CN102934809B

CN102934809B - 益生菌发酵中药制剂制备的组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102934809B
Application number: CN201210527023.9A
Authority: CN
Inventors: 谷劲松; 綦翠华; 张玉; 刘晖
Original assignee: University of Jinan
Current assignee: Chongqing Supersonic Intellectual Property Operation Co ltd; Jilin Tiansanqi Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2012-12-10
Filing date: 2012-12-10
Publication date: 2014-04-30
Anticipated expiration: 2032-12-10
Also published as: CN102934809A

Abstract

本发明公开了一种益生菌发酵中药制剂制备的组合物及其制备方法和应用。该组合物以含有黄芪、枳椇子、葛花、白芍、川芎等中药原料药作为培养液，并通过两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌以及枯草芽胞杆菌等益生菌发酵的发酵液作为有效成分。本发明组合物可促进肝脏中的乙醇代谢，减低血中乙醇浓度，同时增加人体对酒精的耐受能力、减少酒精所致的头面红赤、头晕目眩等不适。本发明组合物制成的食品、保健食品，可以作为预防及改善饮酒过量的安全可靠的解酒产品。

Description

益生菌发酵中药制剂制备的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物发酵技术领域，特别是涉及一种具有解酒保肝作用的组合物，该组合物以含有黄芪、枳椇子、葛花等中药原料药作为培养液，并通过两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌以及枯草芽胞杆菌（含纳豆芽孢杆菌）等益生菌发酵的发酵液作为有效成分。

背景技术

由于历史和文化的原因，酒已与人们的日常生活有了不解之缘。少量饮酒，可以促进代谢，起到活血舒筋的作用，可以增进食欲，消除疲劳；但过度的饮酒，则会引起慢性乙醇中毒，粘膜损伤，心肌乏力，血管变脆，呼吸系统防御功能降低，肾功能衰竭等症状，对人体的消化，神经，循环等系统造成严重损害，还会引起机体生理功能紊乱，从而严重危害人体健康。世界卫生组织（WHO）指出：酒精中毒是当今世界范围内第一大公害，其毒性可累及全身各主要脏器。在发达国家，酒精中毒被列于心血管疾病、肿瘤之后，成为第三位的公共卫生问题。美国将酒精中毒和心脏疾患及精神疾患一样列为最主要的健康问题之一。《黄帝内经》最早记载了过量饮酒为致病因素之一。《素问·上古天真论》云:“以酒为浆，以妄为常，醉以入房，以欲竭其精，故半百而衰也”。古人认识到过量饮酒会耗伤精气，散失真元，致人早衰。人是否醉酒，取决于血液中乙醇的浓度。当血液中乙醇浓度在0.05%-0.1%时，人开始朦胧、畅快地微醉；而达到0.3%时，人就会口齿不清,步态蹒跚，这就是我们常说的酒醉了；如果达到了0.7%,人就会死亡。对于乙醇的承受力，人与人的差异很大，这是由于胃肠吸收能力和肝脏的代谢处理能力不同所致，也就造成了人之间的酒量不同。

酒精在人体的分解代谢有三条途径：肝脏、皮肤和呼吸系统；其中约95%通过肝脏的酶系统进行氧化代谢。肝脏的酶系统中存在两种酶：一种是乙醇脱氢酶，另一种是乙醛脱氢酶。乙醇脱氢酶能把酒精分子中的两个氢原子脱掉，使乙醇分解变成乙醛。而乙醛脱氢酶则能把乙醛中的两个氢原子脱掉，使乙醛转化为乙酸，最终分解为二氧化碳和水。人体中都存在乙醇脱氢酶，而且数量基本是相等的。但缺少乙醛脱氢酶的人就比较多。这种乙醛脱氢酶的缺少，使乙醛不能被完全分解为乙酸，而是以乙醛继续留在体内，使人喝酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等醉酒症状。因此，不善饮酒，酒量在合理标准以下的人，即属于乙醛脱氢酶数量不足或完全缺乏的人。对于善饮酒的人，如果饮酒过多、过快，超过了乙醛脱氢酶的分解能力，也会发生醉酒。

因此开发有效的解酒药物具有重要的意义和广阔的市场前景。目前西方国家开发的解酒药以合成药物为主，而亚洲国家则侧重天然药物的研究开发。目前都没有一种能够降低酒精毒性、同时对酒精所致的肝损伤具有恢复作用的安全可靠的组合物。

发明内容

本发明就是针对上述问题而提供一种益生菌发酵中药制剂制备的组合物及其制备方法和应用。本发明通过两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌以及枯草芽胞杆菌（含纳豆芽孢杆菌）等益生菌发酵，从而获得一种能够降低酒精毒性、对酒精所致的肝损伤具有恢复作用的安全可靠的组合物，将其制成食品、保健食品，既可作为预防及改善饮酒过量的解酒产品，又可作为酒精肝和酒精及非酒精引起的脂肪肝的辅助治疗产品，安全无毒、疗效可靠，具有较好的社会效益和应用前景。

本发明的一种益生菌发酵中药制剂制备的组合物及其制备方法和应用技术方案为，该组合物是是由益生菌混合发酵以下按照质量百分比的原料配方制成: 枳椇子15%-25%、葛花15%-25%、白芍15%-25%、黄芪5%-10%、川芎5%-10%、当归5%-10%、肉桂5%-10%、干姜3%-5%、甘草5%-10%。

优选原料配方为: 枳椇子50g、葛花50g、白芍50g、黄芪20g、川芎20g、当归20g、肉桂15g、干姜10g、甘草15g。

所述益生菌为两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌以及枯草芽胞杆菌。

其中，枯草芽胞杆菌含纳豆芽孢杆菌。

上述的益生菌发酵中药制剂制备的组合物的制备方法，步骤为：

（1）称取配方中的原料药，加适量水，文火煎煮约40分钟后，滤去药渣，制成汤剂；加入按重量计的葡萄糖0.5-1%、酵母膏0.3-0.5%、低聚麦芽糖0.5-1%，用NaOH调节pH至7.0；所得混合物在121℃在高压灭菌15-20分钟；

（2）用MRS培养基和LB培养基分别活化两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌以及枯草芽胞杆菌，并以体积百分数0.1%至10 %接种到汤剂混合物中，将该接种溶液至于恒温摇床培养，并发酵成液体，由此获得目标组合物，培养和发酵在20℃-40℃，时间为2-4天。

优选步骤为：

（1）称取白芍50g、黄芪20g、川芎20g、枳椇子50g、葛花50g、当归20g、肉桂15g、干姜10g、甘草15g加1L水，文火煎煮约40分钟后，滤去药渣，制成汤剂，补足水分至1L，加入葡萄糖1%、酵母膏0.5%、低聚麦芽糖0.5%，用NaOH调节pH至7.0，所得混合物在121℃在高压灭菌15分钟，用于益生菌的培养发酵；

（2）MRS培养基和LB培养基121℃在高压灭菌15分钟，分别接种两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌以及枯草芽胞杆菌，37℃恒温摇床培养24 h，以1%的接种量接入上述中药汤剂混合物中，37℃恒温摇床培养2-4天。

上述组合物在制备解酒保肝的食品或保健食品中的应用。

本发明组合物在制备食品、保健食品的过程中，可以加入矫味剂、赋形剂，制成的食品、保健食品，可以是食品和保健食品中可接受的任何形式的产品，如口嚼片、含化片、颗粒剂、袋泡茶、口服液、饮料类等口服剂型的产品。

本发明的有益效果为：本发明的益生菌发酵中药制剂制备的组合物，是由益生菌混合发酵以下按照质量百分比的原料配方制成: 枳椇子15%-25%、葛花15%-25%、白芍15%-25%、黄芪5%-10%、川芎5%-10%、当归5%-10%、肉桂5%-10%、干姜3%-5%、甘草5%-10%。就原料药的有效成分来说，葛花是野葛的花，其功用为解酒醒脾，治伤酒发热烦渴，不思饮食，呕逆吐酸，吐血，肠风下血。枳椇子为鼠李科植物枳椇的干燥成熟种子，具有清热利尿、解洒毒之功效，主治酒病、烦热、口渴、呕吐、二便不利症，其中治疗酒病是其最常用的功效。肉桂激活胃和肠道的功能，并且可以在消化器官受冷引起消化不良或者当腹部受冷引起腹痛或腹泻时使用。当归能够有效促进血液循环、预防癌症、降低血压、缓解疼痛和痉挛、通过刺激大肠运动减轻便秘、以及消除渗出的血液。白芍可减轻神经和肌肉的过度紧张，从而止痛、养血和缓解疼痛。黄芪用于补充能量，止冷汗和治疗肿胀。川芎有助于血液循环和减轻疼痛，从而广泛用于治疗头痛。它也可激活肝和肠的功能，在用于治疗贫血时具有造血功能。干姜用于治疗消化不良、呕吐、腹泻，并加速血液循环。

同时，本发明将三种益生菌加到中草药中并使所得的混合物发酵来获得有效的解酒保肝组合物，三种益生菌均为美国食品和药品管理局（FDA）公布的可以直接口服的微生物益生菌。利用益生菌将中草药的水提取物进行生物发酵，对上述中草药汤液中的纤维素、淀粉、多糖及药物活性成分进行生物转化和结构修饰，产生性能更高的活性成分，从而促进中草药的体内吸收、运输、代谢、活化及药效作用。

含纳豆芽孢杆菌的枯草芽胞杆菌具有较高的乙醇代谢能力，文献报道枯草芽胞杆菌发酵乳饮品可降低小鼠体内50%的乙醇浓度。枯草芽胞杆菌是耗氧量较大的细菌，它可大量消耗肠道内局部分子氧，使肠内环境趋于无氧状态，这样就更有利于厌氧的两歧双歧杆菌和嗜酸乳杆菌的定植和增殖。双歧杆菌通过磷壁酸与胃肠粘膜上皮细胞相互作用，密切结合，并与其他厌氧菌一起共同占据胃肠道粘膜表面，形成生物屏障，减少了乙醇的吸收。另外，双歧杆菌还具合成多种维生素、提高机体免疫能力，可促进乙醇的代谢。嗜酸乳杆菌也能合成维生素促进新陈代谢，而且中草药汤液经过乳酸杆菌培养和发酵，会产生好闻的味道，从而获得消化功能的协同效应，更加有利于中草药有效成分在体内的吸收。

经试验证明，本发明组合物制成的食品、保健食品，可以增加机体内乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的含量，快速分解乙醇，因而具有促进肝脏中乙醇代谢，减低血中乙醇浓度的作用，同时增加人体对酒精的耐受能力、减少酒精所致的头面红赤、头晕目眩等不适。本发明组合物制成的食品、保健食品，既可作为预防及改善饮酒过量的解酒产品，又可作为酒精肝和酒精及非酒精引起的脂肪肝的辅助治疗产品，安全无毒、疗效可靠。

具体实施方式：

为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。在下述实施例中所给出的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。其中所用试剂均有市售。

实施例1：采用益生菌混合发酵中药制剂制备具有解酒保肝作用的组合物

一、中药原料药的配伍和提取

白芍50g、黄芪20g、川芎20g、枳椇子50g、葛花50g、当归20g、肉桂15g、干姜10g、甘草15g加1L水，文火煎煮约40分钟后，滤去药渣，制成汤剂。补足水分至1L，加入葡萄糖1%、酵母膏0.5%、低聚麦芽糖0.5%，用NaOH调节pH至7.0。所得混合物在121℃在高压灭菌15分钟，用于益生菌的培养发酵。

二、益生菌种子培养

MRS培养基和LB培养基121℃在高压灭菌15分钟，分别接种两歧双歧杆菌（MRS）、嗜酸乳杆菌（MRS）以及枯草芽胞杆菌（含纳豆芽孢杆菌）（LB），37℃恒温摇床培养24 h，以1%的接种量接入上述中药汤剂混合物中，37℃恒温摇床培养2-4 d。

本发明组合物的服用方法是: 以口服液为例，饮酒前、中、后，皆可服用20-100mL，尤其在酒过三巡后服用效果最佳。醉酒后加服效果更明显。次日若还有酒后不适感，可继续服用。食用本品不受用餐或饮酒时间限制，无副作用，可与果汁、茶水或矿泉水同时食用。

实施例2：本发明组合物对酒精中毒小鼠的解酒作用

一、益生菌混合发酵中药制剂组合物对急性酒精中毒小鼠醉酒时间、醉酒率的影响

健康雄性昆明种小鼠（山东大学实验动物中心），体重20—25g。小鼠随机分为2组:模型组(灌服等容积生理盐水)、给药组（灌服发酵液组合物15 mL/kg体重)，每组20只。各组小鼠禁食12 h，各治疗组均一次性给药，30 min后，各组均以15mL/kg体重灌胃56°红星二锅头酒。观察记录小鼠醉酒时间(从清醒到翻正反射消失的时间)，小鼠醉酒与否以翻正反射是否消失为标准:小鼠灌酒后将其背向下轻轻放入动物笼，若动物背向下的姿势保持30 s以上，则认为翻正反射消失，即为醉酒。计算24h内的醉酒率。请见表1。

结果表明，与模型组比较，益生菌混合发酵中药制剂组合物可明显降低小鼠醉酒率，延长醉酒时间(P<0.01)。

二、益生菌混合发酵中药制剂组合物对急性酒精中毒小鼠醒酒时间和死亡率的影响

健康雄性昆明种小鼠（山东大学实验动物中心），体重20—25g。小鼠随机分为2组:模型组(灌服等容积生理盐水)、给药组（灌服发酵液组合物17mL/kg体重)，每组20只。各组小鼠禁食12 h后，各组均以15 mL/kg体重56°红星二锅头酒灌胃，30 min后，各治疗组均一次性给药。观察记录小鼠醒酒时问(从翻正反射消失到清醒的时间)，计算24 h内的死亡率。请见表2。

结果表明，与模型组比较，益生菌混合发酵中药制剂组合物给药可明显降低小鼠死亡率，缩短醒酒时间(P<0.01)。

三、益生菌混合发酵中药制剂组合物对急性酒精中毒小鼠血清乙醇浓度和肝组织ADH活性的影响

健康雄性昆明种小鼠（山东大学实验动物中心），体重20—25g。小鼠随机分为3组:空白对照组、模型组、给药组，每组15只。各组小鼠禁食12 h，除空白对照组外，均以10mL/Kg体重56°红星二锅头酒灌胃，30min后给药（灌服发酵液组合物15 mL/kg体重)，模型组灌服等容积生理盐水。2 h后眼眶取血并处死小鼠，立即剖取肝脏，肝脏去包膜，称重，按1:10加入预冷的1.2%氯化钾溶液分别制成肝组织匀浆。NADH法测定肝组织ADH活性和并测定血清乙醇浓度。请见表3。

结果表明，与空白对照组比较，模型组小鼠血清乙醇浓度明显升高，益生菌混合发酵中药制剂组合物给药可显著降低小鼠血清乙醇浓度(P<0.05)，可明显升高肝组织ADH活性，降低血清乙醇浓度，说明益生菌混合发酵中药制剂组合物可通过提高体内肝组织ADH活性，促进乙醇代谢，降低血清乙醇浓度，发挥解酒作用。

实施例3：益生菌混合发酵中药制剂组合物的人体试食试验

一、益生菌混合发酵中药制剂组合物对受试者血液乙醇含量的影响

选择18-65岁的自愿受试者40人，均为男性，随机分为2组，试验组20人，对照组20人，均符合中西医诊断标准及中医辨证标准，并经纳入排除标准筛选合格者。试验组：服用益生菌混合发酵中药制剂组合物，饮酒15分钟前服用50mL；对照组：服用生理盐水，饮酒15 min前服用50mL。请见表4。

受试者每人饮酒56°红星二锅头酒50mL（5分钟内完成），2 h后采用气相色谱法测定人体血液中乙醇的含量。

结果表明，益生菌混合发酵中药制剂组合物可显著降低饮酒后人体血液乙醇含量，饮酒前服用可降低了30%的血液乙醇浓度，有醒酒、解酒毒之功效，其醒酒机理是激活了体内乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶，使乙醇加速氧化分解为乙醛、进一步氧化生成乙酸。

二、受试者耐酒精试验

从上述血液乙醇含量试验对照组中选取5名有明显头面红赤、头晕目眩症状的受试者，三天后服用益生菌混合发酵中药制剂组合物，饮酒15 min前服用50mL，然后每人饮酒56°红星二锅头酒50 mL（5分钟内完成），30 min后观察如果没有头面红赤、头晕目眩的症状，再饮酒56°红星二锅头酒25mL（5 min内完成）。请见表5。

实验结果表明，除一人外，益生菌混合发酵中药制剂组合物对饮酒后造成的头面红赤、头晕目眩症状有了明显的缓解，其中大部分受试者的酒精耐受力也有了明显的提升。

Claims

1.一种益生菌发酵中药制剂制备的组合物，其特征在于，是由益生菌混合发酵以下按照质量百分比的原料配方制成: 枳椇子50g、葛花50g、白芍50g、黄芪20g、川芎20g、当归20g、肉桂15g、干姜10g、甘草15g，所述益生菌为两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌以及枯草芽胞杆菌。

2. 根据权利要求1所述的一种益生菌发酵中药制剂制备的组合物，其特征在于，枯草芽胞杆菌含纳豆芽孢杆菌。

3. 制备如权利要求1-2任一所述的益生菌发酵中药制剂制备的组合物的制备方法，其特征在于，步骤为：

（1）称取配方中的原料药，加适量水，文火煎煮40分钟后，滤去药渣，制成汤剂；加入按重量计的葡萄糖0.5-1%、酵母膏0.3-0.5%、低聚麦芽糖0.5-1%，用NaOH调节pH至7.0；所得混合物在121℃高压灭菌15-20分钟；

（2）用MRS培养基分别活化两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌；用LB培养基活化枯草芽胞杆菌，并以体积百分数0.1%至10%接种到汤剂混合物中，将该接种溶液至于恒温摇床培养，并发酵成液体，由此获得目标组合物，培养和发酵在20℃-40℃，时间为2-4天。

4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，具体步骤为：

（1）称取白芍50g、黄芪20g、川芎20g、枳椇子50g、葛花50g、当归20g、肉桂15g、干姜10g、甘草15g加1L水，文火煎煮40分钟后，滤去药渣，制成汤剂，补足水分至1L，加入葡萄糖1%、酵母膏0.5%、低聚麦芽糖0.5%，用NaOH调节pH至7.0，所得混合物在121℃高压灭菌15分钟，用于益生菌的培养发酵；

（2）MRS培养基和LB培养基在121℃高压灭菌15分钟，用MRS培养基分别接种两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌，用LB培养基接种枯草芽胞杆菌，37℃恒温摇床培养24 h，以1%的接种量接入上述中药汤剂混合物中，37℃恒温摇床培养2-4天。