CN102603914B - 一种忍冬藤多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及忍冬藤多糖的制备方法，可有效解决忍冬藤多糖的制备问题，其解决的技术方案是，将忍冬藤干燥、粉碎，备用；在酶中加入水，溶解，水浴活化，得活化的酶溶液，备用；将忍冬藤粉末与水混合，水浴，浸泡，调pH至4.0～5.5，摇匀，水浴加热，加入活化的酶溶液，混匀，酶解，水浴回流提取，过滤，浓缩，加入乙醇至含醇量达到80%，静置，离心去除上清液，得多糖沉淀物；依次向多糖沉淀物中加入无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖；本发明操作简单、方便、快速，多糖得率高，初始反应物便宜易得，大大减少了制备成本，提取的忍冬多糖纯度高，并且保留了较高的生物活性，经济和社会价值显著。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种忍冬藤多糖的制备方法。
背景技术
中药忍冬藤(Casulis Lonicerae)为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica的干燥茎枝，资源丰富，价廉易得。中医用于治疗温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛。具有清热解毒，疏风通络的功能。目前对忍冬藤的研究仅限于有机酸类、黄酮类、鞣质、生物碱等化合物的研究，而对忍冬藤多糖的研究在国内外均无人涉足，目前已有研究报道表明，忍冬的花蕾金银花的多糖具有较好的提高免疫和抗氧化活性，是一种在治疗肿瘤及抗衰老方面的潜力药。作为忍冬藤茎的忍冬藤，其多糖极有可能与金银花多糖具有相同的功效，因此，如何研制出一种从忍冬藤中提取忍冬藤多糖，且多糖得率高的忍冬藤多糖制备方法为众所期待。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种忍冬藤多糖的制备方法，可有效解决忍冬藤多糖的制备问题。
本发明解决的技术方案是，包括以下步骤：
（1）将忍冬藤干燥、粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末1~3kg备用；
（2）称取忍冬藤粉末重量体积0.5%～2.5%的酶，在酶中加入10-20倍酶重量体积的30～60℃的水，溶解，30～60℃水浴活化5～45分钟，得活化的酶溶液，备用；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末与水以1：10～20的重量体积比混合，40～90℃水浴，浸泡20～120分钟，冷却至18～25℃，用盐酸调pH至4.0～5.5，摇匀，水浴加热至40～55℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2～12小时；
（4）将第（3）步所得溶液用80～95℃水浴回流提取2～5次，每次2～5小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的1-2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
（5）依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1-2倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖；
所述的酶为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、ß-葡聚糖酶、蛋白酶中的一种或两种以上的混合。
本发明操作简单、方便、快速，多糖得率高，初始反应物便宜易得，大大减少了制备成本，提取的忍冬多糖纯度高，并且保留了较高的生物活性，是忍冬藤多糖制备上的创新，经济和社会价值显著。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1
（1）将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末1kg备用；
（2）称取5g的纤维素酶，在纤维素酶中加入50ml 32℃温水，溶解，32℃水浴活化28分钟，得活化的酶溶液，备用；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末与10000 ml水混合，40℃水浴，浸泡120分钟，冷却至18℃，用盐酸调pH至5.3，摇匀，水浴加热至55℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2小时；
（4）将第（3）步所得溶液用80～95℃水浴回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
（5）依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
实施例2
（1）将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末2kg备用；
（2）称取果胶酶30g，在果胶酶中加入450 ml 45℃温水，溶解，45℃水浴活化20分钟，得活化的酶溶液，备用；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末加水30000 ml混合，70℃水浴，浸泡50分钟，冷却至20℃，用盐酸调pH至4，摇匀，水浴加热至47℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解5小时；
（4）将第（3）步所得溶液用95℃水浴回流提取3次，每次5小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的1倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
（5）依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
实施例3
（1）将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末3kg备用；
（2）称取木聚糖酶75g，在木聚糖酶中加入1500ml58℃温水，溶解，58℃水浴活化8分钟，得活化的酶溶液，备用；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末加水60000 ml混合，80℃水浴，浸泡20分钟，冷却至25℃，用盐酸调pH至4.5，水浴加热至40℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解11小时；
（4）将第（3）步所得溶液用95℃水浴回流提取4次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的1倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
（5）依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
所述的酶为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、ß-葡聚糖酶、蛋白酶中的一种或两种以上的混合。
所述的重量体积是固体按照g计，液体按照ml计。
本发明制备的忍冬藤多糖，经检测多糖含量达到50%以上。方法稳定，可靠，经多次试验均取得了相同或相近的结果，其目的物经鉴定和分析为忍冬藤多糖，经过大量常规动物实验，其目的物具有清热解毒，疏风通络的疗效，并且显著提高了实验动物的免疫及抗衰老能力。
本发明操作简单、方便、快速，多糖得率高，初始反应物便宜易得，大大减少了制备成本，提取的忍冬多糖纯度高，并且保留了较高的生物活性，是忍冬藤多糖制备上的创新，经济和社会价值显著。
Claims (4)
1.一种忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将忍冬藤干燥、粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末1~3kg备用；
（2）称取忍冬藤粉末重量0.5%～2.5%的酶，在酶中加入10-20倍酶重量体积的30～60℃的水，溶解，30～60℃水浴活化5～45分钟，得活化的酶溶液，备用；
所述的重量体积是固体按照g计，液体按照ml计；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末与水以1︰10～20的重量体积比混合，40～90℃水浴，浸泡20～120分钟，冷却至18～25℃，用盐酸调pH至4.0～5.5，摇匀，水浴加热至40～55℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2～12小时；
（4）将第（3）步所得溶液用80～95℃水浴回流提取2～5次，每次2～5小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的1-2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
（5）依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1-2倍量的无水乙醇、丙酮和乙醚分别进行洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖；
所述的酶为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、ß-葡聚糖酶、蛋白酶中的一种或两种以上的混合。
2.根据权利要求1所述的忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末1kg备用；
（2）称取5g的纤维素酶，在纤维素酶中加入50ml 32℃温水，溶解，32℃水浴活化28分钟，得活化的酶溶液，备用；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末与10000 ml水混合，40℃水浴，浸泡120分钟，冷却至18℃，用盐酸调pH至5.3，摇匀，水浴加热至55℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2小时；（4）将第（3）步所得溶液用80～95℃水浴回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
（5）依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1倍量的无水乙醇、丙酮和乙醚分别进行洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
3.根据权利要求1所述的忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末2kg备用；
（2）称取果胶酶30g，在果胶酶中加入450 ml 45℃温水，溶解，45℃水浴活化20分钟，得活化的酶溶液，备用；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末加水30000 ml混合，70℃水浴，浸泡50分钟，冷却至20℃，用盐酸调pH至4，摇匀，水浴加热至47℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解5小时；
（4）将第（3）步所得溶液用95℃水浴回流提取3次，每次5小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的1倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
（5）依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1倍量的无水乙醇、丙酮和乙醚分别进行洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
4.根据权利要求1所述的忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末3kg备用；
（2）称取木聚糖酶75g，在木聚糖酶中加入1500 ml 58℃温水，溶解，58℃水浴活化8分钟，得活化的酶溶液，备用；
（3）将上述称取的忍冬藤粉末加水60000 ml混合，80℃水浴，浸泡20分钟，冷却至25℃，用盐酸调pH至4.5，水浴加热至40℃，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解11小时；
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