CN103599214B

CN103599214B - 一种益生菌发酵型消栓口服液及其制备方法

Info

Publication number: CN103599214B
Application number: CN201310599570.2A
Authority: CN
Inventors: 褚新红; 孙筱林; 吴炳新; 吕美; 甄宗武
Original assignee: SANZHU fur PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: SANZHU fur PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2013-11-25
Filing date: 2013-11-25
Publication date: 2015-08-19
Anticipated expiration: 2033-11-25
Also published as: CN103599214A

Abstract

本发明公开了一种益生菌发酵型消栓口服液及其制备方法，使用对人体有益的双歧杆菌和乳杆菌对消栓口服液原料药黄芪、当归、赤芍、地龙、川芎、桃仁、红花的水提取物进行发酵，一方面保留了中药的水提物全成分，节约了药材；另一方面水提取物经过肠道益生菌发酵，体外转化大分子物质，易于人体吸收，增强疗效；并且在发酵的过程中，产生丰富的风味物质，改善了中药的口感。经实验证明，本发明的益生菌发酵型消栓口服液对改善凝血时间和肠系膜微循环疗效优于原工艺制备的消栓口服液。

Description

一种益生菌发酵型消栓口服液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗中风引起的半身不遂，口眼歪斜，语言蹇涩，口角流涎，下肢瘘废，小便频数的益生菌发酵型消栓口服液及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

根据部颁药品标准WS3-B-2241-96 中给出的制备方法制备而成的消栓口服液，是一种具有补气，活血，通络。用于中风引起的半身不遂，口眼歪斜，语言蹇涩，口角流涎，下肢瘘废，小便频数的口服制剂，经临床验证，疗效确切，是临床和家庭用于治疗上述病症的常用药物。以下是WS3-B-2241-96 药品标准中给出的配方和工艺及简要说明：

处方：黄芪600g 当归60g 赤芍60g 地龙30g 川芎30g 桃仁30g 红花30g

制法：以上七味，加水煎煮三次，第一次1.5 小时，第二、三次分别为1 小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.18 ～ 1.22(50℃ )，加乙醇使含醇量为75％，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩药液至120ml，加蔗糖54g，加热溶解，放冷，滤过，加苯甲酸钠0.9g，加水稀释至300ml，混匀，灌封，灭菌，即得。

功能主治：补气，活血，通络。用于中风引起的半身不遂，口眼歪斜，语言蹇涩，口角流涎，下肢瘘废，小便频数。

用法用量：口服，一次10ml，一日3次。

消栓口服液是清代名医王清任《医林改错》中的“补阳还五汤”经改变剂型制成的口服制剂。

“中风”源于《内经》，是一类严重危害人类健康的疾病，很多中风患者在度过急性期后，都留下后遗症。对中风后遗症的预防和治疗，中医药有一定的优势，这类疾病的机理是，由于支配脑部组织供血的血管发生病变，导致脑组织受到急性或亚急性的损害，发生功能紊乱或不可逆性病理变化，从而出现偏瘫、失语、意识障碍、大小便失控等症状。

中风后遗症的病因病机多为气虚血瘀，脉络阻滞；肝阳上亢，脉络瘀阻；肾精亏虚，风痰阻络。在后遗症期，因其病程日久，加上治疗上的攻伐，正气己伤，阴阳失衡，气血逆乱，故以“气虚血瘀”者多见。其证肢瘫或面瘫，兼见倦怠、嗜卧、气短、舌质暗红或有瘀点瘀斑，苔薄白，脉弱或沉涩。基本治疗原则应是攻补兼施，扶正祛邪，宜采用益气活血法。正如《素问·阴阳应象大论》日：“血实宜决之，气虚宜掣之。”“治风先治血，血行风自灭”，使瘀血去，气血调和，脏腑经络得以荣养，其病当自恢复。此亦即现今我们运用补气活血代表方补阳还五汤治疗“气虚血瘀”中风后遗症的理论依据。

消栓口服液原工艺采用醇沉工艺，将处方中多糖、蛋白肽等大分子类成分除掉，造成药材浪费。

多糖是中药中一类天然高分子化合物，是维持生命正常运转的基本物质，有调节免疫系统功能、抗氧化以及抗衰老等作用，具有巨大开发潜力。蛋白肽有加速毛细血管的微循环、降血脂、舒张血管等作用。

朱虹等实验表明黄芪总提取物（包括黄芪多糖和黄芪总苷）有抑制体内血栓形成和体外直接溶解血凝块作用（中国临床药理学与治疗学，2005 Aug; 10( 8) : 917- 920）。

从理论上来说，非淀粉多糖中的大分子较难跨膜转运，也有推测能通过胞饮作用跨膜。多糖类化合物在胃、小肠由于相应酶的缺乏不能被降解。在结肠，肠道细菌剧增，并产生许多独特酶系，如糖苷酶、葡萄苷酸酶、果胶酶和葡聚糖酶等多糖类在此能被肠菌酶代谢处置，多糖骨架结构被破坏，生成小分子寡糖。根据这一机制，瓜尔胶、壳聚糖、果胶、葡聚糖、直链淀粉、硫酸软骨素等多糖类物质常被用于结肠菌群触发型口服结肠靶向释药系统( [郑年新，阮金秀，张永祥.地黄寡糖的吸收动力学研究.中国中西医结合杂志，2000，20(6)：444～447]、[周四元.多糖类递药系统结肠定位释放及其对大鼠溃疡性结肠炎的治疗研究. 第四军医大学博士学位论文，2005]、[刘新友，周四元，程建峰，等.地塞米松当归多糖前体药在大鼠体内的结肠靶向释药研究.中国临床药理学与治疗学，2006，11（5）：505～509]。由此可见，肠道细菌对多糖的转化和吸收有一定的影响。

发明内容

本发明的目的是克服现行消栓口服液采用醇沉工艺，将处方中多糖、蛋白肽等大分子类成分除掉，造成药材浪费的缺陷，提供一种益生菌发酵型消栓口服液及其制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种益生菌发酵型消栓口服液，由益生菌发酵中药复方制得，所述中药复方的成分及含量为：每1000ml益生菌发酵型消栓口服液中含：黄芪400-1200g、当归40-80g、赤芍40-80g、地龙20-50g、川芎20-50g、桃仁20-50g、红花20-50g。

所述的益生菌为双歧杆菌和乳杆菌。

一种优选的方案，所述中药复方的成分及含量为：每1000ml益生菌发酵型消栓口服液中含：黄芪600g 当归60g 赤芍60g 地龙30g 川芎30g 桃仁30g 红花30g。

所述益生菌发酵型消栓口服液的制备方法步骤如下：

a. 取中药复方中的七味药，加水煎煮二次，第一次1.5-2.0 小时，第二次1.0-1.5 小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至50℃下测定相对密度为1.01 ～1.10；

b．上述浓缩液加入体积百分比为0～1.5%的葡萄糖、体积百分比为0～0.2%的酵母粉、无机盐（FeSO₄·7H₂O 1.0mg/100ml、ZnSO₄·7H₂O 4.4mg/100ml）、体积百分比为0～10%的蔗糖、体积百分比为0～0.03%的三氯蔗糖，调整pH7.0并于110～121℃下灭菌30～60分钟，温度降至39℃左右时，接种预培养的体积百分比各约0.2～1.0%的一种或者两种双歧杆菌的菌液，常规培养约2～6小时，再接种预培养的体积百分比各约0.2～1.0%的两种或者三种乳杆菌的菌液，然后继续发酵12～42小时，当pH降至4.0以下时结束发酵；

c．稳定化处理，离心或过滤或冷沉，添加或不添加防腐剂，加纯化水稀释，分装，灭菌，即得益生菌发酵型消栓口服液；

制备方法步骤b中所述的接种的方式也可为同时接种预培养的体积百分比各约0.2～1.0%的一种或者两种双歧杆菌的菌液和预培养的体积百分比各约0.2～1.0%的两种或者三种乳杆菌的菌液；所述发酵的时间为常规发酵16～48小时，当pH降至4.0以下时结束发酵。

制备方法步骤b中所述的双歧杆菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌。

菌种来源于中国典型培养物保藏中心（CCTCC）（中国，武汉）或中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）（中国，北京）或者从正常人的粪便或肠粘膜组织中分离得到这些细菌菌株。

一般说来，本发明的发酵型消栓口服液的口服给药剂量可根据原工艺制备的消栓口服液药材含量折算，或根据待治疗的病症或病理状态的性质、严重程度、病人或动物的年龄、体重、一般健康状态，以及病人或动物对所用药物的敏感性、耐受性和给药方式等因素，按照个体化的原则由临床医生确定。

本发明利用对人体有益的肠道细菌，在体外发酵中药水提物。一方面，保留了中药的水提物全成分；另一方面，提取物经过肠道益生菌发酵，体外转化大分子物质，易于人体吸收，增强疗效；并且在发酵过程中，产生丰富风味物质，改善了中药的口感。经实验证明，本发明的益生菌发酵型消栓口服液对改善凝血时间和肠系膜微循环有显著的疗效，并且，功效优于原工艺制备的消栓口服液。

具体实施方式

实施例1：益生菌发酵型消栓口服液的制备

按下列重量称取各中药成分：黄芪600g 当归60g 赤芍60g 地龙30g 川芎30g 桃仁30g 红花30g，以上七味，加水煎煮二次，第一次1.5 小时，第二次为1.0 小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至50℃下测定相对密度为1.02 ～ 1.08，加入体积百分比为0.5%的葡萄糖、体积百分比为0.1%的酵母粉、无机盐(FeSO₄·7H₂O 1.0mg/100ml、ZnSO₄·7H₂O 4.4mg/100ml、)、体积百分比为3.0%的蔗糖、体积百分比为0.01%的三氯蔗糖，调整pH7.0左右并于115℃下灭菌40分钟后，温度降至39℃左右时，接种预培养的体积百分比各约0.5%的两歧双歧杆菌（正常人体分离，经中国科学院微生物研究所鉴定）和短双歧杆菌（AS 1.2213）的菌液，37℃培养约6小时后，再接种体积百分比各约0.5%的嗜酸乳杆菌（AS 1.1854）、植物乳杆菌（AS 1.19）和德氏乳杆菌（AS 1.1480）的菌液，37℃发酵16小时检测pH值，当pH值降至4.0以下时结束发酵，稳定化处理，离心，上清液加水定容至1000毫升，分装，灭菌，即得。

本发明中使用的益生菌为双歧杆菌和乳杆菌，其中双歧杆菌是人或哺乳动物体内最重要的生理性细菌，主要分布于小肠下部和结肠内。乳杆菌是人体内分布最为广泛的益生菌，在胃肠道中，该细菌主要分布于迥肠部。本发明选用两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、和植物乳杆菌等常见益生菌菌株，主要是基于它们在人或动物肠道内分布的总体广泛性，以及它们生理学活性的互补性。

可以从中国典型培养物保藏中心（CCTCC）（中国，武汉）和中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）（中国，北京）购得，或者从正常人的粪便或肠粘膜组织中分离得到这些细菌菌株。

实施例2：益生菌发酵型消栓口服液的制备

按下列重量称取各中药成分：黄芪500g 当归50g 赤芍50g 地龙25g 川芎25g 桃仁25g 红花25g，以上七味，加水煎煮二次，第一次2.0 小时，第二次为1.5 小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至50℃下测定相对密度为1.02 ～ 1.07，加入体积百分比为1.0%的葡萄糖、体积百分比为0.2%的酵母粉、无机盐(FeSO₄·7H₂O 1.0mg/100ml、ZnSO₄·7H₂O 4.4mg/100ml、)、体积百分比为0.02%的三氯蔗糖，调整pH7.0左右并于121℃下灭菌30分钟后，温度降至39℃左右时，同时接种预培养的体积百分比为1.0%的短双歧杆菌（AS 1.2213）的菌液以及体积百分比各约0.3%的嗜酸乳杆菌（AS 1.1854）和植物乳杆菌（AS 1.19）的菌液，37℃发酵24小时检测pH值，当pH值降至4.0以下时结束发酵，稳定化处理，过滤，滤液加水定容至1000毫升，分装，灭菌，即得。

实施例3：益生菌发酵型消栓口服液的制备

按下列重量称取各中药成分：黄芪400g 当归40g 赤芍40g 地龙20g 川芎20g 桃仁20g 红花20g，以上七味，加水煎煮二次，第一次2.0 小时，第二次为1.0 小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至50℃下测定相对密度为1.01 ～ 1.06，加入无机盐(FeSO₄·7H₂O 1.0mg/100ml、ZnSO₄·7H₂O 4.4mg/100ml、)、体积百分比为0.01%的三氯蔗糖，调整pH7.0左右并于110℃下灭菌60分钟后，温度降至39℃左右时，接种预培养的体积百分比为1.0%的短双歧杆菌（AS 1.2213）的菌液，37℃培养约2小时后，再接种体积百分比各约0.5%的嗜酸乳杆菌（AS 1.1854）和植物乳杆菌（AS 1.19）的菌液，37℃发酵20小时检测pH值，当pH值降至4.0以下时结束发酵，稳定化处理，自然沉降，上清液加水定容至1000毫升，分装，灭菌，即得。

为检测本发明的益生菌发酵型消栓口服液与市面销售的消栓口服液的功能作用，下面通过对比实验，验证益生菌发酵型消栓口服液与原工艺制备的消栓口服液，对小鼠凝血时间、对大鼠肠系膜微循环等的影响。

实验例1：益生菌发酵型消栓口服液与原工艺消栓口服液抗凝实验

本实验旨在利用对小鼠凝血时间的测定，举例描述按本发明方法制备的发酵型消栓口服液，与原工艺制备的消栓口服液临床效果的比较。

取实施例1制备的益生菌发酵型消栓口服液与原工艺制备的消栓口服液（济南三株福尔制药有限公司生产，批号121001），分别浓缩至相同浓度（按所含药材量折算），作为供试样品。

取体重18～22g的雄性小鼠60只，随机分为5组，每组12只，分别为生理盐水组、原工艺高剂量组、原工艺中剂量组、发酵型高剂量组、发酵型中剂量组。分别经口给予受试样品，对照组同样途径给生理盐水，每日1次，连续10天。中剂量组为人推荐剂量的10倍换算，每日每只口服0.1ml；高剂量组为人推荐剂量的20倍换算，每日每只口服0.2ml。方法：毛细管法测定凝血时间。结果如表1。

表1：不同制备工艺的消栓口服液对小鼠凝血时间的影响

组别	动物数( 只)	凝血时间（秒）
			生理盐水组	12	102.25±8.52
原工艺高剂量组	12	138.58±16.03*
			原工艺中剂量组	12	110.33±12.28
发酵型高剂量组	12	141.42±6.93*
			发酵型中剂量组	12	130.50±7.19*※

与生理盐水组相比，^* p<0.05；与原工艺同剂量组相比，※p<0.05

从本实验结果中可以看出，原工艺中剂量组与生理盐水组凝血时间不存在显著差异，其余各组与生理盐水组差异显著（p<0.05），发酵型中剂量组与原工艺中剂量组之间有显著性差异（p<0.05），发酵型中剂量组与原工艺高剂量组之间无显著性差异。说明益生菌发酵型工艺制备的样品比原工艺制备的样品，在服用量减少的情况下，疗效相当，可减少服用量，从而节约药材。

实验例2：益生菌发酵型消栓口服液与原工艺消栓口服液对大鼠肠系膜微循环变化实验

本实验旨在利用对大鼠毛细血管交点数、毛细血管管径的测定，举例描述按本发明方法制备发酵型消栓口服液，与原工艺制备的消栓口服液临床效果的比较。

取体重220±20g的雄性大鼠60只，适应性饲养3天后，随机分为5组，每组12只，分别为生理盐水组、原工艺高剂量组、原工艺中剂量组、发酵型高剂量组、发酵型中剂量组。分别经口给予受试样品，对照组同样途径给生理盐水，每日1次，连续10天。中剂量组为人推荐剂量的10倍换算，每日每只口服0.9ml；高剂量组为人推荐剂量的20倍换算，每日每只口服1.8ml。方法：断尾取血压迫止血后，将大鼠按照40mg/kg剂量用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，沿腹中线纵向切开腹壁2-3cm，轻轻拉出大鼠肠道回盲部，将肠系膜轻轻展开置于盛有恒温生理盐水的台式灌流槽的视窗上通过BI-2000系统，直接观察肠系膜微循环血色和血液流态的变化，测定1mm²的固定区域毛细血管网交点数；将大鼠肠系膜的第三级分支动脉进行管径测量，每只大鼠测量3次求其平均值。结果如表2：

表2：不同制备工艺的消栓口服液对大鼠肠系膜微循环的影响

组别	动物( 只)	毛细血管点数（个）	毛细血管管径（um）
				生理盐水组	12	11.83±0.86	22.33±0.64
原工艺高剂量组	12	13.83±1.23*	23.93±0.71*
				原工艺中剂量组	12	11.82±0.99	22.75±0.53*
发酵型高剂量组	12	15.12±1.33*※	25.21±0.91*※
				发酵型中剂量组	12	13.58±1.21*※	23.57±0.79*※

从表2中所示的数据可以看出，原工艺中剂量组与生理盐水组毛细血管点数不存在显著差异，其余各组与生理盐水组差异显著（p<0.05），发酵型中剂量组与原工艺中剂量组之间有显著性差异（p<0.05），发酵型高剂量组与原工艺高剂量组之间有显著性差异（p<0.05），发酵型中剂量组与原工艺高剂量组之间无显著性差异。毛细血管管径各组与生理盐水组差异显著（p<0.05），发酵型中剂量组与原工艺中剂量组之间有显著性差异（p<0.05），发酵型高剂量组与原工艺高剂量组之间有显著性差异（p<0.05），发酵型中剂量组与原工艺高剂量组之间无显著性差异。

由以上结果可以看出，按本发明方法制备的消栓口服液对大鼠肠系膜微循环作用明显优于原工艺制备的消栓口服液。发酵型中剂量的疗效与原工艺高剂量的疗效相当，同剂量疗效明显提高。

实验结果表明，本发明的益生菌发酵型消栓口服液比原工艺制备的消栓口服液，对小鼠凝血时间、大鼠肠系膜微循环指标有不同程度的提高和改善，且两者有显著性差异。

因此，根据本发明的优选实施方案，按照本发明的方法制备的发酵型消栓口服液，功效优于原工艺制备的消栓口服液。

Claims

1.一种益生菌发酵型消栓口服液，其特征在于，由益生菌发酵中药复方制得，所述中药复方的成分及含量为：每1000ml益生菌发酵型消栓口服液中有效成分为：黄芪400-1200g、当归40-80g、赤芍40-80g、地龙20-50g、川芎20-50g、桃仁20-50g、红花20-50g；所述的益生菌为双歧杆菌和乳杆菌；其制备方法步骤如下：

b．上述浓缩液加入体积百分比为0～1.5%的葡萄糖、体积百分比为0～0.2%的酵母粉、无机盐、体积百分比为0～10%的蔗糖、体积百分比为0～0.03%的三氯蔗糖，调整pH7.0并于110～121℃下灭菌30～60分钟，温度降至39℃左右时，接种预培养的体积百分比各0.2～1.0%的一种或者两种双歧杆菌的菌液，常规培养2～6小时，再接种预培养的体积百分比各0.2～1.0%的两种或者三种乳杆菌的菌液，然后继续发酵12～42小时，当pH降至4.0以下时结束发酵；

步骤b中所述的无机盐为FeSO₄·7H₂O 1.0mg/100ml、ZnSO₄·7H₂O 4.4mg/100ml。

2.根据权利要求1所述的益生菌发酵型消栓口服液，其特征在于，所述中药复方的成分及含量为：每1000ml益生菌发酵型消栓口服液中有效成分为：黄芪600g 当归60g 赤芍60g 地龙30g 川芎30g 桃仁30g 红花30g。

3.一种益生菌发酵型消栓口服液的制备方法，其特征在于，制备方法步骤如下：

制备方法步骤b中所述的无机盐为FeSO₄·7H₂O 1.0mg/100ml、ZnSO₄·7H₂O 4.4mg/100ml；

所述的中药复方成分及含量为：每1000ml益生菌发酵型消栓口服液中有效成分为：黄芪400-1200g、当归40-80g、赤芍40-80g、地龙20-50g、川芎20-50g、桃仁20-50g、红花20-50g。

4.根据权利要求3所述的益生菌发酵型消栓口服液的制备方法，其特征在于，制备方法步骤b中所述的接种的方式为同时接种预培养的体积百分比各0.2～1.0%的一种或者两种双歧杆菌的菌液和预培养的体积百分比各0.2～1.0%的两种或者三种乳杆菌的菌液；所述发酵的时间为常规发酵16～48小时，当pH降至4.0以下时结束发酵。

5.根据权利要求3或4所述的益生菌发酵型消栓口服液的制备方法，其特征在于，制备方法步骤b中所述的双歧杆菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌。