CN102060827A - 一种从瑞香狼毒中提取新狼毒素b的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法。工艺步骤包括瑞香狼毒根粉碎后回流提取，碱提酸沉，大孔树脂分离，结晶。本方法操作简单，低碳经济，产品纯度高。

Description

一种从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法。

背景技术：

瑞香狼毒(Stellera Chamaejasme.L)，别名断肠草，火柴头花等。多年生草本植物、根粗大、可入药。有大毒，能散结、逐水、止痛、杀虫。可治疗水气肿胀、淋巴结核、骨结核。外用可治疥癣、瘙痒、顽固性皮炎、杀虫蝇、灭蛆。除西部沙漠区外，广布内蒙古各地，尤以退化草场严重，不能作为青饲料，牛羊误食后有致死的可能性。长期以来，是草地牧民们深恶痛绝的一种有害植物。然而，研究发现瑞香狼毒的提取物有杀菌活性，其中起主要作用的是称为新狼毒素B的物质。

新狼毒素B(neochamaejasmine B)结构如下，有双黄酮结构，羟基和羰基数量较多，因此通常利用形成氢键来分离纯化。

现有文献对新狼毒素B的报道较少，工艺低效且问题较多。如杨顺义等《瑞香狼毒根中抑菌成分提取工艺》中研究并总结出用乙醇回流提取所得的抑菌成分较多，然而回流提取所得粗品杂质较其他方法多，需要进一步分离；周乐等在《瑞香狼毒根的抑茵活性成分研究》中使用乙酸乙酯提取，溶剂价格昂贵且浓缩成本大；张如刚等在《不同提取方法对瑞香狼毒总黄酮含量的影响》中比较两种提取方法在聚酰胺吸附、碱提酸沉、溶剂萃取后的效果，但是专属性不高。中国专利CN1544433“瑞香狼毒中新狼毒素B的提取分离方法及其应用”报道了一种超声提取、硅胶层析的提纯方法，提取溶剂较复杂，硅胶分离速度较慢。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种。该方法操作简单，低碳经济，产品纯度高。

本发明是采用以下技术方案实现的：

1.一种从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：取瑞香狼毒的根，粉碎为40-60目，用90-95％乙醇回流提取2次，合并提取液，回收乙醇，得粗品；

2)碱提酸沉：将粗品溶于强碱溶液，过滤，加强酸酸化至出现沉淀，离心，抽滤，得滤饼；

3)大孔树脂分离：将滤饼分散于30％乙醇中，湿法上大孔树脂柱，用2-3倍柱体积水冲洗，再用60-70％洗脱至流出液无黄酮，挥干洗脱液得固体；

4)结晶：将固体溶于丙酮，浓缩结晶，重复2-3次，烘干，得到产品。

所述步骤1)中乙醇用量为原料的10-15倍量(V/W)，每次提取时间为1-1.5小时。

所述步骤2)所用强碱为pH10的氢氧化钠或碳酸钠溶液，所用酸为pH2的盐酸溶液。

所述步骤3)中大孔树脂为极性大孔树脂ADS-2或AB-8。

所述步骤4)中养晶时间为2-3小时。

综上所述，本发明存在以下优点：

(1)原料使用天然毒草，变废为宝，能缓解自然条件失衡导致的环境压力。

(2)瑞香狼毒的根部的黄酮类物质比其他部位更高，用乙醇提取也可以避免蛋白质等杂质溶解。

(3)新狼毒素B的酚羟基多，易溶于碱，可对回流提取后的提取物做初级处理。

(4)新狼毒素B极性较大，易形成氢键，用极性较强的大孔树脂制备能耗少，低碳化。

(5)丙酮极性大，对极性物质溶解性好；沸点低，易回收。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取干燥的瑞香狼毒根部1kg，粉碎为40目，加入10L90％的乙醇，提取1小时后抽滤出一次提取液，药渣再用10L90％的乙醇回流提取1小时，抽滤得二次提取液，合并两次提取液后浓缩成浸膏。将浸膏溶于pH10的氢氧化钠溶液，滤除不溶物，滤液加pH2的盐酸溶液使其析出沉淀，离心后抽滤，保留滤饼。将滤饼分散于30％乙醇中，湿法上ADS-2大孔树脂柱，用2倍柱体积去离子水冲洗柱子后，用60％乙醇洗脱黄酮物质至流出液检测不出黄酮，将所得洗脱液挥干成固体。将固体溶于丙酮，浓缩至小体积并静置结晶，重复2次，烘干晶体，即得97％的新狼毒素B。

实施例2：

取干燥的瑞香狼毒根部1kg，粉碎为40目，加入12L95％的乙醇，提取1.5小时后抽滤出一次提取液，药渣再用12L95％的乙醇回流提取1小时，抽滤得二次提取液，合并两次提取液后浓缩成浸膏。将浸膏溶于pH10的氢氧化钠溶液，滤除不溶物，滤液加pH2的盐酸溶液使其析出沉淀，离心后抽滤，保留滤饼。将滤饼分散于30％乙醇中，湿法上AB-8大孔树脂柱，用3倍柱体积去离子水冲洗柱子后，用65％乙醇洗脱黄酮物质至流出液检测不出黄酮，将所得洗脱液挥干成固体。将固体溶于丙酮，浓缩至小体积并静置结晶，重复3次，烘干晶体，即得98％的新狼毒素B。

实施例3：

取干燥的瑞香狼毒根部1kg，粉碎为60目，加入15L90％的乙醇，提取1.5小时后抽滤出一次提取液，药渣再用15L90％的乙醇回流提取1.5小时，抽滤得二次提取液，合并两次提取液后浓缩成浸膏。将浸膏溶于pH10的氢氧化钠溶液，滤除不溶物，滤液加pH2的盐酸溶液使其析出沉淀，离心后抽滤，保留滤饼。将滤饼分散于30％乙醇中，湿法上AB-8大孔树脂柱，用2倍柱体积去离子水冲洗柱子后，用70％乙醇洗脱黄酮物质至流出液检测不出黄酮，将所得洗脱液挥干成固体。将固体溶于丙酮，浓缩至小体积并静置结晶，重复2次，烘干晶体，即得97％的新狼毒素B。

实施例4：

取干燥的瑞香狼毒根部1kg，粉碎为60目，加入15L95％的乙醇，提取1.5小时后抽滤出一次提取液，药渣再用15L95％的乙醇回流提取1小时，抽滤得二次提取液，合并两次提取液后浓缩成浸膏。将浸膏溶于pH10的氢氧化钠溶液，滤除不溶物，滤液加pH2的盐酸溶液使其析出沉淀，离心后抽滤，保留滤饼。将滤饼分散于30％乙醇中，湿法上ADS-2大孔树脂柱，用3倍柱体积去离子水冲洗柱子后，用70％乙醇洗脱黄酮物质至流出液检测不出黄酮，将所得洗脱液挥干成固体。将固体溶于丙酮，浓缩至小体积并静置结晶，重复3次，烘干晶体，即得99％的新狼毒素B。

Claims (5)

1.一种从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：取瑞香狼毒的根，粉碎为40-60目，用90-95％乙醇回流提取2次，合并提取液，回收乙醇，得粗品；

2)碱提酸沉：将粗品溶于强碱溶液，过滤，加强酸酸化至出现沉淀，离心，抽滤，得滤饼；

3)大孔树脂分离：将滤饼分散于30％乙醇中，湿法上大孔树脂柱，用2-3倍柱体积水冲洗，再用60-70％洗脱至流出液无黄酮，挥干洗脱液得固体；

4)结晶：将固体溶于丙酮，浓缩结晶，重复2-3次，烘干，得到产品。

2.如权利要求1所述的从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法，其特征在于所述步骤1)中乙醇用量为原料的10-15倍量(V/W)，每次提取时间为1-1.5小时。

3.如权利要求1所述的从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法，其特征在于所述步骤2)所用强碱为pH10的氢氧化钠或碳酸钠溶液，所用酸为pH2的盐酸溶液。

4.如权利要求1所述的从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法，其特征在于所述步骤3)中大孔树脂为极性大孔树脂ADS-2或AB-8。

5.如权利要求1所述的从瑞香狼毒中提取新狼毒素B的方法，其特征在于所述步骤4)中养晶时间为2-3小时。