CN102590191A

CN102590191A - 一种瘦肉精含量的检测方法

Info

Publication number: CN102590191A
Application number: CN2012100288734A
Authority: CN
Inventors: 杨秀荣; 包懿; 杨帆; 路丽霞
Original assignee: Changchun Institute of Applied Chemistry of CAS
Current assignee: Changchun Institute of Applied Chemistry of CAS
Priority date: 2012-02-09
Filing date: 2012-02-09
Publication date: 2012-07-18

Abstract

本发明提供一种瘦肉精的检测方法，包括以下步骤：将待测样品进行毛细管电泳分离，得到分离产物；将所述分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物；检测所述反应产物，得到所述反应产物的电化学发光信号强度；根据预定的标准曲线与所述电化学发光信号强度，得到瘦肉精的含量。本发明提供的检测方法首先将待测样品进行毛细管电泳分离，将得到的分离产物与三联吡啶钌反应，利用三联吡啶钌能与含有胺基的瘦肉精发生电化学发光反应、产生更强的电化学发光信号的性质，采用电化学发光法对得到的反应产物进行检测，得到的电化学发光的信号强度与瘦肉精的浓度成正比，从而得到瘦肉精的含量。本发明提供的检测方法选择性好，灵敏度高，结果准确。

Description

一种瘦肉精含量的检测方法

技术领域

本发明涉及添加剂的分析检测技术领域，尤其涉及一种瘦肉精含量的检测方法。

背景技术

盐酸克伦特罗，俗称瘦肉精，是一种选择性β2肾上腺素受体激动剂，在临床上主要用于治疗支气管哮喘和痉挛。研究者在使用过程中偶然发现，较高剂量的盐酸克伦特罗能够明显促进动物的生长，使其瘦肉含量增加，脂肪含量大幅减少，因此被称为“瘦肉精”。将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉含量、减少饲料的使用，从而使肉品提早上市、降低成本。因此，近年来瘦肉精被广泛地用作饲料添加剂，用于牲畜的喂养。

瘦肉精作为动物饲料添加剂使用时，它的用量大大超过了其作为药物使用时的用量，并且作为动物饲料添加剂时的时间较长，一般持续在三周以上，导致瘦肉精在动物体内的代谢周期变长，所以极易在动物体内造成瘦肉精的蓄积(张清安，等.食品与发酵工业，2004，30(9)：108～119.)。国内外的相关研究表明，食用含有瘦肉精的肉会出现恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，特别是对心脏病、高血压患者的危害更大；长期食用则有可能导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤。因此，在2002年，我国农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局发布的《禁止在饲料和动物饮用水中使用的要物品中目录》明令禁止在饲料和动物饮用水中添加瘦肉精。在对食品安全越来越重视的今天，发展简便、快速和准确的瘦肉精含量的检测方法具有非常重要的意义。

目前，检测瘦肉精的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)等(黄传峰，等.中国卫生检验杂志，2002，12(5)：634～634.)，这些方法能够实现对瘦肉精含量的检测，但是对实验条件的要求较高、实验过程繁琐、检测时间长，而且需要贵重的仪器，这些仪器的操作繁琐，价格昂贵，不适用于对瘦肉精的快速检测和上述检测方法的推广应用。为了提高对瘦肉精含量的检测的速度，简化检测的步骤，现有技术中公开了可用于瘦肉精含量检测的试纸或试剂盒，这种试纸或试剂盒以动物或人体的尿液或动物组织为检测对象，这种方法能够快速对瘦肉精进行筛选检测，然而这种方法对瘦肉精的检测灵敏度低，得到的结果准确度不高，容易出现假阴性的检测结果，尤其是对喂食过瘦肉精但出栏前停药的牲畜的检测不准确。

发明内容

本发明的目的在于提供一种瘦肉精含量的检测方法，本发明提供的检测方法对瘦肉精含量检测的结果准确，灵敏度高。

本发明提供一种瘦肉精含量的检测方法，包括以下步骤：

a)将待测样品进行毛细管电泳分离，得到分离产物；

b)将所述步骤a)得到的分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物；

c)检测所述步骤b)得到的反应产物，得到所述反应产物的电化学发光信号强度；

d)根据预定的标准曲线与所述步骤c)得到的电化学发光信号强度，得到瘦肉精含量。

优选的，所述待测样品中瘦肉精与所述步骤b)中三联吡啶钌的摩尔比为(0.02～2.5)∶(5～8)。

优选的，所述步骤a)中毛细管电泳分离的电压为10kV～20kV。

优选的，所述步骤c)具体为：

采用三电极系统检测所述步骤b)得到的反应产物；

所述三电极系统为：铂盘电极为工作电极、铂电极为对电极和银/氯化银为参比电极。

优选的，所述步骤c)中检测的电位为1.1V～1.5V。

优选的，所述步骤b)具体为：

在缓冲溶液中，将所述步骤a)得到的分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物。

优选的，所述缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液。

优选的，所述缓冲溶液的pH值为6.5～8.5；所述缓冲溶液的摩尔浓度为15mmol/L～50mmol/L。

优选的，所述步骤d)的标准曲线按照以下方法得到：

配制瘦肉精标准溶液；

将所述标准溶液进行毛细管电泳分离，得到分离产物；

将所述分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物；

检测所述反应产物，得到所述反应产物的电化学发光信号强度；

根据所述电化学发光信号强度及其对应的所述标准溶液的浓度，得到标准曲线。

优选的，所述瘦肉精标准溶液按照以下方法制备：

按照乙醇与水的体积比为5∶(1～10)，配制乙醇混合溶液；

将瘦肉精溶于所述乙醇混合溶液中，得到瘦肉精标准溶液。

本发明提供一种瘦肉精的检测方法，包括以下步骤：a)将待测样品进行毛细管电泳分离，得到分离产物；b)将所述步骤a)得到的分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物；c)检测所述步骤b)得到的反应产物，得到所述反应产物的电化学发光信号强度；d)根据预定的标准曲线与所述步骤c)中得到的电化学发光信号强度，得到瘦肉精的含量。本发明提供的方法首先将待测样品进行毛细管电泳分离，提高了对瘦肉精检测的选择性；将得到的分离产物与三联吡啶钌反应，利用三联吡啶钌能与含有胺基的瘦肉精发生电化学发光反应、产生更强的电化学发光信号的性质，采用电化学发光法对得到的反应产物进行检测，提高了对瘦肉精检测的灵敏度，实验结果表明，本发明提供的检测方法的最低检测限为1×10^-6mol/L。因此，本发明提供的方法对瘦肉精含量的检测具有较高的选择性和灵敏度，得到更加准确的检测结果。

另外，本发明提供的检测方法操作简单、快速，能够显著节约检测成本；本发明提供的检测方法将待测样品首先进行毛细管电泳分离，无需对样品进行复杂的前处理，更加节省了检测时间，提高了检测速度。

附图说明

图1为本发明实施例1得到的三联吡啶钌(a)和三联吡啶钌与瘦肉精反应产物(b)的电化学发光谱图；

图2为本发明实施例4得到的毛细管电泳-电化学发光谱图；

图3为本发明实施例5得到的毛细管电泳-电化学发光谱图；

图4为本发明实施例6得到的毛细管电泳-电化学发光谱图。

具体实施方式

本发明提供一种瘦肉精的检测方法，包括以下步骤：

a)将待测样品进行毛细管电泳分离，得到分离产物；

d)根据预定的标准曲线与所述步骤c)中得到的电化学发光信号强度，得到瘦肉精的含量。

瘦肉精，学名为盐酸克伦特罗，结构式如式(I)所示，它是一种平喘药，研究者在实验中发现，盐酸克伦特罗具有促进动物生长、增加动物的瘦肉量、减少脂肪含量的性质，因此其被称为“瘦肉精”。瘦肉精虽然能够促进动物的生长，但是容易在动物体内蓄积，长期食用这种含有瘦肉精残留的肉会使人体出现如恶心、头晕、四肢无力、手颤的症状，危害人体的健康，尤其是对心脏病、高血压患者等的危害更大。本发明采用毛细管电泳将待测样品分离，采用电化学发光的方法实现对分离产物进行测定，得到瘦肉精含量。

本发明将待测样品进行毛细管电泳分离，得到分离产物。

在本发明中，将待测样品进行毛细管电泳分离前，为了使毛细管电泳中的毛细管内壁的硅羟基的电离达到充分平衡，本发明优选清洗所述毛细管电泳的毛细管，所述清洗优选为依次进行氢氧化钠溶液清洗、水清洗和缓冲溶液清洗，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度优选为0.01mol/L～1mol/L，更优选为0.05mol/L～0.5mol/L，最优选为0.08mol/L～0.2mol/L；本发明对所述水清洗的水没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的用作毛细管电泳清洗的水即可；所述缓冲溶液优选为磷酸盐缓冲溶液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，更优选为磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液的摩尔浓度优选为10mmol/L～60mmol/L，更优选为15mmol/L～50mmol/L，最优选为25mmol/L～40mmol/L；所述缓冲溶液的pH值优选为6.0～9.0，更优选为6.5～8.5，最优选为7.0～8.0。

在完成对所述毛细管的清洗后，本发明将待测样品进行毛细管电泳分离，得到分离产物。

对于固体待测样品，本发明优选将待测样品溶于有机溶剂中，得到待测样品溶液，再将所述待测样品溶液进行毛细管电泳分离；对于液体待测样品，如尿液，本发明可以将所述液体待测样品直接进行毛细管电泳分离，得到分离产物。

在本发明中，所述毛细管电泳分离的电压优选为5kV～25kV，更优选为10kV～20kV，最优选为12kV～18kV；所述有机溶剂优选为乙醇混合溶液，更优选为乙醇与水的混合溶液，所述乙醇混合溶液的体积分数优选为20％～80％，更优选为30％～70％，最优选为40％～60％；所述待测样品溶液中瘦肉精的摩尔浓度优选为5.0×10^-6mol/L～3.0×10^-2mol/L，更优选为2.0×10^-5mol/L～2.5×10^-3mol/L。

本发明首先采用毛细管电泳对待测样品进行分离，进行毛细管电泳分离的仪器简单，实验过程高效、快速，而且对于液体样品来说，可以直接进样，减少了样品前处理的步骤，节约了时间。

得到分离产物后，本发明优选在电压作用下，更优选为在恒电位或循环伏安电位下，将所述分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物，所述反应优选在缓冲溶液中进行。

在反应过程中，三联吡啶钌在电压的作用下失去电子，得到正三价的三联吡啶钌正离子，反应过程如式(II)所示；如式(I)所示，瘦肉精分子结构中含有胺基，所述胺基会在电压的作用下失去电子，形成自由基和氢离子，反应过程如式(III)所示；所述自由基能够促进所述正三价三联吡啶钌正离子转变为激发态，反应过程如式(IV)所示；得到的激发态三联吡啶钌中的能量会以光子的形式释放，同时激发态的三联吡啶钌正离子转变为正二价的三联吡啶钌正离子，反应过程如式(V)所示。以C表示瘦肉精，上述三联吡啶钌与瘦肉精的反应过程如式(II)～式(V)所示：

C-e→C^·+→C^·+H⁺(III)；

式(IV)中所述C·products为瘦肉精自由基对应的反应产物。

由式(II)～式(V)所述的反应式可以看出，瘦肉精能够使三联吡啶钌转变为激发态，从而放出光子，采用电化学发光法对得到的光子进行检测，得到更强的电化学发光信号的强度，提高了对瘦肉精测定的灵敏度和选择性。

在本发明中，所述三联吡啶钌与待测样品中瘦肉精的摩尔质量比优选为(0.02～2.5)∶(5～8)，更优选为(0.25～2)∶(5.5～7.5)，最优选为(0.5～1.5)∶(6～7)；所述三联吡啶钌优选为三联吡啶钌缓冲溶液；所述三联吡啶钌的物质的量与缓冲溶液的体积比优选为(1～15)mmol∶1L，更优选为(3～10)mmol∶1L，最优选为(5～8)mmol∶1L；所述缓冲溶液优选为磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液的摩尔质量浓度优选为10mmol/L～40mmol/L，更优选为15mmol/L～35mmol/L，最优选为20mmol/L～30mmol/L；所述缓冲溶液的pH值优选为6.5～9.5，更优选为7.0～9.0，最优选为7.5～8.5。

得到反应产物后，本发明检测所述反应产物，得到电化学发光信号强度。

本发明在检测所述反应产物前，优选先对底液进行检测，所述底液为上述技术方案中瘦肉精与三联吡啶钌反应过程中的缓冲溶液。在本发明中，采用三电极系统对所述反应产物进行电化学发光测定，优选对电化学检测池施加恒电位或循环伏安电位对所述反应产物进行电化学发光测定，得到所述反应产物的电化学发光信号强度。所述三电极系统优选为：铂盘电极为工作电极，铂电极为对电极，银/氯化银电极为参比电极；所述恒电位优选为0.5V～2.0V，更优选为0.8V～1.5V，最优选为1.1V～1.2V；所述循环伏安电位优选为0.25V～1.25V。

得到反应产物的电化学发光信号后，本发明根据预定的标准曲线与上述技术方案得到的瘦肉精的电化学发光信号，得到瘦肉精的含量。

在本发明中，所述标准曲线优选按照以下方法获得：

配制瘦肉精标准溶液；

将所述标准溶液进行毛细管电泳分离，得到分离产物；

将所述分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物；

根据所述反应产物的电化学信号强度及其与对应的所述标准溶液的浓度，得到标准曲线。

为了得到标准曲线，本发明首先配制系列浓度的瘦肉精标准溶液，本发明对所述标准溶液的配制方法没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的标准溶液的配制方法得到瘦肉精的标准溶液即可。本发明优选将系列质量的瘦肉精分别溶于乙醇混合溶液中，得到瘦肉精的标准溶液，所述标准溶液的摩尔浓度优选为1.0×10^-6mol/L～5.0×10^-2mol/L，更优选为8.0×10^-6mol/L～1.0×10^-2mol/L，最优选为2.5×10^-5mol/L～2.5×10^-3mol/L；所述乙醇混合溶液优选为无水乙醇与水的混合溶液，所述乙醇混合溶液中乙醇的体积分数优选为10％～80％，更优选为20％～70％，最优选为30％～60％。

得到瘦肉精的标准溶液后，将所述标准溶液与三联吡啶钌反应，得到反应产物。

所述瘦肉精标准溶液与三联吡啶钌的反应过程与上述技术方案中所述分离产物与三联吡啶钌的反应过程相同。

根据上述技术方案得到瘦肉精标准溶液与三联吡啶钌发生电化学发光反应后，本发明优选采用三电极系统检测所述反应产物，得到电化学发光信号。在本发明中，所述检测所述瘦肉精标准溶液与三联吡啶钌的反应产物与上述技术方案中对所述分离产物与三联吡啶钌的反应产物的检测过程相同。

根据上述技术方案得到所述瘦肉精标准溶液与三联吡啶钌反应产物的电化学发光信号强度后，根据所述电化学发光信号的强度与其对应的所述瘦肉精标准溶液的浓度，绘制得到标准曲线。

得到标准溶液后，根据上述技术方案得到的所述分离产物中瘦肉精与三联吡啶钌反应产物的电化学发光信号强度与所述标准曲线，本发明计算得到待测样品中瘦肉精的含量。

在本发明中，优选将毛细管电泳分离与电化学发光检测联用，对待测样品进行测定，所述毛细管电泳的分离产物直接进入电化学发光检测的检测池中，在所述检测池中预置上述技术方案所述的三联吡啶钌的缓冲溶液，所述分离产物进入检测池后与三联吡啶钌反应，电化学发光检测系统直接对检测池中的反应产物进行测定，得到待测样品中的瘦肉精含量。

本发明提供一种瘦肉精的检测方法，首先将待测样品进行毛细管电泳分离，然后将所述反应产物与三联吡啶钌反应，采用电化学发光法测定得到的反应产物，得到反应产物的电化学发光信号，所述电化学发光信号的强度与瘦肉精的浓度存在良好的线性相关性，根据预定的标准曲线与所述反应产物的电化学发光信号得到瘦肉精的含量。本发明首先采用毛细管电泳法将待测产物分离，得到分离产物，利用三联吡啶钌的电化学发光特性以及瘦肉精对三联吡啶钌的电化学发光的增强和促进作用，提高了瘦肉精检测的灵敏度和选择性，得到的测定结果准确可靠。另外，本发明提供的方法简单、快速，而且无需对样品进行复杂的前处理，节省了测定时间，有利于实时在线的对瘦肉精进行检测。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的瘦肉精的检测方法进行详细描述，但不能将他们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

在电化学发光检测池中分别加入摩尔浓度为8mmol/L的三联吡啶钌的磷酸盐缓冲溶液和含有质量浓度为1.53mmol/L盐酸克伦特罗的乙醇溶液和摩尔浓度为8mmol/L的三联吡啶钌的磷酸盐缓冲溶液的混合溶液，其中乙醇溶液由体积比为1∶1的无水乙醇和水组成，磷酸盐缓冲溶液的摩尔浓度为25mmol/L，pH为8.5。以铂盘电极为工作电极、铂电极为对电极、银/氯化银电极为参比电极，在循环伏安电位为-0.25V～1.25V的条件下对三联吡啶钌、盐酸克伦特罗与三联吡啶钌混合物进行电化学发光检测，得到三联吡啶钌、盐酸克伦特罗与三联吡啶钌混合物的电化学发光图谱。

结果如图1所示，图1为本发明实施例1得到的三联吡啶钌(a)和三联吡啶钌与盐酸克伦特罗反应产物(b)的电化学发光谱图，由图1可以看出，盐酸克伦特罗与三联吡啶能发生电化学发光反应，产生更强的电化学发光信号。

实施例2

将系列摩尔质量的盐酸克伦特罗溶液体积分数为50％的乙醇溶液中，得到摩尔浓度分别为2×10^-5mol/L，1×10^-4mol/L，5×10^-4mol/L，1.5×10^-3mol/L，2.5×10^-3mol/L的盐酸克伦特罗标准溶液。采用毛细管电泳-电化学发光法对盐酸克伦特罗标准溶液进行检测。检测前将毛细管依次用摩尔浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液、水和pH值为8.5的磷酸盐缓冲溶液分别清洗30分钟，在电化学检测池中加入摩尔浓度为25mmol/L的三联吡啶钌的磷酸盐缓冲溶液，pH值为8.5，首先将pH值为8.5的磷酸盐缓冲溶液加入进样管中，得到空白溶液的电化学发光光谱定，设定毛细管电泳的运行电压为15KV，电化学发光检测池施加的恒电位为1.1V。在基线平稳后，将盐酸克伦特罗的标准溶液分别加入到进样管中，进样电压为17KV，进样的时间为8s，得到盐酸克伦特罗标准溶液的电化学发光信号。

实验结果表明，盐酸克伦特罗的电化学发光信号的强度与其浓度之间存在良好的线性关系，根据得到的盐酸克伦特罗标准溶液的电化学发光信号的强度与其对应的盐酸克伦特罗标准溶液的浓度，绘制得到标准曲线和线性方程，本实施例得到的线性方程为y＝719755C(mol/L)+355.35，相关系数R²＝0.9998，线性范围为(1.0～5000)μmol/L，式中y为电化学发光信号的强度，C为盐酸克伦特罗的摩尔浓度，单位为mol/L；本实施例得到的最低检测限为1×10 ^-6mol/L。

实施例3

配制摩尔浓度为1.0×10^-5mol/L的盐酸克伦特罗的乙醇溶液中，其中乙醇溶液中乙醇与水的体积比为1∶1，采用毛细管电泳-电化学发光法对得到的盐酸克伦特罗溶液进行检测，检测前将毛细管依次用摩尔浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液、水和pH值为8.5的磷酸盐缓冲溶液分别清洗30分钟，在电化学检测池中加入摩尔浓度为25mmol/L的三联吡啶钌的磷酸盐缓冲溶液，pH值为8.5，首先将pH值为8.5的磷酸盐缓冲溶液加入进样管中，得到空白溶液的电化学发光光谱定，设定毛细管电泳的运行电压为15KV，电化学发光检测池施加的恒电位为1.1V。在基线平稳后，将盐酸克伦特罗的标准溶液分别加入到进样管中，进样电压为17KV，进样的时间为8s，平行检测三次，得到盐酸克伦特罗溶液的电化学发光信号。

结果如表1所示，表1为本发明实施例3得到的检测结果，由表1可以看出，本实施例中测定得到的盐酸克伦特罗的摩尔浓度与真实的盐酸克伦特罗的摩尔浓度接近，测定结果的相对标准偏差较小，本发明提供的方法具有较高的准确度。

表1本发明实施例3得到的检测结果

实施例4

收集本实验室一名25周岁男性的尿液5mL作为待测样品，采用毛细管电泳-电化学发光检测法对所述尿液进行检测。首先将毛细管依次用摩尔浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液、水和摩尔浓度为25mmol/L、pH值为8.5的磷酸盐缓冲溶液注射清洗30分钟，然后在电化学发光检测池中加入摩尔浓度为5mmol/L的三联吡啶钌的磷酸盐缓冲溶液，其中磷酸盐缓冲溶液的摩尔浓度为25mmol/L，pH为8.5。先将摩尔浓度为25mmol/L、pH为8.5的磷酸盐缓冲溶液加入到样品管中，毛细管电泳的运行电压为15KV，电化学检测池内施加的恒电位为1.15V，在基线平稳后再将样品加入到样品管中，进样电压为17KV，进样的时间为8s，检测得到样品的电化学发光图谱。

结果如图2所示，图2为本发明实施例4得到的毛细管电泳-电化学发光图谱，由图2可知，本实施例得到的电化学发光图谱中的盐酸克伦特罗的电化学信号强度得到明显的提高，提高了检测的灵敏度；而且盐酸克伦特罗的峰位能够很好的与其他物质的峰位分开，具有良好的选择性。根据实施例2得到的标准曲线的线性方程与本实施例得到的电化学发光图谱，计算得到样品中盐酸克伦特罗的含量为0.826mmol/L。

实施例5

收集本实验室一名23周岁男性的尿液5mL作为待测样品，采用毛细管电泳-电化学发光检测法对样品进行检测。首先将毛细管依次用摩尔浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液、水和摩尔浓度为25mmol/L、pH值为8.5的磷酸盐缓冲溶液注射清洗30分钟，然后在电化学发光检测池中加入摩尔浓度为5mmol/L的三联吡啶钌的磷酸盐缓冲溶液，其中磷酸盐缓冲溶液的摩尔浓度为25mmol/L，pH为8.5。先将摩尔浓度为25mmol/L、pH为8.5的磷酸盐缓冲溶液加入到样品管中，毛细管电泳的运行电压为15KV，电化学检测池内施加的恒电位为1.20V，在基线平稳后再将样品加入到样品管中，进样电压为17KV，进样的时间为8s，检测得到样品的电化学发光图谱。

结果如图3所示，图3为本发明实施例5得到的毛细管电泳-电化学发光图谱，由图3可知，本实施例得到的电化学发光图谱中的盐酸克伦特罗的电化学信号的强度得到明显的提高，提高了检测的灵敏度；而且能够很好的与其他物质的峰分开，具有良好的选择性。根据实施例2得到的标准曲线的线性方程与本实施例得到的电化学发光图谱，计算得到样品中盐酸克伦特罗的含量为1.03mmol/L。

实施例6

收集本实验室一名26周岁女性的尿液5mL作为待测样品，采用毛细管电泳-电化学发光检测法对样品进行检测。首先将毛细管依次用摩尔浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液、水和摩尔浓度为25mmol/L、pH值为8.5的磷酸盐缓冲溶液注射清洗30分钟，然后在电化学发光检测池中加入摩尔浓度为8mmol/L的三联吡啶钌的磷酸盐缓冲溶液，其中磷酸盐缓冲溶液的摩尔浓度为25mmol/L，pH为8.5。先将摩尔浓度为25mmol/L、pH为8.5的磷酸盐缓冲溶液加入到样品管中，毛细管电泳的运行电压为15KV，电化学检测池内施加的恒电位为1.15V，在基线平稳后再将样品加入到样品管中，进样电压为17KV，进样的时间为8s，检测得到样品的电化学发光图谱。

结果如图4所示，图4为本发明实施例6得到的毛细管电泳-电化学发光图谱，由图4可知，本实施例得到的电化学发光图谱中的盐酸克伦特罗的电化学信号的强度得到明显的提高，提高了检测的灵敏度；而且能够很好的与其他物质的峰分开，具有良好的选择性。根据实施例2得到的标准曲线的线性方程与本实施例得到的电化学发光图谱，计算得到样品中盐酸克伦特罗的含量为0.51mmol/L。

由以上实施例可知，本发明提供的瘦肉精的检测方法首先采用毛细管电泳将待测样品分离，利用三联吡啶钌能与含有胺基的瘦肉精发生电化学发光反应，产生更强电化学发光信号的性质，采用电化学发光法对待测样品中的瘦肉精含量进行检测，使得检测结果的具有良好的灵敏度和准确度，而且本发明提供的方法具有良好的选择性，避免了其他物质对瘦肉精检测的干扰。另外，本发明提供的方法操作简单，步骤少，而且采用毛细管电泳对待测样品进行分离，无需对待测样品进行复杂的前处理，节省了检测时间，有利于对瘦肉精进行实时在线监测。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种瘦肉精含量的检测方法，包括以下步骤：

a)将待测样品进行毛细管电泳分离，得到分离产物；

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品中瘦肉精与所述步骤b)中三联吡啶钌的摩尔比为(0.02～2.5)∶(5～8)。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a)中毛细管电泳分离的电压为10kV～20kV。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤c)具体为：

采用三电极系统检测所述步骤b)得到的反应产物；

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤c)中检测的电位为1.1V～1.5V。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤b)具体为：

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH值为6.5～8.5；所述缓冲溶液的摩尔浓度为15mmol/L～50mmol/L。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤d)的标准曲线按照以下方法得到：

配制瘦肉精标准溶液；

将所述标准溶液进行毛细管电泳分离，得到分离产物；

将所述分离产物与三联吡啶钌反应，得到反应产物；

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述瘦肉精标准溶液按照以下方法制备：

按照乙醇与水的体积比为5∶(1～10)，配制乙醇混合溶液；

将瘦肉精溶于所述乙醇混合溶液中，得到瘦肉精标准溶液。