CN101757045A - 一种茯苓多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从茯苓属植物中提取茯苓多糖的制备方法。它是称取茯苓切片后粉碎，加入3-12倍重量份数的水，回流提取2-3次，在料液比1∶40，提取温度40-95℃，提取30-60min/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质，然后取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80％，静置，过滤，收集沉淀。茯苓多糖具有保肝降谷丙转氨酶、增强免疫、镇静、降血糖及抗肿瘤等作用，被广泛应用于中成药、保健食品、美容药膳，具有较好的开发前景。
Description
技术领域
本发明属于中药制药技术领域，涉及茯苓多糖的制备方法。
背景技术
茯苓为植物多孔菌科茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的菌核，多寄生于马尾松或赤松的根部。产于云南、安徽、湖北、浙江、河南、四川等地。茯苓个：呈类球形、椭圆形、扁圆形或不规则团块，大小不一。外皮薄而粗糙，棕褐色至黑褐色，有明显的皱缩纹理。体重，质坚实，断面颗粒性，有的具裂隙，外层淡棕色，内部白色，少数淡红色，有的中间抱有松根。无臭，味淡，嚼之粘牙。秋春间采挖，栽培品一般在接种后三年采挖。洗净，热草，逐层铺叠，最上盖以厚麻袋，使其发汗，析出水分，取出，将水珠擦去，摊放阴凉处，待表面干燥后再发汗，如此反复3～4次至表面皱缩，皮色变为褐色，再置阴凉处晾至半干，分部切制，阴干，生用。茯苓皮：茯苓菌核的外皮，功能利水肿。赤茯苓：削去外皮后的淡红色部分，功能渗利湿热。白茯苓：切去赤茯苓后的白色部分，亦称茯苓，切成小方块，功能渗湿健脾。茯神：白茯苓中心抱有细松根者，切成方形薄片，功能宁心安神。含B-茯苓聚糖、茯苓酸、卵磷脂及甾醇等。1：利尿作用茯苓利尿机转不明，而且复方较单味药作用明显。2：镇静作用茯苓煎剂对小鼠腹腔注射，可以抑制自发活动，并能对抗咖啡因所致小鼠兴奋过度，对巴比妥的麻醉有协同作用。3：心血管系统乙醇提取物使心肌收缩力加强，心率增加。4：消化系统茯苓对于四氯化碳所引起的小鼠肝损伤，有明显的保护作用。5：抗肿瘤作用茯苓多糖对小鼠肉瘤有抑制作用，其作用与胸腺有关，可激活局部补体。表现在
(1)在体内具抗癌活性，并能促进人体的免疫功能；所含茯苓聚糖对肉瘤S-180的抑制效率可达96.88％。
(2)浸剂对正常兔作腹腔注射有利尿作用；乙醚或乙醇提取物能使离体蛙心收缩加强，对家兔血糖则先使升高而后降低。
(3)茯神煎剂对小鼠有镇静作用，茯苓的镇静作用次于茯神。[药性]甘、淡、平、归肺、胃、肾经。[药效]败毒抗癌、利水化饮、健脾宁心。利水渗湿，健脾，化痰，宁心安神。
茯苓多糖(Pachymaran)来源于多孔菌科真菌茯苓(PoriacocosWolf)。有健脾健肾、宁心安神等功效。现代药理学作用表明，茯苓多糖能增强人体免疫功能，提高人体抗病能力，起到防病、延缓衰老的作用。选择适合茯苓的提取方法，最大限度的提取茯苓的有效成分是研究茯苓药理作用的基础。现有两种最新的提取方法，能使水溶性多糖的提取率得到明显的提高。
发明内容
本发明采用的技术方案如下：
一种茯苓多糖的制备方法，其特征在于，以如下的方法制备：
(1)称取茯苓切片后粉碎，加入3-12倍重量份数的水，回流提取2-3次，在料液比1∶40，提取温度40-95℃，提取30-60min/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；
(2)取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80％，静置，过滤，收集沉淀。
本发明所述的制备方法，其中提取温度为40℃。
本发明所述的制备方法，其中提取时间为30min/次。
本发明所述的制备方法，其中加入95％乙醇。
本发明的目的是实验设计优化茯苓皮中茯苓多糖的提取方法和工艺条件。方法利用单因素实验优化茯苓皮中茯苓多糖的提取方法，在单因素实验的基础上利用响应表面实验设计考察碱法提取过程中碱浓度、提取时间、料液比对多糖提取量的影响。结果茯苓皮中多糖的最佳提取方法为碱法提取，其提取条件可用回归方程Y＝7.89+15.249X1-35.4X12+8.375X2-0.885X22+7.333X1X2描述。结论最佳提取方法为碱法，最佳提取工艺条件为：NaOH浓度0.84mol/L，时间8.89h，料液比1∶150。
茯苓皮为多孔菌科真菌茯苓Ponia cocos(Schw)Wolf菌核的外皮，茯苓皮在临床上用量很少，绝大部分被当作废料弃去。茯苓皮中含有一定量的茯苓多糖，茯苓多糖具有保肝降谷丙转氨酶、增强免疫、镇静、降血糖及抗肿瘤等作用，被广泛应用于中成药、保健食品、美容药膳，具有较好的开发前景。曾分别进行过水提、碱提单因素实验研究和有机溶剂提取工艺的研究，本研究在水提、碱提和超声波提取单因素实验研究的基础上利用响应表面实验设计优化最佳提取工艺条件，为茯苓皮的开发利用奠定基础。
1器材
A主要仪器UV752型可见紫外分光光度计；JJ系列电子天平；赛多利斯BS系列电子天平；HH·S型电热恒温水浴锅；HS10260D超声波提取器；XYJ802离心沉淀机。
B茯苓皮云南思茅地区加工茯苓白块所切削的茯苓皮干品，粉碎备用。
C主要试剂浓硫酸、氢氧化钠、苯酚、无水葡萄糖均为国产分析纯。苯酚溶液：称取苯酚6g，加水至100ml即得。葡萄糖标准液：精密称取105℃下干燥恒重的葡萄糖100.3mg加蒸馏水溶解并定容至100ml。
2方法与结果
A茯苓多糖测定采用硫酸苯酚的方法测定。
B水提法称取一定量茯苓皮，在料液比一定的条件下，考察提取次数、提取时间和提取温度与茯苓多糖提取量的关系。
C超声波提取法称取一定量茯苓皮，在料液比一定的条件下，考察超声提取时间和提取温度与多糖提取量的关系。
D碱法提取多糖称取一定量茯苓皮，在料液比一定的条件下，室温提取30min，考察碱浓度与多糖提取量的关系。
E水提法
(1)提取次数的考察称取一定量茯苓皮，在料液比1∶40，提取温度95℃，提取30min/次的条件下，考察提取次数与茯苓多糖提取量的关系。茯苓皮提取的多糖量随累积提取次数的增加而增加，但从第2次开始提取的多糖量并迅速减小，综合考虑提取过程中的能耗、水耗等因素，宜采用一次提取。
(2)提取时间的考察称取一定量茯苓皮，在料液比1∶40，提取温度95℃，提取一次的条件下，考察不同提取时间与多糖提取量的关系。在10～20min之间，茯苓皮多糖的提取量随提取时间的增加快速增加，20min之后则变化缓和，故提取时间以20～30min为宜。
(3)提取温度的考察称取一定量茯苓皮，在料液比1∶40，提取时间30min，浸提一次的条件下，考察提取温度与多糖提取量的关系。茯苓皮中多糖提取量在20～40℃之间随提取温度的增加而增加，温度高于40℃后则呈下降趋势，60～80℃之间变化不大，在沸腾状况(95℃)下原料处于不断运动状态，其多糖提取量有所上升，提示搅拌使茯苓皮不断运动有利于多糖的提取，故宜选用40℃搅拌提取。
F超声波提取法
(1)超声提取时间的考察称取一定量茯苓皮，在料液比1∶40，超声频率40kHz，超声提取一次的条件下，考察超声提取时间与多糖提取量的关系。，茯苓皮多糖提取量随超声时间的增加而增大，当提取时间达到30min后，提取时间对提取量的影响减小，曲线变得较平缓。故一次超声提取的时间以30min为宜。
(2)超声提取次数的考察称取一定量茯苓皮，在料液比1∶40，超声频率40kHz，超声提取30min/次的条件下，考察超声提取次数与多糖提取量的关系。
G碱法提取称取一定量茯苓皮，在料液比1∶200，室温浸提30min条件下，考察碱浓度与多糖提取量的关系。结果表明茯苓皮多糖提取量在NaOH浓度0.25～0.5mol/L之间呈上升趋势，当浓度大于0.5mol/L以后呈下降趋势，故宜选NaOH浓度为0.5mol/L为中心点进行二次旋转正交组合实验。
H二次旋转正交组合实验为了全面分析碱提过程中各因素交互作用对茯苓皮提取过程的影响，在料液比1∶150条件下，本研究采用23旋转响应表面实验设计进行，影响因子为NaOH浓度、浸提时间，结果指标为茯苓皮的多糖提取量。实验结果采用二次回归分析和方差分析，根据回归方程得出适宜的碱提工艺条件。
用两因子二次旋转正交组合实验统计程序对表2结果进行回归分析和方差分析，得到以多糖提取量为指标，以NaOH浓度X1(mol/L)和提取时间X2为变量的二次回归方程及其方差分析结果(见表3)，结果表明茯苓皮多糖碱浸提中，在α＝0.05水平上对多糖提取量影响显著的因素是X1、X2的一次作用，X2的二次作用及X1X2的交互作用(P＜0.05)。
茯苓皮多糖碱浸提过程中，NaOH浓度X1、浸提时间提X2的一次作用、二次作用、交互作用对多糖提取量影响的数学模型为：Y＝7.889 9+15.248 8X1-35.399 6X12+8.372 6X2-0.884 7X22+7.333 3X1X2。该数学模型的相关系数0.967 7，标准误差3.792 1，方差分析结果显著(P＜0.05，见表3)，可用于预测茯苓皮多糖碱浸提过程中的多糖提取量。各因素对茯苓皮多糖提取量的表面应答图及其等高线图见图8。
3结论
以茯苓多糖提取量为指标，比较水提法、超声波提取法和碱提取法，茯苓皮中茯苓多糖的提取宜用碱法提取。茯苓皮碱浸提过程中，NaOH浓度X1及浸提时间X2对多糖提取量影响的数学模型为：Y＝7.889 9+15.248 8X1-35.399 6X12+8.372 6X2-0.884 7 X22+7.333 3X1X2。通过方程预测得到最佳碱浸提工艺条件为：NaOH浓度X1：0.84mol/L，时间X2：8.89h。此条件下茯苓皮中多糖提取量达54.99％。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述。
实施例1
(1)称取茯苓500g切片后粉碎，加入12倍重量份数的水，回流提取3次，在料液比1∶40，提取温度40℃，提取30min/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；
(2)取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入95％乙醇，使含醇量达到80％，静置，过滤，收集沉淀得到茯苓多糖，茯苓皮中多糖提取量达54.99％。
实施例2
(1)称取茯苓500g切片后粉碎，加入10倍重量份数的水，回流提取2次，在料液比1∶40，提取温度80℃，提取60min/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；
(2)取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入95％乙醇，使含醇量达到80％，静置，过滤，收集沉淀得到茯苓多糖，茯苓皮中多糖提取量达55.9％。
实施例3
在每1000毫升注射液中加入茯苓多糖500mg，吐温-80 30g，余量为氯化钠等渗溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。
实施例4
在每1000毫升注射液中加入茯苓多糖150mg，吐温-80 10g，余量为等渗氯化钾溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。
实施例5
在每1000毫升注射液中加入茯苓多糖200mg，吐温-80 15g，余量为等氯化镁渗溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。
实施例6
在每1000毫升注射液中加入茯苓多糖280mg，吐温-80 25g，余量为注射用水。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。
实施例7
在每1000毫升注射液中加入茯苓多糖300mg，吐温-80 18g，余量为乳酸钠等渗溶液。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。
实施例8
在每1000毫升注射液中加入茯苓多糖400mg，吐温-80 28g，余量为注射用水。加入少量活性炭加热搅拌，压滤，滤液经微孔滤膜过滤，滤液补足注射用水，混匀，灌封，灭菌配成注射液。
Claims (4)
1.一种茯苓多糖的制备方法，其特征在于，以如下的方法制备：
(1)称取茯苓切片后粉碎，加入3-12倍重量份数的水，回流提取2-3次，在料液比1∶40，提取温度40-95℃，提取30-60min/次合并提取液滤过，除去不溶性杂质；
(2)取提取液减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80％，静置，过滤，收集沉淀。
2.如权利要求1所述的制备方法，其中提取温度为40℃。
3.如权利要求1所述的制备方法，其中提取时间为30min/次。
4.如权利要求1所述的制备方法，其中加入95％乙醇。
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