CN106770096A - 一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法，通过检测入RAC前后所测得的发光强度值，根据标准曲线得到莱克多巴胺的含量。本发明是基于莱克多巴胺对Ru(bpy)3 2+/N丁基二乙醇胺(BDEA)发光体系的强烈淬灭效应，建立了一种能够快速、灵敏地检测猪尿中莱克多巴胺残留的方法。所述方法是根据电化学发光强度与Ru(bpy)3 2+浓度在10‑9～10‑5g/mL范围内呈良好的线性相关性(相关系数r＝0.9989)，莱克多巴胺的最低检测限为5×10‑10g/mL。
Description
技术领域
本发明涉及添加剂的分析检测技术领域，尤其涉及一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法。
背景技术
莱克多巴胺(Ractopamine)是常见的一种瘦肉精添加药物，添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。但人们食用含“瘦肉精”猪肉过量后易引发心慌、肌肉震颤、头痛以及脸部潮红等症状，对心率失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺机能亢进等疾病的患者有较大危害。2000年，FDA(美国食品与药品监督管理局)批准莱克多巴胺在养猪业中使用，它是美国唯一允许添加的β肾上腺激动剂，美国、加拿大、澳大利亚等24个国家和地区均秉持这一做法。但是2002年，我国农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局发布公告《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》，其中规定：莱克多巴胺与盐酸克仑特罗、沙丁胺醇、西巴特罗等β肾上腺受体激动剂一起被禁用。
严格控制肉类尤其是猪肉中莱克多巴胺的含量不超标是保证消费者健康的主要关卡。对于莱克多巴胺的检测，目前应用比较成熟的方法和技术，例如质谱分析、色谱法、光谱和酶联免疫吸附法(ELISA)，能够达到高准确度、灵敏度定量检测，但是这些方法大都需要精细的操作，前期准备工作较为繁琐，操作繁琐，不能满足快速检测的要求。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法，通过构建喷射式Ru(bpy)3 2+/N丁基二乙醇胺(BDEA)电化学发光体系，能够用淬灭法测定猪尿中莱克多巴胺残留。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法，包括以下步骤：
1)将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度，记为I0；所述三联吡啶钌溶液与二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔比为1：1～100；
2)将待测样品与三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液进行共反应，检测所述共反应产物的电化学发光信号强度，记为It；
3)根据预制备的标准曲线与电化学发光信号强度差值，得到待测样品中莱克多巴胺的浓度；所述标准曲线为莱克多巴胺浓度与电化学发光信号强度差之间的线性曲线，所述电化学发光信号差值为ΔI＝I0-It。
优选的，所述步骤1)或步骤2)中所述三联吡啶钌溶液或二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液的溶剂为磷酸缓冲液；所述磷酸缓冲液的pH值为7.5～9.0。
优选的，所述步骤1)或步骤2)中二羟乙基N-丁基二乙醇胺以二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液形式存在；所述二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液的摩尔浓度为10-7～10-9mol/L。
优选的，所述步骤2)中所述三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液的摩尔比为1:1～100；所述待测样品添加的体积为12～180μL。
优选的，所述步骤2)中所述共反应的温度为23～27℃。
优选的，所述步骤3)中电化学检测用工作电极为1.25～1.45V。
优选的，所述步骤3)中在检测时采用喷射式电化学发光检测仪进行检测产物；所述反应产物的喷射速率为2～6mL/min。
优选的，所述步骤4)中标准曲线的为y＝-0.6836x+0.1816，相关系数r＝0.9989，x代表莱克多巴胺的质量浓度，y代表电化学发光信号差值。
优选的，所述标准曲线在莱克多巴胺质量浓度为10-9～10-5g/mL范围内具有线性关系。
本发明提供的一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法，基于莱克多巴胺对Ru(bpy)32+-N丁基二乙醇胺(BDEA)发光体系的强烈淬灭效应，建立了一种能够快速、灵敏地检测猪尿中莱克多巴胺残留的方法。本发明提供的方法方法具有较宽的定量检测范围，电化学发光强度与Ru(bpy)32+浓度在10-9～10-5g/mL范围内呈良好的线性相关性(相关系数r＝0.9989)；具有较高的检测灵敏度，对莱克多巴胺的最低检测限为5×10-10g/mL。
进一步的，通过控制影响Ru(bpy)3 2+/N丁基二乙醇胺体系发光的主要参数，结合所构建的喷射式电化学发光分析系统，建立了一种能够快速、灵敏地检测猪尿中莱克多巴胺残留的方法。
附图说明
图1为实施例1中莱克多巴胺(RAC)对Ru(bpy)3 2+/BDEA体系发光强度的湮灭效应；
图2为实施例2中Ru(bpy)3 2+/BDEA发光体系对不同浓度RAC的发光强度的响应情况；
图3为实施例2中Ru(bpy)3 2+/BDEA发光体系对不同浓度RAC的响应曲线；
图4为实施例1中Ru(bpy)3 2+/BDEA-RAC发光体系的稳定性测试结果。
具体实施方式
本发明提供了一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法，包括以下步骤：
1)将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度I0；所述三联吡啶钌溶液与二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔比为1：1～100；
2)将待测样品与三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液进行共反应，检测所述共反应产物的电化学发光信号强度It；
3)根据预制备的标准曲线与电化学发光信号强度差值，得到待测样品中莱克多巴胺的浓度；所述标准曲线为莱克多巴胺浓度与电化学发光信号强度差之间的线性曲线。
本发明将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度，记为I0；所述三联吡啶钌溶液与二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔比为1：1～100。
具体的，本发明优选将三联吡啶钌溶液与二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液混合，进行反应。所述三联吡啶钌溶液的摩尔浓度优选为10-7mol/L，所述二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液的摩尔浓度为10-7～10-9mol/L，更优选为10-8mol/L。本发明中，所述三联吡啶钌溶液或二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液的溶剂优选为磷酸缓冲液；所述磷酸缓冲液的pH值优选为7.5～9.0，更优选为8.5。在本发明中，所述磷酸缓冲液的摩尔浓度优选为0.08～0.12mol/L，更优选为0.1mol/L。
本发明中，所述三联吡啶钌与二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔比优选为1：1～10。所述三联吡啶钌溶液与二羟乙基N-丁基二乙醇胺的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的三联吡啶钌与二羟乙基N-丁基二乙醇胺即可。
三联吡啶钌与二羟乙基N-丁基二乙醇胺反应后，本发明对得到的反应产物进行电化学发光检测，得到初始电化学发光信号，即为I0。
本发明将待测样品与三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液体系中进行共反应，检测所述共反应产物的电化学发光信号强度，记为It。
本发明中，将待测样品与三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液混合进行共反应。
本发明中，所述待测样品没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的含有莱克多巴胺的样品即可，例如猪尿。
本发明中，所述猪尿优选进行前处理。所述前处理的方法具有为样品经转速为5000～6000rpm条件下进行离心3～7min，取上清液。
本发明中，所述三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺的摩尔比与上步的三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺的摩尔比相同。
本发明中，所述待测样品添加的体积优选为120～180μL。
本发明中，所述共反应的温度优选为23～27℃，更优选为25℃。
得到共反应产物后，本发明对所述共反应产物进行电化学发光检测，得到淬灭电化学发光信号，记为It。本发明中，电化学检测优选采用喷射式电化学发光流动检测系统完成。本发明中，所述反应产物进入检测时喷射速率为2～6mL/min，更优选为4mL/min。
本发明中，所述电化学检测检测系统的工作电极优选为1.25～1.45V，更优选1.35～1.40V。
得到初始电化学发光信号和淬灭电化学发光信号后，本发明根据预制备的标准曲线与电化学发光信号强度差值，得到待测样品中莱克多巴胺的浓度；所述标准曲线为莱克多巴胺浓度与电化学发光信号强度差之间的线性曲线。
在本发明中，所述标准曲线的制备方法与待测样品的检测方法的不同之处是用莱克多巴胺标准品溶液代替待测样品溶液。
本发明中，所述莱克多巴胺的标准品来源购自Sigma公司。
本发明中，所述莱克多巴胺标准品溶液的质量浓度分别为10-5g/mL，10-6g/mL，10- 7g/mL，10-8g/mL，10-9g/mL；所述莱克多巴胺标准品溶液的制备方法是将莱克多巴胺粉末溶解于水中，制成1g/mL的溶液，依次进行10倍梯度稀释，分别得到10-5g/mL，10-6g/mL，10-7g/mL，10-8g/mL，10-9g/mL的标准品溶液。
本发明中，所述标准曲线为y＝-0.6836x+0.1816，相关系数r＝0.9989，x代表莱克多巴胺的质量浓度，y代表电化学发光信号差值。
本发明中，所述标准曲线在莱克多巴胺质量浓度优选为10-9～10-5g/mL范围内具有线性关系。
本发明中，所述标准曲线的制备方法，同待测样品的检测方法，将标准品莱克多巴胺进行梯度稀释，用不同稀释度的标准品代替待检样品进行检测，得到的电化学发光强度差值与梯度浓度绘制标准曲线。
下面结合实施例对本发明提供的一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度I0；所述三联吡啶钌溶液的摩尔浓度为10-7mol/L，二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔浓度为10-5mol/L，调整三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺的pH值为7.5；
将莱克多巴胺溶液与摩尔浓度为10-7mol/L的三联吡啶钌溶液和摩尔浓度为10- 5mol/L二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液进行共反应，进入喷射式电化学发光流动检测系统检测，获得电化学发光信号强度It；进样流速设置为3mL/min；进样量为150μL，设置工作电极为1.35V；
结果如图1所示，图1为莱克多巴胺(RAC)对Ru(bpy)3 2+/BDEA体系发光强度的湮灭效应。从附图1中可以看出，在达到峰a时，莱克多巴胺浓度为0g/mL；达到峰b时，莱克多巴胺浓度为1.0×10-7g/mL；在达到峰c时，莱克多巴胺的浓度为1.0×10-6g/mL；达到峰d时，莱克多巴胺的浓度为1.0×10-5g/mL。可以看出，随着莱克多巴胺的浓度逐渐升高，代表发光信号强度的峰值逐渐下降，说明莱克多巴胺对Ru(bpy)3 2+/BDEA体系发光强度有湮灭效应，并且随着莱克多巴胺的浓度增强，湮灭效应越明显。
实施例2
将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度I0；所述三联吡啶钌溶液的摩尔浓度为10-7mol/L，二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔浓度为10-8mol/L，调整三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺的pH值为8.5；
将莱克多巴胺标准品溶解于水制成1g/mL的溶液，分别进行10倍梯度稀释，分别得到10-5g/mL，10-6g/mL，10-7g/mL，10-8g/mL，10-9g/mL的莱克多巴胺溶液；
分别将上述梯度的莱克多巴胺溶液与摩尔浓度为10-7mol/L的三联吡啶钌溶液和摩尔浓度为10-8mol/L二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液进行共反应，进入喷射式电化学发光流动检测系统检测，获得电化学发光信号强度It；进样流速设置为4mL/min；进样量为150μL，设置工作电极为1.45V；
结果如图2所示，图2为Ru(bpy)3 2+/BDEA发光体系对不同浓度RAC的发光强度的响应情况；从附图2中可以看出，随着时间延长，Ru(bpy)32+/BDEA发光体系光强度逐渐减弱；
根据图2得到的电化学发光信号强度差值，与莱克多巴胺浓度进行线性拟合，得到标准曲线，如图3所示，所述标准曲线的公式为y＝-0.6836x+0.1816，相关系数r＝0.9989，在莱克多巴胺浓度为10-5～10-9g/mL范围内，具有较高的线性关系。
实施例3
将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度I0；所述三联吡啶钌溶液的摩尔浓度为10-7mol/L，二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔浓度为10-8mol/L，调整三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺的pH值为8.5；
将10-8g/mL的莱克多巴胺溶液与摩尔浓度为10-7mol/L的三联吡啶钌溶液和摩尔浓度为10-8mol/L二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液进行共反应，进入喷射式电化学发光流动检测系统检测，获得电化学发光信号强度It；进样流速设置为4mL/min；进样量为150μL，设置工作电极为1.45V；经过连续11次测定，得到Ru(bpy)32+/BDEA-RAC发光体系的重复性，如图4所示，所得相对标准差为1.23％(n＝11)，表明该检测体系具有良好的重复性。
实施例4
将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度I0；所述三联吡啶钌溶液的摩尔浓度为10-7mol/L，二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔浓度为10-8mol/L，调整三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺的pH值为8.5；
将莱克多巴胺标准品溶解于处理的猪尿样中(处理方法：猪尿样品经5000rpm离心5min，取上清)，并用经离心的猪尿样进行10倍梯度稀释，得到5×10-10g/mL，的莱克多巴胺猪尿样溶液；将5×10-10g/mL的莱克多巴胺猪尿样溶液与摩尔浓度为10-7mol/L的三联吡啶钌溶液和摩尔浓度为10-8mol/L二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液进行共反应，进入喷射式电化学发光流动检测系统检测，获得电化学发光信号强度It；进样流速设置为4mL/min；进样量为150μL，设置工作电极为1.35V；
得到电化学发光信号强度差值，定义信噪比＞4:1时RAC的最低检测限为5×10- 10g/mL，检测结果为阳性；信噪比＜4:1时，检测结果为阴性。
由以上实施例可知，本发明提供的一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法，首先莱克多巴胺对Ru(bpy)3 2+/BDEA体系发光强度有湮灭效应，并且随着莱克多巴胺的浓度增强，湮灭效应越明显。通过构建标准曲线，发现莱克多巴胺在质量浓度为10-5～10- 9g/mL范围内，具有较高的线性关系。同时通过重复试验表明该检测体系具有良好的稳定性。经过检测RAC的最低检测限为5×10-10g/mL。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种基于电化学发光法检测莱克多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液体系中进行反应，检测所述反应产物的电化学发光信号强度，记为I0；所述三联吡啶钌溶液与二羟乙基N-丁基二乙醇胺摩尔比为1：1～100；
2)将待测样品与三联吡啶钌和二羟乙基N-丁基二乙醇胺在溶液体系中进行共反应，检测所述共反应产物的电化学发光信号强度，记为It；
3)根据预制备的标准曲线与电化学发光信号强度差值，得到待测样品中莱克多巴胺的浓度；所述标准曲线为莱克多巴胺浓度与电化学发光信号强度差之间的线性曲线，所述电化学发光信号差值为ΔI＝I0-It。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)或步骤2)中溶液体系由磷酸缓冲液提供；所述磷酸缓冲液的pH值为7.5～9.0。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)或步骤2)中二羟乙基N-丁基二乙醇胺以二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液形式存在；所述二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液在溶液体系中的摩尔浓度为10-7～10-9mol/L。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中所述三联吡啶钌溶液和二羟乙基N-丁基二乙醇胺溶液的摩尔比为1:1～100；
所述待测样品添加的体积为120～180μL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中所述共反应的温度为23～27℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中电化学检测用工作电极为1.25～1.45V。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的检测时采用喷射式电化学发光检测仪进行；所述反应产物的喷射速率为2～6mL/min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中标准曲线的为y＝-0.6836x+0.1816，相关系数r＝0.9989，x代表莱克多巴胺的质量浓度，y代表电化学发光信号差值。
9.根据权利要求1或9所述的方法，其特征在于，所述标准曲线在莱克多巴胺质量浓度为10-9～10-5g/mL范围内具有线性关系。
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102590191A (zh) * | 2012-02-09 | 2012-07-18 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 一种瘦肉精含量的检测方法 |
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|---|---|---|---|---|
| CN102590191A (zh) * | 2012-02-09 | 2012-07-18 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 一种瘦肉精含量的检测方法 |
| CN105866201A (zh) * | 2016-03-25 | 2016-08-17 | 广州军区广州总医院 | 电化学发光猝灭法快速检测莱克多巴胺的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 陈然 等: "基于新型共反应物的流动注射电化学发光分析方法研究", 《分析科学学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108872352A (zh) * | 2018-07-11 | 2018-11-23 | 广西科技大学鹿山学院 | 联吡啶钌体系电致化学发光法测定盐酸丁螺环酮的方法 |
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