CN102558281B - 一种从山茱萸果核中提取白桦脂酸的方法 - Google Patents

Abstract

一种从山茱萸果核中提取白桦脂酸的方法，先将山茱萸果核粉碎，用石油醚脱脂后，再用有机溶剂提取得到膏状提取物，膏状提取物上样于弱极性或非极性大孔吸附树脂吸附柱，再用高浓度乙醇洗脱得到白桦脂酸粗提物，再用甲醇或乙醇进行重结晶，得到高纯度的白桦脂酸。本发明从山茱萸果核中提取白桦脂酸，不仅拓宽了白桦脂酸的提取来源，而且解决了山茱萸果核的利用问题；同时与现有工艺相比流程少，生产周期缩短10-30%，但提取纯度仍然能达到99%左右，操作简便，利于大规模生产。

Description

一种从山茱萸果核中提取白桦脂酸的方法

技术领域

本发明涉及白桦脂酸的提取方法，具体的说是一种从山茱萸果核中提取白桦脂酸的方法。

背景技术

白桦脂酸是一种三萜类化合物，具有抗肿瘤细胞生长的作用，对肿瘤细胞具有广谱性的细胞毒性，如对成神经细胞瘤、神经胶质瘤、恶性脑瘤、卵巢癌、肺癌等恶性肿瘤以及已经对阿霉素产生抗性的肿瘤细胞都表现出很好的活性，而对正常细胞没有伤害。同时研究发现白桦脂酸对人口腔上皮癌细胞(KB)、结肠腺癌细胞(LS-1747)、肝癌细胞(SMMC-7721)、肺癌细胞(A 549)、HepG2、S180肉瘤细胞以及人类乳腺癌细胞(MCF-7)的增殖均有抑制作用。并且在抗艾滋病方面还有许多新的作用机制，引起人们广泛的关注，这使得白桦脂酸成为很有开发前景的药物。

白桦脂酸目前的主要来源有三种途径：第一，从天然植物中提取分离得到；第二，以白桦脂醇为前体，通过有机合成得到白桦脂酸。这种方式已经应用于工业生产，可以得到工业规模的白桦脂酸，是现在市场上白桦脂酸的主要来源；第三，以白桦脂醇为前体，通过微生物转化生成白桦脂酸。

山茱萸（Cornus officinalis Sieb. et Zucc.），为落叶乔木或小乔木，在我国河南、浙江、陕西等省有大量的分布。山茱萸的干燥成熟果肉为常用种中药，具有补益肝肾，涩精固脱的作用，临床用于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消渴等症。由于每年山茱萸的果肉在我国消费量巨大，而在山茱萸果肉加工制备过程中产生的大量果核在实际生产中被作为废物丢掉。因此，对山茱萸果核的利用方法进行研究，可有效的进一步发挥山茱萸的使用价值，具有较强的现实意义。

山茱萸果核中含有白桦脂酸，虽然已有报道从山茱萸果核中分离出白桦脂酸，由于该方法是采用硅胶柱色谱分离法，操作复杂，制备周期较长，制备规模小，因此不适合与工业化大规模的生产。

发明内容

为解决现有从山茱萸果核中提取白桦脂酸方法存在的不足，拓宽白桦脂酸的提取来源，充分利用废弃的山茱萸果核，本发明提供了一种从山茱萸果核中提取白桦脂酸的方法。

本发明为解决上述技术问题采用的技术方案为：一种从山茱萸果核中提取白桦脂酸的方法，包含以下步骤：

一）取干燥的山茱萸果核粉碎，称取其重量后置于渗漉罐内，然后按照每克果核5-10mL石油醚的比例加入石油醚进行渗漉脱脂，脱脂时间为5-8h，脱脂结束后得山茱萸果核药渣；再将山茱萸果核药渣中按照每克果核5-10mL提取溶剂的比例加入提取溶剂再次进行提取，提取结束后得提取液，然后将提取液中的溶剂回收，得到膏状提取物，备用；

所述的提取溶剂为二氯甲烷、乙醇溶液、氯仿、甲醇或丙酮中的一种；

所述的山茱萸果核药渣再次提取时的提取方式为渗漉提取、加热回流提取、超声提取、微波提取或冷浸提取中的一种；

二）将步骤一中得到的膏状提取物用质量浓度为50-80%的乙醇进行分散，然后上样于弱极性或非极性大孔吸附树脂吸附柱，径高比为1:5-8，吸附流速为2-4 BV/h；上样结束后用质量浓度为50-80%的乙醇洗脱，流速为2-5BV/h；洗脱结束后，再用质量浓度为80-100%的乙醇洗脱进行洗脱，流速为2-5 BV/h，洗脱结束后，收集本次洗脱的洗脱液，回收洗脱液中的乙醇溶剂后得到白桦脂酸的粗提物，备用；

所述的膏状提取物在用质量浓度为50-80%的乙醇中进行分散时，乙醇的加入量按照每克果核0.3-0.7mL的比例加入；

所述的弱极性或非极性大孔吸附树脂吸附柱，树脂的用量按照每克果核2-6mL的比例加入树脂；

用50-80%的乙醇洗脱时，乙醇的加入量按照每克果核5-10mL乙醇的比例加入；

用80-100%的乙醇洗脱时，乙醇的加入量按照每克果核5-10mL乙醇的比例加入；

三）将步骤二中得到的白桦脂酸的粗提物，于乙醇或甲醇中进行重结晶，得到白桦脂酸。

本发明中，山茱萸果核粉碎后用石油醚提取，其作用是脱去果核中的油脂。

本发明中，在使用大孔径吸附树脂吸附柱吸附有机物时，一般不用或极少用高浓度的乙醇洗脱有效成分，高浓度乙醇一般是用于树脂的再生，研究发现白桦脂酸与树脂之间形成的范德华力较大，吸附较牢固，一般的洗脱溶剂很难洗脱，只有用树脂再生时的高浓度乙醇才可将其从树脂上面洗脱下来，因此在制定树脂富集方法时，可先用80%以下的乙醇尽可能的将杂质除去，然后再使用高浓度的乙醇洗脱，从而使白桦脂酸的纯度提高。

本发明中，白桦脂酸的粗提物在进行重结晶时优选在甲醇中重结晶。

有益效果：本发明从山茱萸果核中提取白桦脂酸，有以下特点：

一、现有技术中，山茱萸的果肉作为中成药的原料使用后，果核被当做废料丢弃，不但造成资源上的浪费，而且还给后期的处理造成麻烦。本发明从其中提取出用于医药的白桦脂酸，不仅拓宽了白桦脂酸的提取来源，而且解决了山茱萸果核的利用问题。

二、本发明先用石油醚脱脂，再用溶剂提取，提取液再用弱极性或非极性大孔吸附树脂吸附柱吸附，即可制得白桦脂酸粗提物，粗提物再经过乙醇重结晶即可得到纯度很高的白桦脂酸，与现有工艺相比流程少，生产周期缩短10-30%，但提取纯度仍然能达到99%左右，操作简便，利于大规模生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述。

实施例1：

取干燥的山茱萸果核2.5kg，适当粉碎，将其置于渗漉罐内，先用25L石油醚进行渗漉提取5h，接着用25L丙酮进行渗漏提取5h，收集丙酮渗漏液，回收溶剂旋蒸，得膏状总提取物0.3kg；

取0.3kg山茱萸果核总提取物用1.25L 60%的乙醇溶液进行分散，上样于DIAIN HP-20大孔吸附树脂柱，树脂用量为7.5L（水中体积），径高比为1：6，吸附流速2BV/h；先用25L 60%的乙醇溶液进行洗脱，流速2BV/h，接着用20L 90%的乙醇溶液进行洗脱，流速2 BV/h，收集90%的乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得白桦脂酸的粗提物0.045kg；

取白桦脂酸的粗提物0.045kg，于甲醇中进行重结晶，得白桦脂酸0.025kg，测得其纯度为99.1%。

实施例2：

取干燥的山茱萸果核2.5kg，适当粉碎，将其置于渗漉罐内，先用15L的石油醚进行渗漉提取5h，接着用20L 50%丙酮进行渗漏提取8h，收集50%丙酮渗漏液，回收溶剂，得总提取物0.55kg；

取0.55kg山茱萸果核总提取物用1.75L 50%的乙醇溶液进行分散，上样于AB-8大孔吸附树脂柱，树脂用量为13L（水中体积），径高比为1：8，吸附流速4BV/h；先用12.5L 50%的乙醇溶液进行洗脱，流速4 BV/h，接着用25L 95%的乙醇溶液进行洗脱，流速4 BV/h，收集95%的乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得白桦脂酸的粗提物0.035kg；

取白桦脂酸的粗提物0.035kg，于甲醇中进行重结晶，得白桦脂酸0.012kg，测得其纯度为98.1%。

实施例3：

取干燥的山茱萸果核2.5kg，适当粉碎，将其置于渗漉罐内，先用25L的石油醚进行渗漉提取8h，接着用12.5L 70%丙酮进行渗漏提取6.5h，收集70%丙酮渗漏液，回收溶剂干燥，得总提取物0.45kg；

取0.45kg山茱萸果核总提取物用0.75L 80%的乙醇溶液进行分散，上样于AB-8大孔吸附树脂柱，树脂用量10L（水中体积），径高比为1：8，吸附流速2BV/h；先用20L 80%的乙醇溶液进行洗脱，流速3 BV/h，接着用20L无水乙醇进行洗脱，流速3BV/h，收集无水乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得白桦脂酸的粗提物0.03kg；

取白桦脂酸的粗提物0.03kg，于甲醇中进行重结晶，得白桦脂酸0.01kg，测得其纯度为98.5%。

实施例4：

取干燥的山茱萸果核2.5kg，适当粉碎，将其置于渗漉罐内，先用20L的石油醚进行渗漉提取6.5h，接着用甲醇进行回流提取，提取3次，每次2小时，溶剂用量20L，合并提取液，回收溶剂，得总提取物0.83kg；

取0.83kg山茱萸果核总提取物用1.0L 50%的乙醇溶液进行分散，上样于HPD100大孔吸附树脂柱，树脂用量15L（水中体积），径高比为1：6，吸附流速3BV/h；先用20L 50%的乙醇溶液进行洗脱，流速2BV/h，接着用25L80%乙醇进行洗脱，流速5BV/h，收集80%乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得白桦脂酸的粗提物0.022kg；

取白桦脂酸的粗提物0.022kg，于甲醇中进行重结晶，得白桦脂酸0.019kg，测得其纯度为99.0%。

实施例5：

取干燥的山茱萸果核2.5kg，适当粉碎，将其置于渗漉罐内，先用12.5L的石油醚进行渗漉提取，接着用氯仿进行超声提取，超声功率5000W，超声时间1小时，超声温度40℃，溶剂用量15L，超声2次，合并提取液，回收溶剂，得总提取物0.35kg；

取0.35kg山茱萸果核总提取物用1.5L 80%的乙醇溶液进行分散，上样于DIAIN HP-20大孔吸附树脂柱，树脂用量5 L（水中体积），径高比为1：7，吸附流速2BV/h；先用17.5L 80%的乙醇溶液进行洗脱，流速2BV/h，接着用12.5L无水乙醇进行洗脱，流速2BV/h，收集无水乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得白桦脂酸的粗提物0.02kg；

取白桦脂酸的粗提物0.02kg，于甲醇中进行重结晶，得白桦脂酸0.015kg，测得其纯度为98.0%。

实施例6：

取干燥的山茱萸果核2.5kg，适当粉碎，将其置于渗漉罐内，先用20L的石油醚进行渗漉提取，接着用80%乙醇进行回流提取，提取3次，每次1.5小时，溶剂用量15L，合并提取液，回收溶剂，得总提取物0.8kg；

取0.8kg山茱萸果核总提取物用1.0L 70%的乙醇溶液进行分散，上样于D101型大孔吸附树脂柱，树脂用量15L（水中体积），径高比为1：6，吸附流速3BV/h；先用17L 70%的乙醇溶液进行洗脱，流速5BV/h，接着用22L90%乙醇进行洗脱，流速3BV/h，收集90%乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得白桦脂酸的粗提物0.04kg；

取白桦脂酸的粗提物0.04kg，于甲醇中进行重结晶，得白桦脂酸0.01kg，测得其纯度为98.7%。

实施例7：

取干燥的山茱萸果核2.5kg，适当粉碎，将其置于渗漉罐内，先用20L的石油醚进行渗漉提取，接着用二氯甲烷进行冷浸提取，提取3次，每次15小时，溶剂用量25L，合并提取液，回收溶剂，得总提取物0.5kg；

取0.5kg山茱萸果核总提取物用1.0L 80%的乙醇溶液进行分散，上样于DIAIN HP-20型大孔吸附树脂柱，树脂用量15L（水中体积），径高比为1：5，吸附流速2BV/h；先用20L 80%的乙醇溶液进行洗脱，流速2BV/h，接着用15L无水乙醇进行洗脱，流速2BV/h，收集无水乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得白桦脂酸的粗提物0.02kg；

取白桦脂酸的粗提物0.02kg，于甲醇中进行重结晶，得白桦脂酸0.018kg，测得其纯度为97.9%。

Claims (1)

1.一种从山茱萸果核中提取白桦脂酸的方法，其特征在于，包含以下步骤：

一）取干燥的山茱萸果核粉碎，称取其重量后置于渗漉罐内，然后按照每克果核5-10mL石油醚的比例加入石油醚进行渗漉脱脂，脱脂时间为5-8h，脱脂结束后得山茱萸果核药渣；再将山茱萸果核药渣中按照每克果核5-10mL提取溶剂的比例加入提取溶剂再次进行提取，提取结束后得提取液，然后将提取液中的溶剂回收，得到膏状提取物，备用；

所述的提取溶剂为二氯甲烷、乙醇溶液、氯仿、甲醇或丙酮中的一种；

所述的山茱萸果核药渣再次提取时的提取方式为渗漉提取、加热回流提取、超声提取或冷浸提取中的一种；

二）将步骤一中得到的膏状提取物用质量浓度为50-80%的乙醇进行分散，然后上样于弱极性或非极性大孔吸附树脂吸附柱，径高比为1:5-8，吸附流速为2-4 BV/h；上样结束后用质量浓度为50-80%的乙醇洗脱，流速为2-5BV/h；洗脱结束后，再用质量浓度为80-100%的乙醇洗脱进行洗脱，流速为2-5 BV/h，洗脱结束后，收集本次洗脱的洗脱液，回收洗脱液中的乙醇溶剂后得到白桦脂酸的粗提物，备用；

所述的膏状提取物在用质量浓度为50-80%的乙醇中进行分散时，乙醇的加入量按照每克果核0.3-0.7mL的比例加入；

所述的弱极性或非极性大孔吸附树脂吸附柱，树脂的用量按照每克果核2-6mL的比例加入树脂；

用50-80%的乙醇洗脱时，乙醇的加入量按照每克果核5-10mL乙醇的比例加入；

用80-100%的乙醇洗脱时，乙醇的加入量按照每克果核5-10mL乙醇的比例加入；

三）将步骤二中得到的白桦脂酸的粗提物，于乙醇或甲醇中进行重结晶，得到白桦脂酸。