CN102639138A

CN102639138A - 含有葛根提取物或发酵葛根提取物/乳酸菌复合物作为有效成分的用于预防或治疗肝中毒的组合物

Info

Publication number: CN102639138A
Application number: CN200980161522.7A
Authority: CN
Inventors: 马珍烈; 李载勋; 严永兰; 李智慧
Original assignee: KOREA INSTITUTE ORIENTAL MEDICINE
Current assignee: KOREA INSTITUTE ORIENTAL MEDICINE
Priority date: 2009-09-18
Filing date: 2009-09-25
Publication date: 2012-08-15
Anticipated expiration: 2029-09-25
Also published as: WO2011034225A1; US20130287761A1; KR20110030939A; US9549961B2; CN102639138B; US20120183526A1; KR101128002B1

Abstract

本发明涉及一种发酵葛根提取物/乳酸复合物，以及一种含有所述发酵复合物或葛根提取物作为活性成分的组合物，尤其是涉及通过接种乳酸菌至葛根汤再培养然后发酵制备的发酵葛根提取物/乳酸菌复合物，以及一种含有所述发酵复合物或葛根提取物的用于预防或治疗肝中毒的组合物。本发明的组合物对肝中毒有疗效，所以它可被有效地用作一种肝功能恢复剂或肝功能恢复保健食品。

Description

含有葛根提取物或发酵葛根提取物/乳酸菌复合物作为有效成分的用于预防或治疗肝中毒的组合物

技术领域

本发明涉及乳酸菌发酵葛根汤(Galgeuntang)，以及一种含有葛根汤或乳酸菌发酵葛根汤的用于预防或治疗肝中毒(liver toxicity)的组合物。

背景技术

葛根汤是一种中药处方，该处方通过葛根(puerariae radix)、麻黄、姜、枣、甘草、芍药、桂枝等熬制而成，可用于治疗颈腰僵直、畏寒、冷而无汗畏风寒的感冒症状；发寒颤(shivering with chills)、发烧、充血、冷而无汗身背僵直的感冒；以及眼耳鼻部发炎或者皮疹、哮喘等疾病。

现有技术中有如下的一些通过在草药中加入微生物进行发酵而制备对人体有益的药材的方法。例如，有一种在缓解肠功能紊乱方面能够产生协同效应的方法，该方法包括以下步骤：在草药提取物中联合培养(co-culturing)具有良好的生长率和香味的乳酸菌，然后对所述混合物进行发酵(韩国专利号185619)。还有一种在保持每味药材具备原有疗效(characteristics)的同时加倍其效果的方法，该方法包括以下步骤：用选定的谷物和草药发酵的黄豆，通过低温发酵工艺来发酵全部原材料(韩国专利公开号2004-0078030)。但是，还没有报道涉及葛根汤的发酵。

因此，发明人通过如下实验，首先通过注射四氯化碳诱导大鼠肝中毒，然后证实施用乳酸菌发酵的葛根汤或葛根汤本身后肝中毒能够被治愈，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的目的是提供乳酸菌发酵葛根汤，以及一种含有葛根汤或乳酸菌发酵葛根汤作为活性成分的用于预防或治疗肝中毒的组合物。

本发明提供通过下列步骤制备的乳酸菌发酵葛根汤：首先混合含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药、桂枝(Cinnamomi ramulus)的草药，再用热水提取，得到葛根汤，然后接种乳酸菌至上述葛根汤提取物后进行发酵。

所述葛根汤通过将2-10重量份的麻黄、2-10重量份的姜、2-10重量份的枣、1-7重量份的甘草、1-7重量份的芍药以及1-7重量份的桂枝与12重量份的葛根混合制备而成。

所述乳酸菌优选选自由双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、链球菌(Streptococcus)、明串珠菌(Leuconostoc)、小球菌(Pediococcus)、乳球菌(Lactococcus)菌属微生物组成的组中，进一步优选为双歧杆菌菌属微生物。

本发明还提供一种制备所述乳酸菌发酵葛根汤的方法，该方法包括下列步骤：

通过热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药和桂枝的草药混合物制备葛根汤；

将乳酸菌菌丝体培养液接种到所制备的上述葛根汤中；以及

通过对上述得到的葛根汤培养液进行无氧培养以诱导深层发酵。

上述制备方法优选包括附加步骤：在制备出葛根汤后，接种乳酸菌菌丝体培养液前，调节所述葛根汤的pH至6-8。

本发明还提供一种用于预防或治疗肝中毒的组合物，该组合物含有葛根汤和/或乳酸菌发酵葛根汤作为活性成分。

如上所述，葛根汤通过用热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药以及桂枝的草药混合物制备而成，并且所述乳酸菌发酵葛根汤也是通过如上文描述的方法制备而成的乳酸菌发酵组合物。

所述组合物能够降低选自AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)和LDH(乳酸脱氢酶)组成的组中的一种或多种酶的活性。

本发明进一步提供一种用于恢复肝功能的保健食品，该食品含有上述葛根汤和乳酸菌发酵葛根汤中的至少一种作为活性成分。

根据本发明优选实施方式，通过注射四氯化碳诱导大鼠肝中毒，然后分别对大鼠施用本发明提供的普通葛根汤和乳酸菌发酵葛根汤。观察小鼠的状态。

结果，观察到在施用所述葛根汤或所述葛根汤发酵乳酸菌后没有观察到中毒症状。

本发明的发明人在通过上述操作方法用四氯化碳进行处理后，分别测量了AST、ALT和LDH的活性。结果，本发明的发明人证实了由于注射四氯化碳而活性上升的所述三种酶，在施用所述乳酸菌发酵葛根汤后，三种酶活性都下降了。上述结果表明本发明提供的乳酸菌发酵葛根汤对肝中毒有疗效。

本发明提供的组合物含有乳酸菌发酵葛根汤作为活性成分。所述乳酸菌发酵葛根汤能够通过口服施用，也可以用于一般形式的药物制剂。可用于口服的固体制剂有片剂、硬/软胶囊、溶液、悬浮液等等。所述药物制剂可以使用常用的药剂学载体，如辅料、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助溶剂、悬浮剂、保护剂或者增充剂。

所述乳酸菌发酵葛根汤的有效剂量可以通过病人的状态、年龄、性别、病症情况等条件确定。一般来说，成人的剂量为1-40mL每1kg/天，优选，10-30mL每1kg/天。优选情况下，优选每个单独制剂含有所述乳酸菌发酵葛根汤1天、1/2天、1/3天或1/4天的剂量。施用频率优选一天1-6次。如果需要长期施用，所述剂量可以低于上述剂量，但是更高的剂量也可以接受，因为所述乳酸菌发酵葛根汤被证明是非常安全的。

另外，本发明提供一种用于恢复肝功能的保健食品，该食品含有所述组合物。

本发明提供的乳酸菌发酵葛根汤可用作食品添加剂。这种情况下，所述乳酸菌发酵葛根汤可以按照常规方法单独添加，也可以与其他食物组分混合添加。活性成分的混合比例可以根据使用目的(预防、保健或治疗)来调整。一般来说，用于生产保健食品或保健饮品，乳酸菌发酵葛根汤优选添加比例为5-30wt％，进一步优选为10-20wt％。但是，假如为了卫生保健或者调节健康状况而需要长期施用，所述添加比例可以低于上述比例，但是更高的比例也可以接受，也是因为所述乳酸菌发酵葛根汤被证明是非常安全的。同时，此处所述的食品种类没有特别限制。

本发明提供的组合物对肝中毒有疗效，所以它可被有效的用作一种肝功能恢复剂或肝功能恢复保健食品。

附图说明

图1(A)是葛根汤的色谱图，以及图1(B)是乳酸菌发酵葛根汤的色谱图。

图2是显示实施例1-7中血液生化检测结果的一组图。

图3是显示实施例1-8中肝脏重量检测结果的一组图。

图4-9是显示实施例2中肝脏病理组织检测结果的照片。

附图标记说明

CV：中央静脉

N：小叶中心坏死

←(左箭头)：空泡变性

▲(实心三角)：炎症细胞侵润

具体实施方式

本发明优选的实施方式通过下列实施例来说明。

但是，本领域技术人员应当理解，在不偏离本发明的范围和精神的情况下，各种修改和补充都是可能的。

预备例1：葛根汤的制备

通过热水提取120g葛根、60g麻黄、60g姜、60g枣、40g甘草、40g芍药，以及40g桂枝来制备葛根汤。

实施例1：乳酸菌发酵葛根汤的制备

<1-1>乳酸菌

下列实验所用短双歧杆菌(KFRI 744，ATCC 15700)均来自韩国食品研究所(Korea Food Research Institute)。

<1-2>乳酸菌的菌种培养

菌株分别在斜面培养基(slant medium)和液体培养基中进行次代培养。首先，把所述乳酸菌接种到斜面培养基，在37℃恒温箱中培养24小时。当菌落出现时，用石蜡层密封以切断供氧，并保存在冰箱中。为了避免所述培养的细菌失活或者被其他微生物污染，所述培养基需要每2-3周更换为新鲜的斜面琼脂培养基。把所述菌落接种到液体培养基，然后在37℃恒温箱中培养24小时。

所述菌种培养使用RCM(强化梭菌培养基，Reinforced ClostridialMedium：10g/L细菌用胰蛋白(Bacto-tryptose)、10g/L细菌用牛肉膏、3g/L细菌用酵母提取物、5g/L细菌用葡萄糖、5g/L氯化钠、1g/L可溶淀粉、0.5g/L左旋半胱氨酸盐酸盐、3g/L醋酸钠、0.5g/L细菌用琼脂、pH 7.6)或者肉汤培养基(Gam broth medium)。

<1-3>使用乳酸菌的葛根汤深层发酵

用1M的NaOH将实施例1中制备的葛根汤的pH调节到7.0，然后在121℃、1.5atm下，高压灭菌15分钟。冷却到室温后，将乳酸菌接种到所述葛根汤中。将所述葛根汤在37℃恒温箱中无氧培养48小时，以使其深层发酵。此时，接种物所占体积为1％(V/V)。在发酵48小时后，检测pH的变化。

当用双歧杆菌发酵蔬菜和谷物后，常常能观察到细菌的增殖被抑制，由于pH低，此种现象在番茄发酵后特别明显。但是，当pH调节到7.2时，所述细菌的数量增加了。在这个实施例中，当葛根汤的pH低至4.9时，它的现象就不规律了。所以，为了正常发酵，本发明的发明人用1M的NaOH溶液将pH进行调高。在灭菌前将葛根汤的pH调节为7.0时，发酵之前的对照组的pH降低到了5.9-7.0之间。这大概归因于葛根汤是经过高温高压(121℃，1.5atm，15分钟)灭菌的，所以一些葛根汤里的膳食纤维分解为有机酸同时伴随pH的降低。把KFRI 744(短双歧杆菌)接种到所述调节过pH的葛根汤中，再培养48小时。然后，观察pH的变化。结果表明，通过发酵葛根汤的pH降至4.3，这也说明了活性有机酸的产生。

<1-4>分析发酵产物

1)为HPLC制备样品

离心分离出所述发酵葛根汤的残渣，再用0.45μm的过滤器过滤。然后，用HPLC进行检测。

2)用HPLC分析代谢产物

用HPLC检测葛根汤在乳酸菌作用下发酵前后的代谢产物的变化情况，并对比分析发酵前后的成份情况。

根据下列条件使用HPLC来检测并分析发酵葛根汤的代谢产物。

分析葛根汤发酵产物的HPCL系统的操作条件为

柱：反相柱(C₁₈，250×4.6mm，5μm)

检测器：UV 254nm

溶剂：A水；B乙腈

运行时间：70分钟

进样量：20μL

流速：1.0mL/min

柱温：30℃

表1列出了浓度梯度。

表1

时间(分钟)	A/B
		0	85/15
10	85/15
		50	65/35
55	20/80
		58	20/80
63	80/20
		70	85/15

结果如图1所示，通过对比乳酸菌发酵葛根汤(图1(B))与未发酵葛根汤(图1(A))的结果，可以确定经过发酵38.2分钟出现的峰值增长了6.4倍。黄豆苷(24.3分钟)葛根汤的代表性的指标材料(index materials)在每个样品中都能检测到。

实验实施例1：对肝中毒的疗效

<1-1>实验动物

八周大的雄性大鼠从东方有限公司(Orient Co.Ltd.)(459-24，首尔衿川区尔加山洞)购得，然后送入KIOM(韩国中药研究所)动物实验室进行检疫并驯化二周。然后选择其中健康的小鼠进行实验。

<1-2>剂量的确定

为研究由传统中药配方制备的葛根汤和本发明提供的乳酸菌发酵葛根汤对肝脏的保护作用，大鼠用四氯化碳(CCl₄)处理24小时，然后检测肝脏损伤状况。基于日采食量(daily intake)(3次，3包)，葛根汤的施用剂量确定为15mL/kg，同时发酵葛根汤的剂量确定为7.5mL/kg、15mL/kg和30mL/kg。

<1-3>动物分组及识别

动物分组如下进行。首先，对驯化期间选出的健康大鼠进行称重。以5g为间隔进行区分，选择接近各个平均体重的大鼠各60只。然后，将上述60只大鼠根据重量范围和随机数每组分配均等体重的10只(见表2)。通过对皮毛染色和使用个体识别卡对每只小鼠进行区分。

表2

CON：对照组

NCT：阴性对照组

GGT：施用葛根汤组(15mL/kg)

GFT₁；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(7.5mL/kg)

GFT₂；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(15mL/kg)

GFT₃；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(30mL/kg)

<1-4>统计方法

在本试验中，通过邓尼特检验(Dunnett test)(*p＜0.05，**p＜0.01)来计算阴性对照组和使用实验材料处理的实验组之间的平均值和标准差，从而得到统计学差异。

<1-5>肝中毒的预防和疗效

四氯化碳(CCl₄)是广泛用于肝中毒研究中最具代表性的诱导肝中毒的材料之一。四氯化碳诱导肝中毒的机制如下。四氯化碳在肝脏中代谢产生CCl₃和Cl自由基。这些自由基与细胞膜中的不饱和脂肪酸作用诱发脂质过氧化。

为了评估葛根汤以及乳酸菌发酵葛根汤对肝脏的保护作用，在诱发肝中毒之前的30分钟对大鼠(实验组)施用葛根汤或乳酸菌发酵葛根汤。

将四氯化碳(1.0mL/kg)注射到SD雄性小鼠的腹腔内以诱导肝中毒。24小时后采集血液，然后分别检测AST、ALT以及LDH的活性。在完成血液采集和血细胞计数后(blood count)，对肝脏进行称重。观察肝脏组织形态。

结果，在每个实验组都没有观察到大鼠死亡(见表3)，同时在施用葛根汤和乳酸菌发酵葛根汤后没有出现任何肝中毒症状(见表4)。

表3

CON：对照组

NCT：阴性对照组

GGT：施用葛根汤组(15mL/Kg)

GFT₁；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(7.5mL/kg)

GFT₂；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(15mL/kg)

GFT₃；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(30mL/kg)

表4

注射CCl₄后雄性大鼠的临床症状

CON：对照组

NCT：阴性对照组

GGT：施用葛根汤组(15mL/kg)

GFT₁；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(7.5mL/kg)

GFT₂；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(15mL/kg)

GFT₃；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(30mL/kg)

<1-6>全血细胞计数

通过JT仪(库尔特有限公司，美国迈阿密)用EDTA-2K处理WBC、RBC、HGB、HCT和PLT来进行血液检测。

实验动物SD大鼠在禁食16小时后，口服实验药材葛根汤(15mL/kg)或者乳酸菌发酵葛根汤(7.5、15以及30mL/kg)。施用实验药材30分钟后，向大鼠腹腔注射四氯化碳一次(1.0mL/kg/天)。24小时后，采集血液并进行分析。结果显示，含有实验药材的血细胞未出现异常变化。GFT₂组中红细胞数量的减少以及GFT₃组中血小板数量的增加均在正常范围内，因此这个现象不被认为是由实验材料导致的(见表5)。

表5

施用葛根汤和发酵葛根汤后血液参数

阴性对照的统计学意义计算(*p＜0.05，**p＜0.01).

15mL/kg是成人一天的葛根汤剂量(3瓶/60kg/天)。

<1-7>血液生化检测

先用四氯化碳诱发肝损伤，然后让实验动物口服实验药材葛根汤(15mL/kg)和发酵葛根汤(7.5、15以及30mL/kg)。用药30分钟后，腹腔注射四氯化碳一次(1.0mL/kg/天)。24小时后，评估肝功能损伤情况。

为进行血液生化检测，从尾部静脉(caudal vena cava)采集血液5mL。将所述血液在室温凝固，然后用冷冻高速离心机(Avanti 30，Beckman Co.，USA)在5000rpm下对其进行离心10分钟。然后用生化分析仪(Advia 1650，Shimaz Co.，Japan)检测其AST、ALT和LDH的水平。

检测结果显示于表6和图2。阴性对照组的AST活性为1648.0IU/L，与正常对照组(175.2IU/L)相比增长了940.6％。对比于阴性对照组，GGT组的AST活性降低了57.6％，在GFT₁组为81.9％，在GFT₂组为51.9％，在GFT₃组为37.5％。用四氯化碳对SD大鼠处理后，血清中AST含量几乎增长了9.4倍。用四氯化碳处理的SD大鼠口服了葛根汤或发酵葛根汤(短双歧杆菌)后，根据施用的发酵葛根汤剂量AST水平降低。在GGT组(p＜0.05)、GFT₁组(p＜0.05)以及GFT₂组(p＜0.05)之间观察到显著性差异。

阴性对照组的ALT水平为583.11IU/L，与正常对照组(37.5IU/L)相比，增加了1554.9％。但是，用四氯化碳处理后再施用葛根汤和乳酸菌发酵葛根汤后，与阴性对照组相比，ALT水平在GGT组、GFT₁组、GFT₂组、GFT₃组中分别降低54.8％、90.6％、41.9％、35.4％。也同样在GFT₂组(p＜0.05)，和GFT₃组(p＜0.05)之间观察到的显著性差异。

与正常对照组相比，用四氯化碳处理后再施用葛根汤或乳酸菌发酵葛根汤的分组的血清中LDH水平增加了2.04倍。用四氯化碳处理的实验动物口服乳酸菌发酵葛根汤后，对比于阴性对照组，血清中LDH含量在GGT组、GFT₁组、GFT₂组和GFT₃组分别降低了69.1％、74.6％、71.3％和54.6％。也同样在GGT组(p＜0.05)，GFT₁(p＜0.05)，GFT₂(p＜0.05)和GFT₃(p＜0.01)观察到的显著性差异。

表6

施用葛根汤和发酵葛根汤后血液生化指标

CON：对照组

NCT：阴性对照组

GGT：施用葛根汤组(15mL/kg)

GFT₁；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(7.5mL/kg)

GFT₂；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(15mL/kg)

GFT₃；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(30mL/kg)

与阴性对照的统计学意义计算(*p＜0.05，**p＜0.01)。

a：表示平均值

b：±SD

<1-8>肝脏重量和病理结果(histologic findings)

在放干血后，给实验动物(SD大鼠，雄性)的肝脏称重。将肝中叶的中心部分剪下来，然后将其放入10％中性福尔马林溶液中固定。再进行H&E染色，然后观察组织形态。

具体地，用四氯化碳处理诱发肝损伤。在解剖时进行体重称量。放干血后，对肝脏进行摘取并称重。结果显示于表7和图3。用四氯化碳处理的大鼠体重显著降低。但是，当施用葛根汤或发酵葛根汤后，对比于NCT组体重显著增加了(p＜0.01)。

肝脏重量转化为重量百分数。从计算得出，对比于对照组，施用四氯化碳组的重量显著增加(p＜0.01)，但是，口服发酵葛根汤(30mL/kg)组的重量却减少了(p＜0.05)。

表7

CON：对照组

NCT：阴性对照组

GGT：施用葛根汤组(15mL/kg)

GFT₁；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(7.5mL/kg)

GFT₂；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(15mL/kg)

GFT₃；施用经短双歧杆菌发酵葛根汤组(30mL/kg)

与阴性对照的显著性差异计算(*p＜0.05，**p＜0.01)。

a：表示平均值

b：±SD

如上所述，分析了体重和肝脏重量的变化。结果表明，葛根汤和发酵葛根汤可作为四氯化碳处理导致的肝脏炎症的缓解剂(alleviator)。

试验实施例2：肝脏组织病理学检查

在此实施例中，为了研究试验样品对施用四氯化碳诱发肝中毒的实验动物的影响效果，进行了组织病理学检查。实验动物是总数为30只的雄性大鼠。大鼠的肝脏被固定在10％中性福尔马林溶液中，然后对其进行检测。包括正常对照组在内的总共6个实验组如表8所示。

表8

每个施用四氯化碳的实验动物通过肝细胞的小叶中心坏死、空泡变性和炎症细胞侵润进行评价。为了比较实验组的缓解水平，对每组的平均点进行了计算。

从病理组织检测得出，在CON组的所有动物的肝脏没有观察到特别的病变(见图4)，但是在其他组则能观察到由于施用四氯化碳而诱发的病变。在NCT组，小叶中心坏死(N)和空泡变性(←)的程度相比于其他各组的情况更加明显，同时也能观察到炎症细胞侵润(▲)(见图5)。

在施用了葛根汤的实验组(GGT、GFT₁、GFT₂和GFT₃)，相比于NCT组，小叶中心坏死和空泡变性没有那么显著，但是在GGT组的炎症细胞侵润还是相当高的。GGT组和GFT₁组的病变减少的情况相似(见图6和图7)，同时在GFT₂组则几乎没有病变(见图8)。除了炎症细胞侵润还处于中等水平外，GFT₃组能观察到的病变是最小且微不足道的，这表明GFT₃组与NCT组的差异最大(见图9)。

表9列出了基于图4-9计算出的平均点。在平均点的计算中，评估如下：+：最小，++：较小，+++：中等，++++：严重。

表9

为了评估实验药材对施用四氯化碳的小鼠的损伤肝脏组织的效果，进行了组织病理学检查并对每组结果进行了对比。

结果表明，在施用了四氯化碳的实验组，能够观察到由四氯化碳导致的病变。由四氯化碳导致的病变主要出现在肝脏中央静脉(CV)周围的肝细胞中。在这个实施例中，空泡变性导致的坏死更加显著。在NCT组，由四氯化碳诱发的中毒病变在每个实验动物中都不一样，因此在实验动物中对病变缓解效果进行比较是几乎不可能的。所以，将每组的病变水平相加取平均点，这样就能用于比较整体的缓解效果。

结果显示，所述平均点按照下列顺序增加：CON＜GFT₃＜GFT₂＜GFT₁＜GGT＜NCT。由四氯化碳诱发的中毒病变的缓解水平随着发酵葛根汤剂量的增加而变得更高。即使用了高浓度的实验药材，实验分组的病变也不能完全消除，同时在肝小叶细胞质中还是能观察到轻微的空泡变性。但是，在施用高浓度葛根汤的实验分组中观察到最小的病变。发明人认为对于在细胞质中还观察到微小气泡的现象是归因于病变缓解产生的一系列反应还是归因于高浓度实验药材产生的效果进行评估是非常重要，因此还进行了额外的实验。

在该实施例中，能够在施用了四氯化碳的动物中观察到肝浆膜纤维蛋白和炎症细胞侵润以及肝细胞坏死的现象。由于得不到实验药材对所述病变的效果的任何信息，这影响了判断的准确性。只能推测腹腔注射对病变有所影响。

基于上述观察结果，由四氯化碳诱发的中毒病变在NCT组最为明显，而施用实验药材导致病变的缓解在GFT₃组最为明显。

1)哈桑，N.S.，阿巴斯，N.F.，沙拉夫，H.A.(2003年)。四氯化碳诱导大白鼠肝损伤的组织病理学和组织化学的研究。埃及，J.Hosp.Med.，10：52-65.

2)Kim Hyoung-Chun、Park Eon-Sub、Yoo Jae-Hyung和Song Kye-Yong(1989)。马洛替酯(2-(1，3-二硫杂茂)-叉丙二酸二异丙酯)对含有或未含有乙醇的四氯化碳诱导的慢性肝损伤的立体化学(serochemical)和病理组织学观察。韩国病理学杂志，23(2)：223-234。

3)Gopinath，C，Prentice，D.E.，和Lewis，D.J.(2001年)。实验毒理病理学图集(康等翻译)。chunggu出版有限公司。

为了筛选出对急性炎症的葛根汤和发酵葛根汤的效果，用四氯化碳诱发SD小鼠的急性肝炎，然后施用葛根汤和发酵葛根汤(短双歧杆菌)。然后，分析血液的生化指标。结果表明，血清中的AST、ALT和LDH的水平相对于阴性对照组显著的降低。特别的，发酵葛根汤的效果依赖于剂量的大小。同时还证明所述实验药材减小了体重损失并减小了由四氯化碳导致的肝脏重量增加。施用所述实验药材后，小叶中心坏死、空泡变性和炎症细胞侵润都确实得到了改善。因此，能够证明葛根汤在缓解炎症方面具有非同寻常的效果。同时，发酵葛根汤对于急性炎症的缓解作用随着生物转化，其在体内的吸收率的增加而提高。

制备例1：药物组合物的制备

<1-1>软胶囊的制备

根据韩国药典制备软胶囊的生产工艺，每粒胶囊含有100.0mg实施例1中制备的乳酸菌发酵葛根汤、175.0mg豆油、45.0mg黄蜂蜡、127.5mg棕榈硬化油(palm hardened oil)、21.0mg大豆磷脂、212.0mg明胶、50.0mg甘油(比重1.24)、76.0mg D-山梨醇、0.54mg对甲氧基苯甲酸(paraoxymethylbenzoic acid)、0.90mg对丙氧基苯甲酸(paraoxypropylbenzoicacid)、0.56mg甲基香草醛以及适量黄色食品色素203。

<1-2>片剂的制备

将100.0mg实施例1中制备的乳酸菌发酵葛根汤、90.0mg玉米淀粉、175.0mg乳糖、15.0mg L-羟基丙基纤维素、5.0mg聚乙烯吡咯烷酮90以及适量乙醇均匀混合并用湿法制粒法造粒。然后再向其中加入1.8mg硬脂酸镁，形成重量为400mg的片剂。

制备例2：保健食品的制备

<2-1>胶囊的制备

将100.0mg实施例1中制备的乳酸菌发酵葛根汤、83.2mg玉米淀粉、175.0mg乳糖以及1.8mg硬脂酸镁混合均匀。然后，制备每粒含有360mg所述混合物的胶囊。

<2-2>饮品的制备

制备含有实施例1制备的乳酸菌发酵葛根汤0.48-1.28mg、蜂蜜522mg、二硫化苯酰(thioctic acid amide)5mg、硫辛酰胺10mg、核黄素盐酸钠(sodiumriboflavin hydrochloric acid)3mg、盐酸吡哆辛2mg、肌醇30mg、乳清酸50mg，以及水200mL的饮品。

<2-3>粉剂的制备

将2g实施例1制备的乳酸菌发酵葛根汤以及1g乳糖混合，然后根据制备粉剂的常规方法填充进密封包装而得到粉剂。

工业利用性

本发明的组合物对于肝中毒有疗效，所以它可被有效地用作一种肝功能恢复剂或肝功能恢复保健食品。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种用于预防或治疗肝中毒的组合物，其特征在于，该组合物含有葛根汤和/或乳酸菌发酵葛根汤作为活性成分。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述葛根汤通过热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药以及桂枝的草药混合物制备而成。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述葛根汤通过将2-10重量份的麻黄、2-10重量份的姜、2-10重量份的枣、1-7重量份的甘草、1-7重量份的芍药以及1-7重量份的桂枝与12重量份的葛根混合制备而成。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述乳酸菌发酵葛根汤通过接种乳酸菌至所述葛根汤发酵制备而成。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述乳酸菌选自由双歧杆菌、乳酸杆菌、链球菌、明串珠菌、小球菌以及乳球菌菌属微生物组成的组中。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述乳酸菌为双歧杆菌菌属微生物。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述乳酸菌发酵葛根汤通过包括下列步骤的方法制备而成：

通过热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药以及桂枝的草药混合物而制备葛根汤；

将乳酸菌菌丝体培养液接种到上述葛根汤中；然后

8.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述方法进一步包括下述步骤：在制备葛根汤后，且接种乳酸菌菌丝体培养液前，调节所述葛根汤的pH至6-8。

9.根据权利要求1所述组合物，其中，所述组合物能够降低选自由谷草转氨酶、谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶组成的组中的一种或多种酶的活性。

10.一种恢复肝功能的保健食品，其特征在于，该食品含有上述葛根汤和乳酸菌发酵葛根汤中的至少一种作为活性成分。

11.根据权利要求10所述的保健食品，其中，所述葛根汤通过用热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药以及桂枝的草药混合物制备而成。

12.根据权利要求10所述的保健食品，其中，所述乳酸菌发酵葛根汤通过发酵接种有乳酸菌的所述葛根汤制备而成。

Claims

1.一种乳酸菌发酵葛根汤，该乳酸菌发酵葛根汤是通过下述步骤制备的：

混合含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药以及桂枝的草药，然后进行热水提取；接种乳酸菌至葛根汤提取物；以及发酵制得的所述葛根汤。

2.根据权利要求1所述的乳酸菌发酵葛根汤，其中，所述葛根汤通过将2-10重量份的麻黄、2-10重量份的姜、2-10重量份的枣、1-7重量份的甘草、1-7重量份的芍药以及1-7重量份的桂枝与12重量份的葛根混合而制备。

3.根据权利要求1所述的乳酸菌发酵葛根汤，其中，所述乳酸菌选自由双歧杆菌、乳酸杆菌、链球菌、明串珠菌、小球菌和乳球菌菌属微生物组成的组中。

4.根据权利要求1所述的乳酸菌发酵葛根汤，其中，所述乳酸菌为双歧杆菌菌属微生物。

5.一种制备权利要求1所述的乳酸菌发酵葛根汤的方法，该方法包括下列步骤：

通过热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药、桂枝的草药混合物制备葛根汤；

将乳酸菌菌丝体培养液接种到上述葛根汤中；以及

6.根据权利要求5所述的制备乳酸菌发酵葛根汤的方法，其中，该方法进一步包括以下步骤：在制备出葛根汤后，且接种乳酸菌菌丝体培养液前，调节所述葛根汤的pH至6-8。

7.一种用于预防或治疗肝中毒的组合物，其特征在于，该组合物含有葛根汤和/或乳酸菌发酵葛根汤作为活性成分。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述葛根汤通过用热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药以及桂枝的草药混合物制备而成。

9.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述乳酸菌发酵葛根汤是权利要求1所述的乳酸菌发酵葛根汤。

10.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述组合物能够降低选自由谷草转氨酶、谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶组成的组中的一种或多种酶的活性。

11.一种恢复肝功能的保健食品，其特征在于，该食品含有上述葛根汤和乳酸菌发酵葛根汤中的至少一种作为活性成分。

12.根据权利要求11所述的组合物，其中，所述葛根汤通过用热水提取含有葛根、麻黄、姜、枣、甘草、芍药以及桂枝的草药混合物制备而成。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中，所述乳酸菌发酵葛根汤是权利要求1所述的乳酸菌发酵葛根汤。