVEYKSVATGITAADDMAKTADVEIIEAYTVCPGKYIVLLAGKLSAVNSAIEKGINQYSENVIDSFILGNPHETIYKAMSGTSVIEDVEALGIIETFSAASIILAADTAAKAAKVNLVEIRIARGMCGKSYLLLTGELAAVEASINAGCKALERTGMLLNKSIIPNPDRAIWDKII

SEQ ID NO：99：

ATGGACAAAGCGATAGGATTGGTTGAATACAAATCAGTTGCTACAGGTATAACTGCTGCTGATGACATGGCTAAAACTGCTGATGTGGAAATAATAGAAGCATATACAGTATGTCCGGGGAAATACATTGTTCTGTTAGCTGGGAAATTAAGTGCAGTTAATTCGGCGATAGAAAAGGGCATAAATCAGTATTCGGAAAATGTCATTGATAGCTTTATATTGGGAAATCCGCATGAAACAATATATAAAGCTATGAGTGGCACGTCTGTAATTGAAGATGTAGAAGCACTTGGTATCATAGAGACATTTTCTGCAGCATCAATAATACTTGCAGCAGATACGGCTGCAAAAGCTGCAAAAGTGAATCTGGTAGAGATAAGAATAGCCAGAGGTATGTGCGGCAAGTCATATCTACTGCTTACAGGAGAACTTGCTGCTGTTGAAGCATCTATAAATGCAGGATGCAAAGCTTTGGAGAGAACGGGTATGCTTTTAAATAAGTCTATAATACCCAATCCAGATAGAGCTATTTGGGATAAGATAATTTAA

or209

SEQ ID NO：100：

MYEAEKDKILNDYYNAKEIYAKFDIDIDKVLDKMKKIRISLHCWQGDDVTGFEKSANGLSGGGILATGNWPGRARNGEELRQDIEKALSLIPGKHKINLHAIYAETDGEFVDRDEINVEHFRKWIYWAKENGLGLDFNPTFFSHPKANDGYTLSSKDENIRKFWIQHGKRCREIANEIGRELKTQCVNNVWIPDGSKDLPANRIEHRKILKESLDEIFSVKYDKSNIVDSVESKLFGIGSESYVVGSHEFYMNYASRNDVMLCLDMGHFHPTENIADKISSILTFNDNLLIHVSRGVRWDSDHVVILNEDLLSLAKEIRRCDAYDKVYIALDFFDASINRIMAWVIGARATLKAILISLLEPVHLLMEEENKGNFGARLALMEEFKTLPFYSVWNKYCMDENVPIGTSWIDDVKEYEKEIVKNRA

SEQ ID NO：101：

ATGTATGAAGCAGAAAAAGATAAAATTTTAAATGATTATTATAATGCAAAAGAGATTTATGCAAAGTTTGACATAGATATTGATAAAGTATTAGATAAAATGAAGAAGATTCGTATTTCACTTCACTGCTGGCAAGGCGATGATGTAACTGGATTCGAAAAAAGTGCCAATGGATTAAGCGGTGGAGGTATTTTGGCGACAGGAAACTGGCCTGGTAGAGCAAGAAATGGTGAAGAATTAAGGCAAGACATTGAAAAAGCCTTAAGCCTTATACCAGGCAAACACAAAATCAATTTACATGCCATTTACGCAGAAACGGATGGTGAATTTGTAGACAGAGATGAAATAAACGTGGAGCATTTCAGGAAATGGATTTACTGGGCAAAAGAAAATGGCCTTGGCCTTGACTTCAATCCTACGTTTTTTTCGCATCCTAAAGCAAATGATGGCTATACGCTTTCAAGCAAAGATGAAAACATAAGAAAATTTTGGATCCAACATGGTAAAAGATGCCGTGAAATCGCAAATGAAATAGGAAGAGAGCTAAAAACTCAATGTGTGAATAATGTTTGGATTCCTGATGGTTCAAAAGATTTGCCTGCTAATAGGATTGAACACAGAAAAATACTTAAAGAATCTTTAGATGAGATATTTTCAGTAAAATATGACAAATCAAATATCGTTGATTCTGTTGAAAGCAAATTATTTGGCATTGGATCTGAAAGCTATGTGGTTGGTTCACATGAGTTTTATATGAACTATGCGTCGAGAAATGATGTAATGCTGTGCCTTGATATGGGACATTTTCATCCTACTGAGAATATTGCTGATAAGATATCATCAATACTTACATTCAATGACAATTTGTTGATTCATGTAAGCCGTGGTGTCCGGTGGGATAGCGACCATGTAGTCATTTTAAATGAAGATTTGCTTTCATTAGCAAAAGAAATAAGAAGATGTGATGCTTATGACAAAGTGTATATTGCATTAGATTTCTTTGATGCAAGCATAAATAGGATAATGGCATGGGTAATAGGTGCAAGAGCGACGCTAAAAGCCATATTAATATCACTATTAGAGCCTGTGCATCTACTTATGGAAGAGGAGAATAAAGGAAATTTTGGTGCAAGACTTGCTTTGATGGAGGAATTCAAAACATTGCCATTTTACTCTGTTTGGAACAAATACTGCATGGACGAAAATGTGCCTATTGGTACATCGTGGATTGATGATGTTAAAGAATATGAAAAAGAAATTGTAAAAAATAGGGCTTAA

or208

SEQ ID NO：102：

MKDIVYNLAFDFGASSGRLMLSAFDGEKITIEEIYRFPNEPVKLGQSFYWDFLRLFHELKNGLKIASKRKIKISGIGIDTWGVDYGLLDKNDQLISNPFHYRDKRTDGIIKDFENMALLEEIYNVTGIQFMEFNTIFQLYCDYKKRPELLDNAKTLLFIPDLFNFYLTNEKYNEYTVASTSQMLDANKKDWANDLIEKLNLPEGIFQKILMPGNTIGYLTKEIQEETGLSEVPVISVGSHDTASAVAGTPIENGSSAYLICGTWSLLGVESEKPIINENTKKYNFTNEGGVEGLIRLLKNINGLWIIQQLKQSWNSNGIKIGFPEISQMASKAEHEEFIINPDDKLFIAPDDMAEAIRQYCTKTGQGLPQNIGDIARAAYNGIVEQYKNCLNNLEDIVGQEIDNIHMVGGGIQDKFLCKLTADVTGKKVITGPVEASIYGNVIVQLMALGYIKDLREGRKIIKNSIENDEEMFAK

SEQ ID NO：103：

ATGAAAGATATTGTGTATAATCTGGCTTTTGATTTTGGAGCTTCAAGTGGCCGTCTTATGCTATCCGCGTTTGATGGCGAAAAAATCACAATTGAAGAGATTTATAGATTTCCAAATGAGCCAGTCAAGCTGGGACAATCATTTTATTGGGATTTTTTAAGGCTTTTTCACGAATTAAAAAACGGATTAAAAATAGCATCAAAGAGGAAAATCAAAATATCCGGCATTGGTATAGACACTTGGGGTGTCGATTATGGATTGCTTGATAAAAATGATCAATTGATTTCAAATCCTTTTCATTACAGAGATAAAAGAACGGATGGCATAATAAAAGATTTTGAAAATATGGCGTTACTGGAGGAAATCTACAACGTAACTGGTATACAGTTTATGGAATTTAATACAATATTCCAATTGTATTGCGATTATAAAAAGCGTCCAGAATTATTGGATAATGCAAAGACATTGTTGTTTATTCCAGATTTATTTAACTTTTATTTGACAAATGAGAAATACAATGAATATACTGTTGCATCCACATCGCAAATGTTGGATGCTAACAAGAAAGATTGGGCAAATGATCTTATAGAAAAGTTAAATTTGCCAGAAGGTATTTTTCAAAAGATACTGATGCCAGGAAATACAATTGGTTATCTAACAAAAGAAATTCAAGAAGAAACAGGATTGTCTGAAGTTCCCGTGATTTCTGTTGGCAGCCATGATACGGCATCAGCAGTTGCAGGTACACCTATTGAAAACGGTTCAAGTGCTTATTTGATTTGTGGTACTTGGTCATTATTAGGTGTTGAAAGTGAAAAACCTATAATAAATGAAAATACAAAGAAGTACAATTTTACAAATGAAGGCGGTGTCGAAGGCCTTATAAGGCTACTTAAAAATATTAATGGTCTGTGGATAATTCAGCAATTAAAACAAAGTTGGAATTCAAATGGCATTAAAATAGGATTTCCAGAAATCAGCCAGATGGCATCTAAAGCAGAGCACGAAGAATTTATCATAAATCCTGATGACAAATTGTTTATAGCTCCAGATGATATGGCTGAGGCGATAAGGCAATATTGTACAAAAACAGGACAGGGTTTGCCGCAGAATATTGGCGACATAGCAAGAGCCGCTTACAATGGTATAGTTGAACAATACAAAAATTGCTTAAACAATTTAGAAGATATTGTAGGGCAAGAAATAGATAATATTCACATGGTTGGTGGTGGGATACAGGATAAGTTCCTGTGCAAGCTGACTGCAGATGTTACAGGGAAAAAAGTCATAACAGGCCCTGTAGAAGCTTCAATCTATGGCAATGTGATAGTCCAGCTTATGGCATTGGGATATATAAAAGACTTGAGAGAAGGAAGAAAGATAATAAAGAATTCTATAGAGAATGATGAAGAGATGTTTGCTAAATAG

or207

SEQ ID NO：104：

VSNIYTLVVVEDEYEIRTGLVNCFPWNKMGFVVAEEFENGGECFEYLCKNKVDTILCDIKMPVMSGIELAKKIFESNISTKIVIISGYTDFEYARQALRYGVKDYIVKPTKYNEIIDVFSRIKKELDNENTKEILNNSCNNEIDQYSSIISIIEKYVDEHYRDVTLEDVAKVVYMNPYYLSKYFKQKTGMNFSDYITEVRMKKAVEFLKNPLYKTYEISYMIGYKNPKNFTRAFKKYYKKSPREFVNSAINFKE

SEQ ID NO：105：

GTGTCTAATATTTATACGCTTGTAGTAGTAGAAGATGAATATGAGATAAGAACAGGATTAGTTAACTGCTTTCCATGGAACAAAATGGGTTTTGTTGTTGCAGAAGAATTTGAAAATGGAGGAGAATGTTTTGAGTATTTGTGTAAAAATAAGGTTGATACAATTTTATGTGATATAAAAATGCCAGTTATGTCTGGTATAGAGTTGGCAAAGAAAATTTTTGAAAGTAATATAAGCACTAAAATAGTTATAATCAGTGGTTATACTGATTTTGAATATGCCAGACAGGCGTTAAGATATGGTGTTAAAGATTATATAGTAAAACCTACTAAATATAATGAAATAATTGATGTTTTCAGCAGAATAAAAAAAGAATTAGACAATGAAAATACAAAGGAAATATTGAATAACTCATGTAACAATGAAATTGATCAGTACAGCAGCATAATTTCAATCATAGAAAAATATGTTGATGAACATTACAGAGATGTGACATTGGAAGATGTAGCTAAAGTAGTTTATATGAATCCGTATTATTTAAGCAAATATTTTAAACAAAAAACCGGTATGAATTTTTCTGATTATATAACTGAGGTCAGAATGAAAAAAGCTGTAGAGTTTCTAAAAAATCCTTTGTATAAAACTTATGAAATAAGTTATATGATTGGATATAAAAATCCAAAAAATTTTACTAGAGCATTTAAAAAATATTATAAAAAATCCCCAAGAGAATTTGTAAATTCAGCAATAAATTTTAAGGAATGA

or206

SEQ ID NO：106：

MRELNNKFFYKNLFVLALPLILIVIVLGSFSILITERYVRDEIYKNSREILKQSSNDLSILFNDINKIYLTFGTNKDVTLYLERILNTNKYSLDDMWHLSMIESLFDSTSFSEPYIQSIYLYFNNPNKNFLVTGNGINSVTNYIDNKWYDSFLNAPKDEISWIEVRNLKMYSFDKKGIKVLSIYKKIANFNGDKIDGVLVLNIYLDYIENLLNTSTIFPDQKILILDAHDNLICQNINGNFTGKIDLDNYSKANIITKLESPNYNIKYVSIVPKKYLYEVPIKLLKMTLVLLLTSIFFVILITFRITKRNYENVNKILKIIEAEKTNEIFPEIPVESRDEYSYIIYNIINSYIEKSQLKMELAEKKYKMKAMELLALQSQISPHFLSNALEIIYLRALSYTNGPNDVTKMIENLSQILKYLLSNPNETVTVKEEIENTKAYIQILKVRYRDKFKVNLIYDESILSCLMMKLMLQHLIENSIKHGLKKKNYEGSIKIKIKAVDKKKIKISVIDNGIGMSKERLNYVKRILDSDFDFYEHIGLMNTNERLKLLYGKDCEILIRSKLNIGTAVYIIFPYQLKNQNNDDYNK

SEQ ID NO：107：

ATGAGAGAATTAAACAATAAATTTTTTTATAAAAATCTTTTTGTTTTGGCATTGCCATTAATTTTAATTGTTATTGTATTAGGTTCATTTTCAATATTAATAACAGAAAGATATGTTAGAGATGAAATATACAAAAATAGTAGAGAAATATTAAAGCAAAGCAGTAATGATTTGTCAATTTTATTTAATGATATAAATAAAATTTATTTAACATTTGGAACAAACAAAGATGTGACATTGTATTTGGAAAGGATCTTAAATACAAATAAATATTCTTTAGATGATATGTGGCATCTTAGCATGATAGAAAGTTTATTTGATTCTACGTCGTTTTCAGAACCTTATATACAATCAATTTATTTGTATTTTAACAATCCTAATAAAAATTTTTTAGTGACAGGAAATGGTATTAATTCTGTAACAAATTATATTGATAATAAATGGTATGACAGCTTTTTAAATGCACCAAAAGATGAGATTTCTTGGATAGAGGTTAGAAATTTAAAAATGTATAGTTTCGATAAAAAGGGGATAAAAGTCCTAAGTATATACAAAAAAATTGCAAACTTTAACGGGGATAAAATTGATGGTGTGCTTGTACTAAATATATATTTGGACTATATTGAAAATTTGCTAAATACTTCAACAATATTTCCTGACCAAAAAATTCTTATATTAGATGCCCACGACAATTTAATATGTCAAAATATTAATGGGAATTTCACTGGGAAGATAGACTTAGATAATTATAGCAAAGCAAACATCATAACAAAATTAGAATCTCCAAATTATAATATAAAATATGTATCTATTGTTCCTAAAAAATACCTTTATGAAGTTCCTATAAAGCTTTTAAAGATGACTTTAGTTTTACTTTTGACGTCAATTTTTTTTGTGATATTGATAACATTTAGAATCACTAAACGAAATTACGAAAATGTAAATAAAATATTAAAGATTATAGAGGCAGAAAAGACAAATGAGATATTTCCAGAAATTCCAGTAGAAAGTAGAGATGAGTACAGCTATATAATTTACAACATTATTAATAGTTATATTGAAAAAAGTCAATTGAAAATGGAATTAGCAGAAAAGAAGTATAAAATGAAAGCAATGGAGTTATTAGCACTGCAATCGCAAATTAGTCCTCATTTTTTGTCTAATGCGTTGGAGATTATTTATCTTAGGGCATTGTCATACACAAACGGTCCTAATGATGTCACAAAAATGATTGAAAATTTGTCACAGATTTTAAAGTATTTGTTAAGTAATCCAAATGAAACAGTAACTGTAAAAGAAGAAATTGAAAATACAAAGGCATATATACAAATATTGAAGGTCAGGTATAGAGATAAATTTAAAGTAAATCTAATTTATGATGAAAGTATTTTATCATGTCTCATGATGAAACTGATGCTGCAACATTTAATAGAAAATTCTATAAAACATGGGCTTAAGAAGAAAAATTATGAAGGATCAATAAAAATCAAAATAAAAGCAGTTGATAAAAAGAAAATAAAAATTTCAGTAATCGATAATGGCATAGGAATGTCCAAAGAGAGGCTAAATTATGTAAAAAGAATTCTTGACTCTGACTTCGATTTTTATGAACATATTGGACTAATGAATACAAATGAACGGTTAAAACTTCTCTATGGGAAAGATTGTGAAATATTAATAAGAAGTAAATTGAATATTGGTACTGCCGTATATATAATTTTTCCATATCAATTAAAAAATCAGAATAATGATGATTATAATAAGTGA

or205

SEQ ID NO：108：

MGINRYDLVKRHNVILEKADIENPLSVGNGEIAFTADITGMQTFIDDYKSIPLCTMSQWGFHTTPAQNDKGYYTLEDLNLKYYDAFDRKVGYVTSAENQENVFNWLRSNPHRINLGNIGLNIILDDGTKAELKDIFEIHQVLDLWNGILISDFKVEKVPVHVETFCHPYEDMINFSVESELLKQNKIYIEVKFPYGAANISGSDWDRNDRHDTNVVDYGRDFVELLRTVDEDVYFVKIEYSKGVYLNRIGENHFALKQKEYNGRIEFSCLFSKQKPLKCLHSFSESKRMCKEYWNSFWRGGGAIDFSKCEDKRAFELERRVILSQYLTAIQCSGSMPPQETGLTCNSWYGKFHLEMHWWHAVHFALWGRMPLLSRSIWWYRSIFNVSRDIARKQGYKGVRWPKMVGPDGRDSPSPIGPLLVWQQPHLIYYSELFFRENPTEETLDMFKDIVINTADFIASFVAYDRKNDRYILAPPLIPAQENHDPNVTLNPVFELEYFSFALEIAVKWIERLGLNVNQEWNEIRFKLANLPSKDGVYISHEKCINTYEKFNFDHPSMLAALGMLPGRKVDKETMRRTLHRVLKEWKFEEMWGWDFPMMAMTATRLGEPETAINILLMDSPKNTYMVNGHNNQIPNKELPVYLPGNGGLLAAMALMTAGWDGNSQSTPGFPKNGMWNVEWEGLKAMI

SEQ ID NO：109

ATGGGAATTAACAGATATGATCTTGTAAAAAGGCATAATGTAATTTTGGAAAAAGCAGATATCGAAAATCCATTGTCAGTAGGTAATGGAGAAATTGCTTTTACAGCTGATATAACGGGAATGCAAACTTTTATTGATGACTATAAGAGCATTCCTTTATGTACCATGTCACAGTGGGGGTTTCATACTACGCCGGCACAGAATGATAAGGGCTATTATACTTTGGAAGATTTGAACCTCAAGTATTACGATGCATTTGACCGAAAGGTTGGATATGTAACATCAGCAGAAAATCAAGAGAATGTATTTAATTGGTTGAGGAGTAATCCTCATAGAATTAATTTAGGTAATATAGGATTAAATATAATTCTTGATGATGGCACAAAAGCAGAATTGAAAGATATTTTCGAAATACACCAAGTATTAGATTTGTGGAACGGAATATTGATAAGTGACTTTAAAGTCGAAAAAGTCCCTGTTCACGTTGAGACTTTTTGCCATCCATATGAAGATATGATAAATTTTTCTGTTGAATCAGAACTGCTAAAACAAAATAAAATTTATATTGAAGTAAAATTTCCATATGGTGCGGCCAATATATCAGGCTCCGATTGGGATAGAAATGATAGACATGATACAAATGTGGTTGATTATGGCAGAGATTTTGTCGAATTATTGAGAACTGTCGATGAAGATGTTTATTTTGTAAAAATAGAGTACTCAAAAGGCGTTTATTTAAATAGAATCGGGGAAAATCATTTTGCATTAAAGCAAAAAGAGTATAATGGGAGAATAGAATTTTCGTGCTTGTTTTCGAAGCAAAAACCTCTTAAGTGCTTGCATTCATTTAGTGAAAGCAAAAGGATGTGTAAAGAATATTGGAATAGCTTTTGGAGAGGAGGTGGTGCAATAGATTTTTCAAAGTGTGAGGATAAAAGAGCTTTTGAATTGGAGAGAAGGGTAATACTTTCGCAATATCTTACAGCTATTCAATGTTCGGGTTCTATGCCGCCGCAAGAAACAGGGCTCACCTGTAATAGCTGGTATGGTAAATTTCATTTGGAAATGCATTGGTGGCATGCTGTACATTTTGCTTTATGGGGTAGAATGCCTTTGCTGAGTAGAAGTATATGGTGGTACAGGAGCATTTTCAATGTATCACGTGACATTGCGAGAAAGCAAGGATACAAAGGTGTACGCTGGCCTAAAATGGTTGGACCAGATGGAAGGGATAGCCCTTCTCCGATAGGACCATTGCTTGTTTGGCAGCAGCCTCATCTTATATATTACAGTGAACTGTTTTTTAGAGAAAATCCTACGGAAGAAACATTAGATATGTTTAAAGACATAGTAATTAATACTGCTGATTTTATTGCATCATTTGTTGCATATGATAGAAAAAATGATAGATATATACTTGCGCCACCTTTGATTCCAGCACAAGAAAATCATGATCCTAACGTTACATTAAATCCGGTATTTGAATTGGAGTATTTTTCGTTTGCGCTGGAAATAGCAGTTAAATGGATTGAAAGGTTAGGACTAAATGTGAACCAAGAGTGGAATGAAATACGTTTTAAATTAGCTAATTTACCTTCAAAAGACGGTGTATATATATCGCATGAAAAATGTATTAACACTTATGAGAAATTTAATTTTGACCATCCATCTATGCTTGCAGCATTGGGGATGCTACCAGGCCGCAAGGTTGATAAAGAAACTATGAGAAGGACTTTACATAGAGTATTAAAAGAGTGGAAATTTGAGGAAATGTGGGGTTGGGATTTTCCGATGATGGCTATGACTGCAACAAGATTAGGCGAACCGGAGACAGCAATAAATATTCTTTTGATGGATTCACCAAAAAATACTTATATGGTAAATGGCCATAATAACCAAATACCGAATAAAGAACTACCAGTATATTTGCCTGGAAATGGTGGACTATTGGCGGCAATGGCCCTCATGACAGCTGGTTGGGATGGGAATAGCCAAAGCACACCTGGATTTCCTAAAAATGGGATGTGGAATGTTGAATGGGAAGGGTTAAAAGCGATGATATGA

or204

SEQ ID NO：110：

MIKRKDLYIRDPFVVPVPNEKIYYMFGTTDINCWNDEKATGFDYYKSSDLENFEGPFIAFRPDKNFIWDKNFWAPEVHKYNDMYYMFATFFADGRNRGTQILVSEKISGPYRPWSIEPVTPKDWMCLDGTFYVDENGEPWMIFCHEWVQIYDGEICAVRLSKDLKTTIGNPITLFKASSANWTRSIKKIKDHECYVTDGPFIYRSEEGKLYMLWSSFIENNIYAVGISLSRTGKITGPWVHSENPIFAGDGGHGMIFKTFEGNLTLAVHTPNKRKEERPLFITLEKSVLNDTL

SEQ ID NO：111：

ATGATAAAACGAAAGGATCTTTATATACGTGATCCATTTGTAGTTCCAGTACCGAATGAAAAAATATATTATATGTTTGGAACTACTGATATAAATTGCTGGAATGATGAGAAAGCAACTGGATTTGATTACTATAAATCATCTGATTTAGAAAATTTTGAAGGACCTTTTATTGCATTTAGACCAGATAAAAACTTTATTTGGGATAAAAATTTTTGGGCTCCAGAAGTGCACAAATACAATGACATGTATTATATGTTTGCTACATTTTTCGCTGATGGCAGAAATAGAGGAACGCAAATTTTAGTATCTGAAAAAATAAGTGGGCCATATAGACCATGGAGTATTGAACCGGTGACGCCGAAGGATTGGATGTGTTTAGATGGGACTTTTTATGTAGATGAGAATGGGGAACCCTGGATGATATTTTGCCATGAATGGGTACAAATATATGATGGGGAAATTTGTGCTGTAAGATTGTCGAAAGATTTAAAAACAACGATAGGAAATCCTATTACACTTTTTAAAGCTTCCAGTGCTAATTGGACAAGAAGTATTAAAAAGATTAAAGATCATGAATGCTACGTTACGGATGGCCCTTTTATTTATAGGTCTGAAGAGGGAAAGCTTTATATGTTGTGGTCCAGTTTTATTGAAAACAATATATACGCTGTTGGTATATCATTATCGAGAACAGGCAAAATAACCGGCCCGTGGGTACACAGTGAAAATCCAATTTTCGCAGGTGATGGTGGGCATGGTATGATATTTAAGACCTTTGAAGGGAATCTAACATTGGCAGTACACACACCTAATAAAAGGAAAGAAGAACGGCCCCTTTTTATAACTTTAGAAAAATCTGTGCTTAATGATACCTTATAA

or203

SEQ ID NO：112：

MFKKITSLLISLLLIISLVTGCSSSSNSSSSSKNSSENNTSPKTVTLRFMWWGGDARHKATLDAISLYEKEHPNVKINAEYGGVTDYLQKLITQLSSGTAPDLIQIDVTWLQQLFSQGDFFADLSKLKDINVNAFDQNFLKNYCYVNNKLIGLPTGINNSAMYINKDFFNKFGIDDKTVWTWDNLLQTAKMVHEKDKNAYLLDADSTICDYILVTYVGQKTGNQWVKDDYTLGFDKQTLTEAFKYLNDLFEVGAIEPFSQSAPYEGKPDQNPMWLNGQTGMLWNWSSIYAGVKANIKNLSLALPPIDPNAKQTGIVVRPSQLIAINKDSKNIDEAAKFLNWFFTNTDAIKTLKDVRGVPATADARKILSENNLLDSTLTDNANQAMEKMAPPENGISGNQELEKINTDIIQELAYKKITPEQAADELINTYKQKLPELKSQQ

SEQ ID NO：113：

ATGTTTAAAAAAATTACATCTCTGTTAATATCGCTTCTTTTGATAATTTCATTAGTTACAGGATGTAGCAGTTCTTCGAATTCTTCGAGTTCATCGAAAAATAGTTCTGAAAATAATACCAGCCCAAAAACCGTAACATTAAGATTTATGTGGTGGGGTGGAGATGCCAGACATAAAGCAACACTTGATGCCATAAGTCTTTATGAAAAAGAACATCCCAATGTAAAGATTAATGCTGAATATGGCGGCGTTACTGACTATCTCCAAAAGCTGATAACTCAATTAAGCAGTGGTACAGCACCTGATCTTATACAAATAGATGTAACATGGTTGCAGCAACTTTTTAGCCAAGGTGATTTTTTTGCAGATTTAAGTAAGTTAAAAGATATCAATGTGAATGCATTTGATCAAAATTTTCTTAAAAATTATTGCTATGTCAACAATAAGTTGATAGGTTTGCCTACAGGAATAAACAATTCGGCAATGTATATTAACAAAGACTTTTTTAATAAATTTGGCATAGACGATAAGACGGTTTGGACATGGGATAATCTCTTGCAAACCGCTAAGATGGTGCATGAAAAGGATAAAAATGCTTATCTTTTAGATGCTGATTCTACTATTTGTGATTATATATTGGTCACATACGTGGGGCAAAAAACTGGAAATCAGTGGGTGAAAGATGATTACACTTTAGGTTTTGATAAACAAACATTGACAGAGGCATTCAAATATTTAAACGATTTGTTCGAAGTAGGCGCTATAGAGCCATTTTCTCAAAGTGCTCCATACGAAGGAAAACCTGATCAAAATCCTATGTGGCTTAATGGTCAAACGGGTATGCTTTGGAACTGGTCATCTATATATGCTGGTGTAAAAGCAAACATAAAGAACCTGTCATTGGCATTGCCACCTATTGACCCTAATGCAAAACAGACAGGCATAGTTGTAAGACCATCACAGCTTATTGCTATTAACAAGGATTCTAAAAATATCGATGAAGCAGCAAAATTTTTAAATTGGTTCTTTACGAATACAGATGCTATAAAAACACTTAAAGATGTCAGAGGAGTTCCAGCTACCGCAGATGCACGCAAAATTTTATCAGAAAATAATTTGTTGGATTCGACTTTAACTGATAATGCAAATCAAGCTATGGAAAAGATGGCACCTCCTGAAAACGGTATAAGTGGTAATCAAGAGTTAGAAAAGATAAATACTGATATCATACAAGAACTGGCTTATAAAAAGATAACGCCAGAGCAGGCTGCTGATGAATTGATAAATACTTATAAACAGAAACTTCCAGAATTAAAAAGCCAGCAATAA

or202

SEQ ID NO：114：

MSYNKKRNLMGYLYISPWIIGFLIFTLYPFAMTFIYSFCNYSITKSPVFIGLGNYITMFTKDMYFWPSLINTIKYVLMTVPLKLCFALFVAMILNIDIKGVNVFRTTYYLPSIFGGSVALSVIWKFLFMDNGIMNKFLSYFHIHGPSWLGNPHISLFTISLLSVWEFGSSMVIFLAALKQVPNELYEASMLDGASKIRRFFSITLPMISPVLLFNLVMQTINAFQEFTGPYVITGGGPMNSTYVYSMLIYDNAFRYFRMGYSSALSWILFLLILIVTVIIFKSSNTWVYYENGGR

SEQ ID NO：115：

ATGAGTTATAATAAAAAGAGAAATTTGATGGGGTATTTATATATTAGTCCATGGATTATAGGCTTTTTAATATTTACTCTGTATCCATTTGCTATGACTTTTATCTATTCATTTTGTAACTACAGTATTACAAAATCACCTGTATTTATTGGATTAGGCAATTATATAACTATGTTTACTAAAGATATGTATTTTTGGCCATCTTTAATTAATACTATAAAATATGTATTAATGACAGTTCCTTTAAAATTATGTTTTGCACTTTTTGTTGCAATGATCTTAAATATTGATATTAAAGGAGTTAATGTGTTTAGAACAACTTATTATCTGCCTTCTATTTTTGGAGGAAGTGTTGCTTTATCTGTTATATGGAAATTTTTATTCATGGATAATGGTATTATGAATAAATTTCTTTCATACTTTCATATACACGGGCCAAGTTGGCTTGGAAACCCACACATATCATTATTTACTATAAGTTTATTGTCAGTGTGGGAATTTGGGTCTTCTATGGTAATATTTTTGGCAGCCCTAAAACAGGTCCCGAATGAGTTGTATGAAGCATCTATGTTAGATGGTGCAAGCAAAATAAGAAGGTTTTTCTCAATAACTTTACCTATGATATCGCCTGTGCTATTATTTAATTTGGTTATGCAGACTATAAATGCTTTTCAGGAATTTACAGGTCCATACGTGATAACTGGTGGAGGACCGATGAACTCTACTTATGTGTACAGTATGTTGATTTATGATAATGCGTTTAGGTATTTTAGGATGGGTTATTCATCTGCCTTGTCTTGGATTTTATTTTTGTTAATATTGATTGTTACAGTTATAATATTTAAATCTTCAAATACATGGGTGTATTACGAAAATGGAGGTAGATGA

or201

SEQ ID NO：116：

MKAKNSQNNDIIRKVFIYVFLVAFGIFMIYPLLWVFASSFKSNDEIFKSISLIPKHIVTNSYFEGWKGTGQYSFGTFILNSITLVVPVVVFTAISSTIVAYGFARFEFPLKTILFTLMISTMMLPGTAVLIPRYILFNWLGWINTYKPFIVPALFGTTPFFIFMMVQFLRGLPKELEESATIDGCNSFQILMKILIPLCKPAIISMCIFQFIWTWNDFFNPLIYINSVEKYTVSLGLNMTIDGTSVVNWNQIMAMTIISMIPSIIIFFSAQKYFVEGIATTGLKN

SEQ ID NO：117：

ATGAAAGCAAAGAATAGTCAAAATAACGATATAATCAGAAAAGTATTTATATATGTTTTCTTGGTGGCTTTTGGTATTTTCATGATATATCCTTTACTTTGGGTTTTTGCATCATCATTTAAATCAAATGATGAAATCTTTAAATCGATAAGCCTTATACCAAAACACATTGTGACAAATTCATATTTTGAAGGATGGAAAGGTACGGGACAATACTCTTTTGGTACATTTATTTTAAACAGCATTACGCTTGTTGTACCTGTTGTTGTATTTACTGCTATATCATCAACAATTGTAGCCTATGGATTTGCAAGATTTGAGTTTCCGCTTAAAACTATTTTGTTTACTTTGATGATATCTACTATGATGTTGCCGGGCACTGCAGTTTTGATACCAAGATATATATTGTTTAATTGGTTAGGCTGGATAAACACTTATAAACCATTTATTGTTCCCGCTTTGTTCGGAACAACGCCTTTTTTCATTTTTATGATGGTTCAATTTTTGAGAGGTCTTCCTAAAGAATTAGAAGAATCGGCTACAATTGATGGTTGCAATTCATTTCAAATACTTATGAAGATTTTAATACCATTGTGTAAACCTGCAATTATTTCTATGTGTATATTTCAGTTCATTTGGACTTGGAATGACTTTTTTAATCCATTGATATATATCAACAGTGTAGAAAAATATACAGTTTCTCTCGGGCTTAATATGACAATTGATGGGACTTCAGTTGTAAATTGGAACCAAATAATGGCAATGACAATTATTTCAATGATACCGAGCATCATAATATTTTTTTCAGCGCAAAAATACTTCGTTGAAGGTATTGCAACAACTGGATTAAAGAACTAA

or200

SEQ ID NO：118：

MRYTDGKVHDITIAYIGGGSRGWAWNLMTDLAKEESISGTVKLYDIDYDAAHDNEIIGNALSMRQDVKGKWLYKACETLEESLKGADFVIISILPGTFDEMESDVHAPEKYGIYQSVGDTVGPGGIVRALRTIPMFVDIANAIKEHCPDAWVINYTNPMTLCVRTLYEIFPQIKAFGCCHEVFGTQKLLSRALQDIEGIENVPREEIKINVLGINHFTWIDNARYKDIDLMYVYKQFVNKYYESGFVSDANNNWMNNSFVSAERVKFDLFLRYGVIAAAGDRHLAEFVPGYWYLKDPETVREWMFGLTTVSWRKEDLKRRLERSKRLKTGEEKFELKETGEEGVRQIKALLGLGDLVTNVNMPNHGQIEGIPYGAVVETNALFSGNKLKPVLSGKLPDNVNSLVLRQVYNQETTLKAALKRDFDLAFSAFVNDPLVTISLKDAKKLFKEMLENTKKYLDGWKIKA

SEQ ID NO：119：

ATGAGATATACAGATGGAAAGGTTCATGACATTACTATTGCTTATATCGGTGGTGGTTCAAGAGGATGGGCGTGGAATTTAATGACTGACTTAGCAAAAGAGGAAAGTATTTCTGGTACAGTAAAGTTATACGACATAGATTACGATGCGGCACATGACAATGAGATAATAGGCAATGCTTTATCAATGAGACAGGATGTTAAAGGCAAATGGCTTTATAAAGCTTGTGAGACGTTAGAAGAGTCACTAAAAGGTGCTGATTTTGTCATAATATCTATTTTGCCAGGTACGTTCGACGAGATGGAATCTGATGTTCATGCACCAGAAAAGTATGGCATTTATCAGTCAGTAGGTGATACAGTAGGACCTGGTGGAATAGTCAGAGCTTTAAGGACGATTCCGATGTTTGTGGACATTGCCAATGCGATTAAAGAGCATTGTCCAGATGCATGGGTCATAAATTATACAAATCCTATGACACTTTGTGTAAGGACATTGTATGAAATTTTCCCTCAAATTAAAGCATTTGGATGCTGCCATGAAGTTTTTGGCACACAGAAGCTATTATCTCGTGCTCTGCAGGATATAGAAGGCATTGAAAATGTTCCGAGGGAAGAGATAAAGATAAATGTTTTAGGTATAAATCATTTTACGTGGATCGACAATGCAAGGTACAAAGACATAGATTTAATGTATGTTTATAAACAATTTGTGAATAAGTACTATGAAAGCGGATTTGTCAGCGATGCTAACAATAATTGGATGAACAATTCATTTGTATCTGCAGAGAGAGTAAAGTTTGATCTGTTTTTGAGGTATGGAGTAATAGCTGCAGCGGGAGATAGACATCTGGCGGAATTTGTGCCGGGATATTGGTATTTAAAAGATCCAGAGACAGTCAGAGAATGGATGTTTGGCTTAACGACTGTAAGTTGGAGAAAAGAAGACTTAAAACGCAGGCTTGAAAGAAGTAAAAGGCTTAAGACAGGTGAGGAAAAATTTGAGTTAAAGGAAACAGGCGAAGAAGGTGTTAGGCAAATTAAAGCACTATTAGGCTTAGGCGATTTAGTGACTAATGTCAACATGCCGAACCATGGACAGATTGAAGGAATACCATACGGTGCGGTAGTTGAAACAAACGCTTTATTTTCAGGTAATAAACTAAAGCCTGTATTATCAGGAAAATTGCCTGACAATGTAAACAGCCTCGTGTTAAGGCAAGTATACAACCAAGAAACGACGTTGAAAGCTGCTTTAAAGAGAGATTTTGATTTGGCTTTTAGTGCTTTTGTAAATGATCCACTTGTTACAATATCTTTAAAAGATGCAAAAAAATTATTTAAGGAAATGCTTGAAAATACGAAGAAATATCTAGATGGATGGAAAATAAAAGCTTGA

非天然蛋白

EC 2.3.1.9

丙酮丁醇梭菌ThlA(SEQ ID NO：120)

MKEVVIASAVRTAIGSYGKSLKDVPAVDLGATAIKEAVKKAGIKPEDVNEVILGNVLQAGLGQNPARQASFKAGLPVEIPAMTINKVCGSGLRTVSLAAQIIKAGDADVIIAGGMENMSRAPYLANNARWGYRMGNAKFVDEMITDGLWDAFNDYHMGITAENIAERWNISREEQDEFALASQKKAEEAIKSGQFKDEIVPVVIKGRKGETVVDTDEHPRFGSTIEGLAKLKPAFKKDGTVTAGNASGLNDCAAVLVIMSAEKAKELGVKPLAKIVSYGSAGVDPAIMGYGPFYATKAAIEKAGWTVDELDLIESNEAFAAQSLAVAKDLKFDMNKVNVNGGAIALGHPIGASGARILVTLVHAMQKRDAKKGLATLCIGGGQGTAILLEKC

EC 2.8.3.8

丙酮丁醇梭菌CtfAB

CtfA(SEQ ID NO：121)

MNSKIIRFENLRSFFKDGMTIMIGGFLNCGTPTKLIDFLVNLNIKNLTIISNDTCYPNTGIGKLISNNQVKKLIASYIGSNPDTGKKLFNNELEVELSPQGTLVERIRAGGSGLGGVLTKTGLGTLIEKGKKKISINGTEYLLELPLTADVALIKGSIVDEAGNTFYKGTTKNFNPYMAMAAKTVIVEAENLVSCEKLEKEKAMTPGVLINYIVKEPA

CtfB(SEQ ID NO：122)

MINDKNLAKEIIAKRVARELKNGQLVNLGVGLPTMVADYIPKNFKITFQSENGIVGMGASPKINEADKDVVNAGGDYTTVLPDGTFFDSSVSFSLIRGGHVDVTVLGALQVDEKGNIANWIVPGKMLSGMGGAMDLVNGAKKVIIAMRHTNKGQPKILKKCTLPLTAKSQANLIVTELGVIEVINDGLLLTEINKNTTIDEIRSLTAADLLISNELRPMAV

EC 4.1.1.4

丙酮丁醇梭菌Adc，Aad

Adc(SEQ ID NO：123)

MLKDEVIKQISTPLTSPAFPRGPYKFHNREYFNIVYRTDMDALRKVVPEPLEIDEPLVRFEIMAMHDTSGLGCYTESGQAIPVSFNGVKGDYLHMMYLDNEPAIAVGRELSAYPKKLGYPKLFVDSDTLVGTLDYGKLRVATATMGYKHKALDANEAKDQICRPNYMLKIIPNYDGSPRICELINAKITDVTVHEAWTGPTRLQLFDHAMAPLNDLPVKEIVSSSHILADIILPRAEVIYDYLK

Aad(SEQ ID NO：124)

MLKDEVIKQISTPLTSPAFPRGPYKFHNREYFNIVYRTDMDALRKVVPEPLEIDEPLVRFEIMAMHDTSGLGCYTESGQAIPVSFNGVKGDYLHMMYLDNEPAIAVGRELSAYPKKLGYPKLFVDSDTLVGTLDYGKLRVATATMGYKHKALDANEAKDQICRPNYMLKIIPNYDGSPRICELINAKITDVTVHEAWTGPTRLQLFDHAMAPLNDLPVKEIVSSSHILADIILPRAEVIYDYLK

EC 1.2.1.43甲酸脱氢酶(热乙酸菌)Moth_2312(SEQ IDNO：125)

MVNLTIDGQRVTAPEGMTILEVARENGIHIPTLCHHPKLRPLGYCRLCLVDIEGAAKPMTACNTPVAEGMVIRTSTPVIEEMRKGIIEMLLSLHPEDCLTCEKAGNCQLQDCAYTYGVKHGELPVKREELPVLKENPFIVRDYNKCIVCGRCVRACQEVQVQRVVDLVGKGSAARVGATKAGAEVSLEEGGCVFCGNCVQVCPVGALTEKAGLGQGREWEFKKVRSICSYCGVGCNLTLYVKDGKVVKVRGYENPEVNNGWLCVKGRFGFDYIHNPDRITRPLIREGDREKGYFREASWEEALALVSQKLTQIKGSYGSEALGFLCSAKCTNEENYLLQKLARGVLGTNNVDHCARLHSSTVAGLATTFGSGAMTNSIADIASADCIFVIGSNTTENHPVIALKVKEAVRRGARLIVADPRRIELVNFSYLWLRQKPGTDLALLNGLLHVIIKEELYDKEFIAQRTEGFEALKLAVEEYTPAKVSEVTGVPAGDIIEAARTYARGPSSTILYAMGITQHITGTANVMALANLAMACGQVGKEGSGVNPLRGQSNVQGACDMGGLPNVLPGYQPVTDPGVRHKFSEAWGVPDLPGEPGLTLMEMMAAAQEGKLKGMYILGENPVLTDPDVSHVKEALKNLEFLVVQDIFLTETARMADVVLPGASFAEKEGTFTSTERRVQLLHKAIEPPGEARPDWLILNDLLLLMGYPRKYSSPGEIMQEIAGLTPSYAGITYERLEDKGLQWPVLSLEHPGTPVLHREKFSRGYGQFQVVHYRPPAEEPDEEYPFLFTTGRNLYHYHTVISRKSRGLEEMCPAPVVEINDNDAARLGIREGEMIEIVSRRGKVRVKALVTDRIPRGQVFMNFHFHEAAANLLTIAALDPVAKIPEYKTCAVAIKVKK

用于酿酒酵母工程化的蛋白序列

EC 4.2.3.3

稻-mgs(SEQ ID NO：126)

MELTTRTIAERKHIALVAHDHRKQALLEWVESHKTILAQHQLYATGTTGNLIQRASGIPVTSMLSGPMGGDQQVGALIAEGKIDMLIFFWDPLNAVPHDPDVKALLRLATVWNIPVATNRSTADFLIDSPLFKSEVAIAIPDYQRYLQDRLK

EC 2.3.1.8

解糖热厌氧杆菌-or1741(SEQ ID NO：127)

MKTSELLAMVVEKGASDLHITVGVPPVLRINGQLIKLNLPQLTPQDTEEITKDLLSSDELKKLEDMGDIDLSYSVKGLGRFRINAYKQRGTYSLAIRSVALRIPTIDELGLPEVIKELALKTRGLIIVTGPTGSGKSTTLASMIDLINEERNCHILTLEDPIEYLHKHKKSIVNQREIGHDAASYASALRAALREDPDVILVGEMRDLETIQIAITAAETGHLVLSTLHTIGSAKTIDRIIDVFPPHQQQQIKVQLSNVLEGIVSQQLLPKIDNSGRVVAVEVMIATPAIRNLIREGKSFQIQSMVQTGNKFGMVTMDMWISQLLKRNLISMDDALTYCVDRENFSRLVV

EC 1.1.1.6

恶臭假单胞菌gldA(SEQ ID NO：128)

MDRAIQSPGKYVQGADALQRLGDYLKPLADSWLVIADKFVLGFAEDTIRQSLSKAGLAMDIVAFNGECSQGEVDRLCQLATQNGRSAIVGIGGGKTLDTAKAVAFFQKVPVAVAPTIASTDAPCSALSVLYTDEGEFDRYLMLPTNPALVVVDTAIVARAPARLLAAGIGDALATWFEARAASRSSAATMAGGPATQTALNLARFCYDTLLEEGEKAMLAVQAQVVTPALERIVEANTYLSGVGFESGGVAAAHAVHNGLTAVAETHHFYHGEKVAFGVLVQLALENASNAEMQEVMSLCHAVGLPITLAQLDITEDIPTKMRAVAELACAPGETIHNMPGGVTVEQVYGALLVADQLGQHFLEF

EC 2.7.2.1

解糖热厌氧杆菌or1742(SEQ ID NO：129)

MIKKKLGDLLVEVGLLDESQLNNAIKIQKKTGEKLGKILVKEGYLTEEQIIEALEFQLGIPHIDMKKVFIDANVAKLIPESMAKRHVAIPIKKENNSIFVAMADPLNIFAIDDIKLVTKLDVKPLIASEDGILKAIDRVFGKEEAERAVQDFKKELSHDSAEDDGNLLRDISEDEINNAPAVRLVNSIIEQAVKNRASDVHIEPTENDLRIRFRIDGELHEAMRVFKSTQGPVITRIKIMANMNIAERRIPQDGKIEMNAGGKNIDIRVSSLPTIYGEKLVLRILDKSGYIITKDKLGLGNDDLKLFDNLLKHPNGIILLTGPTGSGKTTTLYAMLNELNKPDKNIITVEDPVEYTLEGLNQVQVNEKAGLTFASALRSILRQDPDIIMIGEIRDRETAEIAIRSSITGHLVLSTLHTNDSAGAITRLIDMGIEPYLVSSSVVGVIAQRLARKICDNCKIEYDASKREKIILGIDADESLKLYRSKGCAVCNKTGYRGRVPIYEIMMMTPKIKELTNEKAPADVILNEAVSNGMSTLKESAKKLVLSGVTTVDEMLRLTYDDAY

EC 2.8.3.8

丙酮丁醇梭菌CtfAB

CtfA(SEQ ID NO：130)

MNSKIIRFENLRSFFKDGMTIMIGGFLNCGTPTKLIDFLVNLNIKNLTIISNDTCYPNTGIGKLISNNQVKKLIASYIGSNPDTGKKLFNNELEVELSPQGTLVERIRAGGSGLGGVLTKTGLGTLIEKGKKKISINGTEYLLELPLTADVALIKGSIVDEAGNTFYKGTTKNFNPYMAMAAKTVIVEAENLVSCEKLEKEKAMTPGVLINYIVKEPA

CtfB(SEQ ID NO：131)

MINDKNLAKEIIAKRVARELKNGQLVNLGVGLPTMVADYIPKNFKITFQSENGIVGMGASPKINEADKDVVNAGGDYTTVLPDGTFFDSSVSFSLIRGGHVDVTVLGALQVDEKGNIANWIVPGKMLSGMGGAMDLVNGAKKVIIAMRHTNKGQPKILKKCTLPLTAKSQANLIVTELGVIEVINDGLLLTEINKNTTIDEIRSLTAADLLISNELRPMAV

EC 4.1.1.4

丙酮丁醇梭菌-Adc(SEQ ID NO：132)

MLKDEVIKQISTPLTSPAFPRGPYKFHNREYFNIVYRTDMDALRKVVPEPLEIDEPLVRFEIMAMHDTSGLGCYTESGQAIPVSFNGVKGDYLHMMYLDNEPAIAVGRELSAYPKKLGYPKLFVDSDTLVGTLDYGKLRVATATMGYKHKALDANEAKDQICRPNYMLKIIPNYDGSPRICELINAKITDVTVHEAWTGPTRLQLFDHAMAPLNDLPVKEIVSSSHILADIILPRAEVIYDYLK

EC 2.3.1.54

大肠杆菌-pflA(SEQ ID NO：133)

MSVIGRIHSFESCGTVDGPGIRFITFFQGCLMRCLYCHNRDTWDTHGGKEVTVEDLMKEVVTYRHFMNASGGGVTASGGEAILQAEFVRDWFRACKKEGIHTCLDTNGFVRRYDPVIDELLEVTDLVMLDLKQMNDEIHQNLVGVSNHRTLEFAKYLANKNVKVWIRYVVVPGWSDDDDSAHRLGEFTRDMGNVEKIELLPYHELGKHKWVAMGEEYKLDGVKPPKKETMERVKGILEQYGHKVMF

EC 2.3.1.54

大肠杆菌-pflB(SEQ ID NO：134)

MSELNEKLATAWEGFTKGDWQNEVNVRDFIQKNYTPYEGDESFLAGATEATTTLWDKVMEGVKLENRTHAPVDFDTAVASTITSHDAGYINKQLEKIVGLQTEAPLKRALIPFGGIKMIEGSCKAYNRELDPMIKKIFTEYRKTHNQGVFDVYTPDILRCRKSGVLTGLPDAYGRGRIIGDYRRVALYGIDYLMKDKLAQFTSLQADLENGVNLEQTIRLREEIAEQHRALGQMKEMAAKYGYDISGPATNAQEAIQWTYFGYLAAVKSQNGAAMSFGRTSTFLDVYIERDLKAGKITEQEAQEMVDHLVMKLRMVRFLRTPEYDELFSGDPIWATESIGGMGLDGRTLVTKNSFRFLNTLYTMGPSPEPNMTILWSEKLPLNFKKFAAKVSIDTSSLQYENDDLMRPDFNNDDYAIACCVSPMIVGKQMQFFGARANLAKTMLYAINGGVDEKLKMQVGPKSEPIKGDVLNYDEVMERMDHFMDWLAKQYITALNIIHYMHDKYSYEASLMALHDRDVIRTMACGIAGLSVAADSLSAIKYAKVKPIRDEDGLAIDFEIEGEYPQFGNNDPRVDDLAVDLVERFMKKIQKLHTYRDAIPTQSVLTITSNVVYGKKTGNTPDGRRAGAPFGPGANPMHGRDQKGAVASLTSVAKLPFAYAKDGISYTFSIVPNALGKDDEVRKTNLAGLMDGYFHHEASIEGGQHLNVNVMNREMLLDAMENPEKYPQLTIRVSGYAVRFNSLTKEQQQDVITRTFTQSM

EC 2.3.1.9

酿酒酵母ERG10(SEQ ID NO：135)

MSQNVYIVSTARTPIGSFQGSLSSKTAVELGAVALKGALAKVPELDASKDFDEIIFGNVLSANLGQAPARQVALAAGLSNHIVASTVNKVCASAMKAIILGAQSIKCGNADVVVAGGCESMTNAPYYMPAARAGAKFGQTVLVDGVERDGLNDAYDGLAMGVHAEKCARDWDITREQQDNFAIESYQKSQKSQKEGKFDNEIVPVTIKGFRGKPDTQVTKDEEPARLHVEKLRSARTVFQKENGTVTAANASPINDGAAAVILVSEKVLKEKNLKPLAIIKGWGEAAHQPADFTWAPSLAVPKALKHAGIEDINSVDYFEFNEAFSVVGLVNTKILKLDPSKVNVYGGAVALGHPLGCSGARVVVTLLSILQQEGGKIGVAAICNGGGGASSIVIEKI

EC 1.1.1.1

酿酒酵母ADH1(SEQ ID NO：136)

MSIPETQKGVIFYESHGKLEYKDIPVPKPKANELLINVKYSGVCHTDLHAWHGDWPLPVKLPLVGGHE GAGVVVGMGENVKGWKIGDYAGIKWLNGSCMACEYCELGNESNCPHADLSGYTHDGSFQQYATADAVQAAHIPQGTDLAQVAPILCAGITVYKALKSANLMAGHWVAISGAAGGLGSLAVQYAKAMGYRVLGIDGGEGKEELFRSIGGEVFIDFTKEKDIVGAVLKATDGGAHGVINVSVSEAAIEASTRYVRANGTTVLVGMPAGAKCCSDVFNQVVKSISIVGSYVGNRADTREALDFFARGLVKSPIKVVGLSTLPEIYEKMEKGQIVGRYVVDTSK

EC 1.1.1.1

酿酒酵母ADH2(SEQ ID NO：137)

MSIPETQKAIIFYESNGKLEHKDIPVPKPKPNELLINVKYSGVCHTDLHAWHGDWPLPTKLPLVGGHEGAGVVVGMGENVKGWKIGDYAGIKWLNGSCMACEYCELGNESNCPHADLSGYTHDGSFQEYATADAVQAAHIPQGTDLAEVAPILCAGITVYKALKSANLRAGHWAAISGAAGGLGSLAVQYAKAMGYRVLGIDGGPGKEELFTSLGGEVFIDFTKEKDIVSAVVKATNGGAHGIINVSVSEAAIEASTRYCRANGTVVLVGLPAGAKCSSDVFNHVVKSISIVGSYVGNRADTREALDFFARGLVKSPIKVVGLSSLPEIYEKMEKGQIAGRYVVDTSK

EC 1.1.1.1

酿酒酵母ADH3(SEQ ID NO：138)

MLRTSTLFTRRVQPSLFSRNILRLQSTAAIPKTQKGVIFYENKGKLHYKDIPVPEPKPNEILINVKYSGVCHTDLHAWHGDWPLPVKLPLVGGHEGAGVVVKLGSNVKGWKVGDLAGIKWLNGSCMTCEFCESGHESNCPDADLSGYTHDGSFQQFATADAIQAAKIQQGTDLAEVAPILCAGVTVYKALKEADLKAGDWVAISGAAGGLGSLAVQYATAMGYRVLGIDAGEEKEKLFKKLGGEVFIDFTKTKNMVSDIQEATKGGPHGVINVSVSEAAISLSTEYVRPCGTVVLVGLPANAYVKSEVFSHVVKSINIKGSYVGNRADTREALDFFSRGLIKSPIKIVGLSELPKVYDLMEKGKILGRYVVDTSK

EC 1.1.1.1

酿酒酵母ADH4(SEQ ID NO：139)

MSSVTGFYIPPISFFGEGALEETADYIKNKDYKKALIVTDPGIAAIGLSGRVQKMLEERDLNVAIYDKTQPNPNIANVTAGLKVLKEQNSEIVVSIGGGSAHDNAKAIALLATNGGEIGDYEGVNQSKKAALPLFAINTTAGTASEMTRFTIISNEEKKIKMAIIDNNVTPAVAVNDPSTMFGLPPALTAATGLDALTHCIEAYVSTASNPITDACALKGIDLINESLVAAYKDGKDKKARTDMCYAEYLAGMAFNNASLGYVHALAHQLGGFYHLPHGVCNAVLLPHVQEANMQCPKAKKRLGEIALHFGASQEDPEETIKALHVLNRTMNIPRNLKELGVKTEDFEILAEHAMHDACHLTNPVQFTKEQVVAIIKKAYEY

EC 1.1.1.1

酿酒酵母ADH5(SEQ ID NO：140)

MPSQVIPEKQKAIVFYETDGKLEYKDVTVPEPKPNEILVHVKYSGVCHSDLHAWHGDWPFQLKFPLIGGHEGAGVVVKLGSNVKGWKVGDFAGIKWLNGTCMSCEYCEVGNESQCPYLDGTGFTHDGTFQEYATADAVQAAHIPPNVNLAEVAPILCAGITVYKALKRANVIPGQWVTISGACGGLGSLAIQYALAMGYRVIGIDGGNAKRKLFEQLGGEIFIDFTEEKDIVGAIIKATNGGSHGVINVSVSEAAIEASTRYCRPNGTVVLVGMPAHAYCNSDVFNQVVKSISIVGSCVGNRADTREALDFFARGLIKSPIHLAGLSDVPEIFAKMEKGEIVGRYVVETSK

EC 1.1.1.1

酿酒酵母ADH6(SEQ ID NO：141)

MSYPEKFEGIAIQSHEDWKNPKKTKYDPKPFYDHDIDIKIEACGVCGSDIHCAAGHWGNMKMPLVVGHEIVGKVVKLGPKSNSGLKVGQRVGVGAQVFSCLECDRCKNDNEPYCTKFVTTYSQPYEDGYVSQGGYANYVRVHEHFVVPIPENIPSHLAAPLLCGGLTVYSPLVRNGCGPGKKVGIVGLGGIGSMGTLISKAMGAETYVISRSSRKREDAMKMGADHYIATLEEGDWGEKYFDTFDLIVVCASSLTDIDFNIMPKAMKVGGRIVSISIPEQHEMLSLKPYGLKAVSISYSALGSIKELNQLLKLVSEKDIKIWVETLPVGEAGVHEAFERMEKGDVRYRFTLVGYDKEFSD

EC 1.1.1.1

酿酒酵母ADH7(SEQ ID NO：142)

MLYPEKFQGIGISNAKDWKHPKLVSFDPKPFGDHDVDVEIEACGICGSDFHIAVGNWGPVPENQILGHEIIGRVVKVGSKCHTGVKIGDRVGVGAQALACFECERCKSDNEQYCTNDHVLTMWTPYKDGYISQGGFASHVRLHEHFAIQIPENIPSPLAAPLLCGGITVFSPLLRNGCGPGKRVGIVGIGGIGHMGILLAKAMGAEVYAFSRGHSKREDSMKLGADHYIAMLEDKGWTEQYSNALDLLVVCSSSLSKVNFDSIVKIMKIGGSIVSIAAPEVNEKLVLKPLGLMGVSISSSAIGSRKEIEQLLKLVSEKNVKIWVEKLPISEEGVSHAFTRMESGDVKYRFTLVDYDKKFHK

EC 1.1.1.1

酿酒酵母BDH2(SEQ ID NO：143)

MRALAYFGKGNIRFTNHLKEPHIVAPDELVIDIEWCGICGTDLHEYTDGPIFFPEDGHTHEISHNPLPQAMGHEMAGTVLEVGPGVKNLKVGDKVVVEPTGTCRDRYRWPLSPNVDKEWCAACKKGYYNICSYLGLCGAGVQSGGFAERVVMNESHCYKVPDFVPLDVAALIQPLAVCWHAIRVCEFKAGSTALIIGAGPIGLGTILALNAAGCKDIVVSEPAKVRRELAEKMGARVYDPTAHAAKESIDYLRSIADGGDGFDYTFDCSGLEVTLNAAIQCLTFRGTAVNLAMWGHHKIQFSPMDITLHERKYTGSMCYTHHDFEAVIEALEEGRIDIDRARHMITGRVNIEDGLDGAIMKLINEKESTIKIILTPNNHGELNREADNEKKEISELSSRKDQERLRESINEAKLRHT

EC 1.1.1.1

酿酒酵母SFA1(SEQ ID NO：144)

MSAATVGKPIKCIAAVAYDAKKPLSVEEITVDAPKAHEVRIKIEYTAVCHTDAYTLSGSDPEGLFPCVLGHEGAGIVESVGDDVITVKPGDHVIALYTAECGKCKFCTSGKTNLCGAVRATQGKGVMPDGTTRFHNAKGEDIYHFMGCSTFSEYTVVADVSVVAIDPKAPLDAACLLGCGVTTGFGAALKTANVQKGDTVAVFGCGTVGLSVIQGAKLRGASKIIAIDINNKKKQYCSQFGATDFVNPKEDLAKDQTIVEKLIEMTDGGLDFTFDCTGNTKIMRDALEACHKGWGQSIIIGVAAAGEEISTRPFQLVTGRVWKGSAFGGIKGRSEMGGLIKDYQKGALKVEEFITHRRPFKEINQAFEDLHNGDCLRTVLKSDEIK

EC 1.1.1.1

酿酒酵母YPL088W(SEQ ID NO：145)

MVLVKQVRLGNSGLKISPIVIGCMSYGSKKWADWVIEDKTQIFKIMKHCYDKGLRTFDTADFYSNGLSERIIKEFLEYYSIKRETVVIMTKIYFPVDETLDLHHNFTLNEFEELDLSNQRGLSRKHIIAGVENSVKRLGTYIDLLQIHRLDHETPMKEIMKALNDVVEAGHVRYIGASSMLATEFAELQFTADKYGWFQFISSQSYYNLLYREDERELIPFAKRHNIGLLPWSPNARGMLTRPLNQSTDRIKSDPTFKSLHLDNLEEEQKEIINRVEKVSKDKKVSMAMLSIAWVLHKGCHPIVGLNTTARVDEAIAALQVTLTEEEIKYLEEPYKPQRQRC*

EC 4.1.2.13

酿酒酵母FBA1(SEQ ID NO：146)

MGVEQILKRKTGVIVGEDVHNLFTYAKEHKFAIPAINVTSSSTAVAALEAARDSKSPIILQTSNGGAAYFAGKGISNEGQNASIKGAIAAAHYIRSIAPAYGIPVVLHSDHCAKKLLPWFDGMLEADEAYFKEHGEPLFSSHMLDLSEETDEENISTCVKYFKRMAAMDQWLEMEIGITGGEEDGVNNENADKEDLYTKPEQVYNVYKALHPISPNFSIAAAFGNCHGLYAGDIALRPEILAEHQKYTREQVGCKEEKPLFLVFHGGSGSTVQEFHTGIDNGVVKVNLDTDCQYAYLTGIRDYVLNKKDYIMSPVGNPEGPEKPNKKFFDPRVWVREGEKTMGAKITKSLETFRTTNTL

EC 5.3.1.1

酿酒酵母TPI1(SEQ ID NO：147)

MARTFFVGGNFKLNGSKQSIKEIVERLNTASIPENVEVVICPPATYLDYSVSLVKKPQVTVGAQNAYLKASGAFTGENSVDQIKDVGAKWVILGHSERRSYFHEDDKFIADKTKFALGQGVGVILCIGETLEEKKAGKTLDVVERQLNAVLEEVKDWTNVVVAYEPVWAIGTGLAATPEDAQDIHASIRKFLASKLGDKAASELRILYGGSANGSNAVTFKDKADVDGFLVGGASLKPEFVDIINSRN

EC 1.2.1.2

酿酒酵母FDH1(SEQ ID NO：148)

MSKGKVLLVLYEGGKHAEEQEKLLGCIENELGIRNFIEEQGYELVTTIDKDPEPTSTVDRELKDAEIVITTPFFPAYISRNRIAEAPNLKLCVTAGVGSDHVDLEAANERKITVTEVTGSNVVSVAEHVMATILVLIRNYNGGHQQAINGEWDIAGVAKNEYDLEDKIISTVGAGRIGYRVLERLVAFNPKKLLYYDYQELPAEAINRLNEASKLFNGRGDIVQRVEKLEDMVAQSDVVTINCPLHKDSRGLFNKKLISHMKDGAYLVNTARGAICVAEDVAEAVKSGKLAGYGGDVWDKQPAPKDHPWRTMDNKDHVGNAMTVHISGTSLDAQKRYAQGVKNILNSYFSKKFDYRPQDIIVQNGSYATRAYGQKK

EC 1.1.1.21

酿酒酵母GRE3(SEQ ID NO：149)

MSSLVTLNNGLKMPLVGLGCWKIDKKVCANQIYEAIKLGYRLFDGACDYGNEKEVGEGIRKAISEGLVSRKDIFVVSKLWNNFHHPDHVKLALKKTLSDMGLDYLDLYYIHFPIAFKYVPFEEKYPPGFYTGADDEKKGHITEAHVPIIDTYRALEECVDEGLIKSIGVSNFQGSLIQDLLRGCRIKPVALQIEHHPYLTQEHLVEFCKLHDIQVVAYSSFGPQSFIEMDLQLAKTTPTLFENDVIKKVSQNHPGSTTSQVLLRWATQRGIAVIPKSSKKERLLGNLEIEKKFTLTEQELKDISALNANIRFNDPWTWLDGKFPTFA

EC 1.1.1.79

酿酒酵母GOR1(SEQ ID NO：150)

MSKKPIVLKLGKDAFGDQAWGELEKIADVITIPESTTREQFLREVKDPQNKLSQVQVITRTARSVKNTGRFDEELALALPSSVVAVCHTGAGYDQIDVEPFKKRHIQVANVPDLVSNATADTHVFLLLGALRNFGIGNRRLIEGNWPEAGPACGSPFGYDPEGKTVGILGLGRIGRCILERLKPFGFENFIYHNRHQLPSEEEHGCEYVGFEEFLKRSDIVSVNVPLNHNTHHLINAETIEKMKDGVVIVNTARGAVIDEQAMTDALRSGKIRSAGLDVFEYEPKISKELLSMSQVLGLPHMGTHSVETRKKMEELVVENAKNVILTGKVLTIVPELQNEDWPNESKPLV

EC 1.1.1.79

酿酒酵母YPL113C(SEQ ID NO：151)

MITSIDIADVTYSAKPRILVPYKTQWEVASHLPEYRKLAERVEFYKYEMSTKDDFVKFLETHRINGFWLTEEFFTVLGNPSSYIEFFPASLKVILVPWVGCDFIDGKLLRSKGITLCNIGPHAADHVTELAIFLAISCFRMTSFWEYCFKYVENGNVEQCKKYISSDSYEIVTDSYHGQEMKFPSRTDKCKPNKDRKVVHLAEKYTVGGKKMESPMNKKVLILGFGSIGQNIGSNLHKVFNMSIEYYKRTGPVQKSLLDYNAKVHSDLDDPNTWKNADLIILALPSTASTNNIINRKSLAWCKDGVRIVNVGRGTCIDEDVLLDALESGKVASCGLDVFKNEETRVKQELLRRWDVTALPHIGSTVADMVIKQTLITLENVQDIFVEGGDGKYVLN

EC 1.2.1.49

酿酒酵母GCY1(SEQ ID NO：152)

MPATLHDSTKILSLNTGAQIPQIGLGTWQSKENDAYKAVLTALKDGYRHIDTAAIYRNEDQVGQAIKDSGVPREEIFVTTKLWCTQHHEPEVALDQSLKRLGLDYVDLYLMHWPARLDPAYIKNEDILSVPTKKDGSRAVDITNWNFIKTWELMQELPKTGKTKAVGVSNFSINNLKDLLASQGNKLTPAANQVEIHPLLPQDELINFCKSKGIVVEAYSPLGSTDAPLLKEPVILEIAKKNNVQPGHVVISWHVQRGYVVLPKSVNPDRIKTNRKIFTLSTEDFEAINNISKEKGEKRVVHPNWSPFEVFK

EC 1.2.1.49

酿酒酵母ALD2(SEQ ID NO：153)

MPTLYTDIEIPQLKISLKQPLGLFINNEFCPSSDGKTIETVNPATGEPITSFQAANEKDVDKAVKAARAAFDNVWSKTSSEQRGIYLSNLLKLIEEEQDTLAALETLDAGKPYSNAKGDLAQILQLTRYFAGSADKFDKGATIPLTFNKFAYTLKVPFGVVAQIVPWNYPLAMACWKLQGALAAGNTVIIKPAENTSLSLLYFATLIKKAGFPPGVVNIVPGYGSLVGQALASHMDIDKISFTGSTKVGGFVLEASGQSNLKDVTLECGGKSPALVFEDADLDKAIDWIAAGIFYNSGQNCTANSRVYVQSSIYDKFVEKFKETAKKEWDVAGKFDPFDEKCIVGPVISSTQYDRIKSYIERGKREEKLDMFQTSEFPIGGAKGYFIPPTIFTDVPQTSKLLQDEIFGPVVVVSKFTNYDDALKLANDTCYGLASAVFTKDVKKAHMFARDIKAGTVWINSSNDEDVTVPFGGFKMSGIGRELGQSGVDTYLQTKAVHINLSLDN

EC 1.2.1.49

酿酒酵母ALD3(SEQ ID NO：154)

MPTLYTDIEIPQLKISLKQPLGLFINNEFCPSSDGKTIETVNPATGEPITSFQAANEKDVDKAVKAARAAFDNVWSKTSSEQRGIYLSNLLKLIEEEQDTLAALETLDAGKPFHSNAKQDLAQIIELTRYYAGAVDKFNMGETIPLTFNKFAYTLKVPFGVVAQIVPWNYPLAMACRKMQGALAAGNTVIIKPAENTSLSLLYFATLIKKAGFPPGVVNVIPGYGSVVGKALGTHMDIDKISFTGSTKVGGSVLEASGQSNLKDITLECGGKSPALVFEDADLDKAIEWVANGIFFNSGQICTANSRVYVQSSIYDKFVEKFKETAKKEWDVAGKFDPFDEKCIVGPVISSTQYDRIKSYIERGKKEEKLDMFQTSEFPIGGAKGYFIPPTIFTDVPETSKLLRDEIFGPVVVVSKFTNYDDALKLANDTCYGLASAVFTKDVKKAHMFARDIKAGTVWINQTNQEEAKVPFGGFKMSGIGRESGDTGVDNYLQIKSVHVDLSLDK

EC 1.2.1.49

酿酒酵母ALD4(SEQ ID NO：155)

MFSRSTLCLKTSASSIGRLQLRYFSHLPMTVPIKLPNGLEYEQPTGLFINNKFVPSKQNKTFEVINPSTEEEICHIYEGREDDVEEAVQAADRAFSNGSWNGIDPIDRGKALYRLAELIEQDKDVIASIETLDNGKAISSSRGDVDLVINYLKSSAGFADKIDGRMIDTGRTHFSYTKRQPLGVCGQIIPWNFPLLMWAWKIAPALVTGNTVVLKTAESTPLSALYVSKYIPQAGIPPGVINIVSGFGKIVGEAITNHPKIKKVAFTGSTATGRHIYQSAAAGLKKVTLELGGKSPNIVFADAELKKAVQNIILGIYYNSGEVCCAGSRVYVEESIYDKFIEEFKAASESIKVGDPFDESTFQGAQTSQMQLNKILKYVDIGKNEGATLITGGERLGSKGYFIKPTVFGDVKEDMRIVKEEIFGPVVTVTKFKSADEVINMANDSEYGLAAGIHTSNINTALKVADRVNAGTVWINTYNDFHHAVPFGGFNASGLGREMSVDALQNYLQVKAVRAKLDE

EC 1.2.1.49

酿酒酵母ALD5(SEQ ID NO：156)

MLSRTRAAAPNSRIFTRSLLRLYSQAPLRVPITLPNGFTYEQPTGLFINGEFVASKQKKTFDVINPSNEEKITTVYKAMEDDVDEAVAAAKKAFETKWSIVEPEVRAKALFNLADLVEKHQETLAAIESMDNGKSLFCARGDVALVSKYLRSCGGWADKIYGNVIDTGKNHFTYSIKEPLGVCGQIIPWNFPLLMWSWKIGPALATGNTVVLKPAETTPLSALFASQLCQEAGIPAGVVNILPGSGRVVGERLSAHPDVKKIAFTGSTATGRHIMKVAADTVKKVTLELGGKSPNIVFADADLDKAVKNIAFGIFYNSGEVCCAGSRIYIQDTVYEEVLQKLKDYTESLKVGDPFDEEVFQGAQTSDKQLHKILDYVDVAKSEGARLVTGGARHGSKGYFVKPTVFADVKGDMRIVKEEVFGPIVTVSKFSTVDEVIAMANDSQYGLAAGIHTNDINKAVDVSKRVKAGTVWINTYNNFHQNVPFGGFGQSGIGREMGEAALSNYTQTKSVRIAIDKPIR

EC 1.2.1.49

酿酒酵母ALD6(SEQ ID NO：157)

MTKLHFDTAEPVKITLPNGLTYEQPTGLFINNKFMKAQDGKTYPVEDPSTENTVCEVSSATTEDVEYAIECADRAFHDTEWATQDPRERGRLLSKLADELESQIDLVSSIEALDNGKTLALARGDVTIAINCLRDAAAYADKVNGRTINTGDGYMNFTTLEPIGVCGQIIPWNFPIMMLAWKIAPALAMGNVCILKPAAVTPLNALYFASLCKKVGIPAGVVNIVPGPGRTVGAALTNDPRIRKLAFTGSTEVGKSVAVDSSESNLKKITLELGGKSAHLVFDDANIKKTLPNLVNGIFKNAGQICSSGSRIYVQEGIYDELLAAFKAYLETEIKVGNPFDKANFQGAITNRQQFDTIMNYIDIGKKEGAKILTGGEKVGDKGYFIRPTVFYDVNEDMRIVKEEIFGPVVTVAKFKTLEEGVEMANSSEFGLGSGIETESLSTGLKVAKMLKAGTVWINTYNDFDSRVPFGGVKQSGYGREMGEEVYHAYTEVKAVRIKL

EC 1.2.1.49

酿酒酵母HFD1(SEQ ID NO：158)

MSNDGSKILNYTPVSKIDEIVEISRNFFFEKQLKLSHENNPRKKDLEFRQLQLKKLYYAVKDHEEELIDAMYKDFHRNKIESVLNETTKLMNDILHLIEILPKLIKPRRVSDSSPPFMFGKTIVEKISRGSVLIIAPFNFPLLLAFAPLAAALAAGNTIVLKPSELTPHTAVVMENLLTTAGFPDGLIQVVQGAIDETTRLLDCGKFDLIFYTGSPRVGSIVAEKAAKSLTPCVLELGGKSPTFITENFKASNIKIALKRIFFGAFGNSGQICVSPDYLLVHKSIYPKVIKECESVLNEFYPSFDEQTDFTRMIHEPAYKKAVASINSTNGSKIVPSKISINSDTEDLCLVPPTIVYNIGWDDPLMKQENFAPVLPIIEYEDLDETINKIIEEHDTPLVQYIFSDSQTEINRILTRLRSGDCVVGDTVIHVGITDAPFGGIGTSGYGNYGGYYGFNTFSHERTIFKQPYWNDFTLFMRYPPNSAQKEKLVRFAMERKPWFDRNGNNKWGLRQYFSLSAAVILISTIYAHCSS

EC 2.7.1.2

酿酒酵母GLK1(SEQ ID NO：159)

MSFDDLHKATERAVIQAVDQICDDFEVTPEKLDELTAYFIEQMEKGLAPPKEGHTLASDKGLPMIPAFVTGSPNGTERGVLLAADLGGTNFRICSVNLHGDHTFSMEQMKSKIPDDLLDDENVTSDDLFGFLARRTLAFMKKYHPDELAKGKDAKPMKLGFTFSYPVDQTSLNSGTLIRWTKGFRIADTVGKDVVQLYQEQLSAQGMPMIKVVALTNDTVGTYLSHCYTSDNTDSMTSGEISEPVIGCIFGTGTNGCYMEEINKITKLPQELRDKLIKEGKTHMIINVEWGSFDNELKHLPTTKYDVVIDQKLSTNPGFHLFEKRVSGMFLGEVLRNILVDLHSQGLLLQQYRSKEQLPRHLTTPFQLSSEVLSHIEIDDSTGLRETELSLLQSLRLPTTPTERVQIQKLVRAISRRSAYLAAVPLAAILIKTNALNKRYHGEVEIGCDGSVVEYYPGFRSMLRHALALSPLGAEGERKVHLKIAKDGSGVGAALCALVA

EC 5.3.1.9

酿酒酵母PGI1(SEQ ID NO：160)

MSNNSFTNFKLATELPAWSKLQKIYESQGKTLSVKQEFQKDAKRFEKLNKTFTNYDGSKILFDYSKNLVNDEIIAALIELAKEANVTGLRDAMFKGEHINSTEDRAVYHVALRNRANKPMYVDGVNVAPEVDSVLKHMKEFSEQVRSGEWKGYTGKKITDVVNIGIGGSDLGPVMVTEALKHYAGVLDVHFVSNIDGTHIAETLKVVDPETTLFLIASKTFTTAETITNANTAKNWFLSKTGNDPSHIAKHFAALSTNETEVAKFGIDTKNMFGFESWVGGRYSVWSAIGLSVALYIGYDNFEAFLKGAEAVDNHFTQTPLEDNIPLLGGLLSVWYNNFFGAQTHLVAPFDQYLHRFPAYLQQLSMESNGKSVTRGNVFTDYSTGSILFGEPATNAQHSFFQLVHQGTKLIPSDFILAAQSHNPIENKLHQKMLASNFFAQAEALMVGKDEEQVKAEGATGGLVPHKVFSGNRPTTSILAQKITPATLGALIAYYEHVTFTEGAIWNINSFDQWGVELGKVLAKVIGKELDNSSTISTHDASTNGLINQFKEWM

EC 2.7.1.11

酿酒酵母PFK1(SEQ ID NO：161)

MQSQDSCYGVAFRSIITNDEALFKKTIHFYHTLGFATVKDFNKFKHGENSLLSSGTSQDSLREVWLESFKLSEVDASGFRIPQQEATNKAQSQGALLKIRLVMSAPIDETFDTNETATITYFSTDLNKIVEKFPKQAEKLSDTLVFLKDPMGNNITFSGLANATDSAPTSKDAFLEATSEDEIISRASSDASDLLRQTLGSSQKKKKIAVMTSGGDSPGMNAAVRAVVRTGIHFGCDVFAVYEGYEGLLRGGKYLKKMAWEDVRGWLSEGGTLIGTARSMEFRKREGRRQAAGNLISQGIDALVVCGGDGSLTGADLFRHEWPSLVDELVAEGRFTKEEVAPYKNLSIVGLVGSIDNDMSGTDSTIGAYSALERICEMVDYIDATAKSHSRAFVVEVMGRHCGWLALMAGIATGADYIFIPERAVPHGKWQDELKEVCQRHRSKGRRNNTIIVAEGALDDQLNPVTANDVKDALIELGLDTKVTILGHVQRGGTAVAHDRWLATLQGVDAVKAVLEFTPETPSPLIGILENKIIRMPLVESVKLTKSVATAIENKDFDKAISLRDTEFIELYENFLSTTVKDDGSELLPVSDRLNIGIVHVGAPSAALNAATRAATLYCLSHGHKPYAIMNGFSGLIQTGEVKELSWIDVENWHNLGGSEIGTNRSVASEDLGTIAYYFQKNKLDGLIILGGFEGFRSLKQLRDGRTQHPIFNIPMCLIPATVSNNVPGTEYSLGVDTCLNALVNYTDDIKQSASATRRRVFVCEVQGGHSGYIASFTGLITGAVSVYTPEKKIDLASIREDITLLKENFRHDKGENRNGKLLVRNEQASSVYSTQLLADIISEASKGKFGVRTAIPGHVQQGGVPSSKDRVTASRFAVKCIKFIEQWNKKNEASPNTDAKVLRFKFDTHGEKVPTVEHEDDSAAVICVNGSHVSFKPIANLWENETNVELRKGFEVHWAEYNKIGDILSGRLKLRAEVAALAAENK

EC 2.7.1.11

酿酒酵母PFK2(SEQ ID NO：162)

MTVTTPFVNGTSYCTVTAYSVQSYKAAIDFYTKFLSLENRSSPDENSTLLSNDSISLKILLRPDEKINKNVEAHLKELNSITKTQDWRSHATQSLVFNTSDILAVKDTLNAMNAPLQGYPTELFPMQLYTLDPLGNVVGVTSTKNAVSTKPTPPPAPEASAESGLSSKVHSYTDLAYRMKTTDTYPSLPKPLNRPQKAIAVMTSGGDAPGMNSNVRAIVRSAIFKGCRAFVVMEGYEGLVRGGPEYIKEFHWEDVRGWSAEGGTNIGTARCMEFKKREGRLLGAQHLIEAGVDALIVCGGDGSLTGADLFRSEWPSLIEELLKTNRISNEQYERMKHLNICGTVGSIDNDMSTTDATIGAYSALDRICKAIDYVEATANSHSRAFVVEVMGRNCGWLALLAGIATSADYIFIPEKPATSSEWQDQMCDIVSKHRSRGKRTTIVVVAEGAIAADLTPISPSDVHKVLVDRLGLDTRITTLGHVQRGGTAVAYDRILATLQGLEAVNAVLESTPDTPSPLIAVNENKIVRKPLMESVKLTKAVAEAIQAKDFKRAMSLRDTEFIEHLNNFMAINSADHNEPKLPKDKRLKIAIVNVGAPAGGINSAVYSMATYCMSQGHRPYAIYNGWSGLARHESVRSLNWKDMLGWQSRGGSEIGTNRVTPEEADLGMIAYYFQKYEFDGLIIVGGFEAFESLHQLERARESYPAFRIPMVLIPATLSNNVPGTEYSLGSDTALNALMEYCDVVKQSASSTRGRAFVVDCQGGNSGYLATYASLAVGAQVSYVPEEGISLEQLSEDIEYLAQSFEKAEGRGRFGKLILKSTNASKALSATKLAEVITAEADGRFDAKPAYPGHVQQGGLPSPIDRTRATRMAIKAVGFIKDNQAAIAEARAAEENFNADDKTISDTAAVVGVKGSHVVYNSIRQLYDYETEVSMRMPKVIHWQATRLIADHLVGRKRVD

EC 4.1.1.1

酿酒酵母PDC1(SEQ ID NO：163)

MSEITLGKYLFERLKQVNVNTVFGLPGDFNLSLLDKIYEVEGMRWAGNANELNAAYAADGYARIKGMSCIITTFGVGELSALNGIAGSYAEHVGVLHVVGVPSISAQAKQLLLHHTLGNGDFTVFHRMSANISETTAMITDIATAPAEIDRCIRTTYVTQRPVYLGLPANLVDLNVPAKLLQTPIDMSLKPNDAESEKEVIDTILALVKDAKNPVILADACCSRHDVKAETKKLIDLTQFPAFVTPMGKGSIDEQHPRYGGVYVGTLSKPEVKEAVESADLILSVGALLSDFNTGSFSYSYKTKNIVEFHSDHMKIRNATFPGVQMKFVLQKLLTTIADAAKGYKPVAVPARTPANAAVPASTPLKQEWMWNQLGNFLQEGDVVIAETGTSAFGINQTTFPNNTYGISQVLWGSIGFTTGATLGAAFAAEEIDPKKRVILFIGDGSLQLTVQEISTMIRWGLKPYLFVLNNDGYTIEKLIHGPKAQYNEIQGWDHLSLLPTFGAKDYETHRVATTGEWDKLTQDKSFNDNSKIRMIEIMLPVFDAPQNLVEQAKLTAATNAKQ

EC 4.1.1.1

酿酒酵母PDC5(SEQ ID NO：164)

MSEITLGKYLFERLSQVNCNTVFGLPGDFNLSLLDKLYEVKGMRWAGNANELNAAYAADGYARIKGMSCIITTFGVGELSALNGIAGSYAEHVGVLHVVGVPSISSQAKQLLLHHTLGNGDFTVFHRMSANISETTAMITDIANAPAEIDRCIRTTYTTQRPVYLGLPANLVDLNVPAKLLETPIDLSLKPNDAEAEAEVVRTVVELIKDAKNPVILADACASRHDVKAETKKLMDLTQFPVYVTPMGKGAIDEQHPRYGGVYVGTLSRPEVKKAVESADLILSIGALLSDFNTGSFSYSYKTKNIVEFHSDHIKIRNATFPGVQMKFALQKLLDAIPEVVKDYKPVAVPARVPITKSTPANTPMKQEWMWNHLGNFLREGDIVIAETGTSAFGINQTTFPTDVYAIVQVLWGSIGFTVGALLGATMAAEELDPKKRVILFIGDGSLQLTVQEISTMIRWGLKPYIFVLNNNGYTIEKLIHGPHAEYNEIQGWDHLALLPTFGARNYETHRVATTGEWEKLTQDKDFQDNSKIRMIEVMLPVFDAPQNLVKQAQLTAATNAKQ

EC 4.1.1.1

酿酒酵母PDC6(SEQ ID NO：165)

MSEITLGKYLFERLKQVNVNTIFGLPGDFNLSLLDKIYEVDGLRWAGNANELNAAYAADGYARIKGLSVLVTTFGVGELSALNGIAGSYAEHVGVLHVVGVPSISAQAKQLLLHHTLGNGDFTVFHRMSANISETTSMITDIATAPSEIDRLIRTTFITQRPSYLGLPANLVDLKVPGSLLEKPIDLSLKPNDPEAEKEVIDTVLELIQNSKNPVILSDACASRHNVKKETQKLIDLTQFPAFVTPLGKGSIDEQHPRYGGVYVGTLSKQDVKQAVESADLILSVGALLSDFNTGSFSYSYKTKNVVEFHSDYVKVKNATFLGVQMKFALQNLLKVIPDVVKGYKSVPVPTKTPANKGVPASTPLKQEWLWNELSKFLQEGDVIISETGTSAFGINQTIFPKDAYGISQVLWGSIGFTTGATLGAAFAAEEIDPNKRVILFIGDGSLQLTVQEISTMIRWGLKPYLFVLNNDGYTIEKLIHGPHAEYNEIQTWDHLALLPAFGAKKYENHKIATTGEWDALTTDSEFQKNSVIRLIELKLPVFDAPESLIKQAQLTAATNAKQ

EC 1.1.1.8

酿酒酵母GPD2(SEQ ID NO：166)

MLAVRRLTRYTFLKRTHPVLYTRRAYKILPSRSTFLRRSLLQTQLHSKMTAHTNIKQHKHCHEDHPIRRSDSAVSIVHLKRAPFKVTVIGSGNWGTTIAKVIAENTELHSHIFEPEVRMWVFDEKIGDENLTDIINTRHQNVKYLPNIDLPHNLVADPDLLHSIKGADILVFNIPHQFLPNIVKQLQGHVAPHVRAISCLKGFELGSKGVQLLSSYVTDELGIQCGALSGANLAPEVAKEHWSETTVAYQLPKDYQGDGKDVDHKILKLLFHRPYFHVNVIDDVAGISIAGALKNVVALACGFVEGMGWGNNASAAIQRLGLGEIIKFGRMFFPESKVETYYQESAGVADLITTCSGGRNVKVATYMAKTGKSALEAEKELLNGQSAQGIITCREVHEWLQTCELTQEFPLFEAVYQIVYNNVRMEDLPEMIEELDIDDE

EC 3.1.3.21

酿酒酵母GPP1(SEQ ID NO：167)

MPLTTKPLSLKINAALFDVDGTIIISQPAIAAFWRDFGKDKPYFDAEHVIHISHGWRTYDAIAKFAPDFADEEYVNKLEGEIPEKYGEHSIEVPGAVKLCNALNALPKEKWAVATSGTRDMAKKWFDILKIKRPEYFITANDVKQGKPHPEPYLKGRNGLGFPINEQDPSKSKVVVFEDAPAGIAAGKAAGCKIVGIATTFDLDFLKEKGCDIIVKNHESIRVGEYNAETDEVELIFDDYLYAKDDLLKW

在某些实施方案中，本发明的酶包括与上文所述的工程化的代谢通路的任何酶至少约70％，80％，90％，95％，99％同一或享有至少约60％，70％，80％，90％，95％序列同一性的任何酶。享有所要求的序列同一性或相似性的这些酶可以是来自不同生物体的野生型酶，或者可以是人工的(即重组的)酶。

在某些实施方案中，编码与上文所述的工程化的代谢通路的任何酶具有相同活性的酶的任何基因都可用于代替所述酶。这些酶可以是来自不同生物体的野生型酶，或者可以是人工的、重组的或工程化的酶。

此外，由于遗传密码的内在简并性，编码基本上相同或功能等同的氨基酸序列的其它核酸序列也可被用于表达编码此类酶的多核苷酸。如本领域技术人员将理解的，修饰编码序列以提高其在特定宿主中的表达可以是有利的。在物种中最经常使用的密码子被称为“最佳密码子”，而不常使用的那些被归类为“少有或低使用密码子”。密码子可被取代以反映宿主的优选密码子使用，此过程有时被称为“密码子优化”或“控制物种密码子偏倚”。用于优化在例如酿酒酵母中表达的核苷酸序列的方法是本领域普通技术人员所知晓的。

经修饰的株系

本发明还提供了敲除株系，其中施行了本发明的工程化的代谢通路。此类经遗传修饰的微生物将具有增加的能力以产生乳酸或乙酸作为发酵产物。基因的“敲除”是指部分地、实质上或完全缺失、沉默、灭活或下调。

因此，本发明的某些实施方案提供了嗜热或嗜温微生物内的某些基因或特定多核苷酸序列的“灭活”或“缺失”，所述基因或特定多核苷酸序列的“灭活”或“缺失”可被理解为涵盖了“遗传修饰”或“转化”从而所产生的所述嗜热或嗜温微生物的株系可被理解为是“经遗传修饰的”或“经转化的”。在某些实施方案中，株系可以是细菌、真菌或酵母来源的。

为敲除株系的经遗传学修饰的株系可具有下列优势：消除产生某些有机酸或干扰所述株系产生高产率的备选产物(例如异丙醇或丙二醇)的能力的产物。

例如，如果通过LDH的作用将丙酮酸转化为乳酸盐(乳酸的盐形式)在糖酵解通路的早期是不可进行的，则丙酮酸可通过丙酮酸脱氢酶或丙酮酸-铁氧还蛋白氧化还原酶的作用被更有效地转化为乙酰辅酶A。

用于本发明而被靶向以敲除的基因包括乳酸脱氢酶(ldh)、氢化酶(hyd)、乙醛脱氢酶(acdh)、乙酸激酶(ack)、丙酮酸-铁氧还蛋白氧化还原酶(por)或丙酮酸脱羧酶(pdc)。

如本申请中所使用的，术语“乳酸脱氢酶”或“LDH”意在包括能够将丙酮酸转化为乳酸的酶。所理解的是LDH也可催化羟基丁酸的氧化。

如本申请中所使用的，术语“乙酸激酶”或“ACK”意在包括能够将乙酰磷酸转化为乙酸的酶。

如本申请中所使用的，术语“丙酮酸-铁氧还蛋白氧化还原酶”或“POR”意在包括能够将丙酮酸转化为乙酰辅酶A，二氧化碳和经还原的铁氧还蛋白的酶。

术语“丙酮酸脱羧酶活性”意在包括多肽酶促地将丙酮酸转化为乙醛的能力(例如“丙酮酸脱羧酶”或“PDC”)。通常，所选择的多肽的活性涵盖与所产生的多肽相关的总酶促活性，这包括例如酶的优越的底物亲合力、热稳定性、在不同pH下的稳定性，或这些特性的组合。

备选地，本发明的某些实施方案提供了嗜热或嗜温微生物内某些基因或特定多核苷酸序列的“插入”(例如添加、整合、并入或引入)，所述基因或特定多核苷酸序列的插入可被理解为涵盖“遗传修饰”或“转化”，从而所产生的所述嗜热或嗜温微生物的株系可被理解为是“经遗传修饰的”或“经转化的”。在某些实施方案中，株系可以是细菌、真菌或酵母来源的。

在本发明的一个方面，基因或特定的多核苷酸序列被插入以活化其所编码的活性，例如酶的表达。在某些实施方案中，编码乙醇的代谢生产中的酶的基因(例如代谢戊糖和/或己糖的酶)可被加入嗜温或嗜热生物体中。在某些本发明的实施方案中，所述酶可赋予代谢戊糖的能力，并且参与例如D-木糖通路和/或L-阿拉伯糖通路。

在本发明的一方面，基因或特定的多核苷酸序列被部分地、实质上或完全缺失、沉默、灭活或下调，从而灭活其所编码的活性(例如酶的表达)。缺失提供了最大的稳定性，因为没有机会进行反向突变以恢复功能。备选地，可通过插入破坏基因的功能和/或表达的核酸序列(例如P1转导或本领域中已知的其它方法)而使基因被部分地、实质上或完全缺失、沉默、灭活或下调。术语“消除(eliminate)”、“消除(elimination)”和“敲除”与术语“缺失”、“部分缺失”、“本质上缺失”或“完全缺失”可互换地使用。在某些实施方案中，目的嗜热或嗜温微生物的株系可通过定点同源重组被工程化以敲除有机酸的产生。在其它实施方案中，可使用RNAi或反义DNA(asDNA)来部分地、实质上、或完全沉默、灭活或下调特定的目的基因。

载体和宿主细胞

本发明还涉及包括编码本发明的酶的基因的载体，如上文所述，以及用本发明的载体遗传工程化的宿主细胞，和通过重组技术生产本发明的多肽。

用本发明的载体将宿主细胞遗传工程化(转导或转化或转染)，所述载体可以是例如，克隆载体或表达载体。所述载体可以是，例如质粒、病毒颗粒、噬菌体等形式。可在被修饰而适于活化启动子、选择转化体或扩增本发明的基因的常规营养培养基中培养经工程化的宿主细胞。培养条件(例如温度、pH等)是之前对于选择用于表达的宿主细胞所使用的那些条件，并且对于本领域普通技术人员而言将是显然的。

表达载体中的DNA序列与适当的表达控制序列(启动子)可操作地缔联以指导mRNA合成。可使用任何合适的启动子来引起基因在本发明的宿主细胞中表达。此外，可使用已知在原核或较低等的真核细胞中控制基因表达的启动子。表达载体还含有用于翻译起始的核糖体结合位点，以及转录终止子。载体还可包括用于扩增表达的适当序列，或者可包括其它的调控区域。

可采用含有适当的可选择性标记物序列(如本申请中所使用的)以及适当的启动子或控制序列的载体以转化适当的嗜热宿主，从而允许宿主表达蛋白质。

术语“启动子”或“替代启动子”意在包括可转录调控其在自然中不转录控制的目的基因的多核苷酸区段。在某些实施方案中，替代启动子的转录控制引起目的基因表达的增加。在某些实施方案中，替代启动子被置于目的基因的5’。替代启动子可被用于替代天然启动子，或者可在天然启动子之外被使用。相对于使用其的宿主细胞，替代启动子可以是内源性的，或者其可以是被引入宿主细胞中的异源多核苷酸序列，例如相对于使用其的宿主细胞而言是外源性的。

术语“基因”或“多核苷酸区段”或“多核苷酸序列”意在包括这样的核酸分子，例如包括编码多肽的开放阅读框的多核苷酸、并且还可包括非编码调控序列以及内含子。此外，所述术语意在包括定位在功能性位置的一个或多个基因。另外，所述术语意在包括用于所选目的的特定基因。所述基因可以是宿主细胞内源的或者可以是被重组地引入宿主细胞中的，例如作为被游离保持的质粒或被稳定整合到基因组中的质粒(或其片段)。除了质粒形式之外，基因可以是例如以线性DNA的形式。在某些实施方案中，基因编码多肽，例如本发明的酶。术语基因也意在涵盖特定基因的所有拷贝，例如细胞中编码特定基因产物的所有DNA序列。

术语“转录控制”意在包括在转录水平上调节基因表达的能力。在某些实施方案中，转录(因而基因表达)是通过在接近目的基因编码区的5’端替换或添加替代启动子而被调节的，从而产生改变的基因表达。在某些实施方案中，一个或多个基因的转录控制被工程化以产生此类基因的最佳表达，例如以所需的比率。此术语也包括可诱导的转录控制，如本领域中所认可的。

术语“表达”意在包括至少在mRNA产生水平的基因表达。

术语“表达产物”意在包括所产生的产物，例如，经表达的基因的多肽。

术语“增加的表达”意在包括至少在增加的mRNA产生水平和优选地在多肽表达的水平上基因表达的改变。术语“增加的生产”意在包括所表达的多肽量的增加、多肽的酶促活性水平的增加，或其组合。

在某些方面，本发明涉及含有上述构建体的宿主细胞。所述宿主细胞可以是厌氧的嗜热细菌细胞，这包括厌氧木聚糖降解性和/或纤维素分解性宿主细胞。由本申请中的教导，选择适当的宿主被认为是在本领域技术人员的技能范围内。

本发明还包括重组构建体，其包含如上文所广泛描述的一种或多种可选择性标记物序列。所述构建体包括载体(例如质粒或病毒载体)，其中以正向或反向插入了本发明的序列。在这种实施方案的一个方面，构建体还包含调控序列，这包括例如启动子，其可操作地与所述序列相缔连。大量合适的载体和启动子是本领域技术人员已知的，并且是商业上可得的。下文的载体仅以示例的方式提供。

术语“源自”意在包括从所示的来源分离(全部或部分)多核苷酸区段或者从所示的来源纯化多肽。此术语意在包括，例如从与所示多核苷酸来源相关的序列或基于此序列直接克隆、PCR扩增或人工合成。

可使用本领域中已知的方法来在宿主细胞中引入构建体。也可通过电穿孔方法实现引入，如2008年10月30日递交的美国临时申请号61/109,642中所描述的，其内容在此通过引用而并入。

此外，使用如2009年8月10日递交的美国临时申请号61/232,648中所描述的方法(其内容在此通过引用而并入)，可使用阳性和/或阴性选择标记物，遗传学工具，和对于在例如嗜热生物体中使用进行了调适的、基于同源重组的基因组整合，来有效地选择经修饰的株系(包括经修饰的热纤维素梭菌和解糖热厌氧杆菌株系)。可实行表达外来基因、敲除和过表达天然基因、以及产生不合有抗生素标记物或其它外源DNA的洁净工业株系的方法，如美国临时申请号61/232,648中所描述的。

生物质

术语“木质纤维素材料”、“木质纤维素底物”和“纤维素生物质”是指包含纤维素、半纤维素、木质素或其组合的任何类型的生物质，例如但不限于木质生物质、牧草、草本能量作物、非木质植物生物质、农业废物和/或农业残余、林业残余和/或林业废物、造纸淤污和/或废纸淤污、废水处理淤污、城市固体废物、来自湿和干磨玉米乙醇工厂的玉米纤维、以及糖加工残余物。

在非限制性的实例中，木质纤维素材料可包括但不限于木质生物质(例如再循环的木浆纤维、锯屑、硬木、软木及其组合；草，例如柳枝稷、大米草、黑麦草、利甘草、芒草或其组合；糖加工残余，例如但不限于甘蔗渣；农业废物，例如但不限于稻草、稻壳、大麦秆、玉米穗轴、谷物秆、小麦秆、双低菜籽秆、燕麦秆、燕麦壳以及玉米纤维；秸秆，例如但不限于大豆秸秆、玉米秸秆；多汁植物，例如但不限于龙舌兰；以及林业废物，例如但不限于再循环的木浆纤维、锯屑、硬木(例如白杨，橡树，枫树，桦树，柳树)、软木或其任意组合。木质纤维素材料可包含一种纤维；备选地，木质纤维素材料可包含源自不同木质纤维素材料的纤维的混合物。特别有利的木质纤维素材料是农业废物，例如谷物秆，这包括小麦秆、大麦秆、双低菜籽秆和燕麦秆；玉米纤维；秸秆，例如玉米秸秆和大豆秸秆；草，例如柳枝稷、利甘草、大米草和芒草；或者其组合。

纸淤污也是用于乳酸或乙酸生产的可行原料。纸淤污是源自制浆和造纸的固体残余，并且通常在初次沉清池中从加工废水中被去除。以$30/湿吨的清理花费，淤污清理的花费等于$5/吨所生产用于出售的纸。清理湿淤污的花费是将材料转化为其它用途(例如转化为乙醇)的重要动机。本发明所提供的方法可广泛应用。此外，糖化和/或发酵产物可被用于生产乙醇或更高附加价值的化学品，例如有机酸、芳香族化合物、酯类、丙酮和聚合物中间产物。在糖酵解的过程中，细胞将简单的糖(例如葡萄糖)转化为丙酮酸，伴随ATP和NADH的净生成。不存在用于氧化磷酸化的有功能的电子转运系统时，至少95％的丙酮酸在短通路中被消耗，所述短通路再生NAD⁺，这对于持续的糖酵解和ATP生产而言是必需的要求。这些NAD⁺再生系统的废产物通常被称作发酵产物。

示例

实施例1

1.1 在细菌和酵母CBP平台中生产混合醇

在细菌和酵母中生产混合醇利用细菌和酵母CBP平台以及它们的可得的工具盒，以产生丙二醇、异丙醇、甘油和乙醇的组合。1954年在培养热丁酸梭菌(Clostridium thermobutyricum)的过程中首先检测到了由微生物产生的痕量丙二醇。见Enebo，L.1954，“Studies incellulose decomposition by an anaerobic thermophilic bacterium andtwo associated non-cellulolytic species”，p.94-96，Viktor PettersonsBokindustrie Aktiebolag，Stockholm。从那以后，报道显示了在楔形梭菌(C.sphenoides)和热解糖热厌氧杆菌的发酵过程中由普通的糖天然产生丙二醇，见Tran-Din，K.，& Gottschalk，G.，1985，Arch.Microbiol.142，87-92；Cameron，D.C.，& Clooney，C.，1986，Bio/Technology 4，651-654。使用多种重组基因，开发了重组的大肠杆菌菌株以由二羟丙酮磷酸(糖代谢的中间产物)产生丙二醇，见Altaras，N.E.，& Cameron，D.C.，1999，Appl Environ Microbiol.65(3)，1180-5；U.S.Patent No.6,303,352。

此实施例的目的是提供新的通路用于在细菌和酵母中生产高产率的混合醇。细菌CBP平台包含与楔形梭菌和热解糖热厌氧杆菌在同一家族中的微生物，其含有用于丙二醇生产的天然基因，并且与文献不同，它们不依赖于重组活性的表达以将二羟丙酮磷酸转化为丙二醇。例如，解糖热厌氧杆菌能够将L-鼠李糖发酵为等摩尔量的丙二醇以及乙醇，乙酸，乳酸，H₂和CO₂的混合物。见Lee等人，InternationalJournal of Systematic Bacteriology，43(1)：41-51(1993)。然而，过去，由于缺乏稳定遗传工程化所需的遗传上可追踪的系统，开发嗜热梭菌用于生产丙二醇是不可行的。对于嗜热梭菌和热厌氧杆菌以及热厌氧细菌菌株的成功的遗传工程化现在使得可能进行此类用于代谢工程化的开发。见2009年8月10日递交的美国临时申请号61/232,648。此外，通过表达单个基因甲基乙二醛合酶(mgs)观察到了在酵母中产生丙二醛，这表明将甲基乙二醛转化为丙二醇所需的其它活性是酵母内源性的。见Lee，W.，& DaSilva，N.A.，2006，Metabolic Eng.8，58-65。

使用这些平台生产的1，2-丙二醇可被用作有价值的中间产物或利用微生物(例如罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri))菌株被转化为丙酸和丙醇，所述微生物菌株分离自已知进行这一反应的酵母。见Sriramulu，D.D.，等人，2008，J Bacteriol.190(13)：4559-67。也可能存在化学途径直接将丙二醇转化为丙醇或甚至丙烯。

通过添加产生丙酮和能够利用丙酮作为底物的脱氢酶的通路可产生异丙醇。被最好地了解和研究的丙酮生产途径来自于丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)的代谢。此通路中的所有酶都被测序并克隆到了其它宿主(例如大肠杆菌)中。见Bermejo，L.L.，等人，1998，Appl Environ Microbiol.64(3)，1079-85。从二十世纪早期开始，丙酮丁醇梭菌就被用于工业发酵中并且所产生的丙酮在第一次世界大战中被用作火药的主要来源。此发酵被广泛地使用直至二十世纪六十年代，那时由于可发酵糖增加的花费，此方法不再能够与所出现的石油化学方法相竞争。细菌和酵母CBP平台使得异丙醇的生产可容易地被追踪。

1.2 混合醇生产的通路定义和化学计量计算

由葡萄糖组合生产丙二醇和异丙醇被概述在图1的通路中并需要数种不同的酶的活性(表2)。

表2.与在细菌和酵母CBP平台中工程化混合醇相关的天然和非天然基因候选者的列表

分支的代谢通路可被如下细分为不同的生产途径：

(i)将二羟丙酮磷酸转化为丙二醇

(ii)将丙酮酸转化为异丙醇

(iii)将丙酮酸转化为乙醇(仅细菌CBP平台)

(iv)将二羟丙酮磷酸转化为甘油(仅酵母CBP平台)。

在细菌代谢过程中，从两个葡萄糖分子组合生产异丙醇、丙二醇和乙醇(途径(i)、(ii)和(iii))是由如下总体化学计量等式控制的，其具有一个丙醇、一个丙二醇和一个乙醇/两个葡萄糖的理论产率：

2C₆H₁₂O₆→C₃H₈O+C₃H₈O₂+C₂H₆O+4CO₂+H₂+3ATP

上述通路作用于己糖和戊糖时，丙二醇、丙醇和乙醇的理论产率为：

在酵母(酿酒酵母)中组合产生异丙醇、丙二醇和甘油(途径(i)、(ii)和(iv))产生一个ATP的净增加，并由下列总体化学计量等式控制：

2C₆H₁₂O₆→C₃H₈O+C₃H₈O₂+C₃H₈O₃+3CO₂+ATP

共产生异丙醇和丙二醇连同失去碳至甘油和CO₂是必需的以维持氧化还原平衡。上述通路作用于己糖和戊糖时，丙二醇、丙醇和甘油的理论产率为：

上述化学计量等式是使用己糖作为碳水化合物源而计算的；然而，戊糖(包括但不限于木糖)也可被容易地利用。当戊糖被用作碳水化合物源时，需要6个戊糖作为5个己糖的等价物。

1.3 混合醇的生产途径和相应的酶学

细菌CBP平台

在细菌CBP平台中由葡萄糖组合生产丙二醇、异丙醇和乙醇可被细分为下列不同的生产途径：(i)将二羟丙酮磷酸转化为丙二醇；(ii)将丙酮酸转化为异丙醇；以及(iii)将丙酮酸转化为乙醇(图1)。微生物宿主利用碳水化合物源(在图1中显示为葡萄糖)以产生混合醇，但是如上文所提及的，戊糖(例如木糖)也可被容易地利用，这需要6个戊糖作为5个己糖的等价物。所述通路的第一个步骤利用微生物宿主的细胞代谢以代谢碳水化合物源，这采用例如Embden-Meyerhof-Parnas(EMP)通路来产生二羟丙酮磷酸和酸甘油醛3-磷酸(图1)。可使用丙糖磷酸异构酶(E.C.5.3.1.1)来交换这些代谢物。

在途径(i)中，二羟丙酮磷酸被甲基乙二醛合酶(E.C.4.2.3.3)转化为甲基乙二醛。甲基乙二醛随后被氧化还原酶(如EC 1.1.1.-中所示(见表2))转化为丙酮醇或被酮还原酶(E.C.1.1.1.79、1.2.1.49)转化为半乳醛。这些中间产物被氧化还原酶(E.C.1.1.1.-)(对于丙酮醇)或(E.C.1.1.1.2)1(对于半乳醛)进一步还原为丙二醇。

对于途径(ii)，酸甘油醛3-磷酸通过标准的糖酵解反应被进一步代谢为丙酮酸，这产生为细胞反应提供动力的ATP和还原碳终产物所需的还原性等价物。在细菌代谢的过程中，丙酮酸被丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶(E.C.1.2.7.1)(图1，浅灰框)代谢为乙酰辅酶A，还原的铁氧还蛋白和CO₂。随后在铁氧还蛋白的氧化过程中产生了NADH和H₂。然后，在产生ATP的反应中，乙酰辅酶A被磷酸乙酰转移酶(E.C.2.3.1.8)和乙酸激酶(E.C.2.7.2.1)转化为乙酸。两个乙酰辅酶A分子被硫解酶(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶(E.C.2.8.3.8)转化为乙酰乙酸，其中辅酶A种类从乙酰乙酰-辅酶A被转移至乙酸，这补充了在硫解酶反应过程中消耗的乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶(E.C.4.1.1.4)转化为丙酮。丙酮被还原为异丙醇可通过醇脱氢酶(E.C.1.1.1.80)完成。

在途径(iii)中，乙酰辅酶A被乙醛脱氢酶(EC 1.2.1.3)和醇脱氢酶(E.C.1.1.1.1)转化为乙醇，或通过催化这两个步骤的起双重作用的酶被转化为乙醇。

所有所需的酶促活性均在热解糖梭菌(C.thermosaccharolyticum)中被显示(见Cameron，D.C.，& Clooney，C.，1986，Bio/Technology 4，651-654)，并且鉴别出了细菌CBP平台生产菌株中显示出与所需酶促结构域有高水平同源性的相关内源性酶(见表2)。文献中鉴别出了催化由乙酰辅酶A产生丙酮的酶，并且可利用来自丙酮丁醇梭菌的基因来工程化与(E.C.2.3.1.9)、(E.C.2.8.3.8)和(E.C.4.1.1.4)相关的活性。见Bermejo，L.L.，等人，1998，ApplEnviron Microbiol.64(3)，1079-85。

已显示了通过多种醇脱氢酶将丙酮转化为异丙醇，并且可就其接受丙酮作为底物的能力来筛选来自微生物CBP宿主的内源性酶。必须作出其它的努力通过调节酶的水平和调控来容易地控制通过不同代谢分支点的流动。为此，缺失ldh(E.C.1.1.1.27)将防止碳从丙酮酸流至乳酸(见表2，“待敲除的基因”)。

酵母CBP平台

在酵母CBP平台中由葡萄糖组合产生丙二醇、异丙醇和甘油可被细分为下列不同的生产途径：(i)将二羟丙酮磷酸转化为丙二醇；(ii)将丙酮酸转化为异丙醇；和(iv)将二羟丙酮磷酸转化为甘油(图1)。如上文所述，微生物宿主利用碳水化合物源，例如图1中所示的葡萄糖或戊糖(例如木糖)。通路中的第一步使用微生物宿主的细胞代谢来代谢碳水化合物源，其采用例如Embden-Meyerhof-Parnas(EMP)通路来产生二羟丙酮磷酸和磷酸甘油醛(图1)。可使用丙糖磷酸异构酶(E.C.5.3.1.1)而互换这些代谢物。

以与细菌CBP平台中的途径(i)类似的方式提出了酵母CBP平台中的途径(i)，其将二羟丙酮磷酸转化为甲基乙二醛并且利用所呈现的两个备选的通路来由甲基乙二醛产生丙二醇。见图1。然而，基于目前的酵母文献，仅有第三个途径可能是可获得的，这一部分是因为所有的都产生相同的氧化还原改变。三者均以通过甲基乙二醛合酶MGS(E.C.4.2.3.3)由二羟丙酮磷酸产生甲基乙二醛开始，所述甲基乙二醛合酶MGS(E.C.4.2.3.3)可从数个潜在的来源之一获得。已显示单独在酵母中引入mgs基因引起丙二醇的产生，但是是以相对低的滴度；随后引入甘油脱氢酶(E.C.1.1.1.6)使所形成的丙二醇的量加倍。见Hoffman，M.L.，1999，Metabolic engineering of 1，2-propanediolproduction in Saccharomyces cerevisiae.Ph.D.Dissertation，University of Wisconsin-Madison。备选地，醛还原酶(E.C.1.1.1.21)可能能够将甲基乙二醛转化为半乳醛并且随后被转化为丙二醇。可过表达天然的酵母醛还原酶GRE3来测试这种可能性。此外，可潜在地通过乙醛酸还原酶(E.C.1.1.1.79)或甲基乙二醛脱氢酶(E.C.1.2.1.49)将甲基乙二醛转化为半乳醛。在酿酒酵母中未报道过这些酶促活性，但是有许多内源性基因可含有这些活性：两种潜在的乙醛酸还原酶(GOR1和YPL113C)，甘油脱氢酶(GCY1)，六种醛脱氢酶(ALD2-6和HFD1)，十种下文所提及的醇脱氢酶。见表2。可能需要结合上文所示的两个备选通路来工程化以由甲基乙二醛产生丙二醇，从而达到所需的丙二醇滴度。

对于途径(ii)，通过标准的糖酵解反应而将酸甘油醛3-磷酸进一步代谢为丙酮酸，如上文中对于细菌CBP平台所描述的。在酵母代谢中，通过丙酮酸甲酸裂解酶(E.C.2.3.1.8)(图1，深灰色框)由丙酮酸产生乙酰辅酶A和甲酸。通过甲酸脱氢酶(E.C.1.2.1.2)(图1，深灰色框)将甲酸进一步代谢为CO₂、NADH和H₂。由乙酰辅酶A产生异丙醇是如上文对于细菌CBP平台所描述的进行的。

五种酶促活性可被工程化到酵母中用于途径(ii)。需要丙酮酸甲酸裂解酶(PFL)(E.C.2.3.1.8)来在细胞溶质中形成乙酰辅酶A，因为在大多数酵母物种中内源产生的乙酰辅酶A被隔离在线粒体中。在酵母中表达了有酶促活性的PFL用于产生甲酸。见Waks，Z.，& Silver，P.A.，2009，Appl.Env.Microbiol.75，1867-1875。酿酒酵母具有内源性的甲酸脱氢酶(E.C.1.2.1.2)以将所产生的甲酸转化为CO₂和H₂。通过引入丙酮丁醇梭菌通路(如上文对于细菌CBP平台所描述的)、与酵母乙酰辅酶A乙酰转移酶ERG10(E.C.2.3.1.9)共同作用，而随后将所产生的细胞溶质乙酰辅酶A转化为丙酮。在这一部分中醇脱氢酶施行最终的反应而使丙酮成为异丙醇。酿酒酵母基因组编码十种醇脱氢酶(ADH1-7，BDH2，SFA1，和YPL088W)，可就将丙酮转化为异丙醇的能力对其进行测定。见表2。如果需要的化，可将外源性的醇脱氢酶工程化到酿酒酵母中。可缺失三个丙酮酸脱羧酶基因(E.C.4.1.1.1)：PDC1、PDC5和PDC6。这三种酶的存在将引起显著的丙酮酸的丧失而成为乙醛。

在途径(iv)中，二羟丙酮磷酸被甘油-3-磷酸脱氢酶(E.C.1.1.1.8)和甘油-3-磷酸酶(E.C.3.1.3.21)(图1，深灰色框)转化为甘油。途径(iv)所需的酶已经存在于酿酒酵母中了。

实施例2

2.1 在细菌CBP平台中产生正丙醇和异丙醇

所有目前天然和重组的产生丙醇的代谢通路最多具有0.33g丙醇/g碳水化合物的理论产率。Yan Y.& Liao J.2009，J Indus Microbioland Biotech 36(4)：471-479。这一产率(相应于一摩尔异丙醇/摩尔葡萄糖)在厌氧发酵过程中仅将75％可获得自葡萄糖的自由能并入异丙醇中。其它25％的自由能(也称作可获得的电子)必须在厌氧发酵过程中被并入副产物中，或者在好氧发酵过程中被氧消耗。

当前的实施例提出了新的通路，用于以0.44g/g碳水化合物的产率由木质纤维素碳水化合物产生丙醇，且并入100％可获得自碳水化合物转化的自由能。为了利用在自然界中发现的生物化学通路以此最大产率产生丙醇，需要产生n-型以及异型丙醇。在本文所述的代谢通路中，异丙醇生产提供生成ATP的能力，而正丙醇生产作为电子穴以平衡厌氧发酵。此通路允许在热力学上可行的平衡的发酵等式。

两种产物均可通过蒸馏而从发酵液中回收，这减少了下游加工的复杂性。异丙醇是由溶剂生成性梭菌天然产生的产物，并且当供以丙酮时，其由热厌氧杆菌物种快速产生，表明存在具有用于所需反应的高活性的天然醇脱氢酶。见Lamed RJ和Zeikus JG.1981，TheBiochemical J 195(1)：183-190。丙酮生产已被详尽研究，并且如上所述，梭菌通路已在大肠杆菌中被异源表达。见Bermejo，L.L.，等人，1998，Appl.Environ.Microbiol.64(3)，1079-85。正丙醇是丙二醇降解的天然产物，许多微生物已被报道在厌氧条件下进行这一催化反应。最近，在一种无害李斯特菌(Listeria innocula)中鉴别出了参与此转化的基因，这将促进在细菌CBP生物体中表达此通路。见Xue J.等人，2008，Applied and Environmental Microbiol.74(22)：7073-7079。丙二醇(正丙醇通路的关键中间产物)是嗜热细菌的天然发酵产物。热解糖热厌氧杆菌HG-8(被报道产生最高的丙二醇滴度的生物体)可被工程化而用于生产正丙醇。

2.2 用于丙醇生产的通路定义和化学计量计算

由葡萄糖或木糖组合生产正丙醇和异丙醇被概述在图2的通路中并需要数种不同的酶的活性(表3)。

表3.与在CBP细菌平台中工程化正丙醇和异丙醇相关的天然和非天然基因候选者的列表

在细菌代谢过程中，由3个葡萄糖分子组合产生正丙醇和异丙醇是由下列总体化学计量等式控制的：

3C₆H₁₂O₆→2(n-)C₃H₈O+2(iso-)C₃H₈O+6CO₂+2H₂O+4ATP

上述通路作用于己糖时，丙醇的理论产率为0.44g丙醇/g己糖。

在细菌代谢过程中由9个木糖分子组合产生正丙醇和异丙醇是由下列总体化学计量等式控制的：

9C₅H₁₀O₅→5(n-)C₃H₈O+5(iso-)C₃H₈O+15CO₂+5H₂O+12ATP

上述通路作用于戊糖时，丙醇的理论产率为0.44g丙醇/g己糖。

对于此代谢通路，产物产率对于己糖(例如葡萄糖)和戊糖(例如木糖)碳水化合物)是相同的，这是由于丙糖磷酸异构酶(tpi)(E.C.5.3.1.1)的活性。与己糖发酵相比，戊糖发酵产生比二羟丙酮磷酸(DHAP)更多的异构体甘油醛3-磷酸(GAP)，而己糖发酵产生等摩尔比值的这两种化合物。然而，tpi允许GAP转化为DHAP(反之亦然)，对于两种碳水化合物都产生相等的产物产率。

2.3 丙醇的生产途径和相应的酶学

用于生产正丙醇和异丙醇的代谢通路可被细分为两个不同的生产途径：(i)将二羟丙酮磷酸转化为正丙醇；和(ii)将丙酮酸转化为异丙醇。

对于正丙醇途径(途径(i))，二羟丙酮磷酸被甲基乙二醛合酶(E.C.4.2.3.3)转化为甲基乙二醛。甲基乙二醛随后被氧化还原酶(E.C.1.1.1.-)转化为丙酮醇或被酮还原酶(1.1.1.79或1.2.1.49)转化为半乳醛。然后，这些中间产物被来自(E.C.1.1.1.-)的酶进一步还原为丙二醇。然后，丙二醇被二醇-水解酶(E.C.4.2.1.28)脱水成为丙醛和被脱氢酶(E.C.1.1.1.202)还原为正丙醇。见图2。

所有用于生产丙二醇所需的酶促活性均在热解糖梭菌(可被遗传工程化的菌株)中被显示，Cameron，D.C.，等人，1998，Biotechnol.Prog.14，116-125。还鉴别出了细菌CBP平台生产菌株中显示出与所需酶促结构域有高水平同源性的相关内源性酶(表3)。可表征细菌CBP平台生产菌株中产生丙二醇的酶，用于实施途径(i)。

对于异丙醇途径(途径(ii))，通过标准的糖酵解反应而将酸甘油醛3-磷酸进一步代谢为丙酮酸，这产生为细胞反应提供动力的ATP和在厌氧发酵过程中平衡正丙醇产生所需的还原性等价物。然后，丙酮酸被丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶(E.C.1.2.7.1)代谢为乙酰辅酶A，还原的铁氧还蛋白和CO₂。随后在铁氧还蛋白的氧化过程中产生了NADH和H₂(见图2)。

然后，在产生ATP的反应中，乙酰辅酶A被磷酸乙酰转移酶(E.C.2.3.1.8)和乙酸激酶(E.C.2.7.2.1)转化为乙酸。两个乙酰辅酶A分子被硫解酶(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶(E.C.2.8.3.8)转化为乙酰乙酸，其中辅酶A种类从乙酰乙酰-辅酶A被转移至乙酸，这补充了在硫解酶反应过程中消耗的乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶(E.C.4.1.1.4)转化为丙酮。丙酮被还原为异丙醇可通过醇脱氢酶(E.C.1.1.1.80)完成。

文献中鉴别出了来自丙酮丁酸梭菌的、催化由乙酰辅酶A产生丙酮的酶。见Bermejo，L.L.，等人，1998，Appl Environ Microbiol.64(3)，1079-85。已显示了通过多种醇脱氢酶将丙酮转化为异丙醇，并且可就其接受丙酮作为底物的能力来筛选内源性的细菌的酶。

也将需要基因缺失来实现高产率的丙醇生产。这些包括缺失L-乳酸脱氢酶ldh(E.C.1.1.1.27)；氢化酶hyd(E.C.1.12.7.2)；和乙醛脱氢酶acdh(E.C.1.2.1.10)。

实施例3

3.1 在细菌CBP平台中生产异丙醇和甲醇

由木质纤维素碳水化合物共产生异丙醇和甲醇允许在热力学上可行的平衡的发酵等式。理论上，异丙醇以0.33g/g碳水化合物被产生，且并入75％可获得自碳水化合物转化的电子。异丙醇和甲醇均可通过蒸馏而从发酵液中回收，这减少了下游加工的复杂性。此外，甲醇是果胶降解的天然产物并且许多经表征的甲醇营养型(methylotropic)生物体含有用于甲醇代谢的基因。

3.2 用于异丙醇和甲醇生产的通路定义和化学计量计算

由碳水化合物生产异丙醇和甲醇被概述在图3的通路中并需要数种不同的酶的活性(见表4)。

表4.与在CBP细菌平台中工程化异丙醇和甲醇相关的天然和非天然基因候选者的列表

在细菌代谢过程中，从一个葡萄糖分子组合生产异丙醇和甲醇是由下述总体化学计量等式控制的，其具有的理论产率为一个丙醇和一个甲醇/葡萄糖：

C₆H₁₂O₆→C₃H₈O+CH₄O+2CO₂+3ATP

上述通路作用于己糖和戊糖时，异丙醇和甲醇的理论产率为(见图3)：

己糖产率：

0.33g异丙醇/g己糖

0.18g甲醇/g己糖

戊糖 产率：

0.33g异丙醇/g戊糖

0.18g甲醇/g戊糖

在细胞代谢过程中，微生物宿主可利用己糖或戊糖碳水化合物源(其中6个戊糖等同于5个己糖)，这采用例如Embden-Meyerhof-Parnas(EMP)通路来产生二羟丙酮磷酸和酸甘油醛3-磷酸。可使用丙糖磷酸异构酶(E.C.5.3.1.1)来交换这些代谢物。

3.3 异丙醇和甲醇的生产途径及相应的酶学

用于由碳水化合物组合生产异丙醇和甲醇的分支的代谢通路可被细分为下述生产途径：(i)将丙酮酸转化为异丙醇；和(ii)将甲酸转化为CO₂和甲醇。

如上文中所述，酸甘油醛3-磷酸通过标准的糖酵解反应被代谢为丙酮酸，这产生为细胞反应提供动力的ATP和还原碳终产物所需的还原性等价物。通过丙酮酸甲酸裂解酶(E.C.2.3.1.54)，由丙酮酸产生乙酰辅酶A和甲酸。对于生产异丙醇(途径(i))，在产生ATP的反应中，乙酰辅酶A被磷酸乙酰转移酶(E.C.2.3.1.8)和乙酸激酶(E.C.2.7.2.1)转化为乙酸。两个乙酰辅酶A分子被硫解酶(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶(E.C.2.8.3.8)转化为乙酰乙酸，其中辅酶A种类从乙酰乙酰辅酶A被转移至乙酸，这补充了在硫解酶反应过程中消耗的乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶(E.C.4.1.1.4)转化为丙酮。丙酮被还原为异丙醇可通过醇脱氢酶(E.C.1.1.1.80)完成。

如上文所述，文献中鉴别出了来自丙酮丁醇梭菌的、催化由乙酰辅酶A产生丙酮的酶。见Bermejo，L.L.，等人，1998，Appl EnvironMicrobiol.64(3)，1079-85。已显示了通过多种醇脱氢酶将丙酮转化为异丙醇，并且可就其接受丙酮作为底物的能力来筛选内源性的细菌的酶。

在途径(ii)中，甲酸以等摩尔比值通过两个通路被进一步代谢，第一个通路通过甲酸脱氢酶(E.C.1.2.1.43)产生CO₂和NADPH，第二个通路通过甲醛脱氢酶(E.C.1.2.1.46)和甲醇脱氢酶(E.C.1.1.1.244)的组合作用产生甲醇，伴随并入两个NADH和水的产生。

通过甲酸产生CO₂和NADPH是经大量文献很好表征的通路。然而，通过甲酸产生甲醇是被表征欠佳的通路。被表征的大多数具有甲醇代谢通路的生物体消耗甲醇，而非产生甲醇。由甲酸产生甲醇在厌氧条件下是热力学上可行的。工程化高产率通路最有可能的途径是引入以反方向天然催化净反应的酶，然后使用进化的工程化技术来选择具有增加的朝向甲醇形成的流动的株系。在工程化其它代谢通路中已成功地采用了这种用于通路流动改进的策略，并且由于净反应的热动力支持，预期其对于这一通路也起作用。

实施例4

4.1 在细菌和酵母CBP平台中厌氧生产丙二醇和丙酮

在热解糖梭菌中天然的微生物生产丙二醇已被Cameron，D.C.，& Clooney，C.，1986 Bio/Technology 4，651-654详细记载，虽然内源性的酶仍待被鉴别和克隆。可从细菌CBP平台微生物中鉴别出天然的酶并将其用于细菌CBP平台宿主(例如，解糖热厌氧杆菌和热纤维素梭菌)中从而消除对于“重组”基因的需求，和/或所述酶可被容易地转移至酵母CBP平台宿主。

包括生成ATP的、厌氧丙二醇生产的理论最大产率需要产生副发酵产物(例如乙酸)。见美国专利号6,303,352。在此实施例中呈现的通路实现了厌氧的最大理论产率并且在生成丙酮作为副发酵产物的过程中利用乙酸作为中间产物。选择丙酮作为副发酵产物是因为其潜在地是有价值的化学品，并且相对于乙酸而言，其是对于微生物毒性更小的发酵产物。同时产生丙二醇和丙酮代表了新的发酵过程。此外，关于将甲基乙二醛转化为丙二醇的酶学所知较少，但是如上文所述，其现在可被查明了。

4.2 用于丙二醇和丙酮生产的通路定义和化学计量计算

由碳水化合物厌氧生产丙二醇和丙酮被概述在图4的通路中并需要数种不同的酶的活性(见表5)。

表5.与在CBP细菌和CBP酵母平台中工程化丙二醇和丙酮相关的天然和非天然基因候选者的列表

在细菌或酵母厌氧代谢过程中，从两个葡萄糖分子组合生产丙二醇和丙酮是由下列总体化学计量等式控制的，这产生了总体的氧化还原平衡和净获得一个ATP：

2C₆H₁₂O₆→2C₃H₈O₂+C₃H₆O+3CO₂+1ATP+H₂O

上述通路作用于己糖和戊糖时，丙二醇和丙酮的理论产率为：

在细胞代谢过程中，微生物宿主可利用己糖或戊糖碳水化合物源(其中6个戊糖等同于5个己糖)，这采用Embden-Meyerhof-Parnas(EMP)通路来产生二羟丙酮磷酸和酸甘油醛3-磷酸。可使用丙糖磷酸异构酶(E.C.5.3.1.1)来交换这些代谢物。

4.3 丙二醇和丙酮的厌氧生产途径和相应的酶学

在嗜热梭菌和酿酒酵母中由己糖和戊糖共生产丙二醇和丙酮可被分解为三个途径：(i)由葡萄糖产生二羟丙酮磷酸和酸甘油醛3-磷酸；(ii)随后由二羟丙酮磷酸产生丙二醇；和(iii)由甘油醛3磷酸生成丙酮。见图4。

对于细菌和酵母CBP平台，途径(i)(由葡萄糖产生二羟丙酮磷酸和酸甘油醛3-磷酸)所需的酶活性是天然糖酵解通路(例如EMP通路)的一部分，如上文所述。见表5。

对于途径(ii)(随后由二羟丙酮磷酸生成丙二醇)，呈现了两个备选的途径，这一部分是因为二者都产生相同的氧化还原平衡并且据推理不知道最佳的途径。二者均以通过甲基乙二醛合酶mgs(E.C.4.2.3.3)由二羟丙酮磷酸产生甲基乙二醛开始。见图4。此基因是细菌CBP平台生物体内源的，然而对于酵母，其将需要从数个潜在的来源之一获得。

对于细菌CBP平台(其包含嗜热细菌)，丙酮醇有可能是由甲基乙二醛至丙二醇的中间产物，如在热解糖热厌氧杆菌中所示的。见Cameron，D.C.，& Clooney，C.，1986，Bio/Technology 4，651-654。在大肠杆菌中，已显示各种醛-酮还原酶催化将甲基乙二醛转化为丙酮醇(E.C.1.1.1.-)。见Ko，J.，等人，2005，J Bacteriol.187(16)，5782-9。细菌平台生物体的内源性醛-酮还原酶列表显示在表5中。这些基因可被过表达和/或删除，以确定其在丙二醇生产中的作用。由乙醛酸还原酶(E.C.1.1.1.79)和甲基乙二醛脱氢酶(E.C.1.2.1.49)产生的半乳醛也有可能是中间产物。为了确定在将甲基乙二醛转化为丙二醇的过程中，丙酮醇或半乳醛是否为主要的中间产物，可使用分析化学程序(例如HPLC)，以鉴别发酵样品中的这些中间产物。见例如，Cameron，D.C.，& Clooney，C.，1986，Bio/Technology 4，651-654；Altaras，N.E.，& Cameron，D.C.，1999，Appl Environ Microbiol.65(3)，1180-5。备选地，细胞可被供以丙酮醇或半乳醛，以确定哪些中间产物被更有效地转化为丙二醇。为了确定哪些基因负责由丙酮醇或半乳醛产生丙二醇，可缺失和/或过表达表5中列出的天然醇脱氢酶和醛-酮还原酶，而监测丙二醇的生产。

对于酵母CBP平台，也存在多个由甲基乙二醛至丙二醇的途径。见图4。一个通过半乳醛的途径涉及引入甘油脱氢酶(E.C.1.1.1.-)，其加倍了所形成的丙二醇的量。见Hoffman，M.L.，1999，Metabolicengineering of 1，2-propanediol production in Saccharomycescerevisiae.Ph.D.Dissertation，University of Wisconsin-Madison。备选地，醛还原酶(E.C.1.1.1.21)可能能够将甲基乙二醛转化为半乳醛，然后随后被转化为丙二醇，可过表达天然的酵母醛还原酶GRE3来测试这种可能性。此外，甲基乙二醛能够潜在地被乙醛酸还原酶(E.C.1.1.1.79)转化为半乳醛，或者被甲基乙二醛脱氢酶(E.C.1.2.1.49)转化为半乳醛。可在十种天然醇脱氢酶中筛选这些醇脱氢酶活性的存在。见表5。可能需要结合上述两个通路进行工程化以达到所需的丙二醇滴度。

将甲基乙二醛转化为丙二醇的酶是氧化还原酶，其中有使用NADH或NADPH作为辅因子的实例。关于辅因子的知识对于在酵母平台中生产丙二醇是重要的，这是因为细胞的区室化以及NADH与NADPH相互转化的相对困难性限制了细胞处理这些辅因子中不平衡的能力。对于厌氧生产丙二醇，将需要与NADH相连的酶，因为这些是在由酸甘油醛3-磷酸产生CO₂和丙酮的过程中生成的还原性等价物。在细菌系统中鉴别的数个酶具有这种特征。

对于途径(iii)(由酸甘油醛3-磷酸生成丙酮)，需要将非天然酶促活性工程化到细菌和酵母平台中。细菌生物体具有将丙酮酸转化为乙酰辅酶A的天然酶活性(E.C.1.2.7.1)(图4，浅灰框)，而酵母平台需要表达非天然活性(E.C.2.3.1.54)以将丙酮酸转化为乙酰辅酶A(图9a，深灰色框)。

为了在细菌平台中将乙酰辅酶A转化为丙酮，可使用来自丙酮丁醇梭菌的基因工程化与(E.C.2.3.1.9)、(E.C.2.8.3.8)和(E.C.4.1.1.4)相关的活性，而与(E.C.1.2.7.1)、(E.C.2.3.1.8)和(E.C.2.7.2.1)相关的活性实际上是内源性的(图4)。见Bermejo，L.L.，等人，1998，ApplEnviron Microbiol.64(3)，1079-85。总之，这些活性将允许由两个分子的丙酮酸形成丙酮。对于酵母平台，这些酶促活性可被工程化到酵母中。需要丙酮酸甲酸裂解酶PFL(E.C.2.3.1.54)用于在细胞溶质中形成乙酰辅酶A，因为大多数酵母内源产生的乙酰辅酶A被隔离在线粒体中。在酵母中表达了有酶促活性的PFL，用于生产甲酸。Waks，Z.，& Silver，P.A.，2009，Appl.Env.Microbiol.75，1867-1875。酿酒酵母具有内源性的甲酸脱氢酶(E.C.1.2.1.2)以将所生成的甲酸转化为CO₂和H⁺。随后可通过引入如上文所述的丙酮丁醇梭菌通路(E.C.2.8.3.8)和(E.C.4.1.1.4)，与酵母乙酰辅酶A乙酰转移酶ERG10(E.C.2.3.1.9)共同作用，而将所生成的细胞溶质乙酰辅酶A转化为丙酮。

上文所述的通路描述了指导碳从糖流向丙二醇和丙酮所需的天然和非天然基因。此外，为了防止产物产率的减少(即防止碳从所需的终产物流走)，可从各个平台中缺失各种基因。对于细菌CBP系统，这些基因显示在表5中。缺失adh(E.C.1.1.1.1)将防止从乙酰辅酶A流向乙醛，而缺失ldh(E.C.1.1.1.27)将防止碳从丙酮酸流向乳酸。缺失氢化酶基因(E.C.1.12.7.2)将确保糖酵解过程中生成的还原性等价物可被用于制备经还原的终产物(例如1，2-丙二醇)而不是更为氧化的H₂和乙酸对。对于酵母CBP平台，待缺失的基因在表5中列出。编码与(E.C.4.1.1.1)相关的活性的基因可被缺失以防止碳从丙酮酸流向乙醛。此外，与(E.C.1.1.1.8)和(E.C.3.1.3.21)活性相关的基因可被缺失以防止碳作为甘油从二羟丙酮磷酸丧失。

实施例5

在酵母CBP平台中好氧生产丙二醇

本实施例的目的是提供用于在酵母CBP平台中好氧生产丙二醇的新通路。好氧生产丙二醇在ATP生产方面提供了一些益处。例如Cameron等人的“Metabolic engineering of propanediolpathways”Biotechnology Progress，14(1)：116-125(1998)中讨论了好氧生产的优势，其中在非区室化的生物体中可实现0.61g丙二醇/g的产率。的确，通过好氧过程进行了商业生产1，3-丙二醇。虽然在非区室化的生物体中没有高达0.61g丙二醇/g，本通路在区室化的生物体中提供了丙二醇的高产率，如下文中所讨论的。

使用此平台生产的1，2-丙二醇可被用作有价值的中间产物或利用微生物(例如罗伊氏乳杆菌)菌株被转化为丙酸和丙醇，所述微生物菌株分离自已知进行这一反应的酵母。见Sriramulu，D.D.，等人，2008，J Bacteriol.190(13)：4559-67。也可能存在化学途径直接将丙二醇转化为丙醇或甚至丙烯。

丙二醇生产的通路定义和化学计量计算

由碳水化合物好氧生产丙二醇被概述在图5的通路中并需要数种不同的酶的活性(见表5)。

在酵母好氧代谢过程中由6个葡萄糖分子生产丙二醇(此反应唯一的可溶性产物)是由下列总体化学计量等式控制的：

6葡萄糖+12O₂→6x丙二醇+12H₂O+18CO₂+26ATP

为了平衡细胞溶质中的氧化还原，必须对于每个所产生的丙二醇分子，通过戊糖磷酸通路(PPP)将1分子的葡萄糖6-磷酸完全氧化。此外，通过在TCA循环中氧化酸甘油醛3-磷酸和电子运输链产生了正的ATP平衡。见图4。

上述通路作用于己糖时，丙二醇的理论产率为0.42g丙二醇/g己糖。通过此通路不能转化100％的木糖，但是可以与单独的葡萄糖相似的产率转化葡萄糖/木糖混合物。虽然没有对于非区室化的生物体的产率高，所提出的通路提供了丙二醇的高产率。此外，不能排除NADH从线粒体基质向细胞溶质穿梭的可能性，因为已显示了这种穿梭。见Bakker，B.M，等人，2000，Appl.Env.Micro.182，4730-4737。这将潜在地允许酿酒酵母中更高的产率。在克鲁维酵母类型的酵母中，由于还原性等价物向细胞质的穿梭和这些生物体中戊糖磷酸通路的提高的活性，产率也可能增加。

5.3 丙二醇的好氧生产途径和相应的酶学

对于由葡萄糖产生二羟丙酮磷酸和酸甘油醛3-磷酸，酶活性是天然糖酵解通路(例如EMP通路)的一部分，如上文所述。见表5和图5。

对于随后由二羟丙酮磷酸生成丙二醇，如实施例4中(见图4)所述呈现了两个备选的途径，这一部分是因为二者都产生相同的氧化还原平衡并且据推理不知道最佳的途径。二者均以通过甲基乙二醛合酶mgs(E.C.4.2.3.3)由二羟丙酮磷酸产生甲基乙二醛开始。见图4。对于酵母，此基因将需要从数个潜在来源之一获得。

如上文的实施例4中所述，酵母中存在多个由甲基乙二醛至丙二醇的途径。见图4。一个通过半乳醛的途径涉及引入甘油脱氢酶(E.C.1.1.1.-)，其加倍了所形成的丙二醇的量。见Hoffman，M.L.，1999，Metabolic engineering of 1，2-propanediol production inSaccharomyces cerevisiae.Ph.D.Dissertation，University ofWisconsin-Madison。备选地，醛还原酶(E.C.1.1.1.21)可能能够将甲基乙二醛转化为半乳醛，然后随后被转化为丙二醇，可过表达天然的酵母醛还原酶GRE3来测试这种可能性。此外，甲基乙二醛能够潜在地被乙醛酸还原酶(E.C.1.1.1.79)转化为半乳醛，或者被甲基乙二醛脱氢酶(E.C.1.2.1.49)转化为半乳醛。可在十种天然醇脱氢酶中筛选这些醇脱氢酶活性的存在。见表5。可能需要结合上述两个通路进行工程化以达到所需的丙二醇滴度。

如上文所述，将甲基乙二醛转化为丙二醇的酶是氧化还原酶，其中有使用NADH或NADPH作为辅因子的实例。关于辅因子的知识对于在酵母平台中生产丙二醇是重要的，这是因为细胞的区室化以及NADH与NADPH相互转化的相对困难性限制了细胞处理这些辅因子中不平衡的能力。在丙二醇的好氧生产中，需要与NADPH相连的酶的版本，因为在戊糖磷酸通路中完成的是产生NADPH形式的还原性等价物。酿酒酵母gre3基因是用于好氧系统的好的实例(和候选者)。

为了在酵母中使用好氧过程将碳水化合物源转化为丙二醇，将需要控制沿特定通路的碳流动。通过控制向PPP和丙二醇的流动获得了氧化还原平衡，而当将向TCA循环和电子转运链的流动被保持在最低水平时，获得了最佳的产物产率。控制向PPP的流动涉及相对于pgi的活性(其将葡萄糖6-磷酸转化为果糖6-磷酸)操控zwf1(其将葡萄糖6-磷酸转化为D-葡萄糖酸-1，5-内酯6-磷酸)的表达水平。为了控制向TCA循环和电子转运链的流动量，可使用两种方法之一。一种将是下调PDH，从而减少线粒体中被转化为乙酰辅酶A的丙酮酸的量。另一种将是控制发酵容器中的氧流动以限制可用于电子转运链的氧的量。前者的遗传学方式具有优势，因为其缓和了用于大规模通风的仔细方法控制的必要性。

实施例6

鉴别和表征解糖热厌氧杆菌pdu基因簇

数种微生物厌氧地将丙二醇代谢为丙醇。丙二醇利用的实例可在各种细菌物种中找到，这包括热厌氧细菌、沙门菌属(Salmonella)、李斯特菌属(Listeria)和梭菌属。在一些微生物(例如，李斯特菌属的种和沙门菌属的种)中，丙二醇利用所需的基因(pdu)在基因组上成簇。一般性地见Scott，K.P.，等人，J.Bacteriol.188(12)：4340-49(2006)；Bobik，T.A.，等人，J.Bacteriol.181(19)：5967-75；Xue，J.，等人，Appl.Env.Microbiol.74(22)：7073-79(2008)。

将丙二醇转化为丙醇所需的两种酶活性包括：

1)二醇脱水酶(由pduCDE编码)和

2)脱氢酶(由pduQ编码)。

见上文的表3。在数种微生物(例如沙门菌属的种或李斯特菌属的种)中，第一种酶活性通常涉及通过依赖维生素B12的异聚二醇脱水酶的催化。pdu基因簇通常被发现包括合成维生素B12所需的酶或与此类酶相关。一些pdu基因簇包括用于下列的基因：1)B12合成，2)AraC型转录活化因子，3)二组分应答调节因子，4)醇和醛脱氢酶，或5)rnfC同源物。见Scott，K.P.，等人，J.Bacteriol.188(12)：4340-49(2006)；Bobik，T.A.，等人，J.Bacteriol.181(19)：5967-75；Xue，J.，等人，Appl.Env.Microbiol.74(22)：7073-79(2008)。

至今，在嗜热厌氧细菌中没有鉴别出pdu基因簇。此实施例提供了就其将丙二醇转化为丙醇的用途(根据例如实施例2中所描述的方案)鉴别和表征解糖热厌氧杆菌pdu基因簇。

解糖热厌氧杆菌中的pdu基因组织结构显示在图6中并且包括数个在来自其它微生物的pdu基因簇中所发现的基因。解糖热厌氧杆菌pdu基因包括ABC-糖转运子组分(or201，or202，or203)、二组分应答调节因子(or206，or207)、鼠李糖异构酶(or209)、鼠李糖激酶(or208)、鼠李糖-1-磷酸半乳醛裂解酶(or227)、推测的丙二醇：NAD⁺氧化还原酶(or211)、微区室蛋白(pduJ，pduL等，or212，or214，or215，or216，or217)、醛脱氢酶(or219)、醇脱氢酶(or218)、磷酸乙酰转移酶(or213)、B12附属酶(or223，or222，or221，or220)、B-12依赖性二醇脱水酶pduCDE(or226，or225，or224)以及转录调节因子(or228)。可例如如下表征这些基因的活性：通过各种基因缺失研究、在鼠李糖上生长、和/或表达到异源系统(例如热解糖热厌氧杆菌和热纤维素梭菌)中。

测定了解糖热厌氧杆菌(其包含上文所鉴别的pdu基因簇)产生可检测水平的正丙醇的能力。在含有10g/L CaCO₃的TSC1培养基(表6)中、以5.8的起始pH、在55℃和200rpm下、在厌氧条件下，培养野生型解糖热厌氧杆菌YS485菌株。所述培养基被补充以0.001g/L的维生素B12。

表6.TSC1培养基的组成

组分	浓度(g/L)
		(NH4)2SO4	1.85
FeSO4*7H2O	0.05
		KH2PO4	0.5
MgSO4	1
		CaCl2*2H2O	0.05
柠檬酸钠*2H2O	2
		酵母提取物	8.5
CaCO3	10
		L-鼠李糖	18

进行了批次发酵并且在表7中所示的各时间点取样。通过HPLC分析样品以检测剩余的L-鼠李糖和终产物，这包括乳酸(LA)、乙酸(AA)、乙醇(Etoh)、1，2-丙二醇(1，2PD)和正丙醇。结果显示在表7中。

表7.在生长在L-鼠李糖上的解糖热厌氧杆菌中生产1，2-丙二醇和正丙醇

这些结果表明在L-鼠李糖上生长时，解糖热厌氧杆菌具有产生1，2-丙二醇(直至5.1g/L)和正丙醇(1.6g/L)的天然能力。pdu基因簇包括一些鼠李糖利用和糖摄取基因，这表示那些有可能参与此过程。这提供了被显示能够生产正丙醇的嗜热厌氧细菌的第一个实例。

实施例7

使用不依赖B12的二醇脱水酶在酵母中通过丙二醇生产丙醇

如上文所述，将丙二醇转化为丙醇所需的两种酶活性之一包括二醇脱水酶，其在数种微生物中依赖于维生素B12。酵母缺乏代谢机制以合成维生素B12，因此，不可能不提供例如合成维生素B12的酶活性而在酵母中工程化依赖维生素B12的酶。有数个报道关于不需要维生素B12的丙二醇脱水酶。见Raynaud，C.，等人，PNAS(USA)100(9)：5010-15(2003)；Scott，K.P.，等人，J.Bacteriol.188(12)：4340-49(2006)；Hartmanis，M.G.，以及Stadtman，T.C.，Arch.Biochem.Biophys.245(1)144-52(1986)。

因为对于维生素B12的需求，将丙二醇厌氧转化为丙醇由于需要依赖维生素B12的酶而被认为是不可能的。描述了不依赖B12的二醇脱水酶的最近的报道提供了筛选自然界中存在的不依赖B12的二醇脱水酶以及在酵母中表达它们的来源和动机。见Raynaud，C.，等人，PNAS(USA)100(9)：5010-15(2003)；Scott，K.P.，等人，J.Bacteriol.188(12)：4340-49(2006)；Hartmanis，M.G.，和Stadtman，T.C.，Arch.Biochem.Biophys.245(1)144-52(1986)。如果成功地进行，这将是迄今为止首例工程化的、产生正丙醇的酵母。此实施例的目的是在酵母(例如酿酒酵母)中鉴别和工程化不依赖维生素B12的二醇脱水酶以及其它必要的酶，以将丙二醇厌氧地转化为丙醇。

在酵母中由例如碳水化合物源生成丙醇的代谢通路与上文中的实施例2和图2中所示的途径相似。为了成功地实现葡萄糖的这种转化，需要在酵母中工程化数种酶活性。通过酵母中内源性的酶活性实现了将葡萄糖转化为丙酮酸和二羟基丙酮-P。需要被工程化的那些活性在图7中被突出显示并且如下：

1)通过丙酮酸-甲酸裂解酶(PFL)(E.C.2.3.1.8)将丙酮酸转化为乙酰辅酶A和甲酸已被成功地工程化并显示。见Waks，Z.and Silver，P.A.，Appl.Env.Microbiol.75(7)：1867-75(2009)。这是在酵母细胞溶质中生成乙酰辅酶A集合用于其随后转化为异丙醇的重要步骤。同时，需要避免丙酮酸通过丙酮酸脱羧酶(PDC)流向乙酰辅酶A，为此需敲除PDC1、PDC5和PDC6。通过内源性的酶甲酸脱氢酶(E.C.1.2.1.2)而催化甲酸向二氧化碳的转化。

2)在生成ATP的反应中，乙酰辅酶A进一步被磷酸乙酰转移酶(E.C.2.3.1.8)和乙酸激酶(E.C.2.7.2.1)转化为乙酸。两个乙酰辅酶A分子被硫解酶(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶(E.C.2.8.3.8)转化为乙酰乙酸，其中辅酶A种类从乙酰乙酰辅酶A被转移至乙酸，这补充了在硫解酶反应过程中消耗的乙酰辅酶A。然后，乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶(E.C.4.1.1.4)转化为丙酮。丙酮被还原为异丙醇可通过醇脱氢酶(E.C.1.1.1.80)完成。

3)由二羟基丙酮-P合成甲基乙二醛可通过表达异源的甲基乙二醛合酶(mgs)和甘油脱氢酶(gldA)实现，如之前所显示的。见Lee，W.和DaSilva，N.A.，Metabolic Eng.8(1)：58-65(2006)。

4)将丙二醇转化为丙醇需要如上所述的两种酶活性，其涉及二醇脱水酶和脱氢酶。虽然数种微生物可利用依赖维生素B12的二醇脱水酶将1，2-丙二醇转化为丙醇，由于B12依赖性，通过依赖维生素B12的二醇脱水酶在酵母中进行反应是不可行的。最近发现的几个不依赖维生素B12的二醇脱水酶的实例包括从下列中鉴别出的那些：丁酸梭菌、Roseburia inulinivorans、乙二醇梭菌和克雷伯菌属的种(Klebsiellaspp)。丁酸梭菌酶被详尽地表征并被显示在异源系统(大肠杆菌)中不依赖于B12而起作用。见Tang，X.，等人，Appl.Env.Microbiol.75(6)：1628-34(2009)。以丁酸梭菌不依赖性于B12的二醇脱水酶活性获得的结果表明所述酶可被工程化到异源系统(例如酵母)中。

除了整合这些酶促活性之外，必须在酵母中破坏从丙酮酸至乙醇的碳流动。这可通过缺失pdc1，pdc5和pdc6实现。PDC缺失株系生长缓慢并且需要添加少量的乙醇或乙酸而存活；然而，这些问题可通过基于进化的方式被克服。见例如，van Maris，A.J.A.，等人，Appl.Env.Microbiol.70(1)：159-66(2004)。此类株系以高水平产生丙酮酸的事实表示此化合物将可用于随后通过上文所提出的通路转化为丙醇。

为了鉴别其它不依赖于B12的二醇脱水酶用于上文部分4中的工程化，可鉴别出自然界中存在的其它不依赖于B12的二醇脱水酶。用于鉴别的适当方法包括但不限于：基于与已知的不依赖于B12的二醇脱水酶的同源性的比对检索，与蛋白纯化和蛋白测序相结合的酶促活性测定，以及对于利用1，2丙二醇的生物体的全基因组转录分析。见例如，Scott，K.P.等人，J.Bact 188(12)：4340-4349(2006)，和Raynaud，C.等人，PNAS 100(9)：5010-5015(2003)。

一旦被鉴别和分离，负责所述活性的基因连同上文所述的其它酶活性被克隆到酵母中。随后进行对于不依赖于B12的二醇脱水酶的表达的优化以及对于丙醇生产的分析测定。

通过引用而并入

本文所引用的所有美国专利和美国公开的专利申请均在此通过引用而并入。

等同者

本领域技术人员将认可、或将能够利用不超出常规实验而确定，本文所描述的本发明的特定技术方案的许多等同体。此类等同体意在被下文的权利要求所涵盖。

Claims (105)

1.重组的微生物；

其中所述微生物表达一种或多种天然和/或异源的酶；

其中所述一种或多种酶在一个或多个工程化的代谢通路中起作用以将碳水化合物源转化为1，2-丙二醇、异丙醇和乙醇，或转化为1，2-丙二醇、异丙醇和甘油；和

其中所述一种或多种天然和/或异源酶被活化、上调或下调。

2.权利要求1的重组微生物，其中所述碳水化合物源是木质纤维素。

3.权利要求1或2的重组微生物，其中所述碳水化合物源被转化为二羟丙酮磷酸和磷酸甘油醛。

4.权利要求1-3中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将二羟丙酮磷酸转化为1，2-丙二醇。

5.权利要求1-4中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将丙酮酸转化为异丙醇。

6.权利要求1-5中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将丙酮酸转化为乙醇。

7.权利要求1-5中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将二羟丙酮磷酸转化为甘油。

8.权利要求1-7中任一项的重组微生物，其中产生1，2丙二醇的工程化的代谢通路包括下列步骤：(a)将二羟丙酮磷酸转化为甲基乙二醛；(b)将甲基乙二醛转化为丙酮醇或半乳醛；和(c)将丙酮醇或半乳醛还原为丙二醇。

9.权利要求1-8中任一项的重组微生物，其中产生异丙醇的工程化的代谢通路包括：(a)将乙酰辅酶A转化为乙酸；(b)将乙酰辅酶A转化为乙酰乙酰辅酶A；(c)将乙酰乙酰辅酶A转化为乙酰乙酸；(d)将乙酰乙酸转化为丙酮；和(e)将丙酮还原为异丙醇。

10.权利要求1-6或8-9中任一项的重组微生物，其中产生乙醇的工程化的代谢通路包括：(a)将乙酰辅酶A转化为乙醇。

11.权利要求1-5或7-9中任一项的重组微生物，其中产生甘油的工程化的代谢通路包括：(a)将二羟丙酮磷酸转化为甘油。

12.权利要求1-6或8-10中任一项的重组微生物，其中所述微生物产生1，2-丙二醇、异丙醇和乙醇。

13.权利要求12的重组微生物，其中组合产生1，2-丙二醇、异丙醇和乙醇是由化学计量等式2C₆H₁₂O₆→C₃H₈O+C₃H₈O₂+C₂H₆O+4CO₂+H₂+3ATP控制的。

14.权利要求1-6，8-10或12-13中任一项的重组微生物，其中所述微生物是嗜热或嗜温细菌。

15.权利要求14的重组微生物，其中所述嗜热或嗜温细菌是下列属的种：热厌氧细菌(Thermoanaerobacterium)、热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter)、梭菌(Clostridium)、土芽孢杆菌(Geobacillus)、糖球菌(Saccharococcus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、热解纤维素菌属(Caldicellulosiruptor)、Anaerocellum或厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)。

16.权利要求15的重组微生物，其中所述微生物是选自下列的细菌：热产硫磺热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosulfurigenes)、嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumaotearoense)、解多糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumpolysaccharolyticum)、玉蜀黍热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumzeae)、解木聚糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumxylanolyticum)、解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumsaccharolyticum)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobium brockii)、热解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosaccharolyticum)、热硫化氢热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterthermohydrosulfuricus)、产乙醇热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterethanolicus)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter brocki)、热纤维素梭菌(Clostridium thermocellum)、解纤维梭菌(Clostridiumcellulolyticum)、Clostridium phytofermentans、Clostridiumstraminosolvens、热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillusthermoglucosidasius)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)、Saccharococcus caldoxylosilyticus、嗜热糖球菌(Saccharoccus thermophilus)、坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacilluscampinasensis)、黄热芽孢杆菌(Bacillus flavothermus)、Anoxybacilluskamchatkensis、Anoxybacillus gonensis、Caldicellulosiruptoracetigenus、解糖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor saccharolyticus)、Caldicellulosiruptor kristjanssonii、Caldicellulosiruptor owensensis、Caldicellulosiruptor lactoaceticus和嗜热厌氧纤维降解菌(Anaerocellum thermophilum)。

17.权利要求16的重组微生物，其中所述微生物选自热纤维素梭菌和解糖热厌氧杆菌。

18.权利要求1-5、7-9或11中任一项的重组微生物，其中所述微生物产生1，2-丙二醇、异丙醇和甘油。

19.权利要求18的重组微生物，其中组合产生1，2-丙二醇、异丙醇和乙醇是由化学计量等式2C₆H₁₂O₆→C₃H₈O+C₃H₈O₂+C₃H₈O₃+3CO₂+ATP控制的。

20.权利要求1-5、7-9、11或18-19中任一项的重组微生物，其中所述微生物选自：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)，马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)，巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)，多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)，红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)，实用假丝酵母(Candida utliis)，Arxula adeninivorans，树干毕赤酵母(Pichiastipitis)，汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，多形德巴利酵母(Debaryomyces polymorphus)，粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)，白色假丝酵母(Candida albicans)和西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)。

21.权利要求20的重组微生物，其中所述微生物为酿酒酵母。

22.权利要求3-21中任一项的重组微生物，其中所述二羟丙酮磷酸被甲基乙二醛合酶(EC 4.2.3.3)转化为甲基乙二醛；其中所述甲基乙二醛被醛-酮还原酶转化为丙酮醇或者被乙醛酸还原酶、甲基乙二醛脱氢酶或醛脱氢酶转化为半乳醛；并且其中所述丙酮醇被醛-酮还原酶转化为丙二醇或者所述半乳醛被醛还原酶转化为丙二醇。

23.权利要求22的重组微生物，其中所述丙二醇被生物学地或化学地转化为丙酸和丙醇。

24.权利要求23的重组微生物，其中所述丙二醇的生物学转化是利用微生物完成的。

25.权利要求24的重组微生物，其中所述微生物是罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。

26.权利要求3-21中任一项的重组微生物，其中所述磷酸甘油醛被转化为丙酮酸；其中所述丙酮酸被丙酮酸甲酸裂解酶(E.C.2.3.1.8)转化为乙酰辅酶A；其中所述乙酰辅酶A被硫解酶ERG10(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A；其中所述乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶转化为乙酰乙酸；其中所述乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶转化为丙酮；并且其中所述丙酮被异丙醇或醇脱氢酶转化为异丙醇。

27.权利要求26的重组微生物，其中所述醇脱氢酶选自ADH1-7、BDH2、SFA1和YPL088W。

28.权利要求26或27的重组微生物，其中所述生物体为PDC1、PDC5和/或PDC6敲除株系。

29.权利要求22或26的重组微生物，其中所述甲基乙二醛合酶，醛-酮还原酶，乙醛酸还原酶，甲基乙二醛脱氢酶，醛还原酶，丙酮酸甲酸裂解酶，硫解酶，辅酶A转移酶，乙酰乙酸脱羧酶，异丙醇，醛脱氢酶和/或醇脱氢酶选自表2中所列的相应酶中的任一种。

30.权利要求1-6、8-10或12-17中任一项的微生物，其产生至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或至少95％的丙二醇、丙醇和乙醇的理论产率，其中所述理论产率是0.21g丙二醇/g碳水化合物，0.17g丙醇/g碳水化合物和0.13g乙醇/g碳水化合物。

31.权利要求1-5、7-9、11或18-21中任一项的微生物，其产生至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或至少95％的丙二醇、丙醇和甘油的理论产率，其中所述理论产率为0.21g丙二醇/g碳水化合物、0.17g丙醇/g碳水化合物和0.26g甘油/g碳水化合物。

32.重组微生物；

其中所述微生物表达一种或多种天然和/或异源酶；

其中所述一种或多种酶在一个或多个工程化的代谢通路中起作用以将碳水化合物源转化为正丙醇和异丙醇；和

其中所述一种或多种天然和/或异源酶被活化、上调或下调。

33.权利要求33的重组微生物，其中所述碳水化合物源为木质纤维素。

34.权利要求33的重组微生物，其中产生正丙醇和异丙醇是由化学计量等式3C₆H₁₂O₆→2(n-)C₃H₈O+2(iso-)C₃H₈O+6CO₂+2H₂O+4ATP控制的。

35.权利要求33的重组微生物，其中产生正丙醇和异丙醇是由化学计量等式9C₅H₁₀O₅→5(n-)C₃H₈O+5(iso-)C₃H₈O+15CO₂+5H₂O+12ATP控制的。

36.权利要求32-35中任一项的重组微生物，其中产率为至少0.35g丙醇/g碳水化合物源。

37.权利要求32-35中任一项的重组微生物，其中产率为至少0.40g丙醇/g碳水化合物源。

38.权利要求32-37中任一项的重组微生物，其产生至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的丙醇的理论产率，其中所述理论产率为0.44g丙醇/g碳水化合物。

39.权利要求32-38中任一项的重组微生物，其中所述碳水化合物源被转化为二羟丙酮磷酸和磷酸甘油醛。

40.权利要求39的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将二羟丙酮磷酸转化为正丙醇。

41.权利要求39或40的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将丙酮酸转化为异丙醇。

42.权利要求39-41中任一项的重组微生物，其中所述二羟丙酮磷酸被甲基乙二醛合酶(E.C.4.2.3.3)转化为甲基乙二醛；其中所述甲基乙二醛被醛-酮还原酶转化为丙酮醇，或者被乙醛酸还原酶、甲基乙二醛脱氢酶或醛脱氢酶转化为半乳醛；其中所述丙酮醇被醛-酮还原酶转化为丙二醇，或者所述半乳醛被醛还原酶转化为丙二醇；其中所述丙二醇被二醇-水解酶(E.C.4.2.1.28)脱水为丙醛；并且其中所述丙醛被脱氢酶(E.C.1.1.1.202)还原为正丙醇。

43.权利要求39-41中任一项的重组微生物，其中所述磷酸甘油醛被转化为丙酮酸；其中所述丙酮酸被丙酮酸甲酸裂解酶(E.C.2.3.1.8)转化为乙酰辅酶A；其中所述乙酰辅酶A被硫解酶ERG10(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A；其中所述乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶转化为乙酰乙酸；其中所述乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶转化为丙酮；和其中所述丙酮被异丙醇或醇脱氢酶转化为异丙醇。

44.权利要求42或43的重组微生物，其中所述甲基乙二醛合酶，醛-酮还原酶，乙醛酸还原酶，甲基乙二醛脱氢酶，醛还原酶，丙酮酸甲酸裂解酶，硫解酶，辅酶A转移酶，乙酰乙酸脱羧酶，异丙醇，醛脱氢酶，醇脱氢酶，二醇-水解酶和/或脱氢酶选自表3中所列的相应酶中的任一种。

45.权利要求32-44中任一项的重组微生物，其中所述微生物是乳酸脱氢酶(ldh)、氢化酶(hyd)和/或乙醛脱氢酶(acdh)敲除株系。

46.权利要求32-45中任一项的重组微生物，其中所述微生物是下列属的种：热厌氧细菌(Thermoanaerobacterium)、热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter)、梭菌(Clostridium)、土芽孢杆菌(Geobacillus)、糖球菌(Saccharococcus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、热解纤维素菌属(Caldicellulosiruptor)、Anaerocellum或厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)。

47.权利要求46的重组微生物，其中所述微生物是选自下列的细菌：热产硫磺热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosulfurigenes)、嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumaotearoense)、解多糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumpolysaccharolyticum)、玉蜀黍热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumzeae)、解木聚糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumxylanolyticum)、解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumsaccharolyticum)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobium brockii)、热解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosaccharolyticum)、热硫化氢热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterthermohydrosulfuricus)、产乙醇热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterethanolicus)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter brocki)、热纤维素梭菌(Clostridium thermocellum)、解纤维梭菌(Clostridiumcellulolyticum)、Clostridium phytofermentans、Clostridiumstraminosolvens、热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillusthermoglucosidasius)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)、Saccharococcus caldoxylosilyticus、嗜热糖球菌(Saccharoccus thermophilus)、坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacilluscampinasensis)、黄热芽孢杆菌(Bacillus flavothermus)、Anoxybacilluskamchatkensis、Anoxybacillus gonensis、Caldicellulosiruptoracetigenus、解糖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor saccharolyticus)、Caldicellulosiruptor kristjanssonii、Caldicellulosiruptor owensensis、Caldicellulosiruptor lactoaceticus和嗜热厌氧纤维降解菌(Anaerocellum thermophilum)。

48.权利要求47的重组微生物，其中所述微生物选自热纤维素梭菌和解糖热厌氧杆菌。

49.权利要求32-45中任一项的重组微生物，其中所述微生物选自：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)，马克思克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)，巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)，多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)，红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)，实用假丝酵母(Candida utliis)，Arxula adeninivorans，树干毕赤酵母(Pichia stipitis)，汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，多形德巴利酵母(Debaryomycespolymorphus)，粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)，白色假丝酵母(Candida albicans)和西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)。

50.重组微生物；

其中所述微生物表达一种或多种天然和/或异源的酶；

其中所述一种或多种酶在一个或多个工程化的代谢通路中起作用以将碳水化合物源转化为异丙醇和甲醇；和

其中所述一种或多种天然和/或异源的酶被活化、上调或下调。

51.权利要求50的重组微生物，其中所述碳水化合物源是木质纤维素。

52.权利要求51的重组微生物，其中产生正丙醇和异丙醇是由化学计量等式C₆H₁₂O₆→C₃H₈O+CH₄O+2CO₂+3ATP控制的。

53.权利要求50-52中任一项的重组微生物，其中产率为至少0.25g丙醇/g碳水化合物源。

54.权利要求50-53中任一项的重组微生物，其中产率为至少0.30g丙醇/g碳水化合物源。

55.权利要求50-52中任一项的重组微生物，其产生至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的丙醇的理论产率，其中所述理论产率为0.33g异丙醇/g碳水化合物和0.18g甲醇/g碳水化合物。

56.权利要求50-55中任一项的重组微生物，其中所述碳水化合物源被转化为丙酮酸；且其中所述丙酮酸被丙酮酸甲酸裂解酶(E.C.2.3.1.54)转化为乙酰辅酶A和甲酸。

57.权利要求50-56中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将丙酮酸转化为异丙醇。

58.权利要求50-57中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将甲酸转化为CO₂和甲醇。

59.权利要求56-58中任一项的重组微生物，其中所述乙酰辅酶A被磷酸乙酰转移酶(E.C.2.3.1.8)转化为乙酸且被硫解酶(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A；其中所述乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶转化为乙酰乙酸；其中所述乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶(E.C.4.1.1.4)转化为丙酮；且其中所述丙酮被氧化还原酶或醇脱氢酶还原为异丙醇。

60.权利要求56-59中任一项的重组微生物，其中所述甲酸通过两个通路被代谢，第一个通路引起由甲酸脱氢酶产生CO₂和NADH，而第二个通路引起由甲醛脱氢酶和甲醇脱氢酶产生甲醇。

61.权利要求59或60的重组微生物，其中所述磷酸乙酰转移酶，硫解酶，辅酶A转移酶，乙酰乙酸脱羧酶，氧化还原酶，醇脱氢酶，甲酸脱氢酶，甲醛脱氢酶或甲醇脱氢酶选自表4中所列的相应酶中的任一种。

62.权利要求50-61中任一项的重组微生物，其中所述微生物微生物是下列属的种：热厌氧细菌(Thermoanaerobacterium)、热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter)、梭菌(Clostridium)、土芽孢杆菌(Geobacillus)、糖球菌(Saccharococcus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、热解纤维素菌属(Caldicellulosiruptor)、Anaerocellum或厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)。

63.权利要求62的重组微生物，其中所述微生物是选自下列的细菌：热产硫磺热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosulfurigenes)、嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumaotearoense)、解多糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumpolysaccharolyticum)、玉蜀黍热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumzeae)、解木聚糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumxylanolyticum)、解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumsaccharolyticum)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobium brockii)、热解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosaccharolyticum)、热硫化氢热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterthermohydrosulfuricus)、产乙醇热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterethanolicus)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter brocki)、热纤维素梭菌(Clostridium thermocellum)、解纤维梭菌(Clostridiumcellulolyticum)、Clostridium phytofermentans、Clostridiumstraminosolvens、热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillusthermoglucosidasius)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)、Saccharococcus caldoxylosilyticus、嗜热糖球菌(Saccharoccus thermophilus)、坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacilluscampinasensis)、黄热芽孢杆菌(Bacillus flavothermus)、Anoxybacilluskamchatkensis、Anoxybacillus gonensis、Caldicellulosiruptoracetigenus、解糖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor saccharolyticus)、Caldicellulosiruptor kristjanssonii、Caldicellulosiruptor owensensis、Caldicellulosiruptor lactoaceticus和嗜热厌氧纤维降解菌(Anaerocellum thermophilum)。

64.权利要求63的重组微生物，其中所述微生物选自热纤维素梭菌和解糖热厌氧杆菌。

65.重组微生物；

其中所述微生物表达一种或多种天然和/或异源的酶；

其中所述一种或多种酶在一个或多个工程化的代谢通路中起作用以将碳水化合物源转化为丙二醇和丙酮；和

其中所述一种或多种天然和/或异源酶被活化、上调或下调。

66.权利要求65的重组微生物，其中所述碳水化合物源是木质纤维素。

67.权利要求65或66的重组微生物，其中所述碳水化合物源被转化为二羟丙酮磷酸和磷酸甘油醛。

68.权利要求65-67中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将二羟丙酮磷酸转化为丙二醇。

69.权利要求65-68中任一项的重组微生物，其中所述工程化的代谢通路之一包括将丙酮酸转化为丙酮。

70.权利要求65-69中任一项的重组微生物，其中产生丙二醇的工程化的代谢通路包括下列步骤：(a)将二羟丙酮磷酸转化为甲基乙二醛；(b)将甲基乙二醛转化为丙酮醇或半乳醛；和(c)将丙酮醇或半乳醛还原为丙二醇。

71.权利要求65-70中任一项的重组微生物，其中产生丙酮的工程化的代谢通路包括：(a)将乙酰辅酶A转化为乙酸；(b)将乙酰辅酶A转化为乙酰乙酰辅酶A；(c)将乙酰乙酰辅酶A转化为乙酰乙酸；和(d)将乙酰乙酸转化为丙酮。

72.权利要求65-71中任一项的重组微生物，其中产生丙酮的工程化的代谢通路包括：(a)将乙酰辅酶A转化为丙酮。

73.权利要求65-72中任一项的重组微生物，其中组合产生丙二醇和丙酮是由化学计量等式C₆H₁₂O₆→2C₃H₈O+C₃H₆O₈+3CO₂+1ATP控制的。

74.权利要求65-73中任一项的重组微生物，其中所述微生物为嗜热或嗜温细菌。

75.权利要求74的重组微生物，其中所述嗜热或嗜温细菌是下列属的种：热厌氧细菌(Thermoanaerobacterium)、热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter)、梭菌(Clostridium)、土芽孢杆菌(Geobacillus)、糖球菌(Saccharococcus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、热解纤维素菌属(Caldicellulosiruptor)、Anaerocellum或厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)。

76.权利要求75的重组微生物，其中所述微生物是选自下列的细菌：热产硫磺热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosulfurigenes)、嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumaotearoense)、解多糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumpolysaccharolyticum)、玉蜀黍热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumzeae)、解木聚糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumxylanolyticum)、解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumsaccharolyticum)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobium brockii)、热解糖热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosaccharolyticum)、热硫化氢热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterthermohydrosulfuricus)、产乙醇热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterethanolicus)、布氏热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter brocki)、热纤维素梭菌(Clostridium thermocellum)、解纤维梭菌(Clostridiumcellulolyticum)、Clostridium phytofermentans、Clostridiumstraminosolvens、热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillusthermoglucosidasius)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)、Saccharococcus caldoxylosilyticus、嗜热糖球菌(Saccharoccus thermophilus)、坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacilluscampinasensis)、黄热芽孢杆菌(Bacillus flavothermus)、Anoxybacilluskamchatkensis、Anoxybacillus gonensis、Caldicellulosiruptoracetigenus、解糖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor saccharolyticus)、Caldicellulosiruptor kristjanssonii、Caldicellulosiruptor owensensis、Caldicellulosiruptor lactoaceticus和嗜热厌氧纤维降解菌(Anaerocellum thermophilum)。

77.权利要求76的重组微生物，其中所述微生物选自热纤维素梭菌和解糖热厌氧杆菌。

78.权利要求65-73中任一项的重组微生物，其中所述微生物选自：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)，马克思克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)，巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)，多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)，红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)，实用假丝酵母(Candida utliis)，Arxula adeninivorans，树干毕赤酵母(Pichia stipitis)，汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，多形德巴利酵母(Debaryomycespolymorphus)，粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)，白色假丝酵母(Candida albicans)和西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)。

79.权利要求78的重组微生物，其中所述微生物是酿酒酵母或乳酸克鲁维酵母。

80.权利要求65-79中任一项的重组微生物，其产生至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的丙醇的理论产率，其中所述理论产率为0.42g丙二醇/g碳水化合物和0.16g丙酮/g碳水化合物。

81.权利要求78或79的重组微生物，其中丙二醇的生产是好氧的。

82.权利要求81的重组微生物，其中产生丙二醇是由化学计量等式6葡萄糖+12O₂→6X丙二醇+12H₂O+18CO₂+26ATP控制的。

83.权利要求65-82中任一项的重组微生物，其中所述二羟丙酮磷酸被甲基乙二醛合酶(EC 4.2.3.3)转化为甲基乙二醛；其中所述甲基乙二醛被醛-酮还原酶转化为丙酮醇或者被乙醛酸还原酶、甲基乙二醛脱氢酶或醛脱氢酶转化为半乳醛；和其中所述丙酮醇被醛-酮还原酶转化为丙二醇或者所述半乳醛被醛还原酶转化为丙二醇。

84.权利要求65-82中任一项的重组微生物，其中所述磷酸甘油醛被转化为丙酮酸；其中所述丙酮酸被丙酮酸甲酸裂解酶(E.C.2.3.1.8)转化为乙酰辅酶A；其中所述乙酰辅酶A被硫解酶(E.C.2.3.1.9)转化为乙酰乙酰辅酶A；其中所述乙酰乙酰辅酶A被辅酶A转移酶转化为乙酰乙酸；和其中所述乙酰乙酸被乙酰乙酸脱羧酶转化为丙酮。

85.权利要求65-83中任一项的重组微生物，其中所述生物体为乳酸脱氢酶(ldh)，氢化酶(hyd)，醇脱氢酶(adh)，丙酮酸脱羧酶(pdc)，甘油-3-磷酸脱氢酶和/或甘油-3-磷酸敲除株系。

86.权利要求83或84的重组微生物，其中所述甲基乙二醛合酶，醛-酮还原酶，乙醛酸还原酶，甲基乙二醛脱氢酶，醛还原酶，丙酮酸甲酸裂解酶，硫解酶，辅酶A转移酶，乙酰乙酸脱羧酶，异丙醇，醛脱氢酶和/或醇脱氢酶选自表5中所列的相应酶的任一种。

87.将木质纤维生物质转化为1，2-丙二醇、异丙醇、甲醇、正丙醇或丙酮的方法，所述方法包括用根据权利要求1-86中任一项的重组微生物接触木质纤维生物质。

88.根据权利要求87的方法，其中所述木质纤维生物质选自草，柳枝稷，大米草，黑麦草，利甘草，混合的牧草，芒草，糖加工残余，甘蔗渣，甘蔗秆，农业废物，稻秆，稻壳，大麦秆，玉米穗轴，谷物秆，小麦秆，双低菜籽秆，燕麦秆，燕麦壳，玉米纤维，秸秆，大豆秸秆，玉米秸秆，林业废物，再循环的木浆纤维，纸淤污，锯屑，硬木，软木，及其组合。

89.根据权利要求1-86中任一项的、用于将木质纤维生物质转化为1，2-丙二醇、异丙醇、甲醇、正丙醇或丙酮的工程化的代谢通路。

90.权利要求42的重组微生物，其中所述丙二醇被来自解糖热厌氧杆菌的二醇脱水酶(pduCDE)脱水为丙醛。

91.权利要求42的重组微生物，其中所述丙二醇被不依赖于维生素B12的二醇脱水酶脱水为丙醛。

92.权利要求91的重组微生物，其中所述重组微生物是选自下列的酵母：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)，马克思克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)，巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)，多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)，红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)，实用假丝酵母(Candida utliis)，Arxula adeninivorans，树干毕赤酵母(Pichia stipitis)，汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，多形德巴利酵母(Debaryomycespolymorphus)，粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)，白色假丝酵母(Candida albicans)和西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)。

93.权利要求42的重组微生物，其中所述不依赖于维生素B12的二醇-水解酶是来自下列的不依赖于维生素B12的二醇脱水酶：丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、Roseburia inulinivorans、乙二醇梭菌(Clostridium glycolicum)或克雷伯菌属的种(Klebsiella spp)。

94.分离的丙二醇利用(pdu)基因簇，其来自解糖热厌氧杆菌。

95.权利要求94的分离的丙二醇利用(pdu)基因簇，其中所述基因簇包括编码下述的一种或多种的多核苷酸：ABC-糖转运子、二组分应答调节因子、鼠李糖利用酶、微区室蛋白pduJ、微区室蛋白pduL、醇或醛脱氢酶、B12酶和二醇脱水酶pduCDE。

96.权利要求94的分离的丙二醇利用(pdu)基因簇，其中所述基因簇包括选自下列的一种或多种多核苷酸：SEQ ID NO：63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117和119。

97.权利要求94的分离的丙二醇利用(pdu)基因簇，其中所述基因簇包括一种或多种多核苷酸，其编码选自下列的多肽：SEQ IDNO：62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116和118。

98.重组的微生物，其包含权利要求94-97中任一项的分离的丙二醇利用(pdu)基因簇。

99.鉴别将丙二醇转化为丙醛的、不依赖于维生素B12的二醇脱水酶的方法，所述方法包括：

(a)测定多肽或多核苷酸以及不依赖于维生素B12的参照二醇脱水酶多肽或多核苷酸的性质，和

(b)确定所述多肽或多核苷酸的性质与所述不依赖于维生素B12的参照二醇脱水酶多肽或多核苷酸的性质是否相似，

从而鉴别所述多肽或所述多核苷酸是否为不依赖于维生素B12的二醇脱水酶。

100.权利要求99的方法，其中所述性质包括多肽或多核苷酸的物理或化学性质，其中所述物理或化学性质包括基因组的、转录组的、蛋白质组的和代谢组的性质。

101.权利要求99的方法，其中所述不依赖于维生素B12的参照二醇脱水酶多肽是源自下列的不依赖于维生素B12的二醇脱水酶：丁酸梭菌、Roseburia inulinivorans、乙二醇梭菌和克雷伯菌属的种。

102.权利要求99的方法，其中所述测量步骤涉及获得多肽或多核苷酸的序列并将其与不依赖于维生素B12的参照二醇脱水酶多肽或多核苷酸的序列进行比对。

103.权利要求99的方法，其中所述测量步骤涉及进行酶促测定。

104.权利要求99的方法，其中所述测量步骤涉及进行全基因组转录测定。

105.重组微生物，其包含权利要求99-104中任一项的分离的不依赖于维生素B12的二醇脱水酶多肽。

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